JPH06509330A - 医薬品製造のためのリパーゼの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 医薬品製造のためのリパーゼの使用 本発明は、医薬品を製造するための特殊なリパーゼの使用に関する。

リパーゼは脂肪消化の際に重要であり、それというのもリパーゼは脂肪から触媒 作用により脂肪酸を分離するからである。従ってリパーゼは、酵素欠乏に起因す る消化障害の治療のために、使用される。このような治療は、例えば膵臓機能不 全症、慢性膵臓炎、および胃切除手術後の場合である。この場合使用されるリパ ーゼは、大部分が脱脂し、乾燥し、かつ粉砕した豚膵液を基礎とする生成物であ る。しかしこのような豚膵液調剤は、複数の重大な欠点を有する：１、この調剤 は僅かな比活性を有し、従って１日当たり５〜ｌｏｇまでの量で使用されなけれ ばならない。

２、調剤の活性範囲はｐＨ５〜９の間である。従って調剤は胃通過の際には脂肪 分解活性を示さない。

３、調剤は６以上のｐＨ値の場合に初めて十分な安定性を示す。従って調剤は、 酸に強い形か、または著しく高い投与量で服用されなければならない。

４、医薬的な目的で製造されるリパーゼは、純粋な形では存在しない。このリパ ーゼはプロテアーゼおよびアミラーゼを含有し、従って所定の消化不良性疾病形 の場合には禁忌症候を生じる。

消化不良を治療するリパーゼを、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉ　ｆｌｕｓ） 、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）　、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、カン ジダ（Ｃａｎｄ’１ｄａ）またはリゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）の種類の菌を培 養することによって製造することは、既に提案されていた。ドイツ連邦共和国特 許出願公開第１６４２６５４号および欧州特許出願公開第３８７９４５号明細書 には、治療の目的のために、酵素による製造およびリゾプス・アルヒズス（Ｒｈ ｉｚｏｐｕｓ　ａｒｒｈｉｚｕｓ）　ｉｌｉからのリパーゼの洗浄が記載されて いる。

本発明の対象は、消化不良の治療用の薬剤を製造するため、微生物シュードモナ ス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｐｅｃ。

）ＤＳＭ６４８３および／またはシュードモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍａ ｎａｓ　ｃｅｐａｃｉａ）　Ｉ　Ａ　Ｍ　１０５７から形成されるリパーゼの抗 体と反応してプラスの免疫学的交差反応を示す、細菌性のリパーゼの使用である 。使用可能な細菌性リパーゼを分化するため、前記の微生物からリパーゼに対す る抗体が必要とされる。リパーゼは培養基中で培養され、かつ酵素は培養液から 単離されることによって、細菌から取得される。適当であるのは、炭素源、窒素 源、無機塩および、場合によっては僅かな量の痕跡元素およびビタミンを含有す る培養基である。窒素源としては、無機または有機窒素化合物、またはこれらの 化合物を含有する材料が使用されてよい１例は次のものである：アンモニウム塩 、硝酸塩、とうもろこし膨化水、酵母自家分解物、酵母抽出物および加水分解さ れたカゼイン、窒素源としては、砂糖、例えばブドウ糖、ポリオール、例えばグ リセリンならびに有機酸、例えばクエン酸または脂肪酸が使用されてよい。炭素 源として特に好適であるのは、植物油、例えば大豆油、亜麻仁油またはオリーブ 油である。無機塩の例は、カルシウム、マグネシウム、マンガン、カリウム、銅 、綱、鉄および他の金属の塩である。塩のアニオンとしては、特にリン酸イオン および硝酸イオンが挙げられる。訂利な培養温度は２５〜３３℃である。媒体の ｐＨ値は６〜７．５、剪利に６゜５〜７に保たれる。これは２ｎの硫酸またはア ンモニアによって調節され、かつ発酵の間一定に保たれる。

培養は深部培養として、強力な通風および撹拌下に実施される。３時間の間隔で ２回の順次連続した測定の場合に活性が一定になるまで、発酵は行なわれる。一 般には４０〜６０時間の培養時間で十分である。

この方法で、自然生息域から直接単離された細菌株を用いて、培養液１７当たり ５０〜５００ｍｇの酵素収量が達成される。酵素収量は化学薬剤またはＵＶ光を 用いた突然変異および次に続く淘汰によって、改善されたリパーゼの生産性へと 高められることができる酵素は培養液から常法により分離される。液体は遠心分 離されるか、または濾過され、その結果、微生物および不溶性材料は分離される 。次に、液体相が冨積され、リパーゼが取得される。これは、水と混合可能な有 機溶剤（例えば、アルコールまたはアセトン）を用いて沈殿させることによって か、または塩、例えば硫酸アンモニウムを添加することによって、行なわれる。

比放射能を増大させるため、および前記した方法により得られた粗製生成物の汚 染を減損させるため、例えば溶剤または塩の添加により分画沈殿させることによ って、粗製生成物を再び溶解し、かつ新たに沈澱させることができる。粗製生成 物を洗浄するためのもう１つの方法は、適当な限外濾過膜を通した、酵素含有溶 液の逆流濾過であり、この場合低分子の汚染は膜を通過するが、酵素は留まった ままである。

このようにして得られたリパーゼの有用性を試験するため、シュードモナス種Ｄ ＳＭ６４８３ならびにシュードモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｃ ｅｐａｃｉａ）から前記のように取得されることができるリパーゼに対する抗体 が必要とされる。更に、これらのリパーゼの１つは１０〜２０日の間隔で、家兎 の漿液が十分に高い抗体滴定濃度を示すまでの間、家兎に注射される。リパーゼ の試験のため、このようにして得られた漿液は直接ＥＬＩＳＡ中で使用される。

前記したリパーゼと反応してプラスの免疫学的交差反応を示す細菌性リパーゼは 、例えばクロモバクター・ビスコスム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ　ｖｉｓｃｏ ｓｕｍ）　（イムノ・バイオロジー・ラボラトリーズ社（Ｉｍｍｕｎｏ　Ｂｉｏ ｌｏｇｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ＧｍｂＨ）、２０００　ハンブルク　２ ０、から入手可能）からのリパーゼ、シュードモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄ。

ｍｏｎａｓ　ｃｅｐａｃｉａ）　Ｉ　ＡＭ　１０５７　（アマノ寺ファーマシュ ーテイカル社（＾ｎａｎｏ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏ、Ｌｔｄ、） 名古屋、日本、から入手可能）からのリパーゼ、シュードモナス・フルオレッセ ンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）（エンザイマチック ス社（Ｅｎｚｙｍａｔｉｘ　Ｌｔｄ、）、ケンブリッジ、ＵＫ、から入手可能） からのリパーゼおよびシュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｐａｃ、 ）　Ｄ　ＳＭ　６５３５からのリパーゼである。

細菌性リパーゼはｐＨ３〜ｐＨ９の活性範囲を示す。

その上、本発明による細菌性のリパーゼには、リゾプス・アルビダス（Ｒｈｉｚ ｏｐｕｓ　ａｒｒｈｉｚｕｓ）からの真菌性リパーゼと比較して、デスオキシコ ール酸により明らかに少ない抑制作用が確認されることができる。これは、市場 の製品よりも良好な効率を有する、本発明による細菌性リパーゼの脂肪分解活性 が、胃腸域内での消化不良の治療のために使用されてよいことを意味する。

前記の方法により得られた生成物は更に、生成物中でのリパーゼ濃度が著しく高 く、その結果、専ら僅かな量の物質（約０．２ｇ）が投薬されればよいだけであ るという利点を有する。これはバンクレアチンと比較しても、真菌リパーゼと比 較しても、激烈な改善を表わす。

細菌性酵素の他の利点としては、前記の沈澱が、付随する蛋白質分解の酵素作用 ならびにアミツリシスによる酵素活性のない単一薬剤として製造されうろことが 挙げられる。このことは、プロテアーゼおよびアミラーゼの存在に基づいてリパ ーゼがパンクレアチンの場合には必ずしも治療のために使用可能ではないという 点で利点である。それというのも、ムコビシドーシスのある子供の場合、アミラ ーゼの成分は好ましくなく、急性膵炎もしくは慢性膵炎の活発な追突のある患者 の場合にはリパーゼは治療上好ましいが、しかしプロテアーゼは配合禁忌である 。

このリパーゼは発生の異なる消化不良、即ち（例えば胃切除手術後、膵臓機能不 全、肝臓病もしくは胆汁欠乏症の場合の）酵素欠乏症に起因する腸内容の不十分 な消化作用の治療のため、著しく好適である。リパーゼは錠剤、糖衣錠の形およ び他の固体の投薬型で経口的に服用される。個々の投薬形の含量は、Ｆ、Ｉ。

Ｐ、によれば有利に１０，０００〜１００，０００酵素単位である。（＝特殊研 究論文“Ｐａｎｋｒｅａｓ−Ｐｕｌｖｅｒ　”ＤＡＢ９．１１２７頁／　Ｐｈ、 　Ｅｕ’ｒ、　、第２版、通しナンバー３５０ン。患者１人および１日あたり、 ＃素単位２０，０００〜４０，０００個が服用される。

リパーゼは常用のガレーン式服用形で固体または液体で、例えば錠剤、フィルム 錠剤、カプセル、粉末、顆粒、糖衣錠または溶液として、使用されることができ る。これらは常法により製造される。この場合、作用物質は常用の製薬助剤、例 えば錠剤結合剤、充填剤、防腐剤、錠剤砕解剤、流動調整剤、軟化剤、架橋剤、 分散剤、乳化剤、溶剤、遅延剤、酸化防止剤および／または噴射ガスを用いて加 工されてよい（Ｈ，５ｕｃｋｅｒ他、Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ　Ｔｅｃ ｈｎｏｌｏｇｉｅ、チーメ社（Ｔｈｉｅｍｅ−Ｖｅｒｌａｇ）、シュツットガル ト、１９７８）。このようにして得られた投薬形は、作用物質を通常１０〜９０ 重量％の量で含有する。

例１ ａ）シュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｐｅｃ、）　Ｄ　Ｓ　Ｍ　 ６４８３からのリパーゼの製造および洗浄微生物シュードモナス種ＤＳＭ６４８ ３の培養のため、次の媒体を使用した・ ｇ／Ｉ Ｋ　ＨＩ　Ｐ　０４　２０ Ｎａ２ＨＰ０．　１０ Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ＋　５ ＣａＣ１ｔ　Ｘ　２ＨｚＯ３ Ｆ　ｅ　Ｓ０４　Ｘ　７Ｈ１００，５ Ｍｎ５Ｏ，Ｘ　４Ｈｔ　Ｏ０，００５ ＣｏＣ１−Ｘ　６Ｈ＊　０　０．００５Ｃｕ　Ｓ　Ｏ＊　Ｘ　５　Ｈｚ　ＯＯ、 ＯＯ５ＺｎＳＯ，ｘ　７Ｈ＋　０　０．００５酵母抽出物　５ 炭素源としては精製した大豆油を使用したが、この大豆油はＩｇ／Ｉ　Ｘ　ｈの 所定の供給率を用いてポンプ供給した。ｐＨ値を全発酵時間に亙って、２ｎのＨ ，Ｓｏ、および２５％のＮＨ，ＯＨの助けを用いてｐＨ６，５に保った。

接種培養液を、栄養素液媒体４００　ｍ　ｌを接種することによって、微生物シ ュードモナス種ＤＳＭ６４８３を用いてｐＨ６，５に保った。

接種培養液を振動装置上で３０℃で１０時間培養した。

媒体に３０℃および６．５のｐＨ値で、媒体１００容量部当たり接種培養液５容 量部を接種した。主な培養を３０℃で１０　１の撹拌培養器中で内容物８１を用 いて実施した。据付けの羽根型撹拌器の撹拌速度は、毎分１０００回転であり、 通風率は毎分および１発酵液ｌ５たりｌ空気量であった。６０時間後、発酵液は ２回連続して測定した場合Ｆ、１．Ｐ、によれば酵素単位３００個の一定の活性 を示した。そこで発酵を中断し、かつ形成されたリパーゼを次のように発酵液か ら単離した・ 発酵器機出物をｎ−プロパツールを用いてアルコール６５％の容量部に希釈した 。生物体量と沈澱した副生成物とを遠心分離によって分離した。澄んだアルコー ル性酵素溶液を、真空下に出発物質の３分の１に蒸発濃縮した。

このようにして得られた酵素濃縮液を透析濾過方法（セルローストリアセテート −逆流濾過方法、分離限界２０．０００規定モル重量、ザルトリウス社（Ｆａ、 ５ａｒｔｏｒｉｕｓ）　、ゲッティンゲン）で、Ｈ８０３回量を用いて洗浄し、 次いで濾過により出発量の４分の１に蒸発濃縮した。この酵素濃縮液から、８５ ％の容量部になるまでｎ−プロパツールを添加することによって、リパーゼを沈 澱させた。このリパーゼ活性を含有する沈澱を、遠心分離によって取得し、かつ ｎ−プロパツール６５容量部を含有する水溶液中で摂取した。沈澱物対ｎ−プロ パツール／水−混合物の重量比は、ｌ・ＩＯであった： 遠心分離によって、溶解しない沈澱を分離した。ｎ−プロパノール含分を８０容 量分に増大することによって、遠心分離の澄明な上澄みからリパーゼを沈澱させ た。沈澱を遠心分離によって取得し、かつ冷凍乾燥した。このようにして得られ た酵素粉末はＦ、１．Ｐ。

によればプロティン１ミリグラム当たり酵素単位７０００個の比活性を示した。

ｂ）同様の方法で、他のシュードモナス属エ（Ｐｓｅｕｄ。

ｍｏｎａｄａｃｅｅ）もしくはクロモバクター・ビスコスムからのリパーゼも製 造し、かつ単離することができる。

著しく良好なリパーゼはシュードモナス種ＤＳＭ６５３５から取得することがで きる。

菌株ＤＳＭ６５３５の分類学的実験から次の性質が判明した： 細胞形態学、長さ１．５〜２．０μｍで、直径０．８〜１．０μｍ ダラム染色：全成長段階において陰性 胞子：無 運動性：有 ４５℃もしくは４１’Ｃで成長なし ３７℃で成長 ３０℃で最適な成長 カタラーゼ・陽性 オキシダーゼ：弱（陽性 グルコースの発酵使用なし 厳密に好気性の成長 表示した性質はＤＳＭ６５３５のシュードモナス属への配属を許容する。

次の生理学的特徴の一致によって、種配属が可能になるはずである。

アルギニンジヒドロラーゼ：有 リジンデカルボキシラーゼ：無 オルニチ〉デカルボキシラーゼ：無 キング（Ｋｉｎｇ）　Ｂ−媒体上の顔料形成＝ｒａ性ツクツウィーン０　（Ｔｗ ｅｅｎ＠　８０）の加水分解：陽性カゼインの加水分解０弱く陽性 ゼラチンの加水分解　弱く陽性 澱粉の加水分解：陽性 尿素の加水分解：陽性 エスクリンの加水分解：弱く陽性 硝酸塩から亜硝酸塩への還元：陽性 サッカロースからのレバン形成：陰性 レシチナーゼ：陰性 β−ガラクトシダーゼ：陽性 グルコースの利用：陽性 マンノースの利用二陽性 マンニットの利用：陽性 イノジットの利用二陽性 Ｎ−アセチルグルコースアミンの利用二弱く陽性グルコン酸の利用二陽性 クエン酸の利用二陽性 リンゴ酸の利用：陰性 フェニル酢酸の利用、陰性 ベンジルアミンの利用二陽性 トレハローゼの利用：陽性 ＤＳＭ６５３５の生理学的性質に基づいて、一義的な種配属は不可能である。

従って、細胞壁の脂肪酸組成をおおう十分な類別を試みた： 次の脂肪酸の発生は、ＤＳＭ６５３５からシュートモナートのｒＲＮＡ−同族群 ２への疑問のない類別を許容する　１４＋０　３−ＯＨ，１６：０　３−ＯＨ。

１．６：ｌ　２−ＯＨおよび１８：１　２−ＯＨ。

脂肪酸標準型とそれの植物病原性細菌との比較は、ｒＲＮＡ−同族群２の範囲内 でのシュードモナス・セパシア／グラフオリ錯体と類似していることを示す。

しかしＤＳＭ６５３５の抜きんでた生理学的特徴は、リパーゼ生産性である：　 前記した発酵条件下に、０５Ｍ６５３５を用いて発酵媒体１１当たりリパーゼ３ ．２ｇまでを製造できる。

例２ 抗体の製造およびＥｌｉｓａの実施 抗原（＝シュードモチ３種ＤＳＭ６４８３からのリパーゼ）Ｏ，１ｍｇ／ｍ＋と フロイトアジュバントとからなる同量の溶液を、均一な乳濁液が生１しるまで混 合した。２匹の雌の家兎に次の予定表に応じて、この乳濁液の２ｍｌの試料を注 射した： Ｏ日目に、フロイト完全アジュバント中の抗原を与えた。次に１４日の間隔をお いてフロイト不完全アジュバント中の抗原を２回与え、次に、以下に記載するＥ ｌｉｓａ試験に十分な抗体を提供する抗体滴定量が得られるまで、アジュバント のない抗原を与えた。抗シュードモナス種ＤＳＭ６４８３漿液の滴定量は、Ｅｌ ｉｓａで次の処理方法により測定した。

段階（１） 微量滴定板に抗原を塗布したが、この場合、抗原を１〜ｌ　Ｏｕ　ｇ　／　ｍ　 ＋の濃度でＮ　ａ　ＨＣＯｓ　Ｏ、Ｏ５特表千６−５０９３３０　（５） モル、ｐＨ９，２中に溶解した。

段階（２） 過剰の結合箇所をリン酸塩緩和した塩（ＰＢＳ）中に牛漿液アルブミン１％を用 いて飽和した。

段階（３） 微量滴定容器を、ＰＢＳ中にツウィーン２０（Ｔｗｅｅｎ＠２０）０．０５％を 用いて３回洗浄した。

段階（４） ツウィーン２００．５％を有するＰＢＳ（第２段階）中に家兎抗血清の希釈液１ １を塗布した。

段階（５） 段階３と同様に洗浄。

段階（６） ＰＢＳ中の牛漿液アルブミンＯ，１％に希釈したビオチニル化した家兎ＩｇＧ抗 体１　：　１００００を塗布した。

段階（７） 段階３と同様に洗浄。

段階（８） ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ錯体と抗体−免疫グロブリン錯体とを反 応させた（希釈度ｌ：１００００）。

段階（９） 段階３と同様に洗浄。

段階（１０） ペルオキシダーゼ基質溶液として、３％Ｈ２０゜１４．７μＩを含有するＮａ− 酢酸塩０．１モル、ｐＨ４，９中テトラメチルベンチジン０．４２ミリモルを使 用した。

段階（１１） 酵素反応をＨ，３０，２モルを用いて停止させた抗シュードモナス橿６４８３の 滴定量を、４５０ｎｍでの吸収を測定することによって測定した。

前記のように製造されたシュードモナス種ＤＳＭ６４８３抗体と反応してプラス の免疫性交差反応を示す全てのリパーゼは、本発明によるリパーゼである。

そのようなリパーゼの典型的な例は次のものである：クロモバクター・ビスコス ム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ　Ｖｉｓｃ。

ｓｕｍ）　（イムノ・バイオロジー・ラボラトリーズ社＜１ｍｍｕｎｏ　Ｂｉｏ ｌｏｇｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｇ＋ｏｂＨ）、２０００　ハンブルク２ ０、から入手可能）からのリパーゼ、シュードモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏ ｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）ＩＡＭ　１０５７（アマノ・ファーマシューティカ ル社（Ａｍａｎｏ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏ、Ｌｔｄ、）名古屋、 日本、製、アマノＰ（Ａｍａｎｏ　Ｐ）の商標名下に入手可能）からのリパーゼ 、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏ＋ｎｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒ ｅｓｃｅｎｓ）　（エンザイマチツクス社（Ｆａ、Ｅｎｚｙｍａｔｉｘ　Ｌｔｄ 、　）、ゲンブリソジ　ＵＫの製品）からのリパーゼおよびシュードモナス種（ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｐｅｃ、）　Ｄ　Ｓ　Ｍ６５３５からのリパーゼ。

有利に本発明によるリパーゼは、同様にシュードモナス・セパシア　ＩＡＭ、１ ０５７からのリパーゼに対する抗体と反応してプラスの免疫性交差反応を示すは ずである。

リパーゼの性質 例３ パンクレアチンと比較して、細菌性の起源の種々のリパーゼ調整の比活性。

活性測定を２つの異なった測定方法により実施した１）膵液粉末用のリパーゼ活 性測定 （特殊研究論文”膵液粉末″ＤＡＢ９．１１２７頁／ｐｈ、欧、第２版、通しナ ンバー３５０）３７℃、ｐＨ９、タウロコール酸塩ｌＯミリモルでの酵素試験２ ）細菌性リパーゼのためのリパーゼ活性測定（ＩＩ剤酵素、発行者：　Ｒ，Ｒｕ ｙｓｓｅｎ　、　Ａ、Ｌａｕｗｅｒｓ　、　Ｅ、５ｔｏｒｙ−５ｃｉｅｎｔｉａ 　Ｐ、Ｖ、Ｂ、Ａ、１９７８年、２１０〜２１３頁）、３７℃、ｐＨ７、タウロ コール酸塩０．５ミリモルでの酵素試験。

プロティン測定のため、ビオ−ラード・ラボラトリーズ社（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌ ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ＧｍｂＨ）のテストキット（Ｔｅｓｔｋｉｔ）を使用 した。このテストキットはＭ・ブラッドフォード（（Ｍ、Ｂｒａｄｆｏｒｄ　） Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、（７２）　、　２４８（１９７６））の方法に基づ く。　下記の表■が示すように、ここに記載した細菌性リパーゼには、前記した ドイツ薬局方のパンクレアチン用の方法を用いて、真菌性リパーゼの場合または パンクレアチンの場合よりも明らかに高い比活性を測定した。パンクレアチンと 細菌性リパーゼとの間の一致は、この２つの酵素の場合、ｐＨ９で測定した比活 性がｐＨ７で（微生物のリパーゼに対する試験において）測定した比活性を上回 っている限り存在する。

試験した真菌性リパーゼはこの点で逆に働く。従って、真菌性リパーゼの最大比 活性は、パンクレアチンの比活性と直接には比較できない。

組 下記のものからのリパーゼ　薬剤酵素によるプロティンｌミリグラム当たりの比 活性　Ｆ、ｒ、Ｐ。

シュードモナス１１ＤＳＭ６４８３　６６９６　７１０８（例１） クロモバクター・ビスコスム　３３０２　５３５２シユードモナス・セパシア　 ７３８　１０３８１０３８（Ａ　Ｐ） シュードモナス種ＤＳＭ６５３５　５０６４　６２９０（例１） パンクレアチン　２２６　４３０ リゾプス・アルビダス　９４２　３１７カンジダ・シリンドラセア　４５９２　 ４１・６（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌ　１ｎｄｒａｃｅａ）ムコール・ミニヘイ（ Ｍｕｃｏｒ　Ｍｉｅｈｅｉ）　２９４　１６９アスペルギルス・ニゲール　３９ ４　０（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）ペニシリウム・ロクエフォルチ イ　１９５　８３．１（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉｉ）ジ オトリクム・カンジウム　１７２　６３．９（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　Ｃａｎｄ ｉｕｍ）例４ パンクレアチンとの比較における細菌性リパーゼのｐＨ依存性 ｐＨ値と脂肪分解活性との関係を調べるため、微生物性および動物性リパーゼ用 の変性した試験系を使用した（Ｃｈ、　Ｕｎｔｅｒｂｅｒｇ　ｉｎ：　Ｆｅｔｔ ｅ、　５ｅｉｆｅｎ、　Ａｎｓｔｒｉｃｈｍｉｔｔｅｌ；第８８巻、５６１〜５ ６４頁）。第１Ｉ表にまとめた数値は、細菌性リパーゼがパンクレアチンと比較 して、酸性のｐＨ範囲内に大きく広がった活性範囲を有することを示している。

従ってこのリパーゼは、活性を既に胃内で発揮できるという利点を有する。

第１＋表 相対脂肪分解活性（％） 値　パンフレ　アマハフアーマ　シュードモナス種　シュードモナス種３．５　 ０　３７．５　＋４．３　２７．４４．０　Ｇ　４２．５　１６．９　２０．７ ４．５　５．０　４＋、３　２９．９　３４．１５．０　２０．０　４５．０　 ５２．０　３４．ＩＥｌ、５　２７．６　４０．０　５２．０　３５．４６．０ 　３０．８　４５６．０　５２．０　３７．８６．５　４６．６　５２．４　５ ８．４４６．３７．０　６１．７　７０．０　？１．４　、　６６．１７．５　 ？６．７　９０．０　７９．２　７６．８８．０　８６．７　１００．０　１０ ０．０　１００．０８．５　９０．０　９２．４　８４．４　６８．３９．０　 ＋００．０　９５．０　１００．０　６９゜５例５ シュードモナス種ＤＳＭ６５３５ならびにリゾプス・アルビダスからのリパーゼ に対するナトリウムデスオキシコレートの作用 胆汁塩　ナトリウムデスオキシコレートの微生物性リパーゼの活性への影響を検 査するため、膵液粉末のための活性測定（特殊研究論文”　Ｐａｎｋｒｅａｓ− Ｐｕｌｖｅｒ”ＤＡＢ　９．　＋１２７頁／Ｐｈ、Ｅｕｒ、、第２版、通しナン ノ＜−３５０）を使用した。タウロコレートの代わりに０〜１０ミリモルの濃度 のナトリウムデスオキシコレートを酵素試験で使用した。

下記の第１１Ｔ表に明らかなように、本発明による細菌性リパーゼは、比較のた めに取り上げたリゾプス・アルビダスからの真菌性リパーゼに対して次の利点を 有する： 殊に５ミリモルを上回るナトリウムデスオキシコレート濃度の場合、シュードモ ナス種ＤＳＭ６５３５からのリパーゼは抑制されないが、これに反して真菌性酵 素は既に明らかな不活性化を示す。

第１ＩＩ表 Ｎａ−デスオキシコレートの　相対脂肪分解活性（％）濃度（ミリモル）　シュ ードモナス種　リゾプス・アルビダスＤＳＭ６５３５ ０．５　１１４　１８０ ２．５　１７７　１１８ ３．５　１００　１００ ６．５　１１５　６４ ７．５　１１７　５０ フロントベージの続き （５１）Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号（Ｃ１２Ｎ　９／２０ Ｃ１２Ｒ１：３８） （７２）発明者　メンケルーコーネン、エルケドイツ連邦共和国　Ｄ−６７２０ シュバイヤー　イム　フォーゲルゲザンク　６５ （７２）発明者　レッテンマイアー、ハンスイエルクドイツ連邦共和国　Ｄ−６ ７１８グリュンシュタット　ビュツケルハウベ　７ Ｉ （７２）発明者　フリードリヒ、トーマスドイツ連邦共和国　Ｄ−６１００ダル ムシュタット　ザールバウシュトラーセ　２２−２４（７２）発明者　ズプコフ スキー、トーマスドイツ連邦共和国　Ｄ−６７０４ムターシュタット　ルーフハ イマー　シュトラーセ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. １．消化不良を治療する薬剤を製造するため、微生物シュードモナス種（Ｐｓｅ ｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐｅｃ．）ＤＳＭ６４８３および／またはシュードモナス ・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍａｎｓ　ｃｅｐａｓｉａ）ＩＡＭ１０５７から形成 されるリパーゼの抗体と反応してプラスの免疫学的交差反応を示す細菌性のリパ ーゼの使用。
2. ２．消化不良を治療する薬剤を製造するためのシュードモナス種ＤＳＭ６５３５ からの細菌性リパーゼの使用。
3. ３．シュードモナス種ＤＳＭ６５３５。