JPH01317391A - Ｄ―β―ヒドロキシアミノ酸を取得する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸を取得する方法
に関する。Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸は抗生物質、酵
素阻害剤等の各種の医薬、農薬類、その他各種の生理活
性物質の合成原料として有用である。

〔従来の技術及び発明が解決しょうとする課題〕Ｄ−β
−ヒトａキシアミノ酸は有機合成法やＬ〜ルアミノのラ
セミ化で作ったＤＬ−アミノ酸を光学分割して製造され
ている。その場合、Ｄ−アミノ酸は長い工程を、経て製
造される為に、その手間が大変であり、また収率も低く
なっていた。

安価で大量に生産されているグリシンとアルデヒド化合
物とｋ、”−スレオニンアルドラーゼＣＤ−スレオニン
をグリシンとアセトアルデヒドに分解する酵素で、逆反
応を触媒する活性も有する）の存在下で反応させること
により、対応するＤ−β−ヒドロキシアミノ酸を製造す
る方法が知られている（特開昭５８−１１６６９０号公
＠）。

しかし、この方法ではアルデヒド化合物がグリシンやＤ
−β−ヒドロキシアミノ酸（以後、これらをアミノ酸と
略記する）と非酵素的に副尺１２を起こすので反応収率
が低く、また、未反応のグリシンが装置に残存する等の
課題かあった。

〔課題を解決する為の手段〕

本発明の第１の発明は、グリシン金属錯体とアルデヒド
化合物とを、Ｄ−スレオニンアルドラーゼの存在下、反
応させて、Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸金属錯体に変換
して後、Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸を取得する方法で
ちる。

第２の発明は、ニッケル及び／又はコバルトラグリシン
金属錯体の金属として用いるものである。

Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸金属錯体からは、公知の方
法にエリ脱金属して容易にＤ−β−ヒドロキシアミノ酸
を取得出来る。

グリシン金属錯体を基質として用いる本発明の方法に工
れば次の利点がある第一に、ニッケル及び／又ホコバル
トが上記アミノ酸と安定な錯体を形成するので、上記ア
ミノ酸とアルデヒド化合物との副反応が抑制され、高収
率でＤ−β−ヒドロキシアミノ酸を得ることができる。

第二に上記グリシン金属錯体を基質に用いて反応すると
遊離のグリシンを用いた場合に比べて高い基質転化率を
得ることが出来る。

第三に、高濃度のグリシンニッケル錯体やグリシンコバ
ルト錯体が、菌体内に含まれる望ましくない反応の触媒
として作用する酵素、例えば、Ｌ−アロスレオニンアル
−ラーゼ（Ｌ−アロスレオニンをグリシンとアセトアル
デヒドに分解する酵素で、逆反応を触・渫する活性も有
する）や、Ｌ−スレオニンアルトラ−ｆ（Ｌ−スレオニ
ンをグリシンとアセトアルデヒドに分解する酵素で、逆
反応の触媒として作用する活性も有する）を強力に阻害
・不活性化するので、［有体や粗研製の酵素を用いるこ
とが出来る。

不ポ明のごとく、高濃度の金（′４錯体を基質とする酵
素反応は知られておらず、従って、本発明の方法は新規
な酵素反応方法である。

本発明で用いるグリシン金属錯体としては、グリシンニ
ッケル錯体又はグリシンコバルト錯体がＤ−スレオニン
アルドラーゼとの反応性やり一β−ヒドロキ７アミノ酸
の収率の点で好掘である。

他の余病錯体としてぼカドミウム、鉄、マンガン、マグ
ネシウム等の金属錯体を使用でさる。更にこれらの錯体
を任意に併用できるが、この中でニッケル錯体とコバル
ト錯体の併用がよい。本発明に好適に用いるグリシンニ
ッケル錯体、又はグリシンコバルト錯体の一般式は ［：Ｍ（ＮＨ２ＣＨ２ＣＯ２）ｒｎ］・ｎＨ２０（＆中
、Ｍ［今頃であり、Ｍがニラ。ケルの場合ｍ＝２、ｎ＝
［］〜２、Ｍがコバルトの場合ｍ＝３、ｎ＝Ｑ〜２であ
る） で示さｎる化合物である。また、二９ｆ４頌以上の金属
Ｔｈ會むクリシン金属錯体、例えばニッケルとコ本発明
で用いるグリシン金属錯体は、例えば、金属埋水溶液に
グリシンとアルカリを加えて加熱するなどの通常の方法
で合成することが出来る。

本条明に用いるアルデヒド化合、吻は、脂肪族アルデヒ
ド、脂環式アルデヒド、芳香族アルデヒｖ１複累環式ア
ルデヒド化合物停であり、例えば、脂肪族アルデヒド化
合物として、アセトアルデヒド、１−グロパナール、１
−ブタナール、２−メチル７”ａパナール、１−ペンタ
ナール、１−ヘキサナール、１−ヘキサナール、クロロ
アセトアルデヒド、フェニルアセトアルデヒド、ニドａ
アセトアルデヒー、β−クロロアセトアルデヒド、エト
キシアセトアルデヒド等、 ｑｈｉ式アルデヒド化合物として、シクａ−りンチルア
ルデヒ「、ンクＯ／（ンテニルアルデヒド、シクロへキ
ンルアルデヒゾ、シクロへキセニルアルデヒに、シクロ
へキシルアセトアルデヒー、シクロヘキセニルアセトア
ルデヒＶ等、 芳香族アルデヒド化合物として、ペンでアルデヒド、７
０口ベンズアルデヒド、クロロペンでアルデヒド、ブロ
モペンでアルデヒド、ニドａベンズアルデヒド、りａａ
ニドａペンでアルデヒド、ヒトミキシニトロベンゾアル
デヒド、メトキシペンでアルデヒド、２ａロメトキシベ
ンでアルデヒド、トルアルデヒド、トリフロロトルアル
デヒド、フェニルアセトアルデヒド等、 複素環式アルデヒド化合物として、２−チオフェンアル
デヒド、ブａモー２−チオフェンアルデヒド、４−フォ
ルミルイミダゾール、４−メチル−５−フォルミルイミ
ダゾール等を用いることが出来る。

本発明で用いるＤ−スレオニンアルｒラーセハＤ−スレ
万ニンに作用してグリシンとアセトアルデヒドとに分解
する酵素であり、例、えば、アルカリｒ不スＨハエ力リ
ス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ）（工
Ｆ○１２６６９）シュードモナス（Ｐｓｅｕｃｌｏｍｏ
ｎａｓ）ＤＫ−２（微工研閑寄６２０口号）、アリスロ
バクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　）　Ｄ　Ｋ　−
１９（微工研閑寄６２０１号）、及びキサントモナス・
オリデエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ　ｏｒｙｚａｅ　）
　（ＩＡＭ　１６５７　）等がこのＤ−スレオニンアル
ドラーゼを生産する能力を有する。

上記微生物は常法に従って培養することが出来る。培養
に用いられる培地ｊ・ゴ、微生物の生育に必彎な炭素源
、窒素源、無機物Ａ等を含む通常の培地である。史に、
ビタミン、アミノ酸などの有機做電栄養素を添加すると
望ましい結果が得られる場合が多い。

培養は好気的条件下でｐＨ４〜１０、＠度２０〜６０゛
Ｃの適当な範囲に制御しつ１〜１０日間培養を行う。

反応にあ九つでは、微生物の培養液、培養液から分離し
た培養菌体、乾燥菌体、菌体破砕液等のほか、硫酸アン
モニウムや有機溶媒等で分割した粗精製酵素、車！＃さ
れた酵素、史には、菌体、菌体処理物、ちるいに酵素自
体の固定化物、その他側れも使用出来る。

グリシン金属錯体とアルデヒド化合物を対応するＤ−β
−ヒドロキシアミノ酸金属錯体に変換する方法は、水性
媒体中にて上記グリシン金属錯体とアルデヒド化合物を
、上記微生物の培＃液、菌体、菌体α埋物、酵素、ある
いは、これらを通漱の方法で固定化したものと接触させ
れば工い。かかる反応時の水性媒体としては、例えば、
水、緩衝液、及び含水有機溶媒等が団用できる。

反る敵のアルデヒド化合物の＠度は酵素を著しく阻害・
失活させない程度であればよいが、０．０５〜２．０モ
ル／ｌが好ましい。

上記グリシン余積錯体は、アルデヒド化合物と等モル程
度で工いが、グリシンの反応収率を高めるためにぼ、ア
ルデヒド化合物エリ中なくするのが工い。かかるグリシ
ン金属錯体、及びアルデヒド化合物の添加は反応の任意
の段隋で可能であり、−括、連続、分割のいずれの手段
で、も実施出来る。

反応１ｍ１ｕ１０〜７０°Ｃが、ｃ　イカ、１０〜４０
°Ｃがエリ好適である。反応時のＰ）（は５〜１０、好
ましくは、５．５〜７．０に維持するのがよい。補酵素
として、ピリドキサール−５７−リ／酸を反応系に添加
すると酵素活性を高めて反応を促進させることが出来る
。

また、反応系にマグネシウムイオンやマンがンイオンを
添加することにエリ酵素活性、及び活性の安定性を高め
て反応を促進させることが出来る。

反応はバッチ方式がよく、連続方式で行ってもよい。か
くして、反りは０．５〜５０時間程時間路了する。

このＬうにして得られたＤ−β−ヒＰロキシアミノ酸を
反応液から採取するには、例えば、上記アミノ酸金属錯
体ｆｃ溶解して後、限外濾過等で除タンパクし、イオン
交換樹脂等で分離・回収する方法や、反応液を濃縮して
上記アミノ酸金属錯体を析出させた後、溶解し、脱金属
する方法など、通常の方法を用いることが出来る。

例えば、反応混合物を強力チオン交換樹脂に吸着させた
後に、アルカリ金属塩の水溶液で溶出すれば、能率良〈
高収率で、上記三成分を同時に分離・回収できる。

上記操作で反応液から分離したＤ−β−ヒトａキシアミ
ノ酸は゛イオン交換樹脂処理、活性炭処理、晶析等の方
法で精製し、この反応液を濃縮するなどして単離・精製
することが出来る。

〔実施例〕

矢に、実施例によＱ本発明の方法を更に詳しく説明する
。例中％は重債憾を示す。また、記号Ｔｈｒ　ＸＡ１１
ｏはそれぞれスレオニン、アロスレオニンを表わす。

酵素製造例 ポリベグトン０．５％、酵母エキス０．５％、ＫＨ２Ｐ
０゜０．１％からなるＰＪ（７，５の培地ｔ−Ａ製し、
５を容の培養槽にその６ｔを投入して１２０°Ｃで１５
分間加熱殺菌した。この培地にアリスロバクター（Ａｒ
ｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　）　Ｄ　Ｋ　−１９（微工蛮菌
寄第６２０１号）を接種し、ｐＨ７，５に保ちながら３
０℃で２０時間通気および攪拌をしつつ培養した。

培養終了後、培ｆ液から菌体を遠心分離し、生理食塩水
で洗浄後、この湿菌体を［］、１１ｍＭピリドキサール
−５′−リン酸おＬび１．Ｑ　ｍＭ　ＭｎＣｌ２を含む
ｐＨ７，５のＱ、ｊ　Ｍ　トリス−塩酸緩衝液１００ｍ
１中に懸濁した。この菌体懸濁液を２０　ＫＨｚ　ｚ　
　５分間の超音波処理を４回行ない菌体を破砕し、懸濁
物質を遠心分離で除去して粗製酵素液を調製した。

次に、粗酵素液を攪拌しながら、冷アセトンを添加し、
アセトンａ度４５〜６５％区間の析出物を分取し、上記
緩衝液１０Ｍに溶解してアセトン分画酵素液を調製した
。

熱処理菌体製造例 酵素製造例１と同様の方法で培養して得たアリスミバク
ター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　）　Ｄ　Ｋ　−ｉ　
９　（微工研萌寄６２０１号）の培＃ａ’＞、ｏｔから
遠心分離で菌体を集菌・水洗し、この湿菌体を０．０１
ｍＭピリドキサール−５７−リン酸、及び１　、０　ｍ
Ｍ　ＭｎＣｌ２を含む水溶液ｉ　ｏ　ｏ　ｖｔｔに＠濁
し、ｐＨ６，０に合わせた。次に、この菌体懸濁液を５
５°Ｃで１２０分間加熱処理を行い、遠心分離で集菌・
水洗後、１０ｍ１の上記水溶液にＳ濁して、熱処理菌体
製造例を調製した。

実施例１ 酵素製造例で得た粗酵Ｘ１１０１Ｍにグリシンニッケル
錯体ＣＮ１（ＮＨ２ＣＨ２ＣＯ２）２〕・２Ｈ２０、ク
リシンコｌマルト錯体〔ｃｏ（ＮＨ２ＣＨ２ＣＯ２）３
１・２Ｈ２０または、グリシン水溶液に、水酸化コバル
トと水酸化ニッケルを加え、加熱・濃縮して得たグリシ
ン・コバルト・ニッケル錯体〔ｃｏ−Ｎ１・（ＮＨ２Ｃ
Ｈ２ＣＯ２）５〕・４Ｈ２０を０．１５．！？及び、ア
セトアルデヒ）’　［１，２ｇＴｈｔｔｒｏ、５Ｍ　）
　ＩＪ　スー塩ｅ緩ｉ液（ｐＨ７−５）　’ｃ１０ｍＪ
ｍ合し、密閉容器内で３０’Ｃ，１０時間反応させた。

反応終了後、０．６Ｎ塩酸を２０Ｍ加えた後、遠心分離
で不溶物ｆ：ｌ＃、去し、約１０陪に希釈した反応Ｈｋ
　Ｄｏｗｅｘ　Ａ　−１（Ｎａ型、１００〜２００メツ
シユ、り゛ウケミカル社）で脱金属して、１（ＰＬＯ（
日立アミノ酸分析システム）でグリシン、及びスレオニ
ン毘性体混合物を定量した。各々のスレオニ／異性体は
、Ｎ−カルボキシＬ。−フェニルアラニン無水物ＣＮＣ
Ａ　）と反らさせてソアステレオマ−に？＆換後、ＨＰ
ＬＣ’　（力５　Ａ　：　ＯＤＳ　６．ＯＸ　２５０朋
、　弓￥！ｈ相：　虐Ｉ　　Ｍ　ＫＨ２ＰＯ４−に２Ｈ
Ｐ０４　　（ｐ’　５．Ｏ）／ｃＩ＋３ｃｕ　−９６／
　４、流速：１．Ｏｄ１分、検出：２１０ｎｒｎ）で分
析した。また、比較としてグリシン０．１ｇを基質に用
いて上記の方法と同様にして反応を行った。

これらの分析結果を第１表に示す。

第　　１　　表 実施例２ 酵素製造例で得たアリスミバクター（Ａｒｔｈｒｏｔ：
ａｃｔｅｒ）Ｄｘ−１９（ｉ工研菌寄６２ｏ１号＞　）
酵ｒｉ１［］ＱｍＡにグリシンニッケ／ｌ／　３．０　
ｇｒ　、　ＭｎＣ４２０，１ｍモル及びアセトアルデヒ
ド［］、５ｍＡ１，６０分毎に１０回添加（合計５．Ｏ
Ｒ／りして、攪拌下、６゜′Ｃで反応を行なった。反応
中は密閉状態？保ち、０．２　Ｎ−ＮａＯＨで反応ｐＨ
を６６５に保った。

反応開始２０時間後、濃塩酸で反応液のＰＨ全２．０に
低下させ、遠心分離で不溶物を除去した後、分画分子量
５万の限外ろ過膜で懸濁物質と高分子量物質を除去した
。次に、この反応液を減圧願発して未反応のアセトアル
デヒドを除去し、１０ｒｎどの活性炭カラム（ツルミコ
ールＧｔ、−３０）ＫＡ液液後Ｈ＋型にしたＤｏｗｅｘ
　５０　Ｗｘ　８　（５０から１００メツシユ、ダウケ
ミカル社製）を充填した１０口酩のカラムに通液し、脱
イオン水で洗浄後、０．２Ｍのアンモニア水で吸着物ｆ
ｆ’を溶出させ、β−ヒトミキシ−α−アミノ酪酸を含
む両分を採取し、濃縮後、メタノールを加えて結晶を析
出させ、０．８ｇの結晶を得た。この結晶についてＮＭ
Ｒ，ＩＲ。

元素分析を行ないβ−ヒげロキシーα−アミノ酪酸であ
ることを確認した。更に、実施例１と同様の方法でスレ
オニン異性体分析を行なったところ全てＤ一体であり、
Ｄ−スレオニンとＤ−アミスレオニンの比が２．５であ
った。

実施例６ グリシン金属錯体としてグリシンニッケルを用いて、各
種アルデヒド化合物について実施例１と同様々方法で反
応を行なった。

反応終了後、薄層りσマドグラフィーで生成β−ヒドロ
キシアミノ酸を分離・定量した。薄層りａマドグラフィ
ーは、１−プロパノールと２５幅アンモニア水の比が２
：１の混合液を展開溶媒とじてシリカゾル薄層上でクロ
マトグラフィーを行い、二／ヒドリンで発色させ、デン
シトメーター（Ｃ３−９１０、島津製作所）で定量した
。これらの分析結果’ｔ’第６表に示す。

生成β−ヒドロキシアミノ酸の同定は、反応液を限外ろ
過し、イオン交換樹脂カラム精製後、上記した条件の薄
層りａマドグラフィーで展開し、生成物を抽出、真空乾
燥してＣ１３−ＮＭＲ、及びＨｌ−ＮＭＲで分析するこ
とにエリ行なった。

また、生成β−ヒドロキシアミノ酸の光学純度はＮ−カ
ルボキシし一フェニルアラニン無水物（ＮＣＡ　）と反
応させ、ジアステレオマーに変換した後、ＯＤＳカラム
を用いる液体クロマトグラフィーによる分析、光学分割
カラム（キラルパツク、ダイセル社製）を用いる液体ク
ロマトグラフィーによる分析、及びシフト試薬を用いた
ＮＭＲ分析にエフ測定した。上記の方法で生成β−ヒド
ロキシアミノ酸を分析し九ところ全てＤ一体であった。

第３表　Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸 の生成量（ｍモル） 実施例４ 酵素製造例で得友アリスロ／々クター（Ａｒｔｈｒｏｔ
ｎｃｔｅｒ）ｐｘ−１９（做工研菌寄６２０１号）の酵
素液１００ｍ１ＶＣり’）　シン＝ツ’ｙル６．ｃＪ　
＆、ＭｎＣｌ２０．１ｍモル及び０−フロロベンでアル
デヒド０．５ｍｌを５０分毎に１０回恭加（合計５．０
ｒｎｌ）して、攪はん下で６０℃で反応を行なった。反
応中は密閉状態を保ち、０．２　Ｎ−ＮａＯＨで反応−
を６．５に保った。

反応開始２０時間後、濃塩酸で反応液のＰＨを２．０に
低下させ、遠心分離で不溶物を除去した後、分画分子−
な５万の限外ろ過模で懸濁物質と高分子槍物質？除去し
た。矢に、この反応成金５Ｑｍｌの活性炭カラム（ツル
ミコールｏｔ、−３０）に通液して生成物を吸着させ、
脱イオン水で十分に洗浄した後、酢酸２０％、フェノー
ル５．０係の混合水溶液で吸着物質を溶出させ、０−フ
ロロフェニルセリンの溶出部分全採取した。

次に、このＯ−フロロフェニルセリンの溶出部分を脱イ
オン水で１．Ｏ４に希釈し、Ｈ＋型にしたＤｏｗｅｘ　
５　Ｑ　Ｗｘ　８　（５０から１００メツシユ、ダウケ
ミカル社製）を充填した１００Ｍのカラムに通液し、脱
イオン水で洗浄後、０．５Ｍのアンモニア水で吸着物質
を溶出させ、０−フロロフェニルセリンの鑓出部分を採
取した。

仄に、１−グロパノールと２５％アンモニア水の比が２
：１の混合液を展開溶媒としてシリカケ９ル薄層上でク
ロマトグラフィーを行い、生成物を抽出後、エタノール
で結晶化して０．１　ｇの結晶を得た。この結晶１ｄ　
Ｉ　Ｒ、ＮＭＲ，及び元素分析から　。

ところ全てＤ一体であり、Ｄ−スレオニンとＤ−アロス
レオニンの比は２．５であった。

実施例５ シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）　Ｄ　Ｋ
　−２（機工研菌寄第６２００号）を用い、酵素製造例
と同様に培養し、培養液から調製したアセトン分画酵素
液を用いて、実施例１と同様にして反応し、反応液に含
まれるアミノ酸を分離・定量した。

これらの分析結果を第４表に示す。

第　　４　　表 実施例６ アルカリすネスハエ力リス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆ
ａｅｃａｌｉｓ　ＩＦＯ１２６６９）　’ｊｒ：用い、
酵素製造例と同様に培養し、培養液から調製したアセト
ン分画酵素ｇを用いて、実施例１と同様にして反応させ
、反応液に含まれるアミノ酸を分離・定量した。

これらの分析結果を第５表に示す。

第　　５　　表 実施例７ シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）　Ｄ　Ｋ
　−２（機工ｆ［！寄６２００号）、アルカリゲネス・
・・エカリス（Ａｌｃａ、ｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａ
ｌｉｓ　）　（ＩＦＯ１２６６９）、及びキサントモナ
ス・オリデエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｏｒｙｚａｅ　
）　（ＩＡＭ　１６５７　）　Ｉｔ：用い、酵素製造例
と同様に培養し、培養液から調製したアセトン分画酵素
液を用い、グリシンニッケルとペンでアルデヒドを基質
とし、実施例１と同様の方法で酵素反応を行い、生成物
を分離・定量した。これらの分析結果を第６表に示す。

生成フェニルセリンは全てＤ一体であった。

第６表　　Ｄ−フェニルセリンの生成量（ｍモル）実施
例８（菌体反応の例） 酵素裂造例と同様の方法で培養して得たアリスロバクタ
−（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　）　Ｄ　Ｋ　−１９（
機工研菌寄６２０１号）の培養液６．０ｔから遠心分離
で菌体を集菌・水洗し、Ｑ、Ｑ　１ｍＭ＆リドキサール
ー５７−リン酸、及びｉ　、Ｑ　ｍＭ　ＭｎＣ６２を含
む水溶液１００１Ｍに１！！！濁し、−を６．０に調製
した。次に、この菌体懸濁液を５５°Ｃで１２０分間加
熱処理を行ない、遠心分離で水洗・集菌後、１０−の上
記水溶液に＠濁した。この菌体懸濁液を用いて実施例１
と同様にして反応、分析を行なった結果を第７表に示す
。

第７表 実施例９（熱処理菌体の例、グリシンニッケル）熱処理
菌体製造例で得た菌体懸濁液１００　ｍｌにグリシンニ
ッケル錯体［Ｎ１（ＮＨ２ＣＨ２ＣＯ２）２］・２Ｈ２
０を３、ＯＦ及び、アセトアルデヒド０．５１ｆｆｉ３
０分毎に１０回添加しく合計５ｍ１）、攪はんしｉがら
３０’Ｏで２０時間反応を行なった。反応中は密閉状ｄ
ｔ−保ち、［１，２Ｎ−ＮａＯＨで反応液のＰＩ−１に
６．０に維持し比。反厄液に含まれるアミノ酸全定曾し
几ところ、Ｄ−β−ヒトミキシアミノ酪酸１．２４．９
゜グリシン０．９７．９であった。

反応終了後、濃塩酸で反応液の−を２．０に低下させ、
遠心分離で不溶物を除去した後、分画分子量５万の限外
ろ過嘆で懸濁物質と高分子楡物質を除去した。次に、こ
の反応液を減圧蒸発して未反応のアセトアルデヒドを除
去し、１０Ｍの活性炭カラム（ツルミコールＣ）Ｌ−５
０）に通液し、精製反応ｇを調製した。矢に、この反応
′ｇｌを２００ｒｎｔに希釈し、Ｈ＋型にしたＤｎｗａ
ｘ　５０　Ｗｘ　８　（５０から１００メツシエ、ダウ
ケミカル社製）を充填した６５Ｍのカラムに通液し、脱
イオン水６００Ｍで洗浄後、０．２Ｍの塩化ナトリウム
水溶液で吸着物質を溶出させ友。溶出液縫が５０１から
２５０Ｍの画分にＤ−β−ヒドロキシアミノ酪酸が溶出
し、２５０から５００　ｖｔｌの画分にＤ−β−ヒドロ
キシアミノ酪酸とグリシンの混合物が、次の６００成か
ら６００Ｍの溶出画分にグリシンが溶出し之。

グリシンが溶出した後、１．７ｔ、＜の塩化ナトリウム
水溶液をカラムに通液したところ、６００から８４０１
１Ｌｌの画分にニッケルが溶出した。

Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酪酸の溶出画分を蒸発乾固し
、エタノールから再結晶させＤ−β−ヒドロキシアミノ
酪酸の結晶を０．９５　、？全得た。

Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酪酸トゲリシンの混合物溶出
画分も同様にして結晶化し、Ｄ−β−ヒても同様にして
結晶化してグリシンの結晶０．７１ｇを得友。

溶出し之ニッケルは炭酸ナトリウムと反Ｃ８せて炭酸ニ
ッケルに変換し、酵素反応に使用した量のほぼ全ｆ’に
回収した。

実頬例１０（熱処理菌体の例、グリシンコバルト）グリ
シンコバルト錯体ＣＣＯ（ＮＨ２ＣＨ２ＣＯ２）３１２
Ｈ２０３，０，９全基質として、実施例１と同様に酵素
反応を行い、Ｄ−β−ヒドロキンアミノ酪酸１．３６　
ｇ。

グリノン０．８８　ｇを含む酵素反応液を得た。

この反り液を実施例９と同様にしてＤ−β−ヒドロキシ
アミノ酪酸、グリシン、及びコバルト全溶出・分離した
。

次に、Ｄ−β−ヒドロキンアミノ酪酸の溶出画分４１発
乾固し、エタノールから再結晶させＤ−β−ヒドロキン
アミノ酪酸の結晶′ｆ！：０．９４．９得た。

Ｄ−β−ヒげａキシアミノ＠酸とグリシンの混合物溶出
画分も同様にして結晶化し、Ｄ−β−ヒドロキシアミノ
酪酸０．２４　ｇとグＩＪ　、７ン０．１７．！ｉ’の
混合物を得之。又、グリシンの溶出画分についても同様
にして結晶化してグリシンの結晶０．６６ｇを得た。

溶出したコバルトは炭酸ナトリウムと反Ｇｇせて炭酸コ
バルトに変換し、酵素反応に使用した量のほぼ全ｆｊ全
回収した。

〔発明の効果〕

本発明の方法に：れば犬着に生産されているグリシンと
アルデヒド化合物からに対応するＤ−β−ヒドロキシア
ミノ酸を製造しつるので、工業的なり一β−ヒトａキシ
アミノ酸の製造法として極めて優れた方法である。

特許出願人　　電気化学工業株式会社 手続補正書 平成１年３月２５日 特許庁長官　　吉　１）文　毅　殿 平成１年特許願第４０２０３号 ２、発明の名称 Ｄ−β−ヒドロキシアミノ酸を取得する方法３、補正を
する者 事件との関係　　特許出願人 住所　■１００　東京都千代田区有楽町１丁目４番１号
明細書の発明の詳細な説明の欄 ５、補正の内容 １）第６頁第１行の「β−クロロアセトアルデヒド、」
を削除する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）グリシン金属錯体とアルデヒド化合物とを、Ｄ−ス
   レオニンアルドラーゼの存在下、反応させて、Ｄ−β−
   ヒドロキシアミノ酸金属錯体に変換して後、Ｄ−β−ヒ
   ドロキシアミノ酸を取得する方法。 ２）グリシン金属錯体の金属が、ニッケル及び／又は、
   コバルトである請求項１）記載のＤ−β−ヒドロキシア
   ミノ酸を取得する方法。