KR20040090677A

KR20040090677A - 녹차폴리페놀을 포함하는 구강 항균 조성물 및 구강 제품

Info

Publication number: KR20040090677A
Application number: KR1020030024658A
Authority: KR
Inventors: 오계헌
Original assignee: 오계헌
Priority date: 2003-04-18
Filing date: 2003-04-18
Publication date: 2004-10-26
Also published as: KR100508600B1

Abstract

본 발명은 녹차 폴리페놀을 포함하는 구강 미생물에 대한 항균 조성물, 및 이를 포함하는 구강 제품에 관한 것으로서, 녹차 폴리페놀은 구강내 미생물에 대한 항균 및 살균 효과가 우수하여 구강 미생물과 관련된 여러 가지 상태, 즉 구치, 플라그 형성 억제, 충치, 및 치주질환 등을 예방 및 치료할 수 있다.

Description

녹차폴리페놀을 포함하는 구강 항균 조성물 및 구강 제품{Antimicrobial composition and dental article comprising green tea polyphenol}

본 발명은 녹차 폴리페놀을 포함하는 구강 미생물에 대한 항균 조성물, 및 이를 포함하는 구강 제품에 관한 것이다.

녹차 폴리페놀(Tea polyphenol, TPP)은 녹차(green tea)의 잎에서 추출되는 천연 화합물로서 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate), 에피갈로카테킨(epigallocatechin), 에피카테킨 갈레이트(epicatechin gallate), 에피카테킨 (epicatechin), 및 카테킨(catechin의)등 5가지 주요 성분으로 구성되어 있다. 녹차 폴리페놀은 항산화 작용, 자외선 흡수작용, 항히스타민 작용, 유해산소 제거, 미백효과, 노화방지, 항암효과 등 인체에 대하여 다양하고 유익한 기능을 가지는 화합물로 알려져 있다. 또한 녹차 폴리페놀은 성인병으로서 고혈압과 당뇨병에 효과를 나타내며, 체내 콜레스테롤의 감소, 관절염 및 비만에도 효과가 있는 것으로 보고되고 있다.

구강내에 분포하는 미생물은 구치, 충치, 및 치주 질환 등을 야기할 수 있으며, 또한 이들 미생물들의 일부는 기회성 병원체로서 질병 발병 가능성을 가지고 있는 것으로 알려져 있다. 최근 구강의 충치예방과 불쾌감을 제거할 목적으로 많은사람들이 구강세정제의 사용이 증가하고 있다. 현재 시판되고 있는 구강세정제는 불소화합물, 탄화수소나트륨, 경질무수규산, 티몰, 염화 아연 등의 합성 화합물을 살균 및 세정의 중요 성분으로 이용하고 있다. 물론, 이런 화학합성 화합물들은 미량으로 사용되어 단기적으로는 인체에 미치는 해에 대해서는 무시될 수 있는 것일 수 있겠으나 장기간 사용 기간을 거치면서 인체에 해를 줄 수도 있다고 보고되고 있다.

따라서, 화학 살균 또는 항균제의 사용에 따른 문제점이 없으며, 건강에 유익한 천연 살균 및/또는 항균 구강제품을 개발할 필요성이 대두되었다.

본 발명의 목적은 구강 미생물에 의한 충치, 풍치, 구강염증, 구치, 치주 질환 등의 예방 및 치료를 위한, 녹차 폴리페놀을 포함하는 구강 미생물에 대한 항균 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 충치, 구치, 및 치주질환의 예방 및 치료를 위한, 녹차 폴리페놀을 유효성분으로 포함하는 항균 또는 살균 구강 제품을 제공하는 것이다.

도 1a은 본 발명에 따른 천연 구강세정제로 처리된Streptococcus sanguis의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리 후(●)이고, 도 1b는 천연구강세정제 처리로Streptococcus sanguis의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분)이다.

도 2a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Lactobacillus acidophilus의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리 후(●))이고, 도 2b는 천연구강세정제 처리로Lactobacillus acidophilus의 살균효과를 보여주는 사진 ((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분)이다.

도 3a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Neisseria meningitidis의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리 후(●)이고, 도 3b는Neisseria meningitidis의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분)이다.

도 4a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Streptococcus salivarius의 살균효과 비교. 대조구(○)와 처리 후(●)이고, 도 4b는Streptococcus salivarius의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분)이다.

도 5a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Streptococcus sobrinus의 살균효과 비교. 대조구(○)와 처리 후(●)이고, 도 5b 천연구강세정제 처리로Streptococcus sobrinus의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분)이다.

도 6a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Streptococcus mitis의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리 후(●))이고, 도 6b는 천연구강세정제 처리로Streptococcus mitis의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분)이다.

도 7a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Streptococcus mutans의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리 후(●))이고, 도 7b는 천연구강세정제 처리로Streptococcus mutans의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분)이다.

도 8a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Lactobacillus plantarum의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리후(●))이고, 도 8b는 천연구강세정제 처리로Lactobacillus plantarum의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분)이다.

도 9a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Staphylococcus aureus의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리후(●))이고, 도 9b는 천연구강세정제 처리로Staphylococcus aureus의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분)이다.

도 10a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Escherichia coli의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리 후(●))이고, 도 10b는 천연구강세정제 처리로Escherichia coli의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분)이다.

도 11a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Enterococcus faecalis의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리 후(●))이고, 도 11b는 천연구강세정제 처리로Enterococcus faecalis의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분)이다.

도 12a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Enterobacter cloacae의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리 후(●))이고, 도 12b는 천연구강세정제 처리로Enterobacter cloacae의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분)이다.

도 13a는 본 발명에 따른 천연구강세정제로 처리된Candida albicans의 살균효과 비교(대조구(○)와 처리 후(●))이고, 도 13b는 천연구강세정제 처리로Candida albicans의 살균효과를 보여주는 사진((A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분)이다.

도 14는 본 발명에 따른 천연구강세정제 20ml로 가글링하여 mitis-salivarius 고체배지 상에서 자란 구강 미생물의 사진((A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분, (F) 5분)이다.

도 15는 본 발명에 따른 천연구강세정제 20 ml로 가글링하여 BHI 고체배지상에서 자란 구강미생물의 사진((A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분, (F) 5분)이다.

도 16은 본 발명에 따른 천연구강세정제 20 ml로 가글링하여 LB 고체배지 상에서 자란 구강미생물의 사진((A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분, (F) 5분)이다.

도 17은 본 발명에 따른 천연구강세정제 20 ml로 가글링하여 MRS 고체배지 상에서 자란 구강미생물의 사진((A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분, (F) 5분)이다.

도 18은 본 발명에 따른 천연구강세정제 20 ml로 가글링하여 tomato juice agar 고체배지 상에서 자란 구강미생물의 사진((A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분)이다.

도 19는 본 발명에 따른 천연구강세정제 20 ml로 가글링하여 EMB agar plate 고체배지 상에서 자란 구강 미생물의 사진((A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분)이다.

도 20은 본 발명에 따른 천연구강세정제 20 ml로 가글링하여 mannitol salt agar 고체배지 상에서 자란 구강미생물의 사진((A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분)이다.

도 21은 본 발명에 따른 천연구강세정제의 처리에 의한 치아 표면에서Streptococcus sanguis에 의한 생물막 형성을 나타내는 사진((A) 대조구, (B) 천연구강세정제 처리 치아)이다.

도 22는 본 발명에 따른 천연구강세정제의 처리에 의한 치아 표면에서Lactobacillus acidophilus에 의한 생물막 형성을 나타내는 사진((A) 대조구, (B) 천연구강세정제 처리 치아)이다.

상기과 같은 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 녹차의 폴리페놀을 유효성분으로 포함하는 구강 미생물에 대한 항균 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 구강 미생물에 대한 항균 조성물은Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Streptococcus mutans, Streptococcussanguis, Streptococcus salivarius, Staphylococcus aureus, Staphylocoocus epidermidis, 및 Enterobacter cloacae로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 구강 미생물에 대한 항균 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 녹차 폴리페놀을 포함하는 구강 제품에 관한 것이며, 상기 구강제품으로는 치약, 가글링제품, 껌, 스프레이, 및 구강 청정제로 이루어지는 군에서 선택되는 것이다.

본 발명자들은 녹차 폴리페놀이 구강 미생물에 대한 항균 및/또는 살균 작용이 우수함을 확인하고, 이를 기초로 상기 구강 미생물에 대한 항균 또는 살균효과를 갖는 조성물, 및 이를 적용한 구강제품에 대한 본 발명을 완성하게 되었다.

이하에서 본 발명을 자세히 설명하고자 한다.

본 발명에 따른 녹차 폴리페놀을 포함하는 구강 항균 조성물은 구강내 서식하는 미생물에 대한 항균 또는 살균 효과를 가진다.

본 발명에서 항균(antimicrobial)이라 함은 세균 및/또는 곰팡이의 성장 및 감염을 방지, 성장 억제, 및/또는 사멸작용을 포함하는 의도이다. 본 발명에서 구강 제품이라 함은 구강용으로 사용되는 제품, 예컨대 치약(고상, 액상), 구강 세정제, 구강 청정제, 및 츄잉검 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서 녹차 폴리페놀이라 함은 폴리페놀 성분을 포함하는 녹차 추출물, 정제되어 폴리페놀 함량이 높아진 추출물 또는 폴리페놀류를 포함하며, 사용 가능한 녹차 폴리페놀은 시판되는 것이나 직접 추출하여 사용할 수 있다. 녹차 폴리페놀은 폴리페놀 함량이 높을수록 항균 활성이 좋으므로 폴리페놀 함량이 높은것이 바람직하다. 예컨대, 본 발명에서 사용 가능한 녹차 폴리페놀은 폴리페놀을 50 중량% 이상, 바람직하게는 75 중량%이상, 가장 바람직하게는 90 중량% 이상을 포함하는 녹차 추출물일 수 있다. 녹차에는 아주 미량의 폴리페놀을 포함하고 있어 이 정도의 양으로 항균력을 기대하기는 매우 어렵다. 녹차 티백 1개(1.5 g중)을 응용를 위해 물에 우려낸 경우에, 실제 녹아있는 최대 녹차 폴리페놀의 양은 100ml중 0.006%가 된다. 반면, 만약 0.4%의 녹차 폴리페놀을 포함하는 천연구강살균세정제를 20 ml로 일회 사용할 경우에는, 사실상 일회 가글링에 사용되는 녹차의 차 폴리페놀의 양은 녹차 티백 약 400 개에 해당하는 분량이다.

본 발명에서 사용 가능한 녹차 폴리페놀은 녹차로부터 폴리페놀을 추출하는 통상의 방법을 사용가능하며, 예컨대, 상기 식물 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들을 혼합물로 추출한 것이다. 본 발명의 일례에서 본 발명에 있어서, 실험에 사용한 녹차 폴리페놀(GTP)은 녹차(Thea sinesis L.: Theaceae) 10 kg을 95% 에탄올(10 L)에 5일간 냉침한 후 여과한 다음 증류수/에틸 아세테이트 (1:1) 용액을 이용, 유기용매 층을 분리하였다. 이를 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)를 이용, 분리하여 99%의 (-)-에피카테킨(EC), (-)-에피갈로카테킨(EGC), (-)-에피카테킨 3-갈레이트(ECG), (-)-에피갈로카테킨 3-O-갈레이트(EGCG) 분획을 정제하여 사용할 수 있다. 녹차잎으로 부터 고순도 기술을 이용하여 고순도로 폴리페놀을 함유하는 녹차 폴리페놀을 제조하여 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물에서 녹차 폴리페놀의 함량은 항균 및 살균효과를 달성하기에 충분한 양으로 포함할 수 있으며, 예컨대 총 조성물중 0.1중량%(1,000ppm) 이상, 바람직하게는 0.3중량% 이상일 수 있다. 녹차 폴리페놀의 함량이 너무 낮으면, 살균 목표를 달성하기에 지나치게 장시간 소요되며, 대상 병원성 미생물의 종류에 따라 살균력에 차이가 나는 등 효율적이지 못하다. 따라서, 항균 조성물중 녹차 폴리페놀의 함량은 0.1중량% 이상, 바람직하게는 0.25 중량%이상, 더욱 바람직하게는 0.3 중량%이상, 예컨대 0.3-0.4 중량%일 수 있다.

녹차 폴리페놀의 원재료인 녹차는 종래부터 식용으로 많이 사용되어 왔던 것으로 과량을 사용하더라도 독성이 없음은 본 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.

본 발명에 따른 항균 조성물은 구강내 세균 및 곰팡이에 대한 항균 활성을 나타낸다. 본 발명에서 바람직한 구강 미생물에 대한 항균 및/또는 살균 조성물은 구강내에 분포하는 미생물, 예컨대 사람에 따라 차이가 있겠지만, 그람 양성으로Lactobacillus acidophilus, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguis, Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius, Staphylococcus aureus, Staphylocoocus epidermidis, Lactobacillus plantarum, Neisseria meningitidis등이 있으며, 그람 음성으로는Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecalis,그리고 효모인Candida albicans등이 있다. 이들 미생물들의 일부는 또한 기회성 병원체로서 질병 발병 가능성을 가지고는 것으로 알려져 있다. 스트렙토코커스 뮤탄스는 구강질환의 일종인 충치 및 치주염을 유발한다.

본 발명에서 바람직한 구강 미생물에 대한 항균 및/또는 살균 조성물은Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Streptococcus mutans,Streptococcus sanguis, Streptococcus salivarius, Staphylococcus aureus, Staphylocoocus epidermidis, 및 Enterobacter cloacae로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 구강 미생물에 대한 항균 및/또는 살균 작용을 가진 것이다.

충치와 치주질환은 모두 구강내 미생물에 의한 감염성 질병으로 세균, 음식물, 타액의 상호작용에 의해 유발된다. 특히 구강내부는 세균의 발육에 필요한 영양분 및 수분이 음식물, 타액, 치온구액 등에 의하여 계속 공급되고, 타액의 pH가 대략 중성 부근에서 유지되며, 온도가 37℃ 전후로 유지되고 있어서 미생물이 발육 및 증식하기에 매우 적합한 환경이 된다. 이러한 치아질환을 유발하는 대표적인 미생물들로는 스트렙토코커스 뮤탄스와 포피로모나스 진지발리스가 있다. 스트렙토코커스 뮤탄스는 균체외 혹은규체표층에 글루코실트랜스퍼라제라는 효소를 분비하여 음식물에서 불용성 글루칸을 형성하고 이 글루칸에 의해 구강내 다른 미생물들이 치면에 부착함으로써 치면 세균막, 즉 플라그가 형성된다. 형성된 플라그의 내부에서 스트렙토코커스 뮤탄스를 포함하는 젖산균이 증식하게 되고 궁극적으로 충치를 야기한다. 따라서, 본 발명의 구강용 항균 조성물에 의해 스트렙토코커스등 구강내 미생물의 증식을 억제하거나 살균함으로써 플라그 형성을 방지하고, 궁극적으로 치주질환의 예방할 수 있다.

상기 녹차 폴리페놀은 조성물 총 중량부에 대하여 1 중량% 내지 100 중량%로 약제학적으로 허용되는 1종 이상의 담체에 첨가하여 약제 조성물로 제조할 수 있다. 상기 담체로는 식염수, 완충 식염수, 물, 글리세롤 및 에탄올 등이 있으나 이에 한정되지 않으며, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제(Remington'sPharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)는 모두 사용가능하다.

상기 조성물은 경고제, 과립제, 산제, 시럽제, 액제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 정제, 캅셀제, 크림제, 등의 제형으로 제조할 수 있으며, 바람직하게는 경구용이다. 상기 조성물의 투여량은 구강 항균제의 통상적인 투여량으로 투여될 수 있으며, 상기 투여량은 이에 한정되지는 않으며, 환자의 연령, 성별, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 질병종류, 병용되는 약물에 따라 달리 적용되는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 상기 항균 조성물을 포함하는 구강제품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 구강 제품으로는 치약, 구강 스프레이, 구강 세정제, 구강 청정제, 츄잉검 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 구강제품은 액상, 고상, 현탁액, 겔상, 에어로졸 형태일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 구강제품에 적용하기 위해서 적절한 첨가제, 담체 등을 상기 항균 조성물에 추가로 포함시킬 수 있으며, 상기 첨가제 및 담체 등을 본 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 적절히 선택 및 조합할 수 있다.

본 발명의 일례에서, 치약은 친수성 기재, 유화제, 풍미제, 방향제 및 방부제 등을 표함하는 성분으로 이루어진 페이스트 담체 또는 통상의 분말중에서 녹차 폴리페놀의 유효량을 포함하여 제조한다. 이와 같은 치약은 타르타르 및/또는 플루오라이드의 기계적인 파괴/제거를 위한 유효량의 연마재를 포함할 수 있다. 이외에도 충치 예방제로 불소화합물을 추가로 사용할 수도 있으며, 약효제의 변색방지를위하여 메타바이설파이트 나트륨(Sodiumm-bisulfite)을 사용할 수 있다. 경구 세정제는 수성 또는 수성-알콜 액체 담체, 방부제 및 일반적으로 약 0.1 중량% 내지 50 중량%로 녹차 폴리페놀을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 항균 조성물에 대해서, (1) 구강에 발견되는 여러 가지 종류의 미생물에 대한 살균력은 실시예 2-실시예 14에서 보여주고, (2) 실제 사람의 구강을 천연구강세정제로 가글링한 후 여러 가지 배지상에서의 살균정도는 실시예 15-실시예 21에서 보여주며, (3) 사람의 치아에서 천연구강세정제를 처리하여 생물막이 형성이 저해되는 것(즉 플라그 형성 억제)이 실시예 22-실시예 23에서 나타내고 있다.

하기 실시예를 들어 본 발명을 더욱 자세히 설명할 것이나, 본 발명의 보호범위가 하기 실시예로 제한되는 의도는 아니다.

[실시예]

실시예 1: 천연구강세정제(GTG)의 제조

증류수 100 mL에 녹차 폴리페놀 (>97%, H&M Bio Co. (충북 충주시 이류면 검단리 123번지)에서 제공받음) 0.4중량%, 소디움 클로라이드 0.1중량%, 에탄올 10 중량%; 0.01 중량%의 멘톨(menthol), 및 미량의 천연색소를 포함하여 천연 구강 세정제를 제조하였다. 구체적으로 증류수 50 mL에 8,000 ppm의 녹차 폴리페놀을 녹이고, 10,000 rpm에서 20분 동안 원심분리하여 이물질을 제거하였다. 원심분리시킨 용액을 0.45 ㎛ 나일론 필터를 통하여 여과시켰다. 여액에 2,000 ppm NaCl을 넣어 녹였으며, 얻어진 용액을 용액 A로 명명하였다. 또한, 증류수 50 mL에 무수 에탄올20% (v/v)로 제조하고, 여기에 200 ppm의 멘톨을 용해시키고 얻어진 용액을 용액 B라 하였다. 상기 용액 A와 용액 B를 1:1의 비율로 섞어 최종 천연구강세정제(GTG)를 만들었다. 최초 제조된 천연구강세정제는 처음에는 노르스름하다가, 시간이 경과함에 따라 다소 노란색이 진해졌다.

실시예 2: Streptococcus sanguis 에 대한 살균효과

Streptococcus sanguis를 TSB(tryptic soy broth) 액체 배지에 접종하여 배양 후 대수생장기(exponential phase)를 거쳐 파장 660 nm에서 O.D(optical density) 값이 1일 때 배양액을 원심분리 튜브에 넣고 2000 ×g에서 10분간 원심분리를 실시하였다. 상등액을 버리고 얻어진 균체를 생리식염수로 3회 세척하여 세균의 최종 농도가 10⁴cells/ml 되게 하였다. 상기 수확된 세포에 제조된 천연구강세정제를Streptococcus sanguis에 노출시켜 배양하면서 1분 간격으로 5분 동안 노출시켜 노출시간에 따른 CFU를 MRS agar plate상에서 계수하여 천연구강세정제의 노출 시간에 따른 살균력을 시험하였다.

도 1a에서는 천연구강세정제를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Streptococcus sanguis의 살균효과를 나타내는 그래프이고(대조구(○)와 처리 후(●)), 도 1b는 천연구강세정제의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분 동안 처리한Streptococcus sanguis의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Streptococcus sanguis는 천연구강세정제 처리 후 1분 이내에 완전히 제거되었다.

실시예 3: Lactobacillus acidophilus 에 대한 살균효과

처리 균주를Lactobacillus acidophilus로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 MRS agar plate상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 2a 및 도 2b에 나타내었다.

도 2a에서는 천연구강세정제를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Lactobacillus acidophilus의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 2b는 천연구강세정제의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분 동안 처리한Lactobacillus acidophilus의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Lactobacillus acidophilus는 천연구강세정제 처리후 1분 이내에 완전히 제거되었다.

실시예 4: Neisseria meningitidis 에 대한 천연구강세정제의 살균효과

처리 균주를Neisseria meningitidis로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 BHI agar plate상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 3a 및 도 3b에 나타내었다.

도 3a에서는 천연구강세정제를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Neisseria meningitidis의 살균효과를 나타내는 그래프이고(대조구(○)와 처리 후(●)), 도 3b는 천연구강세정제(X)의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분 동안 처리한Neisseria meningitidis의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Neisseria meningitidis는 천연구강세정제 처리 후 2분 이내에 완전히 제거되었다.

실시예 5: Streptococcus salivarius 에 대한 천연구강세정제의 살균효과

처리 균주를Streptococcus salivarius로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 mitis-salivarius agar plate상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 4a 및 도 4b에 나타내었다.

도 4a에서는 천연구강세정제를 1분간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 1분, 2분, 3분, 4분, 5분, 대조구의 천연구강세정제 처리에 따른Streptococcus salivarius의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 4b는 천연구강세정제(X)의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분 동안 처리한Streptococcus salivarius의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Streptococcus salivarius는 천연구강세정제 처리 후 3분 이내에 완전히 제거되었다.

실시예 6: Streptococcus sobrinus 에 대한 천연구강세정제의 살균효과.

처리균 주를Streptococcus sobrinus로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 BHI agar plate상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 5a 및 도 5b에 나타내었다.

도 5a에서는 천연구강세정제를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Streptococcus sobrinus의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 5b는 천연구강세정제의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F)4분, (G) 5분 동안 처리한Streptococcus sobrinus의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Streptococcus sobrinus는 천연구강세정제 처리 후 5분 이내에 완전히 제거되었다.

실시예 7: Streptococcus mitis 에 대한 천연구강세정제의 살균효과.

처리 균주를Streptococcus mitis로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 mitis-salivarius agar plate상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 6a 및 도 6b에 나타내었다.

도 6a에서는 천연구강세정제를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Streptococcus mitis의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 6b는 천연구강세정제(X)의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분 동안 처리한Streptococcus mitis의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Streptococcus mitis는 천연구강세정제 처리 후 5분 이내에 완전히 제거되었다.

실시예 8: Streptococcus mutans 에 대한 천연구강세정제의 살균효과

처리 균주를Streptococcus mutans로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 BHI agar plate 상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 7a 및 도 7b에 나타내었다.

도 7a에서는 천연구강세정제를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Streptococcus mutans의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 7b는 천연구강세정제의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분 동안 처리한Streptococcus mutans의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Streptococcus mutans는 천연구강세정제 처리 후 5분 이내에 99% 제거되었다.

실시예 9: Lactobacillus plantarum 에 대한 천연구강세정제의 살균효과

처리 균주를Lactobacillus plantarum로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 MRS agar plate 상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 8a 및 도 8b에 나타내었다.

도 8a에서는 천연구강세정제를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Streptococcus sanguis의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 8b는 천연구강세정제의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분 동안 처리한Lactobacillus plantarum의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Lactobacillus plantarum는 천연구강세정제 처리 후 5분 이내에 완전히 제거되었다.

실시예 10: Staphylococcus aureus 에 대한 천연구강세정제의 살균효과

처리 균주를Staphylococcus aureus로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 mannitol salt agar plate상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 9a 및 도 9b에 나타내었다.

도 9a에서는 천연구강세정제를 1분간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Staphylococcus aureus의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 9b는 천연구강세정제의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분 동안 처리한Staphylococcus aureus의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Staphylococcus aureus는 천연구강세정제 처리 후 5분 이내에 약 84.3% 제거되었다.

실시예 11: Escherichia coli 에 대한 천연구강세정제의 살균효과

처리균주를Escherichia coli로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 EMB agar plate 상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 10a 및 도 10b에 나타내었다.

도 10a에서는 천연구강세정제를 1분간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Escherichia coli의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 10b는 천연구강세정제(X)의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분 동안 처리한Escherichia coli의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Escherichia coli는 천연구강세정제 처리 후 5분 이내에 약 92.2% 제거되었다.

실시예 12: Enterococcus faecalis 에 대한 천연구강세정제의 살균효과

처리균주를Enterococcus faecalis로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 LB agar plate상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 11a 및 도 11b에 나타내었다.

도 11a에서는 천연구강세정제를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Enterococcus faecalis의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 11b는 천연구강세정제(X)의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분, (F) 5분 동안 처리한Enterococcus faecalis의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Enterococcus faecalis는 천연구강세정제 처리 후 5분 이내에 약 91.2% 제거되었다.

실시예 13: Enterobacter cloacae 에 대한 천연구강세정제의 살균효과

처리균주를Enterobacter cloacae로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 LB agar plate상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 12a 및 도 12b에 나타내었다.

도 12a에서는 천연구강세정제를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Enterobacter cloacae의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 12b는 천연구강세정제(X)의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분 동안 처리한Enterobacter cloacae의 사멸효과를 나타내는 사진이다.

Enterobacter cloacae는 천연구강세정제 처리 후 5분 이내에 약 92.6% 제거되었다.

실시예 14: Candida albicans 에 대한 천연구강세정제의 살균효과

처리균주를Candida albicans로 한 것을 제외하고는 상기 실시예 2와 동일하게 실험하여, 노출시간에 따른 CFU를 BIGGY 아가 플레이트상에서 계수하였으며, 실험결과를 도 13a 및 도 13b에 나타내었다.

도 13a에서는 천연구강세정제를 1분간격으로 5분간에 걸쳐 처리하여 살균효과를 나타내는 것으로서, 천연구강세정제 처리에 따른Candida albicans의 살균효과를 나타내는 그래프이고, 도 13b는 천연구강세정제의 처리시간에 따른 살균효과를 나타내는 것으로서, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분 동안 처리한Candida albicans의 사멸효과를 나타내는 사진이다.Candida albicans는 천연구강세정제 처리 후 5분 이내에 약 99.8% 제거되었다.

실시예 15-21

사람에서 구강세척전과 천연구강세정제로 구강세척후의 미생물 살균효과

사람에서 천연구강세정제를 입에 물고 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 가글링한 후 이를 수거하여 100 ul를 mitis-salivarius agar plate, brain heart infusion agar plate, Luria-Bertani agar plate, MRS agar 배지, tomato juice agar, EMB agar plate 및 mannitol salt agar 배지상에서 각각 배양하여 CFU(개/ml)를 계수하였다. 그 실험 결과를 하기 표 1과 도 14 내지 도 20에 나타냈다.

여러 가지 배지상에서 구강 세균의 살균효과

실시예	배지	No of CFU(percentage of killing, %)
실시예	배지	대조구	1분	2분	3분	4분	5분
15	MSA^a	2.7x10⁷(100)	1.8x10⁷(76.9)	1.3x10⁷(42.2)	9.1x10⁶(18.4)	2.3x10⁵(0.3)	0(0.0)
16	BHI agar	2.6x10⁷(100)	2.0x10⁷(63.1)	1.1x10⁷(45.7)	4.8x10⁶(23.1)	8.0x10⁵(3.2)	0(0.0)
17	LB agar	1.9x10⁷(100)	1.3x10⁷(63.1)	8.7x10⁶(45.7)	4.4x10⁶(23.1)	6.1x10⁵(3.2)	0(0.0)
18	MRSA	1.6x10⁷(100)	9.7x10⁶(60.6)	5.7x10⁶(35.0)	1.0x10⁶(6.3%)	0(0.0%)	-
19	TJA	8.6x10⁶(100)	1.3x10⁶(15.1)	9.3x10⁵(10.9)	3.3x10⁵(3.8%)	0(0.0%)	-
20	EMBA	7.3x10⁶(100)	5.1x10⁶(70.8)	3.4x10⁶(46.5)	6.7x10⁵(9.3%)	0(0.0%)	-
21	MSA^b	9.5x10²(100)	2(0.2)	0(0.0)	-	-	-

도 14는 천연구강세정제를 사람의 구강에 실제로 적용하여 구강에 존재하는 미생물의 CFU를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 mitis-salivarius agar상에서의 살균효과를 나타내는 것으로, (A) 대조구, (B) 0분, (C) 1분, (D) 2분, (E) 3분, (F) 4분, (G) 5분 동안 가글링한 후 mitis-salivarius agar plate상, brain heart infusion agar media에서의 세균의 사멸효과를 나타내는 사진이다. 표 1에는 mitis-salivarius agar상에서 자란 CFU의 개수가 노출시간별로 나타나있다. 이 배지에는Streptococcus mitis와Streptococcus salivarius등이 자라는 선택배지로서 5분 이내에 이들 세균은 배지상에서 완전히 제거되었다.

도 15는 천연구강세정제를 사람의 구강에 실제로 적용하여 구강에 존재하는 미생물의 CFU를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 brain heart infusion agar plate상에서의 살균효과를 나타내는 것으로, (A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분, (F) 5분 동안 가글링한 후 brain heart infusion agar plate상에서의 세균의사멸효과를 나타내는 사진이다. 표 1에는 brain heart infusion agar상에서 자란 CFU의 개수가 노출시간별로 나타나있다. 이 배지에는 복합영양배지로서 여러 가지 구강미생물 들이 자란다. 천연구강세정제는 이 배지상에서 자라는 모든 균들을 총균 개념으로 볼 때 5분 이내에 완전히 제거되었다.

도 16는 천연구강세정제를 사람의 구강에 실제로 적용하여 구강에 존재하는 미생물의 CFU를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 Luria-Bertani agar plate상에서의 살균효과를 나타내는 것으로, (A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분, (F) 5분 동안 가글링한 후 Luria-Bertani agar plate 상에서의 세균의 사멸효과를 나타내는 사진이다. 표 1에는 Luria-Bertani agar 상에서 자란 CFU의 개수가 노출시간별로 나타나있다. 이 배지에는 복합영양배지로서 여러 가지 구강미생물들이 자란다. 천연구강세정제는 이 배지상에서 자라는 모든 균들을 총균 개념으로 볼 때 5분 이내에 완전히 제거되었다.

도 17는 천연구강세정제를 사람의 구강에 실제로 적용하여 구강에 존재하는 미생물의 CFU를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 MRS agar plate상에서의 살균효과를 나타내는 것으로, (A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분 동안 가글링한 후 MRS agar plate 상에서의 세균의 사멸효과를 나타내는 사진이다. 표 1에는 MRS agar 상에서 자란 CFU의 개수가 노출시간별로 나타나있다. 이 배지에는 충치의 원인이 되는Lactobacillusspp. 등이 주로 자라는 배지이다. 이 배지에는 복합영양배지로서, 천연구강세정제는 이 배지상에서 자라는 모든 균들을 총균 개념으로 볼 때 4분 이내에 완전히 제거되었다.

도 18는 천연구강세정제를 사람의 구강에 실제로 적용하여 구강에 존재하는 미생물의 CFU를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 tomato juice agar plate 상에서의 살균효과를 나타내는 것으로, (A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분 동안 가글링한 후 tomato juice agar plate 상에서의 세균의 사멸효과를 나타내는 사진이다. 표 1에는 tomato juice agar plate상에서 자란 CFU의 개수가 노출시간별로 나타나있다. 이 배지에는 복합영양배지로서Lactobacillusspp.가 잘 자라는 배지이다. 천연구강세정제는 이 배지상에서 자라는 모든 균들을 총균 개념으로 볼 때 4분 이내에 완전히 제거되었다.

도 19는 천연구강세정제를 사람의 구강에 실제로 적용하여 구강에 존재하는 미생물의 CFU를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 EMB agar plate 상에서의 살균효과를 나타내는 것으로, (A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분, (D) 3분, (E) 4분 동안 가글링한 후 EMB agar plate 상에서의 세균의 사멸효과를 나타내는 사진이다. 표 1에는 EMB agar plate상에서 자란 CFU의 개수가 노출시간별로 나타나있다. EMB 배지에는 선택배지로서Escherichiasp.와Enterobactersp. 등이 자라는 선택배지이다. 천연구강세정제는 이 배지상에서 자라는 모든 균들을 총균 개념으로 볼 때 4분 이내에 완전히 제거되었다.

도 20는 천연구강세정제를 사람의 구강에 실제로 적용하여 구강에 존재하는 미생물의 CFU를 1분 간격으로 5분간에 걸쳐 mannitol salt agar 상에서의 살균효과를 나타내는 것으로, (A) 대조구, (B) 1분, (C) 2분 동안 가글링한 후 mannitol salt agar plate 상에서의 세균의 사멸효과를 나타내는 사진이다. 표 1에는mannitol salt agar plate상에서 자란 CFU의 개수가 노출시간별로 나타나있다. Mannitol salt agar 배지에는Staphylococcus aureus와Staphylococcus epidermidis등의Staphylococcusspp. 만이 자랄 수 있는 선택배지이다. 천연구강세정제는 이 배지상에서 자라는 모든 균들을 총균 개념으로 볼 때 2분 이내에 완전히 제거되었다.

실시예 22

사람의 치아표면에서 Streptococcus sanguis 와 Streptococcus mutans 의 혼합균주의 생물막 형성저해

두 개의 시험관(A, B)에 BHI 액체배지에Streptococcus sanguis와Streptococcus mutans의 혼합균주를 접종하고 사람의 치아를 각각의 시험관에 넣었다. 배양기 (37℃, 150 rpm)에서 배양기간중에 8시간마다 치아를 꺼내어, 시험관(Ａ)는 천연구강세정제에 1일 3회, 각 회당 3분동안 처리하였으며, 시험관(B)는 천연구강세정제 대신에 생리식염수에서 동일한 배양조건과 동일한 방법으로 처리하여 대조군으로 비교분석에 사용되었다. 주사전자현미경으로 치아표면에서 생물학 형성을 관찰하였다.

도 21에서 (A)는 생리식염수에서 처리된 것으로 이들 세균에 의한 생물막 형성에 영향을 주지 않아 치아 표면에 많은 세균들이 자라는 것을 나타낸 그림이고(대조구), (B)는 천연구강세정제로 처리되어 세균들이 생물막 형성이 되지 않은 그림을 나타낸다.Streptococcus sanguis나Streptococcus mutans는 사람의 구강에서 충치나 치석을 만드는 세균으로 알려져 있다. 이들 세균은 생리식염수에 처리된치아에 부착되어 생물막이 생성되는 것이 관찰되었으나, 천연구강세정제로 처리된 치아에서는 생물막이 형성되지 않았다.

실시예 23

천연구강세정제로 사람의 치아표면에서 Lactobacillus acidophilus 와 Streptococcus mutans 의 혼합균주의 생물막 형성저해

두 개의 시험관(A, B)에 BHI 액체배지에Lactobacillus acidophilus와Lactobacillus plantarum의 혼합균주를 접종하고 사람의 치아를 각각의 시험관에 넣었다. 배양기 (37℃, 150 rpm)에서 배양기간 중에 8시간마다 치아를 꺼내어, 시험관(Ａ)는 천연구강세정제에 1일 3회, 각 회당 3분 동안 처리하였으며, 시험관(B)는 천연구강세정제 대신에 생리식염수에서 동일한 배양조건과 동일한 방법으로 처리하여 대조군으로 비교분석에 사용되었다. 주사전자현미경으로 치아표면에서 생물학 형성을 관찰하였다.

도 22에서 (A)는 생리식염수에서 처리된 것으로 이들 세균에 의한 생물막 형성에 영향을 주지 않아 많은 세균들이 자라는 것을 나타낸 그림이다(대조구). (B)는 천연구강세정제로 처리되어 세균들이 크게 손상을 받아 죽어있는 것을 보여준다.

Lactobacillus acidophilus와Lactobacillus plantarum는 사람의 구강에서 충치나 치석을 만드는 세균으로 알려져 있다. 이들 세균은 생리식염수에 처리된 치아에 부착되어 생물막이 생성되는 것이 관찰되었다. 그러나 천연구강세정제로 처리된 치아에서는 치아표면에 부착된 이들 세균이 크게 손상을 입어 죽은 세포들이 쌓여 있음을 보여준다.

본 발명은 녹차 폴리페놀을 포함하는 구강 미생물에 대한 항균 조성물, 및 이를 포함하는 구강 제품을 제공하여, 구강내 미생물에 대한 항균 및 살균 효과가 우수하여 구강 미생물과 관련된 여러 가지 상태, 즉 구치, 플라그 형성 억제, 충치, 및 치주질환 등을 예방 및 치료할 수 있다.

Claims

녹차의 폴리페놀을 유효성분으로 포함하는 구강 미생물에 대한 항균 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 구강 미생물은Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguis, Streptococcus salivarius, Staphylococcus aureus, Staphylocoocus epidermidis, 및 Enterobacter cloacae로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 구강 미생물인 항균 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 녹차 폴리페놀은 녹차 추출물중 폴리페놀이 50 중량% ~ 100 중량%로 포함되는 것인 항균 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 녹차 폴리페놀을 0.1 중량% ~ 100 중량%로 함유하는 항균 조성물.
제 1항 내지 4항중 어느 한항에 따른 녹차 폴리페놀을 유효성분으로 포함하는 조성물을 함유하는 구강 제품.
제 5 항에 있어서, 상기 구강 제품은 치약, 가글링 제품, 껌, 스프레이, 및구강 청정제로 이루어지는 군에서 선택되는 것인 구강 제품.
제 5 항에 있어서, 상기 구강 제품은 담체, 유화제, 풍미제, 방향제, 방부제, 식용색소, 및 향료로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 첨가제를 추가로 포함하는 구강 제품.