JPH06293785A - 不飽和脂肪酸含有リン脂質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ２種の異なる不飽和脂肪酸を１分子中に含有
するリン脂質を提供する。 【構成】 １２種のｎ−６およびｎ−３必須脂肪酸、オ
レイン酸、パリナリン酸およびコロンビニン酸から選択
された２種の異なる不飽和脂肪酸を包含するリン脂質は
医薬、栄養添加物およびスキンケアに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は不飽和脂肪酸を含有する
リン脂質に関する。

【０００２】

【従来の技術】不飽和脂肪酸、特に下記表１に示される
必須脂肪酸（以下ＥＦＡと略記する）およびある種の他
のものはある範囲の医学的用途が可能である。

【０００３】

【表１】 必須脂肪酸と並んで、より詳しくはオレイン酸、パリナ
リン酸および共役二重結合を有する他の脂肪酸、および
必須脂肪酸ではないが必須脂肪酸欠乏の多くの特徴を矯
正できる非共役結合を有する脂肪酸であるコロンビニン
酸（columbinicacid)が存在する。パリナリン酸は18：4
n-３酸（９−シス, 11−トランス, 13−トランス, 15
−シス）であり、コロンビニン酸は18：3 n-６酸（６,
９−シス, 13−トランス）である。ＥＦＡの体内におけ
る主要系列の変換は表１に示される。

【０００４】前記経路は通常は可逆性でもなければ、ヒ
トでｎ−３系列とｎ−６系列の酸とで相互変換性でもな
い。これら酸（本質的に全てシス配置である）は、相当
するオクタデカン酸、エイコサン酸またはドコサン酸の
誘導体、例えば、デルタ−9,12−オクタデカジエン酸ま
たはデルタ−4,7,10,13,16,19 −ドコサヘキサエン酸と
して分類上称されるが、対応する数字表示、例えば、1
8：2 n-6 または22：6 n-3 が便利である。また、例え
ば、20：5 n-3 酸（エイコサペンタエン酸）に関する頭
文字ＥＰＡまたは22：6 n-3 酸（ドコサヘキサエン酸）
に関するＤＨＡも使用されるが、例えば22：5 酸におけ
るように同じ鎖長および同じ不飽和度のn-3 酸とn-6 酸
が存在する場合には役に立たない。n-6 系列で多少とも
普通に使用される通称名が示される。n-3 系列の中で1
8：3 n-3 のみが普通に使用される通称名、アルファ−
リノレン酸を有するが、名称ステアリドン酸が18:4 n-3
酸について使用されてきており、名称エイコサペンタエ
ン酸およびドコサヘキサエン酸もそのまま使用される。
リノレン酸のα異性体はγ−リノレン酸よりも早くに特
性決定され、そして文献、特に早期の文献において単に
リノレン酸に関する言及はα−酸に関するものである。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】これら脂肪酸の多くは
相互に相乗性であると思われる作用を有する。例えば、
ガンマ−リノレン酸（以下ＧＬＡと略記する）はひとそ
ろいの抗炎症作用を及ぼすがエイコサペンタエン酸（以
下ＥＰＡと略記する）は別のひとそろいの抗炎症作用を
及ぼす。脂肪酸の多くは容易に酸化されるが、一方オレ
イン酸は強力な抗酸化作用を及ぼす。アラキドン酸（以
下ＡＡと略記する）は細胞膜の重要な構成成分であるが
しかし前炎症性、前血栓性および血管収縮性代謝産物、
例えばトロンボキサンＡ₂ またはロイコトリエンに変換
された場合は有害でありうる。それゆえ、有害な代謝産
物へのその変換を低減させる脂肪酸と一緒にＡＡを投与
することが有用である。

【０００６】さらに、多くの国々においては医薬生成物
のガイドラインは脂肪酸の混合物のような、化合物の混
合物である薬物を容易に受容しない。それゆえ単一分子
の認可を求めるのが好ましい。従って、脂肪酸を投与す
るためには、異なる脂肪酸を１個の分子の形でとり込む
ビヒクルを提供することが望ましいであろう。それゆえ
本発明は脂肪酸をとり込むことのできる部位を２個有す
るＰ−セリン、Ｐ−コリン、Ｐ−エタノールアミンまた
はＰ−イノシトール（ここでＰはホスファチジル基を意
味する）のようなリン脂質の使用を提案する。かかるリ
ン脂質は天然のリン脂質に近接しており、それゆえ２種
の異なる脂肪酸を放出するための適切な単一分子であ
る。

【０００７】

【課題を解決するための手段】それゆえ本発明は、１つ
の部位が１種の脂肪酸で占められもう１つの部位が別の
脂肪酸特に第１の脂肪酸と付加的作用または相乗作用を
有する脂肪酸により占められたリン脂質に関する。これ
ら脂肪酸はそれ自体知られた方法により化学合成による
かまたは天然産物からの抽出と精製により製造でき、そ
してそれ自体知られた方法によりリン脂質中にとり込む
ことができる。

【０００８】リン脂質の製造に使用すべき脂肪酸は表１
に示される12種の必須脂肪酸、オレイン酸、コロンビニ
ン酸およびパリナリン酸である。ＧＬＡ、ＤＧＬＡ、Ａ
Ａ、ＥＰＡおよびＤＨＡから選択された脂肪酸が存在す
るのが好ましい。脂肪酸の中でもガンマ−リノレン酸
（ＧＬＡ）、ジホモ−ガンマ−リノレン酸（以下ＤＧＬ
Ａと略記する）、アラキドン酸（ＡＡ）、エイコサペン
タエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（以下Ｄ
ＨＡと略記する）が特に重要である。それゆえ特に重要
なものはリン脂質上の２つの位置でこれら特定の脂肪酸
の任意のものを含有するリン脂質であり、特に下記脂肪
酸対を含有するリン脂質である、すなわち −ガンマ−リノレン酸（ＧＬＡ）またはジホモ−ガンマ
−リノレン酸（ＤＧＬＡ）とアラキドン酸 −ＧＬＡまたはＤＧＬＡとエイコサペンタエン酸（ＥＰ
Ａ）、 −ＧＬＡまたはＤＧＬＡとドコサヘキサエン酸（ＤＨ
Ａ）、 −ＡＡとＥＰＡ、 −ＡＡとＤＨＡ、 −ＥＰＡとＤＨＡ。

【０００９】合成法およびリン脂質の分離法に必然的に
限定されるゆえ、医薬産物または食品またはスキンケア
製品で使用される任意のリン脂質調製物は実際上異なる
リン脂質の混合物である可能性がある。それゆえ本発明
は特定されたリン脂質が、存在する総リン脂質の少なく
とも20％、好ましくは40％以上、非常に好ましくは70％
以上そして理想的には90％以上を占めるのが好ましい。

【００１０】これらリン脂質は例えば経口、経腸、非経
口（静脈内、皮下、筋肉内または任意の他のかかる経
路）、局所、直腸内、膣内または他の投与経路により投
与するための食品またはスキンケア調製物または薬剤の
製造に使用できる。これらは特定されたリン脂質１日当
たり１mg〜100g、好ましくは 100mg〜20g そして非常に
好ましくは 500mg〜４g の量で医薬形態で投与されるの
が望ましい。食品または経腸、非経口または局所投与用
調製物中に使用される場合は、特定されたリン脂質0.01
〜60重量％、好ましくは0.１〜30重量％そして非常に好
ましくは１〜20重量％を含有する配合物となされるのが
望ましい。

【００１１】好適な医薬剤形は例えば硬または軟ゼラチ
ンカプセル、錠剤、トローチ（pas-tille)、クリーム、
ローションまたはエマルジョンである。食品は例えばホ
イップ、泡、粉末またはチョコレートであることができ
る。化粧品用途にはクリーム等を使用できる。リン脂質への合成経路 ４種類のリン脂質が考えられる。 Ｉ リン脂質酸（以下ＰＡと略記する） II ホスファチジルコリン（以下ＰＣと略記する） III ホスファチジルエタノールアミン（以下ＰＥと略記
する） IV ホスファチジルセリン（以下ＰＳと略記する） いずれの場合も目的分子はジアシルリン脂質である。

【００１２】リン脂質の合成は２種類の方法に分けるこ
とができる。 （ｉ）初めにリン酸化、次にアシル化 （ii）初めにアシル化、次にリン酸化 リン脂質合成は通常部分合成経路または全合成経路とし
て考えられる。部分合成は出発物質として天然に存在す
るリン脂質を利用するものであり、一方全合成は通常グ
リセリン誘導体から出発する。混合酸リン脂質合成には
第２の手段が一般的により実行可能である。 （Ｉ）ホスファチジン酸合成 （ｉ）初めにリン酸化工程を行う方法 方法（ａ） グリセロホスファチジン酸を脂肪酸無水物を用いて60〜
80％の収率でアシル化した。この経路は２つの位置に同
じアシル基を有するＰＡの合成に好適であるがしかし例
えば II(ｉ)(ａ）でのように混合酸合成にも適合でき
る。環状ホスヘート形成およびホスヘート移動の度合い
を低減させるため、対象とする脂肪酸の塩がしばしば添
加される。

【００１３】グリセロホスファチジン酸はグリセリンの
酵素的リン酸化により大規模（300g）に調製された。醗
酵器中で実施されるこの反応は固定化されたグリセリン
キナーゼ、触媒量のＡＴＰおよびＡＴＰ再生のための酵
素系を用いる。これはＧＰＡの最も魅力的な大規模生産
経路である。環状ホスヘート形成は、ホスヘート基がト
リエステル形である場合は回避できる。ＧＰＡはリン酸
二水素ナトリウムをグリシドールと反応させることによ
り調製され、そして下記反応を用いることができる。

【００１４】

【化１】

【００１５】次にこの中間体ホスホトリエステルを酸ク
ロライドでアシル化しそしてＰＡへの変換はホスヘート
保護基を例えばトリメチルシリルヨーダイドにより除去
することにより完了する。 方法（ｂ） ＰＡはホスホリパーゼＤ（ストレプトミセス・クロモフ
スカス(Streptomyceschromofuscus) から）を用いるＰ
Ｃの加水分解により小規模で定量的収率で製造された。 （ii）初めにアシル化を行う方法 ＰＡは相当する１, ２−ジアシルグリセリンから製造さ
れた。この出発物質は多数の合成に共通であってその製
造方法は以下に示される。この方法を用いるＰＡへの経
路は次のとおりである。 方法（ａ）

【００１６】

【化２】 示されるとおり、これは飽和アシル基に関してのみ適す
る。しかしながら、ベンジルアルコール以外のアルコー
ルを選択するとこの経路の適用可能性が拡がる。 方法（ｂ） １, ２−ジアシルグリセリンをＰＯＣl₃／Ｅt₃Ｎ⁶と反
応させることによりＰＡが高収率（＞90％）で合成され
る。 方法（ｃ）

【００１７】

【化３】 この経路は、出費および銀イオンとポリ不飽和脂肪酸と
の相互作用が受容できるものであれば、アシル基移動の
問題を解決するものである。 方法（ｄ）

【００１８】

【化４】

【００１９】これにより同一酸のＰＡ、ＰＣおよびＰＳ
ならびに新規脂質ホスホジエステルが得られる。初めの
リン酸化は出発物質としてグリセリンを使用しそしてグ
リセリンホスヘート（以下ＧＰＡと略記する）を良好な
収率でかつ光学的に純粋な形態で生成する。この方法は
ＧＰＡを結晶性４−Ｎ, Ｎ−ジメチルアミノピリジン塩
として精製することで出発しそして脂肪酸無水物を使用
するアシル化およびＰＡからＰＣへの変換が続く。最終
工程はホスホリパーゼＤにより仲介されたトランスホス
ファチジル化反応である。 方法（ｅ） これはアシル基移動を招来しない緩和なリン酸化剤を使
用する。

【００２０】

【化５】

【００２１】（II）ホスファチジルコリン合成 （ｉ）初めにリン酸化工程を行う方法 方法（ａ） グリセロホスファチジルコリンは67〜88％の範囲の種々
の収率でアシル化された。超音波の使用により反応時間
が低減される。この経路はＣ１およびＣ２で同じアシル
基を有するＰＣに限定される。しかしながら、多数のホ
スホリパーゼＡ₂ 酵素の任意の１種を使用し、続いて再
アシル化すると、混合酸ＰＣを製造することができる。
グリセロホスファチジルコリンは商業的に入手でき、そ
してまた卵黄からも無色結晶性カドミウムクロライド複
合体として容易に製造できる。化学合成は適当に保護さ
れたホスヘートを用いるグリシドールの開裂である。

【００２２】

【化６】 次にこのホスヘートジエステルを脂肪酸クロライドでア
シル化しそして無水条件下にトリメチルアミンと反応さ
せることによりＰＣに変換する。あるいは、初めに無水
トリメチルアミンで処理してＧＰＣとなし次にこれを前
記したようにしてアシル化する。このホスホトリエステ
ルはまたソルケタール（solketal) からも容易に製造で
きる。

【００２３】

【化７】

【００２４】あるいはまた、ＧＰＣはソルケタールをオ
キシ塩化リン続いてコリンと反応させ、次にアセトニド
基を酸触媒除去することによっても製造できる。 方法（ｂ） ソルケタールまたは１, ２−ジアシルグリセリンとコリ
ンホスヘートとの結合によるＧＰＣまたはＰＣの合成。
コリンホスヘートはコリンの酵素的リン酸化により調製
される。 方法（ｃ） ホスヘートを後半段階まではホスホトリエステルとして
維持することにより、環状ホスヘート形成が回避され
る。例えばトリエステルとして保護されたＧＰＣは以下
のようにして生成される。

【００２５】

【化８】

【００２６】方法（ｄ） ＰＣはホスファチジルエタノールアミンの徹底的メチル
化により製造される。 方法（ｅ） ＰＣは前記 II(ｉ)(ｄ）におけると同じホスヘート活性
化剤の影響の下にＰＡとコリンを反応させることにより
製造される。トリクロロアセトニトリルおよび２, ４,
６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロライドの
両方を使用できる。 方法（ｆ） トルエン中オレイン酸を用いるリゾホスファチジルコリ
ンのホスホリパーゼＡ₂ 仲介再アシル化により混合酸Ｐ
Ｃを製造できる。他の酸誘導体および他の反応条件を用
いることもできる。酸無水物による１位でのＧＰＣの選
択的エステル化を仲介するのにリポザイムを使用でき、
収率71％である。例えばこれら２種類の酵素の連続使用
を包含する合成においてである。 （ii）初めにアシル化を行う方法 １, ２−ジアシルグリセリンのＰＣへの変換には広範囲
の試薬が存在する。 方法（ａ） 最も簡単な経路はオキシ塩化燐続いてコリン（コリンと
して、トシレートまたはテトラフェニルボレート塩とし
て）との反応である。この経路の変形はコリンの代わり
にエタン−１, ２−ジオールの使用であり、そしてこれ
は合成工程をさらに追加するものであるが、中間体
（Ａ）の精製は直接ＰＣ精製より容易である。

【００２７】

【化９】

【００２８】化合物（Ａ）はトリメチルアミンとの反応
によってもＰＣに変換できる。混合酸ＰＣの製造はホス
ホリパーゼＡ₂ による（Ｂ）の加水分解に続いて過塩素
酸の存在下第２の脂肪酸無水物での再アシル化に続くト
リメチルアミンとの反応を包含する。過塩素酸の機能は
アシル基の移動を最小限に抑制することである。しかし
ながらリゾホスファチジルコリンの再アシル化は、ヒド
ロキシル基が立体的に非常に混んでおり、それにより再
アシル化に必要とされる強行条件下ではアシルまたはホ
スヘートの移動を招来しうるので化学的に困難である。 方法（ｂ） 適当に保護されたホスホリルクロライドでのリン酸化に
より上記中間体（Ａ）または（Ｂ）が生成し、次にこれ
をトリメチルアミンと反応させる。 方法（ｃ） これは前記 II(ｉ)(ｄ) におけると同じ経路である。 （III) ホスファチジルエタノールアミン合成 （ｉ）初めにリン酸化工程を行う方法 方法（ａ） グリセロホスファチジルエタノールアミンは商業的に入
手でき、そしてアミノ基は活性な求核基であってアシル
化工程を妨害するが、ＰＥ合成の出発点として使用でき
る。 方法（ｂ） ＰＥはホスホリパーゼＤ触媒トランスホスファチジル化
によりＰＣから製造される。 方法（ｃ） 活性化剤として２, ４, ６−トリイソプロピルベンゼン
スルホニルロクライドを使用して、エタノールアミンの
保護された形態物をＰＡに結合させる。その後保護基を
除去する。 方法（ｄ） 混合酸ＰＥの合成：

【００２９】

【化10】

【００３０】ホスヘートをメチルエステルとして保護す
ると中間体リゾホスファチジルエタノールアミンのアシ
ル化に関して良好な収率が得られる。 方法（ｅ） ＧＰＥの保護形態物をアシル化する。ソルケタールから
出発して、オキシ塩化リンに続いてＮ−保護エタノール
アミンとの反応、そして終りに付加物の酸触媒脱アセト
ン化により、保護ＧＰＥがホスホジエステルとして得ら
れる。保護ＧＰＥホスホトリエステルを合成するための
改善は以下に示される。

【００３１】

【化11】

【００３２】アシル化後、メチル基の除去はブタン−２
−オン中ナトリウムヨーダイドを用いることによる。さ
らに、もしＮ−tＢＯＣエタノールアミンをＯ−リン酸
化する場合はこのものを（トリクロロアセトニトリル、
ＤＣＣまたは２, ４, ６−トリイソプロピルベンゼンス
ルホニルクロライドを用いて）１, ２−ジアシルグリセ
リンと結合させて保護されたＰＥを生成するか、または
ソルケタールと結合させ保護ＧＰＥ（アセトニド基の除
去後）を生成する。 （ii）初めにアシル化を行う方法 方法（ａ） ＰＥは１, ２−ジアシルグリセリンからＰＯＣl₃ およ
びエタノールアミンまたはそのＮ−tＢＯＣ誘導体の連
続的付加により製造できる。遊離エタノールアミンを用
いた場合はオキサアザホスファランが形成される。これ
を非常に緩和な条件下に（水性酢酸、室温、２時間）開
環させる。生成物ＰＥは溶液から沈澱し、従ってこの方
法を大規模合成にとって魅力的なものとなしている。

【００３３】

【化12】 方法（ｂ） ＰＥはグリセリンヨードヒドリンジエステルを適当に保
護されたエタノールアミンホスヘートの銀塩と反応させ
ることにより製造された。ＰＡ合成法（ｃ）参照。 方法（ｃ）

【００３４】

【化13】

【００３５】方法（ｄ） これは前記 II(ｉ)(ｄ）におけると同じ経路である。 （IV）ホスファチジルセリン合成 （ｉ）初めにリン酸化工程を行う方法 方法（ａ） グリセロホスホリルセリンは商業的に入手しうる。ＧＰ
Ｓの保護形態（Ｎ−フタロイル誘導体）を調製した。ア
シル基の結合後ヒドラジンと反応させるとＰＳが得られ
る。 方法（ｂ） ＰＳはセリン、ホスホリパーゼＤ（チリメンキャベツ
（Savoy cabbage)の葉から）の存在下にＰＣの酵素触媒
トランスホスファチジル化により低収率で製造された。

【００３６】ストレプトミセスホスホリパーゼＤ調製物
を用いるとほとんど定量的変換が得られる。 方法（ｃ） ２, ４, ６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロ
ライドにより促進されたＰＡと保護セリン誘導体との結
合により60〜95％の収率でＰＳが得られる。 方法（ｄ） グリセロホスファチジルセリンはソルケタールからホス
ホルアミダイト法を用いて製造された。

【００３７】

【化14】

【００３８】（ii）初めにアシル化を行う方法 方法（ａ） １, ２−ジアシルグリセリンから出発し、ＰＯＣl₃ と
反応させ続いて中間体ホスホジクロリデートを保護セリ
ン誘導体基ＰＳと反応させた。カルボキシル基のみが保
護されたセリン誘導体を用いると中間体オキサアザホス
ホランが形成され、これは容易に開裂される。 方法（ｂ） これは前記 II(ｉ)(ｄ）におけると同じ経路である。１，２−ジアシルグリセリンの調製 リン脂質化学（およびトリグリセリド化学）の要件は純
粋な同一酸型および混合酸型１, ２−ジアシルグリセリ
ンの製造、特に大規模製造である。問題は、１, ２−ジ
グリセリドが非常に容易に１, ３−ジグリセリドに異性
化し、最終リン脂質の精製を複雑にすることである。使
用できる保護基は多種類存在する。例えば、１, ２−ジ
アシルグリセリンの小規模製造にはトリチル基が好首尾
に使用された。このものは極度に緩和な条件（珪酸／ホ
ウ酸上でのカラムクロマトグラフィー）の下に、所望せ
ざる副生物トリフェニルメタノールと一緒にジアシルグ
リセリンより先に溶離して除去される。トリチル基のも
う一つの除去法は、トリフェニルメタノールを反応生成
物から除去せねばならないが、三弗化ホウ素エーテラー
トとの反応である。

【００３９】非常に満足できる経路はレブリノイル保護
基を使用するものである。この経路を以下に示す。脱保
護操作にはアシル移動は非常にわずかしか付随しない。
第２の価値ある保護基は第三ブチルジメチルシリル基で
ある。三弗化ホウ素エーテラートを使用するシリル基の
除去はアセテート基の移動の問題を伴うとなく行われ
る。過剰の乾燥トリエチルアミンを用いて反応をクエン
チし、直ちにリン酸化剤を添加し、それにより水性処理
を回避する。

【００４０】

【化15】 大規模水性処理によりアシル移動が起こる時間が与えら
れる。トリメチルシリル基の使用は２および３位でのシ
リルエーテルの混合物を生じるのに対し、この特定のシ
リル基は充分に嵩高いので、１−モノアシルグリセリン
と３位でのみ反応する。

【００４１】合成は下記の経路をとる。 （ｉ）ＲＣＯ₂Ｈとグリセリンとの反応で１−モノアシ
ルグリセリンを生成 （ii）この１−モノアシルグリセリンとＴＢＤＭＳ−Ｃ
l との反応で１−アシル−３−シリルグリセリンを生成 （iii）このものとＲ'ＣＯＣl との反応で１−アシル−
２−アシル'−３−シリルグリセリンを生成 （iv）ＢＦ₃Ｅt₂Ｏを用いるシリル基の除去 （ｖ）過剰のトリエチルアミンを用いる過剰の三弗化ホ
ウ素のクエンチおよび選択されたリン酸化剤との反応混合酸ホスファチジルコリンの合成 方法１ 同一酸ジアシルホスファチジルコリンをホスホリパーゼ
Ａ₂ 酵素を用いて位置選択的加水分解、続いて異なる酸
での再アシル化。 方法２ 予め調製された１, ２−ジアシルグリセリンのリン酸
化。１, ２−ジアシルグリセリンの小規模生産には多種
類の方法が存在する。１, ３−異性体の形成を回避する
ための注意を払う必要がある、というのはこれは最終ホ
スファチジルコリンの精製を複雑にするからである。 方法３ 下記：

【００４２】

【化16】

【００４３】方法４ 所望される脂肪酸のビニルエステルを用いるＧＰＣのリ
パーゼ仲介モノアシル化（専ら１位のみ）が報告されて
いる。この反応のもう一つの生成物はアセトアルデヒド
でありこのものは反応混合物から速やかに蒸発し去る。
このことは、好適な条件下でリパーゼ反応は効果的に不
可逆的であることを意味する。 方法５ 過剰の脂肪酸エステルを用いる同一酸トリグリセリドの
１, ３−アシル基のリパーゼ触媒による交換によるトリ
グリセリドの製造。この方法は同一酸ＰＣおよび所望の
脂肪酸の単一エステルの過剰を用いて出発することによ
る混合酸ホスファチジルコリンの製造に使用できる。

【００４４】

【実施例】１−（z, z, z −6,9,12−オクタデカトリエノイル）−
２−（z −９−オクタデセノイル）−rac −グリセロ−
３−ホスホコリンの合成

【００４５】

【化17】

【００４６】

【化18】

【００４７】（ｉ） ソルケタール（solketal）(3.3
ｇ、25ミリモル）、硫酸水素テトラブチルアンモニウム
（425mg、1.25ミリモル、５モル％)、水酸化ナトリウム
（6.0ｇ、150ミリモル）、４−メトキシベンジルクロラ
イド（4.7g、30ミリモル）、水（６ml）およびトランス
−1,２−ジクロロエタン（20ml）の混合物を、 tlc（10
％アセトン／ヘキサン）で反応が完結していることが示
されるまで（代表的には３〜７時間）還流下にはげしく
攪拌した。完結後反応混合物を冷却しそして水（20ml）
およびメチレンクロライド（20ml）で希釈した。有機層
を分離しそして洗液が中性となるまで水洗（4×30ml）
した。有機層を乾燥（ＭgＳＯ₄）しそして濃縮乾固し
た。フラッシュクロマトグラフィー（８％アセトン／ヘ
キサン）により精製すると完全に保護されたグリセリン
が無色油状物として得られた。

【００４８】（ii） 完全に保護されたグリセリン（上
記参照）(1.0g)、塩酸（１Ｍ、10ml）およびメタノール
（15ml）の混合物を室温で１時間攪拌した（この時点で
tlc分析（25％酢酸エチル／ヘキサン）では出発物質が
完全に消失しそして生成物に相当する新たな１個のスポ
ットの形成が示された）。大部分の溶媒を除去し、ブラ
イン（20ml）を加えそして生成物をメチレンクロライド
中に抽出した（４×30ml)。合一した抽出液を乾燥（Ｍg
ＳＯ₄）しそして濃縮乾固した。高真空下に放置すると
生成物が結晶化した。１例においてはこれをフラッシュ
クロマトグラフィー（３％メタノール／メチレンクロラ
イド）により精製したが、これは一般的に必要なわけで
はない。このモノ保護グリセリンが脂肪酸を結合させる
ための出発点であった。

【００４９】(iii) メチレンクロライド（10ml）中の
ＤＣＣ（1.1g、5.3 ミリモル）およびＤＭＡＰ（0.67
ｇ、5.3 ミリモル）の溶液を、メチレンクロライド（40
ml）中のモノ保護グリセリン（1.0 ｇ、4.7 ミリモル）
およびＧＬＡ（98％、1.24g 、4.4 ミリモル）の溶液に
０℃で窒素の下に加えた。反応物を一夜攪拌し、室温ま
で昇温させた。反応が進行するに伴いジシクロヘキシル
尿素の沈澱が生成した。ヘキサン（60ml）を加えてジシ
クロヘキシル尿素をさらに沈澱させ、反応物を瀘過しそ
して濃縮乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（20
％酢酸エチル／ヘキサン）により注意深く精製するとモ
ノ保護１−モノアシルグリセリンが無色油状物として得
られた。tlc によれば、このものはいずれのモノ保護２
−モノアシルグリセリン異性体によっても汚染されてい
ないことが明らかであった。

【００５０】（iv） メチレンクロライド（10ml）中の
ＤＣＣ（0.72g 、3.45ミリモル）およびＤＭＡＰ（0.36
g 、2.92ミリモル）の溶液を、メチレンクロライド（40
ml）中のモノ保護１−モノアシルグリセリン（1.25 g、
2.05ミリモル）およびＯＡ（99％、0.83g 、2.92ミリモ
ル）の溶液に室温で窒素の下加えた。反応物を一夜攪拌
した。反応が進行するに伴いジシクロヘキシル尿素の沈
澱が生成した。ヘキサン（60ml）を添加してさらにジシ
クロヘキシル尿素を沈澱させ、反応物を瀘過しそして濃
縮乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（８％酢酸
エチル／ヘキサン）により精製するとモノ保護ジアシル
グリセリンが無色油状物として得られた。

【００５１】（ｖ） メチレンクロライド（20ml）中の
モノ保護ジアシルグリセリン（800mg、1.1 ミリモル）
の溶液に注射器によりブロモジメチルボラン（220 μl
、2.2 ミリモル）を−78℃（ドライアイス／アセトン
により外部から冷却）で窒素の下加えた。−78℃で３分
後ジエチルエーテル（200ml）の添加により反応をクエ
ンチした。tlc 分析（４％アセトン／クロロホルム）で
は反応が実質的に完結したことが示された。この混合物
を水（５×100ml)およびブライン（100ml)で洗い、乾燥
（ＭgＳＯ₄)しそして濃縮乾固した。この生成物はそれ
以上何ら精製することなく直接次の工程に使用した。

【００５２】（vi） ジアシルグリセリン（1.1 ミリモ
ル) およびトリエチルアミン(210μ、1.5 ミリモル) の
溶液を０℃に冷却した。これに、トルエン（5ml)中の２
−クロロ−1,3,2 −ジオキサホスホラン−２−オキサイ
ド(180mg、1.25ミリモル) の溶液を加えた。６時間後さ
らにクロロホスヒデート(150mg) を加えそしてこの混合
物を一夜攪拌し、室温まで昇温させた。 tlc分析（20％
酢酸エチル／トルエン）では出発物質がほとんど完全に
消失したことおよび新規化合物が生成したことが示され
た。溶媒を減圧下に除去し、真空下に45℃で数時間乾燥
した後、生成物を次の反応段階に直接使用した。

【００５３】（vii) 無水アセトニトリル中のトリメチ
ルアミンの溶液（100ml中ガス16g)を調製した。前段階
からの粗生成物をこの溶液（４ml）中に溶解しそして封
管に移した。この管を窒素でパージしそして65℃で48時
間加熱した。反応物を冷却した。この混合物は二層であ
った。

【００５４】下層はホスファチジルコリンでありそして
上層は溶媒であった。この混合物をクロロホルム中に溶
解させ、丸底フラスコに移しそして濃縮乾固した。フラ
ッシュクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノー
ル：水 65:25：４）により精製すると、純粋な混合酸
ホスファチジルコリンが黄色ワックス様固形物として得
られた。tlc 分析（クロロホルム：メタノール：水 6
5:25：４）では唯１個のクリーンなスポットが示され
た。このリン脂質のサンプルをトランスメチル化しそし
て脂肪酸メチルエステルをｇ．ｃ．により測定した。

【００５５】1,2 −ジ−（z,z,z −6,9,12−オクタデカ
トリエノイル）−gn−グリセリン−３−ホスホコリンの
合成 メチレンクロライド（20ml）中の結晶性Ｌ−α−グリセ
ロホスホリルコリン−カドミウムクロライド複合体（Si
gma 社から）（490mg 、1.1 ミリモル）（エタノール
（２×30ml）およびトルエン（４×30ml）からの蒸発に
より乾燥）、ＧＬＡ酸クロライド（890mg 、３ミリモ
ル）および４−N,N −ジメチルアミノピリジン（370mg
、３ミリモル）の混合物を窒素の下室温で一夜攪拌し
た。当初、反応混合物は稠密な縣濁液であったが、一夜
経過後はほとんど透明な溶液となった。２つの系（１．
クロロホルム／メタロール／水 65:25:４； ２．クロ
ロホルム／メタノール／水酸化アンモニウム 65:30:
５）でのtlc 分析では、２個の新たな化合物の存在が示
された。

【００５６】主要成分が所望の生成物と一致する Rf 値
を有しておりそしてマイナー成分は対応するリゾホスホ
リルコリンであると考えられた。この反応混合物を濃縮
乾固しそしてメタノール／クロロホルム／水 ５：４：
１（20ml）中に縣濁した。稠密な白色沈殿が生成した。
この混合物を混合樹脂イオン交換カラム（Dowex 50×４
−100 （Ｈ⁺ 型）およびDowex １×２−100 （ＨＯ
^- 型）のそれぞれ約25mlずつ）に適用した。（これはＤ
ＭＡＰおよびカドミウムクロライドを除去するためであ
る。）リン脂質をメタノール／クロロホルム／水 ５：
４：１（200ml)で溶離しそして溶離液を濃縮乾固した。
水の完全な除去を助けるためにエタノールおよびトルエ
ンを加えた。メチレンクロライド中の粗製混合物の溶液
を、予めメチレンクロライド中に充填したシリカゲル
（20ml) のカラムに適用した。ＧＬＡがメチレンクロラ
イド（250ml)で溶離され、次に生成物がメタノール／ク
ロロホルム／水 ５：４：１で溶出した。純粋な生成物
を含有するフラクションを集め、濃縮した。残留物をメ
チレンクロライド中に溶解させ、乾燥（硫酸マグネシウ
ム）し、濃縮しそして終りに高真空下に乾燥した。生成
物はワックス様固形物でこのものは tlc分析では均一で
あった。この段階で何らそれ以上の分析は行なわれなか
った。収率 310mg（86％）。

【００５７】同様の操作をＧＬＡ酸クロライド以外のＧ
ＬＡ酸および無水物を用いて実施した。それによりずっ
と高い収率（48時間の反応で72％）が得られた。しかし
ながらこのサンプルは検査にまわされなかった。

【００５８】

【発明の効果】脂肪酸をとり込むことのできる部位を２
個有するＰ−セリン、Ｐ−コリン、Ｐ−エタノールアミ
ンまたはＰ−イノシトールのようなリン脂質により、２
種の異なる不飽和脂肪酸を放出するための適切な単一分
子を提供できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ６１Ｋ 37/22 8314−4Ｃ (72)発明者 デイビッド・フレデリック・ホロビン 英国、イングランド、サリー ジー・ユー １ １ビー・エイ、ギルドホード、ウッド ブリッジ・メドウズ、エフアモル・ハウス （番地なし）、スコシア・ファーマシュー ティカルズ・リミテッド内 (72)発明者 オースチン・マクモーディ 英国、イングランド、カーライル・シー・ エイ３ オー・エッチ・エイ、キングスタ ウン・インダストリアル・エステート、キ ングスタウン・ブロードウェイ、リサー チ・アンド・デベロップメント・センター （番地なし）スコシア・ファーマシューテ ィカルズ・リミテッド内 (72)発明者 メハール・シン・マンク 英国、イングランド、カーライル・シー・ エイ３ オー・エッチ・エイ、キングスタ ウン・インダストリアル・エステート、キ ングスタウン・ブロードウェイ、リサー チ・アンド・デベロップメント・センター （番地なし）スコシア・ファーマシューテ ィカルズ・リミテッド内

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 １２種のｎ−６およびｎ−３必須脂肪
   酸、オレイン酸、パリナリン酸およびコロンビニン酸か
   ら選択された２種の異なる不飽和脂肪酸を包含するリン
   脂質。
2. 【請求項２】 前記脂肪酸がＧＬＡ、ＤＧＬＡ、ＡＡ、
   ＥＰＡおよびＤＨＡから選択される請求項１記載のリン
   脂質。
3. 【請求項３】 前記脂肪酸が、ＧＬＡまたはＤＧＬＡと
   ＡＡ、ＥＰＡまたはＤＨＡ；ＡＡとＥＰＡまたはＤＨ
   Ａ；およびＥＰＡとＤＨＡから選択された組合わせであ
   る請求項１記載のリン脂質。
4. 【請求項４】 セリン、コリン、エタノールアミンまた
   はイノシトールを包含する請求項１、２または３記載の
   リン脂質。
5. 【請求項５】 治療、栄養または化粧品用途のための前
   出の請求項のいずれか１項記載のリン脂質。
6. 【請求項６】 前記特定されたリン脂質が、存在する総
   リン脂質の少なくとも20％、好ましくは40％以上、非常
   に好ましくは70％以上、そして理想的には90％以上を構
   成する組成物の形態である、請求項５記載のリン脂質。
7. 【請求項７】 前記特定されたリン脂質を１日当たり１
   mg〜100g、好ましくはり100mg 〜20 g、そして非常に好
   ましくは500mg 〜４ gを投与するのに好適な医薬または
   食品組成物の形態である、請求項５記載のリン脂質。
8. 【請求項８】 前記特定されたリン脂質0.01〜60重量
   ％、好ましくは0.2 〜30重量％そして非常に好ましくは
   １〜20重量％を包含する医薬、食品または化粧品組成物
   の形態である、請求項５記載のリン脂質。