JPH01311087A

JPH01311087A - ホスファチジルコリンの製造方法

Info

Publication number: JPH01311087A
Application number: JP14155488A
Authority: JP
Inventors: Hidehiko Hibino; 日比野　英彦; Hiroshi Iwasaki; 博司岩崎; Osamu Nakachi; 仲地　理
Original assignee: Nippon Oil and Fats Co Ltd
Current assignee: NOF Corp
Priority date: 1988-06-10
Filing date: 1988-06-10
Publication date: 1989-12-15

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、グリセロホスホコリンから直接ホスファチジ
ルコリンを製造する方法に関するものである。

（従来の技術）ホスファチジルコリンは薬物担当のリポソーム、脂肪乳
剤の乳化剤および化粧品、農薬、医薬品の原料として有
用である。一方、グリセロホスホコリンはホスファチジ
ルコリンから脂肪酸基を脱離したものであり、特定アシ
ル基を有するホスファチジルコリンの出発原料として知
られている。

従来、グリセロホスホコリンからホスファチジルコリン
を製造する方法としては、次の方法が知られている。

■　グリセロホスホコリン塩化カドミウム錯体を、無水
ピリジンおよび無水クロロボルムの存在下に酸無水物と
反応させる方法ＣＥ、　Ｂａｅｒ、　Ｄ。

Ｂｕｃｈｎｅａ、　Ｃａｎ、　Ｊ、旧ｏｃｈｅｍ、　Ｂ
ｉｏｐｈｙ、、　　３７　、９５３（１９５９）　）。

■　グリセロホスホコリンを、金属酸化物、金属塩およ
び無機塩等に担持させ、酸無水物または酸クロライドと
反応させる方法（特開昭６０−２５５７９８号）。

■　グリセロホスホコリンと酸無水物を塩Ｗ性エステル
化触媒の存在下に、ジクロロメタン等の低極性溶媒中で
反応させる方法（特開昭６１−８７６８９号）。

（発明が解決しようとする課題）前記の各製造方法には次のような問題点がある。

まず、■の方法は最終製品中にカドミウムがｐｐｍ単位
で残留するため、リポソーム、乳剤用乳化剤および医薬
品原料など生体内に直接投与されるような用途に使用出
来ない。■の方法は反応時に多量の担持物を必要とし、
反応時間に二昼夜を要しホスファチジルコリン以外の反
応生成物が多い。

■の方法は脂肪酸無水物の反応収率およびグリセロホス
ホコリンと脂肪酸無水物との反応収率がホスファチジル
コリンの収量に大きく影響し、その収量が低いという問
題点がある。

本発明はこれらの問題点を解決するためのもので、出来
るだけ単純な反応工程で、しかも副生成物を生じさせる
ことなく、天然型のホスファチジルコリンを短い反応時
間で高収率で製造できるホスファチジルコリンの製造方
法を提供することを目的とする。

（課題を解決するだめの手段）本発明は、ヘキサメチルリン酸トリアミドの存在下に、
グリセロホスホコリン１モル当たりアシルクロライド１
．６〜６モルを用いて反応することを特１攻とするホス
ファチジルコリンの製造方法である。好ましくは、本発
明は反応生成物をカラムクロマトグラフィーで精製する
。

本発明は、例えばプロトンアクセプターと反応溶媒を兼
ねるヘキサメチルリン酸トリアミド１０〜４０モル当量
の存在下、乾燥グリセロホスホコリン１モル当量を懸濁
させ、１．６〜６モル当量のアシルクロライドを加え、
反応混合物を４０〜１００℃で０．５〜５時間反応させ
、その後反応混合物をカラムクロマトグラフィー精製し
て、純粋なホスファチジルコリンを高収率で得ることが
できる。

本発明において、天然型のホスファチジルコリンを得る
ために用いられるグリセロホスホコリンは、天然ホスフ
ァチジルコリンから脱アシルして得られる。脱アシルは
、テトラブチルアンモニウムヒドロキシド等の４級アル
キルアンモニウム水酸化物を使用してアルコーリシスし
て行われるが、低濃度の水酸化物ナトリウム等のアルカ
リで穏やかに加水分解してもよい。得られた脱アシル化
物は立体特異性番号−３−グリセロホスホコリンであり
、非常に強い吸湿性を示すので、調製後、高度の減圧下
のデシケータ−中で五酸化リンと水酸化カリウムで除湿
し、空気遮断下で密閉ガラス容器に移して乾燥した冷所
に保存する。

本発明のホスファチジルコリンの原料として用いられる
アシルクロライドは、脂肪酸や芳香族カルボン酸などの
一塩基性酸の誘導体等を用いることができる。特に原料
の脂肪酸としては、炭素数ｌＯ〜２２０脂肪酸が利用で
き、［］的とするホスファチジルコリンの構造に応して
直鎖型、分類型、飽和型、不飽和型、重合型および高度
不飽和型などを任意に選ぶことが出来る。カルボン酸の
クロライド化はハロゲン化リン、塩化チオニル、ホスゲ
ン、オキシ塩化リン、シュウ酸塩化物、塩化イオウ、四
塩化炭素、四塩化ケイ素などとの反応によって得られる
が脂肪族や芳香族の部位に異性化を生じさせない条件を
選択する事が好ましい。特に生理活性の高い脂肪酸であ
る不飽和結合を有するオレイン酸、リノール酸、リルン
酸、２．４−オクタデカジエン酸、アラキドン酸、エイ
コサペンクエン酸、ドコサヘキサエン酸などは、クロラ
イド化により二重結合が共役系に異性化しない条件を選
択する事が好ましい。

また、ホスファチジルコリン合成には、従来、必ずエス
テル化触媒と反応に用いる溶媒が使われて来たが、本発
明においては水素イオン受容能（プロトンアクセプター
）を有するヘキサメチルリン酸トリアミドを触媒として
用い、さらにこのヘキサメチルリン酸トリアミドは反応
用の溶媒としても適している。ヘキサメチルリン酸ｉ・
リアミドは分子量１７９．２で、比重ｄ＝１．０３であ
るが、沸点が２３０〜２３２℃（７４０ｍ■）Ｉｇ）で
非常に反応生成物から留去し難い溶媒と考えられていた
が、本発明では高真空減圧処理やカラムクロマトグラフ
ィーにより容易に除去することが出来る。さらに本発明
者らは、乾燥グリセロホスホコリンをヘキサメチルリン
酸トリアミドに懸濁させ、この状態でアシルクロライド
を滴下すると効率よくホスファチジルコリンが合成され
、その反応生成物もヘキサメチルリン酸トリアミドにン
容解していることを確認した。

ヘキサメチルリン酸トリアミドは高極性のもので、使用
時にはモレキュラシーブを加えて脱水したものを使うこ
とが好ましい。この触媒と溶媒を兼ねるヘキサメチルリ
ン酸トリアミドは吸湿しないようにグリセロホスホコリ
ン１モルに対して１０〜４０モル（好ましくは、１２〜
２５モル）加えるのが反応収率から好ましい。反応混合
物からのへキサメチルリン酸トリアミドの除去は高度真
空蒸留によって留去できるが、ヘキサンやクロロホルム
を加えてからケイ酸カラムによりクロマトグラフィー精
製することが特に好ましい。特にヘキサメチルリン酸ト
リアミドはクロロホルム／メタノール比の９５１５から
９０／１０でカラムから溶離する。

ホスファチジルコリンの製造は、グリセロホスホコリン
１モルに対して、アシルクロライド１．６〜６モル、好
ましくは３．５〜５．０モルを前記の触媒兼溶媒のへキ
サメチルリン酸トリアミド中で反応させる。上記の範囲
外ではグリセロホスホコリンとアシルクロライドの収支
が悪くなり工業上不利である。反応温度は１０〜１００
℃、好ましくは４０〜６０℃、反応時間は０．５〜１２
時間、好ましくは１〜３時間が適当である。１０℃以下
では反応に長時間を要し、１００℃を越えると副反応が
生して好ましくない。

−Ｆ記の反応では、理論的には１モルのグリセロホスホ
コリンの水酸基に対して２モルのアシルクロライドをプ
ロトンアクセプターと反応溶媒を兼ねるヘキサメチルリ
ン酸トリアミド中で反応させることにより、ホスファチ
ジルコリンを高収率で製造することが出来る。この場合
、アシル部位の異性化を除けば、上記の範囲の比較的高
温で比較的長時間反応を行うことにより、ホスファチジ
ルコリンの収率は高くなる。

反応終了後は溶媒抽出、再結晶、各種クロマトグラフィ
ーなどの分離精製手段によっても、目的物を単離できる
が、本発明においてはアセトン処理による再結晶やクロ
ロホルム／メタノール系グラジェントのケイ酸カラムク
ロマトグラフィーが収率および工程の簡便さから特に好
ましい。ケイ酸カラムにおいて反応混合物中の未反応の
グリセロホスホコリンはカラム上に残り、クロロホルム
が９０〜９５％でヘキサメチルリン酸トリアミドが溶離
し、その後、メタノールの比率の増加に従いホスファチ
ジルコリン、さらにはりゾホスファチジルコリンが溶離
する。

以下、グリセロホスホコリンとアシルクロライドとを使
用する場合のホスファチジルコリンの製造方法について
説明する。反応溶媒と反応触媒を兼ねる充分に脱水した
ヘキサメチルリン酸１リアミドに、グリセロホスホコリ
ンとアシルクロライドを添加し、４０〜６０℃で１〜３
時間程度攪拌すると、粗反応物が得られる。この時の反
応収率は８０％以上である。均一状の粗反応物の精製に
は、充分に脱水したアセトンを添加して冷蔵庫に放置す
る。放置後、遠心分離で生成し、た沈゛澱物を分離し）
８媒を減圧留去する。この工程を繰り返すことにより反
応生成物は完全に精製できる。目的物を多量に分取する
には、中圧カラムにシリカゲルを充填し、前述のホスフ
ァチジルコリン分離用の溶離溶媒系で溶出すると、目的
物のホスファチジルコリンを得ることができる。中圧カ
ラムによる収率は９０〜９５％程度である。

反応の進行度はＴＬＣを用いグリセロホスホコリンの消
失とホスファチジルコリンの増加をリン陽性で観察した
り、未反応アシルクロライドを（）Ｖスペクトル等で確
認できる。単離物はＴＬＣや１−（Ｐ　Ｌ　Ｃで単一で
あり、ファースト・アトム・ボンバード・イオン化マス
クロマトグラフィー（ＦＡＢ−ＭＳ）で目的物の分子イ
オンを確認できる。

こうして得られたホスファチジルコリンは重金属を含ま
ないので食品、化粧品、医薬品等の用途に広く利用する
ことができる。また脂肪酸の種類を選ぶことによりホス
ファチジルコリンの用途を広げることができる。

（発明の効果）本発明によれば、グリセロホスホコリンをアシルクロラ
イドとヘキサメチルリン酸トリ了ミ（′中で反応させる
ようにしたので、グリセロホスホコリンを有害な金属塩
錯体に担持させる必要はなく、短時間で、温和な反応条
件で反応させることができる。これによって、有害な重
金属を含まないホスファチジルコリンを高収率で製造す
ることができ、脂肪族や芳香族の部位の異性化やリン酸
基の転移がなく、反応後の精製も容易である。

（実施例）以下、実施例に浩づき本発明を具体的に説明する。

尚、各例中、％は重ａ　ｕ　ｒｔｉである。

参考例グリセロホスホコリンの製造市販大豆ホスファチジルコリン（純度９０％以上）３０
ｇを５００　ｍｅの無水エチルエーテルに溶解させ、撹
拌しつつテトラブチルアンモニラｌ、ヒドロキシド１０
％メタノール溶液８０ｍ１ｌを加えて、１０分間室温で
反応させた。室温にて２時間放置後、上澄液をデカンテ
ーションして回収し、さらに、底に沈澱したグリセロホ
スホコリンを無水エチルエーテル１００　ｍｌで洗った
後、エタノール１２５　ｍｌを加えて、沸騰させた。こ
れに、ハイフロ・スーパー・セル（Ｉｌｙｆｌｏ−３ｕ
ｐｅｒ　Ｃｅ１ｌ和光純薬工業製）Ｉｇを加えて熱いう
ちに濾過した。濾液を冷却後、無水エチルエーテル２５
０　ｍｌを加えると沈澱が生じた。上澄液をデカンテー
ションによって除き、沈澱を凍結乾燥してグリセロホス
ホコリンを得た。このときの収量は６．１ｇであった。

このものの分析値は次の通りである。

■　ＴＬＣ１移動層：メタノール／水（１／１）Ｒｆ値
：０６４ドラーゲンドルフ試薬発色ニオレンジ色ワンスポットリン試薬発色：青色　ワンスポット ■　ＮＭＲ（Ｄ２０）３、ｌｐｐｍ　（ｓ、　Ｎ”（Ｃｌｈ）３）３．２〜４
．３ｐｐｍ　（ｍ、グリセリン−１）およびコリン−Ｈ
） ■　窒素含量（Ｍｏｌｙｂｄｏｖａｎａｄｏ　ｐｈｏｓ
ｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅ
ｔｒｙ）　：　１１．９％（理論値１２．３％）実施例１２０Ｉｎｌのナス型フラスコに乾燥グリセロホスホコリ
ン５００■（１，９５ミリモル）を入れ、乾燥へキナメ
チルリン酸トリアミド５　ｍｌ　（２８，７４ミリモル
、＋４．７４モル当量）をカロえて！Ｌ％　ｉ−０させ
た。この−艶ン蜀液をマグネチソクスクーラーで３０分
間攪拌した後に、バルミチン酸クロライド２．５ｇ　（
９，１ミリモル、４．７モル当世）を加え、油）容土、
５０°Ｃで９０分間撹拌した。反応終了後、この混合物
を乾燥アセトン１５０　ｍｌ中に注ぎ、生成した沈澱物
を遠心分離により単離した。

この沈澱物をＴＬＣ（展開溶媒：クロ「１ホルム／メタ
ノール／水　６５／２５／　４、リン試薬発色）で観察
した結果、原点のグリセロホスホコリンスポットは非常
に弱く、Ｒｆ値０．２のりゾホスファチジルコリンスポ
ットも非常に小さ（、Ｒｒ値０．３の１−バルミトイル
−２−クロローグリセロホスホコリンスボノ［は認られ
ず、Ｒｒ値０．４のホスファチジルコリンスポットは非
常に濃く大きく、溶媒先端のへキサメチルリン酸トリア
ミドスポットか弱く大きく認められた。

この沈澱物をクロロホルムに溶解し、不溶物を濾過して
除いた後に、溶媒を減圧留去する操作を５回繰り返した
。得られた白色の結晶は１．３９ｇの１．２−ジパルミ
トイルホスファチジルコリン（収率９７．５％）であっ
た。このものの分析値は次の通りである。

■　ＦＡＢ−ＭＳ　：　　ｍ／ｅ　７３４　（Ｍ＋Ｈ）
”■　ＴＬＣ：沈殿物観察と同じ。

Ｒｆ値：Ｏ，３ｇに明瞭なスポット、その他は非常にか
すかであった。

■　ＮＭＲ（ＣＤＣＩ：ｌ）：０．９と１．３ｐｐｍ　Ｃ１ｈ−Ｃ）１２２．３ｐｐｍ
　　　　Ｃ１ｌ□−ＣＯｚ４．２ｐｐａ＋　　　　ＣＨ
２−０−ＣＯ３，４ｐｐｍ　　　　Ｎ−（ＣＨ３）　：
１５．４ｐｐｍ　　　　ＣＨ−Ｃｌｌ、Ｃｌ１＝Ｃ）ｌ
実施例２１００　ｍｌのナス型フラスコに、乾燥グリセロホスホ
コリン１５００ｍｇ　（５，８５ミリモル）を入れ、ヘ
キサメチルリン酸トリアミド１５ｍ１　（８６，２ミリ
モル、１４．７４モル当量）を加えて懸）罰させた。こ
の（懸濁液をマグ不チソクスクーラーで３０分間撹拌し
た後に、リルオイルクロライド６．９ｇ　（２３ミリモ
ル、３．９モル当量）を加え、油浴上、６０℃で３時間
攪拌した。反応終了後、反応混合物を冷却し、この混合
物を１５０　ｍｌの氷水中に注ぎ、ヘキサン抽出した。

ヘキサン層を水洗し、硫酸ナトリウムで乾燥させた後に
溶媒を減圧留去して乾燥させた。残留物をＴＬＣで観察
した結果は実施例１と同様であった。この残留物をシリ
カゲルを充填した２φ×５０ｃｍの中圧カラムにのせク
ロロホルム／メタノール系グラジェントで溶離させた。

得られた黄色流動物は３．３５　ｇの１．２−シリルオ
イルホスファチジルコリン（収率７１．１％）であった
。このものの分析値は次のｉｌりである。

■　ＦＡＢ−ＭＳ　：　　ｍ／ｅ　７８２　［Ｍ＋Ｈ）
”■　ＴＬＣ：実施例１と同じ。

Ｒｆ値：　０．４０、その他は非常にかすかであった。

■　ＮＭＲ：　　（ＣＤＣｌ２）０．９　と１．３ｐｐｍ　ＣＩｌ、−Ｃｌｌ□２．３１
）ｌ）Ｉｌｌ　　　　ＣＨ２−ＣＯ２４，２ｐｐｍ　　
　　ＣＨ，−０−ＣＯ３，４ｐｐｍ　　　　Ｎ−（Ｃｌ
ｈ）　３５．４ｐｐｍ　　　　Ｃ１１−ＣＨ，、Ｃｌ１
＝ＣＨ実施例３１００　ｍｌのナス型フラスコに、乾燥グリセロホスホ
コリン１５００ｍｇ　（５，８５ミリモル）を入れ、ヘ
キサメチルリン酸トリアミド１５ｄ　（８６，２ミリモ
ル、１４．７４モル当量）を力■えて！懸濁させた。こ
の懸）η液をマグネチソクスターラーで３０分間攪拌し
た後に、エイコサペンタエノイルクロライド７．３７ｇ
（２３ミリモル、３．９モル当量）を加え、窒素気流下
、油浴上、４０℃で３時間撹拌した。反応終了後、反応
混合物を冷却し、この混合物を１５０　Ｊの氷水中に注
ぎ、ヘキサン抽出した。

ヘキサン層を水洗し、硫酸ナトリウムで乾燥させた後に
溶媒を減圧留去して乾燥させた。残留物をＴＬＣで観察
した結果は実施例１と同様であった。この残留物をシリ
カゲルを充填した２φＸ５０ｃｍの中圧カラムにのせク
ロロホルム／メタノール系グラジェントで溶離させた。

得られた黄色流動物は３．５５ｇの１．２−ジェイコサ
ペンタエノイルホスファチジルコリン（収率７３．７％
）であった。このものの分析値は次の通りである。

■　ＦＡＢ−ＭＳ　：　　ｍ／ｅ　８２Ｇ　（Ｍ＋Ｈ）
’■　ＴＬＣ：実施例１と同じ。

Ｒｒ値：　０．４０゜その他は非常にかすかであった。

■　ＮＭＲ：　　（ＣＤＣ１，）

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ヘキサメチルリン酸トリアミドの存在下にグリセ
ロホスホコリン１モル当たりアシルクロライド１．６〜
６モルを用いて反応することを特徴とするホスファチジ
ルコリンの製造方法。
（２）特許請求の範囲 I において、反応生成物をカラ
ムクロマトグラフィーで精製することを特徴とするホス
ファチジルコリンの製造方法。