JPH03139288A - α―グリコシル―Ｌ―アスコルビン酸とその製造方法並びに用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は、直接還元性を示さないα−グリコシル−Ｌ−
アスコルビン酸とその製造方法並びに用途に関し、更に
詳細には、新規物質である直接還元性を示さないα−グ
リコシル−し−アスコルビン酸とその生化学的製造方法
並びにα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸を含有せし
めた飲料、加工食品、嗜好物などの飲食物、感受性疾患
の予防剤、治療剤すなわち抗感受性疾患剤および美肌剤
、色白剤で示される化学構造を有しており、ヒト、サル
、モルモットにとっては、生体内で合成できず、必須栄
養素ビタミンＣとなっている。

し−アスコルビン酸は、生体内で、例えば、生体結合組
織の主成分であるコラーゲンの合成に必要なプロリンや
リジンのヒドロキシル化反応に関与し、また、例えば、
チトクロームＣのＦｅ４４＋を還元してＦｅ”＋にする
などの酸化還元反応に関与し、更には、白血球増加によ
る免疫増強作用に関与するなどが知られており、生体の
健康維持、増進に重要な役割をなしている。壊血病は、
Ｌ−アスコルビン酸の欠乏症として古くから知られ、皮
膚の虚弱化、点状出血、斑状出血、歯肉や骨髄下出血な
どを呈する。これを予防し、ｆ！康を維持するために、
し−アスコルビン酸の推奨１日所要量（ＲＤＡ）が定め
られ、それによれば我国では、成人男子６０ｍｇ、成人
女子５０１ｇときれている。

Ｌ−アスコルビン酸の用途は、単に必須栄養素としての
ビタミンＣ強化剤にとどまらず、その化学構造、生理作
用から、例えば、酸味剤、還元剤、酸化防止剤、漂白剤
、安定剤などとして各種化学反応基材、飲食物などに、
また、ウィルス性疾患、細菌性疾患、悪性腫瘍など感受
性疾患の予防剤、治療剤すなわち抗感受性疾患剤に、更
には、還元剤、紫外線吸収剤、メラニン生成抑制剤など
の美肌剤、色白剤などとして化粧品にまで及び、その範
囲は極めて広い。

し−アスコルビン酸の最大の欠点は、それが直接還元性
を示すため、極めて不安定で、酸化分解を受は易く、容
易にその生理活性を失うことである。

Ｌ−アスコルビン酸を安定化きせる方法として、Ｌ−ア
スコルビン酸の糖誘導体が提案されている。

例えば、先に本発明者等が、「ビタミン」第４３巻、第
２０５乃至２０９頁（１９７１年）、「ビタミン」第４
７巻、第２５９乃至２６７頁（１９７３年）および特公
昭４８−３８１５８号公報で、生化学的手法によるＬ−
アスコルビン酸グルコシドの合成法を開示している。

しかしながら、これらのアスコルビン酸グルコシドは、
いずれも同様の方法で調製され、得られたアスコルビン
酸については、例えば、該公報第２′欄第１４乃至１６
行で、「得た誘導体はアスコルビン酸の６番の炭素の第
１アルコール基がエーテル結合によりグルコシドを形成
したもの」と記載され、また、その生成がマルトースか
らα−グルコシル基の糖転移反応であること、更には、
直接還元性を示す性質を有するなどから、その化学構造
が、式［１１Ｅ で示されるものであると考えられ、その安定化の程度に
ついても、該公報実施例１の表の結果から明らかなよう
に１．Ｌ−アスコルビン酸よりは優れているものの、な
お不安定であり、未だ実用化されるに至っていない。

また、６戸等が特公昭５８−５９２０号公報で、有機化
学的手法によるＬ−アスコルビン酸糖誘導体の合成法を
開示している。

しかしながら、このアスコルビン酸＊誘導体は、該公報
第７欄第６行乃至第８欄第１１行で、２６３−ジー０−
（β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスコルビン酸な
ど２１柾類ものβ−Ｄ−グルコピラノシル型のＬ−アス
コルビン酸糖誘導体を掲げて説明していることからも明
らかなように、すべてのＤ−グルコースがβ結合してい
るＬ−アスコルビン酸糖誘導体である。

また、数本等が特開昭５８−１９８４９８号公報で有機
化学的手法によるＬ−アスコルビン酸１ａｉ誘導体の合
成法を開示しているが、これもβ−グルコシル型のＬ−
アスコルビンｒ！ｉ糖誘導体である。

また、これらβ−Ｄ−グルコピラノシル型のＬ−アスコ
ルビン酸糖誘導体について、本発明者等が検討したとこ
ろ、生体、とりわけ、ヒトにおいて、生理活性を充分発
揮きせるごとの困難なことが判明した。更に、その有機
化学的手法による合成法は、反応が複雑で収率も低く、
それ故に、経済性が劣り、加えて、その誘導体の無毒性
、安全性を確保する上において、相当の困難が伴う欠点
のあることも判明した。

叙上のように、従来知られているＬ−アスコルビン酸糖
誘導体の提案は、安定性、安全性、生理活性、経済性な
どの点で、いずれも不充分であり、その実現を見るに至
っていない。

［発明が解決しようとする課８７ 従来のＬ−アスコルビン酸糖誘導体の欠点を解消し、安
定性に優れ、生体内でＬ−アスコルビン酸の生理活性を
充分発揮し、しかも無毒で安心して利用できるＬ−アス
コルビン酸糖誘導体の実現が強く望まれている。

〔課題を解決するための手段］ 本発明は、従来のＬ−アスコルビン酸糖誘導体の欠点を
解消するためになされたものであって、とりわけ、生化
学的手法による糖転移反応を利用し、新しいＬ−アスコ
ルビン酸糖誘導体を目脂して鋭意研究を続けてきた。

その結果、直接還元性を示ざず、安定性に優れ、しかも
生体内で容易に加水分解され、生理活性の点でも申し分
のない新規Ｌ−アスコルビン酸塘諺導体を見出し、更に
、その製造方法並びに飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品
などへの用途を確立して本発明を完成した。

また、本発明のα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸が
、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物とを経
口摂取することにより、生体内で生成され、代謝される
物質であることが判明したことにより、本発明のα−グ
リコシル−Ｌ−アスコルビン酸は、本来、生体物質であ
り、安全性の上からも理想的なＬ−アスコルビン酸の新
規糖誘導体と言うことができる。

ちなみに、有機化学的手法によって合成されるβ−Ｄ−
グルコシル型のＬ−アスコルビン酸糖誘導体は、生体内
で生成きれず、従って、生体にとっては異物と考えられ
る。

本発明のα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸はその製
法を問わず、生化学的手法による製法であワても、有機
化学的手法による製法であってもよい。

しかし、一般的には、安全性、経済性の上から、し−ア
スコルビン酸とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶
液に糖転移酵素を作用きせる生化学的手法により生成さ
せるのが望ましい。

本明細書でいう直接還元性を示さないとは、Ｌ−アスコ
ルビン酸の場合とは違って、そのままで、２゜６−シク
ロルフエノールインドフエノールを還元脱色しないこと
を意味する。

本明細書でいうＬ−アスコルビン酸とは、特に不都合が
生じない限り、遊踏のＬ−アスコルビン酸のみならず、
Ｌ−アスコルビン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ
土類金属塩などのＬ−アスコルビン酸塩、または、それ
らの混合物を意味する。従って、本発明の糖転移反応に
用いるＬ−アスコルビン酸としては、通常、遊離のＬ−
アスコルビン酸だけでなく、必要に応じて、し−アスコ
ルビン酸ナトリウム、し−アスコルビン酸カルシウムな
どが適宜用いられる。

また同様に、本明細書でいうα−グリコシル−１゜−ア
スコルビン酸、２−〇−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アス
コルビン酸などについても、特に不都合が生じない限り
、遊離の酸のみならず、それらの塩をも意味する。

本発明で用いるα−グルコシル糖化合物は、同時に用い
る糖転移酵素によってＬ−アスコルビン酸から直接還元
性を示さないα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸を生
成できるものであればよく、例えば、マルトース、マル
トトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオー
ス、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、マルト
オクタオースなどのマルトオリゴ糖、デキストリン、シ
クロデキストリン、アミロースなとのＶ粉部分加水分解
物、更には、液化澱粉、糊化澱粉、溶性澱粉などが適宜
選択できる。

従って、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸の生成を
容易にするためには、糖転移酵素に好適なα−グルコシ
ル糖化合物が選ばれる。

例えば、糖転移酵素として、α−グルコシダーゼ（ＥＣ
３，２，１，２０）を用いる際には、マルトース、マル
トトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオー
ス、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、マルト
オクタオースなどのマルトオリゴ糖、または、ＤＥ約５
乃至６０のデキストリン、澱粉部分加水分解物などが好
適であり、シクロマルトデキストリン・グルカノトラン
スフェラーゼ（ＥＣ２，４，１，１９）を用いる際には
、シクロデキストリンまたはＤＥＩ未満の澱粉糊化物か
らＤＥ約６０のデキストリンまでの澱粉部分加水分解物
などが好適であり、α−アミラーゼ（ＥＣ３，２゜１．
１）を用いる際には、ＤＥ１未満の糊化澱粉からＤＥ約
３０のデキストリンまでのお粉部分加水分解物などが好
適である。

反応時のＬ−アスコルビン酸の濃度は、通常、ＩＶ／Ｖ
％以上、望ましくは、約２乃至３０１ｉ１／ＶＸ含有し
ておればよ（、α−グルコシル糖化合物の濃度は、Ｌ−
アスコルビン酸に対して、通常、約０．５乃至３０倍の
範囲が好適である。

本発明に用いる糖転移酵素は、Ｌ−アスコルビン酸とこ
の酵素に好適なα−グルコシル糖化合物とを含有する溶
液に作用きせる時、し−アスコルビン酸を分解せずに、
Ｌ−アスコルビン酸の少なくとも２位の炭素のアルコー
ル基にα−グルコシル基を１乃至数個転移してα−グリ
コシル−Ｌ−アスコルビン酸を生成するものであればよ
い。

例えば、α−グルコシダーゼは、マウスの腎臓、ラット
の腸粘膜、イヌ、ブタの小腸など動物由来の酵素、コメ
種子、トウモロコシ種子など植物由来の酵素、更には、
ムコール（Ｍｕｃｏｒ）　Ｍｒ、ペニシリウム（Ｐｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｕａ＋）　Ｈｚなどに属するカビ、または
サツカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　）属な
どに属する酵母などの微生物を栄養培地で培養し得られ
る培養物由来の酵素が、シクロマルトデキストリン・グ
ルカノトランスフェラーゼは、バチルス（ＢａｃｉｌＩ
ｕｓ　）属、クレブシーラ（Ｋ　１ｅｂｓ　ｉｅ　ｌ　
ｌａ　）属などに属する細菌培養物由来の酵素が、α−
アミラーゼは、バチルス属などに属する細菌培養物由来
の酵素などが適宜選択できる。

これらの糖転移酵素は、前記の条件を満足しきえすれば
、必ずしも精製して使用する必要はなく、通常は、粗酵
素で本発明の目的を達成することができる。必要ならば
、公知の各種方法で精製して使用してもよい。また、市
販の糖転移酵素を利用することもできる。使用酵素量と
反応時間とは、密接な関係があり、通常は、経済性の点
から約３乃至８０時間で反応を終了するように酵素量が
選ばれる。

また、固定化された糖転移酵素をバッチ式で繰り返し、
または連続式で反応に利用することも有利に実施できる
。

本発明の反応方法は、通常、前述のＬ−アスコルビン酸
とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶液に糖転移酵
素を加え、該酵素が充分作用する条件、通常、ｐＨ約３
乃至９、温度約３０乃至８０℃の範囲から選ばれる条件
に維持して行う。また、反応中にＬ−アスコルビン酸が
酸化分解を受は易いので、できるだけ嫌気または還元状
態で遮光下に維持するのが望ましく、必要ならば、チオ
尿素、亜硫酸塩などを共存させて反応させることも有利
に実施できる。

また、必要ならば、糖転移反応能を有する微生物の増殖
中に、し−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物と
を共存させて、その目的物質を生成させることも有利に
実施できる。

本発明の直接還元性を示さないα−グリコシル−Ｌ−ア
スコルビン酸について述べると、Ｌ−アスコルビン酸の
少なくとも２位の炭素のアルコール基にα−Ｄ−グルコ
シル基が結合し、その結合数は、１乃至７個程度のグル
コシル基がα−１，４結合しており、その個々の物質と
しては、例えば、２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−ア
スコルビン酸、２−０−α−Ｄ−マルトシルーＬ−アス
コルビン酸、２−０−α−Ｄ−マルトトリオシルーＬ−
アスコルビン酸、２−０−α−ｐ−マルトテトラオシル
ーＬ−アスコルビン酸、２−〇−α−Ｄ−マルトペンタ
オシルーＬ−アスコルビン酸、２−０−α−Ｄ−マルト
ヘキサオシルーＬ−アスコルビン酸、２−０−α−Ｄ−
マルトヘプタオシルーＬ−アスコルビン酸などである。

α−グルコシダーゼによって生成きせる場合には、通常
、２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸だ
けを生成させることかできるし、必要により、２−０−
α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸に、２−０−
α−Ｄ−マルトシルーＬ−アスコルビン酸、２−０−α
−Ｄ−マルトトリオシル−Ｌ−アスコルビン酸などを混
在して生成きせることもできる。

シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラー
ゼやα−アミラーゼによって生成きせる場合には、一般
に、α−グルコシダーゼの場合よりもα−Ｄ−グルコシ
ル基の結合数の大きいものまで混在生成させることかで
き、使用するα−グルコシル糖化合物によっても変動す
るが、一般的には、シクロマルトデキストリシ塾グルカ
ノトランスフェラーゼの場合には、α−Ｄ−グルコシル
基の数が１乃至７程度まで分布し、α−アミラーゼの場
合には、これよりその分布がやや狭い程度である。

このような混合物である生成物を、必要によフて、α−
アミラーゼ（ＥＣ３，２，１，１）　、β−アミラーゼ
（ＥＣ３，２，１，２）　、グルコアミラーゼ（ＥＣ３
，２，１，３）などによフて、部分加水分解し、そのα
−Ｄ−グルコシル基の数を低ｘｈせることができる。例
えば、グルコアミラーゼを作用させる場合には、２−０
−α−Ｄ−マルトシルーＬ−アスコルビン酸以上の高分
子物を加水分解し、２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−
アスコルビン酸を蓄積生成させることができ、また、β
−アミラーゼを作用きせる場合には、主に、２−０−α
−ｐ−マルトテトラオシルーＬ−アスコルビン酸以上の
高分子物を加水分解し、２−０−α−Ｄ−グルコシル−
Ｌ−アスコルビン酸、２−０−α−Ｄ−マルトシルーＬ
−アスコルビン酸および２−〇−α−ｐ−マルトトリオ
シルーＬ−アスコルビン酸の混合物を蓄積生成させるこ
とができる。

以上述べたように、各種方法により生成せしめた直接還
元性を示さないα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸含
有溶ｒ＆は、一般に、ａ−グリコシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸のみならず、未反応のＬ−アスコルビン酸、α−グ
ルコシル糖化合物などを含有しているけれども、そのま
まで、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸含有製品に
することができる。

通常は、反応溶液を加熱するなどして酵素を失活させ、
濾過、濃縮してシラツブ状の、更には、乾燥、粉末化し
て粉末状のα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸含有製
品にする。

更に、精製されたα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン＃
！！品を製造する場合には、α−グリコシル−Ｌ−アス
コルビン酸と未反応のＬ−アスコルビン酸、Ｄ−グルコ
ース、α−グルコシル糖化合物など央雑物との分子量、
親和性などの違いを利用する分離手段、例えば、膜分離
、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフ
ィー、ゲル濾過クロマトグラフィー　イオン交換クロマ
トグラフィーなどの方法で分ｍ精製すれば、高純度の製
品を得ることも容易に達成することがＴ：きる。この際
、分離されるＬ−アスコルビン酸、α−グルコシル糖化
合物などを、再度、糖転移反応の原料として用いること
も有利に実施できる。また、糖転移反応終了後、り０マ
ドグラフイーなどの分離手段にかけるまでの間に、必要
ならば、例えば、反応液を加熱して生じる不溶物を濾過
して除去したり、活性炭などで処理して反応液中の蛋白
性物質、着色物質などを吸着除去したり、陽イオン交換
樹脂（Ｈ型）で脱ミネラルしたり、陰イオン交換樹脂（
ＯＨ型）に吸着させ、アニオン若しくは塩類溶液などで
脱着処理するなどの精製法を組合せて利用することも随
意である。

このようにして得られるα−グリコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸は次の特長を有している。

（１）直接還元性を示ざず、きわめて安定である。

し−アスコルビン酸とは違って、メイラード反応を起こ
しにくい。従って、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、脂質
、糖質、生理活性物質などと共存しても無用の反応を起
ざず、むしろ、これら物質を安定化する。

（２）加水分解を受けてＬ−アスコルビン酸を生成し、
Ｌ−アスコルビン酸と同様の還元作用、抗酸化作用を示
す。

（３）体内の酵素により、Ｌ−アスコルビン酸とＤ−グ
ルコースとに容易に加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸
本来の生理活性を示す。

（４）し−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物な
どとを経口摂取することにより、生体内で生成され、代
謝きれる物質であることから、その安全性は極めて高い
。

（５）α−グルコシル糖化合物などの糖類を含有する製
品の場合には、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸の
効果を発揮するのみならず、糖類が賦形、増量効果や、
甘味効果を発揮することができ、また、糖類を除去した
精製製品の場合には、賦形、増量効果は低いものの、少
量でα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸本来の効果を
発揮することができる。

これらの特長から、直接還元性を示さないα−グリコシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸は、安定性、安全性の高い天然
型のビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、呈味改善剤
、酸味剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、紫外線吸収
剤などとして、飲食物、嗜好物、また、ウィルス性疾患
、！［［Ｉ菌性疾患、悪性腫瘍など感受性疾患の予防剤
、治療剤、更には、美肌剤、色白剤などの化粧品などに
配合して、望ましくは、０．００１Ｗ／Ｗ％以上配合し
て有利に利用できる。

また、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸は、酸味、
塩から味、渋味、旨味、苦味などの呈味を有する各種物
質ともよく調和し、耐酸性、耐熱性も大きいので、普通
一般の飲食物、嗜好物、例えば、醤油、粉末醤油、味噌
、粉末味噌、もろみ、ひしお、フリカケ、マヨネーズ、
ドレッシング、食酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、
天つゆ、麺つゆ、ソース、ケチャツプ、焼肉のタレ、カ
レールウ、シチューの素、スープの素、ダシの素、複合
調味料、みりん、新みりん、テーブルシュガーコーヒー
シュガーなどの各種調味料、せ凡べい、あられ、おこし
１．カリントウ、求肥、餠類、まｈじゆう、ういろう、
あん類、羊輿、水羊苧、錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉
などの各種和菓子、パン、ビスケット、クラッカー、ク
ツキー、パイ、プリン、シュークリーム、ワツフル、ス
ポンジケーキ、ドーナツ、チョコレート、チューインガ
ム、キャラメル、キャンデーなどの各種洋菓子、アイス
クリーム、シャーベットなどの氷菓、果実のシロップ潰
、水蜜などのシロップ類、バタークリーム、カスタード
クリーム、フラワーペースト、ビーナツツペースト、フ
ラーペーストなどのスプレッド、ペースト類、ジャム、
マーマレード、シロップ漬、糖果などの果実、野菜の加
工食品類、パン類、麺類、米飯類、人造間などの穀類加
工食品類、サラダオイル、マーガリンなどの油脂食品類
、福神漬、べったら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬
物類、たくあん漬の素、白菜漬の素などの漬物の索類、
ハム、ソーセージなどの畜肉製品類、魚肉１１ム、魚肉
ソーセージ、カマボコ、チクワ、ハンペンなどの魚肉製
品、ウニ、イカの塩辛、酢コンブ、ききするめ、ふぐの
みりん干しなどの各種珍味類、のり、山菜、するめ、小
魚、貝などで製造きれるつくだ魚類、煮豆、ポテトサラ
ダ、コンブ巻、天ぷらなどのそう菜食品、錦糸卵、乳飲
料、バターチーズなどの卵、乳製品、魚肉、畜肉、果実
、野菜などのビン詰、缶詰類、合成酒、増醸酒、果実酒
、洋酒などの酒類、コーヒー、ココア、ジュース、炭酸
飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料などの清涼飲料水、プリン
ミックス、ホットケーキミックス、即席ジュース、即席
コーヒー、即席しるこ、即席スープなど即席飲食品など
に、ビタミンＣ強化剤、呈味改善剤、酸味剤、品質改良
剤、安定剤、抗酸化剤などの目的で有利に利用すること
ができる。

また、家畜、家禽、蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のため
の飼料、餌料などにビタミンＣ強化剤、呈味改善剤、抗
酸化剤、唯好性向上などの目的で配合して利用すること
も好都合である。

その他、タバコ、トローチ、肝油ドロップ、複合ビタミ
ン剤、口中清涼剤、口中香錠、うがい薬、経営栄養剤、
内服薬、注射剤、線面みがき、口紅、アイシャドウ、乳
液、化粧水、クリーム、ファウンデーション、日焼は止
め、洗顔石鹸、シャンプー、リンスなど各種固状、ペー
スト状、液状の嗜好物、感受性疾患の予防剤、治療剤す
なわち抗感受性疾患剤、美肌剤、色白剤などの化粧品な
どに配合して利用することも有利に実施でき、更には、
紫外線吸収剤、劣化防止剤などとしてプラスチック製品
などに配合して利用することも、α−グリコシド加水分
解酵素の測定用基質などに利用することも有利に実施で
営る。

また、本発明でいう感受性疾患とは、α−グリコシル−
Ｌ−アスコルビン酸によって予防され若しくは治療され
る疾患であり、それが、例えばウィルス性疾患、細菌性
疾患、外傷性疾患、免疫疾患、アレルギー疾患、糖尿病
、白内障、悪性！ＩＩ癌などであってもよい。α−グリ
コシル−Ｌ−アスコルビン酸感受性疾患の予防剤若しく
は治療剤は、その目的に応じてその形状を自由に選択で
きる。例えば、噴霧剤、点眼剤、点鼻剤、うがい剤、注
射剤などの液剤、軟膏、はっぷ剤、クリームのようなペ
ースト剤、粉剤、顆粒、カプセル剤、錠剤などの固剤な
どである。製剤に当たっては、必要に応じて、他の成分
、例えば、治療剤、生理活性物質、抗生物質、補助剤、
増量剤、安定剤、看色剤、着香剤などの１種若しくは２
種以上と併用することも随意である。

投与量は、含量、投与経路、投与頻度などによって適宜
調節することができる。通常、成人１日当り、約０．０
０１乃至１００グラムの範囲が好適である。

また、化粧品の場合も、大体、前述の予防剤、治療剤に
準じて利用することができる。

α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸を含有せしめる方
法としては、それらの製品が完成するまでの工程で、例
えば、混和、混捏、溶解、浸漬、散布、塗布、噴霧、注
入など公知の方法が適宜選ばれる。

また、本発明のα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸、
または、２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸が、遊離の酸の場合には、必要により、これを水酸
化金属、炭酸金属などの水溶液と反応させて、２−０−
α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の塩、
例えば、ナトリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩
、鉄塩、銅塩、亜鉛塩などにして、ｐＲＫ［整するとと
もにビタミンＣ作用とミネラルとを併せ持つ物質を調製
し、これを栄養強化剤、化学薬品などとして利用するこ
とも有利に実施できる。

以下、本発明の直接還元性を示さないα−グリコシル−
Ｌ−アスコルビン酸の代表例を実験を用いて詳細に説明
する。

実験　１　α−グルコシダーゼ標品 ラットの小腸を０．１Ｍリン酸塩１１１１ｊ液（＋））
！７゜０）に２０１７／ＩＪＸになるように加え、これ
をホモゲナイザーで均質化し、遠心分離（４，０００Ｘ
ｇ、　１０分間）し、この上清にメルク社製トリプシン
を終末濃度０．１ｇ／Ｌになるよう加えて室温下で４時
間維持し、次いで冷エタノールを２倍容加え、遠心分離
し、この沈θを０．０１Ｍリン酸塩緩衝液（ｐ）１７．
０）に溶かして、半透膜に入れ、同緩？！！７液に対し
て１５時間透析した。

その後、常法に従って、ＤＥＡＥ−セルロースカラムク
ロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトカラムクロ
マトグラフィーにかけ、α−グルコシダーゼ活性画分を
採取し、これを凍結乾燥したものをα−グルコシダーゼ
標品とした。

氷晶は比活性６０．８　（単位／ｍｇ蛋白質）で、精製
倍率４６０倍、活性収率的４７％であった。

ここでいう活性１単位とは、１．３５ｍＭ　ＥＤＴＡを
含む０．１Ｍ酢酸塩１！Ｉｉ液’（ｐＨ６，０）　７５
０μＬト４１Ｊ／Ｖｌマルトース２５０μＬとの混液に
、適当に希釈した酵素液１００μＬを加え、３７℃で３
０分間反応きせな後、沸騰水に３分間保って反応を停止
させ、これを遠心分離し、その上清２０μＬを採り、こ
れに発色試薬（グルコースオキシダーゼ法、和光純薬社
製、商品名グルコースＢテスト）　１ｍＬを加えて、３
７℃に２０分間保って発色させ、次いで５０５ｎ＠にお
ける吸光度を測定する条件で、３７℃、１分間に１１ｔ
　ｌ！Ｉｏ　ｌｅのグルコースを遊離する酵素量をいう
。

実験　２　α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸（
１）糖転移反応 Ｌ−アスコルビン酸７．０４重量部、マルトース１２゜
８１℃量部およびチオ尿素０．２重量部を０．２）１酢
酸媛街液（ｐ）１５．３）　１００重量部に溶解し、更
に、実験１の方法で調製した部分精製α−グルコシダー
ゼ標品をマルトースグラム当り０．５単位加え、遮光下
、５０℃で５時間反応させな。次いで、４倍容の１゜０
６１Ｊ／Ｖ％メタリン酸溶液を加え酵素を失活させて反
応を停止した。

氷晶を高速液体クロマトグラフィーで測定したところ、
反応に用いたＬ−アスコルビン酸の約３０％が糖誘導体
に変換していた。

（２）精製 （１）の反応停止液を、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製造のゲル濾
過剤（商品名Ｂ１ｏ−Ｇｅ１　Ｐ−２）を用いて、水を
溶出液としてゲル濾過クロマトグラフィーを行ない、α
−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸の高含有画分を
採取し、次いで島津製作所社製造のカラム（商品名５ｈ
ｉｎ−ｐａｃｋ　０ＤＳ）を用いて、０゜３Ｗ／１１１
ｘ酢酸を溶出液として高速液体クロマトグラフィーを行
ない、α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸寓含有
画分を採取し、減圧濃縮し、凍結乾燥し粉末化して、純
度９９．９Ｘの高純度α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸標品を、反応液中のα−Ｄ−グルコシル−Ｌ−
アスコルビン酸に対して、収率的８０Ｗ／Ｗ％で得た。

（３）理化学的性質 本発明のα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸の代表例
として、（２）で調製した高純度α−Ｄ−グルコシル−
Ｌ−アスコルビン酸標品を用いて、次に示す理化学的性
質を調べた。

なお、α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸よりも
α−Ｄ−グルコシル基の数の大きいものの例として、実
施例Ａ−１の方法で得たα−Ｄ−グリコシル−Ｌ−アス
コルビン酸を用いて、できるだけ調べ、その性質をカッ
コ内［］に示した。

・元素分析’　Ｃｌ２８１８０目として理論値Ｃ＝４２
．６Ｘ　　Ｈ＝５．３６Ｘ実測値Ｃ＝４２．３Ｘ　　Ｈ
＝５．３８ＫＮ＜０．ＯＩＸ ・分子量：質量分析装置　（日立製作所要、１４−８０
Ｂ　）を用いてＦＤマススペクトルを測定した結果、（
Ｍ÷Ｈ戸（Ｃ１２Ｈ１８０１１）ＩＷ＝３３８）　とし
て３３９が観劇きれた。

・紫外線吸収スペクトル：　ＰＨ７，０で２６０ｎｍに
、ｐＨ２，０で２３８ｎｍに吸収極大を示す。

［本性質と実質的に同一の性質を示す。１・赤外線吸収
スペクトル：　ＫＢｒＢｒ法で測定した。

結果は、図に示す。

［本性質と実質的に同一の性質を示す。］−ＮＭＲ：　
ＮＭＩＩ定装置（日本電子製、ＪＮ１４−　ＧＸ４００
　）を用いて測定した。

測定溶媒は重水を用い、測定時の溶液の＋＞Ｈは２゜８
であった。

内部標準としてＴＳＰ　（ｓｏｄｉｕｍ　３−’ｔｒｉ
ｍｅｔｈｙｌ−ｓ目ｙｌｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ　”２．
２．３．３−ｄ４）を用いた。

ＩＨ−ＮＭＲδｐｐ陣　（Ｃ２０） ３．５０　（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ＝９．５．　Ｊ＝９．７
　Ｈｚ）３．５６　（ＩＬ　ｄｄ、　Ｊ＝３．４．　Ｊ
＝９．５　Ｈｚ）３．７５　（２Ｌ　　ｄ、　Ｊ＝６．
４　Ｈｚ）３．７８　（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝３．ＯＦＩ
り３．８６　（ＬＨ，ｄｄ、　Ｊ　＝９．５．　Ｊ＝９
．５　Ｈｚ）４．０２　（ＬＨ，ｄｔ、　Ｊ＝９．７．
　Ｊ＝３．０　Ｅｌｚ）４．０８　（ＩＲ，ｔｄ、　Ｊ
＝６．４．　Ｊ＝１．５　Ｈｚ）４．９１　（ＩＩ（、
ｄ、　　Ｊ　＝１．５　）１ｚ）５．５２　（１）１．
　　ｄ、　　Ｊ＝３．４　）１ｚ）・解離定数：ｐＫａ
＝３．０ この値を、ゼイ・セルノウ（Ｊ、Ｊｅｒｎｏｖ）等、テ
トラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　）第３５巻、
第１４８３乃至１４８６頁（１９７９年）の第１表およ
びパオーウエン・ルー（Ｐ６ｏ−Ｍｅｎ　Ｌｕ）等、ジ
ャーナル・アグリカルチュラル・フード・ケミストリー
（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　
Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）第３２巻、第２１乃至
２８頁（１９８４年）の第２表に示される各種アスコル
ビン酸誘導体の解離定数（ｐＫａ）を参照すると、本物
質の場合には、そのアスコルビン酸部分の２位のアルコ
ール基がα−Ｄ−グルコシル結合に関与し、３位のアル
コール基は遊離のままであると判断される。

・メチル化分析 前述のパオーウェン・ルー（Ｐａｏ−Ｗｅｎ　Ｌｕ）等
の文献に記載きれているＬ−アスコルビン酸をジアゾメ
タンによりメチル化して主に３−〇−メチルーＬ−アス
コルビン酸を生成するメチル化反応の方法により、本物
質をメチル化し、次いで、得られるメチル化物を加水分
解して分析したところ、主として、３−０−メチル−し
−アスコルビン酸とＤ−グルコースとを生成した。

これらＨ）ＩＲ、解離定数、メチル化分析のデータから
、Ｌ−アスコルビン酸の２位の炭素のアルコール基がエ
ーテル結合により０−グルコースとα−グルコシド結合
を形成しているものと判断される。

・溶剤に対する溶解性：水、０．１Ｎ−カセイソーダ、
０、　ＩＮ　−Ｉ酸に易溶、メタノール、エタノールに
微溶、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル
に不溶。

［本性質と実質的に同一の性質を示す。］・呈色反応：
直接還元性を示さず、２，６−シクロルフエノールイン
ドフエノールを還元脱色しない。２．４−ジニトロフェ
ニルヒドラジン反応を示さない。アントロン硫酸反応で
緑色を呈する。

［本性質と実質的に同一の性質を示す。］・安定性： （ａ）α−グルコシダーゼ作用またはＩＮ−塩酸、１０
０℃、５分間処理により加水分解され、し−アスコルビ
ン酸とＤ−グルコースとをモル比１：１で生成する。

［グルコアミラーゼにより加水分解され、２−０−α−
Ｄ−グルコシル−し一アスコルビン酸とＤ−グルコース
とを生成する。］（ｂ）β−グルコシダーゼによフては
加水分解されない。

［本性質と実質的に同一の性質を示す。］（ｃ）２−０
−α−〇−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸と、特公昭
４８−３８１５８号公報で開示されている６−０−α−
Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸およびＬ−アスコ
ルビン酸との水溶液中での安定性を比較した。すなわち
、それぞれの試料を濃度７０μＬ　ＰＨ１，０またはｐ
Ｈ２，０に調整して吸光光度計用セルに採り、これを２
０℃に維持して経時的に吸光光度計によりＰ）１７．０
の場合２６０ｎｍで、Ｐ）１２゜０の場合２４５ｎｍで
吸光度を測定し、その残存率（Ｘ）を測定し比較した。

結果は表に示す。

表の結果からも明らかなように、２−ｏ−α−〇−グル
コシル−Ｌ−アスコルビン酸は、６−０−α−０−グル
コシル−し−アスコルビンａ、ｔ、−アスコルビン酸の
いずれとも違って、水溶液中できわめて安定である。

［２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸の
性質と実質的に同一の性質を示す。］・生理活性 （ａ）チトクロームＣ還元活性 ２−０−α−Ｄ−グルコシル−し一アスコルビン酸と、
６−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸およ
びし一アスコルビン酸とを用いて、チトクロームＣの還
元活性を比較した。

すなわち、０．１Ｍリン酸カリウムｖＪ衝液（ｐＨ７，
８）−０，２ｔＭ　ＥＤＴＡ　Ｏ，５■Ｌ、　０．１ｍ
ＭチトクロームＣＯ，１ｍしい一定量の水を加えて終末
液量１ｍＬとし、これにそれぞれの試料１０■Ｍを含む
１０μＬを加え、室温にて５５０ｎｍにおける吸光度の
変化を分光光度計にて」ｑ定し比較した。還元活性は、
反応期速度より吸光度差（ΔＡ）　／分／１０μＬを求
め判定した。

その結果、２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸ば、６−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸、Ｌ−アスコルビン酸のいずれとも違って、還元
活性を示さないことが判明した。

なお、２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン
酸は、実験１の方法でＦＡＩ８！したα−グルコシダー
ゼ標品により加水分解されると、この還元活性を示すこ
とが判明した。

（ｂ）コラーゲン合成活性 ２−０−α−Ｄ−グルコシル−し一アスコルビン酸と、
６−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸およ
びＬ−アスコルビン酸とを用いて、コラーゲン合成活性
を調べた。

すなわち、イーグルＭＥＮ　（ＩＯＸＦＢＳ含有）培地
中でヒトの線維芽細胞（７Ｘ１０’細胞／プレート）を
１週間培養し、これに３１−プロリンを層り当＆ｌＩ４
μＣ１１β−アミノプロピオニトリルをＩＬ当り２０μ
ｇおよびそれぞれの試料を０．２５ｍＭになるように加
え、更に、２４時間培養した。これにｌ０ＩＪ／Ｖ％　
トリクロロ酢酸を加え、培養物中のコラーゲン成分を回
収し、凍結乾燥した。この標品を溶解し、ＰＨを調整後
、３７℃、９０分間コラゲナーゼ（ＩＩＩ型）処理を行
ない、遠心分離し、この上清に含まれる放射能を測定し
コラーゲン合成活性を求めた。

その結果、２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸は、アスコルビン酸と同等のコラーゲン合成活性
を有していることが判明した。

なお、６−０−α−Ｄ−グルコシル−し−アスコルビン
酸のコラーゲン合成活性は、これらよりやや劣る傾向に
あった。

以上の理化学的性質から、本実験で調製した直接還元性
を示さないα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸は、 式〔１夏ＩＪ　： Ｈ２−ＯＨ ただし、ｎは０または１乃至 ６から選ばれる整数 で示される化学構造を有している。

また、その代表例としての２−０−α−Ｄ−グルコシル
−Ｌ−アスコルビン酸は、 式［■］： ＣＨ２−ＯＨ で示される化学構造を有している。

実験３　生体内での生成 ラットに、Ｌ−アスコルビン酸１ｇとマルトース５００
ｍｇ　（ＩＯＷ／ＶＸ液、５ｍＬ）とを経口投与し、経
時的に採血し、遠心分離し、その上清（血漿）を用いて
、高速液体クロマトグラフィーで確認したところ、α−
Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸および少量のα−
Ｄ−マルトシルーＬ−アスコルビン酸に相当するピーク
は、経口投与後３０分頃から認められ、１８０分で最高
に達し、その後、急激に減少し、３６０分で血液中から
消失した。

このピークのうち、大部分を占めるα−Ｄ−グルコシル
−Ｌ−アスコルビン酸を示す物質を単離し、詳細に調べ
たところ、前述の２−〇−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−ア
スコルビン酸の理化学的性質と同一であることが判明し
た。

従って、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸は、生体
内で生成され、代謝され、消失する生体物質であること
から、その安全性は極めて高いものであると言える。

実験　４　急性毒性テスト ７周令のｄｄ系マウスを使用して、実験２（２）での方
法で調製した高純度α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸標品を経口投与して急性毒性テストをしたところ
、５ｇ！で死亡例は見られず、これ以上の投与は困難で
あった。

従って、本物質の毒性は極めて低い。

なお、実施例Ａ−１の方法で製造したα−グリコシル−
Ｌ−アスコルビン酸を用いて本テストを行ったところ、
同様の結果を得、毒性の極めて低いことが判明した。

以下、本発明の実施例として、直接還元性を示さないα
−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造例を実施例Ａ
で、その用途例を実施例Ｂで述べる。

実施例　Ａ−１α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸 α−シクロデキストリン９重量部を水２０重量部に加熱
溶解し、還元下に保って、し−アスコルビン酸３重量部
を加え、ＰＨ５，５，６０℃に維持しつつ、これに、シ
クロマルトデキストリン−グルカノトランスフェラーゼ
（株式会社林原生物化学研究所販売）をα−シクロデキ
ストリングラム当り１５０単位加えて４０時間反応させ
た。反応液を高速液体クロマトグラフィー（島津製作所
製、ＬＣ−６ｉカラム、ＹＭＣＡＱ３０３０ＤＳ；溶離
液、０．１Ｍ　ＫＨ２ＰＯ４−Ｈ３ＰＯ４（ＧＩＨ２，
Ｏ）　；流速＋０．５ｍＬ／ｍ１ｎｉ検出１日本分光工
業（株）ＭυＬＴ　−３４０）で分析したところ、Ｌ−
アスコルビン酸が９．５分の位置に現れたのに対し、新
たに生成したα−０−グルコシル−し−アスコルビン酸
が１１．２分、α−り一マルトシルーＬ−アスコルビン
酸が１５．７分、α−Ｄ−マルトトリオシルーＬ−アス
コルビン酸が２０．６分、α−Ｄ−マルトテトラオシル
ーＬ−アスコルビン酸が２４．９分、α−Ｄ−マルトペ
ンタオシル−Ｌ−アスコルビン酸が２８．１分、α−Ｄ
−マルトヘキサオシルーＬ−アスコルビン酸が３２．１
分およびα−Ｄ−マルトヘプタオシルーＬ−アスコルビ
ン酸が３８．６分の位置に現れた。Ｌ−アスコルビン酸
の約５１がこれらα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸
へ変換していた。

本反応液を加熱して酵素を失活させ、濾過し、濾液を実
験２（２）の方法に準じてα−グリコシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸の各成分を精製単離し、混合して各成分を含有
したα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸を採取し、こ
れを減圧濃縮、粉末化してα−グリコシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸の粉末製品を、固形物当り、原料のＬ−アスコ
ルビン酸に対して約９０νｌｖｚの収率で得た。

水晶は、直接還元性を示ざす、安定性、生理活性も充分
で、ビタミンＣ強化剤としてばかりでな（、安定剤、品
質改良剤、抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収剤などと
して、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利
用で伊る。

実施例　Ａ−２α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸 デキストリン（ＤＥＥＣ）４０重量部を水５０重量部に
加熱溶解し、還元下に保って、し−アスコルビン酸１３
重量部を加え、ｐｏｓ、ａ、６５℃に維持しつつ、これ
に、シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェ
ラーゼをデキストリングラム当り２７０単位加えて、４
００時間反応せた。反応液を、実施例Ａ−１と同様に高
速液体クロマトグラフィーで分析したところ、Ｌ−アス
コルビン酸の約６５駕が、実施例Ａ−１と同様に、α−
Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸、α−Ｄ−マルト
シルーＬ−アスコルビン酸、α−Ｄ−マルトトリオシル
ーＬ−アスコルビン酸、α−Ｄ−マルトテトラオシルー
Ｌ−アスコルビン酸、α−Ｄ−マルトペンタオシル−Ｌ
−アスコルビン酸、α−Ｄ−マルトヘキサオシルーＬ−
アスコルビン酸なとのα−グリコシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸に変換していた。

反応液を加熱し酵素を失活させ、濾過し、濾液を常法に
より活性炭で脱色精製し、濃縮して、シラツブ状のα−
グルコシル糖化合物を含有するα−グリコシル−Ｌ−ア
スコルビン酸製品を固形物当り原料重量に対して約９０
１Ｊ／Ｗχで得た。

本品は、それに含まれるα−グリコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸が直接還元性を示ざず、安定性、生理活性も充分
で、ビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、調味料、保
湿剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性剤、紫
外線吸収剤などとして、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧
品などに有利に利用できる。

実施例　Ａ−３２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アス
コルビン酸 実施例Ａ−２の方法に準じて調製したシラツブ状のα−
グルコシル糖化合物を含有するα−グリコシル−Ｌ−ア
スコルビン酸製品１重量部を水４重量部に溶解し、これ
にグルコアミラーゼ（ＥＣ３，２，１，３、東洋紡績株
式会社販売）を該製品固形物ダラム当り１００単位加え
、５０℃、５時間反応させた。反応液を高速液体クロマ
トグラフィーで分析したところ、各成分を含んでいたα
−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸は、２−０−α−Ｄ
−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸に変換していた。

反応液を加熱して酵素を失活させ、濾過し、濾液を実験
２（２）の方法に準じて精製し、２−０−α−Ｄ−グル
コシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、減圧
濃縮し、粉末化して、純度９９，０駕以上の高純度２−
０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸を原料の
Ｌ−アスコルビン酸に対して約８０ｖ／Ｖ蒐の収率で得
た。

本品の理化学的性質を調べたところ、実験２（３）で示
す２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸と
実質的に同一であった。

本２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸は
、直接還元性を示ざす、安定性、生理活性も充分なビタ
ミンＣ強化剤として、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、
生理活性剤、紫外線吸収剤、化学品、医薬原料などとし
て、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品、試薬などに有利
に利用できる。

実施例　Ａ−４α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸 デキストリン（ＤＥ１８）　２０重量部を水７０重量部
に加熱溶解し、還元下に保って、これにＬ−アスコルビ
ン酸１０重量部と実験１の方法でｉｌｌ製した部分精製
α−グルコシダーゼをデキストリングラム当り４単位加
え、遮光下、ｐＨ５，０，５０℃で８時間反応させた。

次いで実施例Ａ−２の方法に準じて精製し、濃縮、粉末
化して粉末状の製品を収率的ＱＱＷ／Ｗ％で得た。

本品は、約１０１７／Ｗ％のα−グリコシル−Ｌ−アス
コルビン酸を含有していた。

本品は、それに含まれるα−グリコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸が直接還元性を示ざず、安定性、抗酸化剤、生理
活性も充分で、ビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、
調味料、保湿剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理
活性剤、紫外線吸収剤などとして、飲・食物、抗感受性
疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。

実施例Ａ−５α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸 マルトース１０重量部を水８０重量部に加熱溶解し、還
元下に保って、これにし−アスコルビン酸１０Ｍ景部と
シグマ社製コメの揮子由来のα−グルコシダーゼをマル
トースグラム当り４単位加え、遮光下、ｐＨ６，０，４
５℃で６時間反応させた。次いで実施例Ａ−２の方法に
準じて精製し、濃縮、粉末化して、粉末状の製品を収率
的９０Ｗ／ＷＸで得た。水晶は、約１５％のα−グリコ
シル−Ｌ−アスコルビン酸を含有していた。

水晶は、それに含まれるα−グリコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸が直接還元性を示ざず、安定性、生理活性も充分
で、ビタミンＣ強化剤ばかりでなく、甘味剤、調味剤、
保湿剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性剤、
紫外線吸収剤などとして、飲食物、抗感受性疾患剤、化
粧品などとして有利に利用できる。

実施例Ａ−６α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸 （１）α−グルコシダーゼ標品の調製 マルトース４Ｗ／Ｖ駕、リン酸１カリウム０．１Ｗ／Ｖ
Ｘ１硝酸アンモニウム０．１’ｉＪ／Ｖχ、硫酸マグネ
シウム０．０５１ｊ／Ｖ％、塩化力！ｊ’７ム０．０５
シ／ＶＬポリヘプトン０．２Ｗ／ＶＸ。

炭酸カルシウムＩＷ／ＶＸ　（別に乾熱滅菌して植菌時
に無菌的に添加）および水からなる液体培地にムコール
　ジャバニカス（Ｍｕｃｏｒ　ｊａｖａｎｉｃｕｓ）　
ＩＦＯ４５７０を温度３０℃で４４時間振盪培養した。

培養終了後、菌糸体を採取し、固定化α−グルコシダー
ゼ標品とした。

（２）α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造マル
トース（林原株式会社　登録商標サンマルト）４０重量
部を水７０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、これ
にし−アスコルビン酸１０重量部と（１）の方法で調製
した固定化α−グルコシダーゼ標品をマルトースグラム
当り１０単位加え、遮光下、ＰＨ５，５，５０℃で３時
間反応させな。

これを濾過し、固定化α−グルコシダーゼ標品を回収し
、再利用に回した。得られる′ａｌｌ！を加熱し、実施
例Ａ−２の方法に準じて精製し、ａ縮、粉末化して、粉
末状の製品を収率的９５す／Ｗ！で得た。

水晶は、約７１１１／ＷＸのα−グリコシル−Ｌ−アス
コルビン酸を含有していた。

水晶は、それに含まれるα−グリコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸が直接還元性を示ざす、安定性、生理活性も充分
で、ビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、甘味剤、調
味剤、保湿剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活
性剤、紫外線吸収剤などとして、飲食物、抗感受性疾患
剤、化粧品などとして有利に利用できる。

実施例　Ｂ−１チューインガム ガムベース２５重量部及び実施例Ａ−６の方法で得たα
−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸含有粉末２０重量部
とを６０℃でミキサーにより混練し、次いで、無水結晶
マルチトール（林原商事株式会社販売、登録商標マビッ
ト）５０重量部、リン酸カルシウム１．５重量部及びＬ
−メントールβ−シクロデキストリン包接化合物０．１
！量部を混合し、最後に調味料少量を混合して充分に混
速し、ロール加工、裁断してチューインガムを得た。水
晶は、ビタミンＣを強化したチューインガムであって、
しかも低ａｉ蝕性、低カロリーである。

実施例　Ｂ−２求肥 モチ米澱粉１重量部に水１．２重量部を混合し、加熱糊
化しつつ、これに砂糖１．５重量部、結晶性β−マルト
ース（林原株式会社製造、登録商標サンマルト）０．７
重量部及び実施例Ａ−２の方法で得たα−グリコシル−
Ｌ−アスコルビン酸含有シラツブ０．５重量部を混和し
、以後、常法に従って、成形、包装して求肥を製造した
。

水晶は、ビタミンＣを強化した求肥で、老化が抑制され
日持よく、口当り、風味良好なきびだんご風和菓子であ
る。

実施例　Ｂ−３混合甘味料 はちみつ１００重量部、異性化糖５０重量部、黒砂糖２
重量部及び実施例Ａ−３の方法で得た高純度２−０−α
−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸粉末１重量部を
混合して混合甘味料を得た。

水晶は、ビタミンＣを強化した甘味料で、健康食品とし
て好適である。

実施例　Ｂ−４チョコレート カカオペースト４０重量部、カカオバター１０重量部、
無水結晶マルチトール５０重量部及び実施例Ａ−１の方
法で得たα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸含有粉末
１重量部を混合してレファイナーに通して粒度を下げた
後、コンチエに入れて５０℃で二昼夜練り上げる。この
間にレシチン０．５重量部を添加して充分に分散させた
。次いで温度調節型で３１℃に調節し、バターの固まる
直前に型に流し込み、震動機でアワ抜きを行った後、１
０℃の冷却トンネルを２０分間で通過させて固化させた
。これを型抜きして包装し製品を得た。

氷晶は、吸湿性がなく、色、光沢共に良く、内部組織も
良好であり、口中でなめらかに溶け、上品な甘味とまろ
やかな風味を有する。また、氷晶は、ビタミンＣを強化
したチョコレートであって、低カロリー、低鵬蝕性であ
る。

実施例　Ｂ−５サンドクリーム 結晶性α−マルトース（林原株式会社製造、登録商標フ
ァイントース）　１．２００重量部、ショートニングｔ
　、　ｏｏｏ重量部、実施例Ａ−４の方法で得たα−グ
リコシル−Ｌ−アスコルビン酸含有粉末１０重量部、レ
シチン１重量部、レモンオイル１重量部、バニラオイル
１重量部を常法により混和してサンドクリームを製造し
た。

氷晶は、ビタミンＣ強化したサンドクリームで、口当り
、溶は具合、風味とも良好である。

実施例　Ｂ−６錠剤 実施例Ａ−３の方法で得た高純度２−０−α−Ｄ−グル
コシル−Ｌ−アスコルビン酸粉末２０重量部に結晶性β
−マルトース１３重量部、コーンスターチ４重量部、ル
チン１重量部及びリボフラビン０．５重量部を均一に混
合した後、常法に従って打錠して、−錠１５０ｍｇの錠
剤を製造した。

氷晶は、ビタミンＣ１ビタミンＰ、ビタミンＢ２の複合
ビタミン剤で、安定性もよく、飲み易１錠剤である。

実施例　Ｂ−７カプセル剤 酢酸カルシウム・−水塩１０重量部、し−乳酸マグネシ
ウム・三水塩５０重量部、マルトース５７重量部、実施
例Ａ−３の方法で得たα−グリコシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸含有粉末２０重量部及びエイコサペンタエン酸２０
驚含有クーシクロデキストリン包接化合物１２重量部を
均一に混合し、顆粒成形機にかけて顆粒とした後、常法
に従って、ゼラチンカプセルに封入して、−カプセル１
５０ｍｇ入のカプセル剤を製造した。

氷晶は、血中コレステロール低下剤、免疫賦活剤、美肌
剤などとして、感受性疾患の予防剤、治療剤、健康増進
用食品などとして有利に利用できる。

実施例　Ｂ−８軟膏 酢酸ナトリウム・三水塩１重量部、ＤＬ−乳酸カルシウ
ム４重量部をグリセリン１０重量部と均一に混合し、こ
の混合物を、ワセリン５０重量部、木ロウ１０重量部、
ラノリン１０重量部、ゴマ油１４．５重量部、実施例Ａ
−４の方法で得たα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸
含有粉末１重量部及びハツカ油０．５重量部の混合物に
加えて、更に均一に混和して軟膏を製造した。

氷晶は、日焼は止め、美肌剤、色白剤などとして、更に
は外傷、火傷の治癒促進剤などとして有利に利用できる
。

実施例　Ｂ−９注射剤 実験２（２）の方法で得た高純度α−Ｄ−グルコシル−
Ｌ−アスコルビン酸粉末を水に溶解、中和し、常法に従
って、精製濾過してパイロゲンフリーとし、この溶液を
２０ｍＬ容アンジアンα−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコ
ルビンｆｉ５００ｍｇになるように分注し、これを封入
して注射剤を製造した。

本注射剤は、単体で、または、他のビタミン、ミネラル
などと混合して筋肉内又は静脈内に投与できる。また、
氷晶は、低温貯蔵の必要もなく、安定な製剤である。

氷晶は、Ｌ−アスコルビン酸の場合と比軟して、体内滞
留時間が約２乃至１０倍に延長きれ、徐々に加水分解を
受け、Ｌ−アスコルビン酸を放出し、Ｌ−アスコルビン
酸本来の生理効果を発揮する。

また、氷晶は、ビタミンＣ補給としてだけでなく、加水
分解され抗酸化剤として活性酸素の除去、過酸化脂質の
生成抑制などの効果を発揮し、ウィルス性疾患、細菌性
疾患、外傷性疾患、免疫疾患、アレルギー疾患、糖尿病
、白内障、循環器疾患、悪性腫瘍など各種疾患の予防剤
、治療剤に有利に利用できる。

実施例　Ｂ−１０注射剤 塩化ナトリウム６重量部、塩化カリウム０．３重量部、
塩化カルシウム０．２重量部、乳酸ナトリウム３゜１重
量部、マルトース４８重量部及び実施例Ａ−３の方法で
得た高純度２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸粉末２重量部を水１，０００重量部に溶解し、常
法に従ワて、精製濾過してパイロゲンフリーとし、この
溶液を滅菌したプラスチック容器に２５０ｍＬずつ充填
して注射剤を製造した。

氷晶は、ビタミンＣ補給としてだけでなり１．カロリー
補給、ミネラル補給剤としても利用され、更には、加水
分解き・れ、抗酸化剤として活性酸素の除去、過酸化脂
質の生成抑制などの効果を発揮し、病中、病後の治療促
進、回復促進、更には、ウィルス性疾患、細菌性疾患、
外傷性疾患、免疫疾患、アレルギー疾患、糖尿病、白内
障、循環器疾患、悪性Ｉｌｉ瘍など各種疾患の予防剤、
治療剤に有利に利用で伊る。

実施例　Ｂ−１１経管栄養剤 結晶性α−７７１１，ドース２ｏ重量部、グリシン１．
１重量部、グルタミン酸ナトリウム０．１８重量部、食
塩１．２重量部、クエン酸１重量部、乳酸カルシウム０
．４重量部、炭酸マグネシウム０．１重量部、実施例へ
−５の方法で得たα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸
含有粉末０．１重量部、チアミン０．０１重量部及びリ
ボフラビン０．０１重量部からなる配合物を調製する。

この配合物２４ｇずつをラミネートアルミ製小袋に充填
し、ヒートシールして経営栄養剤を調製した。

本経営栄養剤は、−袋を約３００乃至５００ａ＋Ｌの水
に溶解し、経管方法により鼻腔、胃、腸などへの経口的
又は非経口的栄養補給液としても有利に利用できる。

実施例　Ｂ−１２浴用剤 ＤＬ−乳酸ナトリウム２１重量部、ピルビン酸ナトリウ
ム８重量部、実施例Ａ−１の方法で得たα−グリコシル
−Ｌ−アスコルビン酸含有粉末５重量部及びエタノール
４０重量部を、精製水２６重量部及び着色料、香料の適
量と混合し、浴用剤を製造した。

氷晶は、美肌剤、色白剤として好適であり、入浴用の湯
に１００乃至１０，０００倍に希釈して利用すればよい
。氷晶は、入浴用の湯の場合と同様に、洗顔用水、化粧
水などに希釈して利用することも有利に実施できる。

実施例　Ｂ−１３乳液 ポリオキシエチレンベヘニルエーテル０．５重量部、テ
トラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール１重量
部、親油型モノステアリン酸グリセリン１重量部、ピル
ビン酸０．５重量部、ベヘニルアルコール０．５重量部
、アボガド油１重量部、実施例Ａ−３の方法で得た高純
度２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸粉
末１重量部、ビタミンＥ及び防腐剤の適量を、常法に従
って加熱溶解し、これにＬ−乳酸ナトリウム１重量部、
１．３−ブチレンゲリコール５重量部、カルボキシビニ
ルポリマー０．１重量部及び精製水８５．３重量部を加
え、ホモゾナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加
えて撹拌混合し乳液を製造した。

氷晶は、日焼は止め、美肌剤、色白剤などとして有利に
利用できる。

実施例　Ｂ−１４クリーム モノステアリン酸ポリオキシエチレングリコール２重量
部、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５重量部、
実施例Ａ−３の方法で得た高純度２−ｏ−α−Ｄ−グル
コシル−Ｌ−アスコルビン酸粉末２重量部、流動パラフ
ィン１重量部、トリオクタン酸グリ・セリル１０重量部
及び防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、これに
Ｌ−乳酸２重量部、１．３−ブチレングリコール５重量
部及び精製水６６重量部を加え、ホモゾナイザーにかげ
乳化し、更に香料の適量を加えて撹拌混合しクリームを
製造した。

氷晶は、日焼は止め、美肌剤、色白剤などとして有利に
利用できる。

［発明の効果］ 本文で述べたごとく、本発明の新規物質α−グリコシル
−Ｌ−アスコルビン酸は、直接還元性を示きず、安定性
に優れ、しかも、生体内で容易に加水分解きれ、Ｌ−ア
スコルビン酸本来の抗酸化性、生理活性を発揮する。そ
の上、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸は、生体内
で生成され、代謝される物質でもあることが判明したこ
とより、その安全性も極めて高い物質である。

また、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸がＬ−アス
コルビン酸とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶液
に糖転移酵素を作用きせる生化学的手法により容易に生
成できることより、経済性に優れ、その工業的実施も容
易である。

更に、この直接還元性を示さないα−グリコシル−Ｌ−
アスコルビン酸は、安定性、生理活性も充分で、ビタミ
ンＣ強化剤としてばかりでなく、安定剤、品質改良剤、
抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収剤などとして、飲料
、加工食品、嗜好物などの飲食物、感受性疾患の予防剤
、治療剤、更には美肌剤、色白剤など化粧品などに含有
せしめて有利に利用できる。従って、本発明のα−グリ
コシル−Ｌ−アスコルビン酸は広範な用途を有し、これ
ら産業界に与える工業的意義は極めて大きい。

、ｔｒ”原車な説明 ４、　　の　細な説明 図は、本発明のα−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン
酸の赤外線吸収スペクトル図を示す。

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. （１）直接還元性を示さないα−グリコシル−Ｌ−アス
   コルビン酸。
2. （２）Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物と
   を含有する溶液に糖転移酵素を作用させ、直接還元性を
   示さないα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸を生成せ
   しめ、これを採取することを特徴とする直接還元性を示
   さないα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造方法
   。
3. （３）糖転移酵素がシクロマルトデキストリン・グルカ
   ノトランスフェラーゼ（ＥＣ２．４．１．１９）または
   α−グルコシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２０）であるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第（２）項記載の直接還
   元性を示さないα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸の
   製造方法。
4. （４）直接還元性を示さないα−グリコシル−Ｌ−アス
   コルビン酸を含有せしめた飲食物。
5. （５）直接還元性を示さないα−グリコシル−Ｌ−アス
   コルビン酸を有効成分として含有せしめた抗感受性疾患
   剤。
6. （６）直接還元性を示さないα−グリコシル−Ｌ−アス
   コルビン酸を有効成分として含有せしめた化粧品。
7. （７）２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン
   酸。
8. （８）Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物と
   を含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコ
   アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．３）とを作用させ、２−
   ０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸を生成せ
   しめ、これを採取することを特徴とする２−０−α−Ｄ
   −グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造方法。
9. （９）糖転移酵素がシクロマルトデキストリン・グルカ
   ノトランスフェラーゼ（ＥＣ２．４．１．１９）または
   α−グルコシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２０）であるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第（８）項記載の２−０
   −α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造方法
   。
10. （１０）２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビ
    ン酸を含有せしめた飲食物。
11. （１１）２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビ
    ン酸を有効成分として含有せしめた抗感受性疾患剤。
12. （１２）２−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビ
    ン酸を有効成分として含有せしめた化粧品。