JPH02291279A - テイコマイシンａ↓２純粋単―ファクター５ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、テイコマイシンＡ２ファクター２の実質的に
純粋な形状の抗生物質およびそれを製造する方法に関す
る。

テイコマイシンＡ２は、同化しうる炭素原、窒素原およ
び無機塩を含有する培地中に菌株＾ｃｔｔｎｏｐｔａｎ
ｅｓ　Ｔｅ＋ｃｈｏｍｙｃｅｔｔｃｕｓ　ｎｏｕ．　ｓ
ｐ．　ＡＴＣＣ３１　１　２１を培養して得られるいく
つかの異なる抗生物質のうちのひとつである。ベルギー
特許順８３９．２５９をみよ。上記引用の特許記載の方
法によると、ティコマイシンＡ．／’２およびＡ３を含
有する抗生物質の混合物を、発酵ブロスより、水に混和
しない適当な有機溶媒で抽出し、抽出溶媒より沈殿させ
る一般的方法で採取する。

ついでテイコマイシンＡ　を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ■上の
力ラムクロマトグラフィーを用いて得られた抗生物賀混
合物より分ける。スルホン化ボリスチレン樹脂を通して
精製したあとのテイコマイシンＡ２は１組のベーバーお
よび簿層クロマトグラフイーシステムでのＲｆ（ａを含
めた、広く１連の種々の化学的物理的バラメーターで特
徴づける。クロマトグラフィーで、化合物は真に単一生
成物として振舞った。

予期されなかったこととして、今回、テイコマイシンＡ
２は、実際には、いくつかの一緒に生成する非常に類似
した抗生物質の混合物を包含することが分った。それら
の主なファクターは、テイコマイシンＡ２ファクター１
、テイコマイシンＡ２ファクター２、テイコマイシンＡ
２ファクター３、テイコマイシンＡ２ファクター４およ
びテイコマイシンＡ２ファクター５と命名ざれた。さら
に、これらの純粋な単一なファクターは、それらが、感
受性の微生物に対し八度の抗生物質活性を有する点で、
テイコマイシンΔ２複合物から区別されることが分った
。

本発明の抗生物質を製造するには、上記引用のベルギー
特許記載のテイコマイシンＡ２より出発し、高効率クロ
マトグラフ法により抗生物質複合物を単一のファクター
に分け主要なものを採取する。

本明［ｌ書中に記載の“テイコマイシンＡ２゜゛テイコ
マイシンＡ２複合物″′または゛抗生物質複合物″の用
語は、たとえば、水明ｍ占中に引用するベルギー特許８
３９．２５９の記載により得られ、そこでテイコマイシ
ンＡ２と命名されて（Ａる、上記の同時に生産される５
種の抗生物質゛ファクターを含有する混合物を意味する
。この複合物を、主な、純粋な単一ファクターに分ける
ことは、逆相分配クロマトグラフイーまたはイオンー交
換クロマトグラフイーで行ないつる。前者では、カラム
の充填に不活化シリカゲルを用い、ＩＨｌｉｌにはアセ
トニトリル／ギ酸アンモニウム水溶液のグラジエント溶
出を用いるのが便宜であり、後者では、静止相に、ゲル
型の弱陰イオン交換体を用い、溶出システムに、水性緩
衝液または水性緩衝液と非水性溶媒との屁合物を用いる
のが適当である。特に、希ギ酸アンモニウム水溶液とア
セトニトリルとの混合物に溶解した７イコマイシンＡ２
の溶液をシラン化シリカゲルカラムに通し、同じ溶媒シ
ステムでカラムをグラジエント溶出する。アガロースの
ジエチルアミノエチル誘導体を静止相に用い、！！！ｉ
溶液または緩衝溶液と非水混和性の溶媒との混合物を用
いて徐々に溶出して分ける。

分離操作はＨＰＬＣでモニターする。類似のＨ　Ｐ　Ｌ
　Ｃプロフィールを有する分画を合併し、望むならばＷ
製用ＨＰＬＣでさらに精製し脱塩する。

これらの溶液より、有機溶媒を蒸発させ、水をストリッ
プして小容量とし、過剰の、化合物の溶解しない有機溶
媒を加えて、生成物を沈殿させる。

本発明方法をさらによく説明するためにつぎに具体例を
示す。しかし、示した特定の条件で本発明を制限するわ
けでない。テイコマイシンＡ２フＩクター１、２、３、
４および５の分離ベルギー特許８３９．２５９に記載の
方法で得られたテイコマイシンＡ２複合物の１０グラム
を０．２％ギ酸アンモニウムーアセトニトリル（９：１
）ｌｍ合物の１リットルに溶解し、１規定Ｎ　ａ　Ｏ　
ＨでｐＨ７，５に調整する。この溶液をシラン化シリカ
ゲ）Ｌｔ　６　０　（　Ｈｅｒｃｋ　）の５００グラム
を含有するノｊラムに通す。

カラムは、０６２％ギ酸アンモニウム溶液中１０％から
２０％までのアセトニトリルの直線状グラジエントで溶
出する。全容量は１０リットルとする。

２Ｏｄ宛の分画を集めＨＰＬＣでチェックする。

次表に、代表的なＨＰＬＣ分離におけるテイコマイシン
Ａ２ファクター１、２、３、４および５における保持時
間（１Ｒ）を示す。操作条件は次表に示す。

表　　１ テイコマイシンＡ２ ファクター　　　　　　　保持時間（分）１　　　　　
　　　　　２１．　２ ２　　　　　　　　　　２２．６ ３　　　　　　　　　　２３．　３ ４　　　　　　　　　　２５．　８ ５　　　　　　　　　　２６．　４ ３，５−ジヒドＤキシ　　　　８．８４トルエン （内部標準） カラム：　５　１１　　Ｚｏｒｂａｘ■ＯＤＳ　（Ｄｕ
　Ｐａｎｔ　）移動相：４０分のうちに、Ａ中Ｏ％Ｂか
ら５０％Ｂまで直線状グラジエント Ａ）２　５ｍＨ　　Ｎ　ａ　Ｈ　　Ｐ　０４　／アセト
ニトリル（９：１）０．１Ｎ　　ＮａＯＨｒｐＨ６．０
に緩衝 Ｂ）２５ｍ）４　　ＮａＨ２　ｐｏ４／アセトニトリル
（３：７）０．１Ｎ　　ＮａＯＨｒｐｕ６．ｏに緩衝 流　　ｌ：２ｍ／　分 検出器：２５４ｎｍでのＵ．Ｖ．フォトメーター同じＨ
ＰＬＣプロフィールの分画を集め、溶媒を減圧で蒸発さ
せる。残った水溶液を、シラン化シ’）カケ）Ｌｔ　（
６０）　　（Ｈｃｒｃｋ　）の１０グラムを含有するカ
ラムに通す。カラムは蒸留水で洗いギ酸アンモニウムを
除き、５０％水性アセトニトリルで溶出寸る。溶出液は
水を蒸発しやすくするためにブタノールを加えて小容量
に濃縮し、ついで１：１アセトンーエチルエーテル混合
物で沈殿させる。

上記の操作で純テイコマイシンへ２ファクター１（４１
０ｍｇ＞およびファクター２（７７０１１１ｇ）をうる
。テイコマイシンＡ２ファクター３は、テイコマイシン
Ａ２ファクター２と１：１混合物となっているものを、
つぎの操作条件で精製する。半Ｓｌ！１製１１１のＨ　
Ｐ　Ｌ　Ｃを用いる。

カラム：　Ｗｈａｔｍａｎ　Ｐａｒｔｉｓｉｌ■ＯＤＳ
　　Ｍ９１０／５０移動相：０．２％ギ酸アンモニウム
水溶液／アセトニトリル（７６：２４）， 流　速：４．！）ｄ／分 検出ａ：Ｕ．Ｖ．フォトメーター２　５　４　ｎａ添加
聞＝２０Ｒ！Ｊ この場合｝｛ＰＬＯで各分画をチェックして精製をモニ
ターした。

純テイコマイシンＡ２ファクター２を含有づる分画およ
び純テイコマイシンＡ２ファクター３を含有する分画を
合併し、脱塩し前記のように沈殿させた。（収ｆｆｉ：
５１０ＩｐＩのテイコマイシンＡ２ノ？クター２および
５２０ｍｇのテイコ冫イシンΔ２ファクター３）。

第１のカラムから得られる、ファクウ−４および５を１
−１の割合に含有する分画（約５００〜）、平行して実
施した第２の分離より同様に得られたファクター４およ
び５の氾合物含有別のプール（約４９０ａｙ）を合併し
、テイコマイシンＡ２ファクター３の精製について上記
した操作条件を用いる半調製用ＨＰＬＣで分け、３５０
１！Ｊのテイコマイシン八２ファクター４および３００
■のテイコマイシンＡ２ファクター５を得た。テイコマ
イシンＡ２の純単一ファクターの化学的一物理的特徴 テイコマイシンＡ２ファクター１は白色無定型粉末で、
加熱すると、約２２０℃で暗化し始め、２２５℃で完全
に分解する。つぎの特徴を有する。

ａ）　　ＤＩ＞７．　０８３よヒｐｌｌ＜２ノ水、シメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホキサイド、およびブ
ロビレングリコールに自由に溶解する。

メチルセロソルブおよびグリセロールに僅溶メタノール
およびエタノールに難溶、クロＯホルム、ベンゼン、ｎ
−ヘキサン、アセトニトリル、エヂルエーテル、アセト
ン、酢酸エチル、四塩化炭素にほとんど不溶 ｂ）第１図に紫外部吸収スペクトルを示す。つぎの吸収
極大を示す。

１％ ０．１Ｎ塩酸中：λ　　２７８ｎＲｌ（Ｅ　　１ｃｍ＝
ａｔａｘ ４９．５） ＤＨ７．４リン酸塩！１衝液中： １％ λ　　２７８ｎｍ（Ｅ　　　＝５０．０）ＩＩｌａｘ１
ｃｍ Ｃ）第２図にヌジョール中の赤外部吸収スペクトルを示
す。つぎに吸収極大である。３７００−３１００，２９
６０−２８４０　（メジョール）、１６４５、１　５９
０１１　５１　０．１　４６０　（ヌジョール）、１３
７５（ヌジョール）、１３０５、１２３０、１１８０、
１１５５、１０６０，１０２５、９７０、８９０、８４
５、８１５、７２０（ヌジョール）； ｄ）不活性気体中約１４０℃にあらかじめ乾燥した（％
ΔＷ＝８．５＞試料の元素分析値の大体のバーセント組
成（平均値）をつぎに示す：炭素５６．７０％；水索４
．９０％；窒索６．６５％；塩素３．８０％；酸素（差
で）２７．９５％。

ｅ）　　５　ｕ　　Ｚｏｒｂａｘ■ＯＤＳ力ラムを用い
る逆相ＨＰＬＣで、４０分で溶液Ａ中Ｏ％から５０％ま
での溶液Ｂの直線状グラジエントで溶出（溶液Ａ：２５
ｍＨのＮａｌｌ　　ＰＯ４／アセトニトリル（　９／１
　）０．ＩＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に￥１１衝、溶液
Ｂ：２５１１１ＨのＮａＨ２ＰＯ４／アセトニトリル（
　３／７　）、０．１ＮのＮａＯＨでｐｌｌ６．ｏに緩
をｂ）、流速２ｄ／分（内部標準：３．５−ジヒドロギ
シートルエンｔＲａ．８４分）。

ｆ）数滴のＤ２０添加ＤＭＳＯ−ｄ６中濃度２５ｍｇ／
０．５−で測定して、２７０ＨｌｌＺの’Ｈ　Ｎ　Ｍ　
Ｒスペクトル（全スペクトルは第３図に示す）はつぎの
群のシグナルを示す（ＴＭＳを内部標準として：δ＝ｏ
．　ＯＯｐｐｍ　＞　：０．８−１．５　（ｍ）：　１
．７−２．３　（ｍ）；２．７−４．０　（ｍ）：ｉ　
０−４．７　（ｍ）：４．８−５．８　（ｍ）：６．２
−８．１　（ｍ）　，，ｇ）酸官能基を有し、塩を形成
する。

ｈ）塩を形成する塩基性官能基を有する。

ｉ）高速原子衝撃（ＦＡＢ）をイオン原に用いる質吊ス
ペクトル分析で測定して分子吊は約１８７５（ＦＡＢｉ
ｔｆｆｉスペクトルの測定についてはたとえばＨ．　Ｂ
ａｒｂｅｒ等、Ｎａｔｕｒｅ，　２　９　３　、Ｎｎ５
　８　３　０、２７０−７５　（１９８１））。

テイコマイシンＡ２ファクター２は白色無定型粉末で２
１０℃に加熱すると暗化し、２５０゜Ｃで完全に分解す
る。つぎの特性を右づる。

ａ）ｐＨ＞７．０またはＤＨ＜２の水、ジメチルホルム
アミド、ジメチルスルホキサイドおよびプロピレングリ
コールに自由に溶解し；メチルセロソルブおよびグリセ
ロールに僅溶で；メタノールおよびエタノールに難溶で
；クロロホルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アセトニト
リル、エチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、四塩化
炭素に不溶である。

ｂ）第４図に紫外部吸収スペクトルを示す。つぎの吸収
極大を与える。

リン酸緩衝液０１１７．４中： ０．１Ｎの水酸化ナトリウム中： Ｃ）第５図にヌジョール中の赤外部吸収スペクトルを示
す。つぎの吸収極大を認める。３７００３１００、２９
６０−２８６０　（ヌジョール》、１６４５、１５９０
，１５１０、１４６ｏ（ヌジョール）、１３７５（ヌジ
ョール）、１３００、１２６０、１２３０，１１８０１
　１１５０、１０６０、１０２５、９７０、８９０、８
４５、８１５、７２０（ヌジョール）。

ｄ）元素分析値、不活性気体中で試料を約１４０℃に加
熱したあと（％ΔＷ＝９．８＞の大体のバ一セント組成
（平均）をつぎに示す：炭素、５６．１５％；水素、５
．１５％；窒素、６．３０％；塩素、３．９０％：酸素
（差）、２８．５０％。

ｅ）　　５　μ２ｏｒｂａｘ■ＯＤＳカラムヲ用イル逆
相Ｈ　Ｐ　Ｌ　Ｃで、４０分で溶液Ａ中、溶液８のＯ％
から５０％までの直線状グラジエント（溶液Ａ：２５ｍ
ＨのＮａＨ　ＰＯ４／アセトニトリル（　９／１　）、
０．ＩＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩街。溶液Ｂ：２５
ｍｔ４のＮａＨ２ＰＯ４／アセトニトＩＪ／Ｌ，　（　
３／７　）　０．　１　ＮのＮａＯＨで０１１６．０に
緩衝）で、２ｄ／分で溶出し、保持時間（ｔ１）２２．
６分。（内部標準＝３．５−ジヒドロキシトルエン、ｔ
Ｒ８．８４分）。

ｆ）Ｄ　　Ｏｆｉｉ添加ＤＭＳＯ−６６中で記録した２
７０ＨＩＩｚの’Ｉ−ＩＮＭＲ（第６図に示す）はつぎ
のシグナル群を示す（′ａ度２５ｒＩｒｇ／０．５＋＋
ｉ！）（ＴＭＳの内部標準をδ−０．　ＯＯｐｐｍ　）
　：０．７−１．５　（ｍ）：１．８−２．２　（ｍ）
：２．　７−４．　５　（ｒｌ１）　：４．　６−５．
　７　（ｒｎ）　：６．２−８．１　（ｍ）。

ｇ）塩を形成する酸官能基を有する。

ｈ）塩を形成する塩基官能基を有する。

）　　ＦＡＢマススベクトルで測定して約１８７７の分
子畿。

テイコマイシンＡ２ファクター３は白色無定型の粉末で
、加熱すると２０５℃で分解を始め、２５０℃で完全に
分解する。つぎの特性を有する：ａ）　　ｐＨ＞７．　
０またはｐＨ＜２．０の水、ジメチルホルムアミド、ジ
メチルスルホキサイドおよびプロピレングリコールに自
由に溶解し；メチルセロソルブおよびグリセロールに僅
溶で：メタノールおよびエタノールに難溶で：クロロホ
ルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アセトニトリル、エチ
ルエーテル、アセトン、酢酸エチル、四塩化炭素にほと
んと不溶である。

ｂ）紫外部スペクトルを第７図に示すが、極大吸収はつ
きのようである。

４９．　　２＞ ｐＨ７．４のリン酸！ｌ衝液中： ０．ＩＮの水酸化ナトリウム中； Ｃ）第８図にヌジョール中の赤外部スペクトルを示す。

つぎのような吸収極大を認める。３７００−３１００，
２９６０−２８５０　（ヌジフール）；１６４５、１５
９０、１５１０，１４６０　（ヌジョール）、１３７５
（ヌジョール）；１３００，１２３０，１１８０，１１
５０，１１２０、１０６０、１０３０１９７０、８９０
、８４５、８２０、８００、７２０（ヌジコール）。

ｄ）元素分析値、不活性気体中であらかじめ約１４０℃
に加熱した試料（％ΔＷ＝１２．０）は、つぎの大体の
組成パーセント（平均）を示す：炭素、５６．２６％；
水素、５．２０％：窒素、６．６９％；塩素、３．９５
％；酸素（差）、２７．　　９０％。

ｅ）　　５　ｕ　　ＺｏｒｂａｘｏＯ　Ｄ　Ｓ力ラムを
用い、溶液Ａ中、溶液Ｂを、４０分のうちにＯ％から５
０％とする直線状グラジエント（溶液Ａ：２５ｍＨのＮ
ａＨ２ＰＯ４／アセトニトリル（９／１）、０．１Ｎの
ＮａＯＨでｐｌｌ６．ｏに緩衝、溶液Ｂ：２　ｂ　ｍＨ
（１）　Ｎ　ａ　Ｈ　２　Ｐ　Ｏ　，ｓ　／アセトニト
リル（　３／７　）、Ｏ．ＩＮのＮａＯＨでｐＨ６．０
に緩衝》とし、２ｍ／分の流速での逆相ＨＰＬＣで分析
して、保持時間（ｔＲ）は２３．３分（内部標準：３．
５−ジヒドロキシトルエンｔｎ　８．８４分）。

ｆ）　　ａ滴のＤ２０を加えたＤＭＳＯ−ｄ６中（ｍ度
２５＃Ｉｌ！Ｆ／０．５ａｅ）で測定した２７０Ｈｔｌ
ｚ１ＦＩＮＭＲスペクトルを第９図に示す。つぎのシグ
ナルを示す（内部標＄ＴＭＳ１δ＝０．００ｐｐｎ　）
　：０．　７−１．　５　（ｍ）　：　１．　８−２．
　０（ｍ）；２．７−４．５　（ｍ）：４．６−５．７
（ｍ）　　：６．　　２−８．０　　（ｍ）　　。

ｇ）塩を形成しつる酸性基を有する。

ｈ）塩を形成しうる塩基性基を有する。

）ＦＡＢ質聞スペクトルで測定して、分子量約１８７７
。

テイ］マイシンΔ２ファクター４は白色無定型粉末で、
加熱すると約２１０℃で暗化し始め、２５０℃で完全に
分解し、つぎの特性を示す。

ａ）　　ＤＨ＞７．　０またはｐｔｌ＜２，（１）水、
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキサイドおよび
プロピレングリコール中に自由に溶解する；メチルセ０
ンルブおよびグリセロールに僅溶である；メタノールお
よびエタノールに難溶である、クロロホルム、ベンゼン
、ｎ−ヘキサン、アセトニトリル、エチルエーテル、ア
セトン、酢酸エチル、四塩化炭素にほとんど不溶である
。

ｂ）第１０図に紫外部吸収スペクトルを示す。吸収極大
はつどのようである。

５２．　　５） ｐｔｌ７，４リン酸緩衝液中： １％ λ　　２７８ｎｎ＋（Ｅ　１，＝５２．５）ｍａｘ Ｃ）ヌジョール中の赤外部スペクトルを第１１図に示す
。吸収極大はつぎのようである：３７００−３　１　０
０、２９６０−２８４０　（ヌジョール）、１６４５、
１５９０、１５１０、１４６０（ヌジョール）、１３７
５（ヌジョール＞、１３００，１２３０、１１７５、１
１４０、１０６０、１０２５、９７０１８９０、８４０
，８１５、７２０〈ヌジコール）。

ｄ）元素分析値。不活性気体中で約１４０℃に予備乾燥
した試料（％ΔＷ＝９．８＞の大体の組成バーセントを
つぎに示す（平均）：炭素５６．５０％；水素、５．１
０％；窒素、６．５０％；塩素、３．８０％：′ｆｌｉ
素（差）２８．１０％。

ｅ）　　５　ｕ　　ＺｏｒｂａｘｏＯ　Ｄ　Ｓ力ラムを
用い、溶液Ａ中溶液Ｂを、４０分のうちに０％から５０
％とする直線状グラジエント（溶液Ａ：２５ｍＨのＮａ
ｌ−Ｉ　　ＰＯ４／アセトニト＋）ル（　　９／１　）
、０．ＩＮのＮ　ａ　０　１−１でｐｌｌ６．ｏｆ．：
緩衝、溶液Ｂ：２５ｍＨのＮａｌ−Ｉ　　Ｐｏ４／７セ
トニトリル＜　３／７　）、Ｏ．ＩＮのＮ　ａ　Ｏ　Ｈ
でｐｌ−１６．０に緩ＷＪ）とし、２ｍ／分の流速での
逆相ＨＰＬＣで分析して、保持時間（シＩｌ）は２５．
８分（内部標準：３．５−ジヒドロキシトルエンｔｎ８
．８４分）。

ｆ）塩を形成しつる酸性官能阜を有する。

ｇ）塩を形成しつる塩基性官能曇を有する。

ｈ）　　ＦＡＢ質吊スペクトルで測定して分子Φ約１８
９１。

テイコマイシンＡ２ファクター５は白色無定型粉末で２
１０℃に加熱するとＱＱ化しはじめ、２５０℃で完全に
分解し、つどの特性を有する。

ａ）　　ｐｉｆ＞　７　．Ｑまたはｐｌｌ＜２．０の水
、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキサイド、Ｊ
’３よびブロビレングリコールに自由に溶解し；メチル
セロソルブおよびグリセロールに僅溶で；メタノールお
よびエタノールに難溶で、クロロホルム、ベンゼン、ｎ
−ヘキサン、アけトニトリル、エチルエーテル、アセト
ン、酢酸エチル、四塩化炭素にほとんど不溶である。

ｂ）紫外部吸収スペクトルを第１２図に示すが、吸収極
大はつぎのようである。

＝４９．　　６） １］１−１７．４のリン酸緩衝液中； ０，１Ｎの水酸化ナトリウム中： Ｃ）第１３図にヌジョール中の赤外部吸収スペクトルを
示す。つきの吸収極大を認める：３７００−３　１　０
０、２９６０−２８４０　（ヌジョール》、１６４５、
１５９０，１５１０，１４６０（ヌジョール）、１３７
５（ヌジョール）、１３００、１２３０、１１７５、１
１４５’、１０６０、１０２５、９７０、８９０、８４
０，８１５、７２０（ヌジョール）。

ｄ）元素分析値、不活性気体中であらかじめ約１４０℃
に加熱した試料（％ΔＷ＝１０．１）は、つぎの大体の
組成バーセント（平均）を示す；炭素、５６．６０％：
水素、５．０５％：窒素、６，６３％；塩素、３．８５
％：Ｆｎ素（差）、２７．８７％。

ｅ）　　５　ｕ　　７ｏｒｂａｘ”　Ｑ　［）　３カラ
ムを用い、溶液△中溶液Ｂを４０分のうちに、０％から
５０％とする直線状グラ゛ジエント（溶液Ａ：２５ｍＨ
のＮａＨ　　ＰＯ４／７セトニト＋））Ｌｔ　（　　９
／１　）、０．１ＮのＮａＯＨでｐｔｌ６．ｏに緩街、
溶液Ｂ：２５ＩＩＩＨのＮａＨ　　ＰＯ４／アセトニト
リル（　３／７　）、０．ＩＮのＮａＯＨでｐ１１６、
Ｏに緩！＞とし、２ｒｄ／分の流速での逆相１−Ｉ　Ｐ
　Ｌ　Ｇで分析して、保持時間＜ｔＲ）２６．４分（内
部標準：３．５−ジヒドロキシトルエンｉｎ　ｓ．８４
分）。

ｆ）塩を形成しつる酸性基を有する。

ｇ）塩を形成しつる塩阜性基を有する。

ｈ）　　ＦＡＢ質吊スペクトルで測定して分子伝約１８
９１。

テイコマイシンＡ２ファクター１、２、３、４および５
のそれぞれは塩を形成しつる酸性基を有する。テイコマ
イシンＡ２ファクター１、２、３、４および５のアルカ
リ金属、アルカリ土金属および薬剤として許容されつる
アンモニウム塩は、本発明のさらに別の目的である。

代表的なアルカリ金属およびアルカリ土金属塩には、ナ
トリウム、カリウム、リチウム、カルシウムおよびマグ
ネシウム塩がある。アンヤニウム塩にはアンモニウムお
よび１級、２級または３級（Ｃ１−０４）アルキルアン
モニウムおよびヒドＯキシー（Ｃ１−０４）アルキルア
ンモニウム塩がある。アルカリおよびアルカリ土金属塩
は、金属塩を製造するためのふつうの方法で製造しつる
。

たとえば遊離酸形のティコマイシンＡ２ファクター１、
２、３、４または５を、プロピレングリコールのような
適当な溶媒に溶解し、適当な選択した無機塩基の化学世
論的但を、得られた溶液に加える。

生成するアルカリまたはアルカリ土金属塩は、非溶媒で
沈殿させ、濾過して採取ずる。

別様には、これらの塩を凍結乾燥で実質的に無水の形に
調製しつる。その場合、適当に選択したアルカリまたは
アルカリ上金属の炭酸塩または水酸化物をｐ１１７から
８にするように加えて遊ＩａｌｔＭ形を塩にして得られ
た、望む塩を含有する水溶液より不溶物を濾去し、凍結
乾燥する。

有機アンモニウム塩はティコマイシンＡ２ファクター１
、２、３、４および５の遊離酸型を適当な溶媒たとえば
プロピレングリコールに含有する溶液に適当に選択した
アミンを加え溶媒および過剰のアミンを蒸発さずか、ま
たは、できるだけ少量の水中で上記の試剤を接触させ非
溶媒を加えて得られた塩を沈殿さすことにより：ｌｌＪ
製しうる。

前記したように、テイコ冫イシンＡ２ファクター１、２
、３、４、および５のそれぞれは、塩となしつる塩基性
官能基を有する。純粋な単一ファクターと、むしろ強い
酸、なるべくは鉱酸とを接触さす、この方面の技術で知
られる方法で製造した、薬剤として許容されつる酸付加
塩は、本発明の別の目的となる。テイコマイシンＡ２フ
ァクタ−２ナトリウム塩の製造 テイ］マイシンＡ２ファクター２（１５０＃１５Ｆ，１
　５ｍ）の水溶液を、０．１ＮのＮａＯＨを滴下して、
ａｌｌ８．０とする。得られた溶液を濾過し、凍結乾燥
システムの室に移し、凍結させる。完全に凍結したら、
至を０．１トールの真空とし、プレートをＯ℃に加熱し
て氷を昇華させる。操作は生成物がほとんど乾燥するま
で続ける。約１％含水饋まで。このように得られたテイ
コマイシンＡ２ファクター２ナトリウム塩を２５ｄのメ
チルセロソルブ／Ｈ２０　３／１に溶解し、０．１ＮＨ
ＣＪ！で滴定すると、ｐκ：７．０３および４．７８を
特徴とする２つの滴定可能の官能基の存在を示す。

上記の方法を行なうが、ティコマイシンＡ２ファクター
１、３、４および５より出発して、相当するナトリウム
塩をつる。得られた塩中のナトリウムを定量すると、モ
ノナトリウム塩である。

ダラム陽性細菌に主に活性を示すテイコマイシンへ２フ
ァクター１、２、３、４および５のインビトロー抗菌活
性を、ミクロタイターシステム中で２倍希釈法を用いて
、ぶどう球菌および連鎖球菌の臨床分離株に対して調べ
た。Ｐｅｎａｓｓａｙプロス（ｏｉｒｃｏ　）を前者に
、Ｔｏｄｄ−ｆｌｅｗｉｔｔブロス（Ｄｉｒｃｏ　）を
後者に用いた。ブロス１夜培養物を、最終接種体が約１
０３コロニー形成単位／ｄになるように希釈した。３７
℃で１　８−２４時間インキユベーションしたあと、肉
眼に見える発育を示さない最低濃度を最小阻止濃度（Ｍ
ＩＣ）とした。

ファクター１．２．３．４および５の微生物活性の相対
的な比較を、Ｓ．　ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ６　５　３
８を試験菌、ティコマイシンＡ２複合物を標準にして寒
天拡散法で実施した。ティコマイシンＡ２ファクター１
、ティコマイシンＡ２ファクター２、テイコマイシンＡ
２ファクター３、ティコマイシンＡ２ファクター４、テ
イ」マイシンＡ２ファクター５および標準に用いるテイ
コマイシン複合物の適当損を２０００μｇ／Ｉｄにジメ
チルホルムアミドにｒａｙ／ｉ！する。溶液は、１％牛
血清を加えた、ｐｔｌ７．４、０．０６７Ｍのリンｍ緩
衝液でさらに希釈し、２．５．５．１０および２０μ９
／ｄの濃度とした。

濾紙ディスクを試料溶液で浸し、試験菌の懸濁液を接種
してある寒天プレートの表面上に規則的に間隔をあけて
おいた。プレートは３７℃で１８時間インキユベートし
、阻止帯の直径を測定した。

得られたデーターを］ンビューターに入れ、複合物を基
準として、個々のファクターの力価を計算した。結果を
下に示す。

テイコマイシンＡ２ ファクター１ ８４１Ｕ／ｆｆｌ！？ テイコマイシンＡ２ファクター２ １０８６Ｕ　／■ テイコマイシンＡ２ファクター３ １１３１ＬＩ／＃ｌ４Ｆ テイコマイシンＡ２ファクター４ １０６６Ｕ／Ｒ９ テイコマイシンＡ２ファクター５ ９５４Ｕ／１１１ｇ テイコマイシンＡ２複合物 １０００ＬＪ／＃ｌ！？ テイコマイシンＡ２ファクター２．３．４８よび５をさ
らにｓ．　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＳ．　ＩＩＶＯ
（ｌｅｎＯｓでマウスにおこした感染症について調べて
みた。

テイコマイシンＡ２複合物と比較して実験した。

結果を次表３に示す。

表３ 表　　４ インビボー　抗菌活性 マウス急性毒性《腹腔》 テイコマイシンＡ２ファクター１．２．３．４および５
についてのマウス腹腔急性毒性を次表４に示サ。

上記から、ティコマイシンＡ２ファクター１、テイコマ
イシンＡ２ファクター２、デイコマイシンＡ２ファクタ
ー３、ティコマイシンＡ２ファクター４およびティコマ
イシンＡ２ファクター５は、活性成分に感受性の病原性
！１１１菌でおこる感染症の予防および治療に、ヒトお
よび獣医用の薬に用いる抗菌性調製物の活性成分として
効果的に用いうろことが分った。そのような治療で、こ
れらの化合物はそのままかまたは単一の個々のファクタ
ーとして、または、それらの活性パターンの類似性から
、５つのファクターの２つまたはそれ以上の任意の割合
の混合物の形状で用いろる。本発明の化合物は、経口、
局所または注射投与しうる。しかし注射投与がもつとも
有利である。投与のルートに応じて、経口、局所または
注ＣＡ投与しつる。

しかし注射投与がもつとも有利である。投与ルートに応
じて、これらの化合物は種々の投与形態に処方しうる。

経口投与用の調製物はカプセル、錠剤、液状溶液または
懸濁液となしつる。この方面の技術で知られているよう
に、カプセルおよび錠剤は、活性成分に加えて、従来か
ら用いられている助剤、乳糖、リン酸カルシウム、ソル
ビトールおよび類似の希釈剤、ステアリン酸マグネシウ
ム、タルク、ポリエチレングリコールのような滑剤、ポ
リビニルビロリドン、ゲラチン、ソルビトール、トラガ
カント、アカシア、風味剤のような結合剤および許容さ
れつる崩壊剤、湿展剤を含有しうる。

一般的に水性または油性の溶液または懸濁液の形の液体
調製物は、懸濁剤のような従来から用いられている添加
物を含有しつる。局所的使用には、本発明の化合物は、
皮膚をのおよびのどの粘膜または気管の組織を通しての
吸収に適当な形にも調製でき、便宜とあれば、液状スプ
レーまたは吸入剤、ロゼンジまたはのどに塗布する形状
ともなしつる。眼や耳に施すには、調製物は液体または
半固体となしうる。軟膏、クリーム、ローション、ペイ
ントまたは粉末のように疎水性または親水性のベースに
処方して、局所施用しつる。注射用の組成物は、油状ま
たは水性のビヒクル中に懸濁液、溶液またはエマルジョ
ンとすることができ懸濁剤、安定化剤および（または）
分散剤のような処方用薬剤を含有しつる。別様には、活
性成分を粉末にしておいて、使用時に、無菌水のような
適当なビヒクルで再構成しうる。投与すべき活性成分の
量は、治療しようとする対象の大ぎさおよび状態、投与
のルートおよび瀕度および感染原といった種々の要因で
変化する。

テイコマイシンＡ２ファクター１．２．３．４６よび５
は、・休重Ｋ９について約０．１から約２０■の１日量
が一般的に有効で、ふつう、１日に２回に分けて投与す
る。特に望ましい組成物は、約５０から約２５０１ＩＳ
Ｆ／単位を含有する単位投与形態である。

薬剤組成物を調製する代表的例をつぎに示す。

注躬用の無菌水２厩中にテイコマイシンＡ２ファクター
２のナトリウム塩の１００Ｉｌ＋９を溶解して注射用溶
液とする。

２５０＋１１ＳＦのテイコマイシンＡ２ファクター３の
ナトリウム塩を：Ｍの注射用無菌水に溶解して注射用溶
液とする。

２　０　０　１１１！ＦのテイコマイシンＡ２ファクタ
ー２６００ηのポリエチレングリコール４０００ｕ．ｓ
　ｐ． １．２ｇのポリエチレングリコール４００ｌＪ．ｓ．Ｐ
． を用いて局所用軟膏とする。

医薬としての用途の他に、本発明の化合物は動物生長促
進剤に用いられる。

その目的では、本発明の化合物のひとつまたはひとつよ
り多くを適当な飼料に加えて経口投与する。用いる正確
な濃度は、正常量の餌が消費された時に、生長促進に有
効な量の活性剤が摂取されるようにする。

本発明の活性化合物を動物飼料に加えるには、有効憬の
活性化合物を含有する適当な飼料プレミックスを１１１
し、そのプレミツクを完成された飼料に添加するのが有
利である。

別様には、活性成分を中程度の濃さに含有するような＠
料添加物を、飼料に混入しつる。

そのような飼料プレミックスおよび完成飼料を調製し投
与する方法は、春照刊行物（たとえば、“八Ｈｌｉｅｄ
　　Ａｎｉｍａｌ　　ｔ４ｕｔｒｉｔｉｏｎ”　　，　
　Ｌｌｌ．　　Ｆｒｅｅｄｍａｎａｎｄ　Ｃｏ．，　Ｓ
．　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，　ＬＩＳＡ．　１　９　６　
９または”ＬｉＶｅＳｔＱＣｋ　ＦｅＱｄＳ　ａｎｄ　
Ｆｅｅｄｉｎｇ　”　，　Ｏ　　ａｎｄ　ＢＢｏｏｋｓ
，　Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ，　Ｏｒｅｇｏｎ，　ＬＩＳＡ
　．　１　９　７　７　）に記載されているので、これ
らを水明１１１１ｉ１の参照文献として引用する。

【図面の簡単な説明】

第１図はテイコマイシンＡ２ファクター１の紫外線吸収
スペクトルを示す。 第２図はテイコマイシンＡ２ファクター１の赤外線スペ
クトルを示す。 第３図はテイコマイシンＡ２ファクター１の１８ＮＭＲ
スペクトルを示す。 第４図はテイコマイシンＡ２ファクター２の紫外線吸収
スペクトルを示す。 第５図はテイコマイシンＡ２ファクター２の赤外線スペ
クトルを示す。 第６図はテイコマイシンＡ２ファクター２の１ＨＮＭＲ
スペクトルを示す。 第７図はテイコマイシンＡ２ファクター３の紫外線吸収
スペクトルを示す。 第８図はテイコマイシンＡ２ファクター３の赤外線吸収
スペクトルを示す。 第１３図はテイコマイシンＡ２ファクター５の赤外線吸
収スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）化学的物理的性質として、無定型の白色粉末であ
   り、加熱すると２１０℃で暗化を始め、２５０℃で完全
   に分解し、 ａ）ｐＨ＞７．０またはｐＨ＜２．０の水、ジメチルホ
   ルムアミド、ジメチルスルホキサイドまたはプロピレン
   グリコールに自由に溶解し、メチルセロソルブおよびグ
   リセロールに僅溶で、メタノールおよびエタノールに難
   溶で、クロロホルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アセト
   ニトリル、エチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、四
   塩化炭素にほとんど不溶であり、 ｂ）０．１Ｎ塩酸中λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１
   ＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝４９．６）ｐＨ７．４リン酸塩緩衝
   液中 λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝
   ５１．８）０．１Ｎ水酸化ナトリウム中λ＿ｍ＿ａ＿ｘ
   ２９７ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝７８．８）に吸
   収極大を有する紫外線吸収スペクトルを有し、 ｃ）ヌジョール中、３７００−３１００、２９６０−２
   ８４０（ヌジヨール）、１６４５、１５９０、１５１０
   、１４６０（ヌジヨー ル）、１３７５（ヌジョール）、１３００、１２３０、
   １１７５、１１４５、１０６０、１０２５、９７０、８
   ９０、８４０、８１５、７２０（ヌジヨール）に観察し
   うる吸収極大を有する赤外線吸収スペクトルを有し、 ｄ）不活性気体中約１４０℃であらかじめ乾燥して（％
   ΔＷ＝１０．１）、おおよそのパーセント組成（平均）
   として、炭素５６．６０％；水素５．０５％；窒素６．
   ６３％；塩素３．８５％；酸素（差）２７．８７％を与
   える元素分析値を有し、 ｅ）５μ　Ｚｏｒｂａｘ＾［＾Ｒ＾］ＯＤＳカラムを用
   い、溶液Ａ中溶液Ｂを、４０分のうちに０％から５０％
   までの直線状グラジエント（溶液Ａ： ０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍＭの
   ＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（９／１）、溶液
   Ｂ：０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍ
   ＭのＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（３／７））
   とし、２ｍｌ／分の流速で溶出する逆相ＨＰＬＣで分析
   して保持時間（ｔ＿Ｒ）が２６．４分（内部標準：３，
   ５−ジヒドロキシトルエンｔ＿Ｒ８．８４分）であり、 ｆ）塩を形成しうる酸性官能基と、 ｇ）塩を形成しうる塩基性官能基と、 ｈ）ＦＡＢ質量スペクトルで測定して約１８９１の分子
   量を有するテイコマイシンＡ＿２ファクター５及び医薬
   として許容されうるその塩。 （２）薬剤として許容される塩がアルカリ金属塩、アル
   カリ土金属塩またはアンモニウム塩である特許請求の範
   囲（１）項記載のテイコマイシンＡ＿２ファクター５及
   び薬剤として許容されるその塩。 （３）逆相分配またはイオン交換クロマトグラフィーに
   よりテイコマイシンＡ＿２複合物より、化学的物理的性
   質として、無定型の白色粉末であり、加熱すると２１０
   ℃で暗化を始め、２５０℃で完全に分解し、 ａ）ｐＨ＞７．０またはｐＨ＜２．０の水、ジメチルホ
   ルムアミド、ジメチルスルホキサイドまたはプロピレン
   グリコールに自由に溶解し、メチルセロソルブおよびグ
   リセロールに僅溶で、メタノールおよびエタノールに難
   溶で、クロロホルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アトニ
   トリル、エチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、四塩
   化炭素にほとんど不溶であり、ｂ）０．１Ｎ塩酸中λ＿
   ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝４９
   ．６）ｐＨ７．４リン酸塩緩衝液中 λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１＿％＿１＿ｃ＿ｍ＝
   ５１．８）０．１Ｎの水酸化ナトリウム中λ＿ｍ＿ａ＿
   ｘ２９７ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝７８．８）に
   吸収極大を有する紫外線吸収スペクトルを有し、 ｃ）ヌジヨール中、３７００−３１００、２９６０−２
   ８４０（ヌジヨール）、１６４５、１５９０、１５１０
   、１４６０（ヌジョー ル）、１３７５（ヌジヨール）、１３００、１２３０、
   １１７５、１１４５、１０６０、１０２５、９７０、８
   ９０、８４０、８１５、７２０（ヌジヨール）に観察し
   うる吸収極大を有する赤外線吸収スペクトルを有し、 ｄ）不活性気体中約１４０℃であらかじめ乾燥して（％
   ΔＷ＝１０．１）、おおよそのパーセント組成（平均）
   とし、炭素 ５６．６０％；水素５．０５％；窒素 ６．６３％；塩素３．８５％；酸素（差） ２７．８７％を与える元素分析値を有し、 ｅ）５μ　Ｚｏｒｂａｘ＾［＾Ｒ＾］ＯＤＳカラムを用
   い、溶液Ａ中溶液Ｂを、４０分のうちに０％から５０％
   までの直線状グラジエント（溶液Ａ： ０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍＭの
   ＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（９／１）、溶液
   Ｂ：０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍ
   ＭのＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（３／７））
   とし、２ｍｌ／分の流速で溶出する逆相ＨＰＬＣで分析
   して保持時間（ｔ＿Ｒ）が２６．４分（内部標準：３，
   ５−ジヒドロキシトルエンｔ＿Ｒ８．８４分）であり、 ｆ）塩を形成しうる酸性官能基と、 ｇ）塩を形成しうる塩基性官能基と、 ｈ）ＦＡＢ質量スペクトルで測定して約１９８１の分子
   量を有するテイコマイシンＡ＿２ファクター５を分け、
   そして、望むならば、既知の方法により得られたテイコ
   マイシンＡ＿２ファクター５を相当する薬剤として許容
   される塩に変えることからなるテイコマイシンＡ＿２フ
   ァクター５の製造方法。 （４）シラン化シリカゲルカラムおよび、展開に、希水
   性ギ酸アンモニウム中アセトニトリルによるグラジエン
   ト溶出を用いるカラムクロマトグラフィーで分離を行な
   う、特許請求の範囲（３）項記載の方法。 （５）０．２％ギ酸アンモニウム溶液中１０から２０％
   までのアセトニトリルの直線状グラジエントでカラムを
   展開する特許請求の範囲（４）項記載の方法。 （６）カラムより２つのファクターの混合物を採取した
   時に、オクタデシルシランカラムおよびアセトニトリル
   ：０．２％水性ギ酸アンモニウムの２４：７６の混合物
   展開剤を用いる逆相クロマトグラフィーにより単一のフ
   ァクターに分けることを特徴とする、特許請求の範囲（
   ５）項記載の方法。 （７）アガロースのジエチルアミノエチル誘導体を静止
   相に、そして、緩衝溶液、または、緩衝溶液と非水性水
   混和性の溶媒との混合物を溶出液に用いるカラムクロマ
   トグラフィーで分離を行なう、特許請求の範囲（３）項
   記載の方法。 （８）化学的物理的性質として、無定型の白色粉末であ
   り、加熱すると２１０℃で暗化を始め、２５０℃で完全
   に分解し、 ａ）ｐＨ＞７．０またはｐＨ＜２．０の水、ジメチルホ
   ルムアミド、ジメチルスルホキサイドまたはプロピレン
   グリコールに自由に溶解し、メチルセロソルブおよびグ
   リセロールに僅溶で、メタノールおよびエタノールに難
   溶で、クロロホルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アセト
   ニトリル、エチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、四
   塩化炭素にほとんど不溶であり、 ｂ）０．１Ｎ塩酸中λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１
   ＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝４９．６）ｐＨ７．４リン酸塩緩衝
   液中 λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝
   ５１．８）０．１Ｎ水酸化ナトリウム中λ＿！ｍ＿ａ＿
   ｘ２９７ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝７８．８）に
   吸収極大を有する紫外線吸収スペクトルを有し、 ｃ）ヌジョール中、３７００−３１００、２９６０−２
   ８４０（ヌジョール）、１６４５、１５９０、１５１０
   、１４６０（ヌジヨー ル）、１３７５（ヌジヨール）、１３００、１２３０、
   １１７５、１１４５、１０６０、１０２５、９７０、８
   ９０、８４０、８１５、７２０（ヌジヨール）に観察し
   うる吸収極大を有する赤外線吸収スペクトルを有し、 ｄ）不活性気体中約１４０℃であらかじめ乾燥して（％
   ΔＷ＝１０．１）、おおよそのパーセント組成（平均）
   とし、炭素５６．６０％；水素５．０５％；窒素６．６
   ３％；塩素 ３．８５％；酸素（差）２７．８７％を与える元素分析
   値を有し、 ｅ）５μ　Ｚｏｒｂａｘ＾［＾Ｒ＾］ＯＤＳカラムを用
   い、溶液Ａ中溶液Ｂを、４０分のうちに０％から５０％
   までの直線状グラジエント（溶液Ａ： ０、１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍＭの
   ＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（９／１）、溶液
   Ｂ：０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍ
   ＭのＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（３／７））
   とし、２ｍｌ／分の流速で溶出する逆相ＨＰＬＣで分析
   して保持時間（ｔ＿Ｒ）が２６．４分（内部標準：３，
   ５−ジヒドロキシトルエンｔ＿Ｒ８．８４分）であり、 ｆ）塩を形成しうる酸性官能基と、 ｇ）塩を形成しうる塩基性官能基と、 ｈ）ＦＡＢ質量スペクトルで測定して約１８９１の分子
   量を有するテイコマイシンＡ＿２ファクター５または医
   薬として許容されうるその塩を有効成分として含有する
   抗細菌薬剤組成物。