JPH03118306A - 望ましくない微生物に対するウイルスの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は望ましくない微生物、より詳細には衛生上望ま
しくない微生物に対するウィルスの使用に係る。更に、
本発明は衛生上望ましくない微生物を駆除するための衛
生用組成物にも係る。

微生物は単純な単細胞の顕微鏡的形状の生物である。微
生物の具体例は細菌、酵母、カビ及び真菌である。微生
物は多数の種類のものがあり、そのうちには病原性で動
物や人体に疾患を生じるものがある。十分な量の栄養の
存在下且つ適正な条件下で、微生物は迅速に成長及び増
殖する。これは感染をもたらすという意味で衛生的観点
から望ましくないのみならず、臭気、無機鱗屑又は他の
歓迎されない沈積物の形成のような付随現象を生じると
いう点でも望ましくない。

微生物の望ましくない増殖は種々の場所で生じる。例え
ば、細菌が歯で増殖すると人体又は動物の口内に歯垢を
形成し、齲歯又は他の疾患の原因となる。また、便器で
は大腸菌のような糞便細菌が増殖し、悪臭及び健康の潜
在的な危険を生じる。

更に人体の皮膚ではＰ、ａｃｎｅｓによる感染の結果、
通常アクネと呼称される見苦しい皮膚病変を生じる。

微生物を死滅させるため又はその成長を抑制するために
種々の方法を使用することができる。例えば、１種以上
の消毒剤（例えば次亜塩素酸塩）を含有する液体製品に
より便器を消毒することが知られている。このような製
品は湿潤及び清浄化を行うためにしばしば界面活性剤を
含有している。

別の例は殺菌性化合物を含有し得る石鹸のような皮膚清
浄製品である。このような系、特に皮膚清浄用の系の欠
点は、全微生物を不必要に殺すことにより「過剰殺害Ｊ
を生じるという点にある。他の例としては、液体１〜イ
レ消毒用製品があり、消毒用に使用される化学物質の大
部分は洗い流しな後に便器から下水系に直接流入する。

したがって、便器を消毒するために厳密に必要な量より
も大量の消毒剤が使用される。これは不経済であるのみ
ならず、環境上の問題も生じる。

医薬組成物の形態の特定の化学物質により病原性細菌を
駆除することも知られている。しかじながら、細菌によ
っては適切な化学物質が不明のものもある。更に、はと
んどの細菌は該細菌が連続的に暴露される物質に対して
何らかの形の耐性を発揮する傾向があるので、殺菌効果
を得るために必要な用量は次第に増加する。

４− 歯科衛生分野では、少量の殺菌剤（例えばクロロヘキシ
ジン）を含有する練り歯磨きにより歯垢を除去すること
が知られている。このような練り歯磨きは広い抗微生物
活性スペクトルを有するという欠点があり、一般に口内
細菌の数を減らすことにより耐性細菌又は酵母の所謂通
性感染は実際に助長され得る。

本発明の目的は衛生上望ましくない微生物、特に細菌の
増殖を阻止又は抑制し、上記問題を解消するような殺菌
性組成物を提供することである。

本発明者らは驚くべきことに、衛生上望ましくない微生
物の増殖を阻止又は抑制するためにウィルスを使用でき
ることを知見した。より詳細には、本発明者らは、衛生
上望ましくない細菌の増殖を阻止又は抑制するためにバ
クテリオファージを使用できることを知見した。

バクテリオファージはその繁殖のための宿主細胞に依存
するウィルスである。そのために、バクテリオファージ
は細菌細胞に感染し、感染性ファージの多数のコピーを
感染細胞に産生させる。ファージの産生が完了すると、
細菌細胞は破裂（溶菌）し、新しいファージが放出され
る。細菌はこうして破壊される。

したがって、本発明の第１の態様によると、望ましくな
い微生物を駆除するための衛生用組成物が提供され、該
組成物は、少なくとも１種の有機界面活性剤（好ましく
は非イオン性界面活性剤）を含有する適合性基材中に、
望ましくない微生物の１種以上を溶菌させることが可能
な１種以上のウィルスを有効量含有する。

好ましくは、望ましくない細菌の１種以上を溶菌させる
ことが可能な１種以上のバクテリオファージを有効量含
有する殺菌性組成物が提供される。

多くの異なる型のバクテリオファージが単離され、文献
中に記載されている。その種類は一重鎖ＤＮへ分子を含
む比較的単純なファージ（例えばｆｄ）からＴ偶数ファ
ージのような非常に複雑な核酸−タンパク質集合体まで
多様である。ファージによっては宿主範囲が狭いものが
あり、すなわち特定の型の細菌しか溶菌させることがで
きない。他のファージは種々の型の細菌に感染し、溶菌
させることができる。本発明では個々の用途に応じてい
ずれの型のバクテリオファージも使用することができる
。

本発明の組成物は感染性を失うことなくバクテリオファ
ージを所定期間貯蔵することが可能な適合性基材を必要
とする。基材は更に、少量の少なくとも１種の界面活性
剤を含有する。界面活性剤の種類は個々の用途に依存し
、非イオン性、カチオン性、アニオン性、両性又は双性
イオン性界面活性剤であり得る。基材のｐＨは一般に５
〜９であるが、９以上又は５以下のｐｎを有する組成物
でも許容可能であり、好ましくは緩衝剤で処理したもの
である。基材のイオン強度はバクテリオファージをその
構成成分への解離を阻止するように十分な高さにすべき
である。イオン強度が高いと解離及び／又は変性が生じ
得るので、極度に高くしてはならない。

本発明の第２の態様によると、便器に使用されるような
硬質表面クリーナーとして使用するための水性殺菌性組
成物が提供される。この組成物は０．００１〜１５，０
、好ましくは０．０１〜５，０、最適には０．１〜３．
０重量％の非イオン性界面活性剤を含有する。界面活性
剤の主要な機能は、組成物が表面全体に適正に分配され
るように表面の湿潤化を助長することである。別の機能
は当然のことながら、細菌に接近できるように汚れの可
溶化及び除去を助長することである。適切な非イオン性
界面活性剤は例えばＴｕｌｅｅｎ８０．２０．８１及び
Ｄｏｂａｎｏｌ（例えばＤｏｂａｎｏｌ　２３−６．５
）である。

組成物は更に０．０１〜２．０重量％の中性塩と、家庭
細菌（例えば大腸菌）に感染することが可能なバクテリ
オファージ粒子を少なくとも１０２個／贋！、好ましく
は１０３個／ｚ１より多くの該粒子を含有する。

本発明の目的では、家庭細菌は家庭内に存在する細菌と
して規定され、特に糞便細菌である。中性塩としては０
．１〜１．０重量％の塩化ナトリウムを使用すると有利
である。

組成物は更に少量の増粘剤（例えばＨｅｒｃｕｌｅｓ社
の改質セルロースポリマーである２５０　Ｎａｔｒｏｓ
ｏｌＨＨＢＲ）を含有すると特に好適である。

界面活性化合物の存在にも拘わらず、バクテリオファー
ジは上記組成物中で優れた貯蔵安定性を有しており、即
ち室温で２ケ月間宿主微生物に感染する能力を維持する
ことが意外にも知見された。

特に非イオン性界面活性化合物はバクテリオファージに
適合性であることが判明した。

本発明の第３の態様によると、５〜５０重量％の油分と
、０．５〜２０重量％の乳化剤と、３０〜９０重量％の
水と、アクネの原因となることが知られているＰｒｏ　
ｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｃｎｅｓを溶菌させる
ことが可能なバクテリオファージの粒子〉１０２個／ｇ
とを含有するクリーム又はローション形態の殺菌性組成
物が提供される。この組成物は従ってアクネの原因とな
る生物の増殖を抑制することによりアクネを治療するた
めに使用することができる。

また、殺菌性組成物を臭気発生皮膚細菌に対して使用し
てもよい。このために、該組成物はこのような細菌を溶
菌させることが可能なバクテリオファージを含有する。

組成物はＰ、ｏｖａｌｅ及び／又は他の頭皮微生物に対
して使用することもでき、その場合、組成物はこのよう
な微生物を溶菌させることが可能なバクテリオファージ
を含有する。

本発明の第４の態様によると、練り歯磨き又は口内洗浄
用組成物としての殺菌性組成物が提供される。この組成
物は研磨物質（例えばシリカ）、結合剤及び餉歯又は歯
茎疾患に関与する型の細菌の１種以上を溶菌させること
が可能なバクテリオファージの粒子〉１０２個／ｇ、好
ましくは１０３個／ｇよりも著しく多数の該粒子を含有
する。このような微生物の具体例はＳ、ｍｕｔａｎｓ、
Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　７及びＨａｅｍｏ　ｈｉｌｕ
ｓ　ａｃｔｉｎｏｍ　ｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓであ
る本発明の組成物はファージ適合性香料、フレーバー、
溶剤、染料、顔料、保存剤、殺菌剤、吸収剤、充填剤及
び個々の用途に慣用の他の添加剤を含有し得る。

バクテリオファージの単離方法は従来技術で既知であり
、例えばＢＢｌｌｌｉｎ、　Ｅ、、　（１９６９）、　
Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　Ｖ
ｏｌ、　３ｂ、　Ｅｄ、　Ｊ、Ｒ，Ｎｏｒｒ＋５ａｎｄ
　Ｄ、Ｗ、Ｒｉｂｂｏｎｓ、＾ｃａｄ、　　Ｐｒｅｓｓ
、　　ｐ、　３１５−３２９を参照されたい。ファージ
は通常、該ファージか特異的な細菌の培養物から単離さ
れ得る。例えば、腸内細菌に対するバクテリオファージ
はＭ、Ｈ。

＾ｄａｍｓ　ｉｎ　ＢａｃｔｅｒｉｏｐｈａＦＩｅｓ、
　Ｉｎｔｅｒｓｅｉｅｎｅｅ、　）ＪＣｗＹｏｒｋ　（
１９５９）により記載されている増菌方法を使用して下
水から単離することがてきる。

１ ０内細菌に対するファージは歯垢及び唾液から単離され
、増菌方法はこの場合あまり適切でないことが判明した
。Ｐ、　ａｃｎｅｓに対するファージは感染した皮膚病
変部から単離することができる。

用途によっては粗抽出物を使用してもよいが、多くの場
合は精製形態でファージを適用することが望ましい。こ
のために、ファージは細菌細胞挫滅組織片、特に分解酵
素から単離される。単離は濾過、遠心分離又はクロマト
グラフィーのような既知方法により実施され得る。

以下、実施例により発明を説明する。

排出したばかりの下水を０．２μ肩フイルターで濾過し
、細菌を除去した。濾過した下水０．５ｚｆを、ｒａｎ
ｓ　　Ｅ、　ｖｕｌｎｅｒｉｓ　　はＰｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓｆＩｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ｊ乙 として同定される糞便生物の１種を予め接種したプレー
トに散布した。次にプレートを乾燥し、２Ｆ（℃で一晩
インキユベートした。インキ１＋−べ、−ジョン後、細
菌層上にいくつか独立したプラークが認められた。これ
らのプラークを寒天から取り出し、下記のように下水生
物のブロス培養物に接種し、この微生物に特異的なファ
ージを大量に産生させた。

場合により、付加的増菌段階を加える必要があった。そ
の場合、ブロス１０ｚｉＪ中の濾過下水２′１１に細菌
の純粋培養物ｈ＋１を接種した。培養物を２８℃で一晩
インキユベートした。増菌した培養物を４５００ｒｐｍ
で１５分間遠心分離し、上清を０．２ｐｚフイルターで
濾過し、前記と同様に接種済みプレート上に散布した。

プラークを寒天から取り出し、適当な細菌のブロス培養
物に接種し、この微生物に特異的なファージを大量に産
生させた。

し」附呈］」Ｆ柾ｌ− 個々のプラークを寒天プレートから取り出し、を接種し
たフロスに接種した。完全な溶菌が生しるまでブロスを
３７°Ｃでインキュベートした。標準接種プレート方法
を使用してファーシカ価を推定した。力価が１０８＃ｐ
未満の場合は、ファージを再び使用してより多くの接種
ブロスに再接種し、１０１°／肩βを越える力価が得ら
れるまで手順を繰り返した。

培養物をブロス５００１当たり１０１の濃度のクロロホ
ルムで処理し、残りのファージを放出させた。

次に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、　Ｊ、、
　Ｆｒ１ｔｓｃｈ、　Ｅ、Ｆ。

及びＭａｎｉａｔｉｓ、　Ｔ、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　
ＣＩｏｎｉｎ＆、　ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｕ
ａｌ、　２ｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒ
ｉｎｇｔｌａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅ
ｓｓ）の方法を使用してファージを精製した。塩化セシ
ウム密度勾配遠心分離後、バクテリオファージを含むバ
ンドを４℃で貯蔵した。

ＤＮＡ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、　ｐ、２．８０）を抽出し
、アガロースゲル電気泳動（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、　ｐ、
　６．８〜６．１３）で単一バンドを示すことによりバ
クテリオファージの純度を調べた。更に電子顕微鏡によ
り純度を調べた。

透析により塩化セシウムを除去後、ファージ調製物の小
サンプルを炭素被覆親水性グリッドに滴下した。風乾後
、ファージ粒子を２％（ｗ／ν）酢酸ウラニルでポジテ
ィブ染色するか、または２％（Ｉｌｌ／ｖ）タングステ
ン酸メチルアミンでネガティブ染色した。

乾燥後、透過型電子顕微鏡を使用してグリッドを観察し
た。

Ｐｓｅｕｃｌｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓに
対するバクテリオファージを単離し、 バルク増殖した。

１つ Ｅ、ｃｏｌｉ及びＥ、ｖｕｌｎｅｒｉｓに対するバクテ
リオファージは形態的にＴ偶数ファージに類似していた
。

一方、他の多くの形態が観察され、例えはＥｎｔｅｒｏ
ｂａｃｔｅｒ　ａ　　Ｉｏｍｅｒａｎｓに対するファー
ジは丸い頭部と非常に広いえりを有していた。

大腸菌に対するバクテリオファージの粒子１０３個、１
％Ｔｕ＋ｅｅｎ　８０及び０．０１％塩化ナトリウムを
含有する水性組成物を調製した。組成物を室温で２ケ月
貯蔵した処、感染性はほぼ変わらないことが知見された
。

上記組成物を、大腸菌細胞の層で被覆したセラミックタ
イルに接触させた。ファージを含む組成物で処理後、タ
イル上の大腸菌は著しく減少したが、ファージを含まな
い組成物はこの効果を示さなかった。

８〜１０：ロ　バ　−リ　ファージ 刺激を与えた生体からの唾液を５ｏｒｖａｌｌ　ＲＣ−
５遠心分離機で１１００００ｒｐで５分間遠心分離し、
挫滅組織片を除去した８上清を集め、上清５００１β当
たりクロロホルム１０１１１を加えた。混合物を穏やか
に振盪しなから３７°Ｃで１時間インキュベートし、残
りの細菌を溶菌させた。処理済み唾液０．１．ｘ（ｌを
融解Ｂ旧寒天（４５℃）２肩り、並びに志願者から採取
した夫々５ｔｒｅ　　ｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｍｕｔａｎ
ｓ、　　八ＣｔｉｎＯｍ　ＣｅＳ　ｖ　ｉ　５ｃｏｓｕ
ｓ及び５ｔｒｅ　ｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓａｎ　ｕｉｓと
して同定される口内生物の培養物０．１ｘ１と混合した
。混合物を血液寒天プレートに重層し、生物の増殖に適
切な条件（例えばＳ、　ｍｕｔａｎｓでは２０％Ｃ０２
）下で３７℃で３日間インキュベートした。インキュベ
ーション後、寒天層上にいくつかのプラークが認められ
た。

上記手順に従い、Ｓ、　ｍｕｔａｎｓ、＾、　ｙｉ３ｅ
ｏｓｕｓ及び７ユに対するバクテリオファージを単離し
、バルク増殖した。

１１：　　　バクーリ　ファージ 上記実施例の手順と同様の方法に従い、微生物針ｇｈｙ
ｌｏｅｏｓｃｃｕｓ　ｅ　ｉｄｅｒｍｉｓに対するバク
テリオファージをヒト皮膚から単離した。電子顕微鏡で
観察しな処、多面体の頭部を有しており、えりはなく、
非常に長い柔軟な圧部を有することが判明した。

９−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）衛生上望ましくない微生物の増殖を阻止又は抑制
   するためのウィルスの使用。 （２）衛生上望ましくない細菌の増殖を阻止又は抑制す
   るためのバクテリオファージの使用。 （３）望ましくない微生物を駆除するための衛生用組成
   物であつて、少なくとも１種の有機界面活性剤を含有す
   る適合性基材中に、望ましくない微生物の１種以上を溶
   菌させることが可能な１種以上のウィルスを有効量含有
   する組成物。 （４）ウィルスがバクテリオファージであることを特徴
   とする請求項３に記載の組成物。（５）０．００１〜１
   ５．０重量％、好ましくは０．０１〜５．０重量％の非
   イオン性界面活性剤と、０．０１〜２．０重量％の中性
   塩と、家庭細菌を溶菌させることが可能なバクテリオフ
   ァージの粒子＞１０＾２個／ｍｌとを水性基材中に含有
   する請求項４に記載の組成物。 （６）更に０．１〜２．０重量％の増粘剤を含有する請
   求項５に記載の組成物。 （７）請求項３から６のいずれか一項に記載の組成物の
   、硬質表面クリーナーとしての使用。 （８）５〜５０重量％の油分と、０．５〜２０重量％の
   乳化剤と、３０〜９０重量％の水と、￥Ｐｒｏｉｏｎｉ
   ｂａｃｔｅｒｉｕｍ￥￥ａｃｎｅｓ￥を溶菌させること
   が可能なバクテリオファージの粒子＞１０個／ｇとを含
   有する請求項４に記載の組成物。 （９）ファージが臭気発生皮膚細菌を溶菌させることが
   可能である請求項８に記載の組成物。 （１０）ファージが￥Ｐ．ｏｖａｌｅ￥及び／又は他の
   頭皮微生物を溶菌させることが可能である請求項８に記
   載の組成物。 （１１）研磨物質と、結合剤と、齲歯又は歯茎疾患に関
   与する型の細菌の１種以上を溶菌させることが可能なバ
   クテリオファージの粒子＞１０＾２個／ｇとを含有する
   請求項４に記載の殺菌性組成物。 （１２）ファージが￥Ｓ．ｍｕｔａｎｓ￥、￥Ｂａｃｔ
   ｅｒｏｉｄｅｓ￥￥ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ￥及び／又は
   ￥Ｈａｅｆｍｏｈｉｌｉｕｓ　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅ−
   ｔｅｍｎｃｏｍｉｔａｎｓ￥を溶菌させることが可能で
   ある請求項１０に記載の組成物。 （１３）治療用に使用される請求項３に記載の組成物。