JPH02288888A - テイコマイシンａ↓２純粋単―ファクタ―４ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、テイニ１マイシンＡ２ファクター２の実質的
に純粋な形状の抗生物質およびそれを製造する方法に関
する。

ｉイコマイシンＡ２は、同化しうる炭素原、窒素原およ
び無機塩を含有する培地中に菌株へｃｔｉｎｏｐｌａｎ
ｅｓ　　Ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ　　ｎｏｕ、
　　ｓｐ、　　ＡＴＣＣ３１１２１を培養して得られる
いくつかの異なる抗生物質のうちのひとつである。ベル
ギー特許Ｎ。

８３９．２５９をみよ。上記引用の特許記載の方法によ
ると、ティコマイシンＡ、Ａ２およびＡ３を含有する抗
生物質の混合物を、発酵ブロスより、水に混和しない適
当な有機溶媒で抽出し、抽出溶媒より沈殿させる一般的
方法で採取する。

■ ついでティコマイシンへ２を、５ｅｐｈａｃｌｅｘ　　
上のカラムクロマトグラフィーを用いて得られた抗生物
質混合物より分ける。スルポン化ポリスチレン樹脂を通
して精製したあとのティコマイシンＡ２は１組のペーパ
ーおよび薄層クロマトグラフィーシステムでのＲ７値を
含めた、広く１連の種々の化学的物理的パラメーターで
特徴づける。クロマトグラフィーで、化合物は真に単一
・生成物として振舞った。

予期されなかったこととして、今回、ティコマイシンへ
２は、実際には、いくつかの−緒に生成する非常に類似
した抗生物質の混合物を包含することが分った。それら
の主なファクターは、テイコマイシンＡ２ファクター１
、ティコマイシンＡ　ファクター２、テイコマイシンＡ
２ファクタ−３、テイコマイシンＡ２ファクター４およ
びテイコマイシンＡ２ファクター５と命名された。さら
に、これらの純粋な単一なファクターは、それらが、感
受性の微生物に対し高度の抗生物質活性を有する点で、
テイコマイシンＡ２複合物から区別されることが分った
。

本発明の抗生物質を製造するには、上記引用のベルギー
特許記載のティコマイシンＡ２より出発し、高効率クロ
マトグラフ法により抗生物質複合物を単一のノ１クター
に分は主要なものを採取する。

本明細書中に記載の゛テイコマイシンＡ２“テイコマイ
シンＡ２複合物″または“抗生物質複合物″の用語は、
たとえば、本明細書中に引用するベルギー特許８３９．
２５９の記載により得られ、そこでティコマイシンＡ２
と命名されている、上記の同時に生産される５種の抗生
物質ファクターを含ｔｉｔ’する混合物を意味する。こ
の複合物を、主な、純粋な単一ノ１クターに分けること
は、逆相分配りＯマドグラフィーまたはイオン−交換ク
ロマトグラフィーで行ないうる。前者では、カラムの充
填に不活化シリカゲルを用い、展開にはアセトニトリル
／ギ酸アンモニウム水溶液のグラジェント溶出を用いる
のが便宜であり、後者では、静止相に、ゲル型の弱陰イ
オン交換体を用い、溶出システムに、水性緩衝液または
水性緩衝液と非水性溶媒との混合物を用いるのが適当で
ある。特に、希ギ酸アンモニウム水溶液とアセトニトリ
ルとの混合物に溶解したティコマイシンＡ２の溶液をシ
ラン化シリカゲルカラムに通し、同じ溶媒システムでカ
ラムをグラジェント溶出する。アガロースのジエチルア
ミンエチル誘導体を静止相に用い、緩衝溶液または緩衝
溶液と非水混和性の溶媒との混合物を用いて徐々に溶出
して分ける。

分離操作はＨＰＬＣでモニターする。類似のＨＰＬＣプ
ロフィールを有する分画を合併し、望むならば調製用Ｈ
ＰＬＣでさらに精製し脱塩する。

これらの溶液より、有機溶媒を蒸発させ、水をストリッ
プして小容量とし、過剰の、化合物の溶解しない有機溶
媒を加えて、生成物を沈殿させる。

本発明方法をさらによく説明するためにつぎに具体例を
示す。しかし、示した特定の条件で本発明を制限するわ
けでない。テイコマイシンＡ２ファクター１．２．３．
４および５の分離ベルギー特許８３９．２５９に記載の
方法で得られたテイコマイシンＡ２複合物の１０グラム
を０．２％ギ酸アンモニウムーアレトニトリル（９：１
）混合物の１リツトルに溶解し、１規定ＮａＯＨでｌ）
Ｈ４Ｓ ７．５に調整する。この溶液をシラン化シリカゲル６０
　（Ｈｅｒｃｋ　）の５００グラムを含有するカラムに
通す。

カラムは、０．２％ギ酸アンモニウム溶液中１０％から
２０％までのアセトニトリルの直線状グラジェントで溶
出する。全容量は１０リツトルとする。

２Ｏｄ宛の分画を集めＨＰＬＣでチエツクする。

次表に、代表的なＨＰ　Ｌ　Ｃ分離におけるテイコマイ
シンＡ２ファクター１．２．３．４および５における保
持時間（ｔＲ）を示づ。操作条件は次表に示す。

表　　１ ティ」マイシンＡ２ ファクター　　　　　　　保持時間（分）１　　　　　
　　　　２１、２ ２　　　　　　　　　２２、６ ３　　　　　　　　　２３、３ ４　　　　　　　　　２５、８ ５　　　　　　　　　２６、４ ３．５−ジヒドロキシ　　　　８．８４トルエン （内部標準） ［Ｆ］ 力５ム：　５μＺｏｒｂａｘ　　ＯＤＳ　（Ｄｕ　Ｐｏ
ｎｔ　）移動相：４０分のうちに、Ａ中０％Ｂから５０
％Ｂまで直線状グラジェント 八）２５ｍＨＮａｌ−１２Ｐｏ４／アセトニ１−リル（
９：１）０．ＩＮ　　ＮａＯＨでｐＨ６、ｏに緩衝 Ｂ）２５ｍＨＮａＨ２ＰＯ４／アセトニトリル（３ニア
）０．１Ｎ　　ＮａＯトＩＦｐＨ６、ｏに緩衝 流　速：２−７分 検出器：２５４ｎｍでのＵ、Ｖ、フォトメーター同じ１
」Ｐ　Ｌ　Ｏプロフィールの分画を集め、溶媒を減圧で
蒸発させる。残った水溶液を、シラン化シリカゲル（６
０）　　（Ｈｅｒｃｋ　）の１０グラムを含有するカラ
ムに通す。カラムは蒸留水で洗いギ酸アンモニウムを除
き、５０％水性アセトニトリルで溶出する。溶出液は水
を蒸発しやすくするためにブタノールを加えて小容量に
濃縮し、ついで１：１アセトン−エチルエーテル混合物
で沈殿させる。

上記の操作で純テイコマイシンＡ２ファクター１（４１
０ｍｇ＞およびファクター２（７７０ｒｎ９）をうる。

テイコマイシンＡ２ファクター３は、テイコマイシンＡ
２ファクター２と１：１混合物どなっているものを、つ
ぎの操作条件で精製する。半調製用のＨＰ　Ｌ　Ｃを用
いる。

カラム：　Ｗｈａｔｍａｎ　Ｐａｒｔｉｓｉｌ■ＯＤＳ
　　Ｍ９１０１５０移動相：０．２％ギ酸アンモニウム
水溶液／アセトニトリル（７６：　２４）。

流　速：４．！ＩＭ／分 検出器：Ｕ、Ｖ、フォトメーター２５４．　ｎｍ添加量
：２０ｍｇ この場合ＨＰＬＣで各分画をチエツクして精製をモニタ
ーした。

純テイコマイシンＡ２ファクター２を含有づ゛る分画お
よび純テイコマイシンＡ２ファクター３を含有する分画
を合併し、）税塩し前記のように沈殿さ゛けた。（収量
：５１０ｍｇのテイコマイシンＡ２ファクター２および
５２０〜のティコマイシンへ２フアクター３）。

第１のカラムから得られる、ファクター４および５を１
：１の割合に含有する分画（約５００ｒｎ３）、平行し
て実施した第２の分離より同様に得られたファクター４
および５の混合物含有別のプール（約４９０ｍ！ｊ＞を
合併し、テイコマイシンＡ２ファクター３の精製につい
て上記した操作条件を用いる半調製用ＨＰ　Ｌ　Ｃｒ分
（プ、３５０　ｍｇのティーマイシンＡ２ファクター４
おにび３００　ｍｇのテイコマイシンＡ２ファクター５
を得た。ティコマイシンＡ２の純単一ファクターの化学
的−物理的特徴 テイコマイシンＡ２ファクター１は白色無定型粉末で、
加熱すると、約２２０℃で暗化し始め、２２５℃で完全
に分解する。つぎの特徴を有する。

ａ）　　ｐｔｌ＞７．０およびｐＨ＜２の水、ジメチル
ボルムアミド、ジメチルスルホキサイド、およびプｌ］
ピレングリコールに自由に溶解する。

メチルセロソルブおよびグリセロールに僅溶メタノール
およびエタノールに難溶、クロロボルム、ベンゼン、ｎ
−ヘキサン、アセトニトリル、エチルエーテル、アヒト
ン、酢酸エチル、四塩化炭素にほとんど不溶 ｂ）第１図に紫外部吸収スペクトルを示す。つぎの吸収
極大を示す。

１％ ０．１Ｎ塩酸中：λ　　２７８ｎｌｌｌ（Ｅ　１ｃｒｌ
＝ａｘ ４９．５） Ｄｌ１７．４リン酸塩緩衝液中＝ １％ λ　　２７８ｎｍ、（Ｅ　　　＝５０．０）ｍａｘｌｃ
ＩＲ ］　７ Ｃ）第２図にヌジョール中の赤外部吸収スペクトルを示
す。つぎに吸収極大である。３７００−３１００．２９
６０−２８４０　（ヌジョール）、１６４５．１５９０
．１５１０，１４６０　（ヌジョール）、１３７５（ヌ
ジミール）、１３０５．１２３０．１１８０．１１５５
．１０６０．１０２５．９７０．８９０，８４５．８１
５．７２０（ヌジョール）： ｄ）不活性気体巾約１４０℃にあらかじめ乾燥した（％
ΔＷ＝８．５）試料の元素分析値の大体のパーセント組
成（平均１ｉ１りをつぎに示す：炭素５６．７０％；水
素４．９０％：窒素６．６５％；塩素３．８０％；酸素
（差で）２７．９５％。

ｅ）　　５　ｕ　　Ｚｏｒｂａｘｏｏ　０３カラムを用
いる逆相ＨＰＬＧで、４０分で溶液Ａ中Ｏ％から５０％
よでの溶液Ｂの直線状グラジェントで溶出（溶液Δ：２
　！：＋＋＋ｔ４Ｇ）Ｎ　ａｌ−Ｉ　　Ｐ　０４　／ア
セトニトリル（９／１　）Ｏ，ＩＮのＮａ０ＨｒｐＨ６
，Ｑに緩衝、溶液Ｂ：２５ｍＨのＮａＨ２ＰＯ４／アセ
トニトリル（３／７　）、０．ＩＮのＮａＯＨでｐＨ６
，０に緩１１ｉ＋）、流速２１ｄ／分（内部標準：３．
５−ジヒドロキシ−トルエンｔ、ａ、８４分）。

ｆ）数滴のＤｏ添加ＤＭＳＯ−ｄ６中濃度２５＃１０．
！Ｍｌで測定して、２７０　ＭＨｚの１ＨＮ　Ｍ　Ｒス
ペクトル（全スペクトルは第３図に示す）はつぎの群の
シグナルを示す（ＴＭＳを内部標準として；δ＝ｏ、ｏ
ｏｐａ鴇）：０．８−１．５　（ｍ）：１．７−２．３
　（ｍ）：２．７−４．０　（ｍ）：４．Ｏ−４，７（
ｍ）：４．８−５．８　（ｍ）；６．２−８．１　（ｍ
）。

ｇ）酸官能基を有し、塩を形成する。

ｈ）塩を形成する塩基性官能基を有する。

ｉ）高速原子衝撃（ＦＡＢ）をイオン原に用いる質量ス
ペクトル分析で測定して分子量は約１８７５　（ＦＡＢ
質量スペクトルの測定についてはたとえばＨ，Ｂａｒｂ
ｅｒ等、Ｎａｔｕｒｅ、　２９３、Ｎｏ、　５８３０　
。

２７０−７５　（１９８１））。

テイコマイシンＡ２ファクター２は白色無定型粉末で２
１０℃に加熱すると暗化し、２５０℃で完全に分解する
。つぎの特性を有する。

ａ）ｐＨ＞７．０またはｐＨ＜２の水、ジメチルホルム
アミド、ジメチルスルホキサイドおよびプロピレングリ
コールに自由に溶解し；メチルセロソルブおよびグリセ
ロールに僅溶で：メタノールおよびエタノールに難溶で
；クロロホルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アセトニト
リル、エチルニーチル、アセトン、酢酸エチル、四塩化
炭素に不溶である。

ｂ）第４図に紫外部吸収スペクトルを示す。つぎの吸収
極大を与える。

１％ ０．１Ｎの塩酸中：λ　　２７８ｎｍ（Ｅ　１ｃｍ＝ｍ
ａ× リン酸緩衝液ｐＨ７，４中： ０．１Ｎの水酸化ナトリウム中： Ｃ）第５図にヌジョール中の赤外部吸収スペクトルを示
す。つぎの吸収極大を認める。３７００−３１００．２
９６０−２８６０　（ヌジョール）、１６４５．１５９
０．１５１０，１４６０　（ヌジョール）、１３７５（
ヌジョール）、１３００、１２６０．１２３０，１１８
０．１１５０，１０６０．１０２５．９７０．８９０．
８４５．８１５．７２０（ヌジョール）。

ｄ）元素分析値、不活性気体中で試料を約１４０℃に加
熱したあと（％ΔＷ＝９．８＞の大体のパーセント組成
（平均）をつぎに示す：炭素、５６．１５％：水素、５
．１５％；窒素、６．３０％；塩素、３．９０％；酸素
（差）、２８．５０％。

ｅ）　　５　Ｂ　　Ｚｏｒｂａｘ■ＯＤＳカラムを用い
る逆相ＨＰＬＣＴ−１４０分で溶液Ａ中、溶液Ｂ（７）
０％から５０％までの直線状グラジェント（溶液Ａ：２
５ｍＨのＮａＨ２ＰＯａ／アセトニトリル（９／１　）
、Ｏ，ＩＮのＮ　ａ　０１−１でｐＨ６、ｏに緩衝。溶
液Ｂ：２５＋１１）％のＮａＨ２ＰＯ４／アセトニトリ
ル（３／７　）Ｏ’、　ＩＮのＮａＯＨでｐＨ６，０に
緩１ｌｉ）で、２ｄ／分で溶出し、保持時間（ｔＲ）２
２．６分。（内部標準＝３．５−ジヒドロキシトルエン
、ｔＲ８，８４分）。

ｆ）　　Ｄ　　Ｏ数滴添加ＤＭＳＯ−（１６中で記録し
た２７０ＭＨｚの１ＦＩＮＭＲ（第６図に示す）はつぎ
のシグナル群を示す（濃度２５■１０．５ｍ１．）（Ｔ
　Ｍ　Ｓの内部標準をδ−ｏ、　ｏｏｐｐｍ　＞　：０
．７−１．５　（ｍ）；　１．８−２．２　（ｍ）；２
．７−４．５　（ｍ）：４．６−５．７　（ｍ）；６．
２−８．１　（ｍ）。

ｇ）塩を形成する酸官能基を有する。

ｈ）塩を形成する塩基官能基を有する。

）　　ＦＡＢマススペクトルで測定して約１８７７の分
子量。

テイコマイシンＡ２ファクター３は白色無定型の粉末で
、加熱すると２０５℃で分解を始め、２５０’Ｃで完全
に分解する。つぎの特性を有する：ａ）ｐｌ（＞７．０
またはａｌｌ＜２．０の水、ジメチルボルムアミド、ジ
メチルスルホキサイドおよびプロピレングリコールに自
由に溶解し：メチルセロソルブおよびグリセロールに僅
溶で；メタノールおよびエタノールに難溶で；クロロホ
ルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アセトニトリル、エチ
ルエーテル、アセトン、酢酸エチル、四塩化炭素にはと
んと不溶である。

ｂ）紫外部スペクトルを第７図に示すが、極大吸収はつ
ぎのようである。

１％ ０．１Ｎの）−ＩＣｊ！　：λ　　２７８ｎｍ（Ｅ　１
．、、＝１１ａＸ ４９．２） ｐｉ−１７，４のリン酸緩衝液中； １％ λ　　２７８叶（Ｅ　１．、＝５０．８＞ｍａＸ ０．１Ｎの水酸化ナトリ１クム中； １％ λ　　２９７ｎｍ（Ｅ　　　＝７２．７）ｍａＸ　　　
　　　　　１ｃｍ Ｃ）第８図にグリコール中の赤外部スペクトルを示す。

つぎのような吸収極大を認める。３７００３１００．２
９６０−２８５０　（グリコール）；１６４５．１５９
０．１５１０．１４６０（グリコール）、１３７５（グ
リコール）；１３００゜１２３０．１１８０．１１５０
１１１２０，１０６０．１０３０．９７０，８９０．８
４５．８２０．８００，７２０　（グリコール）。

ｄ）元素分析値、不活性気体中であらかじめ約１４０’
Ｃ：に加熱した試料（％ΔＷ＝１２．０）は、つぎの大
体の組成パーセント（平均）を示す：炭素、５６．２６
％；水素、５．２０％；窒素、６．６９％：塩素、３．
９５％：Ｍ素（差）、２７．９０％。

ｅ）　　５　μＺｏｒｂａｘｏＯＤ　Ｓカラムを用い、
溶液Ａ中、溶液Ｂを、４０分のうちに０％から５０％と
する直線状グラジェント（溶液Ａ：２５ｍｔ４のＮａＨ
ＰＯ４／アセトニトリル（９／１　）、０．１ＮのＮａ
ＯＨでｐＨ６，０に緩衝、溶液Ｂ：２５ｍＨのＮａ１−
Ｉ　　ＰＯ４／アセトニトリル（３／７　＞、ｏ、ＩＮ
のＮａＯＨでｐＨ６，０に緩衝）とし、２ｄ／分の流速
での逆相ＨＰＬＣで分析して、保持時間（ｔＲ）は２３
，３分（内部標準；３，５−ジヒドロキシトルエンｔＲ
８，８４分）。

ｆ）数滴のＤ２０を加えたＤＭＳＯ−ｄ６巾（濃度２５
ｍ９１０．５ｒｒｒｆｔ＞で測定した２　７　Ｑ　Ｈｔ
ｌｚ１日ＮＭＲスペクトルを第９図に示す。つぎのシグ
ナルを示す（内部標＊　Ｔ　Ｍ　Ｓ、δ−０，００１）
Ｉ）ｍ　）：Ｑ、７−１．５　（ｍ）：　１．８−２．
０（ｍ）；２．７−４．５　（ｍ）：Ａ、６−５．７（
ｍ＞　　：６．　２−８．０　　（ｍ）　　。

ｇ）塩を形成しつる酸性基を有する。

ｈ）塩を形成しつる塩基性基を有する。

１ＦＡＢ質量スペクトルで測定して、分子１約１８７７
゜ テイコマイシンＡ２ファクター４は白色無定型粉末で、
加熱Ｊると約２１０℃で暗化し始め、２５０℃で完全に
分解し、つぎの特性を示す。

ａ）ＯＨ＞７．０またはａｌｌ＜２．０の水、ジメチル
ホルムアミド、ジメチルスルホキサイドおよびプロピレ
ングリコール中に自由に溶解する；メチルセロソルブお
よびグリセ１コールに僅溶である：メタノールおよびエ
タノールに難溶で、ある、クロロホルム、ベンゼン、ｎ
−ヘキサン、アセトニトリル、エチルエーテル、アゼト
ン、酢酸エチル、四塩化炭素にほとんど不溶である。

ｂ）第１０図に紫外部吸収スペクトルを示す。吸収極大
はつきのようである。

１％ ０．１Ｎ塩酸中：λ　　２７８ｎｍ（Ｅ　１．、＝ａｘ ５２．５＞ ｐＨ７，４リン酸緩衝液中： Ｃ）ヌジョール中の赤外部スペクトルを第１１図に示す
。吸収極大はつぎのようである：３７００３１００．２
９６０−２８４０　（ヌジョール）、１６４５．１５９
０．１５１０．１４６０（ヌジョール）、１３７５（ヌ
ジョール）、１３００゜１２３０．１１７５．１１４０
１１０６０１１０２５．９７０．８９０，８４０．８１
５．７２０（ヌジョール）。

ｄ）元素分析値。不活性気体中で約１４０℃に予備乾燥
した試料（％ΔＷ＝９，８）の大体の組成パーセントを
つぎに示す（平均）：炭素５６．５０％；水素、５．１
０％；窒素、６．５０％；塩素、３．８０％：酸素（差
）２８．１０％。

ｅ）　　５　ｕ　　Ｚｏｒｂａｘ（９Ｑ　ｌ）　３カラ
ムを用い、溶液Ａ中溶液Ｂを、４０分のうちに０％から
５０％とする直線状グラジェント（溶液Δ：２５ｍＨの
ＮａＨ２Ｐｏ４／アセトニｔ−’Ｊ／ｌ、　（９／１　
）、０、ＩＮのＮａＯＨでｐＨ６，０に緩衝、溶液Ｂ：
２５１１１８のＮａＨ２ＰＯ４／アセトニトリル（３／
７　）、０．ＩＮのＮａＯＨでｐＨ６，０に緩１ｉ１）
とし、２−７分の流速での逆相ＨＰＬＣで分析して、保
持時間（１Ｒ）は２５．８分（内部標準：３．５−ジヒ
ドロキシトルエンｔＲｓ、８４分）。

ｆ）塩を形成しつる酸性官能基を有づる。

ｑ）塩を形成しうる塩基性官能基をイ１する。

ｈ）　　ＦＡ、Ｂ質量スペクトルで測定して分子量約１
８９１゜ テイコマイシンＡ２ファクター５は白色無定型粉末で２
１０℃に加熱すると暗化しはじめ、２５０℃で完全に分
解し、つぎの特性を有する。

ａ）ｐＨ＞７．０またはｌ）Ｈ＜２．０の水、ジメチル
ホルムアミド、ジメチルスルホキサイド、およびプロピ
レングリコールに自由に溶解し；メヂルセロソルブおよ
びグリセロールに僅溶で；メタノールおよびエタノール
に難溶で、クロロボルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、ア
セトニトリル、エチルエーテル、アセトン、酢酸エチル
、四塩化炭素にほとんど不溶である。

ｂ）紫外部吸収スペクトルを第１２図に丞すが、吸収極
大はつぎのようである。

＝４９．．６） ｐＨ１７，４のリン酸緩衝液中： ０．１Ｎの水酸化ナトリウム中； Ｃ）第１３図にヌジョール中の赤外部吸収スペクトルを
示す。つぎの吸収極大を認める：３７００３１００．２
９６０−２８４０　（ヌジョール）、１６４５．１５９
０，１５１０．１４６０（ヌジョール）、１３７５（ヌ
ジョール）、１３００．１２３０．１１７５．１１４５
．１０６０，１０２５．９７０，８９０．８４０．８１
５．７２０（ヌジョール）。

ｄ）元素分析値、不活性気体中であらかじめ約１４０℃
に加熱した試料（％ΔＷ＝１０．１＞は、つぎの大体の
組成パーセント（平均）を示す；炭素、５６．６０％；
水素、５．０５％；窒素、６．６３％；塩素、３．８５
％；酸素（差）、２７．８７％。

ｅ）　　５　μＺｏｒｂａｘＯＱ　［）　３カラムを用
い、溶液Ａ中溶液Ｂを４０分のうちに、０％から５０％
とする直線状グラジェント（溶液Ａ：２５＋１１ＨのＮ
ａＨ２ＰＯ４／アセトニド１））Ｌ／　（９／１　）、
０、ＩＮのＮａＯＨでｐＨ６，０に緩衝、溶液Ｂ：２５
ｍＨのＮａｌ−１２Ｐｏ４／アセトニトリル（３／７　
）、０．１ＮのＮａ０ｌ−１でｐＨ６，０に緩衝）とし
、２ｍｅ／分の流速での逆相）−ＩＰＬｃで分析して、
保持時間（ｔＲ）２６．４分（内部標準：３．５−ジヒ
ドロキシトルエンｔＲ８，８４分）。

ｆ）塩を形成しうる酸性基を有する。

ｇ）塩を形成しうる塩基性基を有する。

ｈ）　　ＦＡＢ質量スペクトルで測定して分子量約１８
９１゜ テイコマイシンＡ２ファクター１．２．３．４および５
のそれぞれは塩を形成しうる酸性基を有づ−る。ティコ
マイシンへ２ファクター１．２．３．４および５のアル
カリ金属、アルカリ土金属および薬剤として許容されう
るアンモニウム塩は、本発明のさらに別の目的である。

代表的なアルカリ金属およびアルカリ土金属塩には、ナ
トリウム、カリウム、リチウム、カルシウムおよびマグ
ネシウム塩がある。アンモニウム塩にはアンモニウムお
よび１級、２級または３級（Ｃ１−Ｃ４）アルヤルアン
モニウムおよびヒドロキシ−（Ｃ−０４）アルキルアン
モニウム塩がある。アルカリおよびアルカリ土金属塩は
、金属塩を製造するためのふつうの方法で製造しうる。

だとえば遊離酸形のテイコマイシンＡ２ファクター１．
２．３．４まだは５を、プロピレングリコールのような
適当な溶媒に溶解し、適当な選択した無機ｍ基の化学量
論的量を、得られた溶液に加える。

生成するアルカリまたはアルカリ土金属塩は、非溶媒で
沈殿させ、濾過して採取する。

別様には、これらの塩を凍結乾燥で実質的に無水の形に
調製しうる。その場合、適当に選択したアルカリま１＝
はアルカリ土金属の炭酸塩または水酸化物をｐ１１７か
ら８にするように加えて遊１！ｌ酸形を塩にして得られ
た、望む塩を含有する水溶液より不溶物を濾去し、凍結
乾燥する。

有機アンモニウム塩はテイコマイシンＡ２ファクター１
．２．３．４および５の遊離酸型を適当な溶媒たとえば
プロピレングリコールに含有づる溶液に適当に選択した
アミンを加え溶媒および過剰のアミンを蒸発さすか、ま
たは、できるだ（プ少量の水中で上記の試剤を接触させ
非溶媒を加えて得られた塩を沈殿さすことにより調製し
うる。

前記したように、ティ」マイシンＡ２ファクター１．２
．３．４、および５のそれぞれは、塩となしうる塩基性
官能基を有する。純粋な単一ファクターと、むしろ強い
酸、なるべくは鉱酸とを接触さづ、この方面の技術で知
られる方法で製造した、薬剤として許容されうる酸イ」
加塩は、本発明の別の目的となる。テイコマイシンＡ２
ファクタ一２ナトリウム塩の製造 ティコマイシンへ２ファクター２（１５０ｍｇ、１５蔵
）の水溶液を、０．１ＮのＮ　ａ　ＯＨを滴下して、ａ
ｌ１８．０とする。得られた溶液を濾過し、凍結乾燥シ
ステムの室に移し、凍結させる。完全に凍結したら、室
を０．１トールの真空とし、プレートを０℃に加熱して
氷を昇華させる。操作は生成物がほとんど乾燥するまで
続ける。約１％含水量まで。このように得られたデイ］
マイシンＡ２ファクター２ナトリウム塩を２５ｄのメチ
ルセロソルブ／Ｈ２Ｏ３／１に溶解し、ｏ、　ｉＮ　ｌ
−Ｉ　ＣＩで滴定すると、ｐにニア、０３および４゜７
８を特徴とする２つの滴定可能の官能基の存在を小ず。

上記の方法を行なうが、テイコマイシンＡ２ファクター
１．３．４おＪ：び５より出発して、相当するす１〜リ
ウム塩をうる。得られた塩中のナトリ１クムを定石する
と、モノナトリウム塩である。

グラム陽性細菌に主に活性を示すテイコマイシンＡ２フ
ァクター１．２．３．４および５のインビトロ−抗菌活
性を、ミクロタイターシステム中で２倍希釈法を用いて
、ぶどう球菌おにび連鎖球菌の臨床分離株に対して調べ
た。ＰｅｒｌａＳＳａ■ブロス（ｏｔｒｃｏ　）を前者
に、丁ｏｄｄ−Ｈｃｗｉｔｔブロス（Ｄｉｒｃｏ　＞を
後者に用いた。ブロス１夜培養物を、最終接種体が約１
０３コロニー形成単位／ｄになるように希釈した。、３
７℃で１８−２４時間インキュベーションしたあと、肉
眼に児える発育を示さない最低濃度を最小阻止濃度（Ｍ
ＩＧ）とした。

ファクター１．２．３．４および５の微生物活性の相対
的な比較を、Ｓ、　ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＧ６５３百を
試験菌、テイコマイシンＡ２複合物を標準にして寒天拡
散法で実施した。テイコマイシンＡ２ファクター１、テ
イコマイシンＡ２ファクター２、テイコマイシンＡ２フ
ァクター３、ティコマイシンＡ　ファクター４、テイコ
マイシンＡ２複合物ター５および標準に用いるティコマ
イシン複合物の適当量を２０００Ｕｇ／ｄにジメチルホ
ルムアミドに溶解する。溶液は、１％牛血清を加えた、
ＤＨ７，４，０，０６７Ｍのリン酸緩衝液でさらに希釈
し、２．５，５．１０および２０μ９／ｌ１ｄｌの濃度
とした。

濾紙ディスクを試料溶液で浸し、試験菌の懸濁液を接種
しである寒天プレートの表面上に規則的に間隔をあけて
おいた。プレートは３７℃で１８時間インキエベートし
、阻止帯の直径を測定した。

得られたデーターをコンビ１−ターに入れ、複合物を基
準として、個々のファクターの力価を８１算した。結果
を下に示す。

テイコマイシンＡ２ファクター１ ８４１ＬＪ／＊ テイコマイシンＡ２ファクター２ １０８６Ｕ　／■ テイコマイシンＡ２ファクター３ １１３１Ｕ／１５Ｆ テイコマイシンＡ２ファクター４ １０６６ｔＪ／Ｆｌ ティコマイシンＡ　ファクター５ ９５４ｔＪ　／喀 テイコマイシンＡ２複合物 １０００ｔＪ／Ｉｌｌ！Ｊ ティコマイシンＡ２ファクター２，３．４および５をさ
らにｓ、　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＳ、　ＤＶＯｇ
ｅｎｅｓでマウスにおこした感染症につ（１で調べてみ
た。

ティコマイシンへ、ＩＩ含物と比較して実験し）こ。

結果を次表３に示す。

表３ 表　　４ インビボ−抗菌活性 マウス急性毒性（腹腔） ティコマイシンＡ２ファクター１，２，３．４および５
についてのマウス腹腔急性毒性を法衣４にホす。

上記から、テイコマイシンＡ２ファクター１、テイコマ
イシンＡ２ファクター２、テイコマイシンＡ２ファクタ
ー３、テイコマイシンＡ２ファクター４ａ３よびテイコ
マイシンＡ２ファクター５は、活性成分に感受性の病原
性細菌でおこる感染症の予防および治療に、ヒトおよび
獣医用の薬に用いる抗菌性調製物の活性成分として効果
的に用いうろことが分った。そのような治療で、これら
の化合物はそのままかまたは単一の個々のファクタとし
て、または、それらの活性パターンの類似性から、５つ
のファクターの２つまたはそれ以上の任意の割合の混合
物の形状で用いうる。本発明の化合物は、経口、局所ま
たは注射投与しうる。しかし注射投与がもっとも有利で
ある。投与のルートに応じて、経口、局所または注射投
与しうる。

しかし注射投与がもっとも有利である。投与ルートに応
じて、これらの化合物は種々の投与形態に処方しうる。

経口投与用の調製物はカプセル、錠剤、液状溶液または
懸濁液となしうる。この方面の技術で知られているよう
に、カプセルおよび錠剤ｔよ、活性成分に加えて、従来
から用いられている助剤、乳糖、リン酸カルシウム、ソ
ルビトールおよび類似の希釈剤、ステアリン酸マグネシ
ウム、タルク、ポリエチレングリコールのような滑剤、
ポリビニルピロリドン、ゲラチン、ソルビトール、１〜
ラガカント、アカシア、風味剤のような結合剤および許
容されうるｈＩＩ壊剤、湿展剤を含有しうる。

−船釣に水性または油性の溶液または懸濁液の形の液体
調製物は、懸濁剤のような従来から用いられている添加
物を含有しうる。局所的使用には、本発明の化合物は、
皮ｈ１を鼻およびのどの粘膜または気管の組織を通して
の吸収に適当な形にも調製でき、便宜とあれば、液状ス
プレーまたは吸入剤、ロゼンジまたはのどに塗布する形
状ともなしうる。眼や耳に施すには、調製物は液体また
は半固体となしうる。軟膏、クリーム、ローション、ペ
イントまたは粉末のように疎水性または親水性のベース
に処方して、局所施用しつる。注射用の組成物は、油状
または水性のビヒクル中に懸濁液、溶液またはエマルジ
ョンとすることができ懸濁剤、安定化剤および（または
）分散剤のような処方用薬剤を含有しうる。別様には、
活性成分を粉末にしておいて、使用時に、無菌水のよう
な適当なビヒクルで再構成しろる。投与すべき活性成分
の量は、治療しようとする対象の大きさおよび状態、投
与のルートおよび湿度および感染原といった種々の要因
で変化する。

テイコマイシンＡ２ファクター１，２，３．４８よび５
は、体重Ｋｑについて約０．１から約２０〜の１日量が
一般的に有効で、ふつう、１日に２回に分（プて投与す
る。特に望ましい組成物は、約５０から約２５０ｍｇ／
単位を含有する単位投与形態である。

薬剤組成物を１１製する代表的例をつぎに示す。

注射用の無菌水２＃ｌｉ！中にテイコマイシンＡ２ファ
クター２のナトリウム塩の１００＃１ｇを溶解して注射
用溶液とする。

２５０■のテイコマイシンＡ２ファクター３のナトリウ
ム塩を３ｄの注射用無菌水に溶解して注射用溶液とする
。

２００■のテイコマイシンＡ２ファクター２６００Ｒｇ
のポリエチレングリコール４０００ｕ、ｓ、ｐ。

１．２ｇのポリエチレングリコール４００ｕ、ｓ、ｐ を用いて局所用軟膏とする。

医薬としての用途の他に、本発明の化合物は動物生長促
進剤に用いられる。

その目的では、本発明の化合物のひとつまたはひとつよ
り多くを適当な飼料に加えて経［１投与する。用いる正
確な濃度は、正常量の餌が消費された時に、生長促進に
有効な量の活性剤が摂取されるようにする。

本発明の活性化合物を動物飼料に加えるには、有効量の
活性化合物を含有する適当な飼料プレミックスを調製し
、そのプレミックを完成された飼料に添加するのが有利
である。

別様には、活性成分を中程度の濃さに含有するような飼
料添加物を、飼料に混入しつる。

そのような飼料プレミックスおよび完成飼料を調製し投
与する方法は、参照や１行物（たとえば、゛へｐｐｌｉ
ｅｄ　　Ａｎｉｍａｌ　　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ”　、　
Ｗ、Ｈ，Ｆｒｅｅｄｍａｎａｎｄ　Ｃｏ、、　Ｓ、　Ｆ
ｒａｎｃｉｓｃｏ、　ＵＳＡ、　　１９６９または”　
Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ　Ｆｅｅｄｓ　ａｎｄ　Ｆｅｅｄｉ
ｎｇ”、０ａｎｄＢＢｏｏｋｓ、　Ｃｏｒｖａｌｌｉｓ
、　Ｏｒｅｇｏｎ、　ＵＳＡ　、　１９７７　）に記載
されているので、これらを本明細寵の参照文献として引
用する。

【図面の簡単な説明】

第１図はティ」マイシンへ２フアクター１の紫外線吸収
スペクトルを承り。 第２図はテイコマイシンＡ２ファクター１の赤外線スペ
クトルを示す。 第３図はテイコマイシンＡ２ファクター１の’ＨＮＭＲ
スペクトルを示ず。 第４図はティコマイシンへ２フアクター２の紫外線吸収
スペクトルを示す。 第５図はテイコマイシンＡ２ファクター２の赤外線スペ
クトルを示す。 第６図はテイコマイシンＡ２ファクター２の’ＨＮＭＲ
スペクトルを示す。 第７図はテイコマイシンＡ２ファクター３の紫外線吸収
スペクトルを示す。 第８図はテイコマイシンＡ２ファクター３の赤外線吸収
スペクトルを示ず。 第９図はテイコマイシンＡ２ファクター３の１８　Ｎ　
Ｍ　Ｒスペクトルを示す。 第１０図はティ」マイシンＡ２ノアフタ−４の紫外線吸
収スペクトルを示す。 第１１図はテイコマイシンＡ２ファクター４の赤外線吸
収スペクトルを示す。 第１２図はテイコマイシンＡ２ファクター５の紫外線吸
収スペクトルを示す。 第１３図はテイコマイシンＡ２ファクター５の赤外線吸
収スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）化学的物理的性質として、無定型の白色粉末であ
   り、加熱すると約２１０℃で暗化を始め２５０℃で完全
   に分解し、 ａ）ｐＨ＞７．０またはｐＨ＜２．０の水、ジメチルホ
   ルムアミド、ジメチルスルホキサイド、およびプロピレ
   ングリコールに自由に溶解し、メチルセロソルブおよび
   グリセロールに僅溶でメタノールおよびエタノールに難
   溶で、クロロホルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アセト
   ニトリル、エチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、四
   塩化炭素に不溶であり、 ｂ）０．１Ｎ塩酸中λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１
   ＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝５２．５）ｐＨ７．４リン酸塩緩衝
   液中 λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝
   ５２．５）０．１水酸化ナトリウム中λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２
   ９７ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝７５．５）の吸収
   極大を有する紫外線吸収スペクトルを有し、 ｃ）ヌジヨール中、３７００−３１００、２９６０−２
   ８４０（ヌジョール）、１６４５、１５９０、１５１０
   、１４６０（ヌジヨー ル）、１３７５（ヌジョール）、１３００、１２３０、
   １１７５、１１４０、１０６０、１０２５、９７０、８
   ９０、８４０、８１５、７２０（ヌジョール）に吸収極
   大を有する赤外線スペクトルを有し、 ｄ）不活性気体中約１４０℃にあらかじめ試料を乾燥し
   て（％ΔＷ＝９．８）、おおよそのパーセント組成（平
   均）とし、炭素 ５６．５０％；水素５．１０％；窒素 ６．５０％；塩素３．８０％：酸素（差） ２８．１０％を与える元素分析値を有し、 ｅ）５μＺｏｒｂａｘ＾（＾Ｒ＾）ＯＤＳカラムを用い
   、溶液Ａ中溶液Ｂを、４０分のうちに０％から５０％ま
   での直線状グラジエント（溶液Ａ： ０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍＭの
   ＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（９／１）、溶液
   Ｂ：０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍ
   ＭのＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（３／７））
   とし、２ｍｌ／分の流速で溶出する逆相ＨＰＬＣで分析
   して保持時間（ｔ＿Ｒ）が２５．８分（内部標準：３，
   ５−ジヒドロキシトルエンｔ＿Ｒ８．８４分）であり、 ｆ）塩を形成しうる酸性官能基と、 ｇ）塩を形成しうる塩基性官能基と、 ｈ）ＦＡＢ質量スペクトルで測定して約１９８１の分子
   量を有するテイコマイシンＡ＿２ファクター４及び薬剤
   として許容されうるその塩。 （２）薬剤として許容されうる塩がアルカリ金属塩、ア
   ルカリ土金属塩またはアンモニウム塩である特許請求の
   範囲第（１）項記載のテイコマイシンＡ＿２ファクター
   ４。 （３）逆相分配またはイオン交換クロマトグラフィーに
   よりテイコマイシンＡ＿２複合物より、化学的物理的性
   質として、無定型の白色粉末であり、加熱すると２１０
   ℃で暗化を始め２５０℃で完全に分解し、 ａ）ｐＨ＞７．０またはｐＨ＜２．０の水、ジメチルホ
   ルムアミド、ジメチルスルホキサイド、およびプロピレ
   ングリコールに自由に溶解し、メチルセロソルブおよび
   グリセロールに僅溶でメタノールおよびエタノールに難
   溶で、セクロロホルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アセ
   トニトリル、エチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、
   四塩化炭素に不溶であり、 ｂ）０．１Ｎ塩酸中λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１
   ＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝５２．５）ｐＨ７．４リン酸塩緩衝
   液中 λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝
   ５２．５）０．１Ｎ水酸化ナトリウム中λ＿ｍ＿ａ＿ｘ
   ２９７ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝７５．５）の吸
   収極大を有する紫外線吸収スペクトルを有し、 ｃ）ヌジョール中、３７００−３１００、２９６０−２
   ８４０（ヌジョール）、１６４５、１５９０、１５１０
   、１４６０（ヌジョー ル）、１３７５（ヌジョール）、１３００、１２３０、
   １１７５、１１４０、１０６０、１０２５、９７０、８
   ９０、８４０、８１５、７２０（ヌジヨール）に吸収極
   大を有する赤外線スペクトルを有し、 ｄ）不活性気体中約１４０℃にあらかじめ試料を乾燥し
   て（％ΔＷ＝９．８）、おおよそのパーセント組成（平
   均）とし、炭素 ５６．５０％：水素５．１０％；窒素 ６．５０％；塩素３．８０％；酸素（差） ２８．１０％を与える元素分析値を有し、 ｅ）５μＺｏｒｂａｘ＾（＾Ｒ＾）ＯＤＳカラムを用い
   、溶液Ａ中溶液Ｂを、４０分のうちに０％から５０％ま
   での直線状グラジエント（溶液Ａ： ０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍＭの
   ＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（９／１）、溶液
   Ｂ：０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６．０に緩衝した２５ｍ
   ＭのＮａＨ＿２ＰＯ＿４／アセトニトリル（３／７））
   とし、２ｍｌ／分の流速で溶出する逆相ＨＰＬＣで分析
   して、保持時間（ｔ＿Ｒ）が２５．８分（内部標準：３
   ，５−ジヒドロキシトルエンｔ＿Ｒ８．８４分）であり
   、 ｆ）塩を形成しうる酸性官能基と、 ｇ）塩を形成しうる塩基性官能基と、 ｈ）ＦＡＢ質量スペクトルで測定して約１９８１の分子
   量を有するテイコマイシンＡ＿２ファクター４を分け、
   そして、望むならば、既知の方法により得られたテイコ
   マイシンＡ＿２ファクター４を相当する薬剤として許容
   される塩に変えることからなるテイコマイシンＡ＿２フ
   ァクター４の製造方法。 （４）シラン化シリカゲルカラムおよび、展開に、希水
   性ギ酸アンモニウム中アセトニトリルによるグラジエン
   ト溶出を用いるカラムクロマトグラフィーで分離を行な
   う、特許請求の範囲（３）項記載の方法。 （５）０．２％ギ酸アンモニウム溶液中１０から２０％
   までのアセトニトリルの直線状グラジエントでカラムを
   展開する特許請求の範囲（４）項記載の方法。 （６）カラムより２つのファクターの混合物を採取した
   時に、オクタデシルシランカラムおよびアセトニトリル
   ：０．２％水性ギ酸アンモニウムの２４：７６の混合物
   展開剤を用いる逆相クロマトグラフィーにより単一にフ
   ァクターに分けることを特徴とする、特許請求の範囲（
   ５）項記載の方法。 （７）アガロースのジエチルアミノエチル誘導体を静止
   相に、そして、緩衝溶液、または緩衝溶液と非水性水混
   和性の溶媒との混合物を溶出液に用いるカラムクロマト
   グラフィーで分離を行なう、特許請求の範囲（３）項記
   載の方法。 （８）化学的物理的性質として、無定型の白色粉末であ
   り、加熱すると２１０℃で暗化を始め２５０℃で完全に
   分解し、 ａ）ｐＨ＞７．０またはｐＨ＜２．０の水、ジメチルホ
   ルムアミド、ジメチルスルホキサイド、およびプロピレ
   ングリコールに自由に溶解し、メチルセロソルブおよび
   グリセロールに僅溶でメタノールおよびエタノールに難
   溶で、クロロホルム、ベンゼン、ｎ−ヘキサン、アセト
   ニトリル、エチルエーテル、アセトン、酢酸エチル、四
   塩化炭素に不溶であり、 ｂ）０．１Ｎ塩酸中λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１
   ＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝５２．５）ｐＨ７．４リン酸塩緩衝
   液中 λ＿ｍ＿ａ＿ｘ２７８ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝
   ５２．５）０．１Ｎ水酸化ナトリウム中λ＿ｍ＿ａ＿ｘ
   ２９７ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝７５．５）に吸
   収極大を有する紫外線吸収スペクトルを有し、 ｃ）ヌジョール、中３７００−３１００、２９６０−２
   ８４０（ヌジヨール）、１６４５、１５９０、１５１０
   、１４６０（ヌジヨー ル）、１３７５（ヌジヨール）、１３００、１２３０、
   １１７５、１１４０、１０６０、１０２５、９７０、８
   ９０、８４０、８１５、７２０（ヌジヨール）に吸収極
   大を有する赤外線スペクトルを有し、 ｄ）不活性気体中約１４０℃であらかじめ試料を乾燥し
   て（％ΔＷ＝９．８）、おおよそのパーセント組成（平
   均）として、炭素 ５６．５０％：水素５．１５％；窒素 ６．５０％：塩素３．８０％；酸素（差） ２８．１０％を与える元素分析値を有し、 ｅ）５μＺｏｒｂａｘ＾（＾Ｒ＾）ＯＤＳカラムを用い
   、溶液Ａ中溶液Ｂを４０分のうちに０％から５０％まで
   の直線状グラジエント（溶液Ａ：０．１ＮのＮａＯＨで
   ｐＨ６．０に緩衝した２５ｍＭのＮａＨ＿２ＰＯ＿４／
   アセトニトリル（９／１）、溶液Ｂ：０．１ＮのＮａＯ
   ＨでＰＨ６．０に緩衝した２５ｍＭのＮａＨ＿２ＰＯ＿
   ４／アセトニトリル（３／７））とし、２ｍｌ／分の流
   速で溶出する逆相ＨＰＬＣで分析して保持時間 （ｔ＿Ｒ）が２５．８分（内部標準：３．５−ジヒドロ
   キシトルエンｔ＿Ｒ８．８４分）であり、 ｆ）塩を形成しうる酸性官能基と、 ｇ）塩を形成しうる塩基性官能基と、 ｈ）ＦＡＢ質量スペクトルで測定して約１９８１の分子
   間を有するテイコマイシンＡ＿２ファクター４または薬
   剤として許容されうるその塩を活性成分として含有する
   抗細菌薬剤組成物。