JPS582675B2 - シンキコウセイブツシツノセイホウ - Google Patents

シンキコウセイブツシツノセイホウ

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JPS582675B2
JPS582675B2 JP50038464A JP3846475A JPS582675B2 JP S582675 B2 JPS582675 B2 JP S582675B2 JP 50038464 A JP50038464 A JP 50038464A JP 3846475 A JP3846475 A JP 3846475A JP S582675 B2 JPS582675 B2 JP S582675B2
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salts
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ジヨン・デツク・ホード
デーニス・バツターワース
マーチン・コール
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BIICHAMU GURUUPU PLC
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    • C07D477/10—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2
    • C07D477/12—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, attached in position 6
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    • C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
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Description

【発明の詳細な説明】 この発明はＭＭ１３９０２と名付けた新規な抗生物質及
びその塩類の製法に関する。
ス１・レプトマイセス オリバセウス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｏｌｉｖａｃｅｕｓ）の
ある菌種の培養により、新規な抗生物質が得られること
を見出した。
我々がＭＭ１３９０２と命名した新規物質は、強力な抗
生物質であることに加えてペニシリン類やセファロスポ
リン類と相乗的に作用をするものである。
英国特許第１，３ ６ ３，０ ７ ５号明細書で、ス
トレプトマイセス オリバセウスのある菌種の培養によ
り有用なβ−ラクタマーゼ阻害剤が得られると開示した
。
かくして、この発明に至る迄、上記英国特許で開示され
た物質は実質的に純品であると信じられていたが、これ
は純品ではなく、この物質の少部分の成分が単離できそ
のものは強い抗菌作用を有することを発見した。
この新規物質をＭＭ１．３９０２と名付け且つこのもの
は、現在のところ英国特許第１，３６３，０７５号明細
書の物質の有するβ−ラクタマーゼ阻害活性のごく一部
に寄与するが、該物質の有する抗菌活性の一部を負って
いるものと信ずるものである。
もともとこの発明の明細書では、該英国特許第１，３６
３，０７５号で開示された物質をクレームするものと解
釈されるべきではない。
他のβ−ラククマーゼ阻害剤が、ストレプトマイセスの
菌、例えばドイツ公告特許出願第２． ３ ４． ０．
０ ０ ５号で開示された菌で生産されることが公知
であるが、かような公知物質は、ＭＭ１３９０２の有す
るごとき種類の強い抗菌活性を示していない。
この発明のＭＭ１３９０２は、固体のカルボン酸であり
、実質的に純粋なナトリウム塩の形で次の特性を有する
。
１）水に易溶、メタノールに溶け、クロロホルム、ジエ
チルエーテルと炭化水素類に実質的に不溶である。
１１）水溶液で、吸収極太を持った特有の紫外線吸収ス
ペク１・ルを有し、その吸収極大の一つは約３ ０ ５
’ｎｍである。
Ｉ１１）新しく作ったＫＢｒディスク中０４％（重量／
重量）含ませた際、吸収極大が殊に約３４５０．２９５
０，１７５０ ，１６２０ ，１５］．０ ，１４００
と１２６０ｃＩｒＬ ’ に有する特有の赤外線吸収ス
ペクトルを示す。
１■）Ｄ２０中で測定した核磁気共鳴スペクトルは殊に
（ａ）ほぼ１ ４ Ｈ ｚの結合定数を持ったほぼ２．
８５τと４．００τに中心がある一対の低磁場二重線、
（ｂ）ほぼ８５５τに中心がある二重線、及びほぼ８，
００τに鋭い一重線を有する。
Ｖ） スタフイロコツ力ス アウレウス、バチルスズ
ブチリス、エシエリシア コリ、クレブシラエロゲネス
、プロテウス ミラビリス、サルモネラ テイフイ及び
シュードモナス エルギノーサの菌を含む各種の菌種に
対し抗菌活性を有する。
ｖＯ アンピシリンと混合して用いると、エシエリシ
ア コリ、クレブシラ エロゲネス、プロテウス ミラ
ビリス、プロテウス モルガニイ及びスタフイ口コツ力
ス オウレウス ラッセルを含む微生物に対する活性を
相乗する。
ＭＭ１３９０２の純ジナトリウム塩はβ−ラクタマーゼ
阻害剤で、エシエリシア コリＢｌｌのβ−ラクタマー
ゼに対し０． ０ ０ １ ｄ／／ｆｎｌ と０．０
０ ０ １ ｌｔｇ／ｍｌの間のＩ５０（後述）を示
す。
＊＊セルロース上薄層クロマトグラフイーに付すと、Ｍ
Ｍ１３９０２の純ジナ１ヘリウム塩は、次のようなおお
よそのＲｆ値を有する。
ａ． ｎ−ブタノール／イソプロパノール／水−７：
７：６（容量）；Ｒｆ＝ｏ．７２ ｂ． イソプロパノール／水−７ ： ３ ： Ｒｆ
＝０．８５ｃ． ｎ−ブタノール／エタノール／水
−７：７：６：Ｒｆ＝０．８１ ｄ． ｎ−プロパノール／水−４ ： １ ： Ｒｆ
＝０．７５ｏＭＭ １ ３ ９ ０ ２は硫黄含有抗
菌性剤として特徴付けることができ、その塩はストレプ
１・マイセスオリバセウスＡＴＣＣ３１１２６の培養に
よって生産され、そのジナトリウム塩の水溶液では図１
に示したと同様に約３０５ｎｍと約２２ ５ ｉ１ ｍ
に紫外部吸収極大を有する。
あるいはＭＭ１３９０２は、その実質的に純粋なジナｔ
− ＩＪウム塩の形で新しく作った０．４％（重量／重
量） Ｋ Ｂ ｒディスクでの赤外吸収スペクトルは、
図２で示したごときであり且つ実質的に純粋なジナトリ
ウム塩の形で新しく作ったＤ２０の溶液で測定した核磁
気共鳴スペクトルは、図３で示したごときである抗菌性
剤として特徴付け得るものである。
かくしてＭＭ１３９０２は式（Ｉ）： で表すことができる。
物質ＭＭ１３９０２は、塩にしない酸の形では不安定で
ある傾向にある。
従ってこの発明でＭＭ１３９０２の塩類を提供するのが
好ましい。
又ＭＭｉ３９０２の塩は２塩基塩であることが好ましい
。
最も適切な塩類としては、ナトリウム、カリウム、カル
シウム、マグネシウム、アルミニウム、通常の置換アン
モニウムイオン類などの医薬的に受容なイオン類とで形
成された塩である。
特に適切な塩類としては、ナトリウム又はカリウム塩、
例えばジナトリウム又はジカリウム塩のようなアルカリ
金属塩類である。
この発明によって提供されるＭＭ１３９０２及びその塩
類としては、少なくとも５０％の純品であるのが適切で
あり、少なくとも７０％の純品であるのがより適切で、
好ましくは８０％純品例えば９０〜１００％の純品であ
ることである。
この発明によるＭＭ１３９０２及びその塩は、医薬的に
受容な賦形剤と共に医薬組成物として用いることができ
る。
最も適切な絹成物としては、ＭＭ１３９０２のナトリウ
ム塩又はカリウム塩例えばジナトリウム塩又はジカリウ
ム塩を含むものである。
かような組成物は、経口、局所又は非経口用に適する剤
型であってもよい。
例えば、錠剤、カプセル、クリーム、シロップ、調剤用
散剤や、注射もしくは注入に適する滅菌形態で使用しう
る。
このような製剤には、希釈剤、結合剤、着色剤、矯味剤
、保存剤、崩解剤のような通常の医薬的に受容な物をペ
ニシリン類及びセファロスポリン類ｊのような抗生物質
の製剤化によく知られた通常の製剤プラクテイスに従っ
て含め得る。
ＭＭ１３９０２又はその塩類は、それだけを含めた組成
物としてもよいが、β−ラクタム系抗生物質と一緒に製
剤化してもよい。
適切なβ−ラク１タム系抗生物質にはβ−ラクタマーゼ
に感受性があることが知られたものやβ−ラクタマーゼ
に対しかなり強い固有の耐性を有するものを含む。
このようなβ−ラクタム系抗生物質としては、アンピシ
リン、アモキシシリン、ベンジルペニシリン、，フエノ
キシメチルペニシリン、プロピシリン、セファロリシン
、セホキシチン、セファロチン、セファレキシン、カル
ペニシリン、チカルシリン、及ヒカルペニシリン又はチ
カルシリンのフエニル、トリルもしくはインダニルエス
テル又はアンピシシリン、ベンジルペニシリン、アモキ
シシリン、セファロリジン、セファログリシンなどのア
セトキンメチル、ピバロイルオキシメチルもしくはフタ
リジルエステルのような生体内で加水分解しうるエステ
ル類を含む。
ＭＭ１３９０２又はその塩とβ−ラクタム系抗生物質と
の割合は通常１０：１〜１：１０、例えば３：１〜１：
３である。
単一の服用型に存在さす抗菌剤の全量は通常５０〜１５
００Ｔｎ９で、１００〜１０００ｍ９が普通，であろう
。
好ましい単一服用組成物としては、泌尿管系、呼吸器系
、軟組織系などの疾患の治療に１日当り１以上例えば１
日当り２〜４回投与しうるものである。
かくして組成物は気管支炎、淋疾、中耳炎、乳線炎など
の治療に用いうる。
この発明の一つの観点によれば、後述するごときＭＭ４
５５０（複合物， Ｃｏｍｐｌｅｘ）の溶液を、実質的
にＭＭ１３９０２又はその塩の溶液よりなるフラクショ
ンと他のフラクションにクロマトグラフイー的に分け、
その溶液からＭＭ１３９０２又はその塩を分離すること
よりなるＭＭ１３９０２又はその塩の製法が提供される
。
ここでゝ実質的にＭＭ１３９０２又はその塩の溶液より
なる“フラクションとは、その溶液中に存在する抗生物
質がＭＭ１．３９０２又はその塩のみか又は他の抗生物
質が存在した際はＭＭ１３９０２又はその塩より少なく
存在することを意味する。
ＭＭ１３９０２又はその塩は、フラクション中の抗生物
質の７０％であるのが適切で、より適切には８０％好ま
しくは９０〜１００％存在することである。
どのフラクションが実質的にＭＭ１３９０２又はその塩
のみからなるかを決める適当な方法としては、各サンプ
ルの紫外線吸収スペクトルを測定することであることを
見出した。
図１と類似の紫外部吸収スペクトルを示すフラクション
には、後述のＭＭ４．５５０のような他の抗生物質を実
質的に含まず通常ＭＭ１３９０２又はその塩を含む。
一般的に約３０５ｎｍに明白な紫外部吸収極大を示すフ
ラクションは所望純度のものである。
上の方法は、通常ＭＭ１３９０２をジ塩基性塩として単
離するのに使用される。
ＭＭ１３９０２のモノ塩基性塩又は遊離酸のＭＭ１３９
０２自体を必要とする場合には、一般にＭＭ１３９０２
のモノ塩基性塩及び遊離酸のＭＭ１３９０２はＭＭ４．
５ ５ ０ （複合物）のような混合物から分離する
に充分な安定性を持たないので、ＭＭ１３９０２のジ塩
基性塩を酸性化して作ることができる。
モノ塩基性塩及び遊離酸は安定性が悪いため容易に得る
ことはできない。
前述したようにＭＭ１３９０２のクロマトグラフ的分離
はジナトリウム塩のようなＭＭ１３９０２の塩を用いて
行うのが最良と思う。
ＭＭ１３９０２の塩類は高親油性溶媒より水性溶媒によ
り溶解するのでこの発明に用いるクロマトグラフによる
精製には水性溶媒系を使用するのが好ましい。
ほぼ中性に緩衝された電解質の水性液を塩基性イオン交
換樹脂のような極性支持体と共に使用するのが適当であ
ることを見出した。
かくしてリン酸緩衝液のような通常の緩衝液で約ｐＨ
７にした塩化ナトリウムの水性溶液を第３級アミン基又
は第４級アンモニウム基を含み得る支持体と共に使・用
することができる。
塩基性イオン交換セルロース類及び塩基性イオン交換架
橋されたデキストラン類が適当な支持体であり、ＱＡＥ
セファデツクス（登録商標名）Ａ２５が、０．７モルの
塩化ナトリウムのｐＨ７１Ｊン酸緩衝液よりなる溶媒系
の際に特に好適な支持体であることが見出された。
あるいは、水及び低級アルカノールのような水と混和し
うる有機溶剤からなる溶媒系をシリカゲル又はセルロー
スのような不活性支持体と共に使用に適することが判明
した。
セルロースと共に使用する特に適当な溶媒系とは水とイ
ソプロパノールの混合物特にインプロパノール７：水３
の混合物である。
しかしながら、イオン交換樹脂を用いる上記の操作によ
る製品は、食塩を多く含むことが多いので、集めた溶液
を脱塩するのがよい。
脱塩は、溶液を親油性物質を含むカラムに通すことによ
って行うことができ、そこでＭＭ１３９０２は吸着され
食塩は吸着されない。
カラム用の適当な資材としては、アンバーライトＸＡＤ
４のようなポリスチレン類が含まれる。
あるいはセファデツクスＧ２５のような架橋デキストラ
ン類やバイオゲル（登録商標名）Ｐ２のようなポリアク
リルアミドゲル類のごとき沖過剤を使用してのゲル沖過
法も利用できる。
抗生物質は、水、水性メタノールなどを用いてカラムよ
り溶離させることができる。
上記の工程で所望の溶液が得られた際、緩和な条件下で
溶媒を除去することによりＭＭ１３９０２のジ塩基性塩
を固体で得ることができる。
かような固体物を得るのに用い得る方法としてＭＭ１３
９０２含有の集めたフラクションを減圧濃縮し、凍結乾
燥することがあることを見出した。
所望により上記の工程は２以上の段階に分けて行うこと
ができる。
例えば、ＭＭ４５５０（複合物）の溶液を他の抗菌剤の
それ自体の重量までまざったＭＭ１３９０２又はその塩
よりなるフラクションに分けることができ、フラクショ
ンは例えばＭＭ１３９０２又はその塩を約５０〜６０％
含む物を得るべく凍結乾燥でき、次いでこの物は例えば
ＭＭ１３９０２又はその塩を９０〜１００％含む物を得
るべく再びクロマトグラフイーに付すことができる。
この明細書で用語ゝＭＭ４５５０（複合物）“とけもと
もと英国特許第１，３ ６ ３，０ ７ ５号でＭＭ４
５５０として表示した物を表すために用いられる。
同特許の実症例を繰り返して行い生産されたＭＭ４．５
５０（複合物）は、ＭＭ４５５０の塩類、ＭＭ１３９０
２の塩類及びかなりの量の他の物質を各種割合で含む不
純物である。
ＭＭ４５５０（複合物）は、ＭＭ１３９０２の紫外部の
特異吸収を持たない。
英国特許第１，３ ６ ３，０ ７ ５号の実施例の追
試で得たＭＭ４５５０（複合物）のＩ５０（後述）は通
常０． ０ ０ ０ ４ ｌｔ ＆ ／ｍｌ以下ではな
い。
ＭＭ４．５５０（複合物）中に存在するＭＭ４５５０の
塩類とＭＭ１３９０２の塩類との割合は、非常に変動し
ていると思われ、使用した微生物の菌及び／又は使用し
た正確な分離技術のような因子によるものと考えられる
が、この複合物はＭＭ１３９０２よりＭＭ４５５０をよ
り多く含むことが一般的に見出された。
ＭＭ４５５０（複合物）の製法は後の２解説“の項で述
べる。
この明細書で、用語ゝＭＭ４５５０“は強力なβ−ラク
タマーゼ阻害剤であり又ある程度の抗菌活性を有する実
質的に純粋な化合物を述べるのに用いられる。
ＭＭ４５５０の性状はゝ解説“の項で後述する。
他の観点によれば、この発明はＭＭ１３９０２及びその
塩類の製法を提供するもので、その製法はストレプトマ
イセス属のＭＭ１３９０２生産菌を培養し、その培養物
からＭＭ１３９０２又はその塩を採取することよりなる
。
この方法においてＭＭ１３９０２生産菌とは後述するご
ときストレプトマイセス オリバセウス及びその関連微
生物の菌である。
ストレプトマイセス オリバセウスのＡＴＣＣ２１３７
９：微工研寄託番号２９６０、ＡＴＣＣ２１３８０：微
工研寄託番号２９５６、ＡＴＣＣ２１ ３８１ ：微工
研寄託番号２９５７、Ａ． Ｔ Ｃ Ｃ２１３８２：微
工研寄託番号２９５８、ＡＴＣＣ３１１２６（一ＡＴＣ
Ｃ２１３７９／Ｍ３）：微工研寄託番号２９５５又はそ
れらの変異菌が最も適当な微生物として使用される。
更にこの方法で使用するのに特に好ましい微生物は、ス
トレプトマイセス オリバセウス ＡＴＣＣ３１１２６
である。
ここで使用した用語ゝ培養“とは、炭素、窒素、硫黄及
び鉱物塩類の同化性源の存在下に故意の好気性発育をさ
せることを意味する。
このような好気性発育は、固体又は半固体の栄養培地中
又は栄養源が溶解又は懸濁している液体培地中で行うこ
とができる。
好気的表面培養又は液内培養によって行うことができる
。
栄養培地を複合栄養物で作ってもよく又化学的に限定す
ることもできる。
酵母抽出物、大豆粉末などのような複合栄養源を含む培
地が特に好ましいことを見出した。
又コバルトイオン、硫酸イオン及び炭酸カルシウムの添
加がよいことも見出した。
２８±２℃の温度での培養が抗生物質の許容できる収率
を与え且つ発酵開始後２〜３日でブロスを採取するのが
良い時期であることを見出した。
ここで使用した用語ゝ変異株“とは、自然に生ずるか又
は外部剤を故意に用いるか否かにかかわりなくその外部
剤によって生ずる変異菌を含む。
変異菌を作る適当な方法としては、Ｈ．Ｉ．アドラー氏
、国際原子力エネルギー局、ウインでのシンポジウムの
議事録、１９７３年、第２４１頁の１工業用微生物に対
する照射と放射性同位元素“の中での「微生物の発展技
術」に述べられた方法を含むものである。
これには次のことが含まれる。１）イオン化照射（例え
ばＸ線やγ線照射）、紫外線光、紫外線光と感光剤（例
えば８−メトキシプソラレン）、亜硝酸、ヒドロキシル
アミン、ピリミジン塩基同族体（例えば５−プロムウラ
シル）、アクリジン類、アルキル化剤（例えばマスター
ドガス、エチルメタンスルホン酸塩）、過酸化水素、フ
ェノール類、ホルムアルデヒド、熱など。
１１）くみかえ、形質変換、形質導入、溶原化、溶原的
変換や突然変異用の選択的手法のような遺伝学的手法。
変異促進剤を用いると所望抗生物質の生産量を増す能力
のある微生物が作り得ることを見出した。
例えば、ストレプトマイセス オリバセウスＡＴＣＣ２
１ ３７ ９（微丁研寄託番号２９６０）の培養物に照
射し、次いで得られる菌種を分離すると後述するような
ＫＡＧ検定で最犬の活性ゾーンを生産するとみられるも
ので、ストレプトマイセス オリバセウスＡＴＣＣ ３
１ １ ２ ６の分離につながった。
この菌はこの発明に使用するのに好ましい菌である。
なおＡＴＣＣ３１１２６はオランダでＣＢ８１５５．７
５として寄託されている。
ストレプトマイセス オリバセウスとその関連微生物は
次の特性を有する。
（ａ） 灰色又は黄色の胞子形成気生菌糸を有する。
（ｂ） 波形又は螺旋形の担胞子体形態を有する。
（ｃ） 平滑な表面の胞子を有する。
（ｄ） メラミンを生産しない。
上記の特性を有する菌種には、表５〜９に記載したもの
を含む。
一般に所望の抗生物質を得るのに用いる全ての分離及び
精製法に例えば２０℃以下より好ましくは１２℃以下の
高めた温度ではなくて行う必要がある。
所望の製品は、通常培養沖液より多く得られるので、分
離工程の最初に発酵物より例えば沖過により固形物の除
去を行う。
ＭＭ１３９０２父はそ；の塩の不純製品は、清澄培養沖
液からＭＭ１３９０２又はその塩を活性炭のような活性
物質に吸着させ次いでそれから水性アセトンのような溶
媒を用いて溶離させることにより得ることができる。
この工程は通常ＭＭ１３９０２のジ塩基性塩について・
行われる。
又は、ＭＭ １ ３ ９ ０ ２又はその塩の不純製品
を培養沢液より、親油性アンモニウム塩と水非混和性溶
媒とを用い抽出することにより得ることができる。
これは上記の方法より有利であることが多い。
（ＭＭ１３９０２は減圧下で有機溶冫媒を留去すると置
換アンモニウム塩として得ることができる。
）ＭＭ１３９０２の置換アンモニウム塩の当初溶液を沃
化ナＩ− ＩＪウムのような沃化アルカリ金属の溶液を
用いて水層に逆抽出するのが好ましい。
この最後の工程を変え一般に不純なＭＭ１３９０２のジ
塩基性塩の水性溶液を作るのに用いられる。
上記したようなＭＭ１３９０２又はその塩類の不純なも
のから、許容しうる純度の物を得るため前述のクロマト
グラフィーに付される。
冫 次の解説は抗菌性化合物の分離に有用な一般的情報
を明らかにするものである。
又次の実捲例はこの発明を例証するためのものである。
解説１： Ｉ５０の決定 ；１，ｏ値は、エシエリシア コリ ］”３１１のβ−
ラクタマーゼ酵素（この微生物はＲ因子で制御されたβ
−ラクタマーゼを含む）によりアンピシリンの加水分解
を５０％阻止するに必要な物質の量である。
β−ラククマーゼは、リッチモンドとスキ）一ズ（ Ａ
．ｄｙ． ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ． Ｐｈｙｓ
ｉｏｌ．９．３１（ １９７３））の分類によれば、タ
イプＩｌｌａの酵素に入る。
アンピシリンからそのペニシロ酸へのβ−ラクタマーゼ
加水分解の割合は、澱粉・ヨード滴定検定により分かり
、その一つの方法でペニシロ酸の生成割合が澱粉・ヨー
ド複合物の脱色で分かる。
この方法及びβ−ラクタマーゼの製法は、Ｍ．コールＨ
Ｓ−エルソンとＰ． Ｄ．フルブロックの報告（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ １ ９ ７ ２
， １ ２ ７ ，２９５〜３０８）に記載されてい
る。
上記の方法の少し改良として、阻害剤のサンプルは基質
のアンピシリンを添加する前３７°Ｃで１５分間酵素と
予め培養した。
その操作は次の通りであった。試薬 緩衝液： ０．０５モル，ｐＨ ７ リン酸カリウム緩衝液澱粉
／ヨード液： ノビツク（Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｔ．（ １ ９ ６ ２
） ８ ３ ，２３６〕記載の方法で調整 基質： 緩衝液中アンピシリン４ ０ ｌｔｊｉ ／ｍｌβ−ラ
ククマーゼ酵素： コールら（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（１ ９７２）１ ２
７，２９５〕記載の方法に従いＥ．コＩＪ Ｂ１，よ
り調４整。
緩衝液中の酵素製品の希釈は、未阻止反応で１００秒当
り約０３の光学濃度単位の低下を来たすようにした。
他のＥコリのβ−ラクタマーゼ生産菌を用いることがで
き、特にこれらの菌はＲ因子例えばＲＴＥＭを伝達する
。
条件 反応は３７℃で１ｃＩｒＬのキュベット中でＳ ｐｓｏ
ｏパイ ユニカム分光光度計を用い行った。
これは、４つのサンプルのキュベットと対応するブラン
クで行うことができる。
最初のキュベットを対照の，反応に使用し、阻害剤を含
めなかった。
第２〜４のキュベットは各種希釈の阻害剤に用いた。
反応は、５９００ｍにおける光学濃度を記録しながら、
３〜６分間隔で１００秒当りの光学濃度の変化をみて反
応速度を測定しつつ行われた。
阻害剤サンプルは、阻害剤を加えない対照での反応割合
の５０％に達する迄希釈した。
解説２： ＫＡＧ検定 ＫＡＧ検定は、醗酵ブロス中又は分離工程中でのβ−ラ
クタマーゼ阻害剤の存在を決める方法である。
４５°Ｃのモルトン栄養培地にクレブシラエロゲネスの
適当なβ−ラクタマーゼ生産菌を接種し、次いで寒天中
ペニシリンＧが６μ９７ｍｌの濃度になるのに充分な量
のペニシリンＧ滅菌液を；混合する。
次いで寒天をペトリ皿に注ぎ、固化後減菌金属カッター
を用い寒天層に等しい空間をもった円筒ウエルを入れる
。
テスト溶液をウエルに導入する。
次いでこの皿を２７°Ｃ〜３７°Ｃの一定温度で培養す
る。
培養期間中、テスト溶液中の阻１害剤をウエルから寒天
中へ拡散させ、そこでクレブシラのセルから生産された
β−ラクタマーゼの作用が阻止される。
かくして、ペニシリンＧはβ一ラククマーゼによる分解
から保護され、クレブシラの発育を防ぐに充分な濃度で
存在する。
寒天冫のこの部分に阻害剤が充分な濃度に拡散しないと
クレブシラの高密度の発育を許し、β−ラクタマーゼに
よりペニシリンＧが分解される。
クレブシラ発育の明白な円形の阻止帯が阻害剤を含むウ
エルの周囲に形成される。
各阻止帯の大きさは、テ１スト溶液中の阻害剤の濃度に
従属する。
テスト溶液の力価（任意単位／ｍｌ）は帯の直径に対す
る阻害剤の対数濃度の標準線を参照して得られる。
この検定系はバイオートグラフイーに用いることもでき
る。
冫解説３： 英国特許第１，３ ６ ３，０ ７ ５号に開示された
物と比較できるＭＭ４５５０（複合物）の製法ストレプ
トマイセス オリバセウスＡＴＣＣ２１３７９をローク
ス瓶中の固形寒天斜面−ヒでｉ２８゜Ｃで７日間生育さ
せた。
寒天培地の組成は次の通り。
糾 成 量ｇ／１ 酵母抽出物 １０．０グルコース１
水和物 １００ ノ 寒 天 １５．０
飲料水を加えて １ｌ 酵母抽出物は、英国・バーｌ・ンオントレント・ウエリ
ングトンロードのボブリル・フツド・イングレジエンツ
社より供給のゝイーテツクス“を用い、寒天は英国・Ｓ
． Ｅ． １ ロンドン・ザウスワークブリッジロー
ドのオキソイド社より供給のものを用いた。
培地は滅菌前にｐＨ６．８に調整した。
０．０２％のツウイン８０（ポリオキシエチレン・ソル
ビタン・モノオレエート）含有の５０ｍｌ滅菌脱イオン
水をロークスびん培養物に加え、胞子を振盪して懸濁液
とした。
この胞子懸濁液を接種材料として１０Ｍのステンレス鋼
製の醗酵釜に入れた７５ｌの滅菌種段階用培地に加えた
。
種段階用培地の組成は次の通りである。
組 成 量ｇ７１ 大豆粉末 １００ グルコース１水和物 ２００ 飲料水を加えて １ｌ （大豆粉末は英国・マンチェスター・オールドトラフオ
ードのプリテイシュ・アルカデー社製のアルカソイ５０
を用いた。
）発泡をおさえるために滅菌前の醗酵培地に大豆油中１
０％（容量）のプルロニツクＬａ＋ （登録商標名）の
５０ｍｌを加えた。
〔プルロニツクＬ８、は英国・Ｗ．３ロンドン・ザバー
レ２３１のヤコブセン・ファン・デン・ベルク・ユー・
ケー社より供給されたもので、エチレンオキシドとプロ
ピレンオキンドのブロック重合体である。
〕培地を醗酵槽中で１２０℃で２０分間蒸気滅菌した。
種段階培養液を８．５インチ直径の翼付皿攪拌機を用い
３４０ｒ．ｐ−ｍで攪拌し、開放式スパージャーを通し
て１５０ｌ／ｍｍの滅菌空気を導入した。
培養器にはバツフルプレートを装備した。２８℃に調整
し、この条件下で４５時間培養後にコＣＤ 種培養ｔｉ
の７．５ｌを、３００ｌのステンレス鋼製の醗酵釜に入
れた１５０ｌの滅菌発酵培地に接種液として入れた。
醗酵培地の組成は次の通り。
組 成 分 量ｇ７１大豆粉末（ア
ルカソイ５０） １０．０グルコース１水和物
２ ０． ０白 あ（炭酸カルンウム
より沈澱）０．２塩化コバルト（ＣｏＣｌ２６Ｈ２０
） ０．０ ０ １飲料水を加えて
１ｌ発泡防止用に大豆油中１０％のプルロ
ニツクＩ’ｓｔを３００ｍｌ加えた。
４８時間後に醗酵物を取り遠心分離で澄明にした。
この澄明にしたものは、１００，０００の１の希釈度で
の酵素検定で５０％の阻止をした。
これの１−００ｌを１ ２ｋｇ（ 湿重ｔ）ワットマン
ＤＥ３２イオン交換セルローズのアセテート型（英国・
Ｅ． Ｃ． ４ロンドン・ニューブリッジストリート、
比リーブ・アンゼル社製，ジエチルアミノエチル基で置
換された微細結晶性セルローズ）と攪拌した。
スラリーを濾過し、０．５モル硫酸カリウム１２７でＭ
Ｍ４５５０（複合物）をセルロースから溶離させた。
溶離液を減圧下３０℃以下でクライミング・フイルム蒸
発器中で６ｌに濃縮、１２ｌのアセトン添加で多量の硫
酸カリウムを沈澱させ、Ｐ液を３０℃以下減圧下で２０
０ｍｌに濃縮した。
濃縮液をアンバーライｔ−ＸＡＤ−４樹脂（ロームアン
ドハース社製、非イオン系ポリスチレン樹脂）の７６ｍ
ｍＸ２ｍ塔に通し、脱イオン水で溶離させ、溶離液を１
．４０ｍｌのフラクションに集めた。
ＫＡ（４２により検出された活性フラクションを集め（
２２ｌ）、アミコンＵＭ−０５膜（直径］．５Ｃ）ｍｍ
，英国・ハイワイコブ・クイーンロード５７、アミコン
社製）を用いるウルトラ濾過で６０Ｐ．Ｓ．ｉ． 窒
素気流中２７５ｍｌに濃縮した。
濃縮物を凍結乾燥し、褐色粉末（ Ｉ５００．０ ０
４ ｐｇ／ｒｎｌ） ２．２ｇを得た。
この粉末１ｇを０２モル硫酸ナトリウム１ｌに溶解し、
ジクロルメタン中２％（重量／容量）のテトラーｎ−ブ
チルアンモニウム・ハイドロゲン・サルフエート（スエ
ーデンのＡＢ．アストラ社製）の１ｌと混合した。
ジクロルメタン層を分け、一７０℃に冷却し、濾過して
氷を除去し蒸発で２０ｍｌに濃縮した。
４０〜６０℃の石油エーテル４００ｍｌを加え、遠心分
離で沈澱物を集めた。
沈澱物を１０ｒｕｌのジクロルメタンに再溶解し、沃化
バリウム８０ｍ９と炭酸バリウム７０ｍ９含有の１，ｏ
ｍｌ！の水で抽出した。
層を分離し、水層を濾過しｐ［｛６．５に調整した。
溶液を凍結乾燥し黄色粉末を得た。固体をアセトンで洗
浄し、過剰沃化バリウムを溶出させ淡黄色の固形物を遠
心分離で採取し減圧乾燥した。
収率１ ３１ｎＩ？（ Ｉ５ｏｏ．ｏ ｏ ０ ４ ｐ
ｇ／ｍｌ）解説４： 英国特許第１，３ ６ １，０ ７ ５号記載の物を得
るに有用な培養濾液の炭素吸着の例示 解説３で得られた培養濾液は、穴あき板状寒天拡散抗菌
検定でクレブシラ エロゲネスに対シソーンの直径１７
ｍｍを与えた。
ＫＡＧ検定でゾーンの直径３８朋でＩ５０は１００，０
００の１希釈。
５°Ｃの清澄培養濾１１７（［を９インチ直径のカラム
で活性炭（英国のデアーボーン・ケミカル社製のファー
ネルＢＯ、６０〜８０メッシュで１規定塩酸で予め洗浄
、リン酸塩でｐＨ ６に緩衝）を１６インチの高さにつ
めたものに通し毎分８００〜１０００ｍｌの上昇流動で
浸出させた。
ブリューを税イオン水１０ｌで洗浄し、カラムは２０℃
で２０％アセトンで溶離させた。
１０ｌに至る活性フラクションを３０°Ｃ以下で減圧濃
縮し６ｌにし、凍結乾燥してＩ，ｏ０．０ ５μｇ７ｍ
ｌ！を示す粗製ＭＭ４５５０（複合体）２８２．ｐを得
た。
酵素阻害活性の回収率は２２％であった。
ダルコグラニュラー炭素（英国のハネーウイル・アタラ
ス社製）を用いて活性炭処理を行っても同様な結果が得
られたく解説５： 英国特許第１，３ ６ ３，０ ７ ５号記載の物を得
るに有用な培養濾液のイオン交換樹脂クロマトグラフイ
ーの例示 内径ＩＣｒＩＬのカラムに６ｃｒｒＬ（床容量４．７ｍ
ｌ）の高さにダウエックス２１Ｋイオン交換樹脂（英国
・ドルセット・ポールのＢ．Ｄ．Ｈケミカル社製、塩基
性基含有ポリスチレンージビニルベンゼン樹脂、２０〜
５０米国メッンユでクロリド型）をつめた。
次いでこれを５％水性メタノールでほぼ４，７ｒｄで４
回及び蒸留水４． ７ ｍｌで１回洗浄した。
解説３で記載したごとき方法で得られた２ｌの培養濾液
をカラムに通した。
次いで５０％水性メタノールで洗浄し不純物を除去した
。
５０％水性メタノール中５％の食塩でＭＭ４５５０（複
合物）を溶離させた。
下記の表１は活性単位の用語で得られた結果を示すもの
である。
・培養濾液中のＭＭ４５５０（複合物）の含量は、任意
に８単位／ｍｌにされた。
カラムからの溶出フラクションは、クレブシラ エロゲ
ネスに対する抗菌拡散法を用い検定し、その活性単位は
培養沖液の各種希釈液の単位／ｍｌに対してゾーン直径
をプロットして作った標準線（培養濾液を標準として用
いた）を参照して算出した。
カラム法がＭＭ４５５０（複合物）の濃縮に効果的な方
法であったことが判るであろう。
フラクンヨン２〜５が全量わずか３７ｍｌで活性の６０
％・を含んでいた。
このフラクションの全乾燥重量は約２１０ｍＩ？であり
、従って３５ｇの固形物がカラムに添加されたことにな
る。
解説６： 英国特許第１，３ ６ ３，０ ７ ５号記載の物を得
るに有用な培養濾液のイオン対抽出の例示 硫酸ナトＩＪウム２４８ｇを解説３で記載された方法で
作った清澄培養濾液１０ｌに加え、その溶液をジクロル
メタン中２％テトラｎ−プチルアンモニウム ハイドロ
ゲン スルファート１０ｌで３０分攪拌しつつ抽出した
。
層を分離し、ジクロルメタン層を２゜Ｃに冷却した。
ワットマンＮｏｌＰＳ紙を通し少量の懸濁水を除去した
。
ジクロルメタン溶液を３０℃以下で減圧濃縮し２０ｍｌ
とした。
４００ｍｌの石油エーテル（４０〜６０℃）を加えると
ＭＭ４ ５ ５ ０ （複合物）含有のゴム状物が沈澱
した。
これを遠心分離で集め、５０ｍｌのジクロルメタンに再
溶解し、１ｇの沃化バリウムと１ｇの炭酸バリウム含有
の水５０ｍｌで２分間振とうし抽出した。
固形分を濾別し、二つの層を分離し、バリウム塩として
ＭＭ４５５０（複合物）を含有する水性層をｐＨ６．５
に調整、凍結乾燥した。
それにより、Ｉ５０が０．０ ０ １ １ｄｉ／ｍｌの
粗製朋４５５０（複合物）を３１７ｍ９得た。
？説７： テトラｎ−プチルアンモニウム ハイドロゲンスルファ
ートを使用してＭＭ４５５０とＭＭ１３９０２含有の部
分精製された抗生物質複合物の製法 解説４に従って作られたＭＭ４５５０（複合物）の粗製
品１２．５ｇを水１２５ｍｌに再溶解し、１０％（重量
／容量）テトラｎ−プチルアンモニウムハイドロゲン
スルファートのジクロルメタン溶ｉ１２５ｍｌで抽出し
た。
分離したジクロルメタン層を１９０■の沃化ナｌ− Ｉ
Ｊウム含有の２℃の水１００ｍｌを用いゆっくり攪拌し
つつ且つ水層を２％炭酸水素ナｌ− ＩＪウムでｐＨ６
．４に調整しつつ逆抽出した。
溶液を凍結乾燥し、乾燥固体をアセトン洗浄して Ｆ．
コリβ−ラクタマーゼに対しＩ，ｏＯ．０ ０ ０
２ １ｔ９を持つＭＭ４ ５ ５ ０とＭＭ１３９０
２のナトリウム塩が混った製品８８ｍｇを得た。
抗生物質の回収率は７０％。アンピシリンと解説７で得
た物との混合物の抗菌力を栄養寒天中希釈法で測定した
。
得られた最低発育曲ト濃度は表２の通りである。
アモキシリンとＭＭ４５５０（複合物）の混合物でも上
記と同様な相乗効果が認められた。
解説８： セチルジメチルベンジルアンモニウムクロリドを使用し
てのＭＭ４５５０とＭＭ１３９０２含！有部分精製抗生
物質複合物の製法。
解説４で記載されたごときファーネル炭素カラムからア
セトン・水で溶離させたもの、凍結乾燥品（ Ｉ５０＝
０．０２μｇ／ｒｎｌ）を蒸留水に溶解し、１３７１１
９７ｍｌの濃度とし、ｐＨ６．５に調製した。
１この溶液１００ｍｌを０．１％セチルジメチルベ
ンジル アンモニウムクロリドのジクロルメタン溶液の
等量で抽出した。
遠心分離で層を分け、有機層を再び０．０５％沃化ナト
リウム溶液１００ｍｌで逆抽出した。
層を分離し、水層に残存するジクロｊルメタンを減圧下
１０分間で除去した。
水層を凍結乾燥し、乾燥品を５０７７Ｉｌのアセトンで
３回洗浄した。
アセトン洗浄の製品を真空乾燥器中で乾燥し、淡褐色粉
末（ ４３ｍ９， ■，ｏ＝ ｏ．ｏ ０ ２μｇ／ｒ
ｒｌｌ）を得た。
解説９： ゲル濾過を使用してＭＭ ４ ５ ５ ０とＭＭ１３９
０２含有部分精製抗生物質複合物の製法解説４の方法で
作った粗製ＭＭ４５５０（複合物）Ｉ５０＝０．２ ｌ
ｔ ９ ７ｍｌ！の１ｇを溶離剤としてアエセトン／水
−４二６を用いセファデツクスＧ２５（上級品）でクロ
マトグラフイーに付した。
カラムの大きさは２．５Ｃｒ／′Ｌ×３２ｃｒｒＬで溶
離は毎分１．５ｍｌで行った。
活性フラクションを集め、３０°Ｃ以下で減圧濃縮し、
凍結乾燥して無晶形の淡黄色固体．［（ Ｉ ５０−０
． ０ ０ ５ ，ａ ｊ！ ／ｍｌ） ２ ２ ｍ９
を得た。
回収率８８％で４０倍に精製された。
解説１０： セルロース・クロマトグラフイーを使用してＭＭ４５５
０とＭＭ１３９０２含有精製抗生物Ｊ質複合物の製法 解説７で作られたＭＭ４５５０（複合物）６１０■を溶
離剤としてイソプロパノール／水＝７：３（容量）を用
い、セルロース（ワットマンＣＣ３１）をつめた２．５
ｃＴＬ×３２Ｃｒｔ′Ｌのカラムでクロマトグラ７フイ
ーに付した。
溶離速度は毎分１．５ｍｌ０抗菌活性を示すフラクショ
ンを合せ、３０’Ｃ以下で減圧濃縮、凍結乾燥して抗生
物質複合物（ Ｉ，ｏ＝０．０ ０ ０ ０ ７ ｌｔ
ｇ／ｍｌ）の褐色無晶形固体４０ｍ９を得た。
■，。が非常に小さい値であることは活性物質の純度が
改善されたことを示す。
別の機会に、上記の操作を行い１，。
−０．００１μｊ；ｌ／ｍｌの物を得た。
これの抗菌活性を表３に示す。
抗菌活性は光接種を用いるオキソイド感性ブロス（１％
の一夜ブロス）で標準微量滴定法で測定した。
解説１１： ＭＭ４５５０ ＭＭ４５５０は次のような性質を認めることができる。
ＭＭ４５５０は酸性の固体でそのナトリウム塩は次の特
性を有する。
１）水に易溶、メタノールに溶け、ク［Ｊロホルム、ジ
エチルエーテルと炭化水素類に実質的に不溶である。
１１）水溶液で、吸収極大を持った特有の紫外線吸収ス
ペクトルを有し、その吸収極大は約２３８ｎｍと約２８
７ｎｍである。
１１１）新しく作ったＫＢｒディスク中０．４％（重量
／重量）存在する際、殊に約３４５０，２９５０，１７
６５，１６９５，１５１０，１３９０と１２６０ｃｒｒ
Ｌ ’ に吸収極大を有する特有の赤外線吸収スペクト
ルを示す。
ＫＢｒディスクを調整約一週間後に再びスペクトルを測
定するとかなり変化があり、約１７６５ｃｘ’ の大き
なピークはかなり減少するか消失している。
ｉｖ）Ｄ２０中で測定した核磁気共鳴スペクトルは殊に
（ａ）ほぼ１ ５ Ｈ ｚの結合定数を持ったほぼ２。
４５τと３。６５τに中心がある一対の低磁場二重線、
（ｂ）ほぼ８．５５τに中心がある二重線、（ｃ）ほぼ
７．９５τに鋭敏な一重線を有する。
Ｖ）セルロースーヒ薄層クロマトグラフイーに付すと、
ＭＭ４５５０のジナトリウム塩は、次のようなおおよそ
のＲｆ値を有する。
（ａ） ブタノール／イソプロパノール／水−７：７
： ６ ： Ｒｆ＝０．６ （ｂ） イソプロパノール／水−７ ： ３ ： Ｒ
ｆ＝０７（ｃ）ｎ−ブタノール／エタノール／水−７：
７：６；Ｒｆ＝０．７ （ｄ） ｎ−プロパノール／水＝ ４ ： １ ；
Ｒｆ＝０．６■１）スタフイロコツカス アウレウス、
バチルスズブチリス、エシエリシア コリ、クレブシラ
エロゲネス、プロテウス ミラビリス、アシネトバクタ
ー アニトラタス、セラチア マルセ］ツセンス及びシ
ゲラ ゾネイの菌を含む各種の菌種に対し抗菌活性を有
する。
ｖｉｉ）各種殊にエシエリシア コリ、クレブシラエロ
ゲネス及びスタフイロコツカス アウレウスを含む菌に
よって生産されたβ−ラクタマーゼ類に対し酵素阻害作
用を有する。
Ｅ．コリＢｌｌのβ−ラクタマーゼに対するＩ５０は０
．０ ０ ０ １ ｌｔｇ ／ｍｌ以下である。
ｖｉｉｉ）アンピシリンと混合して用いると、エシエリ
シア コリ、クレブシラ エロゲネス、プロテウス ミ
ラビリス、プロテウス モルガニイ及びスタフイ口コツ
力ス オウレウス ラッセルを含む微生物に対する活性
を相乗する。
ＩＸ）アミノ酸分析でこの物はポリペプチドや蛋白質で
はないことが示される。
酸性加水分解後α一アミノアジピン酸は見出されない。
×）エールリツヒ試薬（３００ｒｎＩ？の４−ジメチル
アミノベンズアルデヒドを５４ｍｌのｎ−ブタノール、
９ｒｒＬｌのエタノールと９ｍｌの濃塩酸の混合液に溶
解）に陽性で、ペーパークロマトグラムと薄層クロマト
板上で青色を示す。
×１）一般の酵素毒ではなく、Ｅ．コリのβ−ラクタマ
ーゼを阻害するに必要な量より過剰濃度で、モノアミン
オキシダーゼ カルボニツクアンヒドラーゼ、ドーパデ
力ルポキシラーゼ、トリプシン、キモトリプシン又はウ
レアーゼの各酵素を阻害しない。
かくしてＭＭ４５５０は式（■）： で表わすことができる。
解説１２： 微生物 最初ＡＴＣＣ２１３７９ ，ＡＴＣＣ２１３８０，ＡＴ
ＣＣ２１３８１とＡＴＣＣ２ １．３ ８２ （これら
はスペイン、ニュージーランド、南阿及びイスラエルで
それぞれ得られた土壌サンプルから分離）の培養物にＭ
Ｍ４ ５ ５ ０ （複合物）が生産されていることを
見出した。
我々の研究所では、これらの培養物は同じであると思わ
れ、かつボウスフイルド博士、スコットランド・アベル
デーン・トーリーリサーチステーションのザ・ナショナ
ル・コレクション・オブ・インダストリアル・バクテリ
ヤ（ＮＣＩＢ）の放線菌の専問家により、フユーター氏
の広く知られた１９６７年の分類〔Ｓ１カルジャー、バ
ーゼルのシステマテツク・デル・ストレプトマイセテン
、３８２頁〕を用い全てストレプトマイセスオリバセウ
スと同定された。
以後にＭＭ４５５０生産が表５にみられるような他のス
トレプトマイセス属の菌種にも見出された。
Ｓ．オリバセウスはワックスマン氏により１９１９年に
記載された〔カルチュアル・スタデーズ・オブ・スピー
シズ・オブ・アクチノマイセス，フィル，サイエンス，
８，７１〜２１５〕。
続いて１９６０年にソ聯の研究グループが非常によく似
た特長を持った菌種を報告し、それをアクチノマイセス
（ストレプトマイセス）フルボビリデスと命名した〔ク
ユーシエバら、Ｔｒｕｄ．Ｉｎｓｔ．Ｍｉｋｒｏｂｉｏ
ｌ ，Ａｋａｄ Ｎａｕｋ． ＳＳＳＲ． ， ８，
２２６〜２５３（１９６０））。
ストレプトマイセス属の微生物は、その生育条件により
形態学的及び生理学的特性が非常に異にするものである
。
多くの菌種についての記述は、その大きな相異があるこ
とを認識する以前になされており、結果的に重複や同義
語がある。
フユター氏（１９６７年）は２５種をＳ．フルボビリデ
スを含むＳ１オリバセウスと同義語であるとしている。
命名と分類の混同を解消すべ＜、１．９６２年にシャー
リングらによるザ・インターナショナル・ストレプトマ
イセス・プロジェクト（ＩＳＰ）が始った（ Ｉｎｔ．
Ｊ． Ｓｙｓｔ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１８，
６９〜１８９（ １９６８））。
このプロジェクトで協力者らが標準条件下でのストレプ
トマイセスの菌種の正確な記述をする一連の研究を行っ
た。
このテーマにより、Ｓ．オリバセウスやＳ．フルボビリ
デスを含む約４００の命名された菌種の代表的菌に標準
的な記載が作られた。
Ｓ．オリバセウスとＳ．フルボビリデスについてのこの
プロジェクトによる記載は、二つの特性のみが異なって
いる。
即ちｉ）担胞子体の形態と１１）唯一の炭素源としてイ
ノシトールの利用能。
Ｓ．オリバセウスは次のように記載されている。
胞子鎖形態： 波形（Ｒｅｃｔ ｉｆｌｅｘｉｂｉｌｅ）部分を暗示す
る屈曲性の胞子鎖から漸次うつり変る開放螺旋形を持つ
螺旋形部分。
成熟胞子鎖は一般に長く、１つの鎖当り５０以上の胞子
を持つことが多い。
炭素利用性： Ｄ − クルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロー
ス、ｉ−イノシトール、Ｄ−マニトール、Ｄーフルク１
〜−スとラムノースを生育に利用する。
シュクロースとラフイノースには全くの生育を認めない
かこん跡の生育しか認めない。
Ｓ．フルボビリデスについて次のように記載されている
。
胞子鎖形態： 波形部分、成熟胞子鎖はやや短かく１つの鎖当り１０〜
５０の胞子をもつ。
炭素利用性： Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−マニトール、Ｄ−フルクトースとラムノースを利用
。
シュークロースの利用は疑問。ｉ−イノシトール又はラ
フイノースは全く生育を認めないかこん跡の生育しか認
めない。
Ｓ＃’）バセウス又はＳ．フルボビリデス及び他の関聯
菌種と同義語と命名された一連のカルチャーを標準的方
法及び培地を用いて測定した〔前掲ＩＳ’Ｐで推奨され
たシャーリングらＩｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ． Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ．，１ ６ ， ３ １ ３ 〜３ ４ ０（
１９６６）参照〕。
カルチャーが異なるソースより得られた。
Ａ．ＴＣＣ２１ ３７９ ，２１ ３８０ ，２１ ３
８ １ ，２１３８２をＭＭ４５５０（複合物）の生産
をもとにして土壌より分離した。
比較目的に他の菌種を各種のカルチャーから得た。
ＭＭ４５５０（複合物）の生産、気生菌糸の色、担胞子
体の形、挙質菌糸の色、溶解色素産生、メラミン産生及
び炭素利用の試験結果を表５〜９に示す。
全ての菌種について電子顕微鏡下で胞子表面はなめらか
である。
ＩＳＰ記述よりＳ．オリバセウスの担胞子体の螺旋状生
育は変りやすい特性であることが明らかである。
真正の螺旋をＳ．オリバセウス即ちＡＴＣＣ３３３５の
タイプに観察された。
川胞子体の大部分は長い。
ＡＴＣＣ２１３７９，２１３８０，２１ ３８］又は２
１３８２の培養物に和胞子体は｝長く波形の背景の中で
螺旋状の傾向を示したが、真正の螺旋が観察されなかっ
た。
しかし、二つの８１オリバセウス菌即ちＮＣＩＢ８２３
８とＮＣＩＢ８５０９では大部分の和胞子体は波形であ
った。
ＮＣＩＢ８２３８では中間の長さで、ＮＣＩＢ８５０９
は長かった。
Ｓ．フルボビリデスの典形的菌のＡＴＣＣ１５８６３か
ら観察された担胞子体はＡＴＣＣ２１３７９，２１ ３
８０，２１３８１，２１３８２，３１１２６のものより
短かく唯一の波形であった。
これらの特性からみてＡＴＣＣ２ １ ３７９ ，２１
３８０，２１３８１，２１３８２，３１１．２６はよく
一致するが正確にはＳ．オリバセウスの記述に一致しな
い。
ＡＴＣＣ２１３７９，２１３８０，２１，３８１．２１
３８２，３１．１２６はイノシトール利用性でいくらか
変化を示しこれはＳ．オリバセウスとＳ．フルボビリデ
スとのＩＳＰの典形的菌種の記述によると異にする特件
である（表８参照）。
ＡＴＣＣ３１１２５とＡＴＣＣ２１３８０はイノシトー
ルを利用し、これは、Ｓ．オリバセウスの特性であり、
一方他の菌種は利用性が疑しいか陰性である。
しかし、一つの炭化水素の利用能をみて種を分けること
は一般に満足し得るものではない。
このような差異は、一つの遺伝子の突然変異で生ずるか
も知れないし、菌株の意味であると考えられることがよ
くある。
Ｓ．オリバセウスのＮＣＩＢ８１３８，ＮＣＩＢ’８５
０９，ＡＴＣＣ２１ ５４９，ＡＴＣＣ１２０１９及び
ＡＴＣＣ３３３５の糖利用性の差異を多くの権威者は、
それらは種を異にすると考えないと示唆している。
かくして、ＡＴＣＣ２１３７９，２１３８０，２１３８
１，２１３８２，３１１２６はＳ．オリバセウスとして
表わすのが適当とみえる。
現在Ｓ．オリバセウスとＳ．フルボビリデスと命名され
たものにより重要な差異が見出されない限り、これらは
国際的に一つの種と認められる可能性があろう。
この場合、正しい名前は先行規定によってＳ．オリバセ
ウスであろう。
これは又フユター氏がＳ．オリバセウスと同義語として
挙げたものも含まれるであろう。
ＭＭ４５５０（複合物）生産用のＳ．オリバセノウス及
びその関聯菌の培養濾液の試験は次のように行うことが
できる。
即ち、リストした菌の培養濾液をワットマン扁１紙の原
点に２０ｌｔｌスポットし、冷時一夜をかけてｎ−ブタ
ノール：イソプ口パノール：水−７：１７：６でクロマ
トグラフイーをした。
別の組でｎ一ブタノール：氷酢酸：水−１２： ３：５
を用い同じく冷時一夜をかけて行った。
部分精製したＭＭ４５５０（複合物）のサンプルを同時
に二つの系で展開した。
フ 又は２５ｍｌの清澄培養ブリューをジクロルメタン
中０２％のセチルジメチルベンジルアンモニウム クロ
リド液１２．５ｍｌで抽出し、層を分け、有機層を残し
、０，５％の沃化ナｌ− １）ウム溶液２．５ｍｌを加
え、振盪、分離、水層を残し、これをクロマ丁トグラフ
イーに付す。
例えば薄層クロマト片に５μスポットし、ｎ−ブタノー
ル：イソプロパノール：水−７：７：６で展開する。
実椎例 Ｉ ＭＭ４５５０（複合物）の製法とＭＭ４５５０とＭＭ１
３９０２への分離 解説の項で説明した分離操作を各種の頃序で利用できる
。
特に適切な順序とは下記のような活性炭吸着、イオン対
抽出とセルロースクロマトグラフイーである。
解説３で得たような培養濾液３４０ｌをファーネルＢＯ
炭素をつめた塔（直径９インチ×高さ２１インチ）に毎
分８００〜１２００ｍｌの上昇流で通した。
炭素はＭＭ４ ５ ５ ０ （複合物）の吸着前に使用
されたもので、次の試薬で洗浄し再生した。
０．５規定水酸化ナトリウム、０．２規定水酸化ナトリ
ウム：アセトン−３：２、水、１規定塩酸、水、ｐＩ｛
６のリン酸緩衝液、水。
カラムを水２０１で洗浄し、培養濾液を除き、アセトン
：水−２：８（容量）を毎分２００〜２ ５ ０ ｍｌ
流下させて溶離させた。
１ｌのフラクションを集めた。
ＭＭ４５５０（複合物）含有のフラクションをクレブシ
ラエ口ゲ゛ネスを用いての抗菌拡散検定で検出し、これ
を集め（１１ｌ）、３０℃以下で減圧濃縮して５．５ｌ
とした。
この段階のＭＭ４５５０（複合物）の回収率は２０％で
あった。
濃縮物を２℃に冷却し、−５゜Ｃのジクロルメタン中２
％（重量／容量）のテトラｎ−プチルアンモニウム ハ
イドロゲン スルファート５．５１を加え、２つの層を
２分間混合した。
ジクロルメタン層を分離し、０℃の０．６％沃化ナ｝
ＩＪウム容液の１ｌを加えた。
２層をゆっくり攪拌した。水層を２％炭酸水素ナｌ−
ＩＪウム水溶液で除々にｐＨ６．５〜７．０に調整した
。
水層を分離、凍結乾燥した。
乾燥固体を乾燥アセトンで抽出して過剰の沃化ナトリウ
ムを除去し、次いで不溶性の残渣から減圧下でアセトン
を除去し淡黄色粉末１．１ｇを得た。
この段階でのＭＭ４５５０（複合物）の一貫回収率は１
０％であった。
培養濾液中に溶解していた全固形物にもとづいての精製
度合は、１２５倍であった。
２．５ｃｒ／Ｌ直径のカラムに、インプロパノール：水
＝ ７ ： ３ 容量比中セルロース粉末（ワットマン
ＣＣ３１）を３２ｃｒｒＬの高さに詰めた。
５ ０ ０ ｙｎＩ？ｃＤ淡黄色粉末をインプロパノー
ル： 水−７ ： ３ 容量比の２１ｎｌに溶解し、同
じ溶媒を用い１分間１．５ｍｌの流速でクロマトグラフ
イーをした。
３ ｍ．ｌのフラクションを集め、約２８５ｎｍに紫外
部吸収極大を示すものを合し、濃縮・凍結乾燥してＭＭ
４５５０（複合物）を得た。
上の実験で、約２８５ｎｍに吸収を示すフラクションに
は酵素阻害・抗菌活性を示す物質が含まれていることを
認めた。
凍結乾燥したＭＭ４５５０（複合物）の収率は３５ｍ９
であった。
本品は、褐色無晶形でＩ５０一０．０００１μｊｉ／ｍ
ｌを有した。
この段階での活性物質の一貫回収率は３％で、通算６０
０倍に精製された。
この製品の抗菌活性を光接種物を用いるオキソイド感光
テストの標準微量滴定法で決めた。
得られた最小発育阻止濃度は前述の表３に示したものと
類似であった。
この製品を展開剤としてｎ−ブタノール：イソプロパノ
ール：水（７：７：６）を用いセルロース（イーストマ
ンコダック社ゝクロマグラム“シート）上での薄層クロ
マ１〜グラフ分析で２つの活性物質に分離され、その１
つはほぼＲｆ＝０．５８でＭＭ４５５０と同定し、ほぼ
Ｒｆ＝０．７２のものはＭＭ１３９０２と同定した。
この両物質は、Ｂ．ズブチリス，Ｓ．アウレウス（オク
スホード）、Ｓ．アウレウス（ペニシリン耐性菌）、Ｅ
． コリ（ペニシリン感受性及び耐性菌）、サルモネ
ラテイフイムリウム、プロテウス ミラビリス、プロテ
ウム モルガニとクレブシラ エロゲネスを含む各種微
生物でバイオートグラフイーで検出できる。
得た結果を表４に示す。更に実験を行ない、２つの物質
をセルロース薄層クロマト上でイソプロパノール：水（
８：２）で展開し分離、リン酸緩衝液で溶出した。
各抽出液のβ−ラクタマーゼ阻害を検定し、両物質共Ｅ
．コリのβ−ラクタマーゼ阻害剤であることが判明した
。
又両物質共Ｋ．エロゲネスに対しベンジルペニシリンと
相乗作用することが判明した。
実施例 ２ ＭＭ４５５０（複合物）の製法とＭＭ４５５０：とＭＭ
１３９０２の分離 Ｓ．オリバセウスＡＴＣＣ３１ １ ２６を５℃、ｐ｝
｛６．５での醗酵から得られた培養濾液１．１００ｌを
ゝダルコ“顆粒炭素を詰めたカラム（０．３ｍ×１ｍ）
に毎分３．２ｌで通した。
〔炭素はＭＭ４５５０（複合物）の吸着に前に使用され
たもので、０，５規定水酸化ナトリウム０．２規定水酸
化ナトリウム：アセトン（３：２）、水、１規定塩酸、
水、リン酸緩衝液（ ｐＨ ６ ）、水の順序で洗浄再
生してから用いた。
〕カラムを６０ｌの水で洗浄し、培養濾液を除去、次い
でアセトン：水（２：８容量比）を用い３０℃で毎分１
．１ｌで溶離させた。
６０１を集め続いて５×１０ｌのフラクションを得た。
Ｋ．エロゲネスを用いる抗菌城散検定で検出したＭＭ４
５ ５ ０（複合物）含有フラクションを集め（４０
ｌ）、３０℃以下減圧下で３２ｌに濃縮した。
この段階でのＭＭ４５５０（複合物）の回収率は１５％
。
濃縮物を５℃に冷却し、１６ｌの０．２％セチルジメチ
ルベンジルアンモニウムクロリドのジクロルメタン溶液
（５゜Ｃ）を加え、２つの層を５分間混合した。
ジクロルメタン層を分離し、０．４％沃化ナトリウム溶
液（５℃）３．７５ｌを加えた。
２つの層を５分間混合、水層を分離、凍結乾燥した。
乾燥固体を乾燥アセトンで抽出し、過剰の沃化ナトリウ
ムを除去し、残存固体を減圧乾燥し淡黄色粉末２．８７
ｇを得た。
この時点でのＭＭ４５５０（複合物）の一貫回収率は６
％であった。
培養濾液中の全溶解固体より算出した精製度合は１６０
倍であった。
６３ｍｍ直径のカラムにイソプロパンール：水（ ７
： ３容量比）中のセルロース粉末（ワットマンＣＣ３
１）を３００ｍｍの高さに詰めた。
２．０ｇの淡黄色粉末をインプロパノール：水（７：３
）５ｍｌに溶解し、同じ溶媒で１分間３ｍｌでクロマト
１グラフイーを行った。
Ｋ．エロゲネスに対する検定で、ＭＭ４５５Ｑ（複合物
）含有フラクションを取り、３０゜Ｃ以下で減圧濃縮し
、凍結乾燥して２０７■の褐色固形物を得た。
この際のＭＭ４５５０（複合物）の回収率は５１％であ
り、精製は５倍であった。
１６ｍｍ直径のカラムにｎ−プロパノール：水（４：ｌ
容ｆｉ比）中のセルロース粉末（ワットマンＣＣ３１）
を３０ＣＨｕｔの高さに詰めた。
１９８〜の褐色固形物を水：ｎ−プ口パノール（ １
： １）に溶解し、ｎ−プロパノール：水（４：１）で
１分間０． ５ ｍｌの流速でクロマトグラフイーを行
った。
６ｍｌのフラクションを集め、Ｋ．エロゲネスに対し微
生物検定した。
各フラクションの紫外部スペクトルを測定した。
フラクション２３〜２８は約３０５ｎｒｎの紫外部吸収
極大を有し、ＭＭ １３９０２のジナトリウム塩を含有
した。
このフラクションを集め、減圧濃縮、凍結乾燥し３０Ｔ
ｎ９の固形物を得た。
本品はイーストマン・コダック社セルロース板を用い、
ｎ−プロパノール：水（４：１容量比）での薄層クロマ
トでＲｆＯ．７７に唯一の抗生物質活性を有するゾーン
を示した。
このゾーンはバシルス ズブチリスでバイオートグラフ
イーにより検出した。
フラクション２９〜４０は、約２８５ｎｍに紫外部吸収
極大を示しＭＭ４５５Ｑを含有した。
これらを集め、減圧濃縮、凍結乾燥し５３■の固形物を
得た。
このものは少量のＭＭ １３９０２の塩が混入したＭＭ
４．５５０の塩を含有した。
実施例 ３ ＭＭ１３９０２製造の好ましい分離法 Ｓ．オリバセウスＡＴＣＣ３１１２６の胞子を乾燥剤付
密封容器内の乾燥土壌チューブ中に２０℃において保存
した。
少量の土壌貯蔵物（ほぼ２ｏＴＩＩ？）を次の培地１０
０ｍｌ含有の５００ｍｌエルレンマイヤーフラスコに無
菌的に移した。
組 成 量ｇ／１ グルコース１水和物 ２０．０大豆粉末
１０．０脱イオン水を加えて
１ｌ滅菌前にｐＨを６．５に調製した。
大豆粉末は、英国・マンチェスター・オールドストラド
フオードのプリテイシュ・アルカデー社の１アルカソイ
５０“を用いた。
フラスコは回転式振盪機上（ ２４０ ｒ． ｐ． ｍ
）２８℃で約３０時間培養した。
２ｍ／の得られる発育生成物を１ロータス“ビンの傾面
固形寒天に接種した。
寒天培地の組成は次の通り。組 成
量 Ｖ−Ｓ野菜ジュ−，２． ２０．０ｍｌ
寒 天 ２００ｇ脱イオ
ン水を加え １ｌ滅菌前にｐＨを６．
０に調整した。
Ｖ−８ジュースは英国・ノルフォーク・キングスレイン
のキアンベルス・スープ社より得たものである。
接種物はビンを振動させることにより寒天表面に拡げら
れ、次いでまっすぐの状態で３０°Ｃで培養した。
２日間培養後、過剰の液体をピペットで除去し更に４日
間培養を行った。
ゝロータス“ビン培養物のこの製法を採用すれば、傾面
培養物にアクチノファージが起るのが抑制されることは
見い出されている。
０．０２％ツウイーン８０含有の滅菌脱イオン水５０ｍ
ｌを１ロークス“ビン培養物に入れ、振とうして胞子を
懸濁させた。
この胞子懸濁液を１００４ステンレス鋼製醗酵釜に入れ
た７５ｌの滅菌種つけ培地に接種した。
種つけ培地糾成は次の通り。組 成
量ｇ７１大豆粉末（アルカソイ５０）
１０．０グルコース１水和物 ２
０．０飲料水を加え １ｌ発
泡抑制のため、１０％（容量戸プルロニツクＬ８１“大
豆油溶液５０ｍｌを滅菌前の醗酵培地に添加した。
培地を１２０℃で２０分間醗酵釜中で蒸気滅菌した。
種つけ培養物を、７５インチ直径の羽根刑攪拌機を用い
１ ４．Ｏ ｒ． ｐ． ｍ． で攪拌し、開放末端
スパージャーを通して滅菌空気を毎分７５１供給した。
温度は２８℃に調節し、この条件下で４８時間培養させ
た後、２０００ｌステンレス鋼製じゃま板付醗酵釜に入
れた１５００ｌの滅菌醗酵培地に容器の内容物を接種し
た。
醗酵培地の組成は次の通り。
組 成 量（ ｇ／ｌ ）大豆粉末（
アルカソイ５０） １０．０グルコース１水
利物 ２０，０白あ（沈降炭酸りルシ
ウム）０．２ 塩化コバルト（ＣｏＣＪｌ？，， −６Ｈ２０）
０． ０ ０ １硫酸ナトリウム（無水）
ｔ．０飲料水を加えて
１５００ｌ滅菌前に水酸化ナ｝ ＩＪウムでｐＦ｛を
６．０に調整シタ。
１０％ゝゝプルロニツクＬ８１ “犬豆油液３ｌを滅菌
前に発泡防止に加えた。
滅菌後、滅菌水酸化ナトリウム溶液で再びｐＨ７．０に
調整した。
二つの１９インチ直径の羽根皿付攪拌機を１０６ｒ．
ｐ． ｍに攪拌した。
温度を３０゜Ｃに調節し、空気流量毎分１２０（ｌで醗
酵を行った。
６０時間後に醗酵物を取り出し、遠心分離で澄明化した
。
上記の生産物は、任意に３４０単位／ｍｌに定められた
。
検定は解説２記載の方法を用いた。１ ０゜Ｃ１ ｐＨ
８の培養濾液１０５０ｌ（３４０単位／ｌ）セチルジ
メチルベンジルアンモニウムクロリド１， ２ ０ ０
．！１７含有のジクロルメタン３１０ｌを用い１０℃
で、予め決めた流速でインラインミキサーを通し二つの
液体をポンプで送り抽出した。
層をシャープレス連続遠心分離で約２分間混合して分離
した。
ジクロルメタン層３００ｌを水性沃化ナトリウムで抽出
した。
この逆抽出は、２１０ｇの沃化ナｌ− ＩＪウム含有の
全量７０１の水を用い４つのバッチで行った。
層は比重で分けた。水層を希塩酸でｐＨ ７． ７〜７
．０に調整し、濾過した。
沃化ナ｝ ｌ）ウム抽出’ｌｌｌ７１には２１，９００
単位／ｍｌを含有した。
１０（Ｊ直径のガラス製カラムに食塩（０．３モル）含
有のｐＨ ７ １Ｊン酸緩衝７１（ｏ．ｏｓモル）中の
ＱＡＥセファデツクスＡ２５（ファーマシア社製）を４
０ｃ１ｒＬの高さに詰めイオン交換樹脂塔を作った。
５℃の沃什ナｌ− ＩＪウム抽出液（７ｌ）を毎分５０
ｍｌの速さでこの塔に入れた。
ｐＨ ７の０．０５モルリン酸緩衝液中０．７モル塩化
ナトリウム溶液で毎分２５ｍｌの流速で５゜Ｃにおいて
溶離させた。
２ｌ（７）溶出液を捨て、９０のフラクション（ １．
０ ０ｍｌ〕を集めた。
このフラクションを紫外分元々度計で検出し、約３ ０
５ ｎｍに吸収極大を示すこれらのフラクソヨンを取
り、ｐＨ ７に言周整した。
（フラクンヨン５０〜６２は１，４４０ｍｌで、７１，
０００単位／ｍｌであった。
）この領域に吸収極太を有するフラクションはＭＭ１３
９０２を含有したことを前に示した。
この集めたフラクションに塩化ナトリウム（５ｇ／１０
０ｍｌ）を加え、５℃において６．３ｃｒｒＬ直径のカ
ラムにアンバーライトＸＡＤ４樹脂（ローム・アンド・
ハース社製）を３０ｃ１ｎの高さに詰めたもの毎分２０
ｍｌの流速で通した。
ＭＭ１３９０２は無機の不純物がなくこれらの条件下で
樹脂に吸着される。
ＭＭ１３９０２を室温で蒸留水２００ｍｌ次いで５０％
水性メタノールを用し溶離さぜた。
溶出１１ｌを３０℃以下で減圧濃縮し、７０ｍｌとし、
ｐＨ ７に調整、凍結乾燥すると１．６２ｇの褐色固形
物が得られた。
このものは３７，０００単位／ｍ９活性を有する部分精
製されたＭＭ１３９０２の塩であった。
部分Ｍ製のＭＭ１３９０２ジナトリウム塩ｌ．０，９１
３７．０００単位／ｍ９をセルロースカラム（ ３．
８ ｃＩｒＬＸ ３ ０ ｃｍ．，ワツ１・マンＣＣ
３１セルロース）でｎ−プロパノール／水（４：］容量
比）を用い毎分２． ５ ｍ．ｌの流速でクロマトグラ
フイを行った。
流出液の最初の１７０ｒＩｌｌを捨て、１００Ｘ１５ｍ
ｌ．のフラクションを集めた。
ＭＭ１３９０２ジナトリウム塩含有フラクションＡ６３
７〜４３（紫外線吸収で測定）は８９ｍｌになった。
これを３０°Ｃ以下で減圧濃縮してｎ−プロパノールを
除去し、次いで凍結乾燥して２１９Ｔｎ９の黄色粉末（
活性７３，０００単位／■）を得た。
このものはＥ１％一約３４３を持ち、約３０８１ｃ１ｒ
Ｌ ｎｍに紫外線吸収極大を示した。
又このものは図２及び図３のような赤外線及び核磁気共
鳴スペクトルを有した。
抗菌活性は表１０に示す通りである。
元素分析により、ことに窒素、硫黄、ナトリウムを含み
、その割合即ちＮ：Ｓ：Ｎａはおおよそ２：２：２であ
った。
ＭＭ１３９０２のジナトリウム塩についての円偏光２色
性曲線の正及び負極大を、通路長さＩＣＴＬ、濃度０．
３ ７ ｍ９ ７ｍ．ｌで記録計付きカリー・６１分
光偏光光度計で測定した。
その結果は次の通りであった。
この本発明は特許請求の範囲に記載の方法であるが、次
の態様を含む。
１．ＭＭ１３９０２物質は固形のカルボン酸でその実質
的に純ナトＩＪウム塩は次の特性：ｉ）水に易溶、メタ
ノールに溶解、クロロホルム、ジエチルエーテルと炭化
水素類に実質的に不溶である。
ＩＩ）水溶液で、吸収極太を持った特有の紫外線吸収ス
ペクトルを有し、その吸収極大の一つは約３０５ｎｍで
ある。
１１１）新しく作ったＫＢｒディスク中０．４％（重量
／重量）含ませた際、殊に約３４５０ ，２９５０，１
７５０，１，６２０，１５１０．１４００と１２６０ｃ
ｒｆＬ−１に吸収極太を有する特有の赤外線吸収スペク
トルを示す、 ｉｖ） Ｄ２０中で測定した核磁気共鳴スペクトルは、
殊に（ａ）ほぼ１４Ｈｚの結合定数を持ったほぼ２．８
５τと４．００τに中心がある一対の低磁場二重線、（
ｂ）ほぼ８．５５τに中心がある二重線、及びほぼ８，
００τに鋭い一重線を有する、 Ｖ）スクフイロコツカス アウレウス、バチルスズブチ
リス、エシエリシア コリ、クレブシラ エロゲネス、
プロテウス ミラビリス、サルモネラ テイフイ及びシ
ュードモナスエルギノーサ、の菌を含む各種の菌種に対
し抗菌活性を有する、 ■１）アンピシリンと混合して用いると、エシエリシア
コリ、クレブシラ エロゲネス、プロテウス ミラビ
リス、プロテウス モルガニイ及びスタフイロコツカス
オウレウスラッセルを含む微生物に対する活性を相乗
する、 を有する特許請求の範囲の方法によるＭＭ１３９０２又
はその塩の製法。
２．ＭＭ１３９０２の実質的純ジナ｝ ＩＪウム塩がセ
ルロース薄層クロマトグラフィに付してほぼ次のＲｆ値
： ａ） ｎ−ブタノール／イソプロパノール／水一７：
７：６（容量）：Ｒｆ＝ｏ．７２ ｂ）インプロパノール／水−７：３：Ｒｆ一〇．８５ ｃ） ｎ−ブタノール／エタノール／水−７＝７：６
：Ｒｆ＝０．８１ ａ） ｎ−プロパノール／水−４：１；Ｒｆ一〇．７
５、 を与えること及び純ジナトリウム塩がエシエリシア コ
ＩＪ Ｂ １ １のβ−ラクタマーゼに対し０、Ｏ Ｏ
１〜０．０ ０ ０ １ μｇ／ｍｌのＩ５０を有す
ることにより更に特徴づけられる上記１に従う方法。
３．ＭＭ１３９０２は硫黄含有抗菌剤で、その塩類はス
トレプトマイセス オリバセウスＡＴＣＣ３１１２６の
培養によって生産され、且つそのジナ１・リウム塩の水
溶液では図１で示されるように約３０５ｎｍと約２２
５ｎｍに実質的に紫外部吸収極大を有することで特徴づ
けられる特，許請求の範囲に従う方法。
４．ＭＭ１．３９０２がＭＭ１３９０２及びその塩類で
、ＭＭ１’３９０２化合物は抗菌剤であって、その実質
的に純ジナトリウム塩を新しく調整した０．４％（重量
）ＫＢｒディスクで赤外線吸収．スペクトルを測定した
際は実質的に図２に示す通りであり且つ同じくジナトリ
ウム塩を新しく調整したＤ２０溶液で核磁気共鳴スペク
トルを測定した際は実質的に図３に示す通りであること
により特徴づけられる特許請求の範囲に従う方法。
５．ストレプトマイセス属の菌が前述したようなストレ
プ１・マイセス オリバセウスの菌種又はその関連菌で
ある上記の何れかに従う方法。
６．ストレプトマイセスＡＴＣＣ３１２２６又はその変
異株による上記５に従う方法。
７．前述したようなＭＭ４５５０（複合物）の溶液をク
ロマトグラフイー的にＭＭ１３９０２又はその塩の溶液
から実質的になる区分と他の区分に分別し、ＭＭ１．３
９’０ ２又はその塩を単離することによりなる上記の
倒れかによるＭＭ１ ３９０２又はその塩の製法。
８．ＭＭ１３９０２のジ塩基性塩の製造に用いる上記７
に従う方法。
９．前述したようなＭＭ４．５５０（複合物）の溶液を
クロマトグラフイー的にＭＭ１３９０２又はその塩溶液
から実質的になる区分と他の区分に分け、ＭＭ１３９０
２又はその塩を分離することからなる前述したような実
質的に純ＭＭ１３９０２又はその塩の製法。
【図面の簡単な説明】
図１、図２及び図３は、ＭＭ１．３９０２の実質的純ジ
ナトリウム塩についての紫外線吸収スペクトル、赤外線
吸収スペクトル及び核磁気共鳴スペクｌ・ルをそれぞれ
示すものである。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ ストレプトマイセス属のＭＭ１３９０２生産菌を培
    養し、培養物からＭＭ１３９０２又はその塩を採取する
    ことを特徴とする新規抗生物質の製法。
JP50038464A 1974-03-28 1975-03-28 シンキコウセイブツシツノセイホウ Expired JPS582675B2 (ja)

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CA (1) CA1050460A (ja)
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DE (1) DE2513854C2 (ja)
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LU72155A1 (ja) 1975-08-20
CA1050460A (en) 1979-03-13
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