JPH0472397A

JPH0472397A - 自動食器洗浄機用洗浄剤組成物

Info

Publication number: JPH0472397A
Application number: JP18358290A
Authority: JP
Inventors: Taeko Sone; 曽▲禰▼　妙子; Masaki Tosaka; 登坂　正樹; Noriyuki Morii; 紀行森井
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 1990-07-11
Filing date: 1990-07-11
Publication date: 1992-03-06
Anticipated expiration: 2009-12-07
Also published as: JPH0699714B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、澱粉質汚れのみならず、澱粉質の汚れと油脂
汚れ、蛋白質汚れ等が混じり合った複合汚れに対する洗
浄力の優れた自動食器洗浄機用洗浄剤組成物に関するも
のである。

〔従来の技術及びその課頚〕

現在家庭用に普及している自動食器洗浄機は、加温した
洗浄剤水溶液を回転式スプレーアームノズルにより食器
に噴射して洗浄し、その後連続して、すすぎ工程、乾燥
工程に入るタイプのものである。この様な洗浄機による
汚れ落ちは、機械力、洗浄温度、洗浄時間により大きく
左右されるが、これらの要素は洗浄機の特性として各洗
浄機に固有のものである。この為、自動食器洗浄機用洗
剤は、一定の機械力、洗浄温度、洗浄時間の下で種々の
汚れに有効に作用し、高い洗浄力を発揮できるものでな
ければならない。

従来の自動食器洗浄機用洗剤は、炭酸塩、珪酸塩、はう
酸塩等のアルカリ剤を主成分とし、これに使用水中の硬
度成分によるスケールの食器或いは洗浄機内への付着を
防止する目的でトリポＩＪ　ＩＪン酸塩、オルトリン酸
塩、ピロリン酸塩、エチレンジアミン匹酢酸塩、ニトリ
ロ三酢酸塩等のキレート剤が配合されている。また、界
面活性剤は、洗浄時に発泡し、洗浄機の運転に支障を来
すことのない様に、低泡性の非イオン性界面活性剤が少
量配合されているか、もしくは全く含まないものが多く
、洗浄剤水溶液の液性は強アルカリ性のものが多い。こ
の様な洗浄剤は、油汚れに対する洗浄力は強いが、澱粉
質の汚れや、澱粉質の汚れと蛋白質汚れ、油汚れ等が混
じり合った複合汚れに対する洗浄力は充分とは言えず、
また食器の光沢を失わしめると言う欠点があった。

一方、澱粉質の汚れ、例えば、日本人の主食である米飯
のこびりつき汚れ等に対しては、澱粉加水分解酵素が有
効であるとされ、−船釣には澱粉分子のα−１，４−グ
リコシド結合に作用するα−アミラーゼが使用されてい
る。しかし、食器類に強固に付着した澱粉質の汚れを短
時間で落とすことは、自動食器洗浄機用洗剤にα−アミ
ラーゼを配合し−でも未だ充分とは言えなかった。これ
に対し、α−１，６−グリコシド結合に作用する澱粉加
水分解酵素としてプルラナーゼ、イソプルラナーゼ、イ
ソアミラーゼがあり、これらは一般に澱粉枝切り酵素と
呼ばれている。（特開平２〜１３２１９３号、及び特開
平２−１３２１９４号には、澱粉汚れに対し、作用部位
の異なる２種の澱粉加水分解酵素、即ちα−アミラーゼ
と澱粉枝切り酵素を併用すれば高い洗浄性能が得られる
ことが開示されている。しかしながら、α−アミラーゼ
と澱粉枝切り酵素を併用しても、澱粉質の汚れと蛋白質
汚れ、油汚れ等が複雑に混じり合った複合汚れに対して
は、まだまだ満足できる洗浄レベルには達し得なかった
。

従って、澱粉質汚れ、油脂汚れ、蛋白質汚れ等が複雑に
混じり合った複合汚れに対して有効に作用し、高い洗浄
力を発揮できる自動食器洗浄機用洗浄剤組成物が望まれ
ていた。

〔課題を解決するための手段〕

かかる実情において本発明者らは、鋭意研究を行った結
果、特定の非イオン性界面活性剤及びカルシウム捕捉キ
レート剤に、α−アミラ〜ゼ活性を有するアルカリ又は
アルカリ耐性プルラナーゼ及びリパーゼを配合し、特定
のＰＨ範囲を有する洗浄剤組成物が、上記複合汚れに対
して有効に作用し、高い洗浄力を発揮することを見出し
本発明を完成した。

すなわち本発明は、次の成分（ａ）〜（ｄ）（ａ）　　
非イオン性界面活性剤　　　　１〜３０重量％（ｂ）　
　カルシウムイオン捕捉キレート剤１〜５０重量％（Ｃ）　　リパーゼ（ｄ）　　α−アミラーゼ活性を有するアルカ１Ｊ又は
アルカリ耐性プルラナーゼを含有し、０．２重量％水溶液のｐＨが７〜１ｏである
自動食器洗浄機用洗浄剤組成物を提供するものである。

本発明に用いる（ａ）成分の非イオン性界面活性剤とし
ては、次の一般式（Ｔ）Ｒ’Ｏ（Ｃ，ＩＩ、０）、（Ｃ，Ｈ，Ｏ）、、ＩＩ　　
　（Ｉ）（式中、Ｒ’は炭素数８〜２ｏのアルキルもし
くはアルケニル基であり、ｍは平均付加モル数で５〜１
５の数を示し、ｎは平均付加モル数で３〜１５の数を示
す）で表わされる高級アルコールのエチレンオキシドとプロ
ピレンオキシド付加体、分子量１．　ｏＱｏ〜１０、０
００のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロッ
ク共重合体、１．０００〜１０．０００の分子量を有す
るエチレンジアミンのポリオキシエチレンポリオキシブ
ロビレン付加体等が好ましい例として挙げられる。これ
らの非イオン性界面活性剤は一種でも二種以上を混合し
て用いてもよい。本発明組成物中への非イオン性界面活
性剤（ａ）の配合量は１〜３０重量％である。１重量％
未満では、油汚れ及びリパーゼによる分解物（主に脂肪
酸）を洗浄液中に分散させる作用が不充分であり、３０
重量％を超えると発泡が多くなりすぎ、洗浄機の運転に
支障を来すおそれがあり、いずれも好ましくない。

特に好ましい配合量は２〜ＩＯ重量％である。

本発明に用いられるわ）成分のカルシウムイオン捕捉キ
レート剤としては例えばクエン酸塩、リンゴ酸塩、酒石
酸塩等のヒドロキシ多価カルボン酸、ポリアクリル酸塩
、アクリル酸と無水マレイン酸との共重合体の塩、無水
マレイン酸とメチルビニルエーテルとの共重合体の塩、
無水７レイン酸とオレフィンとの共重合体の塩、アクリ
ル酸さメタクリル酸との共重合体の塩等の高分子電解質
、無水マレイン酸と酒石酸の縮合物、七オライド等が挙
げられる。

ら）成分のキレート剤は、そのキレート効果を有効に発
揮させるため本発明組成物中に１〜５０重量％配合され
る。１重量％未満では牛レート効果が不充分であり、５
０重量％を超えるとリパーゼ活性を阻害するため好まし
くない。

本発明の（Ｃ）成分であるリパーゼは、市販のもの、例
えば、リパーゼ＾Ｐ１リパーゼトＡＰ、　！ＪパーゼＰ
１リパーゼＦ−ＡＰ、リパーゼＤ１リパーゼＡＹ、リパ
ーゼＬ、ＵパーゼＧ、ＩＪバーゼＲ，ＩＪバーゼＣε、
リパーゼＣＢＳ　、リパーゼＧＣ，リパーゼＮ、（以上
、天野製薬＠）　１．ＬＩＰＡＳＥ　（東洋醸造＠）、
リパーゼＢ（サラポロビール側）、オリバーゼ、サイケ
ン１００　、Ｌｉｐａｓｅ　Ｐ　（以上、長瀬産業鱒）
　、ＩＪ　バー　セ（生化学工業■）、タリパーゼ（田
辺製薬＠Ｊ）、リパーゼ叶、リパーゼＭＹ　（以上、名
糖産業＠）、Ｐａ１ａｔａｓｅ　Ａ、　Ｐａ１ａｔａｓ
ｅ　ＭＸＬＩＰ［］ＬＡＳＥ　（以上、ノボ・インダス
トリー・ジャパン）等を用いることができる。（Ｃ）成
分は本発明組成物１ｇ中にリパーゼ活性として１〜５０
０単位、特に好ましくは５０〜５００単位含有せしめる
のが好ましい。１単位未満では洗浄力が不充分であり、
５００単位を超えると効果に比して経済的に不利となる
為好ましくない。

なお、リパーゼの活性は実施例に示す方法によって測定
されるものである。

本発明に用いられる（ｄ）成分のアルカリ又はアルカリ
耐性プルラナーゼの例としては、例えば次に示す好アル
カリ微生物の一種であるバチルス　エスピー（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ　ｓｌｌ、）ＫＳＭ−ＡＰＬ３７Ｂ　（ＦＥＲ
Ｍ　Ｐ１０８８６）が産生ずるアルカリプルラナーゼが
挙げられる。

この微生物は、次のような菌学的性質を示す。

尚、以下において菌株の分類に用いた培地は次の培地１
〜２１０２１種類であり、これらは何れも別滅菌した炭
酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯａ）を０．５重量％（以下、
隼に％という）含有する。

使用した培地の組成（表示は％）：培地１．　ニュートリエンドブロス、０．８；寒天末（
和光純薬製）、１．５培地２．　　ニュートリエンドブロス、０．８培地３．
　ニュートリエンドブロス、Ｏ，ａ；ゼラチン、２０．
０；寒天末（和光純薬製）、１．５培地４、　バタトリ
トマスミルク、１０．５培地５．　ニュートリエンドブ
ロス、０．８：にＮＤｉ。

０．１バタトペブトン、０．７　；　ＮａＣ１，０，５；ブド
ウ糖、０．５培地？、　　５１Ｍ寒天培地（栄研化学！ＩＩり　、指
示量培地８．　　ＴＳＩ寒天培地（栄研化学製）、指示
量培地９．　酵母エキス、０．５．バタトペブトン、１
．５；に、ＨＰＯ，、０，１；　ＭｇＳＯ４−７Ｈ，０
，０，０２；　可溶性澱粉、２．０．寒天末（和光純薬
製）、１．５培地１０、コーサー培地（栄研化学製）、
指示量培ｊｔ！！１１．　クリステンセン培地（栄研化
学製）、指示量培地１２．■酵母エキス　、　０．０５　；　ＮａｚＳ
Ｏｉ、　ｏ、　ｌ　；ＫＨ，ＰＯ，、０，１；ブドウ糖
、１．０■酵母エキス、　０．０５　；　ＮａｚＳＯ＜
、　０．１　；ＫＨ２ＰＯ，、０，１；ブドウ糖、１．
０；ＣａＣｊ！２・２Ｈ２０，０，０５：　　ＭｎＳ口
、＋　４　〜６　　）１２０，０．０１；Ｆｅ５Ｏ＝・
７ＨｚＯ，０，００１；　Ｍｇ５０．４ｔ（Ｊ、　０．
０２窒素源としては、硝酸ナトリウム、亜硝酸ナトリウ
ム、塩化アンモニウム及びリン酸アンモニウムをそれぞ
れ０．２５％、培地６０、２０２５％、０．１５８％及び０．１９５％となる
ように上記■及び■の培地に加えて用いた。

培地１３．キングΔ培地“栄研”　（栄研化学製）。

指示量培地１４．キングＢ培地′栄研″　（栄研化学製）指示
量培地１５．尿素培地“栄研”　（栄研化学製）、指示量培地１６．チトクローム・オキシダー上試験用濾紙（日
本製薬製）培地１７．３％過酸化水素水培地１８．バタトペプトン、０．５．酵母エキス、０．
５；に２）ＩＰ［１，、０，１；ブドウ糖、　１．０　
；　ＭｇＳ［１４・’１Ｈ２０，０，０２培地１９．バクトペプトン、２．７　；　ＮａＣｊ！　
、５．５　；に２ＨＰＯ，，０，３；ブドウ糖、０．５
．ブロモチモールブルー、０．０６．寒天末（和光純薬
製）、１．５培地２０．　（Ｎ）１．）　２ＨＰＯ４，０，１；にＣ
１、０，０２；　ＭｇＳＯ４・？ＬＤ、　０．０２　；
酵母エキス、　０．０５　、糖、１．０培地２１．カゼ
イン、０．５；酵母エキス、０．５ニブドウ糖１．０　
：　Ｋ２ＨＰＯ−、０，１：　Ｍｇ５Ｏ−・７Ｈ２［］
。

００２；寒天末（和光紬薬製）、　１．５〔菌学的性質
〕（ａ）　　顕微鏡的観察結果菌体の大きさは、０．８〜２．４μｍＸ１．８〜４．０
μｍの桿菌であり、菌体の一端に楕円形の内生胞子（Ｉ
，Ｏｘ１．．２μｍＸ１．２〜１４μｍ）を作る。

また、周鞭毛を有し連結性がある。ダラム染色は不定。

抗酸性はない。

（ｂ）　　各種培地に於ける生育状態 ■　肉汁寒天平板培養（培地１）生育状態は良い。集落の形状は円形であり、表面は円滑
、周縁は円滑である。又集落の色調は黄色半透明で光沢
がある。

■　肉汁寒天斜面培養（培地１）生育する。その状態は拡布状で光沢が有り、黄色半透明
である。

■　肉汁液体培養（培地２）生育する。

■　肉汁ゼラチン穿東り培養（培地３）生育状態は良い
。ゼラチンの液化が認められる。

■　リドマスミルク培地（培地４）ミルクの凝固、ペプトン化は認約られない。

ＩＪ　）マスの変色は培地がアルカリのため判定できな
い。

（Ｃ）　　生理学的性質 ■　硝酸塩の還元及び脱窒反応（培地５）硝酸塩の還元
は陽性。脱窒反応は陰性。

■　ＭＲテスト（培地６）培地がアルカリ性のだ約、陰性、陽性は判定できない。

■　νＰテスト　（培地６）陰性。

■　インドールの生成（培地７）陰性。

■　硫化水素の生成（培地８）陰性。

■　澱粉の加水分解（培地９）陽性。

■　クエン酸の利用コーサー培地（培地１０）で陰性。クリステンセン培地
（培地１１）では陽性か陰性か判定できない。

■　無機窒素源の利用（培地１２）硝酸塩、アンモニウム塩、亜硝酸塩ともに利用する。

■　色素の生成（培地１３．１４）陰性。

■　ウレアーゼ（培地１５）陰性。

■　オキシダーゼ（培地１６）陰性 ■　カタラーゼ（培地１７）陽性。

■　生育の範囲（培地１８）生育の温度範囲は２０〜４０℃、生育最適温度範囲は３
０〜３５℃である。

生育のｐＨ範囲はｐＨ７〜１０．５、生育最適ｐＨはｐ
ｔｌｌｏである。

■　酸素に対する態度好気的。

［相］　Ｄ−Ｆテスト　（培地１９）アルカリ性のため変色は判定できない。

好気状態でのみ生育する。

［相］　糖の利用性（培地２０）Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄグルコース、Ｄ
−マンノース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトース、
麦芽糖、ンヨａ、乳糖、）レバロース、Ｄ−ソルビット
、Ｄ−マンニット、イノジット、グリセリン、デンプン
、ラフィノース、サリンン、Ｄリボース及びデキストリ
ンを利用する。

■　食塩含有培地に於ける生育（培地１を改変）食塩濃
度が７％では生育するが、１０％で生育できない。

■　カゼインの分解（培地２１）陽性。

以上の菌学的性質に関する検討に基づき、バーシーズ・
マニュアル・オブ・ディタミネイティブ、バタテリオロ
ジ−（Ｂｅｒｇａｙ’ｓ　Ｍａｎｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第
８版及びザ０ジーナス・バチルス（”Ｔｈｅ　Ｇｅｎｕ
ｓ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ”　Ｒｕｔｈ。

Ｂ、　Ｇｏｒｄｏｎ、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｌａ
ｎｄｂｏｏｋ　　Ｎｏ、　４２７゜八ｇｒｉｃｕｌｔｕ
ｒａｌ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　　５ｅｒｖｉｃｅ、　　
ＩＩ、　　Ｓ。

Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
　Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ　Ｄ、　Ｃ。

（Ｉ９７３））を参照し、比較検索した結果、本菌株は
有胞子桿菌であるバチルス（Ｂａｃ　ｉ　］　Ｉｕｓ）
属の一種であると認められる。しかし、本菌株は中性領
域では生育できず、専ら高アルカリ領域で良好な生育を
示すことから、最近、ＨｏｒｉｋｏｓｈｉとＡｋｉｂａ
［＝Ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎ
ｉｓｍ　　、　ＪａｐａｎＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　５ｏ
ｃｉｅｔｙ　Ｐｒｅｓｓ　（Ｔｏｋｙｏ）、　　１９８
２年刊〕の主張している、所謂好アルカリ性（Ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ）微生物として暫定的に、
従来の中性で生育するバチルス属細菌とは区別される。

更に、本菌株の菌学的性質は公知の好アルカリ性バチル
スのいずれとも一致しないので、これを新規菌株と判断
してバチルス　エスピー　Ｋ　Ｓ　’、＋　−Ａ　ＰＩ
３７８と命名し、微工研菌寄第１０８８６号として工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託した。

上記の微生物を用いて本発明に使用される（ｄ）成分の
α−アミラーゼ活性を有するアルカリプルラナーゼを得
るには、培地に菌株を接種し、常法に従って培養すれば
よい。培養に用いる培地中には、資化し得る炭素源及び
窒素源を適当量含有せしｙＤでおくことが好ましい。こ
の炭素源及び窒素源は特に制限されないが、その例とし
ては、窒素源としては、コーングルテンミール、大豆粉
、コーンスチープリカー、カザミノ酸、酵母エキス、フ
ァーマメディア、肉エキス、トリプトン、ソイトン、バ
イブロ、アジパワー、綿実油粕、カルテベータ、アジブ
ロン、ゼスト等の有機窒素源及び硫酸アンモニウム、硝
酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、炭酸アンモニウ
ム、硝酸ナトリウム、酢酸アンモニウム等の無機窒素源
が挙げられる。また炭素源としては、可溶性澱粉、不溶
性澱粉、アミロペクチン、グリコーゲン、プルラン及び
これらの部分分解により生じた分岐オリゴ糖に加え、資
化し得る炭素源、例えばグルコース、マルトース、アラ
ビノース、キシロース、リボース、マンノース、フラク
トース、ガラクトース、麦芽糖、ショａ、乳１！、）レ
バロース、マンニット、ソルビット、グリセリンや資化
し得る有機酸、例えばクエン酸、酢酸などが挙げられる
。またその他、リン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム
塩、マンガン塩、亜鉛塩、コバルト塩、ナ）　ＩＪウム
塩、カリウム塩等の無機塩や、必要であれば、無機、有
機微量栄養源を培地中に適宜添加することもできる。

また、培養における温度は２０〜４０℃、特に３０〜３
５℃が好ましく、ｐＨは８〜ｌ００５、特に１０が好ま
しく、この条件下において通常２〜３日間で培養は完了
する。

斯くして得られた培養物中からの目的物質である、α−
アミラーゼ活性を有するアルカリプルラナーゼの採取及
び精製は、一般の酵素の採取及び精製の手段に準じて行
うことができる。即ち、培養後、遠心分離又は濾過等の
通常の固液分離手段により菌体を培養物から除去して粗
酵素液を得ることができる。この粗酵素液は、そのまま
使用することもできるが、必要に応じて、塩析法、沈澱
法、限外濾過法等の分離手段により粗酵素を得、更に公
知の方法により精製結晶化し、精製酵素として使用する
ことも可能である。

以下に、上記アルカリプルラナーゼの好ましい製造法の
一例を説明する。アルカリ性細菌バチルス属に属する例
えばＫＳＭ−ＡＰＩ３７８株を１％プルラン、１％ポリ
ペプトン、０５％酵母エキス、０．１％ＫＨ２ＰＤ、、
０，２５％Ｎａ２ＨＰＯ−・１２Ｈ２［］、００．０２
％Ｍｇ５Ｄ・７Ｈ２０，０，５％炭酸す）　ＩＪウムを
含む培地で３０℃にて３日間好気的に振の培養して得ら
れる培養液から菌体を除き、上澄液を得る。次いで、■
叶ＡＨセルロース吸着、■α−シクロデキストリン　ア
フィニティ　りロマトグラフィー、■ＤＥＡＢトヨバー
ル（東洋曹達社製）クロマトグラフィー■セファクリル
（ファルマシア社製）クロマトグラフィーを行うことに
よって精製される。斯くして得られる精製酵素は、ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動（ゲル濃度１５％）及びソ
ディウムドデシルサルフェー）　（ＳＤＳ）電気泳動で
単一のバンドを与え、またプルラナーゼの活性収率は約
２％であった。

斯くして得られる、アルカリプルラナーゼは、本発明自
動食器洗浄機用洗浄剤組成物の成分として好適に使用し
得る。このアルカリプルラナーゼの酵素化学的性質につ
いて、以下に説明する。

尚、酵素活性の測定は次の緩衝液（各々５０ｍＭ宛）を
用い、以下の方法に従って行った。

ｐＨ４〜６　　酢酸緩衝液ｐＨ６〜８　　リン酸緩衝液（プルラナーゼ活性測定に
使用）ｐＨ６〜８　　トリスマレイド緩衝液（α−アミラーゼ
活性測定に使用）ｐＨ８〜１１　　　グリシン−食塩−水酸化ナトリウム
緩衝液ｐＨｌｌ〜１２　　　塩化カリウム−水酸化ナトリウム
緩衝液酵素活性測定法： ■　プルラナーゼ活性各種緩衝液中にプルラン（反応系に於ける最終濃度は０
．２５％）を溶解させた基質溶液０．９ｄに、酵素液０
．１−を加え、４０ｔで、３０分間反応させた。

反応後、３，５−ジニトロサリチル酸（３，５ｃｌｉｎ
ｉｔｒｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　（ＤＮＳ））
法にて、還元糖の定量を行った。即ち、反応液１０ｍ１
にＤＮＳ試薬１、Ｏｍｌ！を加え、５分間、１００℃で
加熱発色させ、冷却後、４．０−の脱イオン水を加えて
希釈し、波長５３５ｎｍで比色定置した。酵素の力価は
、１分間に１μｍｏ１のグルコースに相当する還元糖を
生成する酵素量を１単位（Ｉ０）、！＝した。

■　α−アミラーゼ活性各種緩衝液中に可溶性澱粉（反応系に於ける最終濃度は
０．２５％）を溶解させた基質溶液０．９ｍｌに、酵素
液０．１ｍｌを加え、５０℃で、１５分間反応させた。

反応後、（ＤＮＳ）法にて、還元糖の定量を行った。

即ち、反応液１．０−にＤＮＳ試薬１．０ｄを加え、５
分間、１００℃で加熱発色させ、冷却後、４．０ｄの脱
イオン水を加えて希釈し、波長５３５ｎｍで比色定置し
た。酵素の力価は、１分間に１μｍｏｂのグルコースに
相当する還元糖を生成する酵素量を１単位（ＩＵ）とし
た。

〔酵素学的諸性質〕

■　作用プルラン及び可溶性澱粉に作用し、前者からは主として
マルトトリオースを、後者からは主としてマルトテトラ
オース及びマルトペンタオースを生成する。また、グリ
コーゲンにも作用しマルトテトラオース及びマルトペン
タオースを生成する（第１図）。

■　基質特異性プルラン、可溶性澱粉及びグリコーゲンに作用する（第
１表）。

以下余白 ■　作用ｐＩ（及び最適作用ｐＨ本酵素のプルランに対する作用ｐＨはｐＨ５〜１２の範
囲にあり、最適作用ｐＨは８．５〜ＩＯの範囲に認約ら
れる。

尚、各ｐＨにおけるプルラナーゼ活性を、０．２５％プ
ルラン、１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４〜５）、リン酸緩
衝液（ｐＨ６〜８）、グリシン−食塩−水酸化ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ９〜１０．５＞及び塩化カリウム−水酸
化ナトリウムＭ衝液（ｐＨ１１〜１２）の反応系を用い
、４０℃、３０分間反応させて測定した結果を第２図（
ａ）に示す。

また、可溶性澱粉に対する作用ｐｔ＋は４〜１２の範囲
にあり、最適作用ｐＨはｐｆ１７〜９．５の範囲に認め
られる。

尚、各ｐｔ＋におけるα−アミラーゼ活性を０．２５％
可溶性澱粉、１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４〜５）、トリ
スマレイド緩衝液（ｐＨ６〜８）、グリシン−食塩−水
酸化す）　ＩＪウム緩衝液（ｐＨ９〜１０．５）及び炭
酸緩衝液（ｐＨ１１〜１２）の反応系を用い、５０℃、
１５分間反応させて測定した結果を第２図の）に示す。

■　ｐＨ安定性本酵素のプルランに対するｐＨ安定性は、ｐＨ６〜１０
．５の範囲に認められる。

尚、各ｐＨにおけるプルラナーゼ活性を０．２５％プル
ラン、１釦λ１酢酸緩衝液（ｐＨ４〜５）、リン酸緩衝
液（ｐＨ６〜８）、グリシン−食塩−水酸化ナトリウム
緩衝液（ｐＨ９〜１０．５）及び塩化カリウム−水酸化
ナトリウム緩衝液（ρ旧１〜］２）の反応系を用い、４
５℃、１０分間反応させて測定した結果を第３図（ａ）
に示す。

また、可溶性澱粉に対するｐＨ安定性はｐＨ４〜１２の
範囲に認められる。

尚、各ｐＨにおけるα−アミラーゼ活性を０２５％プル
ラン、１０　ｍ　！Ｊ酢酸緩衝液（ｐＨ４〜５）、トリ
スマレイド緩衝液（ｐＨ６〜８）、グリシン−食塩水酸
化す）　ＩＪウム緩衝液（ｐＨ９〜１０．５）及び炭酸
Ｍ衝液（ｐＨ１１〜１２）の反応系を用い、５０℃、１
５分間反応させて測定した結果を第３図ら）に示す。

■　作用温度範囲及び最適作用温度本酵素のプルラン及び可溶性澱粉に対する活性は、１０
〜６５℃の範囲で認められ、最適作用温度は約５０℃に
認められる（第４図（ａ）及びら））。

■　温度安定性本酵素についてｐＨ９，５の条件で温度を変化させ、各
温度で３０分間処理することにより失活の条件を調べた
ところ、４５℃までは極狛で安定である（第５図（ａ）
及びら））。

■　分子量ＳＯ３電気泳動法（ゲル濃度７．５％）による分子量は
約２００．０００±５．０００である。

■　金属イオンの影響プルラナーゼ活性はＨｇ２＋、Ｍ口２′″、Ｐｂ２＋で
阻害される。また、α−アミラーゼ活性はＨｇ　２　＋
、Ｉ　ｎ　２　＋ｐｂ”、Ｃｄ”、Ｚｎ２＋で阻害され
る（第２表）。

下記第２表より明らかな如く、本酵素のプルラナーゼ活
性とα−アミラーゼ活性とでは、阻害を受ける金属イオ
ンの種類が異なっている。

■　界面活性剤の影響直鎮アルキルベンゼンスルフナン酸ナトリウム、ポリオ
キシエチレンアルキル硫酸エステルナトリウム塩、α−
オレフィンスルフオン酸ナトリウム、α−スルフォン化
脂肪酸エステルナトリウム、アルキルスルフオン酸ナト
リウム、ＳＯ３、石鹸、ソフタノール（登録商標）等の
各種界面活性剤の０．０５％溶液で４０℃にて１５分間
処理しても殆ど活性阻害を受けない。

■　キレート剤の影響キレート剤であるＥＤＴＡ　（Ｉ，０ｍＭ）及びＥＧＴ
Ａ　（Ｉ０ｍＭ）でプルラナーゼ活性は殆ど阻害を受け
ないが、α−アミラーゼ活性は著しい阻害を受ける。ま
た、キレート剤により阻害を受けたα−アミラーゼ活性
は再びＣａ”″を加えると復活する（第２表）。

■　プロテアーセ耐性マクサターゼ（ＩＢＩｓ社製）及びサビナーゼ（ノボ社
製）等のアルカリプロテアーゼを活性測定時に共存（０
，２Ａ［Ｉ／　１　）させても、何れのプロテアゼに対
しても強い耐性を有する。

本発明の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物には、上記の必
須成分に加え、目的とする性能を損なわない範囲で、必
要に応じて種々の任意成分を添加することができる。

その様な成分としては、カルボキシメチルセルロース、
ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエ
チレングリコール等の再汚染防止剤、炭酸ナトリウム、
炭酸水素ナトリウム、ホウ砂、珪酸塩等のアルカリ剤、
芒硝等の増量剤、香料、色素、過炭酸ナトリウム、過ホ
ウ酸ナトリウム等の漂白剤、シリコーン等の消泡剤、液
体洗浄剤の場合はエタノール、イソプロパツール、プロ
ピレングリコール等のハイドロトロープ剤、防腐・防黴
剤等が挙げられる。

本発明の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物は、その０．２
％水溶液におけるｐＨが７〜１０の範囲内である必要が
あり、ｐＨ７未満では油性汚れに対する洗浄力が低下す
る為好ましくなく、またｐＨ１０を超えると、酵素活性
が失われるか、或いは著しく低下し充分な洗浄効果を得
られない。特に好ましいｐＨの範囲は８．５〜９．５で
ある。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが
、本発明はこれらの実施例により限定されるものではな
い。

なお、本発明に用いる酵素の活性は次の如くして測定し
た。

〈リパーゼの活性測定方法〉本発明におけるリパーゼ活性は、反応基質としてオリー
ブ油を用い、１分間に１μｍｏｂの脂肪酸を遊離する酵
素量を１単位と定必、以下の方法で測定した。

（］）　　サンプルの測定オリーフ油４証と０．１ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７，０
）　４ｍｌとを５０艷容共栓三角フラスコに正確に取り
、よく混合し、３７℃の恒温水槽中で１０分間予熱する
。

これに試料溶液１証を正確に加え、よく混合し、正確に
２０分後アセトン・エタノール混合液２０ｍｆ！、を注
ぎ、ついでフェノールフタレイン試液５滴を指示薬とし
て、０．０５Ｎ水酸化ナトリウム試液で滴定する。

（２）　　ブランクの測定オリーブ油５ｄと０．１！、１リン酸緩衝液（ｐＨ７０
）　４ｍｌとを５０ｍ１容共栓三角フラスコに正確に取
り、３７℃の恒温水槽中で３０分間加熱後、ア七トン・
エタノール混合液２０ｍｆを注ぎ、ついで水１ｍｌを正
確に加え、フェノールフタレイン試液５滴を指示薬とし
て、０．０ＤＮ水酸化ナトリウム試液で滴定する。

（３）　　リパーゼ活性の算出以下の式により活性を算出する。

活性（単位／ｇ）くブルラナーセ活性測定方法〉１０　ｍ　Ｍグリシン−食塩−水酸化すｌ−Ｕラム緩衝
液（ｐＨ９，０）中にプルラン（反応系における最終濃
度は０２５％）を溶解させた基質溶液０９艷に、酵素液
０．１ｍｌを加え４０℃で３０分間反応させる。反応後
、３．５−ジニトロサリチル酸（３，５ｄｉｎｉｔｒｏ
ｓａｌｉｃｙｉｉｃ　ａｃｉｄ（ＤＮＳ））法にて、還
元糖の定量を行った。即ち、反応液１．０ｍｆ！にＤＮ
Ｓ試薬１．０ｄを加え、５分間、１００℃で加熱発色さ
せ、冷却後、４．　Ｏｄの脱゛イオン水を加えて希釈し
、波長５３５ｎｍで比色定量した。酵素の力価は、１分
間に１μｍｏｌのグルコースに相当する還元糖を生成す
る酵素量を１単位（ＩＵ）とした。

製造例１（Ｉ）栃木県栃木市の土壌を薬匙−杯（約０．５ｇ）、
滅菌生理食塩水に懸濁し、８０℃で１５分間熱処理した
。この熱処理液の上清を適当に希釈して、分離用寒天培
地（培地Ａ）に塗布した。次いで、これを３０℃にて３
日間培養し、集落を形成させた。集落の周囲にプルラン
及び着色澱粉の溶解に基づく透明帯を形成するものを選
出し、α−アミラーゼ活性を有するプルラナーゼ生産菌
を取得した。更に、取得菌を培地Ｂの液体培地に接種し
、３０℃で３日間振盪培養した。培養後、遠心分離した
上清液についてプルラナーゼ活性及びアミラーゼ活性を
、ｐＨ１０にて測定し、α−アミラーゼ活性を有するア
ルカリプルラナーゼ生産菌をスクリーニングした。

上述の方法により、α−アミラーゼ活性を有するアルカ
リプルラナーゼ生産菌であるバチルスエスピー　ＫＳＭ
−ＡＰ１３７８（ＦＥＲＭ　Ｐ−１１）８８６）を取得
することが出来た。

培地Ａ、プルラン可溶性澱粉着色プルラン着色澱粉ポリペプチド酵母エキスＫ）１２ＰＤ。

（ＮＨ４）　２５０４Ｍｇ５Ｏ＜・７Ｈ２０ＣａＣ１、・２ＨｘＤＦｅＳＯ＜’７ＨＪＭｎＣｆ　２’４）＋２０寒天０．５％０．５％０．２％０．２％０．２％０．１％０．０３％０．１％０．０２％０．０２　％０．００１％０．０００１％１．５％ｐＨ１０゜０培地Ｂ、プルラン　　　　　　　　０．５％可溶性澱粉
　　　　　　　０，５％ト　リ　ブ　ト　ン　　　　　　　　　　　　　　０．
２％酵母エキス　　　　　　　　０．１％Ｋ）Ｉ２ＰＯ４０，０３％（Ｎ）１．）２ＳＯ，０，１％Ｍｇ５Ｏｓ・７Ｈ２００，０２％ＣａＣＩ　＝　・２）１２００．　［１２％Ｆｅ５Ｄ４
・７ＬＯＯ，００１％ＭｎＣ［ｚ’４Ｈ２００，０００１％ｐＨ１０，０（２）α−アミラーゼ活性を有するアルカリプルラナー
ゼ生産菌であるバチルス　エスピーＫＳＭ−ＡＰＩ３７
８株を実施例１の液体培地已に接種し、３０℃で３日間
振盪培養した。培養後、菌体を遠心分離して除き、粗酵
素液とした。更に、通常の方法に従って、１００％エタ
ノールを添加してエタノール乾燥粉末とし、以下の第３
表に示すα−アミラーゼ活性を有するアルカリプルラナ
ーゼ酵素標品を得ることができた（酵素活性はｐＨ９に
於ける測定値である）。

第３表（３）　　（２）で得られた粗酵素液について、以下の
手順に従って精製を行い、α−アミラーゼ活性を有する
アルカリプルラナーセを得た。すなわち、粗酵素液の上
澄液にＤＥＡＥセルロース粉末を加え、上澄液中のプル
ラナーゼを完全にＤＥＡＥセルロースに吸着させた。次
いで、１０ｍＭトＩＪスー塩酸緩衝液（ｐｌ（８）で樹
脂を洸浄した後、０．６Ｍの食塩を含む同緩衝液で酵素
を溶出した。次に、１０ｍＭ）！Ｊスス−酸緩衝液（ｐ
Ｈ８）で透析後、同緩衝液で平衡化したα−シクロデキ
ストリン　アフィニティー　カラムに吸着させ、β−シ
クロデキストリンを含有する同緩衝液により溶出し、そ
の活性画分を集めた。

集められた活性画分は、透析後、１０ｍＭ）リス−塩酸
緩衝液（ｐＨ８）で平衡化したＤＥＡＥ　トヨパール６
５０Ｓに吸着させた。吸着した酵素を同緩衝液中、０．
１からＩＭの食塩の濃度勾配により溶出し、その活性画
分を集約た。集められた活性画分は、透析後、次いで０
．１Ｍ食塩を含む同緩衝液で平衡化したセファクリルＳ
−２００カラムに充填し、０．１Ｍ食塩を含む同緩衝液
で溶出し、その活性画分を集めた。

集約られた活性画分は、限外濾過膜を用いて濃縮した後
、１．０ｍＭ　）　ＩＪスス−酸緩衝液（ｐＨ８）を用
いて一夜透析した。得られたα−アミラーゼ活性を有す
るアルカリプルラナーゼについてデービス（Ｄａｖｉｓ
　　Ｄ、　　Ｊ、、　　八ｎｎ、　　Ｎ、　　Ｙ、　Ａ
ｃａｄ、　　Ｓｃｉ、、　　１２１゜４０４　（Ｉ９６
４，））の方法に従って電気泳動を行った後、コマンー
・ブＩＪ　ＩＪアント・ブルーで染色して単のバンドを
与えることを確認したく第６図）。

（５）　　（４）で得られたα−アミラーゼ活性を有す
るアルカリプルラナーゼについて、常法に従い、ソディ
ウム・ドデシル・硫酸（ＳＯＳ）電気泳動を行った。

この結果を第７図に示す。この結果から、本酵素は分子
量２００．０００±５．０００であった。

実施例１下記の第４表及び第５表の組成の自動食器洗浄機用洗浄
剤組成物を調製し、その洗浄力の測定を行った。結果を
第５表に示す。尚、洗浄力の測定は以下に示す試験法に
より行った。

洗浄条件使用機種；松下電器■製全自勧食器洗い機ｒ　ＮＰ−６
００」洗浄温度；５℃から５５℃まで徐々に上昇する。

使用水；硬度３．５°Ｄｌｌの水洗浄剤濃度°０２％洗浄時間；洗浄２０分−すすぎ２０分洗浄時の循環水量；約２．５ｐ〔米飯汚れ洗浄力測定法〕汚染皿の調製軟質の炊き上がり米飯を３０分間室温にて放置し、３ｇ
を直径２５叩の磁性の皿に引き伸ばして塗布し、室温で
１昼夜風乾したのもを６枚洗浄に供した。

米飯汚れ洗浄力評価方法洗浄後の皿の米飯の残留を沃素の呈色反応によって生じ
た青色部分の面積（Ｐ）を写真判定によって測り、初期
の汚染面積（Ｓ）から容器の洗浄率を下式によって求め
た。更に、６枚の皿の洗浄率を平均し、平均洗浄率とし
た。

皿−枚の洗浄率−［（ＩＰ）　／ＳＩ　Ｘ１００完全に
洗浄された。

５点少量の汚れの残留が認約られる。

３点〔複合汚れ洗浄力測定法〕汚染皿の墾製ホワイトソース（ハインッ社製の缶詰）　１．ｏｏｇに
マーガリン（官印社製「ネオソフトＪ）１０ｇを加え、
６０℃に加温し良く混合し複合汚れとする。

直ｕ２５ｃｍの磁性の皿−枚当たりに、上記の複合汚れ
５ｇを塗布し、１２０℃で１５分間焼き付ける。

これを−昼夜数置した後洗浄に供した。

洗浄試験と洗浄力評価方法汚染皿５枚を洗浄機に入れ、上記の洗浄条件にて洗浄を
行った。洗浄後の皿は一枚づつ下記の判断基準により判
定し、下式により洗浄評価点を算出した。

全く洗浄されなかった。　　　　　　　０点洗浄評価点
−〔各汚染皿の評価点の和〕×４第４表配合成分ソフタノールＥＰ−７０８５” クエン酸三ナトリウム塩５ｏｋａｌａｎ　　ＣＰ−５Ｐｏｗｄｅｒ”炭酸水素ナ
トリウム硫酸ナトリウム配合率（％）残部本１ソフタノールＢＰ７０８５；５ｅｃ−アルコールのエチレンオキサイド７モル及びブロビレンオキサイド８．５モル付加物（日本触媒化学工業部）Ｓｏｋａｌａｎ　ＣＰ−５Ｐｏｗｄｅｒ；アクリル酸と
無水マレイン酸の共重合体の塩分子量＝約７００００　（ＢＡＳＦ社製）第５表以下余白本３　リパーゼＡＫＧ　、天野製薬本４　アルカリプルラナーゼ；製造例１で得られたもの注）表中の数字は洗浄剤１ｇ中に含まれる活性量（単位
／ｇ＆剤）実施例２第６表の組成の自動食器洗浄機用洗剤を調製し、その洗
浄力を実施例１と同様に測定した。

〔発明の効果〕

本発胡の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物は澱粉質汚れの
みならず、澱粉質、油脂及び蛋白質汚れ等が混じり合っ
た複合汚れに対しても優れた洗浄力を有する。

【図面の簡単な説明】

第１図は、α−アミラーゼ活性を有するアルカリプルラ
ナーゼを用いてプルラン、アミロペクチン、アミロース
、グリコーゲンを基質として酵素反応を行ったときの、
マルトオリゴ糖の生成を示すベーパークロマトグラフィ
ーである。第２図（ａ）及び（ｂ）は、α−アミラーゼ活性を有す
るアルカリプルラナーゼの反応ｐＨと相対活性との関係
を示す図面である。第３図（ａ）及び（ｂ）は、α−アミラーゼ活性を有す
るアルカリプルラナーゼの処理ｐＨと残存活性との関係
を示す図面である。第４図（ａ）及びら）は、α−アミラーゼ活性を有する
アルカリプルラナーゼの反応温度（ｐＨ９，５）と相対
活性との関係を示す図面である。第５図（ａ）及びら）は、α−アミラーゼ活性を有する
アルカリプルラナーゼの処理温度（ｐＨ９，５）と残存
活性との関係を示す図面である。第６図は、α−アミラーゼ活性を有するアルカリプルラ
ナーゼをデービスの方法に従って電気泳動を行った結果
を示す図面である。第７図は、α−アミラーゼ活性を有するアルカリプルラ
ナーゼのＳＯ３電気泳動の結果を示す図面である。以上

Claims

【特許請求の範囲】１、次の成分（ａ）〜（ｄ）（ａ）非イオン性界面活性剤　１〜３０重量％（ｂ）カ
ルシウムイオン捕捉キレート剤１〜５０重量％（ｃ）リパーゼ（ｄ）α−アミラーゼ活性を有するアルカリ又はアルカ
リ耐性プルラナーゼを含有し、０．２重量％水溶液のｐＨが７〜１０である
自動食器洗浄機用洗浄剤組成物。２、（ａ）成分が、次
の一般式（ I ）Ｒ＾１Ｏ（Ｃ＿２Ｈ＿４Ｏ）＿ｍ（Ｃ＿３Ｈ＿７Ｏ）＿
ｎＨ（ I ）（式中、Ｒ＾１は炭素数８〜２０のアルキ
ル又はアルケニル基を示し、ｍは平均付加モル数で５〜
１５の数を示し、ｎは平均付加モル数で３〜１５の数を
示す）で表わされる高級アルコールのエチレンオキシドとプロ
ピレンオキシド付加体、分子量１，０００〜１０，００
０のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック
共重合体並びに１，０００〜１０，０００の分子量を有
するエチレンジアミンのポリオキシエチレンポリオキシ
プロピレン付加体より選ばれる一種又は二種以上の混合
物である請求項１記載の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物
。３、（ｂ）成分が、クエン酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩
、ポリアクリル酸塩、アクリル酸と無水マレイン酸との
共重合体の塩、無水マレイン酸とメチルビニルエーテル
との共重合体の塩、無水マレイン酸とオレフィンとの共
重合体の塩、アクリル酸とメタクリル酸との共重合体の
塩、無水マレイン酸と酒石酸の縮合物及びゼオライトか
らなる群より選ばれる一種又は二種以上のカルシウムイ
オン捕捉キレート剤である請求項１記載の自動食器洗浄
機用洗浄剤組成物。４、（ｄ）成分のアルカリ又はアルカリ耐性プルラナー
ゼが、プルランに対する最適作用ｐＨが８．５〜１０の
範囲であり、可溶性澱粉に対する最適作用ｐＨが７〜９
．５の範囲であるものである請求項１記載の自動食器洗
浄機用洗浄剤組成物。５、（ｄ）成分のアルカリ又はアルカリ耐性プルラナー
ゼが、次の酵素学的性質を有するものである請求項２記
載の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物。１）作用プルラン及び可溶性澱粉に作用し、プルランからは主と
してマルトトリオース、可溶性澱粉からは主としてマル
トテトラオース及びマルトペンタオースを生成する。ま
た、グリコーゲンにも作用し、マルトテトラオース及び
マルトペンタオースを生成する。２）基質特異性プルラン、可溶性澱粉及びグリコーゲンに作用する。３）作用ｐＨ及び最適作用ｐＨプルランに対する作用ｐＨは５〜１２の範囲であり、最
適作用ｐＨは８．５〜１０の範囲である。また、可溶性
澱粉に対する作用ｐＨは４〜１２の範囲であり、最適作
用ｐＨは７〜９．５の範囲である。４）ｐＨ安定性プルランに対してｐＨ６〜１０．５の範囲で安定であり
、可溶性澱粉に対してはｐＨ４〜１２の範囲で安定であ
る（４５℃、１０分間処理による）。５）作用温度範囲及び最適作用温度プルラン及び可溶性澱粉に対して１０〜６５℃の範囲で
作用し、その最適作用温度は約５０℃である。６）温度安定性４５℃までは極めて安定である（ｐＨ９．５の１０ｍＭ
グリシン−食塩−水酸化ナトリウム緩衝液中、３０分間
処理による）。７）分子量ソディウムドデシル硫酸（ＳＤＳ）電気泳動法による分
子量は２００，０００±５，０００である。８）金属イオンの影響プルラナーゼ活性はＨｇ＾２＾＋、Ｍｎ＾２＾＋、Ｐｂ
＾２＾＋で阻害される。また、α−アミラーゼ活性はＨ
ｇ＾２＾＋、Ｍｎ＾２＾＋、Ｐｂ＾２＾＋、Ｚｎ＾２＾
＋、Ｃｄ＾２＾＋で阻害される。６、アルカリ又はアルカリ耐性プルラナーゼが、バチル
ス属に属する微生物の培養物より分離取得されたもので
ある請求項１記載の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物。７、微生物が、バチルスエスピー（￥Ｂａｃｉｌｌｕｓ
￥ｓｐ．）ＫＳＭ−ＡＰ１３７８と命名され、微工研菌
寄第１０８８６号として寄託されたものである請求項６
記載の自動食器洗浄機用洗浄剤組成物。