JPH04228090A - Ｐｐ４に対するモノクローナル抗体およびその製造方法 - Google Patents
Ｐｐ４に対するモノクローナル抗体およびその製造方法Info
- Publication number
- JPH04228090A JPH04228090A JP3110865A JP11086591A JPH04228090A JP H04228090 A JPH04228090 A JP H04228090A JP 3110865 A JP3110865 A JP 3110865A JP 11086591 A JP11086591 A JP 11086591A JP H04228090 A JPH04228090 A JP H04228090A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- antibody
- binds
- metal ions
- antibody against
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 3
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims abstract 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 12
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims description 2
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 claims 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 claims 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 3
- 101710158668 Placental protein Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000008217 Pregnancy Proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 abstract 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 9
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 9
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 8
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 description 7
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 7
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 2
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- YMXHPSHLTSZXKH-RVBZMBCESA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoate Chemical compound C([C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1)CCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O YMXHPSHLTSZXKH-RVBZMBCESA-N 0.000 description 1
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- XNCSCQSQSGDGES-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)C(C)CN(CC(O)=O)CC(O)=O XNCSCQSQSGDGES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2-[(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound S1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C1=NN=C1SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028026 C-DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000843360 Haloferax mediterranei (strain ATCC 33500 / DSM 1411 / JCM 8866 / NBRC 14739 / NCIMB 2177 / R-4) Gas vesicle structural protein Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007760 Iscove's Modified Dulbecco's Medium Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 101000585017 Vipera ammodytes meridionalis Acidic phospholipase A2 homolog vipoxin A chain Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 101150061025 rseP gene Proteins 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4721—Lipocortins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】本発明は蛋白質ＰＰ４に特異的なモノクロ
ーナル抗体、このような抗体を産生するハイブリドーマ
細胞系、およびその使用に関する。
ーナル抗体、このような抗体を産生するハイブリドーマ
細胞系、およびその使用に関する。
【０００２】胎盤蛋白質４（ＰＰ４）の単離およびその
物理化学的特性の決定はＢｏｈｎ（ＥＰ ０１２３ ３
０７）によって最初に行われた。この蛋白質は続いて他
の研究者グループによっても発見されたが、彼らは初期
にはその同一性を認識せずに、アネキシンＶ、リポコル
チンＶまたはＶＡＣアルファと呼んでいた。相当するＣ
ＤＮＡの配列決定（Ｇｒｕｎｄｍａｎら：Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ８５， ３７０８
〜３７１２， １９８８）により、ＰＰ４は、現在では
リポコルチンまたはアネキシンと呼ばれている蛋白質の
ファミリーに属することが明らかにされた。
物理化学的特性の決定はＢｏｈｎ（ＥＰ ０１２３ ３
０７）によって最初に行われた。この蛋白質は続いて他
の研究者グループによっても発見されたが、彼らは初期
にはその同一性を認識せずに、アネキシンＶ、リポコル
チンＶまたはＶＡＣアルファと呼んでいた。相当するＣ
ＤＮＡの配列決定（Ｇｒｕｎｄｍａｎら：Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ８５， ３７０８
〜３７１２， １９８８）により、ＰＰ４は、現在では
リポコルチンまたはアネキシンと呼ばれている蛋白質の
ファミリーに属することが明らかにされた。
【０００３】アネキシンは、炎症のメディエーターの放
出に決定的な調整的役割を果たしている。アネキシンの
投与によって炎症メディエーターの放出を阻害すること
が可能である。
出に決定的な調整的役割を果たしている。アネキシンの
投与によって炎症メディエーターの放出を阻害すること
が可能である。
【０００４】アネキシンは播種性血管内凝固症候群（Ｄ
ＩＣ）のような凝固障害に有用な治療剤である。
ＩＣ）のような凝固障害に有用な治療剤である。
【０００５】適当な量を入手可能なヒト胎盤は、ＰＰ４
を得るのに適した原料である。天然の原料からＰＰ４を
精製するための確立された方法は、しかしながら、労力
を要し、しかもＰＰ４のロスを伴う。同じことが大腸菌
または動物細胞の培養液から生物学的に活性な形で得ら
れる遺伝子操作によるＰＰ４についてもいえる。したが
って、ロスを最小限にした迅速な精製方法が要求されて
いる。
を得るのに適した原料である。天然の原料からＰＰ４を
精製するための確立された方法は、しかしながら、労力
を要し、しかもＰＰ４のロスを伴う。同じことが大腸菌
または動物細胞の培養液から生物学的に活性な形で得ら
れる遺伝子操作によるＰＰ４についてもいえる。したが
って、ロスを最小限にした迅速な精製方法が要求されて
いる。
【０００６】精製の目的でモノクローナル抗体を使用す
ることは、一部の他の蛋白質について、すでに記載され
、確立されている。固定化されたモノクローナル抗体に
結合した蛋白質を再び溶出するために使用できる条件お
よび試薬は、精製蛋白質の収率および天然の性質にとっ
て重要である。モノクローナル抗体と蛋白質の解離は、
極端なｐＨ値やカオトロピック試薬によってのみ可能で
ある場合が多く、これはしばしば、蛋白質の変性を招く
。そしてこれが、迅速で無害な精製に、モノクローナル
抗体であれば何でもよいというわけではない理由である
。
ることは、一部の他の蛋白質について、すでに記載され
、確立されている。固定化されたモノクローナル抗体に
結合した蛋白質を再び溶出するために使用できる条件お
よび試薬は、精製蛋白質の収率および天然の性質にとっ
て重要である。モノクローナル抗体と蛋白質の解離は、
極端なｐＨ値やカオトロピック試薬によってのみ可能で
ある場合が多く、これはしばしば、蛋白質の変性を招く
。そしてこれが、迅速で無害な精製に、モノクローナル
抗体であれば何でもよいというわけではない理由である
。
【０００７】本発明の目的はしたがって、適当な支持体
に結合させた場合、様々な出発原料からのＰＰ４の無害
な効率的な精製を可能にする、ＰＰ４に対するモノクロ
ーナル抗体を開発することにあった。
に結合させた場合、様々な出発原料からのＰＰ４の無害
な効率的な精製を可能にする、ＰＰ４に対するモノクロ
ーナル抗体を開発することにあった。
【０００８】本発明は、ＰＰ４に対するモノクローナル
抗体、その製造方法、およびその好ましくはＰＰ４の精
製または診断のための使用に関する。
抗体、その製造方法、およびその好ましくはＰＰ４の精
製または診断のための使用に関する。
【０００９】驚くべきことに、２価陽イオン好ましくは
カルシウムの存在下のみでアネキシンＰＰ４に結合する
モノクローナル抗体が見出された。カルシウムを含まな
いかまたはキレート剤を含有する溶液により、ＰＰ４を
生物学的に活性な形で、しかも高収率、高純度に抗体か
ら脱着させることができる。適当な支持体に結合させた
このようなモノクローナル抗体は、ヒト細胞または臓器
からのＰＰ４の精製、ならびに大腸菌または動物細胞の
培養液からの組換えＰＰ４の精製に適している。このよ
うな抗体は同様にして、診断の目的にも使用できる。
カルシウムの存在下のみでアネキシンＰＰ４に結合する
モノクローナル抗体が見出された。カルシウムを含まな
いかまたはキレート剤を含有する溶液により、ＰＰ４を
生物学的に活性な形で、しかも高収率、高純度に抗体か
ら脱着させることができる。適当な支持体に結合させた
このようなモノクローナル抗体は、ヒト細胞または臓器
からのＰＰ４の精製、ならびに大腸菌または動物細胞の
培養液からの組換えＰＰ４の精製に適している。このよ
うな抗体は同様にして、診断の目的にも使用できる。
【００１０】すでに明らかにされているように、ＰＰ４
はある種の疾患のマーカーとみなすことができる。正常
時には、ＰＰ４は、ヒト体液たとえば血漿中には、きわ
めて低濃度（０〜１０ｎｇ／ｍｌ）しか検出されない。 この蛋白質の濃度は、ある種の疾患たとえば一部の腫瘍
で有意に増大し、迅速な診断のためのパラメーターとし
て使用できる。これには、モノクローナル抗体を用い、
体液中のＰＰ４をたとえばラジオイムノアッセイまたは
酵素イムノアッセイで定量的に測定する場合と、細胞表
面上、組織抽出液中または組織学的標本たとえば組織切
片上で定性的または定量的測定を行う場合との両者が包
含される。
はある種の疾患のマーカーとみなすことができる。正常
時には、ＰＰ４は、ヒト体液たとえば血漿中には、きわ
めて低濃度（０〜１０ｎｇ／ｍｌ）しか検出されない。 この蛋白質の濃度は、ある種の疾患たとえば一部の腫瘍
で有意に増大し、迅速な診断のためのパラメーターとし
て使用できる。これには、モノクローナル抗体を用い、
体液中のＰＰ４をたとえばラジオイムノアッセイまたは
酵素イムノアッセイで定量的に測定する場合と、細胞表
面上、組織抽出液中または組織学的標本たとえば組織切
片上で定性的または定量的測定を行う場合との両者が包
含される。
【００１１】これらの目的に適当な抗体は以下の方法で
製造できる。
製造できる。
【００１２】抗体産生細胞の取得
哺乳動物、たとえばＢＡＬＢ／ｃマウスに、完全フ
ロインドアジュバント中にＰＰ４（ヒト胎盤から例１に
記載したようにして精製）５０μｇを加えたエマルジョ
ンを皮下注射する（日１）。日２８および日５６にそれ
ぞれ、不完全フロインドアジュバントに乳化したＰＰ４
（５０μｇ）を同様に皮下注射する。続いて日９２に生
理食塩水０．５ｍｌ中１００μｇのＰＰ４を腹腔内注射
する。日９５に脾臓と機械的に破壊してリンパ球を採取
する。
ロインドアジュバント中にＰＰ４（ヒト胎盤から例１に
記載したようにして精製）５０μｇを加えたエマルジョ
ンを皮下注射する（日１）。日２８および日５６にそれ
ぞれ、不完全フロインドアジュバントに乳化したＰＰ４
（５０μｇ）を同様に皮下注射する。続いて日９２に生
理食塩水０．５ｍｌ中１００μｇのＰＰ４を腹腔内注射
する。日９５に脾臓と機械的に破壊してリンパ球を採取
する。
【００１３】リンパ球のミエローマ細胞との融合 ハ
イブリドーマ細胞は標準方法（Ｋｏｅｈｌｅｒ ＆ Ｍ
ｉｌｓｔｅｉｎ：Ｎａｔｕｒｅ， ２５６：４９５〜４
９７， １９７５）によって得られる。 たとえば、ミエローマ細胞系 ＳＰ２／Ｏ−Ａｇ１４を
、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含有するダルベッコ
改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養する。融合によ
るハイブリドーマ細胞の生成には、通常、１匹のマウス
からの脾臓細胞（約１０８個）を５×１０７個のミエロ
ーマ細胞と混合し、血清を含まないＤＭＥＭで洗浄し、
遠心分離する。上澄液を完全に除去した後、ＤＭＥＭ中
濃度５０％のポリエチレングリコール４０００溶液０．
５ｍｌを１分間かけて細胞ペレットに滴加する。懸濁液
を３７℃で９０秒間インキュベートし、ついで５分間か
けてＤＭＥＭ７．５ｍｌを加えて希釈する。室温で１０
分間インキュベートした後、ＤＭＥＭを加えて４０ｍｌ
とし、細胞を遠心分離する。上澄液を吸引除去した後、
細胞を２０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ中に再懸濁し、６つの
マイクロタイタープレートに分配する（各孔に２００μ
ｌ）。 ハイブリドーマ細胞は、１３．６ｍｇ／ｍｌのヒポキサ
ンチン、０．１８ｍｇ／ｍｌのアミノプテリンおよび３
．９ｍｇ／ｍｌのチミジン（ＨＡＴ培地）を加えて選択
する。培地は３〜４日間隔で新鮮なものに置換し、１０
日後にＨＡＴ培地をＨＴ培地で置換する。
イブリドーマ細胞は標準方法（Ｋｏｅｈｌｅｒ ＆ Ｍ
ｉｌｓｔｅｉｎ：Ｎａｔｕｒｅ， ２５６：４９５〜４
９７， １９７５）によって得られる。 たとえば、ミエローマ細胞系 ＳＰ２／Ｏ−Ａｇ１４を
、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含有するダルベッコ
改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養する。融合によ
るハイブリドーマ細胞の生成には、通常、１匹のマウス
からの脾臓細胞（約１０８個）を５×１０７個のミエロ
ーマ細胞と混合し、血清を含まないＤＭＥＭで洗浄し、
遠心分離する。上澄液を完全に除去した後、ＤＭＥＭ中
濃度５０％のポリエチレングリコール４０００溶液０．
５ｍｌを１分間かけて細胞ペレットに滴加する。懸濁液
を３７℃で９０秒間インキュベートし、ついで５分間か
けてＤＭＥＭ７．５ｍｌを加えて希釈する。室温で１０
分間インキュベートした後、ＤＭＥＭを加えて４０ｍｌ
とし、細胞を遠心分離する。上澄液を吸引除去した後、
細胞を２０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ中に再懸濁し、６つの
マイクロタイタープレートに分配する（各孔に２００μ
ｌ）。 ハイブリドーマ細胞は、１３．６ｍｇ／ｍｌのヒポキサ
ンチン、０．１８ｍｇ／ｍｌのアミノプテリンおよび３
．９ｍｇ／ｍｌのチミジン（ＨＡＴ培地）を加えて選択
する。培地は３〜４日間隔で新鮮なものに置換し、１０
日後にＨＡＴ培地をＨＴ培地で置換する。
【００１４】ＰＰ４のビオチン化
ＰＰ４特異的抗体の検定にはビオチン化ＰＰ４が必
要である。これは次のようにして製造できる。ＰＰ４を
０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３、ｐＨ８．０に対して透析する
。この溶液に、蛋白質１ｍｇあたり０．１ｍｇのＤ−ビ
オチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ジメチ
ルスルホキシド中０．１％濃度溶液）を加える。反応混
合物を室温で４時間インキュベートし、ついで０．０１
Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐ
Ｈ７．２、０．１５Ｍ ＮａＣｌに対して透析する。
要である。これは次のようにして製造できる。ＰＰ４を
０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３、ｐＨ８．０に対して透析する
。この溶液に、蛋白質１ｍｇあたり０．１ｍｇのＤ−ビ
オチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ジメチ
ルスルホキシド中０．１％濃度溶液）を加える。反応混
合物を室温で４時間インキュベートし、ついで０．０１
Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐ
Ｈ７．２、０．１５Ｍ ＮａＣｌに対して透析する。
【００１５】ＰＰ４抗体の検定
融合後１４日目に、融合細胞の細胞培養上澄液を、
酵素イムノアッセイで、ＰＰ４に対する抗体について検
定する。ポリスチレンマイクロテストプレートを、０．
１Ｍ ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６中０．５μｇ／ｍｌの
ヤギ抗−マウスＩｇＧとインキュベートする（２４時間
、４℃）。 次に、細胞培養上澄液を適用し（２時間、３７℃）、つ
いでビオチン化ＰＰ４（１μｇ／ｍｌ）とインキュベー
トする。続いて３７℃で、アビジンとビオチン化ペルオ
キシダーゼの複合体（各１μｇ／ｍｌ）と３０分間イン
キュベートする。使用した基質は、０．１Ｍクエン酸、
０．１Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４中の、ｐＨ４．５の０．１％
（重量／容量）２，２′−アジノ−ジ−（３−エチルベ
ンゾチアゾリン−６−スルホネート）および０．０１２
％（容量／容量）Ｈ２Ｏ２溶液である。３７℃で３０分
間インキュベートした後、４０５ｎｍにおける吸収を測
定する。各インキュベーション工程間の洗浄は０．０１
Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐ
Ｈ７．２、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅ
ｎ ２０（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ）で行った。すべて試薬
は、０．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．４、０．
１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０２Ｍ ＣａＣｌ２、２％ウシ
血清アルブミン（ＴＢＳ／ＢＳＡ）に希釈する。酵素イ
ムノアッセイは、同じ細胞培養上澄液を用いるが、希釈
緩衝液中の塩化カルシウムを０．０２Ｍ ＥＤＴＡで置
換した実験を平行して実施する。ＣａＣｌ２の存在下に
のみＰＰ４と結合し、ＥＤＴＡの存在下には結合しない
抗体を選択する。これらはＰＰ４のイムノアフィニティ
ークロマトグラフィーによる精製にとくに適している。
酵素イムノアッセイで、ＰＰ４に対する抗体について検
定する。ポリスチレンマイクロテストプレートを、０．
１Ｍ ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６中０．５μｇ／ｍｌの
ヤギ抗−マウスＩｇＧとインキュベートする（２４時間
、４℃）。 次に、細胞培養上澄液を適用し（２時間、３７℃）、つ
いでビオチン化ＰＰ４（１μｇ／ｍｌ）とインキュベー
トする。続いて３７℃で、アビジンとビオチン化ペルオ
キシダーゼの複合体（各１μｇ／ｍｌ）と３０分間イン
キュベートする。使用した基質は、０．１Ｍクエン酸、
０．１Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４中の、ｐＨ４．５の０．１％
（重量／容量）２，２′−アジノ−ジ−（３−エチルベ
ンゾチアゾリン−６−スルホネート）および０．０１２
％（容量／容量）Ｈ２Ｏ２溶液である。３７℃で３０分
間インキュベートした後、４０５ｎｍにおける吸収を測
定する。各インキュベーション工程間の洗浄は０．０１
Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐ
Ｈ７．２、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅ
ｎ ２０（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ）で行った。すべて試薬
は、０．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．４、０．
１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０２Ｍ ＣａＣｌ２、２％ウシ
血清アルブミン（ＴＢＳ／ＢＳＡ）に希釈する。酵素イ
ムノアッセイは、同じ細胞培養上澄液を用いるが、希釈
緩衝液中の塩化カルシウムを０．０２Ｍ ＥＤＴＡで置
換した実験を平行して実施する。ＣａＣｌ２の存在下に
のみＰＰ４と結合し、ＥＤＴＡの存在下には結合しない
抗体を選択する。これらはＰＰ４のイムノアフィニティ
ークロマトグラフィーによる精製にとくに適している。
【００１６】抗体産生細胞系のクローニング ＥＤＴ
Ａの存在下におけるＰＰ４抗体の検定では陽性反応を示
すが、カルシウムの存在下には陽性反応を示さない細胞
系を、限界希釈法でクローン化する。このためには、２
０％ＦＣＳおよび５％ヒト内皮培養上澄液（Ｃｏｓｔａ
ｒ）含有ＤＭＥＭ ２０ｍｌ中約６０個の細胞を９６孔
の細胞培養プレート上に分配する。単一のクローンにつ
いて顕微鏡下に同定し、抗体産生を検定する。クローニ
ングは２回反復する。
Ａの存在下におけるＰＰ４抗体の検定では陽性反応を示
すが、カルシウムの存在下には陽性反応を示さない細胞
系を、限界希釈法でクローン化する。このためには、２
０％ＦＣＳおよび５％ヒト内皮培養上澄液（Ｃｏｓｔａ
ｒ）含有ＤＭＥＭ ２０ｍｌ中約６０個の細胞を９６孔
の細胞培養プレート上に分配する。単一のクローンにつ
いて顕微鏡下に同定し、抗体産生を検定する。クローニ
ングは２回反復する。
【００１７】モノクローナル抗体の精製 抗体の製造
には、クローン細胞系を回転瓶に移し、イスコブ改良ダ
ルベッコ培地中で培養する。細胞上澄液を遠心分離によ
って得て、限外濾過により約１０倍に濃縮する。濃縮液
をプロテインＡ−ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ−４Ｂ（
Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に通過させ、結合したＩｇＧを０
．２Ｍグリシン／ＨＣｌ、ｐＨ３．０で溶出する。蛋白
質含有分画を０．１Ｍクエン酸塩、ｐＨ６．５に対して
透析し、限外濾過によって約５ｍｇ／ｍｌに濃縮する。 これにより、たとえば等電点クロマトグラフィーにより
ｐＨ範囲６．２〜６．５に数個のバンドが現れ、カルシ
ウムイオンの存在下にＰＰ４が結合するＩｇＧカッパサ
ブタイプの抗体が得られる。
には、クローン細胞系を回転瓶に移し、イスコブ改良ダ
ルベッコ培地中で培養する。細胞上澄液を遠心分離によ
って得て、限外濾過により約１０倍に濃縮する。濃縮液
をプロテインＡ−ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ−４Ｂ（
Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に通過させ、結合したＩｇＧを０
．２Ｍグリシン／ＨＣｌ、ｐＨ３．０で溶出する。蛋白
質含有分画を０．１Ｍクエン酸塩、ｐＨ６．５に対して
透析し、限外濾過によって約５ｍｇ／ｍｌに濃縮する。 これにより、たとえば等電点クロマトグラフィーにより
ｐＨ範囲６．２〜６．５に数個のバンドが現れ、カルシ
ウムイオンの存在下にＰＰ４が結合するＩｇＧカッパサ
ブタイプの抗体が得られる。
【００１８】適当なイムノアフィニティーゲルは以下の
方法で製造できる。製造方法を上述したモノクローナル
抗体のひとつを適当な不溶性支持体材料（たとえば、ア
ガロース、セルロース、ポリアクリルアミドおよびその
誘導体）上に、本技術分野の熟練者にはよく知られた方
法（たとえばシアノーゲンブロミド、エポキシドまたは
カルボジイミドによる活性化）で固定化する。好ましい
操作においては、このようなモノクローナル抗体を、製
造業者の説明書に従って予めシアノーゲンブロミドで活
性化したＲＳｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ）にカップリングさせることが可能である。たとえ
ば５ｍｇの抗体を１ｍｌのゲルに結合させることができ
る。これらのゲルはついで、ＰＰ４のイムノアフィニテ
ィークロマトグラフィーに使用できる。
方法で製造できる。製造方法を上述したモノクローナル
抗体のひとつを適当な不溶性支持体材料（たとえば、ア
ガロース、セルロース、ポリアクリルアミドおよびその
誘導体）上に、本技術分野の熟練者にはよく知られた方
法（たとえばシアノーゲンブロミド、エポキシドまたは
カルボジイミドによる活性化）で固定化する。好ましい
操作においては、このようなモノクローナル抗体を、製
造業者の説明書に従って予めシアノーゲンブロミドで活
性化したＲＳｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ）にカップリングさせることが可能である。たとえ
ば５ｍｇの抗体を１ｍｌのゲルに結合させることができ
る。これらのゲルはついで、ＰＰ４のイムノアフィニテ
ィークロマトグラフィーに使用できる。
【００１９】以下の実施例により、本発明を例示する。
【００２０】実施例 １
ヒト胎盤からのＰＰ４の精製および生物活性の測定ヒト
胎盤３６ｋｇを粉砕し、０．１５Ｍ ＮａＣｌで数回洗
浄し、ついで凍結乾燥した。凍結乾燥物（３ｋｇ）を０
．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．５、０．１５Ｍ
ＮａＣｌ、０．１Ｍクエン酸三ナトリウム ５０ｌで
抽出し、硫酸アンモニウム（３３％飽和）と混合し、４
ｌのフェニル−ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅとバッチ法でイン
キュベートした。樹脂を洗浄した後、ＰＰ４を水で直ち
に溶出させ、硫酸アンモニウムを８０％飽和まで加えて
沈殿させ、遠心分離してペレット化し、０．０２Ｍ Ｔ
ｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ８．０（緩衝液Ａ）に取り、同じ
緩衝液に対して透析した。ＣａＣｌ２を最終濃度０．０
０５Ｍまで添加した後、透析液をバッチ法でヘパリン−
ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅ １ｌと混合し、室温で６０分間
撹拌し、上澄液を分離した。吸着剤を次に、０．００５
Ｍ ＣａＣｌ２添加緩衝液Ａで洗浄した。ＰＰ４は、カ
ルシウム含有緩衝液Ａ中０〜０．５Ｍ ＮａＣｌの直線
勾配によって溶出した。ＰＰ４含有分画を透析後、ＥＤ
ＴＡを最終濃度０．００１Ｍになるように加え、透析液
を、０．００１Ｍ ＥＤＴＡ含有緩衝液Ａに平衡化した
ヘパリン−ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅ ２００ｍｌと接触さ
せ、室温で６０分間撹拌し、ついで上澄のＰＰ４含有溶
液を分離した。必要ならば、ＰＰ４含有溶液をＤＥＡＥ
−ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅと接触させ、蛋白質を直線Ｎａ
Ｃｌ勾配で溶出した。 この方法で精製したＰＰ４は、ＳＤＳポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）において、分子量３３ｋＤ
ａの１個のバンドとして現れた。ＰＰ４は５種の他のア
ネキシンに対するポリクローナル抗体と交差反応を示さ
なかった。
胎盤３６ｋｇを粉砕し、０．１５Ｍ ＮａＣｌで数回洗
浄し、ついで凍結乾燥した。凍結乾燥物（３ｋｇ）を０
．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．５、０．１５Ｍ
ＮａＣｌ、０．１Ｍクエン酸三ナトリウム ５０ｌで
抽出し、硫酸アンモニウム（３３％飽和）と混合し、４
ｌのフェニル−ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅとバッチ法でイン
キュベートした。樹脂を洗浄した後、ＰＰ４を水で直ち
に溶出させ、硫酸アンモニウムを８０％飽和まで加えて
沈殿させ、遠心分離してペレット化し、０．０２Ｍ Ｔ
ｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ８．０（緩衝液Ａ）に取り、同じ
緩衝液に対して透析した。ＣａＣｌ２を最終濃度０．０
０５Ｍまで添加した後、透析液をバッチ法でヘパリン−
ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅ １ｌと混合し、室温で６０分間
撹拌し、上澄液を分離した。吸着剤を次に、０．００５
Ｍ ＣａＣｌ２添加緩衝液Ａで洗浄した。ＰＰ４は、カ
ルシウム含有緩衝液Ａ中０〜０．５Ｍ ＮａＣｌの直線
勾配によって溶出した。ＰＰ４含有分画を透析後、ＥＤ
ＴＡを最終濃度０．００１Ｍになるように加え、透析液
を、０．００１Ｍ ＥＤＴＡ含有緩衝液Ａに平衡化した
ヘパリン−ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅ ２００ｍｌと接触さ
せ、室温で６０分間撹拌し、ついで上澄のＰＰ４含有溶
液を分離した。必要ならば、ＰＰ４含有溶液をＤＥＡＥ
−ＲＳｅｐｈａｒｏｓｅと接触させ、蛋白質を直線Ｎａ
Ｃｌ勾配で溶出した。 この方法で精製したＰＰ４は、ＳＤＳポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）において、分子量３３ｋＤ
ａの１個のバンドとして現れた。ＰＰ４は５種の他のア
ネキシンに対するポリクローナル抗体と交差反応を示さ
なかった。
【００２１】ＰＰ４の抗凝固活性は、改良プロトロンビ
ン時間試験によって調べた。加クエン酸血漿（標準ヒト
血漿）５０μｌを、０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐ
Ｈ７．５、０．１５Ｍ ＮａＣｌの溶液１５０μｌ、お
よび緩衝液またはサンプル２５μｌ、およびカルシウム
を含まないトロンボプラスチン２５μｌと混合した。こ
の混合物を３７℃で３分間インキュベートした。凝固は
０．０２Ｍ ＣａＣｌ２溶液２５μｌの添加によって開
始させた。凝固時間はＳｃｈｎｉｔｇｅｒとＧｒｏｓｓ
の凝固計を用いて測定した。上述のようにして精製した
ＰＰ４を使用して検量曲線を構築した。
ン時間試験によって調べた。加クエン酸血漿（標準ヒト
血漿）５０μｌを、０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐ
Ｈ７．５、０．１５Ｍ ＮａＣｌの溶液１５０μｌ、お
よび緩衝液またはサンプル２５μｌ、およびカルシウム
を含まないトロンボプラスチン２５μｌと混合した。こ
の混合物を３７℃で３分間インキュベートした。凝固は
０．０２Ｍ ＣａＣｌ２溶液２５μｌの添加によって開
始させた。凝固時間はＳｃｈｎｉｔｇｅｒとＧｒｏｓｓ
の凝固計を用いて測定した。上述のようにして精製した
ＰＰ４を使用して検量曲線を構築した。
【００２２】実施例 ２
ヒト胎盤からのＰＰ４のイムノアフィニティークロマト
グラフィーによる精製成熟ヒト胎盤を実施例１に記載し
たようにして洗浄し、凍結乾燥し、クエン酸緩衝液で抽
出した。この抽出液を０．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、
ｐＨ７．５に対して透析した。４．５ｍｇのＰＰ４を含
有する（実施例４に記載する酵素イムノアッセイで測定
）透析液のサンプルをＣａＣｌ２と混合し（最終濃度０
．０２Ｍ）、ポンプでアフィニティーゲル（２０ｍｇの
モノクローナル抗体が４ｍｌのＣＮＢｒ活性化ＲＳｅｐ
ｈａｒｏｓｅ ４Ｂにカップリング）を通過させた。非
結合蛋白質を次に１００ｍｌのＴＢＳ／カルシウム（０
．０２Ｍ Ｔｒｉｓ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０２
Ｍ ＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）で洗浄除去した。 ついでゲルをカルシウムを含まないＴＢＳ ３０ｍｌで
洗浄すると、ＰＰ４が抗体から溶出した。抗原の収率お
よびイムノアフィニティークロマトグラフィーからの活
性はそれぞれ９２および９０％であった。ＰＰ４はＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥにおいて分子量３３ｋＤａのバンドとして
現れる。
グラフィーによる精製成熟ヒト胎盤を実施例１に記載し
たようにして洗浄し、凍結乾燥し、クエン酸緩衝液で抽
出した。この抽出液を０．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、
ｐＨ７．５に対して透析した。４．５ｍｇのＰＰ４を含
有する（実施例４に記載する酵素イムノアッセイで測定
）透析液のサンプルをＣａＣｌ２と混合し（最終濃度０
．０２Ｍ）、ポンプでアフィニティーゲル（２０ｍｇの
モノクローナル抗体が４ｍｌのＣＮＢｒ活性化ＲＳｅｐ
ｈａｒｏｓｅ ４Ｂにカップリング）を通過させた。非
結合蛋白質を次に１００ｍｌのＴＢＳ／カルシウム（０
．０２Ｍ Ｔｒｉｓ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．０２
Ｍ ＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）で洗浄除去した。 ついでゲルをカルシウムを含まないＴＢＳ ３０ｍｌで
洗浄すると、ＰＰ４が抗体から溶出した。抗原の収率お
よびイムノアフィニティークロマトグラフィーからの活
性はそれぞれ９２および９０％であった。ＰＰ４はＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥにおいて分子量３３ｋＤａのバンドとして
現れる。
【００２３】実施例 ３
大腸菌からの組換えＰＰ４の、イムノアフィニティーク
ロマトグラフィーによる精製 ヒト胎盤遺伝子バンクから単離され特性づけられたＰＰ
４をコードするｃＤＮＡをクローン化し、ベクター ｐ
Ｔｒｃ９９Ａによる大腸菌内での発現に使用した。組換
えＰＰ４（ｒ−ＰＰ４）は、大腸菌株Ｗ３１１０ｌａｃ
ＩＱの培養によって発現させた。大腸菌は、本技術分野
の熟練者にはよく知られた操作によって培養した。培養
完了後、細胞を遠心分離によって収穫した。ペレットを
０．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．５および０．
０１ＭＥＤＴＡ中に再懸濁し、細胞をフレンチプレスを
用いて溶解させた。細胞フラグメントを遠心分離によっ
て除去し、ついで上澄液を０．４５μｍフィルターを通
して濾過して精製した。ｒ−ＰＰ４含有溶液をＲＴｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１００と混合し、０．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／
ＨＣｌ、ｐＨ７．５の緩衝液に対して透析した。３．８
ｍｇのＰＰ４（実施例４に記載の酵素イムノアッセイで
測定）を含有する透析液のサンプルをＣａＣｌ２（最終
濃度０．０２Ｍ）と混合し、生成した沈殿を遠心分離し
、上澄液を実施例２に記載のイムノアフィニティークロ
マトグラフィーで精製した。ＰＰ４抗原の収率およびそ
の活性（実施例４に記載の酵素イムノアッセイ、および
実施例１に記載の活性検定によりそれぞれ測定）はそれ
ぞれ９４および９３％であった。この蛋白質はＳＤＳゲ
ルにおいて分子量３３ｋＤａの均一性を示した。
ロマトグラフィーによる精製 ヒト胎盤遺伝子バンクから単離され特性づけられたＰＰ
４をコードするｃＤＮＡをクローン化し、ベクター ｐ
Ｔｒｃ９９Ａによる大腸菌内での発現に使用した。組換
えＰＰ４（ｒ−ＰＰ４）は、大腸菌株Ｗ３１１０ｌａｃ
ＩＱの培養によって発現させた。大腸菌は、本技術分野
の熟練者にはよく知られた操作によって培養した。培養
完了後、細胞を遠心分離によって収穫した。ペレットを
０．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．５および０．
０１ＭＥＤＴＡ中に再懸濁し、細胞をフレンチプレスを
用いて溶解させた。細胞フラグメントを遠心分離によっ
て除去し、ついで上澄液を０．４５μｍフィルターを通
して濾過して精製した。ｒ−ＰＰ４含有溶液をＲＴｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１００と混合し、０．０２Ｍ Ｔｒｉｓ／
ＨＣｌ、ｐＨ７．５の緩衝液に対して透析した。３．８
ｍｇのＰＰ４（実施例４に記載の酵素イムノアッセイで
測定）を含有する透析液のサンプルをＣａＣｌ２（最終
濃度０．０２Ｍ）と混合し、生成した沈殿を遠心分離し
、上澄液を実施例２に記載のイムノアフィニティークロ
マトグラフィーで精製した。ＰＰ４抗原の収率およびそ
の活性（実施例４に記載の酵素イムノアッセイ、および
実施例１に記載の活性検定によりそれぞれ測定）はそれ
ぞれ９４および９３％であった。この蛋白質はＳＤＳゲ
ルにおいて分子量３３ｋＤａの均一性を示した。
【００２４】実施例 ４
ＰＰ４抗原の定量のサンドイッチＥＬＩＳＡ生物学的液
体中のＰＰ４の定量用にサンドイッチＥＬＩＳＡを開発
した。マイクロタイタープレートをＰＰ４に対するポリ
クローナル抗体（１〜２０μｇ／ｍｌ）でコーティング
した。この抗体をコーティングしたプレート上でＰＰ４
含有サンプル（たとえば胎盤組織抽出液、大腸菌溶解物
または血漿）をインキュベートした。次にビオチン化モ
ノクローナル抗体（２μｇ／ｍｌ）、ついでアビジンと
ビオチン化ペルオキシダーゼの複合体とのインキュベー
ションを行った。酵素イムノアッセイおよびペルオキシ
ダーゼ活性の検出操作は、「ＰＰ４抗体の検定」の項に
記載したとおりとした。実施例１の記載のようにして胎
盤から精製したＰＰ４を用いて検量線を構築した。濃度
範囲１２５ｎｇ／ｍｌ〜２ｎｇ／ｍｌでＰＰ４の測定が
可能であった（表１）。
体中のＰＰ４の定量用にサンドイッチＥＬＩＳＡを開発
した。マイクロタイタープレートをＰＰ４に対するポリ
クローナル抗体（１〜２０μｇ／ｍｌ）でコーティング
した。この抗体をコーティングしたプレート上でＰＰ４
含有サンプル（たとえば胎盤組織抽出液、大腸菌溶解物
または血漿）をインキュベートした。次にビオチン化モ
ノクローナル抗体（２μｇ／ｍｌ）、ついでアビジンと
ビオチン化ペルオキシダーゼの複合体とのインキュベー
ションを行った。酵素イムノアッセイおよびペルオキシ
ダーゼ活性の検出操作は、「ＰＰ４抗体の検定」の項に
記載したとおりとした。実施例１の記載のようにして胎
盤から精製したＰＰ４を用いて検量線を構築した。濃度
範囲１２５ｎｇ／ｍｌ〜２ｎｇ／ｍｌでＰＰ４の測定が
可能であった（表１）。
【００２５】
【表１】
Claims (10)
- 【請求項１】 ＰＰ４に対するモノクローナル抗体。
- 【請求項２】 ２価金属イオンの存在下にのみＰＰ４
に結合する、請求項１記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項３】 カルシウムイオンの存在下にのみＰＰ
４に結合する、請求項１記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項４】 ＰＰ４を哺乳動物に注射し、この動物
のリンパ器官からリンパ球を得、これらをミエローマ細
胞系の細胞と融合させ、形成したハイブリドーマを培養
し、細胞上澄液についてＰＰ４と反応性を示す抗体の試
験を行い、ハイブリドーマをクローニングし、得られた
クローンを培養し、培養液からＰＰ４に対するモノクロ
ーナル抗体を得ることからなる、請求項１記載のモノク
ローナル抗体の製造方法。 - 【請求項５】 ２価金属イオンの存在下にのみＰＰ４
に結合するモノクローナル抗体を得る、請求項４記載の
方法。 - 【請求項６】 ＰＰ４に対するモノクローナル抗体の
、ＰＰ４の精製のための使用。 - 【請求項７】 抗体は不溶性材料に結合させる、請求
項６記載の方法。 - 【請求項８】 診断補助剤としてまたは診断方法にお
けるＰＰ４に対するモノクローナル抗体の使用。 - 【請求項９】 ＰＰ４に対するモノクローナル抗体と
クロマトグラフィー精製過程に適当な不溶性材料に結合
させ、結合抗体上に溶液からのＰＰ４を吸着させ、そし
てＰＰ４を溶出させることからなるＰＰ４の精製方法。 - 【請求項１０】 モノクローナル抗体は２価金属イオ
ンの存在下にのみＰＰ４が結合する抗体であり、ＰＰ４
はこのような金属イオンを錯体型で含有するかまたは全
く含まない溶液で溶出する、請求項９記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4012341A DE4012341A1 (de) | 1990-04-18 | 1990-04-18 | Monoklonale antikoerper gegen pp4, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE4012341.3 | 1990-04-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04228090A true JPH04228090A (ja) | 1992-08-18 |
Family
ID=6404578
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3110865A Pending JPH04228090A (ja) | 1990-04-18 | 1991-04-17 | Ｐｐ４に対するモノクローナル抗体およびその製造方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0452849A1 (ja) |
| JP (1) | JPH04228090A (ja) |
| KR (1) | KR910018041A (ja) |
| AU (1) | AU7504691A (ja) |
| CA (1) | CA2040722A1 (ja) |
| DE (1) | DE4012341A1 (ja) |
| IE (1) | IE911285A1 (ja) |
| PT (1) | PT97389A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003535309A (ja) * | 1999-08-06 | 2003-11-25 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | がんのマーカーとして使用されるアネキシン類及び自己抗体 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PT672136E (pt) * | 1992-07-08 | 2000-08-31 | Innogenetics Nv | Polipeptidos derivados da endonexina 2 tendo actividade receptora do virus da hepatite b e sua utilizacao em diagnostico e composicoes farmaceuticas |
| US5968477A (en) | 1994-01-24 | 1999-10-19 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator |
| US20030220233A1 (en) | 1994-01-24 | 2003-11-27 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexins |
| US5767247A (en) * | 1994-11-11 | 1998-06-16 | Noboru Kaneko | Anti-annexin-V monoclonal antibodies, and preparation and use thereof |
| GB2542391A (en) | 2015-09-17 | 2017-03-22 | Annexin Pharmaceuticals Ab | Process of manufacture |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08840B2 (ja) * | 1986-11-14 | 1996-01-10 | 興和株式会社 | 抗ｐｃｉモノクローナル抗体、これを用いた抗ｐｃｉの精製法及び免疫学的測定法 |
| DE3737237A1 (de) * | 1987-11-03 | 1989-05-18 | Behringwerke Ag | Anticoagulatorisches protein pp4-x, seine herstellung und verwendung |
| DE3737239A1 (de) * | 1987-11-03 | 1989-10-12 | Behringwerke Ag | Gentechnische herstellung von anticoagulatorischem protein pp4 |
| DE3810331A1 (de) * | 1988-03-26 | 1989-10-05 | Boehringer Ingelheim Int | Monoklonale vac-antikoerper |
| JP2639684B2 (ja) * | 1988-04-08 | 1997-08-13 | 興和株式会社 | 抗ｃｐｂ▲ｉｉ▼モノクローナル抗体 |
-
1990
- 1990-04-18 DE DE4012341A patent/DE4012341A1/de not_active Withdrawn
-
1991
- 1991-04-15 EP EP91105971A patent/EP0452849A1/de not_active Withdrawn
- 1991-04-17 IE IE128591A patent/IE911285A1/en unknown
- 1991-04-17 JP JP3110865A patent/JPH04228090A/ja active Pending
- 1991-04-17 PT PT97389A patent/PT97389A/pt not_active Application Discontinuation
- 1991-04-17 AU AU75046/91A patent/AU7504691A/en not_active Abandoned
- 1991-04-17 CA CA002040722A patent/CA2040722A1/en not_active Abandoned
- 1991-04-18 KR KR1019910006194A patent/KR910018041A/ko not_active Application Discontinuation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003535309A (ja) * | 1999-08-06 | 2003-11-25 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | がんのマーカーとして使用されるアネキシン類及び自己抗体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0452849A1 (de) | 1991-10-23 |
| CA2040722A1 (en) | 1991-10-19 |
| AU7504691A (en) | 1991-10-24 |
| PT97389A (pt) | 1992-01-31 |
| DE4012341A1 (de) | 1991-10-24 |
| IE911285A1 (en) | 1991-10-23 |
| KR910018041A (ko) | 1991-11-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0669390B2 (ja) | ヒト−レニンに対するモノクロ−ナル抗体及びその使用 | |
| JPS60120825A (ja) | 抗プロテインｃモノクロ−ナル抗体およびそれを産生するハイブリド−マ | |
| JPH04228090A (ja) | Ｐｐ４に対するモノクローナル抗体およびその製造方法 | |
| KR960013460B1 (ko) | 안티-pci 모노클로날 항체 | |
| JP3889084B2 (ja) | 新規なモノクローナル抗体並びにｅ−Ｄダイマー及びｅ−ＤＤ／Ｅ複合体の免疫学的測定法 | |
| JPH09176199A (ja) | 抗ファクターＸａ・ティシュファクターパスウェイインヒビター複合体モノクローナル抗体及びその使用 | |
| KR960002740B1 (ko) | 안티-트롬빈-결합물질 모노클로날 항체, 이를 생산하는 하이브리도마 및 모노클로날 항체를 이용한 트롬빈-결합물질의 정제법 및 측정법 | |
| JP3098640B2 (ja) | ヒト７２−ｋＤａゼラチナーゼ／ＩＶ型コラゲナーゼの免疫学的定量法 | |
| JP3076640B2 (ja) | ヒト９２ｋＤａゼラチナーゼの免疫学的定量法 | |
| US5688919A (en) | Process for the purification of factor XIII, monoclonal antibodies against factor XIIIA, the preparation and use thereof | |
| FI86255C (fi) | Monoklonal antiurokinase-antikropp, den innehaollande matris och biokemiska testpackningar, i vilka den anvaendes. | |
| JPH02276591A (ja) | Ａｎｐのｃ端側を認識するモノクローナル抗体 | |
| EP0417298A1 (en) | Detection of human tissue factor activator | |
| JPH0977799A (ja) | ヒト−マクロファージ遊走阻止因子（ヒト−ｍｉｆ）に対するモノクローナル抗体および該抗体を産生するハイブリドーマ | |
| JP4612922B2 (ja) | 新規のモノクローナル抗体並びにｅ−Ｄモノマー、ｅ−Ｄダイマー、及びｅ−ＤＤ／Ｅ複合体の免疫学的分析方法 | |
| JPH02203795A (ja) | 抗ヒト組織因子モノクローナル抗体 | |
| JP2639684B2 (ja) | 抗ｃｐｂ▲ｉｉ▼モノクローナル抗体 | |
| JP4608570B2 (ja) | 新規なモノクローナル抗体及びニックβ２グリコプロテインＩの免疫学的分析方法 | |
| JP2739977B2 (ja) | ガン遺伝子産物に対するモノクローナル抗体 | |
| JPS61181964A (ja) | 人正常細胞由来の組織型プラスミノーゲンアクチベーターに対するモノクロナル抗体を用いる免疫学的測定試薬 | |
| JPH069695A (ja) | プラスミノーゲンアクティベーターインヒビター２のイムノアフィニティークロマトグラフィーによる精製 | |
| Vockley et al. | Purification of monoclonal antibodies to human alkaline phosphatases by antigen-immunoaffinity chromatography: comparisons of their molar binding values | |
| JPS62236494A (ja) | シグナルペプチダ−ゼに対するモノクロ−ナル抗体、およびそれを産生するハイブリド−マ | |
| JPS63141595A (ja) | 抗ヒトフエリチンｈ型サブユニツト単クロ−ン性抗体及びこれを産生するハイブリド−マ並びにこれを利用するヒトフエリチンｈ型サブユニツト量の測定法 | |
| JPH08187082A (ja) | 抗ｐｃｉモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ |