JPH069688A

JPH069688A - Ｃｎｐ類似体ペプチド及びその用途

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Publication number: JPH069688A
Application number: JP3254066A
Authority: JP
Inventors: Masaharu Tanaka; 正治田中; Yoshiharu Minamitake; 義春南竹; Yasuo Kitajima; 安雄北島; Masami Furuya; 真優美古谷; Toshiyuki Matsuo; 壽之松尾
Original assignee: Suntory Ltd
Current assignee: Suntory Ltd
Priority date: 1991-01-31
Filing date: 1991-06-28
Publication date: 1994-01-18
Anticipated expiration: 2013-10-08
Also published as: ES2178634T3; EP0497368B1; US5434133A; JP2809533B2; ATE219103T1; DE69232636T2; EP0497368A1; DE69232636D1

Abstract

(57)【要約】（修正有）【目的】血菅平滑筋細胞の増殖抑制作用を示すＣ型ナ
トリウム利尿ペプチド（以下ＣＮＰと略す）及びそれら
ペプチドを有効成分とする血管平滑筋増殖抑制剤を提供
する。【構成】一般式〔例えば、Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｍｅｔ
−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−
Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｓ
ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＯＨ（ジスルフィド
型）〕で示されるペプチド及びそれらの生理的に許容さ
れうる酸付加物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、血管平滑筋細胞の増殖
を抑制するペプチド類の合成及びその使用に関する。さ
らに詳しくはＣ型ナトリウム利尿ペプチド（以下ＣＮＰ
と略す）の新規誘導体の合成、ＣＮＰ及びＣＮＰ誘導体
の新規生理作用、さらにはこれらペプチドを有効成分と
する血管平滑筋増殖抑制剤に関する。なお、本明細書に
おいて、ＣＮＰ類似体ペプチドとは「請求項１」に記載
した化合物、ＣＮＰ−２２、ヒトＣＮＰ−５３、ブタＣ
ＮＰ−５３、カエルＣＮＰ、及びニワトリＣＮＰを意味
する。

【０００２】

【従来の技術】近年、各種動物の心臓及び脳から、ナト
リウム利尿作用及び血圧降下作用を有するペプチドが数
多く発見されてきた。これらのペプチドは総称してナト
リウム利尿ペプチド（ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｐｅｐ
ｔｉｄｅ；ＮＰ）と呼ばれている。従来生体から、鎖長
が異なったり、アミノ酸一次配列が類似したＮＰが数多
く単離・同定されていたが、これらは全て３つの異なる
ＮＰ前駆体タンパク（ｐｒｅｐｒｏＡＮＰ，ｐｒｅｐ
ｒｏＢＮＰ，ｐｒｅｐｒｏＣＮＰ）から生合成され
てくることが判ってきた。

【０００３】従って、現在ＮＰはその生合成経路から次
に示す３つのタイプに分類することができる。すなわ
ち、Ａ型ＮＰ（Ａｔｙｐｅｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ
ｐｅｐｔｉｄｅ；ＡＮＰ）、Ｂ型ＮＰ（Ｂｔｙｐｅ
ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅ；ＢＮＰ）
及びＣ型ＮＰ（Ｃｔｙｐｅｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ
ｐｅｐｔｉｄｅ；ＣＮＰ）である。このうち、ＡＮＰと
ＢＮＰはそれぞれ心房及び脳から単離されたため、初
め、ＡＮＰは心房性ナトリウム利尿ペプチド（ａｔｒｉ
ａｌｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅ）、Ｂ
ＮＰは脳ナトリウム利尿ペプチド（ｂｒａｉｎｎａｔ
ｒｉｕｒｅｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅ）とも呼ばれていた
（Ｍａｔｓｕｏ，Ｈ．ａｎｄＮａｋａｚａｔｏ，Ｈ．
Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒ
ｔｈＡｍｅｒ．，１６，４３，１９８７；Ｓｕｄｏ
ｈ，Ｔ．ｅｔａｌＮａｔｕｒｅ，３３２，７８，１
９８８）。しかし、その後の研究でＡＮＰは心房のみな
らず脳でも産生されていること、これと同様、ＢＮＰは
脳のみならず心臓でも産生されていることが判ってきた
（Ｕｅｄａ，Ｓ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４９，１０５
５，１９８７；Ａｂｕｒａｙａ，Ｍ．ｅｔａｌ．，Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，１６５，８７２，１９８９）。また、ＡＮＰとＢ
ＮＰはいずれもｉｎｖｉｖｏ投与で同程度の顕著なナ
トリウム利尿作用及び血圧降下作用を示すことが確認さ
れた。以上のことから、現在ＡＮＰとＢＮＰはいずれも
心臓から血中へ分泌されるホルモンとして働くと共に、
神経伝達因子としても作動し、生体の体液量及び血圧の
ホメオスタシス維持に重要な役割を果たしていると考え
られている。

【０００４】一方、ＣＮＰはＡＮＰ，ＢＮＰに続く第３
のＮＰに分類されるペプチドで、これらのペプチドはご
く最近単離され、その構造及び生合成機構が解明されて
きた。最初に発見されたＣＮＰは２２アミノ酸残基より
成るＣＮＰ−２２とＣＮＰ−２２のＮ−末端に３１アミ
ノ酸残基が付加されたＣＮＰ−５３で、これらのペプチ
ドはいずれもブタ脳から単離され、その構造が明らかに
された。なお、ブタ脳においてＣＮＰ−２２とＣＮＰ−
５３はほぼ同量存在していることも明らかにされた（Ｓ
ｕｄｏｈ，Ｔ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１６８，８６３，
１９９０；Ｍｉｎａｍｉｎｏ，Ｎ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，
１７０，９７３，１９９０）。その後、ＣＮＰ−２２
・ＣＮＰ−５３に対応するブタＣＮＰ遺伝子及びｃＤＮ
Ａが単離され、これらの解析からＣＮＰ−２２及びＣＮ
Ｐ−５３はいずれも共通前駆体タンパク（ｐｒｅｐｒｏ
ＣＮＰ）から生ずることが判った。また、このｐｒｅ
ｐｒｏＣＮＰはＡＮＰ及びＢＮＰ前駆体タンパク（ｐ
ｒｅｐｒｏＡＮＰ，ｐｒｅｐｒｏＢＮＰ）とは明ら
かに異なっていることが判った（Ｔａｗａｒａｇｉ，
Ｙ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１７２，６２７，１９９
０）。

【０００５】また、ブタＣＮＰ遺伝子の単離に続き、ラ
ットＣＮＰｃＤＮＡ及びヒトＣＮＰ遺伝子が単離され、
ラット及びヒトＣＮＰ前駆体タンパクの構造が明らかに
されてきた。この結果、ＣＮＰ−２２はブタ，ヒト・ラ
ットですべて同一アミノ酸一次配列を有すること、ＣＮ
Ｐ−５３はブタとラットで同一アミノ酸一次配列を有す
るが、ヒトとブタでは２ヶ所アミノ酸が置換しているこ
と、さらに、ＣＮＰはＡＮＰ・ＢＮＰとは異なり、心臓
では産生されず、脳で特異的に産生されていることが判
った（Ｋｏｊｉｍａ，Ｍ．ｅｔａｌ．，ＦＥＢＳｌ
ｅｔｔｅｒ，２７６，２０９，１９９０；Ｔａｗａｒａ
ｇｉ，Ｙ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈ
ｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１７５，６４５，１９
９１）。さらに、現在ではカエル及びニワトリからもＣ
ＮＰに帰属されるペプチドが単離・同定されている（特
願平０２−２３８２９４：特願平０２−２３８２９
３）。

【０００６】この様に、現在ＣＮＰは哺乳動物のみなら
ず、鳥類及び両棲類にも存在していることが確認されて
きた。しかし、ＣＮＰのＮＰとしての生理的役割につい
ては不明な点が多い。すなわち、ＣＮＰはそのアミノ酸
一次配列がＡＮＰ及びＢＮＰと類似しており、また、ｉ
ｎｖｉｖｏ投与でナトリウム利尿作用及び血圧降下作
用を示すことからＮＰファミリーに帰属された。しか
し、ＣＮＰのナトリウム利尿作用及び血圧降下作用はＡ
ＮＰ・ＢＮＰに比べ著しく弱いこと（１／５０〜１／１
００）、また、ＣＮＰの産生組織がＡＮＰ及びＢＮＰと
は異なり脳に限られていることから、ＣＮＰはＮＰファ
ミリーのなかでも特異的な位置を占め、その生理的役割
については体液量や血圧のホメオスタシス維持以外に別
な役割を果たしているのではないかと推定されていた。

【０００７】ところで、今までの研究からＮＰの血圧降
下作用機構は、ＮＰが血管平滑筋細胞の表面に存在する
ＮＰレセプターに結合することにより細胞内ｃＧＭＰ
（サイクリックグアノシンモノフォスフェート）を上昇
させ、このｃＧＭＰがＮＰの細胞内セカンドメッセンジ
ャーとして作動し、最終的に血管弛緩を引き起こすと考
えられている。実際、血管標本あるいは血管平滑筋培養
細胞（ＶＳＭＣ）にＮＰを作用させると細胞内ｃＧＭＰ
が上昇することが確かめられている。しかし、本発明者
らは最近、ＣＮＰをＶＳＭＣに作用させたところ、予想
に反しＣＮＰはＶＳＭＣの細胞内ｃＧＭＰをＡＮＰまた
はＢＮＰに比べ数倍強く上昇させることを見いだした
（Ｆｕｒｕｙａ，Ｍ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１７０，２
０１，１９９０）。このことは、ＣＮＰにより誘発され
たｃＧＭＰがＶＳＭＣにおいてただ単に血管弛緩作用の
セカンドメッセンジャーとして作動しているばかりでな
く、他の生理作用発現のメディエーターとして機能して
いることを示唆している。この点に関しＧａｒｇ等は、
ニトロプルシド、Ｓ−ニトロソＮ−アセチルペニシラミ
ン等の血管弛緩剤が、ラットＶＳＭＣの系において、細
胞増殖を抑制すること、さらに同じ系で８−ブロモｃＧ
ＭＰも同様の作用を示すことを明らかにし、この増殖抑
制作用が、ニトリックオキサイド（ＮＯ）ラジカルによ
り誘起されたｃＧＭＰによって引き起こされると結論し
ている（Ｇａｒｇ，Ｕ．Ｃ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉ
ｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８３，１７７４，１９８９）。ま
た、Ｋａｒｉｙａ等は、ラビット大動脈由来の血管平滑
筋培養細胞において、ＡＮＰが細胞内ｃＧＭＰ産生を亢
進させ、この細胞の増殖を抑制させると報告している
（Ｋａｒｉｙａ，Ｋ．ｅｔａｌ．，Ａｔｈｅｒｏｓｃ
ｌｅｒｏｓｉｓ，８０，１４３，１９８９）。これらの
報告はいずれもｃＧＭＰが血管平滑筋培養細胞の増殖を
抑制するメディエーターとして働いていることを強く示
唆しており、また、ＣＮＰにより誘起されたｃＧＭＰも
血管平滑筋培養細胞の増殖を抑制する可能性があること
を示唆している。しかしながら、現在ＣＮＰが血管平滑
筋培養細胞の増殖を抑制するか否かは判っていない。

【０００８】一方、全てのＮＰは分子内Ｓ−Ｓ結合に基
づき形成される１７アミノ酸残基から成る環状構造を持
つことが知られている。そこで、この共通環状構造を中
心に、ＮＰの構造を３つのドメイン（環外Ｎ−末端ドメ
イン、環内ドメイン及び環外Ｃ−末端ドメイン）に分
け、ＣＮＰの構造をＡＮＰ及びＢＮＰのそれらと比較す
ると、ＣＮＰはＡＮＰまたはＢＮＰと以下に述べる点が
異なっていることが判る（図１参照）。すなわち、ＣＮ
Ｐのアミノ酸一次配列は、環外Ｎ−末端ドメインではＡ
ＮＰまたはＢＮＰと全く異なり、また、環内ドメインで
は１７アミノ酸残基のうちＡＮＰとは５残基、ＢＮＰと
は４残基異なっていることが判る。また、ＣＮＰの環外
Ｃ−末端ドメインの構造はＡＮＰまたはＢＮＰと大きく
異なり、ＣＮＰにはＡＮＰまたはＢＮＰに存在するｔａ
ｉｌ構造が存在しない（ＡＮＰ・ＢＮＰの場合、環状構
造のＣ−末端側にＡＮＰで５個、ＢＮＰで６個、アミノ
酸残基が付加されており、この構造を便宜的にｔａｉｌ
構造と呼ぶ）。以上述べたＣＮＰとＡＮＰまたはＢＮＰ
との構造上の違いが、前記したＣＮＰの特徴的薬理作用
発現に関与していることは明かである。しかしながら、
現在ＣＮＰのどのドメイン構造、また、どのアミノ酸一
次配列がＣＮＰの強いｃＧＭＰ産生活性に直接関与して
いるかについては判っていない。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明におけ
る課題は、まず第一に、天然から単離されたＣＮＰに帰
属されるペプチドが血管平滑筋培養細胞の増殖を抑制す
るか否かを明らかにすることである。第二に、ＣＮＰの
構造で、ＣＮＰの強いｃＧＭＰ産生活性発現に関与して
いる最小活性構造および必須アミノ酸一次配列を明らか
にすることである。また、この知見に基づき、最終的に
は天然由来ＣＮＰより強いｃＧＭＰ産生活性を示す新規
ＣＮＰ誘導体を作成することである。さらに第三とし
て、天然由来ＣＮＰ及びＣＮＰ誘導体の医薬品としての
利用方法を見いだすことである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、まず第一
の課題を明らかにする方法として、ＣＮＰが血清または
ＰＤＧＦ（Ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏ
ｗｔｈｆａｃｔｏｒ）で刺激したラット血管平滑筋培
養細胞のＤＮＡ合成を抑制するか否かを調べた。次に第
二の課題を達成する方法として、まず、α−ｈＡＮＰ
（ヒトにおいて、このペプチドが主に心房から血中へ分
泌されている）とＣＮＰ−２２のアミノ酸配列の一部を
お互いに入れ換えた誘導体及びＣＮＰ−２２の環外Ｎ−
末端ドメインを除去した誘導体を作成し、ＣＮＰに特徴
的な強いｃＧＭＰ産生活性発現にＣＮＰのどのドメイン
またはアミノ酸一次配列が関与しているかをつきとめ
た。また、同時にＣＮＰの前記活性発現に必要な最小活
性構造を明らかにした。次に、これらＣＮＰ誘導体の一
部のアミノ酸残基を異常アミノ酸（非天然型）残基に置
換することで、ＣＮＰより強いｃＧＭＰ産生活性、及び
ＤＮＡ合成阻害活性を有するＣＮＰ誘導体を作製した。
第三の課題については、本発明も含め今までに判ってい
るＣＮＰの生理作用及び種々の病変組織の解析から明ら
かにされている知見を総合的に考え、ＣＮＰ及び新規Ｃ
ＮＰ誘導体の医薬品としての利用方法を具体的に提示し
た。

【００１１】具体的な説明本発明者等は、実施例１−２に示した方法に従い、ＣＮ
Ｐ−２２及びヒトＣＮＰ−５３（ｈＣＮＰ−５３）がラ
ットＶＳＭＣの細胞増殖を抑制するか否かを調べた。こ
の結果、図２、図３及び図４に示すようにＣＮＰ−２２
及びｈＣＮＰ−５３はいずれも用量依存的に同程度の強
さでラットＶＳＭＣのＤＮＡ合成を抑制することが判っ
た。また、この作用の強さはα−ｈＡＮＰに比べ１０倍
強いことが判った。さらに表１に示すように、ＣＮＰ−
２２は血清で刺激したＶＳＭＣの細胞数の増加をも抑制
することが判った。

【００１２】

【表１】

【００１３】以上のことから、ＣＮＰ（ＣＮＰ−２２，
ｈＣＮＰ−５３）はラットＶＳＭＣに対し、細胞増殖抑
制作用を示すことが初めて明らかにされた。また、この
細胞増殖抑制作用の強さと細胞内ｃＧＭＰの濃度との間
には正の相関関係が成立していることが判った（図
４）。

【００１４】次に本発明者等は、以下に示す方針に従
い、種々のＣＮＰ誘導体を作製し、ＣＮＰに特徴的な強
いｃＧＭＰ産生活性がＣＮＰのどの構造あるいはどのア
ミノ酸一次配列に基づくかを調べた。前記したように、
ＣＮＰ−２２とα−ｈＡＮＰの構造を環外Ｎ−末端ドメ
イン、環内ドメイン、及び環外Ｃ−末端ドメインに分け
比較すると、ＣＮＰ−２２はα−ｈＡＮＰと以下に示す
点が異なっている（図１参照）。すなわち、ＣＮＰ−２
２のアミノ酸一次配列は環外Ｎ−末端ドメインでは全く
異なり、また、環内ドメインでは１７アミノ酸残基のう
ち５残基（ＣＮＰ−２２の９位ロイシン、１０位リジ
ン、１１位ロイシン、１６位セリン及び１７位メチオニ
ン残基。ただし、これらの残基はα−ｈＡＮＰにおいて
は、それぞれ１０位グリシン、１１位アルギニン、１２
位メチオニン、１７位アラニン及び１８位グルタミン残
基に対応する）が異なる。また、ＣＮＰ−２２にはα−
ｈＡＮＰに存在する環外Ｃ−末端ドメインが存在しな
い。従って、これらの構造の違いがＣＮＰとＡＮＰとの
薬理作用の違い（特にＶＳＭＣに対するｃＧＭＰ産生活
性の違い）に関与していることは明らかである。

【００１５】そこでまず本発明者等は、ＣＮＰに特徴的
なｃＧＭＰ産生活性がＣＮＰのどのドメイン構造に基づ
くかを調べた。表２に本発明で合成した全ての誘導体の
一次構造を示す。

【００１６】

【表２】

【００１７】まず、α−ｈＡＮＰの環外Ｃ−末端ドメイ
ンを除去した誘導体、ＣＮＰ−２２とα−ｈＡＮＰの各
ドメインをお互い組み換えた誘導体、及びＣＮＰ−２２
の環外Ｎ−末端ドメインを除去した誘導体を合成し（表
２，１〜５）、これら誘導体のｃＧＭＰ産生活性につい
て調べた。この結果、表３に示すように、分子内にＣＮ
Ｐ−２２の環内ドメイン構造を有する誘導体３，４，及
びＣＮＰ−２２の環外Ｎ−末端ドメインを除去した誘導
体５はいずれもＣＮＰ−２２と同程度の強いｃＧＭＰ産
生活性を示すことが判った。

【００１８】

【表３】

【００１９】一方、α−ｈＡＮＰの環外Ｃ−末端ドメイ
ンを除去した誘導体１及びα−ｈＡＮＰの環外Ｎ−末端
ドメインをＣＮＰ−２２の環外Ｎ−末端ドメインに置き
換えた誘導体２はα−ｈＡＮＰと同程度の弱いｃＧＭＰ
産生活性しか示さないことが判った。

【００２０】以上のことから、ＣＮＰの強いｃＧＭＰ産
生活性は、ＣＮＰ−２２の環内ドメイン構造に基づいて
いることが判った。また、最終的には、ＣＮＰ−２２の
分子内Ｓ−Ｓ結合を開裂させた誘導体１９がほとんどｃ
ＧＭＰ産生活性を示さないことが判り、ＣＮＰのｃＧＭ
Ｐ産生活性に関する最小活性構造は環状ＣＮＰ（６−２
３）５と決定された。

【００２１】次に、ＣＮＰのｃＧＭＰ産生活性発現に、
ＣＮＰの環内ドメインアミノ酸残基のうち、どのアミノ
酸残基（またはアミノ酸一次配列）が重要であるかを調
べた。このために、まずＣＮＰ−２２を基本骨格とし
て、α−ｈＡＮＰとは異なるＣＮＰ−２２の環内ドメイ
ン５アミノ酸残基（９位ロイシン、１０位リジン、１１
位ロイシン、１６位セリン及び１７位メチオニン残基）
を、それぞれ対応するα−ｈＡＮＰのアミノ酸残基（１
０位グリシン、１１位アルギニン、１２位メチオニン、
１７位アラニン及び１８位グルタミン）に置き換えた一
残基置換体（表２，６〜１０）を作製し、これらのｃＧ
ＭＰ産生活性を調べた。この結果、表３に示すように、
ＣＮＰ−２２の１６位置換体９と１７位置換体１０は、
いずれもＣＮＰ−２２と同程度の強い活性を示した。こ
れに対し、ＣＮＰ−２２の９，１０及び１１位置換体
６，７，８はいずれもＣＮＰ−２２に比べ活性が低下し
た（ただし、これらの活性はいずれもα−ｈＡＮＰと比
べると高い）。

【００２２】以上のことから、ＣＮＰ−２２の９位ロイ
シン、１０位リジン及び１１位ロイシン残基がＣＮＰの
ｃＧＭＰ産生活性発現に重要であることが判った。しか
しながら、表３から明らかなように、一残基置換体
（６，７，８）ではいずれも活性の低下は十分でないこ
とから、活性に重要な残基は単一残基ではなく、ＣＮＰ
−２２の９位ロイシン、１０位リジンまたは１１位ロイ
シン残基のうちいずれか２残基以上で構成されているこ
とが予想された。

【００２３】そこで、次にＣＮＰ−２２の９位ロイシ
ン、１０位リジン、１１位ロイシン残基の組み合せから
得られる二残基置換体（表２，１１〜１３）、及び三残
基置換体（表２，１４）を作製し、これらのｃＧＭＰ産
生活性を調べた。この結果、表３に示すように、三残基
置換体１４では予想どうり活性が激減した。また、二残
基置換体はいずれも前記した一残基置換体より活性がさ
らに低下した。なかでも１１及び１３の活性低下は著し
い。これらの解析から、ＣＮＰ−２２の環内ドメインア
ミノ酸一次配列で９位から１１位までの配列、すなわち
Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＬｅｕがＣＮＰのｃＧＭＰ産生活性発
現に重要であることが判った。このことは、実際α−ｈ
ＡＮＰの１０，１１及び１２位アミノ酸残基をそれぞれ
ロイシン、リジン、ロイシン残基に置換した三残基置換
体１５がＣＮＰ−２２とほぼ同程度の強いｃＧＭＰ産生
活性を示すことからも確かめられた。また、前記した実
験結果からＣＮＰ−２２の９位から１１位までの３残基
のなかで特に重要な残基を指摘することは難しいが、一
残基置換体６と二残基置換体１１，１３はいずれもｃＧ
ＭＰ産生活性が他の一及び二残基置換体に比べ低いこと
から、ＣＮＰの９位ロイシン残基が特に重要と考える。
言い換えれば、ＡＮＰとＣＮＰのｃＧＭＰ産生能の差
は、ＣＮＰ−２２の９位ロイシン残基と対応するα−ｈ
ＡＮＰ１０位グリシン残基の違いから生じると推定され
る。

【００２４】次に、本発明者等は、本発明で明らかにさ
れた知見及び今までにＡＮＰの構造活性相関の研究で明
らかにされている知見（例えば、Ｍｉｎａｍｉｔａｋ
ｅ，Ｙ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１７２，９７１，１９９
０）を総合的に考え、天然由来ＮＰ（ＡＮＰまたはＣＮ
Ｐ）より強いｃＧＭＰ産生活性及びＤＮＡ合成阻害活性
を有するＣＮＰ誘導体の作製を試みた。

【００２５】本発明者等は、まず、ＣＮＰ−２２の９位
ロイシン残基に着目し、ＣＮＰ−２２を基本骨格として
９位ロイシン残基をイソロイシン、バリン、α−アミノ
イソ酪酸、あるいはｔ−ロイシン残基に置換した誘導体
（表２，２０〜２３）を作製した。次に、ＣＮＰ（６−
２２）５を基本骨格として、６位システイン残基をペン
タシクロメルカプトプロピオニル基に置換した誘導体、
７位フェニルアラニン残基をｐ−クロロ−フェニルアラ
ニン残基に置換した誘導体、及び、６位及び７位をそれ
ぞれペンタシクロメルカプトプロピオニル及びｐ−クロ
ロ−フェニルアラニン残基で同時に置換した誘導体を合
成した（表２，１６，１７，１８）。さらに、［Ｌｅｕ
１０，Ｌｙｓ１１，Ｌｅｕ１２］α−ｈＡＮＰ（７−２
８）を基本骨格として、８位フェニルアラニン残基をｐ
−クロロ−フェニルアラニン、ｐ−フルオロ−フェニル
アラニン、ｐ−ニトロ−フェニルアラニン、あるいはシ
クロヘキシルアラニン残基で置換した誘導体を作製した
（表２，２４〜２７）。また、これら誘導体のｃＧＭＰ
産生を調べた。

【００２６】この結果、第３表に示すように、まず、Ｃ
ＮＰ−２２を基本骨格とする誘導体では、２０及び２１
がＣＮＰ−２２とほぼ同程度の活性を示すことが判っ
た。次に、ＣＮＰ（６−２２）を基本骨格とする誘導体
では、１６がＣＮＰ−２２より強い活性を示すことが判
った。さらに、［Ｌｅｕ１０，Ｌｙｓ１１，Ｌｅｕ１
２］α−ｈＡＮＰ（７−２８）を基本骨格とする誘導体
では、１５，２４，２５及び２７がいずれもα−ｈＡＮ
Ｐに比べ４〜６倍強い活性を示した。なかでも、誘導体
２４及び２５の活性はＣＮＰ−２２より強いことが判っ
た。

【００２７】これらの結果から、ＣＮＰ−２２、ＣＮＰ
（６−２２）及び［Ｌｅｕ１０，Ｌｙｓ１１，Ｌｅｕ１
２］α−ｈＡＮＰ（７−２８）の一部のアミノ酸残基を
異常アミノ酸（非天然型）残基に置換することで、ＣＮ
Ｐ−２２あるいはα−ｈＡＮＰより強いｃＧＭＰ産生活
性を示す誘導体を作製できることが判った。

【００２８】次に、ＣＮＰ及びＣＮＰ誘導体の医薬品へ
の利用方法について具体的に述べる。現在までに、血管
平滑筋細胞の異常増殖に起因する疾患が種々報告されて
いる。例えば、冠動脈の再狭窄は経皮経管腔冠動脈形成
術（ＰＴＣＡ）に成功した患者の約３０％に発生し、こ
の原因はほとんどの場合血栓形成ではなく、動脈平滑筋
細胞の異常増殖であることが知られている。また、これ
と同様な再狭窄は動脈バイパスなどを含め移植された組
織の血管でも生ずることが知られている。さらに、血管
平滑筋の増殖は動脈硬化症の患者の血管でもしばしば見
いだされている。しかしながら、今までにこれら血管平
滑筋の増殖に起因する疾患に対し有効な治療薬は見いだ
されておらず、現在その開発が望まれている。

【００２９】一方本発明者等は、本発明において、ＣＮ
Ｐが血管平滑筋細胞の増殖を強く抑制することを初めて
明らかにした。また、この作用の強さと、ｃＧＭＰ産生
活性の強さとの間には正の相関関係が成立することを明
らかにした。さらに、天然由来ＡＮＰまたはＣＮＰより
強いｃＧＭＰ産生活性を示す誘導体を作製することに成
功した。

【００３０】以上を総合的に考えると、血管平滑筋細胞
に対し、強いｃＧＭＰ産生活性を示すＣＮＰ及びＣＮＰ
誘導体は、再狭窄及び動脈硬化など血管平滑筋細胞の異
常増殖が原因となる疾患に対し、有効な治療薬または予
防薬となりうる。以上、本発明において、まずＣＮＰが
血管平滑筋細胞の異常増殖を強く抑制することを明らか
にし、この作用の強さとｃＧＭＰ産生活性の強さとの間
には正の相関関係が成立することを見いだした。

【００３１】次に、ＣＮＰの新規誘導体を種々合成する
ことにより、ＣＮＰのＶＳＭＣに対するｃＧＭＰ産生活
性に関する最小活性構造はＣＮＰ（６−２２）であるこ
とを見いだした。また、天然由来ＡＮＰまたはＣＮＰよ
り強いｃＧＭＰ産生活性を示す新規ＣＮＰ誘導体の合成
に成功した。さらに、ＣＮＰ及びＣＮＰ誘導体が、再狭
窄及び動脈硬化など血管平滑筋細胞の異常増殖が原因と
なる疾患に対し、有効な治療薬または予防薬となりうる
ことを見いだし、本発明を完成させた。なお、本発明に
おいては、具体的実施例として第２表に示したＣＮＰ誘
導体について述べるが、本発明の知見からすれば、ＶＳ
ＭＣに対し強いｃＧＭＰ産生活性を示す誘導体の作製
は、すでに構造が明らかにされている他のＮＰに適応で
きる。

【００３２】本発明に関するペプチドは、無機酸、例え
ば塩酸、硫酸、リン酸、あるいは有機酸、例えばギ酸、
酢酸、酪酸、コハク酸、クエン酸等の酸付加塩に転換で
きる。本発明に関するペプチドの製造は、標準的な化学
合成法、あるいは組み換えＤＮＡ法（ただし非天然形ア
ミノ酸残基を含む誘導体は除く）を用いて行うことがで
きる。化学合成法の一般的総書としては、例えば「生化
学実験講座Ｉタンパク質の化学ＩＶ第ＩＩ部２０７
〜４９５頁」（東京化学同人）、「ペプチド合成の基礎
と実験・泉屋信夫他共著」（丸善）、また「ペプチドケ
ミストリー１９８４，２２９〜２３４頁，２３５〜２４
０頁，及び２４１〜２４６頁・泉屋編集」（蛋白研発
行）などがあり、これらに合成法が詳細に記載されてい
る。また、組み換えＤＮＡ法による製造法としては、例
えば「遺伝子操作１９９０、蛋白質核酸酵素臨時増刊２
６１３〜２６１９頁、高浪満・木村光編集」（共立出
版）があり、これに基本的製造法が記載されている。

【００３３】本発明に関するペプチドは、上記文献に記
載されている化学合成法に準じて合成した。すなわち、
保護基のついたアミノ酸を固相法と称せられる方法で縮
合・延長させ、弗化水素で全保護基を除去した後、ジス
ルフィド結合反応を経て製造した。前記の方法等で得ら
れた粗ペプチドは、イオン交換カラムクロマト、逆相カ
ラムクロマト等、常用される精製法の組み合せにより純
品として得られる。本発明の医薬組成物は、本発明に関
するペプチドの遊離型としても、あるいはその薬理学的
に許容される酸付加塩としても投与することができる。

【００３４】本発明に関するペプチドもしくはその薬理
学的に許容される酸付加塩は、公知の薬理学的に許容さ
れる担体、賦型剤、希釈剤などと混合して、ペプチド性
医薬に一般に使用されている投与方法、すなわち非経口
投与法（静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与など）によ
って投与するのが望ましいが、有効成分である本ペプチ
ドをリポソームあるいはポリアミドなどに包容すること
で、消化管内で分解されにくいマイクロカプセル製剤と
して経口投与することも可能である。また、坐剤、点鼻
スプレー、点眼剤、舌下錠剤等の形態でそれぞれ直腸、
鼻腔内、眼、舌下などの粘膜から吸収される投与方法も
可能である。

【００３５】本発明の医薬組成物の投与量は、疾患の種
類、患者の年齢、体重、症状の程度及び投与経路などに
よっても異なるが、一般的に１日当り０．０１ｍｇ／ｂ
ｏｄｙ〜１０ｍｇ／ｂｏｄｙの範囲で投与可能であり、
０．０５ｍｇ／ｂｏｄｙ〜１ｍｇ／ｂｏｄｙの範囲で投
与するのが好ましい。

【００３６】本明細書において特に標記のないアミノ酸
はＬ−体であり、試薬類を含め下に示される略号を用い
た。

【００３７】Ａｓｐ：Ｌ−アスパラギンＡｓｐ（ＯｃＨｅｘ）：β−シクロヘキシルアスパラギ
ン酸Ｓｅｒ：Ｌ−セリンＳｅｒ（Ｂｚｌ）：Ｏ−ベンジル−Ｌ−セリンＧｌｎ：Ｌ−グルタミンＧｌｙ：グリシンＡｌａ：Ｌ−アラニンＣｙｓ：Ｌ−システインＣｙｓ（４ＭｅＢｚｌ）：４−メチルベンジル−Ｌ−シ
ステインＭｅｔ：Ｌ−メチオニンＩｌｅ：Ｌ−イソロイシンＬｅｕ：Ｌ−ロイシンｔ−Ｌｅｕ：Ｌ−ターシャルロイシンＴｙｒ：Ｌ−チロシンＴｙｒ（ＢｒＺ）：０−２−ブロモベンジルオキシカル
ボニル−Ｌ−チロシンＰｈｅ：Ｌ−フェニルアラニンＡｒｇ：Ｌ−アルギニンＡｒｇ（Ｔｏｓ）：Ｇ−トシル−Ｌ−アルギニンｐＣｌＰｈｅ：パラクロロ−Ｌ−フェニルアラニンＰｍｐ：ペンタシクロメルカプトプロピオン酸Ａｉｂ：アミノイソ酪酸Ｌｙｓ：Ｌ−リジンＢｏｃ−：ｔ−ブチルオキシカルボニルＴＦＡ：トリフルオロ酢酸ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドンＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシドＨＯＢｔ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミンＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド最終物の純度検定を、下に示す薄層クロマトグラフィ
ー、分析用高速液体クロマトグラフィー、及びアミノ酸
分析にて実施した。

【００３８】薄層クロマトグラフィー担体：シリカゲル６０Ｆ−２５４（メルク）展開溶媒：Ｒｆ１ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝４：
１：１：２Ｒｆ２ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝３０：
２０：６：２４分析用高速液体クロマトグラフィー機器：島津ＬＣ−６Ａシステムカラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＡ−３０２ＯＤ５４．
６φｘ１５０ｍｍ展開溶媒：１８％ＣＨ_３ＣＮ／０．１％ＴＦＡから
６０％ＣＨ_３ＣＮ／０．１％ＴＦＡまでの３０分リ
ニアグラジエントアミノ酸分析機器：日立アミノ酸分析機８３５型

【００３９】

【実施例】実施例１．生物活性の測定１−１：ｃＧＭＰ産生活性の測定本発明で合成した化合物の上記活性をＨｉｒａｔａら
（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ
ｕｎ．，１２８５３８，１９８５）、及びＳｃａｒｂ
ｏｒｏｕｇｈら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１
１２９６０，１９８６）の方法に従って測定した。用い
た細胞は、ラット大動脈由来の血管平滑筋培養細胞（以
下ＶＳＭＣと略す）である。１０−９〜１０−６Ｍのα
−ｈＡＮＰ、及びペプチドをＶＳＭＣと共にインキュベ
ートし、産出したｃＧＭＰ量を、ｃＧＭＰラジオイムノ
アッセイにて測定した。α−ｈＡＮＰによる最大反応値
を１００％とし、各ペプチドの最大反応率を求め活性の
指標とした。

【００４０】１−２：細胞増殖抑制活性の測定細胞増殖抑制活性は、前記ＶＳＭＣを用いてＫａｒｉｙ
ａ等の方法に従い（Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，
８０，１４３−１４７，１９９０）、［^３Ｈ］チミジン
の細胞内への取り込みを指標にＤＮＡ合成阻害率で測定
した。すなわち、静止期に同調させた細胞を１％血清あ
るいは２０ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ（血小板由来成長因
子）存在下、各検体を加え３７℃にて１４時間インキュ
ベートした。次に、この細胞に３７ｋＢｑ／ｍｌの［^３
Ｈ］チミジンを加えてさらに４時間インキュベートし、
この間細胞内に取り込まれた［^３Ｈ］チミジン量を測定
した。各検体のＤＮＡ合成阻害活性はペプチド非存在下
で１％血清あるいはＰＤＧＦのみを加えたときの
［^３Ｈ］チミジンの取り込み量を１００％とし、これに
対する抑制率で示した。測定結果を図２、図３及び表３
に示す。また、ＣＮＰ−２２に関しては、ＶＳＭＣを１
％血清存在下、ＣＮＰ−２２あるいはα−ｈＡＮＰを加
え４日間培養し、血球計算盤を用い細胞数を数えた。こ
の結果を表１に示す。

【００４１】実施例２．ＣＮＰ誘導体の合成本発明ペプチドは、すべてアプライドバイオシステム社
製ペプチド合成機４３１型を用い固相法にて作成した。
代表例として表２に示す化合物２と１９の合成を示す。２−１：化合物番号２；Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−
Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｇ
ｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｐｈ
ｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＯＨ（ジスルフィド型）の合成０．７ｇ（０．５ｍｍｏｌ）のＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−
Ｚ）−Ｏ−ＣＨ２−ＰＡＭ樹脂より出発し、６０％ＴＦ
Ａによる脱Ｂｏｃ、ＤＩＥＡによる中和、及びＤＣＣ／
ＨＯＢｔによる保護アミノ酸縮合を順次繰り返し、約
２．１ｇの保護ペプチド樹脂を得た。このものをパラ・
クレゾール３ｍｌ）存在下、−２℃で６０分間、ＨＦ
（１７ｍｌ）処理した。遊離ペプチドを５０ｍｌのＴＦ
Ａで抽出後濃縮し、エーテルを加え、８００ｍｇの粗ペ
プチドを得た。このものを３２ｇの飽和ウレア水に溶か
し、フェリシアン化カリウム（１４７ｍｇ，４４．８μ
ｍｏｌ）を含む飽和ウレア水（２８８ｍｌ，ｐＨ７．
４）中に撹拌下、滴下した。滴下終了後、反応液を酢酸
でｐＨ５とした後、１ＮＡｃＯＨで平衡化したＡＧ３
−Ｘ４Ａ（１０ｍｌ，Ｃｌ−型）と、ＨＰ−２０（１５
０ｍｌ）の連結カラムに添加した。１ＮＡｃＯＨ（５
００ｍｌ）で洗浄後、ＨＰ−２０に吸着したペプチドを
８０％ＣＨ_３ＣＮ／１ＮＡｃＯＨで溶出した。ペプチ
ドを含む画分を濃縮し、凍結乾燥して粗環状ペプチド
（７５０ｍｇ）を得た。

【００４２】次に、水で平衡化したイオン交換カラム
（ＣＭ−２ＳＷ，２φｘ１５ｃｍ）に添加し、水から
０．５ＭＮＨ４ＯＡｃ（ｐＨ７．２）への６０分間の
リニヤグラジエントでペプチドを溶出させた。主画分を
集め０．１％ＴＦＡで初期化した逆相Ｃ１８カラム（Ｙ
ＭＣ−ＰａｃｋＤ−ＯＤＳ２φｘ２５ｃｍ）に添加
し、３０％ＣＨ_３ＣＮ／０．１％ＴＦＡから６０％ＣＨ
_３ＣＮ／０．１％ＴＦＡへの６０分間のリニヤグラジエ
ントをかけ、１０ｍｌ／ｍｉｎで溶出させた。９７％以
上の純度をもつ画分を集め、凍結乾燥し１５０ｍｇの目
的物（２）を得た。本実施例に基づき、１９を除く他の
誘導体を作成した。

【００４３】２−２：化合物番号１９；Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−
Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｓ
ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−ＯＨ
の合成ＣＮＰ（６．０ｍｇ）の水溶液（５ｍｌ）にジチオスレ
イトール（１０ｍｇ）を加え、１０％アンモニア水でｐ
Ｈ８．５とした後、室温で３０分間放置した。逆相Ｃ１
８カラム（ＹＭＣ−ＰａｃｋＤ−ＯＤＳ２φｘ２５
ｃｍ）に反応液を添加後、実施例１−１に準じ、ＣＨ_３
ＣＮのグラジエント溶出によりペプチドを単離、凍結乾
燥して５．７ｍｇ（２．６μｍｏｌ）の還元型ＣＮＰを
得た。このものを水（３ｍｌ）に溶かし、１．６ｍｇ
（７．３μｍｏｌ）の４−ニトロベンゼンスルホン酸メ
チルを含むアセトニトリル溶液（０．５ｍｌ）を、上記
水溶液に加え、２時間室温に放置した。原料の消失をＨ
ＰＬＣで確認後、逆相Ｃ１８カラムでペプチドを分離
し、４．５ｍｇの目的物（１９）を得た。

【００４４】

【発明の効果】本発明では、まずＣＮＰの生理活性作用
に関して、ＣＮＰは血管平滑筋細胞に対し、強い細胞増
殖抑制活性を有することが初めて明らかにされた。ま
た、この作用の強さはα−ｈＡＮＰに比べ１０倍強いこ
とがわかった。さらに、この作用の強さと細胞内ｃＧＭ
ｐの濃度との間には正の相関関係が成立することが見い
だされた。次に、ＣＮＰの構造活性相関に関して、ＣＮ
ＰのｃＧＭＰ産生活性に関する最小活性構造は環状ＣＮ
Ｐ（６−２３）５であることがわかった。また、ＣＮＰ
の環内ドメインアミノ酸一次配列でＣＮＰ−２２の９位
から１１位までの配列（Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ）がＣ
ＮＰのｃＧＭＰ産生活性発現に重要であることがわかっ
た。さらに、新規ＣＮＰ誘導体の合成に関して、ＣＮＰ
−２２、ＣＮＰ（６−２２）及び［Ｌｅｕ１０、Ｌｙｓ
１１，Ｌｅｕ１２］α−ｈＡＮＰ（７−２８）の一部の
アミノ酸残基を異常アミノ酸（非天然型）残基に置換す
ることでＣＮＰ−２２あるいはα−ｈＡＮＰより強いｃ
ＧＮＰ産生活性を示す誘導体を作製できることがわかっ
た。以上のことから、血管平滑筋細胞に対し、強いｃＧ
ＭＰ産生活性ならびに細胞増殖抑制活性を示すＣＮＰ及
びＣＮＰ誘導体は、再狭窄及び動脈硬化など血管平滑筋
細胞の異常増殖が原因となる疾患に対し、極めて有効な
治療薬または予防薬としてその有用性が期待できる。な
お、本発明で合成した誘導体の中で、異常アミノ酸（非
天然型）残基を含んでいる誘導体は、ｉｎｖｉｖｏに
投与した場合、生体内（血中及び細胞表面）に存在する
プロテアーゼに対し抵抗性を示すことが考えられる。従
って、これらの誘導は、たとえＣＮＰ−２２またはα−
ｈＡＮＰに比べそのｃＧＭＰ産生活性が低下していて
も、血中半減期は異常アミノ酸を含まないＣＮＰ類似体
に比べ長くなることが考えられ、この観点から有用性が
期待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】Ａ型ＮＰ、Ｂ型ＮＰ、及びＣ型ＮＰそれぞれに
属する代表的なナトリウム利尿ペプチドの一次構造を示
す図である。

【図２】α−ｈＡＮＰ、ＣＮＰ−２２のＤＮＡ合成阻害
作用を示すグラフである。

【図３】α−ｈＡＮＰ、ＣＮＰ−２２、ｈＣＮＰ−５３
のＤＮＡ合成阻害作用を示すグラフである。

【図４】ＣＮＰ類似体ペプチドのｃＧＭＰ産生活性とＤ
ＮＡ合成阻害活性の相関関係を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者南竹義春大阪府三島郡島本町若山台１丁目１番１号サントリー株式会社生物医学研究所内 (72)発明者北島安雄大阪府三島郡島本町若山台１丁目１番１号サントリー株式会社生物医学研究所内 (72)発明者古谷真優美大阪府三島郡島本町若山台１丁目１番１号サントリー株式会社生物医学研究所内 (72)発明者松尾壽之大阪府箕面市小野原東５丁目５−15−141

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式【化１】で示される新規ペプチド及びそれらの生理的に許容され
うる酸付加物。ただし式中（Ａ）は、Ｈ−，Ｈ−Ｇｌ
ｙ，Ｈ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ，Ｈ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｙ，Ｈ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ，Ｈ−Ｇｌｙ
−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ，Ｈ−Ｓｅｒ，Ｈ−
Ｓｅｒ−Ｓｅｒ，Ｈ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ，Ｈ−Ａ
ｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ，Ｈ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−
Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ，Ｈ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒを表し、（Ｂ）はＨ−Ｃｙｓ，又はＰｍｐを、（Ｃ）はＰｈｅ−，ｐＣｌ−Ｐｈｅ，ｐＦ−Ｐｈｅ，ｐ
ＮＯ_２−Ｐｈｅ，またはＣｈａを（Ｄ）はＩｌｅ，Ｖａｌ，Ａｉｂ，ｔＬｅｕ，Ｇｌｙ，
又はＬｅｕ，（Ｅ）はＬｙｓ，又はＡｒｇ，（Ｆ）はＩｌｅ，Ｌｅｕ，又はＭｅｔ，（Ｇ）はＳｅｒ，又はＡｌａ，（Ｈ）はＭｅｔ，又はＧｌｎ，（Ｉ）は−ＯＨ，−Ａｓｎ−ＯＨ，−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−
ＯＨ，−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−ＯＨ，−Ａｓｎ−Ｓ
ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＯＨ，または−Ａｓｎ−Ｓｅｒ
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＯＨを表し、一般式中……
はジスルフィド結合を示す。但し、これらの式中で１）
α−ｈＡＮＰ，２）α−ｈＡＮＰ（７−２８），３）Ｃ
ＮＰ−２２を除く。
【請求項２】ＣＮＰ類似体ペプチドを有効成分とする平
滑筋増殖抑制剤。