JPH02191221A - イノシトールトリホスフェートを含有する移植に関する障害に対する医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ヒトを含む哺乳類における移植に関連する障
害又は疾患の予防、治療又は軽減のための、イノシトー
ルトリホスフェート（ＩＰ３）の少なくとも１種類の異
性体を含んで成る医薬に関する。

〔従来の技術〕

種々の器官又は組織の同じ体の他の領域への又は他の固
体への移植はこの頻度及び重要さを増している。改良さ
れた外科的技術及び免疫問題へのより良い理解が重要さ
の増大に寄与している。

心臓、腎臓、骨髄及び皮膚のごとき種々の器官及び組織
の移植は今日−船釣であり、腎臓移植が最もしばしば行
われている。移植はすでに増加しているが、幾つかの主
要な問題点が解決されれば多くの好結果で移植が行われ
る可能性が非常に高い。

移植されるべき器官が提供者から摘出された場合、血流
が減少し、そしてやがて停止する。この虚血の間、多く
の条件が変化し、これは受容者に導入された場合器官及
び器官にとって不都合である。特に、酸素圧が変化し、
これが酸素含有種の外観に影響を与える。これらの種は
細胞膜中の成分に損傷を与え、これが組織中の種々の細
胞の機能を退化せしめる。

器官が提供者から取られた後、該器官が受容者に移され
る前に常に一定の期間が存在する。この間に器官は３７
℃又は冷所に保存される。この間の器官に対する損傷は
該器官の機能及び生存の機会を減少せしめる。このこと
は、はとんどの場合において、提供者から器官を取り出
して受容者に移植するまでの時間は非常に短かくなけれ
ばならないことを意味する。これらの条件は、言うまで
もなく、移植数の増加及び行われた移植が成功する可能
性を非常に制限する。

新しい器官を受容者に導入する場合、この器官に血液が
流れ始める時期が存在する。この再循環期もまた器官の
生存及び機能のために非常に重要である。この場合もや
はり器官に不利に影響する反応性化合物が増加する。

器官を受容者に移植する場合の他の重要な要素は免疫問
題の発生である。多くの移植片は他の体に導入された場
合程度はともかく拒絶され、この結果機能が障害され、
又は最悪の場合には器官が拒絶される。

虚血又は再循間の期間に前記の効果を低下せしめるため
の方法は今日存在しない。

受容器に移植される前に器官を保存するための今日使用
されている一般的方法は温度を約０°Ｃに低下せしめる
ことである。ビタミンＥのごとき幾つかの化合物が貯蔵
期間を引き伸ばすために使用されているが、機能の喪失
を伴わないでより長期間器官を保存する手段が必要であ
る。

免疫的性質を緩和するため、シクロスポリンのごとき免
疫抑制剤と組み合わされたステロイドが使用されている
。しかしながら、この手段は深刻な副作用を生じさせ、
例えばシクロスポリンは腎毒性を有する。

〔発明が解決しようとする課題〕

移植された器官の機能を改善しそして拒絶の傾向を抑制
するために改良された手段が必要である。

〔課題を解決するための手段〕

本発明によれば、全く驚くべきことに、イノシトールト
リホスフェート（ＩＰ３）の少なくとも１種類の異性体
を用いることにより上記の課題が解決される。

ヨーロッパ特許Ｎ１１１７９４３９から、医薬活性成分
としてイノシトールトリホスフェートの少なくとも１つ
の異性体を含んで成る医薬組成物が知られている。この
特許においては、この医薬組成物の効果は異る分野、例
えば心臓血管疾患及び関節炎について示されている。

本発明は、移植に関連する障害を予防し、治療又は軽減
するため、例えば、虚血及び再循環による損傷を軽減し
又は治療するため；貯蔵期間を延長するため；移植され
た組織又は器官の機能を改善し、そして拒絶を導く免疫
反応を低下せしめるために、ＩＰ３を使用することに関
する。

本発明はまた、虚血及び再循環による損傷をこれらの状
態が病気において現われる場合に、及び−次的に移植に
関連しない状態、すなわち他のタイプの移植操作、バイ
パス手術、種々のタイプの梗塞、発作等を軽減又は治療
することに関する。

ＩＰ３の製造及びその種々の異性体の単離は米国特許Ｎ
ａ　４，７７７．１３４に開示されている。　ＩＰｓの
異性体はまた、例えばイノシトールとリン酸源から出発
して化学的又は酵素的合成法により製造することができ
る。さらにバイブリドＤＮＡ技法を含む微生物学的製造
法も適当である。

ＩＰ、の構造及びその種々の異性体が米国特許漱４．７
３５．９３６及び米国特許阻４．７９７，３９０に開示
されている。

本発明に従って使用される医薬は単位投与型で存在する
のが好ましい。このような単位投与のためには錠剤、顆
粒又はカプセルが好ましい、さらに、胃で制御されない
加水分解を防止し、そして騙での好ましい吸収を行うた
めに錠剤及び顆粒に表面処理例えば腸溶コートを行うこ
とができる。

他の適当な投与形は徐放形及び経皮投与形である。

常用の医薬として許容される添加剤、賦形剤及び／又は
キャリヤーを医薬に含めることができる。

錠剤及び顆粒はまた、これらを腸内で容易に崩壊せしめ
る崩壊剤を含有することができる。ある場合、特に急性
状態の場合には、静脈投与用溶液の形の単位投与形を用
いるのが好ましい。

医薬はまた、添加剤、試剤又はキャリヤーをなんら含有
せずＩＰＩのみから成ることもできる。

所望により、医薬は他のイノシトールホスフェートすな
わちＴＰＩ　　、Ｉｈ　　、ＩＰ４　．１ＰＳ及びＩＰ
、を含有しないことができる。従って、Ｉｈ異性体の混
合物が９０〜ｌＯＯ％例えば９３〜１００％又は好まし
くは９５〜１００％の純度を有することができる。

あるいは、この医薬は、それぞれが実質的に純粋な形で
存在する１又は複数の特定のＩＰ、異性体から成るか又
はそれを含んで成ることができる。

すなわち、種々の異性体を純粋な形で単離することがで
きこのことは、これらが８０〜１００％例えば８２〜１
００％、又は８５〜１００％、好ましくは９０〜１００
％の純度を有することを意味する。言うまでもなく、異
性体を純粋な形で製造することができるからそれらを任
意の比率で混合することができる。

医薬は、ＩＰ、、ＩＰＳ又はＩＰａの少なくとも１つと
ＩＰ３を生成せしめるのに適当な酵素のごとき分解性物
質とにより提供されるＩＰ３から成ることができる。

ミネラルバランスに負の影響を与えないように、本発明
の医薬の製造のために使用される１又は複数のＩＰ、異
性体が塩の形で存在するのがほとんどの場合において好
ましい、塩は好ましくはナトリウム塩、カルシウム塩、
亜鉛塩もしくはマグネシウム塩又はこれらの塩の２以上
の混合物である。

カルシウム塩もしくは亜鉛塩又はこれらの混合物が特に
好ましい、　ＩＰ３の異性体はまた一部はランタニド系
の１又は複数の生理的に許容される化合物の塩として存
在することができる。

上記の理由により、鉱酸又は有機酸とカルシウム、亜鉛
又はマグネシウムとの医薬として許容される塩１種類以
上を余分に医薬を含有するのも好ましい。これは特に、
しばしばこれらのミネラルを欠いている老人のために特
に価値がある。

ヒトの患者への投与のため、適当な投与量は、種々の投
与量で動物において得られた結果の延長により当業者に
より日常的に決定され得る。ヒトへの好ましい投与量は
０．１〜１０００■、特に０．１〜２００■ＩＰ、　７
日／ｋｇ体重の範囲である。

動物実験において、１６０■／ｋｇ体重という高投与量
でのマウスへの腹腔内投与の後、ＩＰａの毒性効果は見
られなかった。

医薬は、単位投与当り通常０．０１〜１．５ｇ、例えば
０．０５〜１．３又は好ましくは０．１〜１ｇのＩＰ３
を含有する。

１つの好ましいＢ様において、ＩＰＩはＤ−ミオ−イノ
シトール−１，２，６−トリホスフェートである。

この医薬の１つの機能は種々の細胞型の膜、特に血小板
、内皮細胞、赤血球及び好中球の細胞膜への損傷を回復
し、予防し又は軽減することである。この医薬の使用は
これらの細胞型の改良された安定性、変形に対する感受
性の低下、及び改良された機能をもたらす。さらに、例
えば血管壁への集合性及び付着のごときパラメーターが
低下する。

この医薬の使用が例えば細胞膜の脂質の過酸化を抑制す
る。

さらに、この医薬を使用する場合イノシトール代謝の正
常化が起こる。この医薬の使用の他の結果は膜流動性の
調節、コレステロールのごとき成分の導入、並びに種々
のホスホリピドの生産、導入及びバランスである。

この医薬の使用の他の結果は細胞の電解質バランスの調
整である０例えばカルシウム、カリウム、塩素、リン酸
等の細胞内レベルの調整が挙げられる。

細胞表面活性、及び例えばリン酸化による受容体の活性
化／不活性化を介しての外部刺激に対する応答は、この
医薬の使用により影響される他のパラメーターである。

この発明を以下の例によりさらに説明する。例１〜４は
ＩＰ３の製造を示し、他方例５及び６はＩＰ。

の溶液及び錠剤の調製を例示する。例７〜１０は移植に
関連する障害に対するＩＰ３の効果を記載する。

１、４　ｋｇのフィチン酸ナトリウム（トウモロコシ由
来、シグマケミカル社製）を１２００　ｆの酢酸ナトリ
ウム緩衝液（ｐＨ４，６）に溶解する。ジエストボラゲ
ット（ＪＭｓｔｂｏｌａｇｅｔ）　、スエーデン（乾物
２８％、窒素含量２％、リン含量０．４％）を撹拌しな
がら加え、そして４５°Ｃにてインキュベージリンを続
ける。放出される無機リンを測定することにより脱リン
酸化を追跡する。７時間後５０％の無機リンが放出され
た時、アンモニアを加えてＰＨ１２にすることにより加
水分解を停止せしめる。懸濁液を遠心し、そして上清を
集める。

８００１の上清をイオン交換カラム（ダウエックス１１
塩素形、１００（１１１Ｘ　１５０ｃｍ）に通し、そし
て塩酸の直線グラジェント（０−０，７Ｎ　ＨＣｆｆｉ
　）により溶出を行う。

リン／イノシトール比が３：ｌである例１により得られ
た両分を中和し、そしてカルシウム塩として沈澱せしめ
る１００■の沈澱物をＨ−ＮＭＲにより分析する。デー
タが示すところによればピークはミオ−イノシトール−
１，２，６−）リボスフエートから成る。

■ユ ０．５ｇのＤ−キロ−イノシトール（Ｄ−ｃｈｉｒｏ−
ｉｎｏｓｉｔｏｌ）をＩＩｄのリン酸に６０℃にて溶解
した。

２０ｇのボリソン酸を添加し、そしてこの混合物を真空
下１５０°Ｃにて６時間加熱した。混合物を水で稀釈し
て２００　ｍｌにし、そしてイオン交換カラム（ダウエ
ックスｌ、塩素形、２５鵬ｘ　２５０ｍｍ）に通し、そ
して塩酸の直線グラジェント（０−２，０ＮＨＩＪ’　
）により溶出した。

リンとイノシトールとの比率が６：ｌであるピークの成
分を、水酸化カルシウムの添加により沈澱せしめた。こ
の沈澱を濾過し、洗浄し、そしてＩＯ戚の陽イオン交換
樹脂と混合してイノシトールヘキサホスフェートの酸形
を得た。水酸化ナトリウムで中和し、そして凍結乾燥し
゛た後、Ｄ−キロ−イノシトールへキサホスフェートの
ナトリウム塩を得た。

貫土 例３に従って製造されたＤ−キロ−イノシトールへキサ
ホスフェートのナトリウム塩０．８ｇを３００　ｄの酢
酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，２）に溶解した。１．３
ｇの小麦フィターゼ（ＥＣ３，１，３，２６゜０．０１
５０／ｍｇ、シグマ・ケミカル社より入手）を添加し、
そして混合物を３８°Ｃにてインキュベートした。

５０％の無機リンの放出の後、アンモニアを加えてｐＨ
１２にすることにより加水分解を停止せしめた。

Ｄ−キロ−イノシトールホスフェート類を含有する混合
物をイオン交換カラム（ダウエックス１、塩素形、２５
ＷＸ　２５０１１１１）に通し、そして塩酸の直線グラ
ジェント（０−０，７Ｎ　ＨＣＩ　）により溶出した。

リンとイノシトールの比が３＝１であるピークを１．０
Ｍ水酸化ナトリウムにより中和し、そして凍結乾燥した
。

ＮＭＲ及びＩＲによる構造決定により、生成物がＤ−キ
ロ−イノシトールホスフェートであることが示された。

櫃 ＩＰ、のナトリウム塩０．５ｇ及び０．７７　ｇのＮａ
ｃｅを９８．７３ａｄの注射用水に溶解して、ヒト又は
動物に注射するために適当な溶液を得た。

Ｄ−ミオ−イノシトール−１，２，６−）リボスフェー
トのカルシウム塩の錠剤を次の様にして製造した。Ｄ−
ミオ−イノシトール−１，２，６トリホスフエートのカ
ルシウム塩５０ｇ、１３２ｇのラクトース及び６ｇのア
カシャガムを混合した。

次に、この混合物に精製水を加え、次に適当な稠度が得
られるまで混合を続けた。この混合物を篩に通し、そし
て乾燥せしめた。次に、この混合物を１０ｇのタルク及
び２ｇのステアリン酸マグネシウムとブレンドした。こ
の混合物を２００■の錠剤に圧縮した。

貫ユ ある動物から他の動物への移植はまず血流の減少及び新
たな動物における血液の再流を含む、この過程において
器官は容易に損傷され、そしてその指標としていわゆる
シッフ塩基が測定される。

ラビットの６個の腎臓の群において血流をまず１２０分
間減少せしめ、そして次に６０分間再流した。

６個の腎臓の他の群を同様に処理し、但し５０ｐｐｍの
Ｄ−ミオ−イノシトール−１，２，６−トリホスフエー
）（Ｉｈ）を血流の減少の前５分及び再流の前５分にお
いて２回投与した。腎臓の皮質及び髄質中のシッフ塩基
を測定した（対照に対する％）。

皮質　髄質 群ｌ（対照）　　　　　１００　　　１００群２（ｘｐ
ｓ）　　　　　２０　　　４５すなわち、ＩＰ！で処理
された腎臓は移植中の損傷に対して強く保護される。

肛 腎臓をラビットから摘出し、４８時間貯蔵し、そして次
に同じ動物に植えもどした。

１０ラビツトからの腎Ｎ（群１）を一定圧（１００■Ｈ
ｇ）において腎動脈を介して冷（４°Ｃ）高浸透圧クエ
ン酸塩によりフラッシュし、同じ溶液を含むビーカーに
入れ、０゛Ｃにて貯蔵し、ポリスチレン容器中で４８時
間氷で囲んでおいた。

他の１０ラツトからの腎臓（２群）を同じ条件下で、但
し前記高浸透圧クエン酸塩溶液に１ｍＭＤミオーイノシ
トールー１．２．６−トリホスフェートを加えて処理し
た。貯蔵期間の後、すべての腎臓を同じ提供動物に植え
もどし、そして血液再流の６０分間後に器官の損傷を測
定した。器官の損傷を反映する生成したシッフ塩基の量
を腎臓の皮質及び髄質において測定した（対照に対する
％）。

処　　理　　　　　　シッフ塩基（％）皮質　髄質 群１（対照）　　　　　１００　　　１００群２（ＩＰ
：ｌ）　　　　　１５　　　２４貯蔵溶液へのＩＰ、の
添加は貯蔵中の腎臓の種々の部分の損傷を減少せしめる
。

貫豆 腎臓を２匹の血液不適合のラビット（サンプイー・ロブ
対ニューシーラント・ホワイト）の間で同種移植した。

一対のラビットを対照として用い、他の対のラビットに
Ｄ−ミオ−イノシトール−１，２，６トリホスフエート
（ＩＰ３）を投与した。

提供動物に０．９％ＮａＣ１溶液を静脈内に投与するか
又はＮａＣ１溶液中ＩＰ３を５０■／ｋｇの投与量で静
脈内に投与した。提供動物から腎臓を得た後、この器官
を一定圧力（１００ｍｇＨｇ）にて腎動脈を介して冷（
４°Ｃ）高浸透圧クエン酸塩溶液でフラッシュし、同じ
溶液を入れた１００ｄのビータ−に入れ、そしてポリス
チレン容器中水で囲んでＯ″Ｃにて２４時間貯蔵した。

受容動物に、０．９％ＮａＣ１溶液を静的に（対照）又
は０．９％ＮａＣｊ！溶液中ＩＰ、を５０■／ｋｇの投
与量で腎臓移植後５日間静内投与した。対照動物は６日
目までに尿を通さなくなり、そして９日目に殺さなけれ
ばならなかった。

ＩＰ、を投与した動物は２９日目に殺したが、その時な
お良好な腎機能を有してした。この結果が示すところに
よれば、ＩＰ３は有意な免疫抑制特性を有し、そして同
種移植された腎臓の機能を劇的に改善した。

■利 皮膚を２匹の血液不適合ラビット（サンプイー・ロブ対
ニューシーラント・ホワイト）の間で同種移植した。

６対のラビットを対照として用い、他方７対のラビット
にＤ−ミオ−イノシトール−１，２，６−トリホスフェ
ート（ＩＰｓ　）を投与した。

提供動物に皮膚片の採取前１０分に０．９％Ｍａｃｌ溶
液を静脈内に投与する（対照）か、又は０．９％ＮａＣ
１溶液中５０■／　ｋｇのＩｈを静脈内に投与した。

受容動物に、移植の前及びその後５日間に０．９％Ｎａ
Ｃ１（対照）又は５０ｍｇ／ｋｇのＩｈを静脈内投与し
た。対照動物における皮膚移植片ｌＯ日日間後全体的に
拒絶され、他方、ＩＰ、処置された動物は実験を１７日
で終えた後拒絶の兆候を示さなかった。

この結果が示すところによれば、ＩＰ、処置は皮膚の移
植の後機能を改善しそして拒絶に対抗する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトを含む哺乳類における移植に関する障害又は疾
   患を予防し、治療し又は軽減するための、イノシトール
   トリホスフェート（ＩＰ＿３）の少なくとも１種類の異
   性体を含んで成る医薬。 ２、移植された器官の拒絶を緩和するための請求項１に
   記載の医薬。 ３、前記移植が皮膚の移植に関する、請求項１に記載の
   医薬。 ４、前記イノシトールトリホスフェートが塩の形である
   請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬。 ５、前記イノシトールトリホスフェート塩がナトリウム
   塩、カリウム塩、カルシウム塩又は亜鉛塩である、請求
   項４に記載の医薬。 ６、前記医薬が錠剤、又は顆粒の形である請求項１〜５
   のいずれか１項に記載の医薬。 ７、前記医薬が溶液の形である、請求項１〜５のいずれ
   か１項に記載の方法。 ８、前記イノシトールトリホスフェートがＤ−ミオ−イ
   ノシトール−１，２，６−トリホスフェートである、請
   求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬。