JPH04311327A - シクラメンの不定芽の生育培養方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、シクラメンの不定芽を
液体培地中で通気培養することにより、不定芽を効率よ
く生育させる培養方法に関する。

【０００２】

【従来技術】シクラメンはこれまで種子繁殖の方法によ
り種子を採取し、播種、育苗の手段によって栽培されて
いる。この従来方法では、種子の生産過程でシクラメン
の個体間で交配を行なうため、花色や花型などの重要な
形質が固定化されず、親株と同じものが安定して得られ
ないという品質上の問題がある。

【０００３】このような問題を解決するためにこれまで
固形培地を用い、シクラメンの組織を培養して不定芽を
分化、生育させ、幼苗を形成させる方法が用いられてい
る。また、組織シクラメンの不定芽を分化、生育させる
培地としては公知の植物組織培養培地であるムラシゲ・
スクーグ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ　　＆　　Ｓｋｏｏｇ）
培地（以下「ＭＳ培地」という）などが挙げられる。こ
れらの公知の植物組織培養培地はそのままの組成で用い
るか、これらの培地の組成のうち全無機塩の濃度を２分
の１または３分の１にして用いられる〔特開昭６３−２
２６２１５号公報、特開昭６３−１３７６１７号公報、
図解組織培養入門第７２頁〜第７５頁（昭和６０年誠文
堂新光社発行）〕。しかしながら、これらの公知の固形
培地を用いた組織培養方法ではシクラメンの不定芽の生
育速度が遅いため、培養期間が長くなったり、生育培養
中に枯死する割合も高くなったりすることからシクラメ
ンの幼苗の大量生産に用いる不定芽の生産方法としては
必ずしも満足すべきものではない。

【０００４】一方、液体培地中通気してバラ属植物の組
織を培養して、種苗を増殖する方法が知られている（特
開平１−２６９４３０号公報）。しかしながら、シクラ
メンの不定芽を液体培地中で通気して生育させる培養方
法については知られていない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】同一形質のシクラメン
の幼苗を大量生産するためには、シクラメンの組織片を
組織培養して不定芽を分化させる過程、分化させた不定
芽を効率良く増殖させ不定芽数を増加させる過程、不定
芽を良好に生育させ幼苗を形成させる過程を順に経る方
法が最適であると考えられる。本発明の目的は、シクラ
メンの不定芽を生育させる工程において、不定芽の生存
率が低く生育速度が遅い従来の固体培地を用いる方法に
代わるシクラメンの効率的な不定芽の生育培養方法を提
供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記した
課題の解決のために鋭意研究した。その結果、シクラメ
ンの不定芽を液体培地中で通気培養することによって不
定芽を効率良く生育させて健全な幼苗を形成できること
を見い出した。したがって、本発明の要旨とするところ
は、シクラメンの不定芽を液体培地中で通気培養するこ
とにより、不定芽を生育させることを特徴とするシクラ
メンの不定芽の生育培養方法にある。

【０００７】本発明の方法に用いる不定芽は次のように
して得られる。

【０００８】本発明に用いるシクラメンはシクラメン属
の植物であり、品種としてビクトリア、バーバーク、ピ
ュアホワイト、パステル、ミニシクラメンなどが挙げら
れるが、これらの品種に限定されるものではない。

【０００９】まず、シクラメンの葉身、葉柄、茎頂、塊
茎、葯基部、花茎などの組織片を約７０〜８０％のエタ
ノール溶液に１０秒間、次いで約１％の次亜塩素酸ナト
リウム溶液に２０分間殺菌後、１ｃｍ角の切片とする。 これをＭＳ培地の無機成分を３分の１に希釈した培地に
ナフタレン酢酸０．１ｍｇ／ｌ、ベンジルアデニン１．
０ｍｇ／ｌ、ショ糖３０ｇ／ｌをそれぞれ加えてｐＨ５
．８とし、さらにゲルライト１０ｇ／ｌを加えた固形培
地上に置床した。そして２０℃の暗所で５０日間培養し
て組織の周辺からカルスを形成させ、さらにカルス上に
不定芽を分化させた。

【００１０】この不定芽のうち生長点を有する部位を用
いればよい。

【００１１】生長点部位を有する不定芽とは、例えばシ
クラメンの葉身の切片から分化して形成された不定芽の
うち不定芽長が０．５ｃｍ〜３ｃｍ、好ましくは１〜２
ｃｍであり、その不定芽の基部に新葉展開の基となる生
長点部位を有しているものをいう。このように生長点部
位を有する不定芽を用いて生育培養を行った場合は生育
培養して形成させた幼苗を液体培地から取り出した後、
従来から知られている方法により発根、馴化させた後性
質が一定で健全な植物体に生長させることができる。

【００１２】また生長点部位を有さない不定芽を用いて
本発明の液体培地による生育培養を行っても健全な幼苗
には至らず発根、順化の過程で枯死するか、健全な植物
体に至らない。

【００１３】このようにして得た不定芽を本発明の方法
に用いる。

【００１４】本発明によるシクラメンの不定芽の培養方
法は以下の要領で実施される。

【００１５】本発明の不定芽の生育に用いる培地として
は、例えばムラシゲ−スクーグ（以下「ＭＳ培地」とい
う）、ガンボルグのＢ５培地、ホワイト培地、ニッチ−
ニッチ培地、Ｎ６培地などの植物組織培養用の培地があ
げられる。これらの公知の培地組成に関しては、例えば
、竹内、中島、古谷著の「新植物組織培養」第３８６頁
〜第３９１頁（１９７９年）朝倉書店発行に記載されて
いる。これらの培地の無機成分をそのままか、もしくは
１／３または１／２に希釈したものを用いればよいが、
特にＭＳ培地を用いて調製された液体培地が好ましい。

【００１６】本発明に用いられる液体培地に添加する炭
素源としてはショ糖などの糖類、エタノールなどの第１
級アルコールなどが挙げられるが、ショ糖を２０ｇ／ｌ
〜９０ｇ／ｌ、好ましくは３０ｇ／ｌ〜６０ｇ／ｌの濃
度で使用されるのがよい。

【００１７】また液体培地のｐＨは５．６〜５．８に調
整され使用される。

【００１８】本発明における不定芽の生育培養方法では
、通常液体培地に植物生長ホルモンの添加を必要としな
いが、必要に応じてベンジルアデニン（ＢＡ）、カイネ
チン、ゼアチンなどのサイトカイニン類を０．０１ｍｇ
／ｌ〜０．５ｍｇ／ｌの濃度で、またはインドール酢酸
、α−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、インドール酪酸など
のオーキシン類を０．０１ｍｇ／ｌ〜０．５ｍｇ／ｌの
濃度で添加させてもよい。

【００１９】前記した培地のうち、ＭＳ培地を用いてシ
クラメンの不定芽の生育培養方法について説明する。

【００２０】まず、ＭＳ培地の無機成分を３分の１に希
釈した培地にショ糖３０ｇ／ｌを加えてｐＨ５．８とし
た液体培地を調製した。

【００２１】これを１１のガラス容器に５００ｍｌ入れ
、前記により得た生長点部位を有する不定芽１０〜２０
本を移植した。培養器は振とうしても静置してもどちら
でもよい。これを２０℃の恒温室内で２０〜４０日、好
ましくは３０日間培養すると不定芽が生育し、葉茎の伸
長とともに幼苗を形成した。

【００２２】この不定芽の培養中は、液体培地に酸素を
含有する気体を通して行なわれる。この場合の酸素を含
有する気体とは、空気を単独、酸素ガスを単独、または
酸素、二酸化炭素、窒素、空気などのうちの２種類以上
を混合してなる気体を用いることができる。これらの気
体中の酸素含有量は５〜１００％、好ましくは２０〜９
０％である。液体培地中への上記した気体の通気量とし
ては５０ｍｌ／ｌ・ｍｉｎ．以上５００ｍｌ／ｌ・ｍｉ
ｎ．以下、好ましくは１００ｍｌ／ｌ・ｍｉｎ．以上３
００ｍｌ／ｌ・ｍｉｎ．以下が不定芽の生育培養に適し
ている。また本発明におけるシクラメンの不定芽の生育
培養は光照射下で行なわれるのが良く、この場合の照度
としては５００ルックス以上、１０００ルックス以下、
好ましくは１０００ルックス以上３０００ルックス以下
が適している。さらにこの光照射下での培養は明期を１
２時間から１８時間、好ましくは１６時間、暗期を６時
間から１２時間、好ましくは８時間の明期、暗期の周期
となるように調整すると、不定芽の生育および茎葉伸長
の速度がはやく生育が促進される。

【００２３】以下に本発明の試験例を示す。

【００２４】

【試験例】シクラメン（品種：ビクトリア、パステル、
ミニシクラメン）の葉身の組織片を約７０〜８０％のエ
タノール溶液に１０秒間、次いで約１％の次亜塩素酸ナ
トリウム溶液に２０分間浸漬し、殺菌処理する。次いで
、この組織片を取り出し、その表面に付着した次亜塩素
酸ナトリウムを滅菌水で３回洗浄後、これを無菌条件下
で組織片を１ｃｍ角の切片とする。これをＭＳ培地の無
機成分を３分の１に希釈した培地にＮＡＡを０．１ｍｇ
／ｌ、ＢＡを１．０ｍｇ／ｌ、ショ糖を３０ｇ／ｌを加
えてｐＨ５．８とし、ゲルライトを１０ｇ／ｌ加えた固
形培地上に置床し、２０℃の温度条件で暗所で５０日間
培養した。そして葉の周辺からカルスを形成させ、さら
にカルス上に不定芽を分化させた。

【００２５】この不定芽のうち生長点部位を有している
長さ１ｃｍの不定芽をメスで切り取り材料とした。

【００２６】次にＭＳ培地の無機成分を３分の１に希釈
した培地にショ糖３０ｇ／ｌを加えてｐＨ５．８とした
液体培地を１ｌ容のガラス容器に５００ｍｌを入れ、こ
れに上記した不定芽を１容器あたり２０本あて移植し、
２０℃で、照度２０００ルックスの明期を１６時間、暗
期を８時間とし、無菌空気を第１表記載の通気量で通気
して培養した。調査は不定芽を移植した後、生育して茎
葉の長さが４ｃｍになった幼苗期に行い、下記数式１に
より生存率（％）を算出した。その結果は表１に示した
とおりである。

【００２７】

【数１】

【００２８】

【比較例１】液体培地中に無菌空気を通気しない以外は
該試験例と同様にして培養した。その結果は表１に示し
たとおりである。

【００２９】

【比較例２】培地として寒天１％を含む固体培地を用い
て、無菌空気を通気しない以外は該試験例と同様にして
培養した。その結果は表１に示したとおりである。

【００３０】

【表１】

【００３１】

【発明の効果】本発明によれば、従来の組織培養用の固
体培地を用いた方法に比べ、シクラメンの組織片を培養
して得られる不定芽を効率よく生育させ、目的の幼苗を
得ることができる。したがって、本発明の方法を用いて
品質の均一なシクラメンの幼苗の大量生産を有効に行う
ことができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　シクラメンの不定芽を液体培地中で通
   気培養することにより、不定芽を生育させることを特徴
   とする、シクラメンの不定芽の生育培養方法。