JPH0662555B2 - 放射性核種金属キレート用化合物 - Google Patents
放射性核種金属キレート用化合物Info
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- JPH0662555B2 JPH0662555B2 JP61006155A JP615586A JPH0662555B2 JP H0662555 B2 JPH0662555 B2 JP H0662555B2 JP 61006155 A JP61006155 A JP 61006155A JP 615586 A JP615586 A JP 615586A JP H0662555 B2 JPH0662555 B2 JP H0662555B2
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- C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 放射性ラベルされた化合物は医療的診断及び処置におけ
る重要な道具である。このような化合物は、深部静脈血
栓の診断、リンパ節病理の研究、並びに新生物の検出、
進行度の決定及び治療を含む種々の技法において用いら
れる。これらの化合物の多くが金属放射性核種、例えば
テクノチウム−９９ｍを使用する。イン−ビボ投与のた
めに放射性核種を使用する場合、その放射性核種が標的
器官又は癌部位に局在化するのが好ましい。従って、放
射性核種は一般に、特定の器官又は組織による選択的な
結合又は吸着をもたらすように製剤化される。放射性核
種をあらかじめ選択された部位に正確に向かわせて周囲
の又は離れた組織に向けられるバックグラウンド放射能
を減少せしめ、投与量を減少し、イン−ビボイメージン
グにおけるバックグラウンドを最小にし、そして不所望
の副作用を最小にすることが非常に有利である。この目
的のため、それに放射性核種が接合することができる特
異的リガンド又はリセプターを用いる方法が有利であ
る。
る重要な道具である。このような化合物は、深部静脈血
栓の診断、リンパ節病理の研究、並びに新生物の検出、
進行度の決定及び治療を含む種々の技法において用いら
れる。これらの化合物の多くが金属放射性核種、例えば
テクノチウム−９９ｍを使用する。イン−ビボ投与のた
めに放射性核種を使用する場合、その放射性核種が標的
器官又は癌部位に局在化するのが好ましい。従って、放
射性核種は一般に、特定の器官又は組織による選択的な
結合又は吸着をもたらすように製剤化される。放射性核
種をあらかじめ選択された部位に正確に向かわせて周囲
の又は離れた組織に向けられるバックグラウンド放射能
を減少せしめ、投与量を減少し、イン−ビボイメージン
グにおけるバックグラウンドを最小にし、そして不所望
の副作用を最小にすることが非常に有利である。この目
的のため、それに放射性核種が接合することができる特
異的リガンド又はリセプターを用いる方法が有利であ
る。
興味ある参照文献にはKhaw等、J.Nucl.Med.（１９８
２）２３：１０１１；Rhodes,A.B.,Sem.Nucl.Med.（１
９７４）４：２８１；Davidson等、Inorg.Chem.（１９
８１）２０：１６２９；並びに、Byrne及びTolman,J.Nu
cl.Med.（１９８３）２４：Ｐ１２６が含まれる。特
に、Fritzberg等、J.Nucl.Med.（１９８２）２３：５２
９；Fritzberg等、前掲（１９８１）２２：２５８；及
びFritzberg等、前掲（１９８２）２３：Ｐ１７を、エ
チレンジアミンカルボン酸誘導体のメルカプトアセチル
誘導体の記載について参照のこと。さらに、米国特許N
o.4,434,151、No.4,444,690、及びNo.4,472,509を参照の
こと。
２）２３：１０１１；Rhodes,A.B.,Sem.Nucl.Med.（１
９７４）４：２８１；Davidson等、Inorg.Chem.（１９
８１）２０：１６２９；並びに、Byrne及びTolman,J.Nu
cl.Med.（１９８３）２４：Ｐ１２６が含まれる。特
に、Fritzberg等、J.Nucl.Med.（１９８２）２３：５２
９；Fritzberg等、前掲（１９８１）２２：２５８；及
びFritzberg等、前掲（１９８２）２３：Ｐ１７を、エ
チレンジアミンカルボン酸誘導体のメルカプトアセチル
誘導体の記載について参照のこと。さらに、米国特許N
o.4,434,151、No.4,444,690、及びNo.4,472,509を参照の
こと。
〔発明の概要〕 種々の病理状態の診断及び処置のために金属放射性核種
でラベルされた蛋白質が提供される。特に、リンパ節病
及び深部静脈血栓を含む状態の診断、並びに新生物の検
出及び進行度の決定のために、キレート化された放射性
核種蛋白質接合体が使用される。さらに、蛋白質接合体
としてのキレート化放射性核種は腫瘍の放射線療法のた
めに使用される。
でラベルされた蛋白質が提供される。特に、リンパ節病
及び深部静脈血栓を含む状態の診断、並びに新生物の検
出及び進行度の決定のために、キレート化された放射性
核種蛋白質接合体が使用される。さらに、蛋白質接合体
としてのキレート化放射性核種は腫瘍の放射線療法のた
めに使用される。
本発明は金属放射性核種キレートの製造のための前駆体
化合物に関する。
化合物に関する。
本発明の化合物は、次の式： （式中、Ｔは除去可能な硫黄保護基であり、ｎは１〜６
の整数であり、Ｗは＝NH又は＝０であり、そしてＹはヒ
ドロキシル基、又はペプチドとの結合を形成することが
できる活性エステル基である） により表わされる金属キレート形成性化合物である。
の整数であり、Ｗは＝NH又は＝０であり、そしてＹはヒ
ドロキシル基、又はペプチドとの結合を形成することが
できる活性エステル基である） により表わされる金属キレート形成性化合物である。
さらに好ましい化合物として、次の式： （式中、Ｔは硫黄保護基であり、そしてＹは活性エステ
ルの脱離基である） で表わされる化合物が挙げられる。
ルの脱離基である） で表わされる化合物が挙げられる。
Ｔは硫黄保護基であり、これにはアシル、アシルチオ、
ヒドロカルビルチオ又は置換されたヒドロカルビルチオ
又はヘテロシクリルチオが含まれ、ここでアシル又はヒ
ドロカルビル基は脂肪族、脂環族、芳香族又はこれらの
組合せであり、そしてアシル基にはさらに複素環性のも
のが含まれ、ここでアシルは一般にカルボキシアシルで
あり、Ｔは、アシルである場合、一般に炭素原子数１〜
10個、２〜10個、一般に２〜８個からなり、置換基には
非−オキソ−カルボニル（カルボキシ）、ハロ（アリー
ル）、特にフルオロ及びクロロ、シアノ及びニトロが含
まれる。
ヒドロカルビルチオ又は置換されたヒドロカルビルチオ
又はヘテロシクリルチオが含まれ、ここでアシル又はヒ
ドロカルビル基は脂肪族、脂環族、芳香族又はこれらの
組合せであり、そしてアシル基にはさらに複素環性のも
のが含まれ、ここでアシルは一般にカルボキシアシルで
あり、Ｔは、アシルである場合、一般に炭素原子数１〜
10個、２〜10個、一般に２〜８個からなり、置換基には
非−オキソ−カルボニル（カルボキシ）、ハロ（アリー
ル）、特にフルオロ及びクロロ、シアノ及びニトロが含
まれる。
Ｔの代表例として、保護されるべき硫黄原子と一緒にな
って構成される、次の式： （式中、Ｒ3は炭素原子数約２〜５個の低級アルキル基
であり、Ｒ4は炭素原子数１〜３個の低級アルキル基で
あり、そしてＲ5は水素、又は炭素原子数１〜３個の低
級アルキル基である） により表わされるヘミチオアセタール硫黄保護基が挙げ
られる。
って構成される、次の式： （式中、Ｒ3は炭素原子数約２〜５個の低級アルキル基
であり、Ｒ4は炭素原子数１〜３個の低級アルキル基で
あり、そしてＲ5は水素、又は炭素原子数１〜３個の低
級アルキル基である） により表わされるヘミチオアセタール硫黄保護基が挙げ
られる。
また、Ｙの代表例として、次の式： から成る群から選択された脱離基が挙げられる。
上記の化合物の具体例として、次の基： （式中、Ｔは硫黄保護基である） で表わされる化合物が挙げられる。
さらに具体的には、次の式： で表わされる化合物、及び次の式： で表わされる化合物が挙げられる。
前記アルカリ金属イオンは、好ましくはナトリウムイオ
ン、又はカリウムイオンである。
ン、又はカリウムイオンである。
前記ポリペプチドは、好ましくは、分子量約1000以上、
さらに一般には分子量約2000以上、一般に約1.6MDal以
下、さらに一般には約800KDal以下のポリペプチドであ
る。ポリペプチドとして、免疫グロブリン、又はその特
異的結合断片が特に興味深い。
さらに一般には分子量約2000以上、一般に約1.6MDal以
下、さらに一般には約800KDal以下のポリペプチドであ
る。ポリペプチドとして、免疫グロブリン、又はその特
異的結合断片が特に興味深い。
C(W)とポリペプチドとの間の結合はC(W)-Yの性質により
変化するであろう。C(W)-Yがカルボキシル官能基である
場合、この連結はＷが＝０であるか＝NHであるかに依存
してカルボキサミド又はアミジンである。しかしなが
ら、C(W)-Yがメチレンアミン又はメチレンヒドラジンを
定義する場合、還元的アミノ化にはオキソ基に開裂され
ている（例えば過ヨウ素酸塩によるグリコール開裂）糖
置換されたポリペプチドが必要であろう。還元的アミ化
は、オキソ−置換されたポリペプチドをアミノ−又はヒ
ドラジノ−置換されたN2S2リガンドと、還元剤、例えば
シアノボロヒドリドの存在下で一緒にすることにより達
成することができる。
変化するであろう。C(W)-Yがカルボキシル官能基である
場合、この連結はＷが＝０であるか＝NHであるかに依存
してカルボキサミド又はアミジンである。しかしなが
ら、C(W)-Yがメチレンアミン又はメチレンヒドラジンを
定義する場合、還元的アミノ化にはオキソ基に開裂され
ている（例えば過ヨウ素酸塩によるグリコール開裂）糖
置換されたポリペプチドが必要であろう。還元的アミ化
は、オキソ−置換されたポリペプチドをアミノ−又はヒ
ドラジノ−置換されたN2S2リガンドと、還元剤、例えば
シアノボロヒドリドの存在下で一緒にすることにより達
成することができる。
本発明の化合物は、次の式： （式中、ｎは１〜６の整数であり、Ｗは＝NH又は＝０で
あり、Ｙはヒドロキシル基、ペプチドとの結合を形成す
ることができる活性エステル基、又はペプチドであり、
そしてＭは放射性核種である） で表わされるキレート化合物の製造のために有用であ
る。
あり、Ｙはヒドロキシル基、ペプチドとの結合を形成す
ることができる活性エステル基、又はペプチドであり、
そしてＭは放射性核種である） で表わされるキレート化合物の製造のために有用であ
る。
放射性核種として種々の金属を使用することができる。
これらの金属には、銅、例えば67Cu及び64Cu、テクネチ
ウム、例えば99mTc、レニウム、例えば186Re及び188Re
が含まれる。
これらの金属には、銅、例えば67Cu及び64Cu、テクネチ
ウム、例えば99mTc、レニウム、例えば186Re及び188Re
が含まれる。
エステルは、水性媒体中でポリペプチドと反応すること
が知られているエステルである。特定の放射性核種、蛋
白質、及び接合の条件に依存してエステル類のいずれか
が好ましい。使用される一般的なエステルは、ｏ−及び
ｐ−ニトロフェニル、２−クロロ−４−ニトロフェニ
ル、シアノメチル、２−メルカプトピリジル、ヒドロキ
シベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミ
ド、トリクロロフェニル、テトラフルオロフェニル、ｏ
−ニトロ−ｐ−スルホフェニル、Ｎ−ヒドロキシフタリ
イミド等である。ほとんどの場合、エステルは活性フェ
ノールのそれ、特にニトロ−活性化フェノール、及びヒ
ドロキシルアミンに基礎を置く環状化合物のエステルで
ある。他のヒドロキシ化合物が入手可能となる場合、こ
れらもこの発明において使用される。
が知られているエステルである。特定の放射性核種、蛋
白質、及び接合の条件に依存してエステル類のいずれか
が好ましい。使用される一般的なエステルは、ｏ−及び
ｐ−ニトロフェニル、２−クロロ−４−ニトロフェニ
ル、シアノメチル、２−メルカプトピリジル、ヒドロキ
シベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミ
ド、トリクロロフェニル、テトラフルオロフェニル、ｏ
−ニトロ−ｐ−スルホフェニル、Ｎ−ヒドロキシフタリ
イミド等である。ほとんどの場合、エステルは活性フェ
ノールのそれ、特にニトロ−活性化フェノール、及びヒ
ドロキシルアミンに基礎を置く環状化合物のエステルで
ある。他のヒドロキシ化合物が入手可能となる場合、こ
れらもこの発明において使用される。
ポリペプチド化合物は、使用する放射性核種の性質に依
存して広く異なることができる。すなわち、化合物はリ
ガンドであってもよく、又はリセプターであってもよ
い。リガンドには、ホルモン、リンホカイン、成長因
子、基質、特に表面膜リセプターに結合する化合物（複
合体は表面に結合して保持され、又は細胞内に入る）が
含まれる。リセプターとして、表面膜リセプター、抗
体、酵素、天然リセプター、レクチン等を挙げることが
できる。免疫グロブリン又はその同等物（Fab断片、Ｆ
（ab′）2、Fvを含む）、Ｔ−細胞リセプター等が興味
深い。
存して広く異なることができる。すなわち、化合物はリ
ガンドであってもよく、又はリセプターであってもよ
い。リガンドには、ホルモン、リンホカイン、成長因
子、基質、特に表面膜リセプターに結合する化合物（複
合体は表面に結合して保持され、又は細胞内に入る）が
含まれる。リセプターとして、表面膜リセプター、抗
体、酵素、天然リセプター、レクチン等を挙げることが
できる。免疫グロブリン又はその同等物（Fab断片、Ｆ
（ab′）2、Fvを含む）、Ｔ−細胞リセプター等が興味
深い。
ω，（ω−ｘ）−ジアミノ脂肪族カルボン酸、特にアル
カン酸は炭素原子数４〜10個、一般に４〜７個のもので
あり、そして既知の化合物であり、又は常法に従って、
もしくはこの明細書に記載されるようにして容易に製造
される。例えば、近接ジブロミドを緩和な条件下で水性
アンモニアと化合させることができる。次に、ジアミノ
エステル、例えば低級アルキルエステルの塩酸塩を、不
活性炭化水素溶剤、例えばトルエン中でのα−ハロアシ
ルクロリド、例えばクロロアセチルクロリドと反応せし
め、次に水素スルフィドの適当な誘導体、例えばナトリ
ウムベンズチオラート、ナトリウムチオアセテート、ｔ
−ブチルメルカプタン等を用いて、クロロ基をメルカプ
ト基で置換することにより、誘導体化することができ
る。今や、エステルが酸に加水分解され、そして金属キ
レートが形成れ、又はチオエーテルが活性化されたスル
ホニルクロリドと反応し、次にチオグリコレートで処理
される。他の方法として、α−アルキルチオ置換された
アシル化合物をカルボジイミドと共に用いてアシル化
し、次にチオエーテルを開裂してジスルフィドを形成
し、そして上記のようにしてジスルフィドをメルカプト
に還元する。
カン酸は炭素原子数４〜10個、一般に４〜７個のもので
あり、そして既知の化合物であり、又は常法に従って、
もしくはこの明細書に記載されるようにして容易に製造
される。例えば、近接ジブロミドを緩和な条件下で水性
アンモニアと化合させることができる。次に、ジアミノ
エステル、例えば低級アルキルエステルの塩酸塩を、不
活性炭化水素溶剤、例えばトルエン中でのα−ハロアシ
ルクロリド、例えばクロロアセチルクロリドと反応せし
め、次に水素スルフィドの適当な誘導体、例えばナトリ
ウムベンズチオラート、ナトリウムチオアセテート、ｔ
−ブチルメルカプタン等を用いて、クロロ基をメルカプ
ト基で置換することにより、誘導体化することができ
る。今や、エステルが酸に加水分解され、そして金属キ
レートが形成れ、又はチオエーテルが活性化されたスル
ホニルクロリドと反応し、次にチオグリコレートで処理
される。他の方法として、α−アルキルチオ置換された
アシル化合物をカルボジイミドと共に用いてアシル化
し、次にチオエーテルを開裂してジスルフィドを形成
し、そして上記のようにしてジスルフィドをメルカプト
に還元する。
４，５−ジアミノペンタノエートのために使用される他
の方法は容易に入手できるグルタメートを用いる。５−
カルボキシエステルを形成した後、アミノ基を保護し、
そして酸基（１−カルボキシル）を選択的にアルコール
に還元する。アルコールを活性開裂基、例えばハライド
又はシュードハライドに転換し、次にアミノ基への中間
体として機能する窒素陰イオン、例えばアジドで置き換
える。アミノ中間体のアミノへの触媒的還元、及びエス
テルの加水分解の後、Ｓ−保護α−メルカプトアシル基
によりアミノ基をアシル化する。保護基を除去し、交換
し、又は変形することができ、例えば水溶化基を導入す
ることができる。
の方法は容易に入手できるグルタメートを用いる。５−
カルボキシエステルを形成した後、アミノ基を保護し、
そして酸基（１−カルボキシル）を選択的にアルコール
に還元する。アルコールを活性開裂基、例えばハライド
又はシュードハライドに転換し、次にアミノ基への中間
体として機能する窒素陰イオン、例えばアジドで置き換
える。アミノ中間体のアミノへの触媒的還元、及びエス
テルの加水分解の後、Ｓ−保護α−メルカプトアシル基
によりアミノ基をアシル化する。保護基を除去し、交換
し、又は変形することができ、例えば水溶化基を導入す
ることができる。
種々のN2S2キレート環を調製するために種々の合成法を
使用することができる。カルボキサミドを形成し、そし
てアルミニウム又はボロヒドリドを用いてアミンを形成
することができる。脂肪族ハライドによりアミンをアル
キル化することができる。エチレンもしくはプロピレン
ジアミン又はカルボキシアルキルアルキレンジアミンを
用いてチオグリコール酸を連結することができる。N2B2
リガンドに依存して他の合成法を使用することもでき
る。
使用することができる。カルボキサミドを形成し、そし
てアルミニウム又はボロヒドリドを用いてアミンを形成
することができる。脂肪族ハライドによりアミンをアル
キル化することができる。エチレンもしくはプロピレン
ジアミン又はカルボキシアルキルアルキレンジアミンを
用いてチオグリコール酸を連結することができる。N2B2
リガンドに依存して他の合成法を使用することもでき
る。
ニトリルによる置換によるアミノ保護ω，（ω−ｘ）−
ジアミノアルキルハライド又はシュードハライドのニト
リルの調製、前記のようにして脱保護されたアミノ基の
メルカプトアシル化、及び常法、例えば酸性（HCl）無
水アルカノールによるイミドエステルの形成により、イ
ミデートを用いることができる。
ジアミノアルキルハライド又はシュードハライドのニト
リルの調製、前記のようにして脱保護されたアミノ基の
メルカプトアシル化、及び常法、例えば酸性（HCl）無
水アルカノールによるイミドエステルの形成により、イ
ミデートを用いることができる。
Ｓ−保護基は広範囲に変えることができ、アシル基、チ
オ基、又は次の操作中にチオ基を保護しそしてペプチド
接合体への不都合な効果を伴わないで容易に除去され得
る他の化合物である。
オ基、又は次の操作中にチオ基を保護しそしてペプチド
接合体への不都合な効果を伴わないで容易に除去され得
る他の化合物である。
代表的な基にはベンゾイル、アセチル、ｍ−もしくはｐ
−フタロイル、チオグリコール酸、ｏ−カルボキシチオ
フェノール、エチルチオカルボネート、β−メルカプト
プロピオン酸、テトラヒドロピラニル、スルホナート等
が含まれる。別法として、環状ジ−又はポリ−スルフィ
ドを形成することができる。スルフィニルハライド、ジ
ニトロチオフェノキシド置換されたメルカプタンを用い
て、保護基等の過剰の存在下で穏和な酸化によりジスル
フィドを調製することができる。
−フタロイル、チオグリコール酸、ｏ−カルボキシチオ
フェノール、エチルチオカルボネート、β−メルカプト
プロピオン酸、テトラヒドロピラニル、スルホナート等
が含まれる。別法として、環状ジ−又はポリ−スルフィ
ドを形成することができる。スルフィニルハライド、ジ
ニトロチオフェノキシド置換されたメルカプタンを用い
て、保護基等の過剰の存在下で穏和な酸化によりジスル
フィドを調製することができる。
保護基は種々の方法で除去することができる。
チオエステルは水性アンモニア、アルカノール中水性ア
ルコキシド、又は任意の常法を用いて加水分解すること
ができる。ジスルフィドは、ジチオスレイトール、グル
タチオン、β−メルカプトエチルアミン又は他の常用の
試薬を用いて開裂せしめることができる。ジスルフィド
の開裂はポリペプチドへの接合の前又は後で行うことが
できる。
ルコキシド、又は任意の常法を用いて加水分解すること
ができる。ジスルフィドは、ジチオスレイトール、グル
タチオン、β−メルカプトエチルアミン又は他の常用の
試薬を用いて開裂せしめることができる。ジスルフィド
の開裂はポリペプチドへの接合の前又は後で行うことが
できる。
特定の金属に依存して、金属キレートを製造するために
種々の条件及び常法を用いることができる。テクニチウ
ムキレートを製造するため、カルボキシレート又は活性
化エステルのごときキレート化合物を、還元剤、例えば
第一錫又はジチオニトの存在下、常用の条件下でペルテ
クネテート（pertechnetate）溶液と一緒にし、こうし
てテクネチウムキレートを安定な塩として形成せしめ
る。レニウムキレートは、クエン酸塩及びN2S2リガンド
の存在下で第一錫イオンによりペルレネート（perrhena
te）を還元することにより形成することができる。収率
は、５０℃にて１時間後５０％以上である。
種々の条件及び常法を用いることができる。テクニチウ
ムキレートを製造するため、カルボキシレート又は活性
化エステルのごときキレート化合物を、還元剤、例えば
第一錫又はジチオニトの存在下、常用の条件下でペルテ
クネテート（pertechnetate）溶液と一緒にし、こうし
てテクネチウムキレートを安定な塩として形成せしめ
る。レニウムキレートは、クエン酸塩及びN2S2リガンド
の存在下で第一錫イオンによりペルレネート（perrhena
te）を還元することにより形成することができる。収率
は、５０℃にて１時間後５０％以上である。
キレート化された酸はすでにエステル化されており、又
は常法に従ってエステル化される。すでにエステル化さ
れている場合、不安定な錯体、例えばTc−９９mmグルコ
ネートが調製され、これはN2S2活性化エステルリガンド
への交換を許容し、蛋白質接合のために適当な錯体を形
成するであろう。他の方法として、水性媒体中、少なく
とも理論量、好ましくは過剰量のヒドロキシ化合物の存
在下で、水溶性カルボジイミド、例えばＥＤＣＩを用い
ることによりカルボン酸を活性化することができる。適
切に緩衝化された水性媒体を用いることができる。過剰
のカルボジイミドは酢酸塩を加えることにより尿素に転
換することができる。次に、この水性媒体を、さらに精
製することなくポリペプチドとの接合のために直接使用
することができる。好ましくは、ポリペプチドをエステ
ル含有水性媒体に、便利な濃度、穏和なアルカリ性pHに
て、一般に約7.5度以上、約９以下にて添加し、そして
活性エステルのすべてがポリペプチドと反応するか又は
実質上完全に加水分解されるのに十分な時間反応を行
う。通常、時間は約６時間より短くそして３０分間以上
であり、温度は約０℃〜５０℃の範囲であり、通常約４
０℃を超えない。特定の条件は、特定の活性化されたエ
ステル、pH、ポリペプチドの活性等に従って選択する。
は常法に従ってエステル化される。すでにエステル化さ
れている場合、不安定な錯体、例えばTc−９９mmグルコ
ネートが調製され、これはN2S2活性化エステルリガンド
への交換を許容し、蛋白質接合のために適当な錯体を形
成するであろう。他の方法として、水性媒体中、少なく
とも理論量、好ましくは過剰量のヒドロキシ化合物の存
在下で、水溶性カルボジイミド、例えばＥＤＣＩを用い
ることによりカルボン酸を活性化することができる。適
切に緩衝化された水性媒体を用いることができる。過剰
のカルボジイミドは酢酸塩を加えることにより尿素に転
換することができる。次に、この水性媒体を、さらに精
製することなくポリペプチドとの接合のために直接使用
することができる。好ましくは、ポリペプチドをエステ
ル含有水性媒体に、便利な濃度、穏和なアルカリ性pHに
て、一般に約7.5度以上、約９以下にて添加し、そして
活性エステルのすべてがポリペプチドと反応するか又は
実質上完全に加水分解されるのに十分な時間反応を行
う。通常、時間は約６時間より短くそして３０分間以上
であり、温度は約０℃〜５０℃の範囲であり、通常約４
０℃を超えない。特定の条件は、特定の活性化されたエ
ステル、pH、ポリペプチドの活性等に従って選択する。
金属イオンの非存在下でキレート化剤（N2S2）をポリペ
プチドに接合させることも可能であるが好ましくはな
い。カルボン酸基をポリペプチドに連結して安定な共有
結合、例えばアミド結合を形成し、次に還元されキレー
ト化された交換可能な形の金属を添加する。キレートと
してα−又は−ジオキソ化合物が有用である。便利に
は、金属イオンを、弱くキレート化されたイオンとし
て、又は弱くキレート化する基、例えばウロネート、例
えばグルコネートの存在下で加えることができる。
プチドに接合させることも可能であるが好ましくはな
い。カルボン酸基をポリペプチドに連結して安定な共有
結合、例えばアミド結合を形成し、次に還元されキレー
ト化された交換可能な形の金属を添加する。キレートと
してα−又は−ジオキソ化合物が有用である。便利に
は、金属イオンを、弱くキレート化されたイオンとし
て、又は弱くキレート化する基、例えばウロネート、例
えばグルコネートの存在下で加えることができる。
この発明のキレートは、哺乳動物宿主に、一般に注射に
より、放射性核種が望まれる所定の部位に依存して静脈
内に、動脈内に、腹腔に、腫瘍内に、又はこれらに類似
する方法により投与される。一般に、宿主のサイズに依
存して、約0.001〜５０μCi/kg宿主となるように約0.1
〜２mlが投与される。ヒトのためには、投与量は一般
に、約１０〜５０mCi／７０kg宿主、さらに一般には約
２５〜３５mCi／７０kg宿主である。下等哺乳動物、例
えばマウスについては、生体分布研究のためには１μCi
であり、他方イメージング研究のためには５００μCiよ
り多量である。その目的に応じて放射性核種を投与した
後、検出又は治療のための種々の方法により宿主を処理
することができる。
より、放射性核種が望まれる所定の部位に依存して静脈
内に、動脈内に、腹腔に、腫瘍内に、又はこれらに類似
する方法により投与される。一般に、宿主のサイズに依
存して、約0.001〜５０μCi/kg宿主となるように約0.1
〜２mlが投与される。ヒトのためには、投与量は一般
に、約１０〜５０mCi／７０kg宿主、さらに一般には約
２５〜３５mCi／７０kg宿主である。下等哺乳動物、例
えばマウスについては、生体分布研究のためには１μCi
であり、他方イメージング研究のためには５００μCiよ
り多量である。その目的に応じて放射性核種を投与した
後、検出又は治療のための種々の方法により宿主を処理
することができる。
次に、例によりこの発明をさらに具体的に説明する。但
し、これによりこの発明の範囲を限定するものではな
い。
し、これによりこの発明の範囲を限定するものではな
い。
例1.Ｎ，Ｎ′−ビス（ベンゾイルメルカプトアセチル）
−３，４−ジアミノブチレートの合成 窒素のもと暗フラスコ中に1.54ｇ（0.010ｍmole）の
３，４−ジアミノ酪酸塩酸塩及び２５０mlの純エタノー
ルを入れる。次に、この溶液中に乾燥HClガスを泡立て
る。この混合物を１〜２日間、エチルエステルの形成が
完了するまで還流する。次に生成物を乾燥固体に濃縮
し、そして塩酸塩エステルを、氷浴温度にて急速攪拌す
ることにより、５０mlのトルエンと５０mlの飽和炭酸水
素ナトリウムとの混合物中に溶解する。この溶液に、１
０mlのトルエン中5.0ｇ（0.044mole）のクロロアセチル
クロリドを滴加する。添加が完了した後、混合物を室温
まで放置し、そしてさらに３０分間攪拌する。層を分離
し、そして水相を酢酸エチルで２回抽出する。有機相を
一緒にし、水及び塩水で洗浄し、そして乾燥する（硫酸
マグネシウム）。溶剤を除去することにより生成物を白
色固体として残す。この生成物をさらに精製することな
く使用することができる。
−３，４−ジアミノブチレートの合成 窒素のもと暗フラスコ中に1.54ｇ（0.010ｍmole）の
３，４−ジアミノ酪酸塩酸塩及び２５０mlの純エタノー
ルを入れる。次に、この溶液中に乾燥HClガスを泡立て
る。この混合物を１〜２日間、エチルエステルの形成が
完了するまで還流する。次に生成物を乾燥固体に濃縮
し、そして塩酸塩エステルを、氷浴温度にて急速攪拌す
ることにより、５０mlのトルエンと５０mlの飽和炭酸水
素ナトリウムとの混合物中に溶解する。この溶液に、１
０mlのトルエン中5.0ｇ（0.044mole）のクロロアセチル
クロリドを滴加する。添加が完了した後、混合物を室温
まで放置し、そしてさらに３０分間攪拌する。層を分離
し、そして水相を酢酸エチルで２回抽出する。有機相を
一緒にし、水及び塩水で洗浄し、そして乾燥する（硫酸
マグネシウム）。溶剤を除去することにより生成物を白
色固体として残す。この生成物をさらに精製することな
く使用することができる。
1.41ｇ（約4.45ｍmole）のビス−クロロアセタミドの溶
液を、窒素のもとで１０mlの乾燥エタノール中に調製す
る。これに、乾燥エタノール中チオ安息香酸ナトリウム
の溶液〔ナトリウムメトキシド（0.204ｇ（8.87ｍmol
e）のナトリウム、及びエタノール）を1.23ｇ（8.90ｍm
ole）のチオ安息香酸と反応せしめて調製する〕を加え
る。室温にて数分間置いた後、沈殿が生ずる。反応混合
物を３０分間還流加熱する。次に放冷し、酢酸エチルで
希釈し、水及び塩水で洗浄し、そして乾燥する（硫酸マ
グネシウム）。溶剤を除去してクリーム色の固体を残
す。これはトルエンから結晶化する。
液を、窒素のもとで１０mlの乾燥エタノール中に調製す
る。これに、乾燥エタノール中チオ安息香酸ナトリウム
の溶液〔ナトリウムメトキシド（0.204ｇ（8.87ｍmol
e）のナトリウム、及びエタノール）を1.23ｇ（8.90ｍm
ole）のチオ安息香酸と反応せしめて調製する〕を加え
る。室温にて数分間置いた後、沈殿が生ずる。反応混合
物を３０分間還流加熱する。次に放冷し、酢酸エチルで
希釈し、水及び塩水で洗浄し、そして乾燥する（硫酸マ
グネシウム）。溶剤を除去してクリーム色の固体を残
す。これはトルエンから結晶化する。
例2.Ｔｃ−９９ｍによる放射性ラベル化 １．例１において精製した生成物（0.1mg）を0.3mlのエ
タノールに加熱溶解し、次に３０μｌの５Ｎ水酸化ナト
リウム及び0.3mlの水を次々に加える。９５℃にて１５
分間加熱した後、この間にエタノールが蒸発して、加水
分解されたリガンドの実質的に水性の溶液が残る。次
に、この混合物に塩溶液（0.5ml以下）中ゼネレーター
・ペルテクネテート（約３０mCi以下のＴｃ−９９ｍ及
び0.5mgの新しく溶解したナトリウムジチオニトを含
む）を加え、あるいは、(2)混合物を室温にて短時間放
置した後、混合物をさらに１５分間９５℃に加熱し、そ
してpHを約８に調整する。
タノールに加熱溶解し、次に３０μｌの５Ｎ水酸化ナト
リウム及び0.3mlの水を次々に加える。９５℃にて１５
分間加熱した後、この間にエタノールが蒸発して、加水
分解されたリガンドの実質的に水性の溶液が残る。次
に、この混合物に塩溶液（0.5ml以下）中ゼネレーター
・ペルテクネテート（約３０mCi以下のＴｃ−９９ｍ及
び0.5mgの新しく溶解したナトリウムジチオニトを含
む）を加え、あるいは、(2)混合物を室温にて短時間放
置した後、混合物をさらに１５分間９５℃に加熱し、そ
してpHを約８に調整する。
２．例１の保護されたチオール及び遊離カルボン酸を有
するリガンド0.10mgを、２０mgのグルコン酸ナトリウム
及び0.010mgのSnCl2・2H2Oに加え、pHを５に調整する。
ペルテクネテートとしてのＴｃ−９９ｍを混合物に加
え、そして混合物を９５℃にて５分間加熱する。
するリガンド0.10mgを、２０mgのグルコン酸ナトリウム
及び0.010mgのSnCl2・2H2Oに加え、pHを５に調整する。
ペルテクネテートとしてのＴｃ−９９ｍを混合物に加
え、そして混合物を９５℃にて５分間加熱する。
生成物を精製用ＨＰＬＣにより精製することができ、こ
の場合２５cmオクタデシルシランカラム（Altex Model
３１２クロマトグラフ；4.6×２５０mmＯＤＳウルトラ
スペア，５μ）を使用し、そして９５％の0.01Ｍリン酸
ナトリウム及び５％のエタノールで1.0ml／分の流速で
溶出する。調製物をシレカゲル薄層ストリップ上で、還
元され加水分解されたテクニチウムについて分析した。
の場合２５cmオクタデシルシランカラム（Altex Model
３１２クロマトグラフ；4.6×２５０mmＯＤＳウルトラ
スペア，５μ）を使用し、そして９５％の0.01Ｍリン酸
ナトリウム及び５％のエタノールで1.0ml／分の流速で
溶出する。調製物をシレカゲル薄層ストリップ上で、還
元され加水分解されたテクニチウムについて分析した。
例3.活性化されたエステルの形成 活性化されたエステルの形成の条件は次の通りである。
反応フラスコに、カルボン酸リガンド又は痕跡レベルの
金属錯体カルボキシレート及び等モル量のヒドロキシ化
合物及び小過剰量、約２５％過剰量の１−エチル−３−
ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩（ＥＣＤ
Ｉ）及び４００μのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
を加える。反応が完了した後、酢酸ナトリウムを加えて
未反応のＥＣＤＩを分解し、そして溶剤を接合のために
そのまま使用する。
反応フラスコに、カルボン酸リガンド又は痕跡レベルの
金属錯体カルボキシレート及び等モル量のヒドロキシ化
合物及び小過剰量、約２５％過剰量の１−エチル−３−
ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩（ＥＣＤ
Ｉ）及び４００μのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
を加える。反応が完了した後、酢酸ナトリウムを加えて
未反応のＥＣＤＩを分解し、そして溶剤を接合のために
そのまま使用する。
接合すべき蛋白質を0.2Ｍ硼酸緩衝液（pH8.5〜9.0）中
に約２〜５mg/mlの蛋白質濃度に溶解する。すべての蛋
白質が溶解するまで混合物を４℃に保持する。pHを8.5
〜9.0に調整した水性蛋白質溶液にエステル溶液を加
え、そして必要であればpHを再調整する。次に、生成し
た接合体を、ＨＰＬＣゲル過カラム上で、溶離剤とし
て0.05Ｍリン酸塩（pH7.4）を用いて製造的にクロマト
グラフ処理する。
に約２〜５mg/mlの蛋白質濃度に溶解する。すべての蛋
白質が溶解するまで混合物を４℃に保持する。pHを8.5
〜9.0に調整した水性蛋白質溶液にエステル溶液を加
え、そして必要であればpHを再調整する。次に、生成し
た接合体を、ＨＰＬＣゲル過カラム上で、溶離剤とし
て0.05Ｍリン酸塩（pH7.4）を用いて製造的にクロマト
グラフ処理する。
次の研究において種々の条件を用い、この場合、時間、
温度、濃度及びpHの種々の条件下で、免疫グロブリンと
の反応のために上記のようにして調製されたテクニチウ
ムキレートの活性化エステルを使用した。次の第１表に
結果を示す。
温度、濃度及びpHの種々の条件下で、免疫グロブリンと
の反応のために上記のようにして調製されたテクニチウ
ムキレートの活性化エステルを使用した。次の第１表に
結果を示す。
例4.４，５−ジアミノペンタノエートの合成 ２００mlの水中50.5ｇの炭酸水素ナトリウムの溶液に8
5.0ｇにグルタミン酸γ−エチルエステルを加え、そし
てこの混合物を氷−塩浴中で冷却した。温度を０℃〜５
℃に維持しながら、４０ｇのカルボベンゾキシクロリド
を加え、そして混合物を５時間攪拌し、次に室温に加熱
し、そしてさらに２時間攪拌した。２×２００mlのエー
テルで抽出した後、混合物を６NHClによりコンゴレッド
pH３に酸性化した。分離した油状物を３×１００mlの塩
化メチレンで抽出し、一緒にした有機層を塩水及び水で
洗浄し、そして次に無水硫酸ナトリウムで乾燥した。蒸
発、及び２００mlの四塩化炭素からの結晶化により46.3
ｇ（７７％）の収量が得られた。融点８６℃〜８８℃。
5.0ｇにグルタミン酸γ−エチルエステルを加え、そし
てこの混合物を氷−塩浴中で冷却した。温度を０℃〜５
℃に維持しながら、４０ｇのカルボベンゾキシクロリド
を加え、そして混合物を５時間攪拌し、次に室温に加熱
し、そしてさらに２時間攪拌した。２×２００mlのエー
テルで抽出した後、混合物を６NHClによりコンゴレッド
pH３に酸性化した。分離した油状物を３×１００mlの塩
化メチレンで抽出し、一緒にした有機層を塩水及び水で
洗浄し、そして次に無水硫酸ナトリウムで乾燥した。蒸
発、及び２００mlの四塩化炭素からの結晶化により46.3
ｇ（７７％）の収量が得られた。融点８６℃〜８８℃。
４５mlのＴＨＦ中４６ｇの上記生成物の溶液に、３５℃
〜４０℃にてＢＨ４−ＴＨＦ（１７８ml中0.18ｍmole）
に急速に加えた。３時間後、TLCは（酢酸エチル−ヘキ
サン４：１）上のアリコートは、アルコールへの実質的
に完全な転換を示した。
〜４０℃にてＢＨ４−ＴＨＦ（１７８ml中0.18ｍmole）
に急速に加えた。３時間後、TLCは（酢酸エチル−ヘキ
サン４：１）上のアリコートは、アルコールへの実質的
に完全な転換を示した。
反応混合物に５０mlのエタノールを加え、そして蒸発乾
燥した。１００mlのエタノールと共にこの方法を２回繰
り返した後、残渣を水に懸濁し、酢酸エチルで抽出し、
そして２×１００mlの２％の炭酸水素塩の水溶液及び水
で次々に有機層を洗浄し、次に無水硫酸ナトリウムで洗
浄した。次に有機層を蒸発せしめ、残渣をヘキサン中に
溶解し、そして冷却した後、30.8ｇ（７１．％）の低融
点固体が得られた。融点８６〜８８℃：ＴＬＣ（Rf＝0.
19、酢酸エチル／ヘキサン）。
燥した。１００mlのエタノールと共にこの方法を２回繰
り返した後、残渣を水に懸濁し、酢酸エチルで抽出し、
そして２×１００mlの２％の炭酸水素塩の水溶液及び水
で次々に有機層を洗浄し、次に無水硫酸ナトリウムで洗
浄した。次に有機層を蒸発せしめ、残渣をヘキサン中に
溶解し、そして冷却した後、30.8ｇ（７１．％）の低融
点固体が得られた。融点８６〜８８℃：ＴＬＣ（Rf＝0.
19、酢酸エチル／ヘキサン）。
上記のようにして調製したアルコール（29.5ｇ）を９０
mlのピリジン（０℃〜５℃）に溶解し、そして19.5ｇの
トシルクロリドを１度に加えた。１時間後、ピリジニウ
ム塩酸塩の沈澱が観察され、そして混合物をさらに２時
間攪拌し、次に４℃にて一夜貯蔵した。この溶液を攪拌
しながら１の氷水に注入し、そして生じた固体を過
により分離し、水で洗浄し、そしてデシケーター中で一
夜乾燥して３５ｇ（８０％）のトシルエステルを得た。
融点７３℃〜７６℃。
mlのピリジン（０℃〜５℃）に溶解し、そして19.5ｇの
トシルクロリドを１度に加えた。１時間後、ピリジニウ
ム塩酸塩の沈澱が観察され、そして混合物をさらに２時
間攪拌し、次に４℃にて一夜貯蔵した。この溶液を攪拌
しながら１の氷水に注入し、そして生じた固体を過
により分離し、水で洗浄し、そしてデシケーター中で一
夜乾燥して３５ｇ（８０％）のトシルエステルを得た。
融点７３℃〜７６℃。
１５０mlのＤＭＦ中トシルエステル（22.45ｇ）に、3.9
ｇのナトリウムアジドを加え、そして混合物を５０℃〜
５５℃にて３時間加熱した。この時間の終りに、５〜１
０torrの真空中でDMFを除去し、冷水を加え、そして
過した。生成したアジドをデシケーター中で一夜乾燥し
て14.56ｇ（９１％）の目的生成物を得た。融点６０℃
〜６３℃。
ｇのナトリウムアジドを加え、そして混合物を５０℃〜
５５℃にて３時間加熱した。この時間の終りに、５〜１
０torrの真空中でDMFを除去し、冷水を加え、そして
過した。生成したアジドをデシケーター中で一夜乾燥し
て14.56ｇ（９１％）の目的生成物を得た。融点６０℃
〜６３℃。
２２７mlの１ＮHCl−エタノール（無水）に１４ｇの上
記のアジドを溶解し、この溶液を注意深く、水素化ビン
中の酸化白金1.4ｇに加えた。この混合物を、５０℃〜
５５℃にて４８時間水素化し、そしてＴＬＣにより還元
の経過を追跡した。反応が完了したとき触媒を去し、
液を蒸発乾燥し、そして残渣を３２５mlの６ＮHClに
溶解し、そして混合物を３６時間還流した。過し、そ
して蒸発乾燥した後、残渣を１００mlの水に溶解し、水
を蒸発せしめ、そしてこの方法を２回反復した。残渣を
エタノールと共にすりつぶして8.3ｇ（９１％）のジア
ミノ酸生成物を得た。融点＞２５０℃。
記のアジドを溶解し、この溶液を注意深く、水素化ビン
中の酸化白金1.4ｇに加えた。この混合物を、５０℃〜
５５℃にて４８時間水素化し、そしてＴＬＣにより還元
の経過を追跡した。反応が完了したとき触媒を去し、
液を蒸発乾燥し、そして残渣を３２５mlの６ＮHClに
溶解し、そして混合物を３６時間還流した。過し、そ
して蒸発乾燥した後、残渣を１００mlの水に溶解し、水
を蒸発せしめ、そしてこの方法を２回反復した。残渣を
エタノールと共にすりつぶして8.3ｇ（９１％）のジア
ミノ酸生成物を得た。融点＞２５０℃。
例5.ｏ−ニトロフェニルジスルフィド保護リガンドを用
いる抗体N2S2接合体の合成 ５０mlのＤＭＦに溶解した2.05ｇの前記のジアミノ酸に
トリエチルアミン（３ml）及びサクシンイミジルＳ−ベ
ンゾイルチオグリコレート（5.86ｇ）を加え、そしてこ
の混合物を１５分間攪拌した。ジエチルホルムアミドを
真空除去し、そして１００mlの冷水を加えた。沈澱した
油状物を放置して固化せしめた。この固体を取し、乾
燥し、そして酢酸エチルから結晶化した。融点１２６〜
１２７℃。
いる抗体N2S2接合体の合成 ５０mlのＤＭＦに溶解した2.05ｇの前記のジアミノ酸に
トリエチルアミン（３ml）及びサクシンイミジルＳ−ベ
ンゾイルチオグリコレート（5.86ｇ）を加え、そしてこ
の混合物を１５分間攪拌した。ジエチルホルムアミドを
真空除去し、そして１００mlの冷水を加えた。沈澱した
油状物を放置して固化せしめた。この固体を取し、乾
燥し、そして酢酸エチルから結晶化した。融点１２６〜
１２７℃。
３０mlのエタノール中ナトリウムエトキシド（ナトリウ
ム１４０mg）に、0.966ｇの上記生成物を加え、そして
混合物を室温にて一夜攪拌した。溶剤を真空蒸発せしめ
た後、残渣を氷酢酸中に溶解し、溶剤を蒸発せしめ、そ
してこの工程を２回反復した。残渣を３０mlの氷酢酸に
再溶解し、そして0.77ｇのｏ−ニトロフェニルスルフェ
ニルクロリドを加え、そして混合物を室温にて２４時間
攪拌した。反応をＴＬＣ（アセトニトリル／水９５：
５）によりモニターし、そして反応が完了したとき、酢
酸を真空除去し、そして冷水を加えた。固体沈澱物を
取し、冷エタノール（１０〜１５ml）で洗蒸し、そして
P0O5上で１２時間真空乾燥した。収量は1.03ｇ（８８
％）であった。融点＞２００℃、ＴＬＣ：アセトニトリ
ル／水９５：５；Ｒｆ＝0.39。
ム１４０mg）に、0.966ｇの上記生成物を加え、そして
混合物を室温にて一夜攪拌した。溶剤を真空蒸発せしめ
た後、残渣を氷酢酸中に溶解し、溶剤を蒸発せしめ、そ
してこの工程を２回反復した。残渣を３０mlの氷酢酸に
再溶解し、そして0.77ｇのｏ−ニトロフェニルスルフェ
ニルクロリドを加え、そして混合物を室温にて２４時間
攪拌した。反応をＴＬＣ（アセトニトリル／水９５：
５）によりモニターし、そして反応が完了したとき、酢
酸を真空除去し、そして冷水を加えた。固体沈澱物を
取し、冷エタノール（１０〜１５ml）で洗蒸し、そして
P0O5上で１２時間真空乾燥した。収量は1.03ｇ（８８
％）であった。融点＞２００℃、ＴＬＣ：アセトニトリ
ル／水９５：５；Ｒｆ＝0.39。
５０mlのＴＨＦ（無水）に懸濁したビス−（ジ−ｏ−ニ
トロフェニルジスルフィド（0.293ｇ）に、Ｎ−ヒドロ
キシサクシンイミド（６３mg）を加え、次にジシクロヘ
キシルカルボジイミド（１１３mg）を加え、そして混合
物を室温にて４８時間攪拌した。この溶液を約１５〜２
０mlに濃縮し、そして冷却し、沈澱を去し、そして
液を約１０mlに濃縮し、そして約１０℃〜１５℃に冷却
した。過した後、液を約４℃にて２〜３時間保持し
た。冷溶液に無水エーテルを添加することにより黄色沈
澱（約９５mg）が生じ、次に約９０mgの不純な生成物が
生じた。
トロフェニルジスルフィド（0.293ｇ）に、Ｎ−ヒドロ
キシサクシンイミド（６３mg）を加え、次にジシクロヘ
キシルカルボジイミド（１１３mg）を加え、そして混合
物を室温にて４８時間攪拌した。この溶液を約１５〜２
０mlに濃縮し、そして冷却し、沈澱を去し、そして
液を約１０mlに濃縮し、そして約１０℃〜１５℃に冷却
した。過した後、液を約４℃にて２〜３時間保持し
た。冷溶液に無水エーテルを添加することにより黄色沈
澱（約９５mg）が生じ、次に約９０mgの不純な生成物が
生じた。
抗体接合反応混合物を４０mlの最終容積中に含めた：1.
8mg(1.72×１０-5mole）のビス−（ジ−ｏ−ニトロフェ
ニルジスルフィド）N2S2リガンド、１７８mgのマウスモ
ノクローナル抗体（IgG,1.2×１０-6mole）、4.0mlの再
蒸溜ＤＭＦ、0.05Ｍ硼酸ナトリウム緩衝液（pH8.5）。
室温にて９０分間攪拌した後、4.4mlの５Ｎ塩化ナトリ
ウム及び1.9mlの１００ｍＭジチオスレイトールを加え
た。さらに３０分間の後、反応混合物を遠心して沈澱を
除去し、そして上清をゲル過カラムクロマトグラフィ
ーにより分画した。カラムからの溶出液を２８０mmにて
モニターし、そしてモノマー抗体接合体を含有する画分
をプールし、そしてアミコン攪拌セル（30,000分子量カ
ットオフ）中で濃縮した。最終終了は１４１mg（８２
％）であった。
8mg(1.72×１０-5mole）のビス−（ジ−ｏ−ニトロフェ
ニルジスルフィド）N2S2リガンド、１７８mgのマウスモ
ノクローナル抗体（IgG,1.2×１０-6mole）、4.0mlの再
蒸溜ＤＭＦ、0.05Ｍ硼酸ナトリウム緩衝液（pH8.5）。
室温にて９０分間攪拌した後、4.4mlの５Ｎ塩化ナトリ
ウム及び1.9mlの１００ｍＭジチオスレイトールを加え
た。さらに３０分間の後、反応混合物を遠心して沈澱を
除去し、そして上清をゲル過カラムクロマトグラフィ
ーにより分画した。カラムからの溶出液を２８０mmにて
モニターし、そしてモノマー抗体接合体を含有する画分
をプールし、そしてアミコン攪拌セル（30,000分子量カ
ットオフ）中で濃縮した。最終終了は１４１mg（８２
％）であった。
例6.Ｔｃ−酒石酸塩による抗体−リガンド接合体のテク
ニチウム−９９ｍラベル化 酒石酸第一錫キットを、窒素雰囲気下脱気されたバイア
ル中で、0.5mlの酒石酸二ナトリウム（１５０mg/ml）及
び0.1ml塩化第一錫（エタノール中1.0mg/ml）の脱気し
た溶液から調製した。酒石酸第一錫キットにナトリウム
ペルペクネテート0.5ml（〜１５mCi）を加え、そして５
０℃にて１０〜１５分間加熱した。室温に冷却した後、
Ｔｃ−９９ｍ酒石酸塩及び不溶性Ｔｃ−９９ｍについて
の品質管理を、それぞれメチルエチルケトン及び0.01Ｍ
酒石酸ナトリウム（pH7.0）溶離液を用いてGelmanITLC
上で行った。Ｔｃ−９９ｍ酒石酸塩の形成は典型的には
９８〜９９％であり、不溶性Ｔｃ−９９ｍの値は0.1〜
0.2％であった。
ニチウム−９９ｍラベル化 酒石酸第一錫キットを、窒素雰囲気下脱気されたバイア
ル中で、0.5mlの酒石酸二ナトリウム（１５０mg/ml）及
び0.1ml塩化第一錫（エタノール中1.0mg/ml）の脱気し
た溶液から調製した。酒石酸第一錫キットにナトリウム
ペルペクネテート0.5ml（〜１５mCi）を加え、そして５
０℃にて１０〜１５分間加熱した。室温に冷却した後、
Ｔｃ−９９ｍ酒石酸塩及び不溶性Ｔｃ−９９ｍについて
の品質管理を、それぞれメチルエチルケトン及び0.01Ｍ
酒石酸ナトリウム（pH7.0）溶離液を用いてGelmanITLC
上で行った。Ｔｃ−９９ｍ酒石酸塩の形成は典型的には
９８〜９９％であり、不溶性Ｔｃ−９９ｍの値は0.1〜
0.2％であった。
脱気されたバイアルに、１００μｌの塩溶液、２００μ
ｌのリン酸ナトリウム（2.0Ｍ、pH8.0）、及び２００μ
ｌの抗体−リガンド接合体（1.9mg/ml）を次々に加え
た。接合体を添加した直後に２５０μｌのＴｃ−酒石酸
塩（約３〜５mCi）を加え、そして５０℃にて１時間加
熱した。蛋白質に結合したテクネチウムの％及びペルテ
クネテートの形成を、それぞれ５０％MeOH：１０％酢酸
アンモニウム（１：１）、及び１−ブタノールを用いて
ＩＴＬＣにより決定した。テクネチウムの導入は、リガ
ンドと抗体の比率が1.5〜3.0であるリガンド−Ａｂ接合
体に対して、典型的には７０〜８８％であった。
ｌのリン酸ナトリウム（2.0Ｍ、pH8.0）、及び２００μ
ｌの抗体−リガンド接合体（1.9mg/ml）を次々に加え
た。接合体を添加した直後に２５０μｌのＴｃ−酒石酸
塩（約３〜５mCi）を加え、そして５０℃にて１時間加
熱した。蛋白質に結合したテクネチウムの％及びペルテ
クネテートの形成を、それぞれ５０％MeOH：１０％酢酸
アンモニウム（１：１）、及び１−ブタノールを用いて
ＩＴＬＣにより決定した。テクネチウムの導入は、リガ
ンドと抗体の比率が1.5〜3.0であるリガンド−Ａｂ接合
体に対して、典型的には７０〜８８％であった。
例7.あらかじめ形成されたＴｃ−９９ｍペンタノイルN2
S2キレートによる杭体のラベル化 Ｔｃ−９９ｍキレート化誘導体を次のようにして杭体と
接合せしめた。Ｎ，Ｎ′−ビスメルカプトアセチル４，
５−ジアミノペンタン酸によりキレート化されたＴｃ−
９９ｍを塩基性pHにて２５μｇのN2S2リガンドと共にＴ
ｃ−９９ｍペルテクネテートをジチオニトで還元するこ
とにより調製した。0.5mlの水中上記錯体を、pH７にお
いて、3.0mgの２，３，５，６−テトラフルオロフェノ
ールを含有する水：アセトニトリル（１：９）１００μ
ｌに加え、そして7.5mgの１−シクロヘキシル−３−
（２−モルホリノエチル）カルボジイミド（モルホＣＤ
Ｉ）を含有する水：アセトニトリル（１：９）１００μ
ｌを加えることにより酸を活性化した。室温にて１８時
間貯蔵した後、Baker-10SPE逆相C18カラムを用いて混合
物を精製した。カラムを２mlのエタノールで条件調節
し、次にＨＩＬＣグレードの水で洗浄した。次に、反応
混合物をカラムに加え、カラムを0.01Ｍリン酸ナトリウ
ム（ｐＨ7.0）中１０％メタノール２mlずつにより４回
洗浄し、そしてエステル錯体を2.5mlずつのアセトニト
リルで溶出した。最初の溶出液は8.5mCiを含有し、そし
て第２の溶出液は0.18mCiを含有していた。自然崩壊に
より、収率は８６％であった。
S2キレートによる杭体のラベル化 Ｔｃ−９９ｍキレート化誘導体を次のようにして杭体と
接合せしめた。Ｎ，Ｎ′−ビスメルカプトアセチル４，
５−ジアミノペンタン酸によりキレート化されたＴｃ−
９９ｍを塩基性pHにて２５μｇのN2S2リガンドと共にＴ
ｃ−９９ｍペルテクネテートをジチオニトで還元するこ
とにより調製した。0.5mlの水中上記錯体を、pH７にお
いて、3.0mgの２，３，５，６−テトラフルオロフェノ
ールを含有する水：アセトニトリル（１：９）１００μ
ｌに加え、そして7.5mgの１−シクロヘキシル−３−
（２−モルホリノエチル）カルボジイミド（モルホＣＤ
Ｉ）を含有する水：アセトニトリル（１：９）１００μ
ｌを加えることにより酸を活性化した。室温にて１８時
間貯蔵した後、Baker-10SPE逆相C18カラムを用いて混合
物を精製した。カラムを２mlのエタノールで条件調節
し、次にＨＩＬＣグレードの水で洗浄した。次に、反応
混合物をカラムに加え、カラムを0.01Ｍリン酸ナトリウ
ム（ｐＨ7.0）中１０％メタノール２mlずつにより４回
洗浄し、そしてエステル錯体を2.5mlずつのアセトニト
リルで溶出した。最初の溶出液は8.5mCiを含有し、そし
て第２の溶出液は0.18mCiを含有していた。自然崩壊に
より、収率は８６％であった。
２mlのバイアルに、窒素流中に蒸留された溶剤であるア
セトニトリル中活性化されたエステル錯体4.5mCiを加
え、そして0.40mlの硼酸ナトリウム（0.5Ｍ、pH9.0）を
加えた。攪拌しながら、30μｌ（9.14mg/ml）の杭黒色
腫杭体（9.2，２７）を加えた。最終蛋白質濃度は0.52m
g/mlであった。反応を、GelmanＩＴＬＣ ＳＧストリッ
プを用いそして５０％水性メタノール：１０％酢酸アン
モニウム（１：１）で溶出することによりＴＬＣで追跡
し、室温にて１５分間で４７％の蛋白質がＴｃ−９９ｍ
を結合し、３０分間で５９％であることが示された。Ｔ
ｃ−９９ｍでラベルされた蛋白質をセントリコン−１０
ｋフィルター遠心により精製した。92.4％の蛋白質がＴ
ｃ−９９ｍと結合したサンプルは、ＦＥＭＸ黒色腫細胞
への84.0％の結合を示した。
セトニトリル中活性化されたエステル錯体4.5mCiを加
え、そして0.40mlの硼酸ナトリウム（0.5Ｍ、pH9.0）を
加えた。攪拌しながら、30μｌ（9.14mg/ml）の杭黒色
腫杭体（9.2，２７）を加えた。最終蛋白質濃度は0.52m
g/mlであった。反応を、GelmanＩＴＬＣ ＳＧストリッ
プを用いそして５０％水性メタノール：１０％酢酸アン
モニウム（１：１）で溶出することによりＴＬＣで追跡
し、室温にて１５分間で４７％の蛋白質がＴｃ−９９ｍ
を結合し、３０分間で５９％であることが示された。Ｔ
ｃ−９９ｍでラベルされた蛋白質をセントリコン−１０
ｋフィルター遠心により精製した。92.4％の蛋白質がＴ
ｃ−９９ｍと結合したサンプルは、ＦＥＭＸ黒色腫細胞
への84.0％の結合を示した。
例８．Ｒｅ−１８６／４，５−ジメルカプトアセタミド
ペンタノイル−杭体（杭黒色腫杭体9.2，２７）の調製 脱気したバイアル中で、１００μｌのH2O、１００μｌ
のアセトニトリル、１００μｌのクエン酸塩溶液（28.8
mg、1.5×１０-4mole）、５０μｌのリンガンド〔テトラ
フルオロフェニル４，５−ジ−（テトラヒドロピラニル
メルカプトアセタミド）ペンタン酸（0.40mg、6.5×１０
-7mole）、５０μｌの塩化第一錫（0.5mg、2.6×１０-6m
ole）、及びアセトニトリル中Re−１８６ペルレネート
（4.24μｇ、2.3×１０-8mole）を一緒にする。混合物
を５０℃にて１時間加熱し、そして次に0.3mlの１ＮNaO
Hを加える。
ペンタノイル−杭体（杭黒色腫杭体9.2，２７）の調製 脱気したバイアル中で、１００μｌのH2O、１００μｌ
のアセトニトリル、１００μｌのクエン酸塩溶液（28.8
mg、1.5×１０-4mole）、５０μｌのリンガンド〔テトラ
フルオロフェニル４，５−ジ−（テトラヒドロピラニル
メルカプトアセタミド）ペンタン酸（0.40mg、6.5×１０
-7mole）、５０μｌの塩化第一錫（0.5mg、2.6×１０-6m
ole）、及びアセトニトリル中Re−１８６ペルレネート
（4.24μｇ、2.3×１０-8mole）を一緒にする。混合物
を５０℃にて１時間加熱し、そして次に0.3mlの１ＮNaO
Hを加える。
Ｒｅ−１８６N2S2錯体のテトラフルオロフェニルエステ
ル生成物をC18Baker−１０ＳＰＥカラム上で精製する。
カラムへの適用の後、２×３mlのH2O及び４×３mlの１
０％CH3OH/0.01Ｍリン酸塩（pH７）で不純物を洗浄除去
する。生成物を２mlのアセトニトリルで溶出し、そして
次に溶液を窒素流のもとで乾燥するまで減少させる。生
成物の収量は約６０％である。
ル生成物をC18Baker−１０ＳＰＥカラム上で精製する。
カラムへの適用の後、２×３mlのH2O及び４×３mlの１
０％CH3OH/0.01Ｍリン酸塩（pH７）で不純物を洗浄除去
する。生成物を２mlのアセトニトリルで溶出し、そして
次に溶液を窒素流のもとで乾燥するまで減少させる。生
成物の収量は約６０％である。
Ｒｅ−１８６N2S2錯体の接合は、３４０μｌの硼酸緩衝
液（0.5Ｍ、pH９）中杭体（１６０μｌ、５mg/ml）〔Mo
rgan等、Hybridomd（１９８１）１：２７〕の添加によ
って行う。室温にて３０分間置いた後、５８％の放射能
が蛋白質に結合した。ＦＥＭＸ黒色腫細胞への放射能の
結合により決定された免疫反能性は、非蛋白質結合物質
について補正した後８０％であった。
液（0.5Ｍ、pH９）中杭体（１６０μｌ、５mg/ml）〔Mo
rgan等、Hybridomd（１９８１）１：２７〕の添加によ
って行う。室温にて３０分間置いた後、５８％の放射能
が蛋白質に結合した。ＦＥＭＸ黒色腫細胞への放射能の
結合により決定された免疫反能性は、非蛋白質結合物質
について補正した後８０％であった。
例９．イミデート形のN2S2リガンドの合成、杭体への接
合及びＴｃ−９９ｍによる放射性ラベル化 ２，３−（ビス−カルボベンジルオキシ）ジアミノプロ
パン−１−オール〔２〕 ５００mlの水素化ビンに５５ｇ（0.25mole）の２，３−
ジブロモプロパノール（アルドリッヒ）３００mlの２８
〜３０％水性NH4OH溶液を仕込んだ。この混合物を内部
温度計と共に密封し、Parr振とう機で振とうしながら２
３時間７５℃〜８５℃に加熱した。冷却したとき、振と
うを停止し、そして混合物を注意深く開放した。油浴上
で加熱しながらN2ガスを通すことにより、混合物を５０
mlに蒸発せしめた。熱い内に５０mlのEtOHを加え、そし
て混合物を放冷した。２，３−ジアミノプロパン−１−
オールの臭化水素塩を過により集め、そして乾燥して
白色固体の硬い塊を５０ｇ得、これをさらに精製するこ
となく使用した。
合及びＴｃ−９９ｍによる放射性ラベル化 ２，３−（ビス−カルボベンジルオキシ）ジアミノプロ
パン−１−オール〔２〕 ５００mlの水素化ビンに５５ｇ（0.25mole）の２，３−
ジブロモプロパノール（アルドリッヒ）３００mlの２８
〜３０％水性NH4OH溶液を仕込んだ。この混合物を内部
温度計と共に密封し、Parr振とう機で振とうしながら２
３時間７５℃〜８５℃に加熱した。冷却したとき、振と
うを停止し、そして混合物を注意深く開放した。油浴上
で加熱しながらN2ガスを通すことにより、混合物を５０
mlに蒸発せしめた。熱い内に５０mlのEtOHを加え、そし
て混合物を放冷した。２，３−ジアミノプロパン−１−
オールの臭化水素塩を過により集め、そして乾燥して
白色固体の硬い塊を５０ｇ得、これをさらに精製するこ
となく使用した。
１１０mlの４ＮNaＯＨ中２５ｇの粗製塩の溶液を０℃に
冷却（氷浴）し、そしてこの溶液に１００mlのCH2Cl2中
31.4ml(0.22mole、37.5ｇ）のベンジルクロロホルメート
の溶液を加えた。この混合物は０℃にて３０分間、そし
て室温にて１６時間、急速攪拌した。CH2Cl2相を集め、
７５mlの塩水で洗浄し、乾燥し（MgSO4）、過し、そ
して濃縮した。生じた固体を１００mlのEt2Oで洗浄し、
過により集め、そして真空乾燥して10.7ｇ（２４％）
の〔２〕を白色固体として得た。これをCHCl3／ヘキサ
ンから再結晶化し小さい針状体を得ることができた。融
点119℃〜１２０℃。
冷却（氷浴）し、そしてこの溶液に１００mlのCH2Cl2中
31.4ml(0.22mole、37.5ｇ）のベンジルクロロホルメート
の溶液を加えた。この混合物は０℃にて３０分間、そし
て室温にて１６時間、急速攪拌した。CH2Cl2相を集め、
７５mlの塩水で洗浄し、乾燥し（MgSO4）、過し、そ
して濃縮した。生じた固体を１００mlのEt2Oで洗浄し、
過により集め、そして真空乾燥して10.7ｇ（２４％）
の〔２〕を白色固体として得た。これをCHCl3／ヘキサ
ンから再結晶化し小さい針状体を得ることができた。融
点119℃〜１２０℃。
２，３−（ビス−カルボベンジルオキシ）ジアミノプロ
ピル−１−メタンスルホネート〔３〕 N2雰囲気下で０℃に冷却された１５０mlのCH2Cl2中10.6
8ｇ（３０ｍmole）の〔2〕及び6.27ml(4.55ｇ、４５ｍm
ole）のEt2Nの懸濁液に、2.25ml（3.78ｇ、３３ｍmol
e）のメタンスルホニルクロリドを加え、そしてこの混
合物を０℃にて３０分間攪拌した。生じた透明な溶液を
７５mlの５％HCl、７５mlのH2O、７５mmの５％NaHCO3、
及び７５mlのNaCl飽和水溶液（すべて氷中で冷却）で次
々に洗浄した。CH2Cl2相を乾燥し（MgSO4）、過し、
濃縮し、そしてCHCl3／ヘキサンから結晶化して12.33ｇ
（９４％）の白色結晶を得た。融点９２℃〜９３℃。
ピル−１−メタンスルホネート〔３〕 N2雰囲気下で０℃に冷却された１５０mlのCH2Cl2中10.6
8ｇ（３０ｍmole）の〔2〕及び6.27ml(4.55ｇ、４５ｍm
ole）のEt2Nの懸濁液に、2.25ml（3.78ｇ、３３ｍmol
e）のメタンスルホニルクロリドを加え、そしてこの混
合物を０℃にて３０分間攪拌した。生じた透明な溶液を
７５mlの５％HCl、７５mlのH2O、７５mmの５％NaHCO3、
及び７５mlのNaCl飽和水溶液（すべて氷中で冷却）で次
々に洗浄した。CH2Cl2相を乾燥し（MgSO4）、過し、
濃縮し、そしてCHCl3／ヘキサンから結晶化して12.33ｇ
（９４％）の白色結晶を得た。融点９２℃〜９３℃。
３，４−（ビス−カルボベンジルオキシ）ジアミノブチ
ロニトリル〔４〕 6.56ｇ（１５ｍmole）の〔3〕、1.08ｇ （16.5ｍmole）のＫＣＮ、0.40(1.5ｍmole）の１８−ク
ラウン−６、及び75mlの無水アセトニトリル（３Åの分
子篩上で貯蔵したもの）の混合物を窒素雰囲気中で１９
時間還流した。冷却したとき、混合物を１００mlの１０
％NaHCO3溶液と２００mlのCH2Cl2の間で分配した。CH2C
l2相を１００mlずつの５％HCl、水、及び塩水で洗浄し
た。CH2Cl2相を乾燥し（MgSO4）、過し、そして濃縮
して5.47ｇの褐色油状物を得た。
ロニトリル〔４〕 6.56ｇ（１５ｍmole）の〔3〕、1.08ｇ （16.5ｍmole）のＫＣＮ、0.40(1.5ｍmole）の１８−ク
ラウン−６、及び75mlの無水アセトニトリル（３Åの分
子篩上で貯蔵したもの）の混合物を窒素雰囲気中で１９
時間還流した。冷却したとき、混合物を１００mlの１０
％NaHCO3溶液と２００mlのCH2Cl2の間で分配した。CH2C
l2相を１００mlずつの５％HCl、水、及び塩水で洗浄し
た。CH2Cl2相を乾燥し（MgSO4）、過し、そして濃縮
して5.47ｇの褐色油状物を得た。
CHCl3／ヘキサンからの２回の再結晶化により2.68ｇの
〔4〕を白色固体として得た。融点111〜１１２℃。
〔4〕を白色固体として得た。融点111〜１１２℃。
３，４−ジアミノブチロニトリルハイドロゼンイオジド
塩〔５〕 １００mlのフラスコ中の3.38ｇ（13.3ｍmole）のＩ
2に、Ｎ2雰囲気下で、54.2ml(3.87ｇ、26.5ｍmloe）の
ヘキサメチルジシランを加えた。固体Ｉ1が溶解するま
で（３０分間）、混合物を４５℃〜５０℃の油浴中に浸
漬した。温度を１００℃に上げ、そして色が消失するま
で５分間保持した。この溶液を氷浴により０℃に冷却
し、そして13.3mlのCH2Cl2で稀釈した。０℃の溶液に、
13.3mlのCH2Cl2中1.96(5.3ｍmoleの〔４〕の溶液を５分
間にわたり滴加した。冷却浴を除去し、そして混合物を
室温にて３時間暗中で攪拌した。この混合物に2.15ml
(1.70ｇ、５３ｍmole）のMeOHを加え、そして攪拌を一
夜（１６時間）続けた。混合物を０℃に冷却し、そして
固体を過により集め、そして真空乾燥して1.75ｇ（１
００％）の黄褐色固体の〔５〕を得、これはそのジベン
ゾイル誘導体として特徴付けられた。
塩〔５〕 １００mlのフラスコ中の3.38ｇ（13.3ｍmole）のＩ
2に、Ｎ2雰囲気下で、54.2ml(3.87ｇ、26.5ｍmloe）の
ヘキサメチルジシランを加えた。固体Ｉ1が溶解するま
で（３０分間）、混合物を４５℃〜５０℃の油浴中に浸
漬した。温度を１００℃に上げ、そして色が消失するま
で５分間保持した。この溶液を氷浴により０℃に冷却
し、そして13.3mlのCH2Cl2で稀釈した。０℃の溶液に、
13.3mlのCH2Cl2中1.96(5.3ｍmoleの〔４〕の溶液を５分
間にわたり滴加した。冷却浴を除去し、そして混合物を
室温にて３時間暗中で攪拌した。この混合物に2.15ml
(1.70ｇ、５３ｍmole）のMeOHを加え、そして攪拌を一
夜（１６時間）続けた。混合物を０℃に冷却し、そして
固体を過により集め、そして真空乾燥して1.75ｇ（１
００％）の黄褐色固体の〔５〕を得、これはそのジベン
ゾイル誘導体として特徴付けられた。
３，４−ジベンゾイルメルカプトアセタミドブチロニト
リル〔６〕 3.27ｇ（１０ｍmole）の〔５〕、7.33ｇ（２５ｍmole）
のＮ−サクシンイミジルＳ−ベンゾイルメルカプト酢
酸、及び１０mlのＤＭＦの化合物に、０℃N2雰囲気下で
3.48ml（2.52ｇ、２５ｍmole）のトリエチルアミンを加
えた。冷却浴を取りさり、そして混合物を１時間攪拌し
た。混合物を、５０mlの５％Hcl溶液で希釈し、そして
２×５０mlのCH2Cl2で抽出した。一緒にしたCH2Cl2相を
１００mlの５％NaHCO3溶液で洗浄し、乾燥し（MgS
O4）、過し、そして真空乾燥して6.75ｇの紫色を帯び
た固体を得た。
リル〔６〕 3.27ｇ（１０ｍmole）の〔５〕、7.33ｇ（２５ｍmole）
のＮ−サクシンイミジルＳ−ベンゾイルメルカプト酢
酸、及び１０mlのＤＭＦの化合物に、０℃N2雰囲気下で
3.48ml（2.52ｇ、２５ｍmole）のトリエチルアミンを加
えた。冷却浴を取りさり、そして混合物を１時間攪拌し
た。混合物を、５０mlの５％Hcl溶液で希釈し、そして
２×５０mlのCH2Cl2で抽出した。一緒にしたCH2Cl2相を
１００mlの５％NaHCO3溶液で洗浄し、乾燥し（MgS
O4）、過し、そして真空乾燥して6.75ｇの紫色を帯び
た固体を得た。
クロマトグラフィ−（シリカゲル、EtOAc）により精製
を行い、そして精製された画分の結晶化（CHCl3／ヘキ
サン）により3.20ｇ（７０％）の白色固体を得た。融点
１２５℃〜１２７℃。
を行い、そして精製された画分の結晶化（CHCl3／ヘキ
サン）により3.20ｇ（７０％）の白色固体を得た。融点
１２５℃〜１２７℃。
３，４−ビス−メチルジチオアセタミドブチロニトリル
〔７〕 ６mlのEtOH中４５５mg(1.0ｍmole）の〔６〕の懸濁液
に、室温にてN2雰囲気下で2.2mlの１Ｎ水性NaOHを加え
た。混合物を室温にて1.6時間攪拌し、そして生じた透
明な溶液に２２６μｌのメタンチオスルホン酸メチルを
加えた。この混合物を３時間攪拌し、そして２０mlのpH
７の緩衝液と２×２０mlのCH2Cl2との間で分配した。一
緒にした水層を乾燥し（MgSO4）、過し、そして濃縮
して５９１mgのピンク色の残渣を得た。シリカゲルクロ
マトグラフィー（EtOAc）による精製及びCHCl3／ヘキサ
ンからの結晶化により合計２１７mg（６４％）の白色非
結晶質固体〔７〕を得た。融点１２１℃〜１２３℃。
〔７〕 ６mlのEtOH中４５５mg(1.0ｍmole）の〔６〕の懸濁液
に、室温にてN2雰囲気下で2.2mlの１Ｎ水性NaOHを加え
た。混合物を室温にて1.6時間攪拌し、そして生じた透
明な溶液に２２６μｌのメタンチオスルホン酸メチルを
加えた。この混合物を３時間攪拌し、そして２０mlのpH
７の緩衝液と２×２０mlのCH2Cl2との間で分配した。一
緒にした水層を乾燥し（MgSO4）、過し、そして濃縮
して５９１mgのピンク色の残渣を得た。シリカゲルクロ
マトグラフィー（EtOAc）による精製及びCHCl3／ヘキサ
ンからの結晶化により合計２１７mg（６４％）の白色非
結晶質固体〔７〕を得た。融点１２１℃〜１２３℃。
メチル３，４−ビス−メチルジチオアセタミドブチルイ
ミデート塩酸塩〔１〕 1.66mlのMeOH及び4.15mlのEt2O中１４１mg(0.41ｍmol
e）の〔７〕の懸濁液を−２０℃に冷却し（CO2/CC
l4）、そしてほとんどの固体が溶解しそして溶液がHCl
により飽和されるまで、セプタム入口を通して５分間に
わたりHClガスを混合物に通した。この混合物をフリー
ザー中にデシケーターに６６時間入れ、そして次に真空
中で濃縮して白色泡状固形物を生成せしめた。固形物を
破砕し、無水Et2Oで３回洗浄し、真空乾燥して灰色味の
ある白色の固体として１１１mg（６６％）の〔１〕を得
た。この物質は加熱により分解し、そしてまたフリーザ
ー中で数日間の後分解した。
ミデート塩酸塩〔１〕 1.66mlのMeOH及び4.15mlのEt2O中１４１mg(0.41ｍmol
e）の〔７〕の懸濁液を−２０℃に冷却し（CO2/CC
l4）、そしてほとんどの固体が溶解しそして溶液がHCl
により飽和されるまで、セプタム入口を通して５分間に
わたりHClガスを混合物に通した。この混合物をフリー
ザー中にデシケーターに６６時間入れ、そして次に真空
中で濃縮して白色泡状固形物を生成せしめた。固形物を
破砕し、無水Et2Oで３回洗浄し、真空乾燥して灰色味の
ある白色の固体として１１１mg（６６％）の〔１〕を得
た。この物質は加熱により分解し、そしてまたフリーザ
ー中で数日間の後分解した。
抗体／メチル３，４−ビス−メチルジチオアセタミドブ
チルイミデート接合体の製造 N2S2リガンドの２mg/mlストック溶液を乾燥アセトニト
リル中に調製した。２−ニトロ−５−チオスルホベンゾ
エートを用いてジスルフィド含量を決定することにより
溶液を標定し〔Thannhauser等、Anal.Biochem.（１９８
４）１３８：１８１〕、そしてリガンド濃度が5.30ｍＭ
であることを見出した。
チルイミデート接合体の製造 N2S2リガンドの２mg/mlストック溶液を乾燥アセトニト
リル中に調製した。２−ニトロ−５−チオスルホベンゾ
エートを用いてジスルフィド含量を決定することにより
溶液を標定し〔Thannhauser等、Anal.Biochem.（１９８
４）１３８：１８１〕、そしてリガンド濃度が5.30ｍＭ
であることを見出した。
マウスモノクローナル抗体への接合のため、0.16mlのN2
S2リガンド−アセトニトリル溶液を反応バイアルに加
え、そして乾燥窒素流により溶剤を除去した。抗体（0.
62mlの8.1mg/ml溶液）と1.0mlの0.2Ｍ炭酸水素ナトリウ
ム緩衝液（pH9.5）とを混合し、そして次に乾燥したリ
ガンドを収容する反応容器に加えた。室温にて３０分間
攪拌した後、全溶液を、同じ量の乾燥リガンドを収容す
る新たなバイアルに加え、そして溶液をさらに３０分間
攪拌した。接合した抗体を、50ｍＭリン酸ナトリウム
（pH7.5）、0.5ｍＭ塩化ナトリウム中でセファデックス
Ｇ−２５クロマトグラフィーにより精製した。蛋白質含
有画分をプールし、そしてアミコン攪拌セル中で約２mg
/mlの濃度に濃縮した。溶液をグルタチオンが５０ｍＭ
となるようにし、２５分間攪拌し、そしてセファデック
スＧ−２５ゲル過により精製し、そして前記のように
して濃縮した。最終溶液（1.7mg/ml）を、使用まで４℃
に貯蔵した。
S2リガンド−アセトニトリル溶液を反応バイアルに加
え、そして乾燥窒素流により溶剤を除去した。抗体（0.
62mlの8.1mg/ml溶液）と1.0mlの0.2Ｍ炭酸水素ナトリウ
ム緩衝液（pH9.5）とを混合し、そして次に乾燥したリ
ガンドを収容する反応容器に加えた。室温にて３０分間
攪拌した後、全溶液を、同じ量の乾燥リガンドを収容す
る新たなバイアルに加え、そして溶液をさらに３０分間
攪拌した。接合した抗体を、50ｍＭリン酸ナトリウム
（pH7.5）、0.5ｍＭ塩化ナトリウム中でセファデックス
Ｇ−２５クロマトグラフィーにより精製した。蛋白質含
有画分をプールし、そしてアミコン攪拌セル中で約２mg
/mlの濃度に濃縮した。溶液をグルタチオンが５０ｍＭ
となるようにし、２５分間攪拌し、そしてセファデック
スＧ−２５ゲル過により精製し、そして前記のように
して濃縮した。最終溶液（1.7mg/ml）を、使用まで４℃
に貯蔵した。
抗体／メチル３，４−ビス−メチルジチオアセタミドブ
チルイミデート接合体の放射性ラベル化 Ｔｃ−９９ｍ酒石酸塩を、１００μｇのSnCl2、９Ｖ／
Ｖ％のエタノール、７５mgの酒石酸二ナトリウム、及び
3.2mCiのナトリウム（Ｔｃ−９９ｍ）ペルテクネートを
用いて、全体積1.1mlの脱気した水中に調製した。この
溶液を５０℃にて１５分間加熱した。約１００μｌのＴ
ｃ−９９ｍ酒石酸塩溶液、１００μｌの0.2Ｍ炭酸水素
ナトリウム（pH１０）、及び１００μｇの抗体接合体を
別のバイアルに加えた。次に、0.15Ｍ塩化ナトリウムを
用いて合計体積を0.5mlに調整し、そして溶液を５５℃
にて６０分間インキュベートした。HPLC〔ＴＳＫカラ
ム、0.2Ｍリン酸ナトリウム（pH7.4）、0.15Ｍ塩化ナト
リウム〕による分析は、９５％のＴｃ−９９ｍが抗体接
合体と会合したことを示した。
チルイミデート接合体の放射性ラベル化 Ｔｃ−９９ｍ酒石酸塩を、１００μｇのSnCl2、９Ｖ／
Ｖ％のエタノール、７５mgの酒石酸二ナトリウム、及び
3.2mCiのナトリウム（Ｔｃ−９９ｍ）ペルテクネートを
用いて、全体積1.1mlの脱気した水中に調製した。この
溶液を５０℃にて１５分間加熱した。約１００μｌのＴ
ｃ−９９ｍ酒石酸塩溶液、１００μｌの0.2Ｍ炭酸水素
ナトリウム（pH１０）、及び１００μｇの抗体接合体を
別のバイアルに加えた。次に、0.15Ｍ塩化ナトリウムを
用いて合計体積を0.5mlに調整し、そして溶液を５５℃
にて６０分間インキュベートした。HPLC〔ＴＳＫカラ
ム、0.2Ｍリン酸ナトリウム（pH7.4）、0.15Ｍ塩化ナト
リウム〕による分析は、９５％のＴｃ−９９ｍが抗体接
合体と会合したことを示した。
例10.Ｓ−テレフタロイル置換N2S2リガンドの調製 テレフタル酸のモノ−tert−ブチルエステル〔１〕を、
Buckle及びSmith,J.Chem.Soc.（１９７１）５４：２８
２１の方法により調製した。
Buckle及びSmith,J.Chem.Soc.（１９７１）５４：２８
２１の方法により調製した。
サクシンイミジルエステル〔２〕を、〔１〕と1.2モル
当量のＮ−ヒドロキシサクシンイミド及び1.3モル当量
の1.3−ジシクロヘキシルカルボジイミドとを乾燥ＴＨ
Ｆ中で室温にて１４〜１６時間攪拌することにより調製
した。薄層クロマログラフィー分析は、反応が完了した
ことを示した。次に、ジシクロヘキシル尿素を去し、
そして得られた液を真空濃縮して〔２〕を白色固体とし
て得た。〔２〕の最終精製を、フラッシュクロマトグラ
フィーにより達成した。
当量のＮ−ヒドロキシサクシンイミド及び1.3モル当量
の1.3−ジシクロヘキシルカルボジイミドとを乾燥ＴＨ
Ｆ中で室温にて１４〜１６時間攪拌することにより調製
した。薄層クロマログラフィー分析は、反応が完了した
ことを示した。次に、ジシクロヘキシル尿素を去し、
そして得られた液を真空濃縮して〔２〕を白色固体とし
て得た。〔２〕の最終精製を、フラッシュクロマトグラ
フィーにより達成した。
1.0モル当量のメルカプト酢酸及び2.0モル当量の４−ジ
メチルアミノピリジンを乾燥ＴＨＦ中に溶解することに
よりチオエステル〔３〕を調製した。サクシンイミジル
エステル〔２〕を攪拌中の上記溶液に加えた。５時間攪
拌した後、反応が完了したことが薄層クロマトグラフ分
析により示された。ＴＨＦを真空除去し、そして残渣を
CH2Cl2中に溶解した。次に、溶液をHCl希釈溶液で洗浄
し、そして無水MgSO4で乾燥した。過及び溶剤の蒸発
により〔３〕が無色油状物として得られ、このものは放
置の後固化した。
メチルアミノピリジンを乾燥ＴＨＦ中に溶解することに
よりチオエステル〔３〕を調製した。サクシンイミジル
エステル〔２〕を攪拌中の上記溶液に加えた。５時間攪
拌した後、反応が完了したことが薄層クロマトグラフ分
析により示された。ＴＨＦを真空除去し、そして残渣を
CH2Cl2中に溶解した。次に、溶液をHCl希釈溶液で洗浄
し、そして無水MgSO4で乾燥した。過及び溶剤の蒸発
により〔３〕が無色油状物として得られ、このものは放
置の後固化した。
サクシンイミジルエステル〔４〕をSubramanianの方法
〔R.F.Schneider等、J.Nucl.Med.（１９８４）２５：２
２３−２２９〕により調製した。
〔R.F.Schneider等、J.Nucl.Med.（１９８４）２５：２
２３−２２９〕により調製した。
3.0モル当量のトリエチルアミンを含有するH2O/CH3CN
（１：４）中に４，５−ジアミノペンタン酸二塩酸塩を
溶解し、そして次に2.0モル当量のサクシンイミジルエ
ステル〔４〕を加えることによりカルボン酸〔５〕を調
製した。室温にて１４〜１８時間攪拌した後、ＴＬＣ分
析は反応が完了したことを示した。溶剤を真空除去し
た。残渣を酢酸エチルに溶解し、そしてHCl希水溶液、
水、及び塩水で洗浄した。次に、酢酸エチル層を無水Na
2SO4で乾燥した。過、及び溶剤の除去後、ワックス状
固体が得られ、これを酢酸エチルとヘキサンとの混合物
から再結晶化して〔５〕を白色固体として得た。
（１：４）中に４，５−ジアミノペンタン酸二塩酸塩を
溶解し、そして次に2.0モル当量のサクシンイミジルエ
ステル〔４〕を加えることによりカルボン酸〔５〕を調
製した。室温にて１４〜１８時間攪拌した後、ＴＬＣ分
析は反応が完了したことを示した。溶剤を真空除去し
た。残渣を酢酸エチルに溶解し、そしてHCl希水溶液、
水、及び塩水で洗浄した。次に、酢酸エチル層を無水Na
2SO4で乾燥した。過、及び溶剤の除去後、ワックス状
固体が得られ、これを酢酸エチルとヘキサンとの混合物
から再結晶化して〔５〕を白色固体として得た。
〔５〕を1.2モル当量の２，３，５，６−テトラフルオ
ロフェノールと共に乾燥ＴＨＦに溶解することによりテ
トラフルオロフェノールエステル６Ａを調製した。この
混合物に１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（1.
2モル当量）を加え、そしてこの混合物を１２〜１５時
間攪拌した。薄層クロマトグラフィーによる分析は反応
が完了したことを示した。ジシクロヘキシル尿素を去
し、そして溶剤を真空蒸発せしめた。残渣をフラッシュ
クロマトグラフィーにより精製してエステル〔６Ａ〕を
白色固体として得た。
ロフェノールと共に乾燥ＴＨＦに溶解することによりテ
トラフルオロフェノールエステル６Ａを調製した。この
混合物に１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（1.
2モル当量）を加え、そしてこの混合物を１２〜１５時
間攪拌した。薄層クロマトグラフィーによる分析は反応
が完了したことを示した。ジシクロヘキシル尿素を去
し、そして溶剤を真空蒸発せしめた。残渣をフラッシュ
クロマトグラフィーにより精製してエステル〔６Ａ〕を
白色固体として得た。
〔５〕を1.2モル当量のＮ−ヒドロキシサクシンイミド
と共に乾燥ＴＨＦに溶解することによりサクシンイミジ
エルエステル（６Ｂ）を調製した。この混合物に１，３
−ジシクロヘキシルカルボジイミド（1.2モル当量）を
加えて、そしてこの混合物を室温にて１４〜１６時間攪
拌した。薄層クロマトグラフ分析は、反応が完了したこ
とを示した。ジシクロヘキシル尿素を去し、そして溶
剤を真空除去した。残渣を酢酸エチル中に溶解し、そし
て水で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水Na2SO4で乾燥し
た。乾燥剤を去し、そして溶剤を真空除去した。得ら
れた残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し
てサクシンイミジルエステル〔６Ｂ〕を白色固体として
得た。
と共に乾燥ＴＨＦに溶解することによりサクシンイミジ
エルエステル（６Ｂ）を調製した。この混合物に１，３
−ジシクロヘキシルカルボジイミド（1.2モル当量）を
加えて、そしてこの混合物を室温にて１４〜１６時間攪
拌した。薄層クロマトグラフ分析は、反応が完了したこ
とを示した。ジシクロヘキシル尿素を去し、そして溶
剤を真空除去した。残渣を酢酸エチル中に溶解し、そし
て水で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水Na2SO4で乾燥し
た。乾燥剤を去し、そして溶剤を真空除去した。得ら
れた残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し
てサクシンイミジルエステル〔６Ｂ〕を白色固体として
得た。
テトラフルオロフェニルエステル〔６Ａ〕をCH2Cl2中に
溶解し、そしてこの溶液を最初に０℃にて過剰のトリフ
ルオロ酢酸で処理し、次に室温にて３時間攪拌すること
により、tert−ブチル保護基を除去した。薄層クロマト
グラフィー分析は反応が完結したことを示した。次に、
溶剤及び過剰のトリフルオロ酢酸を真空除去して白色な
いし無色の固体を得、これをCH3CN/H2Oから再結晶化し
て〔７Ａ〕を白色粉末として得た。
溶解し、そしてこの溶液を最初に０℃にて過剰のトリフ
ルオロ酢酸で処理し、次に室温にて３時間攪拌すること
により、tert−ブチル保護基を除去した。薄層クロマト
グラフィー分析は反応が完結したことを示した。次に、
溶剤及び過剰のトリフルオロ酢酸を真空除去して白色な
いし無色の固体を得、これをCH3CN/H2Oから再結晶化し
て〔７Ａ〕を白色粉末として得た。
サクシンイミジルエステル〔６Ｂ〕の場合、化合物〔６
Ａ〕について記載したのと同様にしてtert−ブチル保護
基を除去した。しかしながら、フラッシュクロマトグラ
フィーにより生成物〔７Ｂ〕を精製することが必要であ
った。
Ａ〕について記載したのと同様にしてtert−ブチル保護
基を除去した。しかしながら、フラッシュクロマトグラ
フィーにより生成物〔７Ｂ〕を精製することが必要であ
った。
これらの反応過程をまた、イソフタル酸のモノtert−ブ
チルエステルから出発して行い、上記の生成物の類似の
メタ異性体を得た。
チルエステルから出発して行い、上記の生成物の類似の
メタ異性体を得た。
例11.Ｎ−ヒドロキシサクシンイミジル４，５−ジテレ
フタロイルメルカプトアセタミドペンタノエートのIgG
抗体への接合 ４８０μｇ（7.1×１０-7mole）のN2S2リガンド活性エ
ステル〔６Ｂ〕、0.2mlの再蒸溜ＤＭＦ（１０％）、0.1
5Ｍ塩化ナトリウム、0.05Ｍ硼酸ナトリウム（pH8.5）、
及び10.0mgのマウスモノクローナル抗体（6.7×１０-8m
ole）を含有する2.0mlの合計容積中で接合を行った。室
温にて９０分間攪拌した後、反応混合物を、0.15Ｍ塩化
ナトリウムを含む0.05Ｍリン酸ナトリウム緩衝（pH7.
5）中、セファデックスＧ−２８でのゲル過により画
分した。接合した抗体を含有する排除容積を集めた。残
留非蛋白質物質を除去するため、接合体を、0.15Ｍ塩化
ナトリウムを含へ0.05Ｍリン酸ナトリウム（pH7.5）に
対して１８時間透析した。蛋白質の最終収量は１００％
であった。
フタロイルメルカプトアセタミドペンタノエートのIgG
抗体への接合 ４８０μｇ（7.1×１０-7mole）のN2S2リガンド活性エ
ステル〔６Ｂ〕、0.2mlの再蒸溜ＤＭＦ（１０％）、0.1
5Ｍ塩化ナトリウム、0.05Ｍ硼酸ナトリウム（pH8.5）、
及び10.0mgのマウスモノクローナル抗体（6.7×１０-8m
ole）を含有する2.0mlの合計容積中で接合を行った。室
温にて９０分間攪拌した後、反応混合物を、0.15Ｍ塩化
ナトリウムを含む0.05Ｍリン酸ナトリウム緩衝（pH7.
5）中、セファデックスＧ−２８でのゲル過により画
分した。接合した抗体を含有する排除容積を集めた。残
留非蛋白質物質を除去するため、接合体を、0.15Ｍ塩化
ナトリウムを含へ0.05Ｍリン酸ナトリウム（pH7.5）に
対して１８時間透析した。蛋白質の最終収量は１００％
であった。
例12.４，５−ジテレフタリルメルカプトアセタミドペ
ンタノイル／IgG抗体接合体のＴｃ−９９ｍラベル化 １２０μｌの塩水、２００μｌの0.2Ｍリン酸ナトリウ
ム緩衝液（pH８）、及び８０μｌのテレフタロイル硫黄
保護N2S2接合体（4.66mg/ml）に、前記のようにして調
製したＴｃ−９９ｍ酒石酸（約４mCi）を加えた。反応
混合物を５０℃にて１時間加熱し、これにより９０％の
Ｔｃ−取り込みがもたらされた。
ンタノイル／IgG抗体接合体のＴｃ−９９ｍラベル化 １２０μｌの塩水、２００μｌの0.2Ｍリン酸ナトリウ
ム緩衝液（pH８）、及び８０μｌのテレフタロイル硫黄
保護N2S2接合体（4.66mg/ml）に、前記のようにして調
製したＴｃ−９９ｍ酒石酸（約４mCi）を加えた。反応
混合物を５０℃にて１時間加熱し、これにより９０％の
Ｔｃ−取り込みがもたらされた。
上記の方法に従って、イソフタロイル類似体を製造する
こともできる。
こともできる。
得られる生成物が放射性核種接合体の最大形成をもたら
すことが重要である。さらに、放射性同位元素は時間と
共に崩壊するから、時間に関心がもたれる。そして、こ
の発明の化合物を用いて、蛋白質を急速に接合せしめ、
イン−ビボで使用するための放射性核種置換試薬を得る
ことができる。この試薬は、純粋な形で、良収量で得る
ことができ、そして放射性核種金属はイン−ビボで使用
するための蛋白質とのキレートとして保持される。従っ
て、放射性核種を安全に目的部位に向けることができ、
低レベルの放射能のみが非特異的に向けられそして結合
する。
すことが重要である。さらに、放射性同位元素は時間と
共に崩壊するから、時間に関心がもたれる。そして、こ
の発明の化合物を用いて、蛋白質を急速に接合せしめ、
イン−ビボで使用するための放射性核種置換試薬を得る
ことができる。この試薬は、純粋な形で、良収量で得る
ことができ、そして放射性核種金属はイン−ビボで使用
するための蛋白質とのキレートとして保持される。従っ
て、放射性核種を安全に目的部位に向けることができ、
低レベルの放射能のみが非特異的に向けられそして結合
する。
以上、この発明を詳細に説明したが、この発明の範囲内
において多くの変化，変法を行うことができる。
において多くの変化，変法を行うことができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ２１Ｈ 5/02 Ｃ 9117−2Ｇ
Claims (8)
- 【請求項１】次の式： （式中、Ｔは除去可能な硫黄保護基であり、ｎは１〜６
の整数であり、Ｗは＝NH又は＝０であり、そしてＹはヒ
ドロキシル基、又はペプチドとの結合を形成することが
できる活性エステル基である） により表わされる金属キレート形成性化合物。 - 【請求項２】ｎが２である、請求項１に記載の化合物。
- 【請求項３】Ｔが、保護されるべき硫黄原子と一緒にな
って次の式： （式中、Ｒ3は炭素原子数２〜５個の低級アルキル基で
あり、Ｒ4は炭素原子数１〜３個の低級アルキル基であ
り、そしてＲ5は水素、又は炭素原子数１〜３個の低級
アルキル基である） により表わされるヘミチオアセタール硫黄保護基を構成
する、請求項１又は２に記載の化合物。 - 【請求項４】Ｙが、次の式： で表わされる脱離基である、請求項１又は２に記載の化
合物。 - 【請求項５】Ｙが、次の式： から成る群から選択された脱離基であり、そしてＴは、
保護されるべき硫黄原子と一緒になって次の式： （式中、Ｒ3は炭素原子数２〜５個の低級アルキル基で
あり、Ｒ4は炭素原子数１〜３個の低級アルキル基であ
り、そしてＲ5は水素、又は炭素原子数１〜３個の低級
アルキル基である） により表わされるヘミチオアセタール硫黄保護基を構成
する、請求項１又は２に記載の化合物。 - 【請求項６】次の式： （式中、Ｔは硫黄保護基である） で表わされる特許請求の範囲第１項又は２項に記載の化
合物。 - 【請求項７】次の式： で表わされる、請求項１、２、又は５に記載の化合物。
- 【請求項８】次の式： で表わされる請求項１，２又は６に記載の化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US69200085A | 1985-01-14 | 1985-01-14 | |
| US692000 | 1985-01-14 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4290223A Division JPH07103159B2 (ja) | 1985-01-14 | 1992-10-28 | 放射性核種金属キレート |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61225163A JPS61225163A (ja) | 1986-10-06 |
| JPH0662555B2 true JPH0662555B2 (ja) | 1994-08-17 |
Family
ID=24778874
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61006155A Expired - Fee Related JPH0662555B2 (ja) | 1985-01-14 | 1986-01-14 | 放射性核種金属キレート用化合物 |
| JP4290223A Expired - Fee Related JPH07103159B2 (ja) | 1985-01-14 | 1992-10-28 | 放射性核種金属キレート |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4290223A Expired - Fee Related JPH07103159B2 (ja) | 1985-01-14 | 1992-10-28 | 放射性核種金属キレート |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0188256B1 (ja) |
| JP (2) | JPH0662555B2 (ja) |
| AT (1) | ATE66469T1 (ja) |
| CA (1) | CA1336076C (ja) |
| DE (1) | DE3680924D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10193422B2 (en) | 2015-05-13 | 2019-01-29 | Makita Corporation | Power tool |
Families Citing this family (152)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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