JPS631315B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ペニシリンの顕著な抗生物質活性の発見はこの
分野における大きな興味を刺激し、他のペニシリ
ン、セフアロスポリン、ストレプトマイシン、バ
シトラシン、テトラサイクリン、クロラムフエニ
コール、エリスロマイシンなどのような多くの他
の価値ある抗生物質の発見をもたらした。一般
に、これらの抗生物質の抗菌活性はある臨床的に
重要な病原細菌を含まない。例えば、あるもの
は、主として、グラム−陽性型の細菌に対しての
み活性である。細菌感染の治療における既存抗生
物質の広汎な使用の過程において得られた抵抗性
は、重大なる抵抗性の問題を引起している。 従つて、既知抗生物質の欠点は、広範囲な病原
菌並びに特定の微生物の耐性菌株に対して活性で
ある他の抗生物質を発見する研究を刺激してい
る。 この研究は、本発明の化合物を含むチエナマイ
シン族の抗生物質を発見する原因となつた。チエ
ナマイシン族の抗生物質の他のものは、1974年11
月25日出願されたジエーンS.カーン、フレデリツ
クM.カーン、エドワードO.スタプレー、ロバー
トT.ゴエゲルマン及びセバスチアンヘルナンデ
スの米国特許出願U.S.S.N第526992号の分割出願
である1975年11月18日付出願のジエーンS.カー
ン、フレデリツクM.カーン、エドワードO.スタ
プレー、ロバートT.ゴエゲルマン及びセバスチ
アンヘルナンデスの米国特許出願第632938号（米
国特許第4081548号）；1974年12月19日に出願され
たロバートT.ゴエゲルマン及びフレデリツクM.
カーンの米国特許出願U.S.S.N第534382号（現在
は放棄した）の部分的継続出願である1975年９月
18日付出願のロバートT.ゴエゲルマン及びフレ
デリツクM.カーンの米国特許出願U.S.S.N第
613822号（米国特許第4000161号）；1975年11月21
日に出願されたパトリツクJ.カシデイー、ロバー
トT.ゴエゲルマン、エドワードO.スタプレー及
びセバスチアンヘルナンデスの米国特許出願U.S.
S.N第634300号（米国特許第4000161号）；1975年
11月21日に出願されたジエーンS.カーン、フレデ
リツクM.カーン、ロバートT.ゴエゲルマン、エ
ドワードO.スタプレー及びセバスチアンヘルナ
ンデスの米国特許出願U.S.S.N第634301号（米国
特許第4229534号）及び1975年11月24日に出願さ
れたジエーンS.カーン及びフレデリツクM.カー
ンの米国特許出願U.S.S.N第634560号（特開昭52
−65295号に対応）説明されている。 本発明は、チエナマイシン族の抗菌剤の新規な
化合物に関するものである。更に詳しくは、本発
明は、本明細書中において890A₂及び890A₅と称
する新規な抗生物質に関するものである。本発明
は、稀釈形態、粗製濃縮物及び純粋な形態の抗生
物質を包含する。 本発明の目的は、種々なグラム−陰性及びグラ
ム−陽性微生物の生長を阻止するのに高度に有効
である新規且つ有用な抗生物質を提供せんとする
ものである。他の目的は、ストレプトミセスの菌
種による栄養培地の醗酵によつてこれらの新規な
抗生物質を製造する方法を提供せんとするもので
ある。他の目的は、以下に示す本発明の詳細な説
明から明らかとなるであろう。 本発明の新規な抗生物質は、調整された条件下
においてストレプトミセス フラボグリセウス
（Streptomyces flavogriseus）の新規な菌株を生
長せしめることによつて生産される。 広範囲な分類学的研究を基にして、本発明に使
用される微生物の菌株は、菌種ストレプトミセス
フラボグリセウスに属することが同定されそし
てニユージヤーシ州ローウエイーのメルク社の培
養菌収集においてMA−4434及びMA−4600（そ
れぞれ微生物受託番号微工研菌寄第3792号及び第
3793号）と命名されている。これらの菌株は、イ
リノイス州ピオリアにある米国農務省、農業研究
サービス、北部利用研究開発部、北部研究所の培
養菌収集において入手に関して制限なしに永久寄
託されそしてそれぞれ受理番号NRRL8139及び
8140として公に入手できる。 ストレプトミセス フラボグリセウス
NRRL8139及びNRRL8140は、抗生物質890A₂及
び890A₅を生産しそしてこれらの化合物は醗酵液
から実質的に純粋な形態で単離される。 ストレプトミセス フラボグリセウス
NRRL8139の形態学的及び培養学的特性は次の
表に示す通りである。 形態学的特性−胞子柄は分枝した直線状乃至屈曲
した胞子の鎖であつて、ふさを形成する。鎖は
長さにおいて10以上の胞子からなつている。胞
子は球状乃至玉子状0.9μ×1.2μ（970X）である。 培養学的特性 オートミール寒天 栄養生長−裏面−黄色がかつた黄褐色、羊皮紙様
の生長 気菌糸−中程度の灰色で縁とられた明るい灰色 可溶性色素−なし ツアペツクドツクス寒天（シユクローズ・ナイ
トレート寒天） 栄養生長−裏面−暗褐色で縁とられた褐色 気菌糸−中程度の灰色、ビロード様 可溶性色素−培地の僅かな褐色化 卵アルブミン寒天 栄養生長−裏面−褐色で縁とられた黄色がかつた
黄褐色 気菌糸−黄色がかつた灰色と混つた中程度の灰色
（2dc）及び灰色がかつた黄色（2db） 可溶性色素−明るい黄色がかつた黄褐色 グリセロールアスパラギン寒天 栄養生長−裏面−黄色がかつた黄褐色、平坦、広
がり 気菌糸−ビロード様、強い黄色がかつた色相を有
する明るい灰色乃至灰色（2dc） 可溶性色素−なし 無機塩−澱粉寒天 栄養生長−裏面−褐色 気菌糸−中程度の灰色、ビロード様 可溶性色素−明るい黄色がかつた黄褐色 酵母エキス−デキストローズ＋塩寒天 栄養生長−裏面−非常な暗褐色で縁とられた褐色 気菌糸−明るい灰色と混つた暗灰色、ビロード様 可溶性色素−なし 酵母エキス−麦芽エキス寒天 栄養生長−裏面−暗褐色 気菌糸−暗灰色、ビロード様 可溶性色素−なし 脱脂乳寒天 栄養生長−黄褐色 気菌糸−まばら、灰色がかつている 可溶性色素−培地の僅かな褐色化 カゼインの加水分解−良好 リトマス ミルク 栄養生長−中程度の生長リング、暗黄褐色 気菌糸−なし 色−赤紫色 凝固及び（または）ペプトン化−完全なペプトン
化、アルカリ性となる PH8.2 脱脂乳 栄養生長−中程度の生長リング、黄褐色 気菌糸−なし 可溶性色素−黄褐色 凝固及び（または）ペプトン化−完全なペプトン
化、アルカリ性となる PH8.0 チロシン寒天 栄養生長−裏面−暗褐色 気菌糸−暗灰色 可溶性色素−培地の僅かな褐色化 チロシンの分解−なし ペプトン−鉄−酵母エキス寒天 栄養生長−黄褐色 気菌糸−まばら、灰色がかつている 可溶性色素−なし メラニン−なし H₂S生成−なし 栄養寒天 栄養生長−裏面−暗灰色〜褐色で縁とられた明る
い灰色がかつた褐色 気菌糸−暗灰色で縁とられた明るい灰色 可溶性色素−なし 栄養澱粉寒天 栄養生長−灰色で縁とられた黄褐色 気菌糸−暗灰色で縁とられた中程度の灰色 可溶性色素−なし 澱粉の加水分解−良好 栄養ゼラチン寒天 栄養生長−暗灰色で縁とられた無色 気菌糸−灰色がかつた白色 可溶性色素−なし ゼラチンの液化−良好 馬鈴薯プラグ 栄養生長−良好な生長、しわがある 気菌糸−灰色乃至緑色がかつた灰色 可溶性色素−培地の僅かな褐色化 ロエフラー血清 栄養生長−クリーム色に着色 気菌糸−なし 可溶性色素−なし 液化−なし ゼラチン スタブ 栄養生長−クリーム色に着色 気菌糸−なし 可溶性色素−なし ゼラチンの液化−良好 前述した判定は、すべて、別に説明しない限り
は、28℃で３週間培養した後にとられたものであ
る。これらの検討に使用した培地のPHは大体中性
即ちPH6.8〜7.2である。説明に使用した色の表現
は、イリノイス州シカゴのコンテナー コポレー
シヨン オブ アメリカのカラー ハーモニー
マニユアル（Color Harmony Manual）第４版
（1958年）の定義による。 ストレプトミセス フラボグリセウス
NRRL8139は、また、種々な炭水化物を利用す
る即ち同化する能力について試験した。この目的
のために、微生物を炭水化物１％を含有する基合
成培地（プリドハム及びゴツトリーブ）上で28℃
で３週間生長せしめた。研究に使用した培地のPH
は、大体中性（6.8〜7.2）である。第表は、ス
トレプトミセス フラボグリセウスNRRL8139
によるこれらの炭水化物源の利用を示す。＋は良
好な生長を示し、±は貧弱な生長を示しそして−
は生長しないことを示す。 第 表 グルコース ＋ マルトース ＋ アラビノース ＋ マンニトール ＋ セルロース − マンノース ＋ フラクトース ＋ ラフイノース − イノシトール − ラムノース ＋ ラクトース ＋ シユクロース ± キシロース ＋ 微生物の温度変化による生長量及び酸素要求は
次の通りである。 温度範囲（酵母エキス−デキストロース＋塩寒
天）： 28℃−良好 37℃−良好な栄養生長、気菌糸なし 50℃−生長しない 酵素要求（酵母エキス−デキストロース＋塩寒天
中の穿刺培養） 好気性 ストレプトミセス フラボグリセウス
NRRL8140の形態学的特性及び培養学的特性は
次の表に示す通りである。 形態学的特性−胞子柄は、分枝した直線状乃至屈
曲した胞子の鎖であつてふさを形成する。鎖は
長さにおいて10以上の胞子からなる。胞子は球
状乃至玉子状0.9μ×1.2μ（970X）である。 培養学的特性 オートミール寒天 栄養生長−裏面−暗褐色で縁とられた黄色がかつ
た黄褐色 気菌糸−中程度の灰色で縁とられた明るい灰色 可溶性色素−なし ツアペツク ドツクス寒天（シユクロース ナ
イトレート寒天） 栄養生長−裏面−暗褐色で縁とられた褐色 気菌糸−中程度の灰色、ビロード様 可溶性色素−なし 卵アルブミン寒天 栄養生長−裏面−強力な黄色黄褐色の部分を有す
る灰色がかつた黄褐色 気菌糸−中程度の灰色、灰色がかつた白色及び黄
色がかつた灰色（2dc）の部分 可溶性色素−非常に明るい黄褐色 グリセロール アスパラギン寒天 栄養生長−黄色がかつた黄褐色 気菌糸−まばら、灰色がかつている 可溶性色素−なし 無機塩−澱粉寒天 栄養生長−裏面−灰色がかつたクリーム色 気菌糸−中程度の灰色、ビロード様 可溶性色素−なし 酵母エキス−デキストロース＋塩寒天 栄養生長−裏面−暗褐色 気菌糸−明るい灰色と混つた暗灰色 ビロード様 可溶性色素−なし 酵母エキス−麦芽エキス寒天 栄養生長−裏面−暗褐色 気菌糸−暗灰色、ビロード様 可溶性色素−なし ペプトン−鉄−酵母エキス寒天 栄養生長−黄褐色 気菌糸−なし 可溶性色素−なし メラニン−なし H₂S生成−なし 栄養寒天 栄養生長−明るい黄褐色 気菌糸−なし 可溶性色素−なし 栄養澱粉寒天 栄養生長−クリーム色に着色 気菌糸−なし 可溶性色素−なし 澱粉の加水分解−良好 栄養ゼラチン寒天 栄養生長−クリーム色に着色 気菌糸−なし 可溶性色素−なし ゼラチンの液化−良好 ゼラチン スタブ 栄養生長−黄褐色 気菌糸−なし 可溶性色素−なし ゼラチンの液化−完全 脱脂乳寒天 栄養生長−黄褐色 気菌糸−なし 可溶性色素−なし カゼインの加水分解−良好 リトマス ミルク 栄養生長−黄褐色生長リング 気菌糸−なし 色−褐色がかつた赤紫色 凝固及び（または）ペプトン化−完全なペプトン
化、アルカリ性となる PH8.0 脱脂乳 栄養生長−黄褐色、中程度の生長リング 気菌糸−なし 可溶性色素−明るい褐色 凝固及び（または）ペプトン化−完全なペプトン
化、アルカリ性となる PH8.5 馬鈴薯プラグ 栄養生長−良好、黄褐色に着色 気菌糸−非常にまばら、白色がかつている 可溶性色素−なし ロエフラー血清 栄養生長−クリーム色に着色 気菌糸−なし 可溶性色素−なし 液化−なし チロシン寒天 栄養生長−黄褐色 気菌糸−なし 可溶性色素−培地の僅かな褐色化 チロシンの分解−非常に僅か 前述した判定は、すべて、別に説明しない限り
は、28℃で３週間培養した後にとられた。これら
の検討に使用した培地のPHは、大体中性即ちPH
6.8〜7.2である。説明に使用した色表現は、イリ
ノイス州シカゴのコンタイナー コーポレーシヨ
ン オブ アメリカのカラー ハーモニー マニ
ユアル第４版（1958年）の定義による。 ストレプトミセス フラボグリセウス
NRRL8140は、また、種々な炭水化物を利用即
ち同化する能力について試験した。この目的に対
して、微生物を炭水化物１％を含有する基合成培
地（プリドハム及びゴツトリーブ）上で28℃で３
週間生長せしめた。研究に使用した培地のPHは大
体中性（6.8〜7.2）である。第表は、ストレプ
トミセス フラボグリセウスNRRL8140による
これらの炭水化物源の利用を示す。＋は良好な生
長を示し、±は貧弱な生長を示しそして−は生長
しないことを示す。 第 表 グルコース ＋ マルトース ＋ アラビノース ＋ マンニトール ＋ セルロース − マンノース ＋ フラクトース ＋ ラフイノース ± イノシトール ± ラムノース ＋ ラクトース ＋ シユクロース ± キシロース ＋ 微生物の温度変化による生長の量及び酸素要求
は次の通りである。 温度範囲（酵母エキス−デキストロース＋塩寒
天） 28℃−良好 37℃−中程度の栄養生長、気菌糸なし 50℃−生長しない 酵素要求（酵母エキス−デキストロース＋塩寒天
における穿刺培養） 好気性 本発明の新規な抗生物質の生産に対して、本発
明は例示的目的のために示したストレプトミセス
フラボグリセウスまたは前述した生長及び顕微
鏡的特性に完全にかなう微生物に限定されるもの
でないことは理解されるべきである。事実、Ｘ線
照射、紫外線照射、ナイトロジエンマスタード、
フアージ露出などのような種々な手段によつて前
述した微生物から得られる変異株の使用を包含す
べく企図するものである。 本発明の新規な抗生物質890A₂及び890A₅は、
微生物ストレプトミセス フラボグリセウスの菌
株を接種した適当な水性栄養培地を調整された条
件下で好気的に醗酵することによつて生産され
る。他の抗生物質の生産に対して使用されている
培地のような水性培地が890A₂及び890A₅の生産
に対して適当している。このような培地は、微生
物によつて同化できる炭素、窒素及び無機塩の源
を含有している。 一般に、例えばデキストロース、グルコース、
フラクトース、マルトース、シユクロース、キシ
ロース、マンニトールなどのような糖類及びデキ
ストリンまたは穀類例えばオート麦、ライ麦、玉
蜀黍澱粉、玉蜀黍粉末などのような澱粉を単独で
または組合せて栄養培地の同化性炭素源として使
用することができる。培地に使用される炭水化物
源の正確な量は、一部分、培地の他の成分によつ
てきまつてくるが、一般に、炭水化物の量は培地
の約１〜６重量％の間に普通変化される。これら
の炭素源は、個々に使用することができるまたは
幾つかのこのような炭素源を培地中で一緒にする
ことができる。一般に、多くの蛋白質物質を醗酵
法における窒素源として使用することができる。
適当な窒素源は、例えば、酵母加水分解物、プラ
イマリー イースト、大豆粉、綿実粉、カゼイン
の加水分解物、玉蜀黍浸出液、デイスチラーズソ
リユーブルまたはトマトペーストなどを包含す
る。窒素源は、単独でまたは組合せて、水性培地
の約0.2〜６重量％の範囲の量で使用される。 培地に混合し得る栄養無機塩は、ナトリウム、
カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシ
ウム、フオスフエート、サルフエート、クロライ
ド、カーボネートなどのイオンを与えることので
きる普通の塩である。また、コバルト、マンガン
及び鉄のような微量の金属も包含される。 例に説明した培地は使用し得る広範囲の種々な
培地の単なる例示であつてそして限定されるべき
でないことは理解されなければならない。 醗酵は約20〜37℃の範囲の温度で実施される
が、最適の結果に対しては、醗酵を約23〜28℃の
温度で実施することが好適である。ストレプトミ
セス フラボグリセウス培養菌の菌株を生長させ
るのに適当したそして抗生物質890A₂及び890A₅
を生産するのに適当した栄養培地の初期PHは、約
6.0〜8.0に変化し得る。 新規な抗生物質890A₂及び890A₅は表面及び液
内栄養（Submerged cultures）の両方によつて
生産されるが、醗酵を液内状態で実施することが
好適である。 抗生物質の小規模の醗酵は、有利には、適当な
栄養培地を抗生物質−生産培養菌で接種し次に生
産培地に移した後に醗酵を約28℃の一定温度で振
盪機上で数日間進行せしめることによつて実施さ
れる。 醗酵は、１またはそれ以上の種子展開段階を経
るようにして栄養培地の滅菌フラスコ中で開始さ
れる。種子段階に対する栄養培地は、炭素及び窒
素源の何れかの適当な組合せからなり得る。種子
フラスコは約28℃の一定の温度の室で１日間また
は生長が満足されるまで振盪するそして得られた
生長物の若干を使用して第２段階の種子または生
産培地に接種する。中間段階種子フラスコを使用
する場合は、これらは本質的に同じ方法で実施す
る即ち最後の種子段階からのフラスコの内容物の
一部を使用して生産培地に接種する。接種したフ
ラスコは、一定の温度で数日間振盪し次に培養期
間の終りにフラスコの内容物を遠心分離処理また
は過する。 大規模の実施に対しては、撹拌器及び醗酵培地
に通気する手段を具備した適当なタンク中で醗酵
を実施することが好適である。この方法によれ
ば、栄養培地をタンク中でつくりそして約120℃
までの温度で加熱することによつて滅菌する。冷
却後に、滅菌培地を生産培養菌の前もつて生長せ
しめた種子で接種し、次に栄養培地を撹拌及び
（または）通気しながらそして温度を約24〜28℃
に保持しながら醗酵を例えば１〜６日のような時
間進行させる。抗生物質890A₂及び890A₅を生産
するこの方法は、大規模な抗生物質の量を製造す
るのに特に適当している。 抗生物質890A₂及び890A₅の物理的及び化学的性
質 抗生物質890A₂の性質 抗生物質890A₂は、中性PHにおける電気泳動に
おいて陽性電極に向つて移動する酸性物質であ
る。 抗生物質890A₂のナトリウム塩は水溶液から凍
結乾燥した場合白色粉末でありそして水に非常に
可溶性である。 紫外線吸収スペクトルは、308及び228nｍで極
大を有しそして262nｍで極小を有す。中性PHの
水中の抗生物質890A₂のナトリウム塩の308nｍに
おけるＥ％は490より大であることが測定される。
得られた最良の試料に対して、吸収値A308／
A260の比は1.91でありそしてA308／A228の比は
1.02である。これらの試料中に残る少量の不純物
の証拠は、比が最終純度の試料に対して僅かによ
り高いことを示唆する。 308nｍにおける吸収の80％以上はヒドロキシ
ルアミンとの反応によつて除去することができる
そして同様な減少はシステインとの反応に対して
観察される。このような反応後の260nｍにおけ
る吸収は、A308減少の大きさの約1/4増加する。
HAEA308値を測定する生物試験に説明した条
件下において、反応動力学（reaction kinetics）
は室温で0.5〜1.5分の半減期をもつ一次（first
order）であると思われる。 次の表は、以下DSSと称する内部標準物質ナト
リウム２・２−ジメチル−２−シラペンタン−５
−スルフオネートと関連せしめたD₂O中の890A₂
ナトリウム塩に対する100MH₂−NMRシグナル
を示す。化学シフトはppmでそして結合定数はHz
で示す。みかけの重複度を示す。 1.33（ｄ、Ｊ＝６、ＣＨ ₃−CH）；2.07（Ｓ、ＣＨ
₃C＝Ｏ）；3.15（ｍ、Ｃ−ＣＨ ₂−Ｃ）；3.69（ｍ、
ＣＨ−Ｃ＝Ｏ）；〜4.3（ＣＨＮ及びＣＨ−
OH）；6.09及び7.12（グブレツト、Ｊ＝13.5、Ｓ−
ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ） 生物試験に説明されているようにしてビブリ
オ パーコランスATCC8461に対して測定した
890A₂の抗菌力価は1HAEA308単位当り約180単
位である。 抗生物質890A₅の性質 抗生物質890A₅は、中性PHにおける電気泳動に
おいて陽性電極に向つて移動する酸性物質であ
る。 ナトリウム塩は水溶液から凍結乾燥した場合白
色粉末である。 紫外線吸収スペクトルは、308.5及び228nｍで
極大を有しそして262nｍで極小を有する。中性
PHの水中の抗生物質890A₅のナトリウム塩の溶液
の308.5nｍにおけるＥ％は、純粋な試料に対し
て、490であることが測定される。吸収A308／
A260比は2.0でありそしてA308／A228の比は1.03
である。308nｍにおける吸収の90％以上はヒド
ロキシルアミンとの反応によつて除去され、
260nｍにおける増加された吸収を有する生成物
を与える。A260増加の大きさはA308減少の約1/
４である。HAEA308を測定するために説明した
条件下におけるA308減少の動力学は室温で１〜
３分の半減期をもつ一次であるように思われる。 890A₅の円二色性スペクトル（circular
dichroism spectrum）は、１デシメーターグラ
ム当り7189度−mlの比楕円性（specific
ellipticity）を有する304nｍにおける正の極大、
257.5nｍにおける０楕円性及び１デシメーターグ
ラム当り−21.218度−mlの比楕円性を有する220n
ｍにおける負の極小を有す。これらの値の計算に
おいて、890A₅の濃度は、308nｍの波長における
490のＥ％値を使用して308nｍにおける吸収から
評価される。 次の表は、内部標準物質DSSと関連せしめた
D₂O中の890A₅ナトリウム塩に対する100MHz−
NMRシグナルを示す。化学シフトはppmでそし
て結合定数はHzで示す。みかけの重複度を示す。 1.29（ｄ、Ｊ＝6.2、ＣＨ ₃−CH）、2.05（Ｓ、Ｃ
Ｈ₃C＝Ｏ）、3.09（ｄ of ｄ、Ｃ−ＣＨ ₂−Ｃ）、
3.41（ｄ of ｄ、Ｊ＝5.0、3.0ＣＨ−Ｃ＝Ｏ）、
4.16（ｍ、ＣＨ−Ｎ及びＣＨ−OH）、6.00及
び7.11（ダブレツト、Ｊ＝13.8、Ｓ−CH＝CH−
Ｎ） ビブリオ パーコランスATCC8461に対して測
定した890A₅の抗菌力価は、1HAEA308単位当り
12単位である。 890A₂及び890A₅の質量スペクトル分析 890A₅に対する質量スペクトルデーターを、ジ
メチルフオルフオルムアミド中のビス−トリメチ
ルシリルトリフルオロアセトアミドと抗生物質の
アンモニウム塩から製造ししたトリメチルシリル
誘導体に対して得た。抗生物質のアンモニウム塩
への抗生物質のナトリウム塩の変換は、酸性イオ
ン交換樹脂のアンモニウム塩を使用することによ
つて実施される。 890A₂及び890A₅のトリメチル−シリル化は３
種の異なる誘導体即ちジ−及びトリ−トリメチル
シリル誘導体（それぞれM.W456及び528）並び
にβ−ラクタム環が開いた加水分解生成物のテト
ラ−トリメチルシリル誘導体（M.W618）の少量
を生ずる。 もつとも重要な質量スペクトル部分の値は次の
通りである。 ジ−トリメチルシリル誘導体441、299、298及
び84。 トリ−トリメチルシリル誘導体513、371及び
156 テトラ−トリメチルシリル誘導体（低分割シグ
ナルのみ観察）618及び603。 抗生物質890A₂及び890A₅は、次の分子構造を
有する異性体であると信じられる。 抗生物質890A₂及び890A₅は次の抗菌スペクト
ルによつて特徴づけられる。 抗生物質890A₂の抗菌スペクトルを測定する試
験は、5μｇ／mlの濃度の５％メタノール中の
890A₂の溶液中で1/4吋直径のペーパーデイスク
を飽和し、この飽和せしめたペーパーデイスクを
空気乾燥し次にこれらのデイスクを種子接種した
栄養寒天＋0.2％酵母エキス５mlを含有する100×
15mmのペトリープレートの表面におくことによつ
て行われる。 抗生物質890A₅の抗菌スペクトルプロフイルを
測定する試験は、種子接種した栄養寒天＋0.2％
酵母エキス５mlを含有する100×15mmのペトリー
プレートの表面に、抗生物質の33μｇ／ml水溶液
の0.015ml小滴を適用することによつて行われる。
阻止帯域の直径（mm）で示した結果を第表に示
す。 抗生物質890A₂及び890A₅のスペクトルは、ジ
フコ ペニシリナーゼによる及びビブリオ パー
コランス（MB−2566）のセフアロスポリンＣ−
抗菌性菌株によつて生産されるラクタマーゼによ
る不活性化に対する890A₅の抵抗性を除いては、
全く類似している。また、結果は、抗生物質
890A₂が890A₅よりも著しく強力であるというこ
とを示している。 【表】 【表】 対して抵抗性を示す。
抗生物質890A₂は、グラム−陰性及びグラム−
陽性菌に対して生体内活性を示すそしてそれ故に
動物及び人間における細菌感染の抑制に有用であ
る。生体内活性の測定においては、抗生物質
890A₂を0.15M NaCl0.01M燐酸ナトリウム（ppm
を7.0）に溶解し次に水でうすめて試験用の５段
階の４倍稀釈濃度の薬剤を得る。平均体重約21ｇ
の雌の白スイスマウスを、ブロスに懸濁した試験
微生物を使用して腹腔内的に感染させた。注入し
た微生物の数は標準プレート−カウント（plate
count）技術によつて測定した。感染時及び６時
間後に、ある何匹かのマウスを抗生物質を使用し
て腹腔内的に処理する。５匹のマウスを試験され
る薬剤のそれぞれの濃度に対して使用した。更に
感染しない２匹のマウスを抗生物質で処理して注
入した薬剤の量が有毒であるか否かについて測定
した。感染培養菌の幾つかの稀釈のそれぞれに対
して５匹のマウスを各テストにおいてコントロー
ルに用いて、感染させて処理しなかつたマウスの
50％を死亡させる細菌数（LD₅₀）を計算した。
この計算は、感染後７日の生存データーを使用し
て行い、そしてこの時に、感染したマウスの50％
を保護する薬剤の量（ED₅₀）も計算した。 この挑戦をうけそして抗生物質で処理されなか
つた動物はすべて感染後48時間以内に死亡した。
サルモネラ シヨツトムエラリ（Salmonella
schottmuellari）MB−2837に対する59単位／ml
の力価を有する抗生物質890A₂の効力は以下に示
す通りである。 【表】 りである。
抗生物質890A₂及び890A₅は、種々なグラム−
陽性及びグラム−陰性細菌に対して活性な価値あ
る抗生物質でありそして従従つて人間及び家畜動
物の医薬として利用されることが判つた。本発明
の化合物は、単独でまたは互に組合せてグラム−
陽性またはグラム−陰性細菌例えばスタフイロコ
ツカス オーレワス、プロテウス ミラビリス、
エシエリヒア コリー、クレブシエラ、プノイモ
ニー及びサルモネラ シヨツトムエラリーによつ
て引起される感染を治療する抗菌剤として使用す
ることができる。本発明の抗菌性物質は、更に、
動物飼料に対する添加剤として食品を保存するた
めに及び殺菌剤として利用することができる。例
えば、医科及び歯科用装置上の有害な細菌の生長
を破壊及び阻止するためにそしてまた工業的適用
例えば水性ペイント及び製紙ミルの白水における
殺菌剤として有害な細菌の生長を阻止するため
に、本発明の化合物は、溶液１ミリオン部当り抗
生物質約0.1〜100部の範囲の濃度好適には溶液１
ミリオン部当り抗生物質約１〜10部の範囲の濃度
で水性組成物に使用することができる。 本発明の抗生物質は、単独の活性成分としてま
たは１種またはそれ以上の他の抗生物質または１
種またはそれ以上の薬理的に活性な物質と組合せ
て、種々な製剤に使用することができる。例え
ば、ゲンタマイシンのようなアミノシクリトール
抗生物質を一緒に投与して抵抗性菌が現出する機
会を最小にすることができる。また、例えば、ジ
フエノキシレート及びアトロピンを胃腸炎の治療
のために使用形態において一緒にすることができ
る。抗生物質は、カプセル形態、錠剤、粉末、液
状溶液、懸濁液またはエリキサーとして使用する
ことができる。抗生物質は、経口的に、局処的
に、静脈的にまたは筋肉内的に投与することがで
きる。更に抗生物質890A₂及び890A₅は互に組合
せて使用することができる。 経口投与用の錠剤及びカプセルは、単位使用形
態にすることができそして結合剤例えばシロツ
プ、アラビヤゴム、ゼラチン、ソルビトール、ト
ラガントゴムまたはポリビニルピロリドン、充填
剤例えばラクトーズ、砂糖、とうもろこし澱粉、
燐酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン、
潤滑剤例えばステアリン酸マグネシウム、タル
ク、ポリエチレングリコール、シリカ、崩解剤例
えば馬鈴薯澱粉または湿潤剤例えばナトリウム
ラウリルサルフエートのような普通の賦形剤を含
有し得る。錠剤は、当該技術によく知られている
方法によつて被覆することができる。経口用液状
製剤は水性懸濁液、油性懸濁液、溶液、乳濁液、
シロツプ、エリキサーなどの形態になし得るまた
は使用前に水または他の適当なベヒクルで再構成
できる乾燥製品として与えることができる。この
ような液体製剤は、懸濁剤例えばソルビトール
シロツプ、メチルセルローズ、グルコース／砂糖
シロツプ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロー
ズ、カルボキシメチルセルローズ、ステアリン酸
アルミニウムゲルまたは水素添加食用脂肪、乳化
剤例えばレシチン、ソルビタンモノオレエートま
たはアラビヤゴム、食用油例えばアーモンド油、
分画したココヤシ油、油状エステル、プロピレン
グリコールまたはエチルアルコールを包含する非
水性ベヒクル、防腐剤例えばメチルまたはプロピ
ルＰ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸
のような普通の添加剤を含有し得る。坐薬は、普
通の坐薬基剤例えばココアバターまたは他のグリ
セリドを含有する。 注射用組成物は、アンプルまたは防腐剤を加え
た多使用容器中の単位使用状態で提供し得る。組
成物は、油性または水性ベヒクル中の懸濁液、溶
液、乳濁液のような形態をとり得るそして懸濁
剤、安定剤及び（または）分散剤のような処方剤
を含有し得る。以上のようにする代りに、活性成
分は、使用前に適当なベヒクル例えば滅菌した発
熱性物質を含有していない水で再構成できる粉末
の形態になし得る。 組成物は、また、はな及びのどの粘膜または気
管支組織を通つて吸収される適当な形態に製造す
ることができる。そして普通粉末、液体スプレ
ー、吸入剤、ロゼンジ、のど塗布剤などの形態を
とる。目または耳に投薬するために、製剤は液体
または半固体の個々のカプセル剤として提供する
ことができるまたは点滴剤などとして使用するこ
とができる。局処適用は、軟膏、クリーム、ロー
シヨン、塗布剤、粉剤などのような疎水性または
親水性基剤中で処方することができる。 また、担体の他に、本組成物は、安定剤、結合
剤、酸化防止剤、防腐剤、潤滑剤、懸濁剤、粘稠
剤または風味剤などのような他の成分を含有する
ことができる。 にわとり、牛、羊、豚などの治療におけるよう
な家畜医薬においては、組成物は、例えば長時間
作用するかまたは早く放出される基剤中の乳腺内
製剤として処方することができる。 投与される使用量は、大部分、治療される患者
の症状、宿主の体重、感染の型、投与方法及び頻
度（非経口的投与方法は一般的感染に対して好適
である。そして経口的投与方法は腸感染に対して
好適である。）によつてきまつてくる。 人間の細菌感染の治療においては、本発明の化
合物は、抗生物質投与の普通の方法によつて、好
適には分割した使用量で例えば１日に３〜４回投
与するようにして、約２〜600mg／Kg／日、好適
には約５〜100mg／Kg／日の量で、経口的にまた
は非経口的に投与される。抗生物質は、適当な生
理学的に使用し得る担体または賦形剤と共に例え
ば活性成分100、330、400または1000mgを含有す
る使用単位で投与し得る。使用単位は、溶液また
は懸濁液のような液状製剤または錠剤またはカプ
セルのような固体の形態にある。勿論、一定の場
合における最適の使用量は処理される感染の型及
び程度によつてきまつてくるものでありそして小
児用に対しては少量使用されるものであることは
理解されるべきである。 本発明は、890A₂及び890A₅の非毒性の医薬的
に使用し得る塩例えば無機及び有機塩基をもつて
形成された医薬的に使用し得る塩を包含する。こ
れらの塩は、例えば、アルカリ金属またはアルカ
リ土類金属水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩から
誘導された金属塩例えばナトリウム、カリウム、
アンモニウム及びカルシウムから誘導された金属
塩及び第１級、第２級または第３級アミン例えば
モノアルキルアミン、ジアルキルアミン、トリア
ルキルアミン、低級アルカノールアミン、ジ低級
アルカノールアミン、低級アルキレンジアミン、
Ｎ・Ｎ−ジアラキル低級アルキレンジアミン、ア
ラルキルアミン、アミノ置換低級アルカノール、
アミノ−、ポリアミノ及びグアニジノ−置換低級
アルカン酸、及び窒素含有複素環式アミンから誘
導された塩を包含する。代表的な例は、水酸化ナ
トリウム、水酸化アンモニウム、炭酸ナトリウ
ム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化カ
リウム、炭酸カルシウム、トリメチルアミン、ト
リエチルアミン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリ
ジン、モルフオリン、キニン、リジン、プロタミ
ン、アルギニン、プロカイン、エタノールアミ
ン、モルフイン、ベンジルアミン、エチレンジア
ミン、Ｎ・N′−ジベンジルエチレンジアミン、
ジエタノールアミン、ピペラジン、ジメチルアミ
ノエタノール、２−アミノ−２−メチル−１−プ
ロパノール、テオフイリン、Ｎ−メチルグルカミ
ンなどから誘導された塩を包含する。 本発明の化合物の塩は、当該技術においてよく
知られている普通の方法によつて製造することが
できる。例えば、モノナトリウム塩のようなモノ
塩は、適当な溶剤中で生成物（）の１当量を水
酸化ナトリウム１当量で処理することによつて得
られる。また、２価陽イオンとの混合塩は、２価
の塩基１モルを生成物（）１モル＋他の酸１当
量と混合することによつて製造できる。このよう
にする代りに、塩は、水酸化カルシウムのような
２価の陽イオンを有する塩基１当量を生成物
（）１当量で処理することによつて得ることが
できる。本発明の塩は、医薬的に使用し得る非毒
性の誘導体であつて、これらは適当な単位使用製
薬形態における活性成分として使用することがで
きる。また、これらの化合物は、他の薬剤と合し
て広い活性スペクトルを有する組成物を与えるこ
とができる。 本明細書に説明した方法によつて得られる抗生
物質890A₂及び890A₅を含有する醗酵液は、ビブ
リオ パーコランス（ATCC8461）を使用してデ
イスク拡散試験によつて試験したときに、約２〜
170単位／mlの範囲の活性度を有す。これらの醗
酵液に含有されている抗生物質890A₂及び890A₅
は、多くの方法によつて採取精製される。１つの
このような方法は、抗生物質890A₂及び890A₅を
強塩基性陰イオン交換樹脂上に吸着せしめること
から成る。このような強塩基性陰イオン交換樹脂
の例示は、スチレン−ジビニルベンゼン母体を有
する樹脂例えばクロライドサイクルのポリスチレ
ン核第４級アンモニウム樹脂ダウエツクス１×２
（ミシガン州ミドランドのダウ・ケミカル・カン
パニーによつて製造された）である。強塩基性交
換樹脂のこの級の他の代表的な樹脂はジユオライ
トＡ−40、Ａ−42、Ａ−101、Ａ−102及びＡ−
114（カリフオルニア州レツドウツド・シテイーの
ケミカル・プロセス・カンパニー社製）、アンバ
ーライトIRA−400、IRA−401及びIRA−410で
ある。このようにする代りに、弱塩基性陰イオン
交換樹脂例えばアンバーライトIRA−68を使用し
得る。（アンバーライト樹脂は、ペンシルバニア
州フイラデルフイア５、ワシントン スクエアー
のローム・アンド・ハス社によつて製造される。） 吸収した抗生物質は、50％（Ｖ／Ｖ）水性メタ
ノール中の塩溶液で陰イオン交換樹脂から容易に
溶離される。そのようにして得られた溶離液は、
若し必要ならば、他の精製方法によつて更に精製
することができる。このように、溶離液は、それ
を濃縮し次にそれをXAD−７または８のような
中間極性のアクリルエステル重合体を充填したカ
ラムを通してまたはXAD−１、２及び４のよう
なポリスチレン、非極性、疎水性交叉結合ジビニ
ルベンゼン重合体好適にはXAD−２を充填した
カラムを通して通すことによつて精製することが
できる。（XAD−１、２、４、７及び８は、ペン
シルバニヤ州フイラデルフイア５、ワシントンス
クエアーのローム・アンド・ハス社によつて製造
される。）。この方法は、部分的に抗生物質890A₂
及び890A₅を分割する。890A₂に富んだフラクシ
ヨン及び890A₅に富んだフラクシヨンを集める。
これらの集めたフラクシヨンを更に精製する。 更に精製された抗生物質890A₂及び890A₅を得
る方法は、ビオーゲルＰ−２（カリフオルニア州
リツチモンドのビオ・ラドによつて製造された）
のような1800より大なる分子量を有する分子を除
去した孔サイズを有するポリアクリルアミドを通
過させるゲル過の使用による。セフアデツクス
Ｇ−10のような他のゲルもまた脱塩に対して使用
することができる。 抗生物質890A₂及び890A₅をブロスから高純度
で得ることのできる好適な方法は、固体を除去す
るブロスの遠心分離処理または過；50％（Ｖ／
Ｖ）水性メタノール中の３％NaClを使用したク
ロライドサイクルのダウエツクス−１×２のよう
な陰イオン交換樹脂上の液の吸着及び溶離（こ
れは抗生物質を濃縮そして部分的に精製する）；
適当に製造したXAD−２のカラムの通過（これ
は抗生物質を遅延しそしてそれによつてダウエツ
クス−１×２溶離液を精製及び脱塩する）からな
る。更に、抗生物質890A₅は抗生物質890A₂より
以上に遅延しそしてそれによつて２つの抗生物質
は部分的に分割される。890A₂及び890A₅に富ん
だフラクシヨンを集めそして更に精製する。ダウ
エツクス１×２−400メツシユ樹脂上のクロマト
グラフイー処理及び50％水性エタノール中の
NaCl及び（または）NH₄Clによる溶離は大部分
のUV−吸収不純物を含有していない生成物を与
える（NH₄Clは溶離剤中の緩衝能を与えるため
に使用した）そしてビオーゲルＰ−２またはセフ
アデツクスＧ−10上の脱塩はダウエツクス１×２
クロマトグラフイー処理に導入された塩の大部分
を除去する。 低力価のブロスを前記方法によつて処理した場
合、最終物質は、残留する不純物の顕著な量（50
％以上）を有す。これらの不純物は、ダウエツク
ス−１×２−400メツシユ上のクロマトグラフイ
ー処理及び塩化ナトリウム及び50％イソプロパノ
ールを含有する溶液による溶離によつて減少し得
る。低力価のブロスから抗生物質を単離する場
合、第２段階のXAD−２クロマトグラフイー処
理をなすことが好ましい。これは、更に精製し、
残留する塩を除去しそして抗生物質890A₅から抗
生物質A₂を部分的に分割する。特に890A₅は
890A₂よりおそく溶離しそして２つの抗生物質は
生物活性度対HAEA₃₀₈の異なる比によつて区別
し得る。1HAEA₃₀₈単位当り180生物活性単位の
ビブリオ パーコランスATCC8461に対する生物
活性度対HAEA₃₀₈の比を示すフラクシヨンは抗
生物質890A₂を含有しそして1HAEA₃₀₈単位当り
12生物活性単位のビブリオ パーコランス
ATCC8461に対する生物活性対HAEA₃₀₈の比を
示すフラクシヨンは抗生物質890A₅を含有する。 カラムクロマトグラフイー処理による精製にお
いては、一般に、もつとも純粋なフラクシヨンの
少なくとも30％の純度の抗生物質を含有する溶離
した容量のフラクシヨンのみを更に精製するため
に合する。純度の基準は生物活性度／A₂₂₀、
A₃₀₈／A₂₆₀及びHAEA₃₀₈／A₂₂₀の比でありそし
て脱塩操作法においては伝導度である。このよう
に、それぞれのクロマトグラフイー処理工程にお
いては、適当なフラクシヨンのA₂₂₀、A₂₆₀、A₃₀₈
及び生物活性度を測定する。可能である場合は
HAEA₃₀₈も測定する。脱塩操作においては、伝
導度を測定する。次の操作のために合するフラク
シヨンを決定する基準は、純度の犠牲において高
収量を達成するためにまたは反対に収量の犠牲に
おいて高純度を達成するために若干調節すること
ができる。 実験室的規模の操作（試料容量20以下）にお
いては、XAD−２クロマトグラフイー処理以外
のすべてのクロマトグラフイー工程は、２〜５℃
の冷室で実施する。XAD−２クロマトグラフイ
ー処理は特に説明しない限りは室温で実施する。
貯蔵される抗生物質溶液のPHは、稀NaOHまた
はHCl溶液の注意深い添加によつて７〜８に調整
する。水溶液は冷却器または好適には氷水中で貯
蔵しそして50％メタノール溶液を−20℃で貯蔵す
る。 XAD−２クロマトグラフイー処理前の精製の
段階においては、溶液は、一般に水酸化ナトリウ
ムの添加によりPH7.0に中和した0.1MNa₂EDTA
の溶液（0.1M中性EDTA）の1/4000容量の添加
によつてEDTA中25μMにする。 抗生物質890A₂及び890A₅を得る精製操作のフ
ローシート図は、それぞれ第１図及び第２図に示
す通りである。 【表】 【表】 ↓

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 構造式 を有する化合物及びその医薬的に使用し得る塩。 ２ ５（Ｒ）−６（Ｒ）−８（Ｓ）異性体である特許
   請求の範囲第１項に記載の化合物及びその医薬的
   に使用し得る塩。 ３ ５（Ｒ）−６（Ｓ）−８（Ｓ）異性体である特許
   請求の範囲第１項に記載の化合物及びその医薬的
   に使用し得る塩。 ４ 構造式 を有する化合物またはその医薬的に使用し得る塩
   の抗菌的に有効な量及びそれに対する非毒性の医
   薬的に使用し得る担体からなる組成物。 ５ 前記化合物が５（Ｒ）−６（Ｒ）−８（Ｓ）異性
   体である特許請求の範囲第４項に記載の組成物。 ６ 前記化合物が５（Ｒ）−６（Ｓ）−８（Ｓ）異性
   体である特許請求の範囲第４項に記載の組成物。