JPH03503238A - 糖代用物質の製造に有用なオリゴデキストランの酵素による合成方法および新規なオリゴデキストラン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 糖代用物質の製造に有用なオリゴデキストランの酵素による合成方法および新規 なオリゴデキストラン本発明は、糖代用物質の製造に有用なオリゴデキストラン の酵素による合成方法および新規なオリゴデキストランに関する。

乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅ ｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）をショ糖に作用させることによる、分子量が１００万を超 える（すなわち、グルコース単位が６０００を超える重合度の）高分子量デキス トランの合成は既知である。また、この菌が、株によっては、α（１→２）グル コシド結合を有し該結合が分岐点を構成しているデキストランを生産することも 既知である。

しかし、本発明以前には、ショ糖とショ糖由来のグルコース残基の受容体となる 糖（糖受容体）とから出発して、少なくとも１つのα（１→２）グルコシド結合 を含むオリゴデキストラン（低い重合度のデキストラン）を酵素により直接合成 する方法は知られていなかった。

本発明は、まさにこのような方法を提供する。

より正確には１本発明は、少なくとも１つのα（１→２）グルコシド結合を含む オリゴデキストランおよび一般式：％式％ 〔ここで、Ａは、マルトース、イソマルトース、イソマルトトリオース、α−メ チルグルコシドおよびグルコースの中から選ばれるグルコースの受容体となる糖 の残基であり、ｍは１〜１０の値をとり、ｎは１〜３０の値をとる。また、α（ １→２）グルコシド結合の位置は任意である。〕に対応するオリゴデキストラン を高い割合で含むオリゴデキストラン混合物の製造方法であって、ショ糖とマル トース、イソマルトース、イソマルトトリオース、α−メチルグルコシドおよび グルコースの中から選ばれるグルコースの受容体となる糖とを、α（１→２）グ ルコシド結合を含むデキストランを醗酵により生産する能力を有する乳酸菌ロイ コノストック・メセンテロイデス少なくとも１株から抽出したグルコシルトラン スフェラーゼ酵素の存在下に、水性媒質中、２〜４８時間接触させることを特徴 とする方法に関する。

上記式中、α（１→２）グルコシド結合の位置は、特に、基Ａの性質およびオリ ゴデキストランの分子量（これはそれ自体が反応条件に依存する）によって変化 する。こうした結合は、たとえば、主鎖上もしくは分枝上に存在し、またはオリ ゴデキストランの分岐点を形成する。

好適な乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスの例には。

ＮＲＲＬ　Ｂ−１２９９、Ｂ−１３９９，８−１３９７、Ｂ−１２９８、Ｂ−１ ３９６，８−１４２４゜８−１３８２、Ｂ−１１４９およびＢ−５２３が含まれ る。

本発明の方法により生産されるオリゴデキストラン（オリゴサツカリドとも呼ば れる）のいくつかは新規化合物である。しかし、デキストランＮＲＲＬ　Ｂ−１ ３９７のアセトリシスによるトリサツカリド（０−α−Ｄ−グルコピラノシル− （１→２）−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−（α−（１→６）−Ｄ−グルコー スの製造については、ケイ・サカキバラ等が「カーボハイドレート・リサーチｊ 　　（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）第２５号（１９７２）第 ４４３〜４５１頁で記載している。また、ワイ・ミツイシ等は、「カーボハイド レート・リサーチ」（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）第１２７ 号（１９８４）第３３１〜３３７頁で、α（１→２）グルコシド結合部分で分岐 したオリゴサツカリドについて記載している。

よって１本発明は、新規物質である、式：（０−α−Ｄ−グルコピラノシル−（ １→２））ｍ（０−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６））ｎＡ 〔ここで、Ａは、マルトース、イソマルトース、イソマルトトリオース、α−メ チルグルコシドおよびグルコースの中から選ばれるグルコースの受容体となる糖 の残基であり、ｍば１〜１０の値をとり、ｎは１〜３０の値をとる。また、α（ １→２）グルコシド結合の位置は任意である。〕に対応するオリゴデキストラン にも関する。

本発明によって生産されるオリゴデキストランは、非還元性の末端に位置するか またはオリゴデキストランの分岐点を形成するα（１→２）グルコシド結合を含 んでおり、新規物質であるか否かに関わらず、エンドデキストラナーゼやグルコ アミラーゼ等のグルコハイドロラーゼによる酵素加水分解に対して特に抵抗性が ある。これは、非還元性の末端に位置するかまたはオリゴデキストランの分岐点 を形成する特殊なα（１→２）グルコこの性質により、上記オリゴデキストラン は、ヒトによってはほとんどまたは全く代謝されることのない糖代用物質充填剤 ・増量剤として有用である。したがって、アスパラタムのような強力な甘味剤と 混合して、低カロリー食品の処方に使用することができる。

また１本発明のオリゴサツカリドは、腸内フロラ中の有益な微生物の増殖生長を 促進する。この性質により、これらオリゴデキストランは（畜産上有益な）動物 用飼料の添加剤として、また（食餌療法および栄養上の）食品添加剤として有用 である。

よって、本発明は、非還元性の末端に位置するかまたはオリゴデキストランの分 岐点を形成するα（１→２）グルコシド結合を少なくとも１含み、式： （０−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２））ｍ（０−α−Ｄ−グルコピラノ シル＝（１→６））ｎＡ 〔ここで、Ａは、マルトース、イソマルトース、イソマルトトリオース、α−メ チルグルコシドおよびグルコースの中から選ばれるグルコースの受容体となる糖 の残基であり、ｍは１〜１゜の値をとり、ｎは１〜３０の値をとる。また、α（ １→２）グルコシド結合の位置は任意である。〕に対応するオリゴデキストラン を高い割合で含むオリゴデキストラン混合物の利用（たとえば、糖代用物の増量 剤や食品添加剤として）にも関する。

上述のとおり、酵素合成反応は、α（１→２）グルコシド結合を含むデキストラ ンを醗酵により生産する能力を有する乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデ ス少なくとも１株から抽出したグルコシルトランスフェラーゼ酵素（Ｅ、Ｃ：　 ２．４．１．５）の存在下に行なわれる。この反応は、全体としては次の反応式 で表わすことができる： グルコシルトランスフェラーゼ シヨ糖＋糖受容体　　　　　　　　　　オリゴデキストラン＋フルクトース特に 好適な菌株は、ＮＲＲＬ　Ｂ−１２９９、Ｂ−１３９９、Ｂ−１３９７、Ｂ−１ ２９８、Ｂ−１３９６、Ｂ−１４２４、Ｂ−１３８２、Ｂ−１１４９およびＢ− ５２３である。これらは、Ｎ、Ｎ、Ｒ，Ｃ，（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｒｅｇｊｏｎ ａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ）より入手できる。その宛先は以下のと おりである：　ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈ　５ｅｒｖｉｃｅ、 　Ｕ、Ｓ、　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ、　１８１ ５Ｎｏｒｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　５ｔｒｅｅｔ、　Ｐｅｏｒｉａ、　ｌ１ ｌｉｎｏｉｓ　６１６０４．　ＵＳＡ、これらは、１９５０代初め１、土壌分離 菌の淘汰によって特徴づけが行なわれ、特に５次の刊行物中に、一覧目録が記載 されている：”Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｌａｓｓｉｆｉ ｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｅｘｔｒａｎｓｆｒｏｍ　　ｎ１ｎｅｔｙ−ｓｉｘ　　 ５ｔｒａｉｎｓ　　ｏｆ　　ｂａｃｔｅｒｉａ”、　　Ａ、　　Ｊｅａｎｅｓ　 　ｅｔ　　ａｌ。

（１９５４）、　Ｊ、　Ａｙｍｅｒ、　Ｃｈｅｔａ、　Ｓｏｃ、　７６、５０４ １−５０５２゜言うまでもなく、上記の菌株の代わりに、これらの菌株より常套 的方法（すなわち菌株に対する放射線照射や化学薬品の作用）によって突然変異 を生成させ、生残った個体を培養して得られる菌株を使用してもよいし、自然変 異株の淘汰により得られる菌株を使用してもよい。これらの変異株は、本発明の 目的においては、上記菌株と等価なものと考えられる。

グルコシルトランスフェラーゼは、適当な乳酸菌ロイコノストック・メセンテロ イデス株、たとえば、ＮＲＲＬ　Ｂ−１２９９を、適当な栄養培地、特に、グル コシルトランスフェラーゼの生産を誘導するようにショ糖を含有する培地上で培 養することによって得られる。酵素活性分は、菌が生長した後にポリエチレング リコールを添加して、各種グルコシルトランスフェラーゼ（細胞外のもの、細胞 や不溶性多糖類に結合した状態のものおよび細胞内のもの）を沈降・濃縮するこ とによって抽出される。このため、この酵素調製品には、Ｌ、　ｎ＋ｅｓｅｎｔ ｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９の細胞全体が含まれる。培養の最終段階で、一つ には酵素活性を増加させるため、また一つには細胞を破壊するために、既知の細 胞粉砕法（機械的粉砕または化学物質もしくは酵素（リゾチーム等）の使用）を 用いてもよい。もっとも、このような操作は必ず必要なものではない。最初の沈 降物（第１回抽出で得られたもの）は、たとえば、塩化カルシウムを０．０２ｇ ／ｌ含む２０＋＋＋Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ５，４）に溶解し、ポリエ チレングリコールによって酵素活性分を再度抽出する。この２回目の沈降物はす べて酵素活性分である。酵素活性を損うことなく、凍結乾燥または濃縮したかた ちで凍結することもできる。遠心分離法、限外種化法またはクロマトグラフィー 法のようなその他の精製法を用いてもよい。

オリゴデキストランの酵素合成は、この酵素調製品またはいずれかのかたちの酵 素（細胞破壊後の細胞内酵素、不溶性高分子に結合している細胞外酵素、可溶性 細胞外酵素）に対応する酵素調製品分画を用いて２反応基質であるショ糖と、グ ルコース受容体として知られる糖、たとえば、マルトース（またはデンプンの加 水分解生成物のようにマルトースを多量に含む物質）、イソマルトース、α−メ チルグルコシド、イソマルトトリオースおよびグルコース（または澱粉の加水分 解生成物のようにマルトースを多量に含む物質）のような糖の存在下に行なわれ る。

目安としては、反応は５〜４５℃、好ましくはおよそ２０〜３０℃で行なうこと ができる。反応ｐＨは、４．５〜７、好ましくは５〜６である。反応持続時間は １通常はおよそ２〜４８時間であるが、これは合成反応媒質中の酵素濃度に依存 する。好ましくは、酵素濃度は０．２０〜Ｉ　Ｕ／＋＋Ωであるが、必要ならば これ以上でもよい。

１酵素単位（Ｕ）は、活性測定のための以下の標準条件下、１分間にフルクトー ス１マイクロモルを生産するのに必要な酵素の量として定義される： 一ショ糖：　１００ｇ／ｆｉ −２０ｄ酢酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ５，２）−３０℃。

ショ糖とグルコースの受容体となる糖受容体との比率はそれほど重要ではない。

目安としては、ショ糖は２０〜６００ｇ＃ｌの濃度で、グルコースの受容体とな る糖受容体は１０〜３００ｇＩＱの濃度で使用することができる。オリゴデキス トラン合成効率を最大にするのは、糖受容体濃度（ｇ／Ｕに対するショ糖濃度（ ｇ／Ｕが０．５〜１０．好ましくは２〜４とする。

酵素は、遊離状態でも（回分法）、または網状としたゲル（たとえば、アルギン 酸カルシウムゲル）の内部に封じもしくは不溶性支持体に共有結合で固定しても 使用することができる。酵素を固定する場合には９、適当な反応器（固定床反応 器、流動床反応器等）中で使用してオリゴデキストランを連続的に生産すること もできる。

酵素を作用させた後、逆相高精度液体クロマトグラフィ−（ＨＰＬｃ）法により 、オリゴデキストランを分離し分析する（たとえば、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ−Ｗａ ｔｅｒｓのｍ１ｃｒｏ−Ｂｏｎｄａｐａｃｋ　Ｃ１８カラムを使用）。溶離は、 高純度の水または水／メタノール混合液（メタノールは０〜６％（容量／容量） ）を用いて行なう。この量的方法では、重合度がおよそ２〜２０のオリゴデキス トランをすべて分離することができる。

反応中に生産された還元糖の定量は＋　Ｄ、　Ｎ、　Ｆ、試薬（アルカリ媒質に 溶解させたジニトロサリチル酸ナトリウム）を用いて行なうことができる。

得られる反応混合物には、少なくとも１のα（１→２）グルコシド結合を含むオ リゴデキストラン、こうした結合を含まないオリゴデキストラン、フルクトース および未反応のグルコース受容体が含まれる。

α（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランはオリゴデキストラン 総量の３０〜５５％程度に達する。

目的とするオリゴデキストランの分子量に応じて、合成法および精製法を調整す ることが可能である。特に、オリゴデキストラン分子量は１合成反応媒質中のシ ョ糖／受容体比によって変わり、この比が大きくなるにつれて増大する。合成後 、フルクトースは反応媒質中に保持してもよいし、イオン交換クロマトグラフィ ー法により分離してもよい。

また、α（１→２）グルコシド結合を含むオリゴデキストランの割合を増加させ るために、ある種の添加剤、たとえば、モノグリムやジグリム等の水混和性溶媒 あるいは塩化マグネシウムや塩化カルシウム等の塩を、合成反応媒質中に添加し てもよいということを記しておくべきであろう。

さらにまた、反応媒質中からα（１→２）グルコシド結合を含まないオリゴデキ ストランを除去したい場合には、アスペルギルス・ニゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ ｕｓ　ｎｉｇｅｒ）由来のグルコアミラーゼおよび／またはペニシリウム（Ｐｅ ｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属由来のエンドデキストラナーゼをのような加水分解酵素 を作用させて、α（１→２）グルコシド結合を含まないオリゴデキストランをす べて分解してしまうことができる。一方のα（１→２）グルコシド結合を含むオ リゴデキストラン、特に重合度が４．５．６および７のもの（Ｄ、　Ｐ、４、Ｄ 、　Ｐ、　５、Ｄ、　Ｐ、　６およびり、　Ｐ、　７と略称する）は加水分解に 抵抗性がある。加水分解酵素の作用後、反応媒質には、グルコース、フルクトー ス、１または複数のα（１→２）グルコシド結合を含むオリゴデキストランが含 まれている。グルコースとフルクトースは、必要ならば、たとえば、カルシウム 形陽イオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィーによって、オリゴデキストラン から分離することができる。オリゴデキストランを含む分画は、減圧下に濃縮し 、脱塩を行ない、活性炭によって濾過した後、凍結乾燥または噴震により乾燥す る。最終生成物は、きわめて水に溶けやすい（溶解度ニア０％、重量／重量）白 色粉末で、甘味を有さず、ＰＩ（は中性である。これは、１または複数のα（１ →２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランを９５重量％以上含有してい る。

以下に実施例を挙げるが、これは本発明を一層明らかにするためのものであり、 本発明はこれに限定されるものではない。

肛 （ａ）　Ｌ、　ｍｅｓｅｎｔａｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９のグルコシルトラン スフェラーゼの製造および精製 り、　ｍｅｓａｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９は、凍結乾燥された状態また は１０％（容量／容量）グリセロールの存在下に凍結して保存したものである。

これを以下の培地（標準培地）： 一ショ糖：　４０ｇＩＱ −酵母エキス：　２０ｇＩＱ −リン酸二カリウム：　２０ｇ／Ｒ（あらかじめ純粋なオルトリン酸を用いてｐ Ｈを６．９に調整した溶液として添加）−硫酸マグネシウム・７Ｈ２０：　０． ２ｇＩＱ−硫酸マンガン・Ｈ，０：　０．０１ｇ／Ω　。

−塩化カルシウム・２１１□０　：　０．０２ｇ＃２−塩化ナトリウム：　０． ０１ｇ／１２−硫酸鉄・７Ｈ２０：　０．０１ｇ／Ｑで培養する。

培地のｐＨは６．９である。培地およびリン酸−カリウム溶液は、あらかじめ、 高温（１２１℃）滅菌する。培養中にｐＨを調節しない場合には、菌の生長につ れて培地が酸性になっていく。培養を終えるときまでにはｐＨは４．５にまで達 し得る。これよりも高い値５〜６．５にｐＨを調節するのが好ましい。ｐＨの調 節は、２Ｎ炭酸ソーダまたはショ糖アルカリ溶液（ショ糖４００ｇ／Ｑ　；　２ Ｎ炭酸ソーダ）を用いて行なう。このうちショ糖溶液は、培地の細胞密度および 酵素の生産をわずかながらも高めるので有利である。

マルトース（２０ｇ／Ｒ）や界面活性剤Ｔｗｅｅｎ■（１％）のような添加剤は 、酵素が細胞外の培地中に可溶性のかたちで分泌されるのを促進する。

下記第１表は、条件をかえて行なった培養実験３例の結果をまとめたものである 。

第１表 ｐＨ調節なし　　　　　３．５　　　　０．３５　　　　　７．９　　　　　０ ．４標準培地 十マルトース（２０ｇ／Ｒ）　　　　　　　　２，７５　　　　　　　　０．６ 　　　　　　　　　　４．３　　　　　　　　　　０．５＋Ｔｗｅｅｎ＠（１％ ） 標準培地 十マルトース（２０ｇ／Ｑ）　　　　　　　　　４．０　　　　　　　　　０． ６　　　　　　　　　　　　ｇ、４　　　　　　　　　　　O．４ ＋Ｔｗｅｅｎ＠（１％） 培地の温度は２７℃とし、５００ｒｐｍで攪拌を行ない、ユｖｖｍ相当の通気を 行なう。

６時間３０分培養した後、実験３の酵素濃度は４０／ｍ。となり、うち０．６０ ／ｍＲが細胞外の可溶性酵素である。８５％のグルコシルトランスフェラーゼは 、細胞および／または多糖類の不溶性粒子に結合している。

生長後、さまざまなかたちをとっている酵素を、低分子量のポリエチレングリコ ール（ＰＥＧ　１５００）の存在下に沈降させて培地から抽出する。ＰＥＧＩ５ ００の濃度が２０％（重量／容量）に達すると、すべての酵素溝性分が菌によっ て生産された多糖類および細胞とともに沈降する。

沈降分は、遠心分離（１０分間１０，０００ｇ）するが静置（１ｇＩＱ亜硫酸ナ トリウムもしくは２ｇ／Ω安息香酸ナトリウムのような静菌剤の存在下に１２時 間、４℃で）して回収する。ポリエチレングリコールで２回連続して抽出した後 、酵素調製品を凍結乾燥する。酵素の抽出効率はほぼ１００％である。

（ｂ）　Ｌ、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９の可溶性および不溶 性グルコシルトランスフェラーゼによるオリゴデキストランの酵素合成合成は以 下の条件で行なう： 一ショ糖：　１．００ｇ／Ω 一マルトース：　５０ｇＩＱ 一温度：３０℃ −２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ５，２）−アジ化ナトリウム：０．５％ 、（殺菌剤）−酵素濃度：　０．３１ｊ／ｎ＋れ ２０時間反応させた後、酵素を熱（８０’Ｃ１３０分）によって不活性化し、前 記のＨＰＬＣ法によってオリゴデキストランを分析する。

結果は第２表にまとめた。

第２表 り、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９可溶性および不溶性グルコシ ルトランスフェラーゼ作用後の反応媒質の組成パンノース（三糖類）　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　］、６．６オリゴデキストランＤ、Ｐ、 　４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１４．９α（１→２）グルコシド 結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、　４　　　　　５．３オリゴデキスト ランＤ、Ｐ、　５　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７．０α（１→２ ）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、５　　　　１８，０α（ ｌ→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、　６以上　　５． ９収率（反応率）は以下の方法でもとめる：（リ　　オリゴデキストランα（１ →２）、ｇ／ＭＯ，４７４Ｘショ糖→−マルトース　ｇ／Ｑ（−リ　　　　　　 オリゴデキストラン合計量　ｇ／１２０．４７４　ｘショ糖十当初の受台　−又 　　　留分　ｇ／Ｒ（ｃ）添加剤存在下におけるり、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄ ｅｓ　Ｂ−１２９９の可溶性および不溶性グルコシル１−ランスフェラーゼによ るオリゴデキストランの酵素合成 ３例の合成ｊ−１２および３を、以下の共通の条件下：一ショ糖８１．００ｇ＃ ！ 一マルトース：　３３ｇ＃２ −２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，２）−アジ化ナトリウム＝０．５篇 一酵素濃度：１υ／１ＩＱ 一温度＝３０℃ 次の点をかえて行なった： 傘合成１：保温時間６時間（添加剤なし）串合成２：保温時間２３時間（マグネ シウム５００ｄおよび塩化カルシウム５１１Ｍ存在下） 拳合成３：保温時間２３時間（塩化カルシウム３００＋＋＋Ｍ存在下）。

−Ｆ記の保温時間経過後、酵素を熱（８０℃、３０分）によって不活性化し、前 記のＨＰＬＣ法によってオリゴデキストランを分析する９結果は第３表にまとめ た。

酵素反応の速度は、塩（塩化マグネシウムおよび塩化カルシウム）が高濃度に存 在することによって大きく低下する。しかし、対照の合成例（添加剤なし）に比 べ、α（１−＋２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランの割合は大きく 増加していることが確認される。

第３表 り、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９の可溶性および不溶性グルコ シルトランスフェラーゼ作用後の反応媒質の組成フルクトース　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　５３．７　　　４７．３　　　５４．６マルトース、 ロイクロース　　　　　　　　　　　７，９　　　１１．０　　　　ｇ、９パン ノース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．６　　　９．７　　　６． ０オリゴデキストランＤ、Ｐ、４　　　　　　　　　　　８．３　　　７．７　 　　６．０オリゴデキストランＤ、Ｐ、５　　　　　　　　　　５．０　　　５ ．４　　　４．０受容体反応率　　　　　　　　　　　　　　　　５２％　　　 ７５％　　　６１％夕じζ Ｌ、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９の可溶性グルコシル１−ラン スフェラーゼによるオリゴデキストランの酵素合成細胞および不溶性高分子を除 去するため、培地を遠心分離（１０，０００ｇ、２０分間）し、上澄みを例１に 記載の方法にしたがって、ポリエチレングリコール１　、５００を用いて液液抽 出する。グルコシルトランスフェラーゼの抽出効率は８５％以上である。この操 作を２回繰返した。ついで、酵素を２０＋Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ５，２ ）に溶解して凍結または凍結乾燥する。

合成は以下の条件で行なう。

−ショ糖：　１００ｇ／１２ 一マルトース：　５０ｇＩＱ 一温度：３０℃ −２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，２）−酵素濃度：　０．５Ｌｌ／ｍ Ｑ −反応時間：４時間。

ショ糖がグルコシルトランスフェラーゼによって完全に消費された後、酵素を熱 （８０℃、　３０分）によって変性する。前記の）ＩＰＬｃ法によって反応媒質 中に存在するオリゴデキストランを分析する。結果は第４表にまとめた。

第４表 り、　ｎ＋ｅｓｅｎｔｅｒｏｊｄｅｓ　Ｂ−１２９９可溶性グルコシルトランス フ工ラーゼ作用後の反応媒質の組成 フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５ ０．５オリゴデキストランＤ、Ｐ、　４　　　　　　　　　　　　　　　　　　 １９．０α（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、　４ 　　　　３．１オリゴデキストランＤ、Ｐ、　５　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　９．９α（］→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、 Ｐ、５　　　１８．２α（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストラン Ｄ、Ｐ、６以上　　１３．６α（ｌ→２）グルコシド結合を有するオリボデキス １−ランの収率　　　３６％受容体反応率　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　９５％上記の収率では重合度７以上のオリゴデキストランは考 慮に入っていない。これらは水沫によって得られるクロマトグラムでは現われこ ないためである。

丘菱 り、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９の不溶性グルコシルトランス フェラーゼによるオリゴデキストランの酵素合成培地を遠心分離（４℃で１０， ０００ｇ、２０分間）し、遠心分離酸分を２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５，２）で数回洗う。ついで、各種菌類の増殖を防ぐために溶液を凍結乾燥する 。

合成は以下の条件で行なう。

一ショ糖：　１．ＯＯｇＨｌ −マルトース：　５０ｇ／Ω 一温度：３０℃ −２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，２）−アジ化ナトリウム＝０．５へ 一酵素濃度：　０．９Ｕ／ｍＱ ８時間保温でショ糖が完全に消費される。合成媒質中のオリゴデキストラン組成 を第５表にまとめた。

第５表 り、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９不溶性グルコシルトランスフ 工ラーゼ作用後の反応媒質の組成 り、　ｍｅｓａｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９の可溶性グルコシルトランス フェラーゼ濃度のオリゴデキストラン合成への影響実験条件： −ショ糖：　１００ｇ／Ｑ −マルトースニ５０ｇＩＱ −２０ｍ阿酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，２）一温度＝３０℃ 酵素を３種の濃度０．１７．０．５および２　Ｕ／１１１２で使用した。ショ糖 が完全に消費された後、３種の反応媒質を分析する。受容体の反応率に関しても α（１→２）グルコシド結合を有１−るオ「ノボデキストラン収率に関しても３ 件の合成例で結果番よ同じである。

外足 オリゴデキストランの酵素合成に対するｐＨの影響実験条件： 一ショ糖：　１００ｇ／１２ 一マルトース：　５０ｇＩＱ 一温度＝３０℃ 一酵素濃度：ＩＵ／＋Ｑ −３０ｄクエン酸リン酸ナトリウム緩衝液５．２．６．０および６．４の３種類 のｐＨで試験した。ＰＨが６．０を超えると可溶性酵素および不溶性酵素の酵素 活性はわずかながら低下する。しかし、反応媒質中のオリゴデキストラン組成に 関しては、ＰＨ値による有意の差は認められなかった。

匠旦 イソマルトース−イソマルトトリオース混合物を受容体とした場合のり、　ｍｅ ｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９の不溶性グルコシルトランスフェラーゼ によるオリゴデキストランの酵素合成実験条件： 一ショ糖：１００ｇ＃１ 一受容体：　　５０ｇＩＱ 受容体組成： イソマルトース＝５９％ イソマルトトリオース：５０％ グルコース：　　　　　　５％ 一温度＝３０℃ 一アジ化ナトリウム＝０．５篇 −２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，２）−酵素濃度：ＩＵ／ｄ ショ糖が完全に消費された後、前記のＨＰＬＣ法によって反応媒質中の分析を行 なう（第６表）。

第６表 り、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９不溶性グルコシルトランスフ 工ラーゼ作用後の反応媒質の組成 イソマル１〜−ス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５６゜ イソマルトトリオース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．１ α（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、　４　　　　 １０．４イソマルトテトラオース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　２．４α（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、　５ 　　　　　９．４ｃｃ’（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストラン の収率受容体反応率　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２９ ．ｏ％α−メチルグルコシド存在下でのり、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ −１２９９のグルコシル１ヘランスフエラーゼによるオリゴデキストランの合成 実験条件： 一ショ糖：　１００ｇ／ｆｌ −α−メチルグルコシド：　ＳＯｇＩＱ−その他の条件二側６参照 ショ糖が完全に消費された後、前記のＨＰＬＣ法によって反応媒質中の分析を行 なった。結果は以下のとおり（第７表）。

第７表 り、　ｍｅｓｅｎむｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９不溶性グルコシルトランスフ 工ラーゼ作用後の反応媒質の組成 フルクトース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５３ ．０α−メチルグルコシド　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３４ ．０メチルイソマルトシト　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．８ α（１→２）グルコシド結合を有するメチル化オリゴデキストラン　　９．３メ チルイソマルトトリオシト　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．４メチル イソマルトテトラオシド　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８例」ニ ジー１糖濃度をかえた場合のり、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９ の可溶性および不溶性グルコシルトランスフェラーゼによるオリゴデキストラン の酵素合成 実験条件ニ 一温度＝３０℃ −２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，２）−アジ化ナトリウム二０．５％ Ｉ −ショ糖／マルトース比：３ 合成１ニ ー乾燥残量＝２０％（重量／重量） −ショ糖：１５％（重量／重量） 一マルトース＝５％（重量／重量） −酵素濃度：　０．６Ｕ／ｍＱ 合成２ニ ー乾燥残量：３５％（重量／重量） −ショ糖：２６％（重量／重量） −マルトース：９％（重量／重量） −酵素濃度：　１．２Ｕ／踵Ｑ 合成３ニ ー乾燥残量＝４０％（重量／重量） −ショ糖：３０％（重量／重量） 一マルトース＝１０％（重量／重量） −酵素濃度：　１．８Ｕ／ｍＱ ２１時間反応させた後、酵素を熱（８０℃、３０分）によって不活性化する。反 応媒質のＩＩＰＬｃ分析結果を第８表に示す。

第８表 り、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９可溶性および不溶性（細胞に 結合）グルコシルトランスフェラーゼ作用後の反応媒質３種の組成マルトース　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．７　　　９．７　　１１．９０イ クロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６，３　　１３．９　　２０ ．４パンノース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１１．７　　１７． ５　　２２．９オリゴデキストランＤ、Ｐ、４　　　　　　　　　　　　１４． ８　　２５．５　　３５．２オリゴデキス１ヘランＤ、Ｐ、５　　　　　　　　 　　　　１０．６　　１７．９　　２０．１受容体反応率　　　　　　　　　　 　　　　　　　　７６％　　７５％　　７０％続いて合成媒質に４０℃で６時間 、Ａ、　Ｎｉｇａｒのグルコアミラーゼ（２０／ｍＱ）とＰｅｎ１ｃｉｌｌｉｕ ＋ａ　ｓｐ、エンドデキストラナーゼ（１７Ｕ／＋ｉＱ）との混合物を作用させ る。酵素反応は３０分間９０℃の加熱処理によって終了させる。グルコースとフ ルクトースはカルシウム形イオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィーによって 除去する。

反応媒質中のα（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランの濃度は 、合成１では５７ｇ／Ｑ、合成２では１０７ｇ／Ｌ合成３では１２２ｇ／Ｑであ る。

オリゴデキストランの分布は以下のとおりである。

合成１（幻　合成２（幻　合成３（幻 夕■ム マルトース含有量の高いグルコース糖液にニュートリオース（ｎｕｔｒｉｏｓｅ ）　Ｒ７２５）存在下でのり、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９の 可溶性および不溶性グルコシルトランスフェラーゼによるオリゴデキストランの 合成 ニュートリオース（ｎｕｔｒｉｏｓｅ）　Ｒ７２５はロケット・フレール社（Ｓ ｏｃｉｅｔｅ　Ｒｏｑｕｅｔｔｅ　Ｆｒｅｒｅｓ）　（フランス国しトラン（Ｌ ｅｓｔｒｅｍ。

Ｆｒａｎｃｅ）　）の製品であり、マルトースとマルトトリオースを高い含有量 で含む。

グルコース糖液ニュートリオースＲ７２５の平均組成は−乾燥残量：６８％（重 量／重量） −グルコース：１．５％ 一マルトース：７７％ −マルトトリオース：２０％ 一重合度４以上の物質＝１．５％ このグルコース精液を、以下の条件で受容体として用いた。

合成１： 一ショ糖濃度：　１００ｇ＃１ 一ユニートリオースＲ７２５：　６８ｇ＃！−ショ糖／マルトース比：２ 一酵素濃度：　０．３Ｕ／ｍＱ −その他の条件二側８参照 合成２： −ショ糖濃度：　１００ｇ／ｌ −ユニートリオースＲ７２５：　４２ｇ＃ｔ−ショ糖／マルトース比：３ 一酵素濃度：　０．３１／ｄ −その他の条件二側８参照 ２】時間保温した後１反応媒質をＨＰＬＣによって分析する。結果を第９表に示 す。

第９表 り、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９可溶性および不溶性グルコシ ルトランスフェラーゼ作用後の反応媒質の組成フルクトース　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　５３．０　　　　５２．０マル１−−ス　　　　　　　　 　　　　　　　　　　１８．２　　　　９．７マルトトリオース　　　　　　　 　　　　　　　　７．４　　　　４．８パンノース　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　２］、７　　　　８．７オリゴデキストランＤ、Ｐ、４　　　　　 　　　　　１４．３　　　　８．２α（１→２）グルコシド結合を有する オリゴデキストランＤ、Ｐ、　４．　　　　　４．３　　　　２．０オリゴデキ ストランＤ、　Ｐ、　５　　　　　　　　　　　４．９　　　　４．６受容体反 応率　　　　　　　　　　　　　　　　７４％　　　　６０％続いて合成媒質に ４０℃で６時間、Ａ、　Ｎｉｇｅｒのグルコアミラーゼ（２０／ｍＱ）とＰｅｎ １ｃｉｌｌｉｕ＋ｗ　ｓｐ、エンドデキストラナーゼ（１７０／ｍｕ）との混合 物を作用させる。酵素反応は３０分間９０℃の加熱処理によって終了させる。グ ルコースとフルクトースはカルシウム形イオン交換樹脂を用いたクロマトグラフ ィーによって除去する。

反応媒質中のα（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランの濃度は 、合成１では３０ｇ／Ｒ１合成２では３５ｇ＃ｌである。

オリゴデキストランの分布は以下のとおりである。

合成１（％″）合成２（ｘ） 例１０ Ａ、　ＮｉｇｅｒのグルコアミラーゼまたはＡ、　Ｎｉｇｅｒの　グルコアミラ ーゼとＰｅｎ１ｃｉｌｌｉｕＩＩｓｐ、エンドブキス１−ラナーゼとの混合物に よるオリゴデキストランの加水分解 例１〜９それぞれの反応媒質は、反応条件にともなって異なる重合度のオリゴデ キストランを含んでいる。α（１→６）およびα（１→４）結合に特異的に作用 する加水分解を施すことにより、生成物中、α（１→２）グルコシド結合を有し 重合度が４〜５であるものの割合を高めることが可能である。

Ａ、　Ｎｉｇｅｒのグルコアミラーゼはオリゴデキストランのα（１→４）およ びα（１→６）結合を非還元性末端から加水分解していく。α（１→２）グルコ シド結合に出会うとその作用は阻止される。結合の位置にはよらない。エンドデ キストラナーゼは重合度が３以上の基質についてα（１→６）グルコシド結合を 特異的にエンド位置から加水分解していく。しかし、エンドデキストラナーゼは 非還元性末端にα（１→２）グルコシド結合を有する重合度が４および５のオリ ゴデキストランは加水分解しない。

これら２つの酵素を組合わせて作用させることにより、主として重合度が４のオ リゴデキストランと重合度が５のオリゴデキストランとからからなる生成物を得 ることができる。

Ｌ、　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９のグルコシルトランスフェラ ーゼがショ糖に作用することによって媒質中に遊離放出されるフルクトースおよ び加水分解によって生じるグルコースは、ともにカルシウム形イオン交換樹脂を 用いたクロマトグラフィーによって分離除去することができる。これは、既知の 技術であり、フルクトース含有量の高い糖液を生産するために工業的規模で幅広 く用いられている。

Ａ、　Ｎｊ４ｅｒのグルコアミラーゼのみを作用させた場合には、得られるオリ ゴデキストランの平均重合度は前記の場合よりも高い。これは、グルコアミラー ゼの作用がオリゴデキストランの非還元性末端にα（１→２）グルコシド結合が 存在した場合には、そこで停止してしまうためである。

加水分解条件ニ ー合成反応媒質を１７１０に希釈 一アミログルコシダーゼを添加 Ｎ０ＶＯ（３００ＡＧＯ／ｍＱ）　：　３　ＡＧＵ／Ｑ−デキストラナーゼＬを 添加 ＡＭＡＮＯ（５０００Ｕ／ｍＲ）　：　１７　Ｕ＃ａＱ一温度＝４０℃ 一加水分解時間二６時間 ６時間保温した後、２種の酵素を熱（１００℃、°３０分）によって不活性化す る。２種の反応媒質それぞれを２種の加水分解酵素で処理した後のＨＰＬＣ分析 結果を第１０表に示す。

第１０表 受容体：マルトース　　　　８ｇ／Ｑ１７ｇ／Ω　　　　　　　２ｇ／１１合成 条件：例３参照 受容体：イソマルトース イソマルトトリオース　　２２ｇ／Ω　　　　　　　５ｇ／ＱＩｇ／１２合成条 件：例６参照 例１１ Ｌｅｕｅｏｎｏｓｔｏｅ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−１２９９から得ら れる可溶性および不溶性グルコシルトランスフェラーゼによるα（１→２）グル コシド結合を有するオリゴデキストランの製造および精製グルコシルトランスフ ェラーゼを例１（ａ）のように製造・精製した後、以下の条件でオリゴデキスト ランの合成を行なった。

−ショ糖：　］、ＯＯｇ／Ｑ −受容体ユニュートリオースＲ７２５：　４４ｇ＃ｔ（マルトース：　３３ｇ／ Ω） 一ショ糖／マルトース比＝３ 一酵素濃度：　０．３Ｌｌ／ｄ −アジ化ナトリウム二〇、５％ｌ −ｐＨ：５．６　（ＩＮ塩酸で調！１１）一温度：３０℃ 一保温時間＝４０時間 一反応器容量：２．５Ｑ 酵素反応は加熱（９０℃、１５分）によって停止する。

合成後、反応媒質の組成は以下のとおりであるニーフルクトース：　４９ｇＩＱ −ロイクロース：６ｇＩＱ −マルトース：３ｇＩＱ −マルトトリオース：　７．５ｇＩＱ −重合度４のオリゴデキストラン：　１３ｇ＃を一重合度５のオリゴデキストラ ン：　１０ｇ／Ｑ媒質には重合度がさらに高いオリゴデキストランも含まれてい るがこれは合成媒質のクロマトグラフィー分析には現われてこない。

続いて合成媒質に４０℃で６時間、Ａ、　Ｎｉｇｅｒのグルコアミラーゼ（３Ｕ ／ｍｕ）とＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ、エンドデキストラナーゼ（１７Ｕ／ ｍＲ）との混合物を作用させる。酵素反応は３０分間９０℃の加熱処理によって 終了させる。グルコースとフルクトースはカルシウム形イオン交換樹脂を用いた クロマトグラフィーによって除去する。

このようにして純度９４％のα（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキス トラン４０ｇが得られる。

オリゴデキストランの分布は以下のとおりである。

α（ｌ→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、４　　　２４ α（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、５　　　５６ α（１→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、６　　　７α （ｌ→２）グルコシド結合を有するオリゴデキストランＤ、Ｐ、７　　　７調製 品は最終的には凍結乾燥する。凍結乾燥後の最終製品は、きわめて水に溶けやす い非吸湿性白色粉末で、甘味はない。２０℃における水への溶解度は７０％（重 量／重量）である。

何Ｕ 分子量１０００のオリゴデキストランを受容体として存在させたα（１→２）オ リゴデキストランの合成使用される受容体は、還元性末端にα（１→４）グルコ シド結合およびα（１→６）グルコシド結合のみを有する線状オリゴサツカリド の混合物からなる。これは、ショ糖とマルトースの存在下にり、　ｍｅｓｅｎｔ ｅｒｏｉｄｅｓ　Ｂ−５１２（Ｆ）デキストラン−サッカラーゼを作用させて得 られる。

実験条件： 合成１： 一ショ糖濃度：　２００ｇＩＱ −分子量１０００のオリゴデキストラン（）１ｗ　：　１０００）　　：　２０ ｇＩＱ−２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ５，０）一温度：２３℃ 一酵素濃度：ＩＵ／＋＋＋Ｑ 合成２： 受容体濃度（分子量１０００のオリゴデキストラン）を４０ｇＩＱとする以外は 合成１の手順と同様にする。

４０時間反応させた後、反応媒質を加熱処理（３０分間９０℃）して酵素を不活 性化する。ついで、２種の反応媒質を遠心分離し、以下の条件下、非還元性末端 に位置するα（１→６）グルコシド結合を加水分解するためにＡ、　Ｎｉｇｅｒ のグルコアミラーゼを作用させる。

−Ａ、　ＮｉｇｅｒのグルコアミラーゼＡＭＧ　２００　Ｌ＠　（ＮＯＶＯ）　 ：　２ＡＧＵ／ｍＱ一温度＝４０℃ 一保温時間：２４時間 続いてグルコアミラーゼは２０分間７０℃の加熱によって不活性化する。

ついでα（１→２）オリゴデキストランは、イオン交換樹脂を用いたクロマトグ ラフィー（Ｄｏｗｅｒ＠　５０ｗＸ　４　）で精製して単糖類および二糖類を除 去する。続いてα（１→２）オリゴデキストランは、限外種化（遮断閾値：　１ ００，０００．　ＡＭＩＣＯＮモジュール）、脱塩し、凍結乾燥する。

合成１の場合、α（１→２）オリゴデキストランの重量平均分子量は１　、６０ ０である。合成２の場合、α（１→２）オリゴデキストランの平均分子量は１， ４００である。

国際調査報告 国際調査報告

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．少なくとも１つのα（１→２）グルコシド結合を含むオリゴデキストランお よび一般式： （０−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２））ｍ（０−α−Ｄ−グルコピラノ シル−（１→６））ｎＡ 〔ここで、Ａは、マルトース、イソマルトース、イソマルトトリオース、α−メ チルグルコシドおよびグルコースの中から選ばれるグルコースの受容体となる糖 の残基であり、ｍは１〜１０の値をとり、ｎは１〜３０の値をとる。また、α（ １→２）グルコシド結合の位置は任意である。〕に対応するオリゴデキストラン を高い割合で含むオリゴデキストラン混合物の製造方法であって、ショ糖とマル トース、イソマルトース、イソマルトトリオース、α−メチルグルコシドおよび グルコースの中から選ばれるグルコースの受容体となる糖とを、α（１→２）グ ルコシド結合を含むデキストランを醗酵により生産する能力を有する孔酸菌レウ コノストック・メセンテロイデス株の少なくとも１株から抽出したグルコシルト ランスフェラーゼ酵素の存在下に、水性媒質中、２〜４８時間接触させることを 特徴とする方法。
2. ２．請求項１の方法であって、酵素反応中にｐＨが４．５〜６に維持されること を特徴とする方法。
3. ３．請求項１の方法であって、酵素反応が約５〜４５℃で行なわれることを特徴 とする方法。
4. ４．請求項１〜３のいずれかの項に記載の方法であって、ショ糖／グルコースの 受容体となる糖受容体の重量比が０．５〜１０であることを特徴とする方法。
5. ５．請求項４の方法であって、前記比が２〜４であることを特徴とする方法。
6. ６．請求項１〜５のいずれかめ項に記載の方法であって、酵素濃度が反応媒質１ ｍｌあたり０．２〜１．０単位であることを特徴とする方法。
7. ７．請求項１〜６のいずれかの項に記載の方法であって、、モノグリム、ジグリ ム、塩化マグネシウムおよび塩化カルシウムから選ばれる少なくとも１の添加剤 の存在下に反応が行なわれることを特徴とする方法。
8. ８．請求項１〜７のいずれかの項に記載の方法であって、酵素グルコシルトラン スフェラーゼを除去または不活性化した後、少なくとも１の加水分解酵素を作用 させ反応媒質中に存在するα（１→２）グルコシド結合を有しないオリゴデキス トランを選択的に加水分解する工程をさらに含むことを特徴とする方法。
9. ９．請求項８の方法であって、前記加水分解酵素がアスペルギルス・ニゲル由来 のグルコアミラーゼおよび／またはペニシリン属由来のエンドデキストラナーゼ であることを特徴とする方法。
10. １０．一般式： （０−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２））ｍ（０−α−Ｄ−グルコピラノ シル−（１→６））ｎＡ 〔ここで、Ａは、マルトース、イソマルトース、イソマルトトリオース、α−メ チルグルコシドおよびグルコースの中から選ばれるグルコースの受容体となる糖 の残基であり、ｍは１〜１０の値をとり、ｎは１〜３０の値をとる。また、α（ １→２）グルコシド結合の位置は任意である。〕に対応する新規なオリゴデキス トラン。
11. １１．請求項１０のオリゴデキストランであって、ｎが１〜４、ｍは１または２ の値をとり、残基がマルトースであることを特徴とするもの。
12. １２．非還元性の末端に位置するかまたはオリゴデキストランの分岐点を形成す るα（１→２）グルコシド結合を少なくとも１含み、式： （０−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２））ｍ（０−α−Ｄ−グルコピラノ シル−（１→６））ｎＡ 〔ここで、Ａは、マルトース、イソマルトース、イソマルトトリオース、α−メ チルグルコシドおよびグルコースの中から選ばれるグルコースの受容体となる糖 の残基であり、ｍは１〜１０の値をとり、ｎは１〜３０の値をとる。また、α（ １→２）グルコシド結合の位置は任意である。〕に対応するオリゴデキストラン を高い割合で含むオリゴデキストラン混合物の、糖代用物の増量剤または食品添 加剤としての利用。