JPH02113890A - 光学活性なβ−ハロ乳酸又はグリシジル酸の合成法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、医薬品合成中間体である光学活性なβ−ハロ
乳酸又は光学活性なグリシジル酸を効率良く合成する光
学活性なβ−ハロ乳酸又は光学活性なグリシジル酸の合
成法に関するものである。

（従来の技術） β−ハロ乳酸又はグリシジル酸は、不整脈薬剤など多く
の医薬品を合成する際の合成中間体として重要な化合物
である。従来、多くの合成医薬品は、光学活性体でなく
、ラセミ体の形で使用されることがほとんどであったが
、近年、光学活性体が薬効を持ち、ラセミ体は薬効がな
い例が見出され、有効な光学活性体を合成しようという
機運が高まってきている。しかし、よく知られているよ
うに、従来の有機合成法では光学活性体を合成すること
がきわめて困難で、通常、ラセミ体しか合成できない。

光学活性体である合成医薬品を得るには、合成の中間段
階で光学活性体を得て、これから最終の医薬品にＨＡ　
”！する方法がしばしば用いられている。

重要な医薬中間体であるβ−ハロ乳酸又はグリシジル酸
においても同様で、光学活性なβ−ハロ乳酸や光学活性
なグリシジル酸を得る試みがなされている。例えば（イ
）ヒルシュベインらは、クロロピルビン酸を乳酸脱水素
酵素で還元してβ−クロロ乳酸としたのち、水酸化カリ
ウムを加えて還化させることで光学活性なグリシジル酸
を合成している〔ビー・エル・ヒルシュベイン、ジー・
エム・ホワイトサイド、アメリカ化学会誌、（Ｊ、Ａｍ
。

Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、）　１０４巻４４５８　（１９８２
年）〕。

また、別の例としては、（ロ）３−クロロ−１，２−プ
ロパンジオールを微生物で酸化させたのち、上記ヒルシ
ュベインらの報告と同様水酸化カリウムを加えて還化さ
せる方法を報告している〔大橋、長谷用、有機合成化学
４５巻、３３１頁（１，９８７年）〕。

一方、２−ハロ酸デヒドロゲナーゼは、し−ハロ酸をＤ
−ヒドロキシ酸にするこで知られている〔ジャーナル・
オン・バイオロジカルケミストリー誌（Ｊ、Ｂｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、）第２４３巻、４２８頁（１９６８年）、ジ
ャーナル・オン・ヨーロピアン・バイオケミストリー誌
（Ｊ、Ｅｕｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、）第２１巻、９９頁（
１９７１年）及びアグリカルチュラル・バイオロジカル
・ケミストリー誌（Ａｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、
）　　４６　巻、　　８３７頁（１，９８２）、特開昭
５７−１．２５６９０．１２５６．Ｉｌ１号公号公報時
にＬ−クロロプロピオン酸からのＤ−乳酸の製造は工業
的な光学活性乳酸の有効な方法である。また、２−ハロ
酸デヒドロゲナーゼを用い、ラセミ体のクロロプロピオ
ン酸からの光学活性乳酸の製造法も知られている（特開
昭５９−３１６９０号公報）。

しかし、α位の炭酸だけでなくβ位の炭素もハロゲン化
されたα、β−ジハロプロピオン酸のα位の炭素を脱ハ
ロゲン化することは全く知られていなかった。

（発明が解決しようとする課題） 前記した（イ）の方法では、高価なＮＡＤＩ＋と呼ばれ
る補酵素を使用しなければならない問題があり、経済的
に光学活性なβ−ハロ乳酸又は光学活性なグリシジル酸
の合成法にはなり得す、この欠点を改善する目的で、グ
ルコース６−りん酸膜水素酵素を用いる、いわゆる補酵
素再生産系と共役している方法が提案されているものの
、十分な経済的効果は得られておらず、しかも、反応系
が２つの酵素と補酵素ＮＡＤ）Ｉとの共存系であるため
、極めて複雑となるという問題があり、また、（ロ）の
方法では、補酵素再生の問題点が解消されるものの、収
率が１０〜２８％ときわめて低くという問題があり、こ
れらの方法は、光学活性なβ−ハロ乳酸又は光学活性な
グリシジル酸を得るための工業的に有１１な方法と言え
ない。

一方、前記したように２−ハロ酸デヒドロゲナーゼは、
Ｌ−ハロ酸をＤ−ヒドロキシ酸にすることで知られてい
るものの、α位の炭素だけでなく、β位の炭素もハロゲ
ン化されたα、β−ジハロプロピオン酸のα位の炭素を
脱ハロゲン化することは全く知られていなかった。

（課題を解決するための手段） 本発明者らは、安価にしかも工業的に有利な光学純度の
高い光学活性なβ−ハロ乳酸又は光学活性なグリシジル
酸の合成法を提供することを目的として鋭意研究の結果
、α、β−ジハロプロピオン酸を原料とする光学活性な
β−ハロ乳酸又は光学活性なグリシジル酸の合成に２−
ハロ酸デハロゲナーゼを利用すれば、上記の目的が達成
しうろことを見出し、本発明に到達した。

すなわち、本発明は、α、β−ジハロプロピオン酸に２
−ハロ酸デハロゲナーゼを作用させることを特徴とする
光学活性なβ−ハロ乳酸の合成法、ｐｌ＋が９を越える
条件下でα、β−ジハロプロピオン酸に２−ハロ酸デハ
ロゲナーゼを作用させることを特徴とする光学活性なグ
リシジル酸の合成法及び請求項１で得られたβ＝ハロ乳
酸とアルカリを含む溶媒とを反応させて光学活性なグリ
シジル酸を得ることを特徴とする光学活性なグリシジル
酸の合成法を要旨とするものである。

本発明に用いられるα、β−ジハロプロピオン酸として
は、例えば、ジクロロプロピオン酸、ジブロモプロピオ
ン酸、ショートプロピオン酸などのα、β−ジハロゲン
体があげられる。

また、本発明においては、安価なアクリル酸をハロゲン
化して得たものを用いることもできる。

本発明に用いられる２−ハロ酸デハロゲナーゼとは、酵
素番号Ｅ、Ｃ，３，８，１，−に分類する酵素群の総称
であり、ハロゲン置換されたカルボン酸のα位のハロゲ
ンを脱ハロゲン化する活性。

を有する酵素である。これらの酵素は、カビや細菌から
入手することができ、例えばトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈ
ｒｏｄｅｒｍａ）、アクロスタラグムス（Ａｃｒｏｓｔ
ａｌ　　ｍｕｓ）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉ
ｕｍ）、クロレスタチス（Ｃｒ　ｏ−明記±±■）など
のカビや、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
、アースロバフタ−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）　、
リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）、アグロバクテリウ
ム（Ａ　ｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）　、バチルス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ）　、アルカリジュネス（Ａｌｃａｌｉ　
ｅｎｅｓ）、ノーカルブイア（Ｎｏｒｃａｒｄ　ｉａ）
、ミクロコツカス（旧ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）　、アクロ
モバクタ−（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）、モラゼラ
（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ）などの細菌があげられる。特に
シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ皿復
ｄａ）　１．０９株（微工研菌寄第１０２６２号）由来
の酵素は特異性が高く有効である。この苗株は宇治市内
の畑作土壌から採取してきた土からの菌を、０．３％の
α−クロロプロピオン酸　の単一の炭素源と。

して、０．５％の硫安、０．１％のりん酸−カリウム、
０．１　％のりん酸二ナトリウム２水和塩、ｐＨ７，０
の培地で、試験管内において、集積培養して得たもので
ある。またシュードモナスＵＫＩ１．３株（微工研菌寄
５６６６号）はＤ型のα、β−ジハロプロピオン酸の脱
ハロゲンに有効である。

本発明で光学活性なβ−ハロ乳酸を合成するには、例え
ば、α、β−ジハロプロピオン酸を緩衝液に溶かし、こ
の溶液と２−へロ酸デハロゲナーゼ又は２−ハロ酸デハ
ロゲナーゼを含有する菌体とを混合して実施すればよい
。このときの緩衝液としては、例えば、クエン酸、酢酸
、リン酸、トリス、イミダゾール、コリジン、バルビタ
ール、炭酸、ホウ酸などの緩衝液が適宜使用され、その
濃度としては、１０〜５００＋＋＋Ｍ、特ニ２０〜２ｏ
ｏｍＭが適当である。

そして、α、β−ジハロプロピオン酸の濃度（Ｗ／Ｖ％
）としては、０．１〜１０００が適当であり、１０〜５
００、特に５０〜３００が好ましい。また、２−ハロ酸
デハロゲナーゼの使用星としては、α、β−ジハロプロ
ピオン酸の量と反応が完結するのに要する時間とから決
定されるが、例えば１００ミリモルのα、β−ジハロプ
ロピオン酸を８時間でβ−ハロ乳酸を得るためには、約
２１０ユニ７トの２−ハロ酸デハロゲナーゼを使用すれ
ばよい。

このとき、ｐＨが９を越える条件では、グリシジル酸が
β−ハロ乳酸と共に蓄積されるので、ｐＨを９以下にす
ることが好ましく、さらに７〜９にすることが好ましい
。反応温度としては、１０’Ｃ〜７０℃が適当で、２０
℃〜５０℃が好ましく、特に３０℃〜４０°Ｃが好まし
い。

このようにしてβ−ハロ乳酸水溶液が得られ、得られた
β−ハロ乳酸水溶液がらβ−ハロ乳酸を単離するには、
例えば得られたβ−ハロ乳酸水溶液のｐＨを４以下に下
げ、さらに必要ならば、食塩、塩化カリウム、塩化マグ
ネシウム、硝酸ナトリウム、臭化カリウム等の無機塩を
適量加えたのち、水に溶解しない有機溶媒、例えば、酢
酸エチル、エーテル、塩化メチレン、クロロホルム、プ
ロピオン酸メチルなどで抽出し、この抽出液を乾燥後、
濃縮し、β−ハロ乳酸の固形物として単離することがで
きる。

次に光学活性なグリシジル酸を合成するには、例′えば
上述の光学活性なβ−ハロ乳酸を合成する方法でｐｌ＋
が９を越える条件下、好ましくは９．５〜１１の条件下
で行うことにより、−段階で合成することもできるが、
グリシジル酸への変換率を上げるために、２段階に分け
て行うことも出来る。

すなわち、上述のようにして単離した光学活性なβ−ハ
ロ乳酸の固形物とメタノール、エタノールなどのアルコ
ール類、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）やジメチルス
ルホキシド（ＤＭＳＯ）などのアミド溶媒などに水酸化
カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化リチウムなどのア
ルカリを加えた溶媒とを反応させることによって、光学
活性なグリシジル酸を得ることができる。

このときのアルカリの濃度としては、０．１〜２０モル
／Ｉ！が適当であり、０．５〜１．０モル／１、特に１
〜５モル／ｌが好ましい。

また、β−ハロ乳酸は連続して加えることも、少しずつ
滴下することも、数回に分けて加えることも、−度に加
えることも可能である。このときの温度としては、−５
０〜３０℃が適当であり、＝３０〜１０℃、特に−２０
〜Ｏ℃が好ましく、β−ハロ乳酸を加えた後の温度とし
ては、−３０〜５０℃が適当であり、−２０〜３０℃、
特に−５〜２０℃が好ましい。

このようにして得た反応液を濾別したのち、上清中に目
的の光学活性なグリシジル酸を得ることができる。

本発明において、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ）１１．３株由来の２−ハロ酸デハロゲナーゼとシ
ュードモナス・プチダ１０９株由来の２−ハロ酸デハロ
ゲナーゼを用い、α、β−ジハロプロピオン酸から、０
体と５体の光学活性なβ−ハロ乳酸又は０体と１、体の
光学活性なグリシジル酸を分別して合成することもでき
る。

すなわち、α、β−ジハロプロピオン酸ラセミ体を用い
、まず、α、β−ジハロプロピオン酸の１７体のみに使
用する性質を有するシュードモナス・プチダ１０９株由
来の２−ハロ酸デハログナーゼ（以下Ｌ−２−ハロ酸デ
ハロゲナーゼという、）を用いて０体の光学活性β−ハ
ロ乳酸又は０体の光学活性なグリシジル酸を合成し、次
に反応系にシュードモナス（Ｐｓｅｕｃｌｏｍｏｎａｓ
）　１１３株由来の、α、β−ジハロプロピオン酸の０
体及び５体に使用する２−ハロ酸デハロゲナーゼ（以下
り、Ｌ−２−ハロ酸デハロゲナーゼという。）を作用さ
せて５体の光学活性なβ−ハロ乳酸、又は、５体の光学
活性なグリシジル酸を得ることができる。

本発明に用いられる２−ハロ酸デハロゲナーゼは、精製
酵素、粗酵素液又は菌体をそれぞれ単独で用いることも
出来るが、これらを高分子担体に固定化するか、あるい
は架橋して水不溶性にするかして用いてもよい。その高
分子担体としては、例えば、セルロース、デキストラン
、アガロースなどのような多糖類のｇＲ体、ポリスチレ
ン、エチレン−マレイン酸共重合体、架橋アクリルなど
のようなビニルポリマーの誘導体、Ｌ−アラニン−Ｌ−
グルタミン酸共重合体、ポリアスパラギン酸などのよう
なポリアミノ酸又はポリアミド誘導体、ガラス、アルミ
ナ、ヒドロキシアパタイト、セライトなどのような無機
物の誘導体などがあげられ、これらに結合、包括、ある
いは吸着せしめればよい。

また、架橋するには、グルタルアルデヒド、ジイソシア
ナート、ビスジアゾベンシジン、などの２価試薬と精製
酵素、粗酵素液又は菌体とを混合し２て反応させればよ
い。

上記のごとき、固定化物又は架橋物は、合成にさいし、
繰返し使用しうるだけでなく、バッチ法に加え、カラム
法によって実施することができ、特にカラム法による場
合、連続的に光学活性なβハロ乳酸又は光学活性なグリ
シジル酸を合成できるという大きな利点がある。このと
きのカラム法の条件としては、カラムの上からでも下か
らでも流すことができこのときのカラムの流速としては
、用いるカラムの大きさ、中にある固定化物又は架橋物
によって異なるが、菌体をゼラチンとグルクルアルデヒ
ドで架橋したものを、５００　ｃｃの容積のカラムにつ
めたものでは、０．５ｎ＋！！、／分〜２０１ｗ７！／
分が適当で、１ｍｌ／分〜１０ｍＡ／分が好ましく、特
に２ｍ６／分〜５ｍｆｆ　／分が好ましい。

（実施例） 次に本発明を実施例により具体的に説明する。

実施例１ ０．５％（重量％を表す、以下同様）硫酸アンモニウム
、０．１　％りん酸−カリウム、０６１　％りん酸二ナ
トリウム、０．０１％硫酸マグネシウム、０．０００５
％ｇ酸第−鉄、ｏ、ｏｏｏｓ％水酸化カルシウム、０４
０００１％硫酸マンガン、０．０００１％モリブデン酸
ナトリウム、０．３％α、β−ジクロロプロピオン酸を
含むｐＨ７，０に調整した培地２０１にシュードモナス
・プチダ１０９株（微工研菌第１０２６２号）を接種し
、３０℃で培養した。

次に培養して得た菌体を遠心分離によって回収した後、
超音波処理によって、菌体を破砕して破砕液を得た。こ
の破砕液に４０％飽和になるように硫酸アンモニウムを
加え、沈殿を除去し、得られた上清に、さらに７０％飽
和になるように硫酸アンモニウムを加え、沈殿を回収し
た。沈殿をｐＨ７．５のりん酸緩衝液を用い、懸濁し、
さらに透析し、ＤＥＡＥ−セファセルカラム（６Ｘ５９
ｃｍ、ファルマシア社製）に供与した。５０ｍＦ１から
５００ｍ１ｌのりん酸緩衝液ｐＨ７，５によって展開し
、活性のある分画を集め、硫酸アンモニウム７０％飽和
にて沈殿化させ、ｐＨ７，５りん酸緩衝液に透析し、ヒ
ドロキシアパタイトカラムに供与した。５１から１００
ｍＭのりん酸緩衝液で展開し、活性のある分画を集め、
前述のように硫安分画したのち、セファデックスＧ−１
５０カラム（３Ｘ　１３０ｃｍ　、ファルマシア社製）
によってクロマトグラフィーを行ってＬ−２−ハロ酸デ
ハログナーゼを精製した。

精製した酵素２０ユニ７）を１０ｍｇのα、β−ジクロ
ロプロピオン酸（ラセン体）を含むｐＨ８，５の５０ｍ
ＦＩ炭酸媛衝液３緩衝液１に加え、３０℃で１０時間反
応させた。反応液より酵素を限外濾過器で回収したのち
、塩酸でｐＨを約１にし、食塩を飽和するまで加え、３
００ｍｊｌ’の酢酸エチルを用いて３回抽出したのち、
硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮乾固した。さらにこの乾
固物をトルエンとベンゼンをに９で混合した溶媒で再結
晶化させ、白い斜状結晶のＤ−β−クロロ乳酸を２．８
　ｍｇ得た。

この結晶を元素分析したところ、炭素２８．９３％、水
素４．００％、塩素２８．４４％であった。用いたラセ
ミ体、α、β−ジクロロプロピオン酸の半量がＬ−α、
β−ジクロロプロピオン酸であったとして、収率を求め
ると、６４％であった。また、Ｄ−乳酸脱水素酵素とＬ
−乳酸脱水素酵素により、この結晶を分別定量し、Ｄ−
β−クロロ乳酸の光学純度を（Ｄ−β−クロロ乳酸−Ｌ
−β−クロロ乳酸／Ｄ−β−クロロ乳酸＋Ｌ−β−クロ
ロ乳酸）×１００として求めたところ、９４％であった
。

実施例２ ３つ首のガラス製酵素反応器（容量１５０ｍｐ）の２つ
の入口に管をつけ、平膜型限外濾過膜（ミ２１ボア社製
）につないだ。これにｐＨ８，５の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ
−ｓｕｌｆａｔｅ緩衝液を入れ、１時間に５７！の流速
で循環させ、反応器を湯浴で３０℃に保った。

この反応器の別の入口から、実施例１と同様にして精製
した２−ハロ酸デハロゲナーゼを１００ユニ・ノド加え
、そこへさらに管をつけ、循環液と同じ緩衝液に溶かし
、４℃に保存しである５００ｍＭのα、β−ジクロロプ
ロピオン酸（ラセミ体）を１時間に５０ｃｃの流速で加
えた。

−Ｆ記の限外濾過膜を通った溶液の一部を一時間に５０
　ｃｃの流速で連続的に回収し、４℃に保存した。この
反応を約３日間行ったのち、３．２ｊ！のβ−クロロ乳
酸液を得た。これに塩酸を加え、ｐＨ１にし、食塩を飽
和するまで加え、計５１の酢酸エチルで数回に分けて抽
出し、硫酸ナトリウムで濃縮、乾固して粗β−ハロ乳酸
を得た。この粗β−ハロ乳酸をベンゼンによって再結晶
化させ、８２ｇの白い斜状結晶のＤ−β−クロロ乳酸を
得た。

この結晶を元素分析したところ、炭素２８．９１％、水
素４．０６％、塩素２８．５０％であった。また、Ｄ−
β−クロロ乳酸を誘導体化して’ＨＮＭＲで光学純度を
測定したところ、９６％であった。

次に上記で得られたＤ−β−クロロ乳酸５０ｇを１００
ｍＡのメタノールに溶かしたものを、５００ｔｓｅのメ
タノールにＫＯ８５０ｇを溶かしたフラスコに少しずつ
滴下した。この操作は、氷で冷やしながら、１０℃を越
えないように行った。

滴下終了後、室温（２５℃）で約３時間かきまぜ、生じ
た塩化カリウムを濾過によって除き、氷冷したメタノー
ルで洗い、４０．２ｇのし一グリシジル酸カリウムを得
た。

、二のときの収率は９１％であり、’ＩＩ　ＮＭＲでＬ
−グリシジル酸カリウムを誘導体化して光学純度を」１
ｊ定したところ、８８％であった。

実施例３ ０．３％ＤＬ−４、β−ジクロロプロピオン酸、０．５
％硫酸アンモニウム、Ｏｏｌ　％りん酸−カリウム、０
．１％りん酸二ナトリウム、ｏ、ｏｉ％硫酸マグネシウ
ム、を含むｐＨ７，０に調整した培地２０７！にシュー
ドモナスＵＫ１１３株（徽工研寄第５６６６号）を接種
し、３０℃で培養した。

次に培養して得た菌体を遠心分離によって回収し、ダイ
ノミルによって国体を破砕して粗酵素液を得た。この粗
酵素液から実施例１と同様に精製し、Ｄ、Ｌ−２−ハロ
酸デハロゲナーゼを得た。

次に０．０５モルのり、　　Ｌ−α、β−ジクロロプロ
ピオン酸をｐＨ８，５の５０ｍＭ）リス塩酸緩衝液１０
０ｍｐ、に溶かし、実施例１で精製したし−２−ハロ酸
デハロゲナーゼを６０ユニット加え、ｐＨスタットを用
い、５ＮＮａＯＨでｐＨを８．５に維持しながら、３０
℃で一昼夜反応させた。

反応後、ｐ＋＋を塩酸で２に下げ、エバポレーターでン
？縮した。濃縮液から酢酸エチルでＤ−α、βジクロロ
プロピオン酸とＤ−β−クロロ乳酸を抽出した。エタノ
ールをエバポレーターで除いた後、残った？８液をギ酸
化型のダウエ・７クカラム（室町化学工業社製５．ＯＸ
　５０　ｔＵ＞に供与した。

０゜５　Ｍのギ酸でＤ−β−クロロ乳酸を溶出し、２Ｍ
のギ酸でＤ−α、β−ジクロロプロピオン酸を溶出した
。二つの両分を集め、エバポレーターでギ酸を除いた。

＞、Ｈ縮したＤ−α、β−ジクロロプロピオン酸を約３
０倍に希釈し、ｐｉ（を８．５に調整し、今度はＤ、Ｌ
−２−ハロ酸テハログナーゼを６０ユニット加え、前述
のように、−昼夜反応させた。反応後、ｐｉ＋を塩酸で
２に下げ、エバポレーターで乾燥させた。乾固物から酢
酸エチルでＬ−β−クロロ乳酸′を抽出した　得られた
Ｄ−およびし−β−クロロ乳酸をベンゼンを用いて再結
晶化させてＤ−β−クロロ乳酸を２．８６　ｍｇ（２３
ｍ　ｍｏｌｅ）、Ｌ−β−クロロ乳酸を２．２４ｍｇ　
（１８ｍｎｏ＋ｅ）得た。得られたＤ−β−クロロ乳酸
を元素分析したところ、炭素が２８．９２％、水素が３
，９９％、塩素が２８．４５％であった。また、Ｌ−β
−クロロ乳酸を元素分析したところ、炭素が２８．９３
％、水素が４３０１％、塩素が２８．４２％であった。

さらにそれぞれの収率は、Ｄ−β−クロロ乳酸が９２％
、Ｌ−β−クロロ乳酸が７２％であり、光学純度は、Ｄ
−β−クロロ乳酸が９７％、Ｌβ−クロロ乳酸は９２％
であった。

次に上記で得られたＤ−β−クロロ乳酸２　ｍｇを氷で
冷やしながら、０．１ｇのＫＯＨを含む０．５ｍＡのメ
タノールに溶かした後、水冷をやめ７、室温（２５℃）
で数時間混合した。

次いで生じた塩化カリウムを遠心分離して除き、約０℃
に冷やしたメタノールで洗浄し、Ｌ−グリシジル酸カリ
ウムを得た。

Ｌ−β−クロロ乳酸も同様にしてＤ−グリシジル酸カリ
ウムを得た。

このときのし−グリシジル酸カリウム及びＤ−グリシジ
ル酸カリウムの収率は、それぞれ９５％と９６％であり
、’ＨＮＭＲでＬ−グリシジル酸カリウム及びＤ−グリ
シジル酸カリウムを誘導体化して光学純度を測定したと
ころ、それぞれ９０％と８７％であった。

実施例４ シュードモナス・プチダ（ハ鵠封懸胆り匹旦並）１０９
株（微工研菌寄第１．０２６２号）の湿菌体６０ｇに１
０％のゼラチン１０ｎ＋＋２　　を練り込んだのち、細
目の金網で裏ごしをした。得られた粒状の菌体の塊を５
％のグルタルアルデヒドに４時間浸漬させた後、良く水
洗し、カラム（直径２０ｆｌ、長さ２５０肩貢）に詰め
た。

次に５ｇのα、β−ジブロモプロピオン酸（ラセミ体）
を含むｐＨ８，５のホウ酸緩衝液３００ｍｊ！を流速２
ｍｌ／分でカラムに流した。カラムのジャケットに４　
ｏ　’ｃの温水を流し、保温した。カラムからの溶出液
を集め、塩酸を加えてｐｌ＋を杓４に下げ１、生じた沈
殿を濾別後、濾液をｐＨ４の５０　ｍＦ酢酸ナトリウム
緩衝液で平浄ｉ化させた陰イオン交換樹脂（ダウエック
ス１．室町化学工業社製）カラム（直径３０罵嘱、長さ
５００１ｍ）に吸着させた。

同ｉ；緩衝液の食塩濃度勾配により、吸着した光学活性
なグリシジル酸（Ｌ−グリシジル酸）を溶出した。グリ
シジル酸両分にエーテルを加え、抽出後、濃縮、乾固し
てグリシジル酸を得た。

得られたグリシジル酸を元素分析したところ、炭素３２
．６８％、水素２．７４％、カリウム３５．５２％であ
り、α、β−ジブロモプロピオン酸の半ｈ１が１、−α
、β−ジブロモプロピオン酸としたときの収率は８２％
であった。得られたし一グリシジル酸を誘導体化して’
　Ｉｔ　Ｎ　Ｍ　Ｒで光学純度を測定したところ、８７
％であった。

（発明の効果） 本発明によれば、安価な原料を用いて医薬品中量体とし
て重要な光学活性なβ−ハロ乳酸又は光学活性なグリシ
ジル酸を効率的に合成でき、しかも従来の酵素法にみら
れた高コスト、低収率ならびに繁雑な工程を克服するこ
とができるなど、工業上測り知れないものがある。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）α、β−ジハロプロピオン酸に２−ハロ酸デハロ
   ゲナーゼを作用させることを特徴とする光学活性なβ−
   ハロ乳酸の合成法。
2. （２）ｐＨが９を越える条件下でα、β−ジハロプロピ
   オン酸に２−ハロ酸デハロゲナーゼを作用させることを
   特徴とする光学活性なグリシジル酸の合成法。
3. （３）請求項１で得られたβ−ハロ乳酸とアルカリを含
   む溶媒とを反応させて光学活性なグリシジル酸を得るこ
   とを特徴とする光学活性なグリシジル酸の合成法。