JPH0394696A

JPH0394696A - 光学活性体の製造方法

Info

Publication number: JPH0394696A
Application number: JP18182389A
Authority: JP
Inventors: Masao Kuwabara; 桑原　正雄; Takashi Furusato; 古里　孝; Hiroyuki Narishima; 成島　裕之; Michito Tagawa; 道人田川; Shuzo Araya; 新家　修造
Original assignee: Nissan Chemical Corp
Current assignee: Nissan Chemical Corp
Priority date: 1988-09-05
Filing date: 1989-07-14
Publication date: 1991-04-19

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（イ）産業上の利用分野本発明は、安一価な化学的合戒法で得られるＮ置換力ル
ポニル一〇，　Ｌ−アミノ酸及び／又はその塩に、微生
物の培養菌体及び／又はその培養処理物を作用させて酵
素的にし−アミノ酸とＮ一置換カルボニル−Ｄ−アミノ
酸とに光学分割する方法に関するものである。

（口）従来の技術及び発明が解決しようとする問題点Ｎ−アシルーＤ，Ｌ−アミノ酸のうちＬ体のみのアシル
基を選択的に脱アシル化ししＬ−アミノ酸を製造する方
法は、従来より知られている（特開昭６３−２２１８８
号公報等）。

しかし、従来報告されている脱アシル化化酵素は、含リ
ンアミノ酸や酸性アミノ酸のＮ−アシル体の脱アシル化
活性が弱い。

一般式〔１〕のＮ−置換カルボニル一〇，Ｌ−アミノ酸
及び／又はその塩において、Ｎ−アシルーＤ，Ｌ−２ア
ミノー４−メチルホスフィノ酪酸及び／又はその塩を光
学分割して得られるＬ−２−アミノー４−メチルホスフ
ィノ酪酸は除草剤として用いることができる化合物であ
る。

現在、２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸はラセミ
体として使用されているが、除草活性を示すのはＬ体で
あり、活性本体であるＬ−２−アミノー４メチルホスフ
ィノ醋酸の選択的で安価な製造方法が望まれている。

近年、農薬は高い活性を持ち且つ環境に優しいものが求
められ、環境への影響の軽減のため不活性な異性体を環
境中へ放出しないことが望まれている。

Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸は、醗酵法
によっても製造することができるが高価なものとなる。

又、酵素的にＮ−アシルーＤ．Ｌ−２−アミノー４−メ
チルホスフィノ酪酸からＬ−２−アミノー４−メチルホ
スフィノ酪酸を製造する方法は、シュードモナス属、ス
トレプトミセス属又はアスベルギルス属の培養菌体を用
いる方法（特開昭５５−４７６３０号公報）とペニシリ
ンＧ−アシラーゼを用いる方法（特開昭５７１３８３９
４号公報、特開昭６４−５１０９９号公報）が報告され
ているのみである。

しかし、前者により得られたＬ−２−アミノー４−メチ
ルホスフィノ酪酸の旋光度は最大［α］Ｄ＝２３゜（Ｃ
＝Ｌ　ＩＮＩＩＣＩ）であり、光学純度は低い（特開昭
６４−５１（１０９号公報）。

又、これらの酵素の作用温度は２８〜３５゜Ｃであり５
０″Ｃでは失活（特開昭５５−４７６３０号公報）し、
工業的な製造法としては有用ではない。

更に、Ｎ−アシル〜Ｌ−２−ア旦ノー４−メチルホスフ
ィノ酪酸以外のＬ−アミノ酸のアシル体に対しては、作
用が弱いか全く作用しない（特開昭５５−４７６３０号
公報）。

工業的とは言えない。

又、従来報告されているアミノアシラーゼは、Ｎ−アシ
ルーＤ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸の
アシル基に対しては全く作用しないことも知られている
（特開昭５７−１３８３９４号公報）。

一方、後者のペニシリンＧ−アシラーゼによる方法は脱
離基としてフェナシル基を用いるため、（ハ）問題点を
解決するための手段本発明等は上記問題点を解決すべく鋭意努力検討した結
果、Ｎ一置換カルボニル−Ｄ，Ｌ−アミノ酸のうち、Ｌ
一体だけを選択的に脱置換カルボニル化（例えば、脱ア
セチル化）して、Ｌ−アミノ酸に変換することのできる
微生物を見いだし本発明を完成するに至った．即ち、本発明は、アくドカルポニル化反応等により安価
に製造できる一般式（１） −ＣＯＯＨを、Ｒ１は水素原子、炭素数１〜１０のアル
キル基、ハロゲン置換炭素Ｈ１−ｔｏ（７）アルキル基
を、Ｒ２は炭素数１〜５のアルカノイル基、ベンゾイル
基、ハロゲン置換炭素数１〜５のアルカノイル基、ハロ
ゲン置換ベンゾイル基を示す。）で表されるＮ一置換カルボニル一〇，Ｌ−アミノ酸及び
／又はその塩に、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、ス
タフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属
、バチルス（Ｂａｃｉ−＋１ｕｓ）属、フラボバクテリ
ウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アクロモハ
クタ−（Ａｃｈｒｏａ＋ｏｂａｃｔｅｒ）属、アルカリ
ゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属から選ばれる細菌
及び／又はアクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅ
ｓ）属、ストレプトスポランジウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓ
ｐｏｒａｎｇｉｕｍ）属、セベキア（Ｓｅｂｅｋ　ｉａ
）属から選ばれる放線菌から選ばれた微生物の培養菌体
及び／又はその培養処理物を作用させ光学分割を行うこ
とを特徴とするＬーアごノ酸及びＮ−置換カルボニル−
Ｄ−アミノ酸の製造方法に関するものである。

以下、本発明を詳細に説明する。

一ｉ式（１）のＮ一置換カルボニル一〇，Ｌ−アミノ酸
及び／又はその塩において、ａ　ｉ！！！！　５　Ｒ　’である炭素数１〜１０のア
ルキル基の具体例としては、メチル基、エチル基、．ｎ
−プロビル基、ｉ−プロビル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブ
チル基、ｔ−ブチル基、ベンチル基、ヘキシル基、ヘプ
チル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等が挙げられ
る。

置換基Ｒ１であるハロゲン置換炭素数１〜１０のアルキ
ル基において、ハロゲンとしては塩素、臭素等が挙げら
れ、その具体例としては、クロロメチル基、クロロエチ
ル基、クロロプロビル基、クロロプチル基、クロロペン
チル基、クロロヘキシル基、クロロヘプチル基、クロロ
オクチル基、クロロノニル基、クロロデシル基、プロモ
メチル基、プロモエチル基、プロモプロピル基、ブロモ
ブチル基、フロモペンチル基、プロモヘキシル基、プロ
モヘブロモ基、プロモオクチル基、プロモノニル基、プ
ロモデシル基等が挙げられる。

置換カルボニル基Ｒ２である炭素数１〜５のアルカノイ
ル基の具体例としては、ホルミル基、アセチル基、プロ
ピオニル基、ｎ−ブチリル基、ｉ−プチリル基、ｎ−ペ
ンタノイル基、ｉ−ペンタノイル基等が挙げられる。

置換カルボニル基Ｒ２であるハロゲン置換炭素数１〜５
のアルカノイル基において、ハロゲンとしては塩素、臭
素等が挙げられ、その具体例としては、クロロカルボニ
ル基、クロロアセチル基、クロロプ口ピオニル基、・ク
ロロプチリル基、クロロペンタノイル基、プロモカルボ
ニル基、プロモアセチル基、プロモプロピオニル基、プ
ロモブチリル基、プロモペンタノイル基等が挙げられる
。

置換カルボニル基Ｒ２であるハロゲン置換ベンゾイル基
において、ハロゲンとしては塩素、臭素等が挙げられ、
その具体例としては、クロロベンゾイル基、プロモベン
ゾイル基等が挙げられる。

しかしながら、置換カルボニル基Ｒ２は、本微生物酵素
で脱離されてＬ−ア旦ノ酸を生威し得る置換カルボニル
基であればどの様な基であってもよい。

ｍ式ｃ１〕のＮ−置換カルボニル−Ｄ，Ｌ−アミノ酸の
塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム
塩、カルシウム塩等が挙げられる。

本発明に使用される微生物としては、セラチア（Ｓｅｒ
ｒａｔｉａ）属、スタフィ口コツカス（Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ）属、バチルス（Ｂａｃｉ　ｆｌｕｓ）
属、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ）属、アクロモバクター（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅ
ｒ）属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属
から選ばれる細菌及び／又はアクチノプラネス（Ａｃｔ
ｉｎｏｐｌａｎｅｓ）属、ストレプトスポランジウム（
Ｓ　ｔｒｅｐ　ｔｏｓｐｏｒａｎｇ　ｉｕｍ）属、セベ
キア（Ｓｅｂｅｋｉａ）属から選ばれる放線菌から選ば
れた微生物のうち、Ｎ一置換カルボニル一〇，Ｌ−アミ
ノ酸及び／又はその塩のＬ体だけを選択的に脱置換カル
ボニル化（例えば、脱アシル化）して、Ｌ−アミノ酸に
変換することのできる微生物であればよい。

この様な微生物は一般に入手又は購入が容易である保存
株から選択することもできるし、又は自然界から分離す
るもできる。

尚、これらの菌株に変異を生じさせて一層生産性の高い
菌株を得ることもできる。

又、これら菌株の細胞中に存在する酵素の生産に関与す
る遺伝子を切り出し、これを適切なベクター、例えばプ
ラス５ドに挿入し、このヘクターを用いて適当な宿主、
例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒ　ｉｃｈ　ｉａ　ｃｏｌｉ
）や枯草菌（Ｂｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉ−　１ｉｓ）
或いは放線菌のごとき異種宿主又は同種宿主を形質転換
することにより、本発明の酵素生産株を人為的に創製す
ることもできる。

本発明に使用する微生物のうち、−１’ＩＱに入手可能
な細菌の例としては、セラチア・マルセッセンスＩＦ０
　１２６４８　（Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｃｅｓｃｅ
ｎｓ　ＩＦＯ　１２６４８）％スタフィロコッカス・ア
ウレウスＩＦＯ　１２７３２　（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ＩＦＯ　１２７３２）　、ア
クロモバクター・エスビーＩＦＯ　１３４９５　（Ａｃ
ｈｒｏｍｏｂａｃＬｅｒ　ｓｐ，ＩＦＯ　１３４９５）
が挙げられる．又、一般に入手可能な放線菌の例としては、アクチノプ
ラネス・リグリアエＩＦＯ１３９９７　（Ａｃｔｉｎｏ
−ｐｌａｎｅｓ　ｌｉｇｕｒｉａｅ　ＩＦＯ　１３９９
７）、セベキア・ベニハナＩＦＯ　１４３０９　（Ｓｅ
ｂｅｋｉａ　ｂｅｎｉｈａｎａＴＦｏ　１４３０９）が
挙げられる。

更に、本発明者等が、土壌より分離した細菌の例として
は、埼玉県白岡町の土壌より分離したバチルス・セレウ
スＮＣＢ　１９−１　（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕ
ｓＮＣＢ１９−１）、バチルス・プレビスＮＣＢ　１１
　（Ｂａｃｉｌｌｕｓｂｒｅｖｉｓ　ＮＣＢ　１１）、
フラボバクテリウム・エスピーＮＣＢ　１２−２　（Ｐ
ｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｐ．　ＮＣＢ　１２−
２）、静岡県伊東市の土壌より分離したアルカリゲネス
・レイタスＮＣＢ　４−１２　（＾Ｉｃａｌｉｇｅｎｅ
ｓ　ｌａｔｕｓ　ＮＣＢ　４−１２）が挙げられる。

又、土壌より分離した放線菌の例としては、埼玉県の土
壌から分離したストレプトスポランジウム・エスピーＮ
Ｃ　２６（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ　ｓｐ
．　ＮＣ２６）が挙げられる。

とれらの微生物の菌学的性質を示すと以下の通りである
。

■．バチルス・セレウス　ＮＣＢ　１９−１　（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ　ＮＣＢ　１９−１）株の菌学
的性状。

Ａ．形態 ■形及び大きさ：桿菌１．Ｑ　〜１．２　Ｘ３．Ｏ　〜５．０　ｐｍ■多形式
：一連又は二乃至四連 ■運動性：有り ■胞子の有無：有り胞子の形′：楕円胞子の形成部位：中立〜亜端立胞子のう：非膨出 ■ダラム染色性：陽性Ｂ．生育状況 ■肉汁寒天平板培養生育良好、不定形又は拡散状、表面は培養日数の経過と
共にシワ状となり、内容はバター状不透明で乳白色を呈
す。

■肉汁寒天斜面培養生育良好、樹木状に生育、表面はシワ状となり内容はバ
ター状不透明で乳白色を呈す。

■肉汁液体培養生育良好、表面に発育し菌膜を形威、培養日数の経過と
共に、混濁し菌体は乳白色を呈す。

■リトマスミルク液化速やかにペプトン化しわずかにリトマ脱色。

■肉汁ゼラチン穿刺液化される。

Ｃ．生理学的性質 ■硝酸塩還元　　　：有り ■脱窒素反応　　　：無し ■ＭＲテスト　　　：陰性 ■ＶＰテスト　　：陽性、ＶＰブロスのｐｏ＝ｓ．　４
■インドールの生ｔ？．：無し ■硫化水素の生戒　：無し ■デンプンの加水分解二有り ■クエン酸の利用　：有り ■卵黄反応　　　　：陽性［相］色素の生Ｉｙ．：無し ■カタラーゼ　　　：有り＠ゼラチンの分解　：有り ■生育Ｐ｝Ｉ　　：ｐＨ５〜９で生育可能■生育温度　
：１５〜４５゜Ｃで生育するが、５゜Ｃ或いは５０゜Ｃ
では生育しない。

０酸素に対する態度：嫌気的に増殖する。

［相］塩化ナトリウム耐性：７％で生育せず。

■○−Ｆテスト：グルコースより醗酵的に酸を生成する
がガスは生成しない。

［相］チロシン分解　　：有りＤ．糖類から酸の生戊の有無Ｌ−アラビノースＤ−キシロースＤ−グルコース　　　＋マルトース　　　　　＋ショ糖　　　　　　　　十乳糖トレハロース　　　　＋Ｄ−ソルビットＤ−マンニットイノシフトグリセリン　　　　＋ＮＣＢ　１９−１株の菌学的性質を、バージーズ・マニ
ュアル・オブ・システマティク・バクテリオロジーの記
載に照合すると、培養性状、生理学的性質及びＩＪ！Ｊ
Ｔから酸の生或の特徴から、ＮＣＢ　１９−１株は、バ
チルス・セレウスの種に属する一菌株と認められる。本
菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所に微生物受託
番号微工研菌寄第１０４５８号（ＦＥＲＭＰ−１０４５
８）として寄託されている。

２．バチルス・ブレビスＮＣＢ　１１　（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ　ｂｒｅｖｉｓＮＣＢ　１１）株の菌学的性状Ａ．形態 ■形及び大きさ：桿菌０．６　〜０．９　Ｘ２．０　〜４．０　ｐｍ■多形式
二一連又は二連 ■運動性：有り ■胞子の有無：有り胞子の形：楕円胞子の形戒部位：亜端立胞子のう：僅かに膨出 ■ダラム染色性：陽性Ｂ．生育状況 ■肉汁寒天平板培養生育良好、表面は光沢があり、内容は半透明で乳白色を
呈す。

■肉汁寒天斜面培養生育良好、均一に生育、表面は光沢があり、内容は半透
明で乳白色を呈す。

■肉汁液体培養生育良好、表面に発育し菌膜を形戒、培養日数の経過と
共に、混濁し菌体は乳白色を呈す。

■リトマスミルクペプトン化し僅かにリトマス脱色。

■肉汁ゼラチン穿刺液化される。

Ｃ．生理学的性質 ■硝酸塩還元　　　：有り ■脱窒素反応　　　：無し ■ＭＲテスト　　　：陰性 ■ｖｐテスト　　：陰性、ＶＰブロスのｐＨ．７．８■
インドールの生成：無し ■硫化水素の生或　：無し ■デンプンの加水分解：無し ■クエン酸の利用　：有り ■卵黄反応　　　　：陰性［相］色素の生成　　　：無し ■カタラーゼ　　　：有り ■ゼラチンの分解　：有り ■生育ｐＨ　　：ｐＨ６〜９で生育可能ｐＨ５．７では
生育しない。

■生育温度　＝１５〜５０゜Ｃで生育するが、ｌＯ゜Ｃ
或いは５５゜Ｃでは生育しない。

■酸素に対する態度：好気的に増殖する。

■塩化ナトリウム耐性：５％で生育せず。

■チロシン分解　　：有りＤ，＄Ｊ！類から酸の生戒の有無Ｌ−アラビノースＤ−キシロースＤ−グルコース　　　＋Ｄ−マンニット　　　＋ＮＣ８　１１株の菌学的性質を、バージーズ・マニュア
ル・オブ・システマティク・バクテリオロジーの記載に
照合すると、培養性状、生理学的性質及びＩｌｉ類から
酸の生成の特徴から、ＮＣ８　１１株は、バチルス・プ
レビスの種に属する一菌株と認められる。本菌株は、工
業技術院微生物工業技術研究所に微生物受託番号微工研
菌寄第１０４５７号（ＦＥＲＭＰ−１０４５７）として
寄託されている。

３．フラボハテリウム・エスビー　ＮＣＢ　１２−２　
（Ｆｌａ−ｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｐ．　　ＮＣＢ
　１２−２）株の菌学的性状Ａ．形態 ■形及び大きさ：桿菌０．４　〜０．６　Ｘ１．０　〜２．０　ｐｍ■多形式
二一連乃至二連 ■運動性：無し ■胞子の有無：無し ■ダラム染色性：陰性Ｂ．生育状況 ■肉汁寒天平板培養生育良好、均一に生育し、内容はバター状不透明で黄色
を呈す。

■肉汁寒天斜面培養生育良好、均一に生育し、内容はバター状不透明で黄色
を呈す。

■肉汁液体培養生育良好、表面に発育し培養日数の経過と共に、混濁し
菌体は乳白色を呈す。

■リトマスミルク速やかにペプトン化し僅かにリトマス脱色。

■肉汁ゼラチン穿刺液化される。

■シモンズのクエン酸寒゛天斜面培養生育せず。

■セトリミｌ゛寒天斜面培養生育せず。

Ｃ．生理学的性質 ■硝酸塩還元　　　：無し ■脱窒素反応　　　：無し ■ＭＲテスト　　　：陰性 ■ｖｐテスト　　　：陰性 ■インドールの生成：有り ■硫化水素の生成　：無し ■デンプンの加水分解：有り ■カゼイン分解　　：有り ■エスタリン加水分解：有り［相］色素の生戒　　　：非水溶性黄色色素■オキシダ
ーゼ　　：有り ■カタラーゼ　　　：有り ■ゼラチンの分解　：有り ■生育ｐＨ　　：ｐＨ５〜９で生育可能■生育温度　＝
１５〜４５゜Ｃで生育可能、至適温度２５〜３５゜Ｃ．［相］酸素に対する態度：好気的に増殖する。

＠Ｏ−Ｆテスト：グルコースより酸化的に酸を生成する
がガスは生成しない。

［相］尿素分解　　　　：有りＤ．ｖＭ類から酸の生戒の有無Ｌ−アラビノース　　ーＩ》エタノール　　　　　−１）Ｄ−キシロース　　　−１）Ｄ−グルコース　　　−１》サリシン　　　　　　ーＩ）シヨ糖　　　　　　　　−１》セロビオース　　　　−１》Ｄ−マンニット　　　−１乳１！　　　　　　　　　−” ラフィノース　　　　ー１》アドニトール　　　　−２》Ｄ−キシロース　　　−２）Ｄ−グノレコース　　　士！）シヨ糖　　　　　　　　−ｔ》マノレトース　　　　　＋２｝乳ｔｉ　　　　　　　　　−” ｌ）アンモニウム塩を基礎培地とした。

２）ＯＦ培地を基礎培地とした。

ＮＣＢ　１２−２株の菌学的性質を、バージーズ・マニ
ュアル・オプ・システマティク・バクテリオロジーの記
載に照合すると、培養性状、生理学的性質及び糖類から
酸の生成の特徴から、ＮＣＢ　１２−２株は、フラボバ
クテリウム属種に属し、フラボバクテリウム・メニンゴ
セプチカムに類似の一菌株と認められる。本菌株は、工
業技術院微生物工業技術研究所に微生物受託番号微工研
菌寄第１０４５９号（ＦＥＲＭ　ｌ’−１０４５９）と
して寄託されている。

４．アルカリゲネス・レイタス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅ
ｓ　Ｉａ−ｔｕｓ　ＮＣＢ　４−１２）株の菌学的性状
。

Ａ．形態 ■形及び大きさ：桿菌１．０　〜１．５　Ｘ１．５　〜３．０　ｇｍ■多形式
：一連又は二連 ■運動性：有り・周ペン毛を有する ■胞子の有無：無し ■ダラム染色性：陰性Ｂ．生育状況 ■肉汁寒天平板培養生育良好、菌体は白色乃至淡黄色を呈し表面は、培養と
共にシワ状を呈する。

■肉汁寒天斜面培養生育良好、均一に生育し、内容は半透明で白色乃至淡黄
色を呈す。

■肉汁液体培養生育良好、培養日数の経過と共に、混濁し菌体は乳白色
を呈す。

■リトマスごルク液化されない。

■肉汁ゼラチン穿刺液化される。

Ｃ．生理学的性質 ■硝酸塩還元　　　：有り ■亜硝酸塩還元　　：無し ■硝酸塩存在下での嫌気下生育　：生育せず■亜硝酸塩
存在下での嫌気下生育：生育せず■オキシダーゼ　　：
有り ■カタラーゼ　　　　：有り ■デンプンの加水分解：有り ■Ｔｗｅｅｎ８０分解　　：有り ■尿素分解　　　　：無し［相］３−ケトラクトースの産生：無し＠ＯＦ培地での
酸の生成：グルコース、キシロース共に無し＠生育１）Ｈ　　：ＰＨ５〜９で生育する■生育温度　
：１５〜４５℃で生育するＤ．炭素源の利用性アラビノースキシロースグルコース　　　＋マンニットマルトース　　　＋マンノースフラクトースアジピン酸塩ＮＣＢ　４−１２株の菌学的性質を、バージーズ・マニ
ュアル・オプ・システマティク・バクテリオロジーの記
載に照合すると、培養性状、生理学的性質及び炭素源の
利用性の特徴から、ＮＣＢ　４−１２株は、アルカリゲ
ネス・レイタスの種に属する一菌株と認められる。本菌
株は、工業技術院微生物工業技術研究所に微生物受託番
号微工研菌寄第１０６６０号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０６６
０）として寄託されている。

５．ストレプトスポランジウム・エスビーＮＣ　２６（
Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｎ＋　ｓｐ．　ＮＣ
　２６）株の菌学的性状（１）形態的特徴気中菌糸を形成、その上に球形の胞子のうを着生し、胞
子のう胞子に運動性は認められない。

又、基生菌糸は分岐し、分断は認められない。

（２）細胞壁組威ジアくノビメリン酸　　メソ型（３）全菌体糖組戒ガラクトース、グルコース、マンノース、マジュロース
、リボース（４）メナキノンＭＷ−９（Ｈ＊）、ＭＫ−９（Ｈｏ）、ＭＫ−９（ｌｌ
ｍ）（５）各培地における生育状態（２５゜Ｃ，２１日
間観察）■シュクロース・硝酸塩寒天培地生育は中程度であり、コロニーの色は白色である。

■グルコース・アスパラギン寒天培地生育は中程度であり、コロニーの色は白色乃至淡いクリ
ーム色である。

■グリセリン・アスパラギン寒天培地生育は中程度であり、コロニーの色は白色である。

■スターチ寒天培地生育は貧弱であり、コロニーの色は白色である。

■チロシン寒天培地生育は貧弱であり、コロニーの色は白色である。

■栄養寒天培地生育は中程度であり、コロニーの色は淡黄色である。

■イースト・麦芽寒天培地生育は豊富であり、コロニーの色は淡黄色乃至橙色であ
る。

■オートミール寒天培地生育は貧弱であり、コロニーの色は白色である。

（６）生理的性質 ■生育温度範囲＝１０〜４５゜Ｃ．最適、２５〜３５゜
Ｃ．■生育ｐｌ｛範囲：　　５．Ｑ　〜１０．０．最適
、７．０〜Ｂ．０■ゼラチンの液化：陽性 ■スターチの加水分解：陽性 ■脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：共に陰性■メラニン様
色素の生成：陰性（７）各種炭素源の同化性（ブリドハム・ゴドリープ寒
天培地上）Ｌ−アラビノース　　ートＤ−キシロース　　　＋Ｄ−グルコース　　　＋Ｄ−フラクトース　　＋シュクロース　　　　＋イノシトール　　　　＋Ｌ−ラムノースラフィノースＤ−マンニット　　　＋ＮＣ　２６株の菌学的性質を、バージーズ・マニュアル
・オブ・ディタミネイティブ・バクテリオロジ−（第８
版）の記載に基づいて検索した結果、本菌株はストレプ
トスポランジウム属に属する一菌株と認められる。本菌
株は、工業技術院微生物工業技術研究所に微生物受託番
号微工研菌寄第１０７５２号（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０７５
２）として寄託されている。

尚、本発明に使用できる微生物株は上記の例に限定され
るものではない。

本発明に用いる微生物の培養は、通常、震盪培養或いは
通気撹拌深部培養等の好気的条件下で行う。

培養温度は２０〜３７゜Ｃ、培養ｐＨは６〜９で、１〜
７日間培養する。

培地には、使用菌が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩
及び微量有機栄養源が含まれる。

即ち、炭素源としては、グルコース、マルトース、デン
プン加水分解液、糖蜜等の炭水化物等も使用できる。

窒素源としては、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化
アンモニウム等の各種の無機及び有機のアンモニウム塩
類又は肉エキス、酵母エキス、ポリペプトン、コーン・
スチープ・リカー、カゼイン加水分解物等の天然有機窒
素源も使用可能である．無機塩としては、マグネシウム、鉄、マンガン、カリウ
ム、ナトリウム、カルシウム、コバルト等の塩が適宜用
いられる。

又、目的変換酵素活性を誘導或いは酵素活性を高めるた
めに、培養初期或いは培養途中に本酵素の基質となる一
般式（１）のＮ−置換カルボニル−Ｄ，Ｌ−アミノ酸及
び／又はその塩、或いは本酵素の基質となる一般式ＣＩ
）のＮ一置換カルボニル−Ｄ，　Ｌ−アミノ酸及び／又
はその塩の構造類似体等を微生物の生育を妨げない程度
添加し培養することもできる。

上記の方法で得られた培養菌体及び／又はその培養処理
物を用いて本発明の光学分割を行う。

培養物を遠心分離等により培養菌体と培養濾液に分け、
置換カルボニル基脱離酵素（例えば、脱アシル基酵素）
が菌体内に存在する場合は、この培養菌体及び／又は菌
体処理物を用いる。

ここでいう菌体処理物とは、培養菌体の超音波処理物、
ゴーリン・ホモジナイザー破砕や培養菌体のアセトンや
トルエン等の有機溶媒による処理物、更には培養菌体を
トライトンＸ−１（１０等の界面活性剤処理した物等を
示す。

又、公知の方法を適宜組合わせて、培養菌体より酵素を
精製し各異なる精製度の酵素標品を用いることもできる
。

置換カルボニル基分解酵素（例えば、アシル基）が菌体
外に存在する場合は、培養濾液より酵素を精製採取して
用いる。

又、培養菌体、菌体処理物又は異なる精製度の酵素標品
を、公知の方法により担体に固定化し、これを反応に用
いることも本発明の好ましい一形態である。

担体としては、固定化処理により酵素が失活しない限り
どのような担体でもよく、アルギン酸、カラギーナン、
キトサン、ポリアクリルアξド、光架橋性樹脂等が挙げ
られる。

又、本発明の基質となる一般式（１）一般式〔■〕のＮ
一置換カルボニル一〇，　Ｌ−アミノ酸及び／又はその
塩の濃度には制限はないが、通常０．５〜２０％で使用
する。

反応温度は１０〜６０゜Ｃ１好ましくは２０〜５０゜Ｃ
である。

反応ｐＨは４〜１０、好ましくは６〜９の範囲で０．５
〜４日間反応する。

反応液からし−アミノ酸とＮ一置換カルボニルーＤ−ア
ミノ酸を分離するには、例えば濃縮、等電点沈澱等によ
る直接晶析法や、イオン交換樹脂処理等の公知の方法に
より行うことができる。

生威したＬ−アミノ酸の定性と定量はＮＮクロマトグラ
フィー、高速液体クロマトグラフィー及び／又はバイオ
アッセイによる方法を用いることができる。

又、光学的異性体は、旋光度分析、光学異性体分離力ラ
ムを用いた高速液体クロマトグラフィーにより判別する
ことができる。

尚、未反応のＮ一置換カルボニル一〇−アミノ酸は常法
により化学的にラセミ化し、再び上述の反応に供するこ
とができる。

（二）発明の効果本発明によれば、アミドカルボニル反応を用い容易に化
学合戒できるＮ一置換カルボニルーＤ．Ｌ−アミノ酸及
び／又はその塩から光学活性体であるＬーア逅ノ酸及び
Ｎ一置換カルボニル−Ｄ−アミノ酸を簡単な工程で、且
つ温和な条件で選択的に製造することができる。

本発明に用いる置換カルボニル基分解酵素は、含燐アξ
ノ酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタ逅ン等の
Ｎ一置換カルボニル体のＬ体の置換カルボニル基のみを
効率よく分解し、高い光学純度を持つＬ−アミノ酸を生
戒する。

更に、５０゜Ｃの高温反応においても、高い置換カルボ
ニル基分解活性を保持し、高温で安定である。

（ホ）実施例以下、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本
発明はこれに限定されるものではない。

参考例Ｎ−アセチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフ
ィノ酪酸の合或Ｄ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸４ｇ（
０．　０　２　２モル）を、室温で水と酢酸（１／ｌ重
量比）の混合溶液１６０ｇに溶解後、攪拌しながら無水
酢酸３２０ｇを加えた。

２時間後、発熱が起こり８０″Ｃに温度が上昇したので
、水一水浴で２０゜Ｃに冷却した。冷却後、更に２０゜
Ｃで２時間撹拌を行った。

反応生威物を、減圧下濃縮した後、残渣を高速液体クロ
マトグラフィーで分析したところ、Ｄ，Ｌ２−アミノー
４−メチルホスフィノ酪酸のＮ−アセチル化物への転化
率は１（１０％であった。

又、残渣をジアゾメタンでメチル化し、ガスクロマトグ
ラフィー一質量分析にて分析したところ、メチル化物は
Ｎ−アセチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフ
ィノ酪酸メチルエステルであり、収率ｌＯＯ％であった
。

実施例１５（１０ｍｌ容三角フラスコに、ペプトン１％、酵母エ
キス０．５％、食塩０．５％の組成からなる滅菌培地１
（１０ｍｌを加え、これにセラチア・マルセッセンスＩ
Ｐ０１２６４Ｂのスラントから１白金耳を植菌し、２８
℃で７２時間、１分間１５０回転で旋回振盪培養を行っ
た。

この際、培養開始４８時間後に酵素生産を誘導する意味
でＮ−アｔチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホス
フィノ酪酸を０．　１　ｇ添加し、更に２４時間培養を
行った。

培養液を遠心分離（８　０　０　０ｒｐｍ，　２　０分
間）し、菌体を得た。得られた菌体５（１０ｍｇと濃ア
ンモニア水でｐｌ１８．０に調整したＮ−アセチルーＤ
，Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸１（１０
ｍｇ！０．１Ｍトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ　８．０）　
　１　０ｍｌに懸濁した。

この懸濁液を１（１０ｍｌ容三角フラスコに加え、１分
間１（１０回転で旋回振盪しつつ、２８゜Ｃで９６時間
反応を行った。

反応終了後遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体分
離カラム（ＭＣＩ　ＧＥＬ　　三菱化成製、キラルパッ
クーＨ　ダイセル化学工業製）を用いて分析した。

生戒産物の分析条件を以下に示す。

分析条件：カラム　ＭＣＩ　ＧＥＬ　ＣＲＳＩＯＷ（Ｄ
ＬＡ＾）　４．６ｍｍＸ５０ｍｍ　（三菱化成製）、溶
出溶媒　２．ＯｍＭ　ＣｕＳＯｎ、流ＴＪ　　ｌｍｌ／
ｍｉｎ．、温度　３０℃、ＵＶ２５４ｎｍで検出。

又、未反応基質（残存している基質）の分析条件を以下
に示す。

分析条件二カラム　Ｃ｝ＩＩＲＡＬＰＡＫ　ＷＨ　４．
６ｍｍＸ２５０ｍｍ（ダイセル化学工業製）、溶出溶媒
０．２５ｍＭ　ＣｕＳＯ．、流Ｍ１　　１．５ｍｌ／ｍ
ｉｎ，、温度　３０゜ＣＳＵＶ２２０ｎｍで検出。

その結果、反応生成物はＬ−２−アミノー４−メチルホ
スフィノ酪酸であった。

Ｎ−アセチルーＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ
酪酸からＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸へ
の変換率は２０％であった。

Ｎ−アセチルー［Ｌ　Ｌ−２−アミノー４−メチルホス
フィノ酪酸のＬ体だけの脱アセチル化反応（加水分解反
応）の選択率は１（１０％であった。

実施例２５（１０ｍｌ容三角フラスコに、ベプトンｌ％、酵母エ
キス０．５％、食塩０．５％の組或からなる滅菌培地１
　０　０　ｍｌを加え、これにスタフィロコッカス・ア
ウレウスＩＦＯ　１２７３２のスラントから１白金耳を
植菌し、２８゜Ｃで７２時間、１分間１５０回転で旋回
振盪培養を行った。この際、培養開始４８時間後に酵素
生産を誘導する意味でＮ−アセチルーＬグルタミン酸ナ
トリウムを０．１ｇ添加し、更に２４時間培養を行った
。培養液を遠心分離（８（１００　ｒｐｍ，　２　０分
間）し、菌体を得た。

得られた菌体５（１０ｍｇと濃アンモニア水でｐＨ８．
０に調整したＮ−アセチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４−
メチルホスフィノ酪酸１（１０ｍｇを０．　１　Ｍ　｝
リス・塩酸緩衝液（ｐｌｌ８．　０　）　　１　０　ｍ
ｌに懸濁した。この懸濁液を１（１０ｍｌ容三角フラス
コに加え、１分間１（１０回転で旋回振盪しつつ、２８
゜Ｃで４８時間反応を行った。

反応終了後遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体分
離カラム（ＭＣＩ　ＧＥＬ　　三菱化或製、キラルパッ
ク目　ダイセル化学工業製）を用いて実施例１と同様の
条件で分析したところ、反応生戒物はＬ−２−アミノー
４−メチルホスフィノ酪酸であった。

Ｎ−アセチルーＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ
酪酸からＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸へ
の変換率は１８％であった。

Ｎ−アセチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフ
ィノ酪酸のＬ体だけの脱アセチル化反応（加水分解反応
）の選択率は１（１０％であった。

実施例３５（１０ｍｌ容三角フラスコに、酵母エキス０．２％、
肉エキス０．２％、ポリペプトン０．４％、グルコース
１．０％の組戒からなる滅菌培地１（１０ｍｌを加え、
これにアクチノブラネス・リグリアエＩＦＯ　１３９９
７のスラントから１白金耳を植菌し、２８゜Ｃで１３６
時間、１分間回転で旋回振盪培養を行った。

この際、培養開始４０時間後に酵素生産を誘導する意味
でＮ−アセチルーＬ−グルタごン酸ナトリウムを０．１
ｇ添加し、更に４０時間培養を行った。

培養液を遠心分離（８　０　０　０ｒｐｍ，　２　０分
間）し、菌体を得た。

得られた菌体４（１０ｍｇと濃アンモニア水でｐｌ＋８
．０に調整したＮ−アセチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４
−メチルホスフィノ酪酸５０ｍｇを０．　１　Ｍ　Ｉ−
リス・塩酸緩衝液（ｐＨ　　８．　０　）　５　ｍｌに
懸濁した。この懸濁液を１（１０ｍｌ容三角フラスコに
加え、■分間１（１０回転で旋回振盪しつつ、２８゜Ｃ
で４８時間反応を行った。

反応終了後、遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体
分離カラム（ＭＣＩ　ＧＥＬ三菱化成製、キラルパック
Ｗｌ１　　ダイセル化学工業製）を用いて実施例Ｉと同
様の条件で分析を行ったところ、反応生戒物はＬ−２−
アミノー４−メチルホスフィノ酪酸であった。

Ｎ−アセチルーＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ
酪酸からＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸へ
の変換率は１５％であった。

Ｎ−アセチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフ
ィノ酪酸のＬ体だけの脱アセチル化反応（加水分解反応
）の選択率は８０％であった。

実施例４５（１０ｍｌ容三角フラスコに、ペプトン１％、酵母エ
キス０．５％、食塩０．５％の組成からなる滅菌培地１
　０　０　ｍｌを加え、これにバチルス・セレウスＮＣ
Ｂ　１９−１のスラントから１白金耳を植菌し、３７゜
Ｃで７２時間１分間１５０回転で旋回震盪培養を行った
。

培養液を遠心分離（８　０　０　０ｒｐｍ．　２　０分
間）し、菌体を得た。得られた菌体５（１０ｍｇと濃ア
ンモニア水でｐｌｌ　８．０に調整したＮ−アセチルー
Ｄ，　Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪＃１（
１０ｍｇを０．　Ｉ　Ｍ　Ｆリス・塩酸緩衝液（ｐＨ　
８．０）　１　０ＩＩｌ＋に懸濁した。

この懸濁液を１（１０ｍｌ容三角フラスコに加え、■分
間１（１０回転で旋回振盪しつつ、２８゜Ｃで９６時間
反応を行った。

反応終了後遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体分
離カラム（ＭＣＩ　ＧＥＬ　　三菱化戒製、キラルパッ
クＷＨ　　ダイセル化学工業製）を用いて実施例１と同
様の条件で分析を行ったところ、反応生戒物はＬ−２−
アミノー４−メチルホスフィノ酪酸であった。

実施例５５（１０ｍｌ容三角フラスコに、ペプトン１％、酵母エ
キス０．５％、食塩０．５％の組或からなる滅菌培地１
（１０ＩＩｌｌを加え、これにバチルス・ブレビスＮＣ
Ｂ　１１のスラントから１白金耳を植菌し、３７℃で７
２時間１分間１５０回転で旋回振盪培養を行った。

培養液を遠心分ｉ％’Ｉ　（８　０　０　０ｒｐｍ．２
　０分間）し、菌体を得た。得られた菌体５（１０ｍｇ
と濃アンモニア水でｐｉ　ｓ．ｏに調整したＮ−アセチ
ルーＤ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸１
（１０ｍｇを０．　１　Ｍ　｝リス・塩酸緩衝液（ｐＨ
　８．０）　１　０ｍｌに懸濁した。

反応終了後遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体分
離カラム（ＭＣＩ　ＣＥＬ　　Ｅ菱化成製、キラルパッ
クーＨ　ダイセル化学工業製）を用いて実施例１と同様
の条件で分析を行ったところ、反応生成物はＬ−２−ア
ミノー４−メチルホスフイノ酪酸であった。

Ｎ−アセチルーＬ−２−アミノー４−メチルホスフイノ
酪酸からＬ−２−アミノー４−メチルホスフイノ醋酸へ
の変換率は３５％であった。

Ｎ−アセチルーＤ，　Ｌ−２−アミノー４−メチルホス
フイノ酪酸のＬ体だけの脱アセチル化反応（加水分解反
応）の選択率は１（１０％であった。

実施例６５（１０ｍｌ容三角フラスコに、ペプトン１％、酵母エ
キス０．５％、食塩０．５％の組或からなる滅菌培地１
（１０ｎ＋１を加え、これにフラボバクテリウム・エス
ピーＮＣＢ　１２−２　　のスラントから１白金耳を植
菌し、３０℃で７２時間１分間１５０回転で旋回振盪培
養を行った。

培養液を遠心分離（８　０　０　０ｒｐｎ＋．　２　０
分間）し、菌体を得た。得られた菌体５（１０ｍｇと濃
アンモニア水でｐＨ　８．０に調整したＮ−アセチルー
Ｄ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸１（１
０ｍｇを０．　１　Ｍ　｝リス・塩酸緩衝液（ｐＨ　８
．０）　　ｌ　Ｏｍｌに懸濁した。

反応終了後遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体分
離力ラム（ＭＣＩ　ＢＥＬ　　三菱化威製、キラルパッ
クＷｌ＋　　ダイセル化学工業製）を用いて実施例ｌと
同様の条件で分析を行ったところ、反応生成物はＬ−２
−ア〔ノー４−メチルホスフィノ酪酸であった。

Ｎ−アセチルーＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ
酪酸からＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸へ
の変換率は３０％であった。

Ｎ−アセチルーＤ．　Ｌ−２−アミノー４−メチルホス
フィノ醋酸のＬ体だけの脱アセチル化反応（加水分解反
応）の選択率は１（１０％であった。

実施例７５（１０ｍｌ容三角フラスコに、燐酸２水素カリウム０
．１％、燐酸１水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウ
ム０．Ｏｌ％、グリセロール１％、トリプトン１％、酵
母エキス１％、Ｎ−アセチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４
−メチルホスフィノ酪酸０．１％（ｐＨ　７．０）の組
成からなる滅菌培地１（１０ｍｌを加え、これにアク口
モバクター・エスピーｔＦｏ　１３４９５ののスラント
から１白金耳を植菌し、３０゜Ｃで４８時間１分間１５
０回転で旋回振盪培養を行った。

培養液を遠心分離（８　０　０　０ｒｐｍ，　２　０分
間）し、菌体を得た。得られた菌体５（１０ｍｇを、１
％のＮ−アセチルーＤ．Ｌ−２−アミノー４−メチルホ
スフィノ酪酸を含む０．　１　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ　
７．５）　ｌ　Ｏｍ＋に懸濁した。

この懸濁液を１（１０ｍｌ容三角フラスコに加え、１分
間１（１０回転で旋回振盪しつつ、３０″Ｃで４８時間
反応を行った。

反応終了後遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体分
離力ラム（ＭＣＩ　ＧＥＬ　　三菱化或製、キラルパッ
クＷＨ　　ダイセル化学工業製）を用いて実施例１と同
様の条件で分析を行ったところ、反応生戒物はＬ−２−
アミノー４−メヂルホスフィノ酪酸であった。

Ｎ−アセチルーＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ
５８酸からＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸
への変換率は２５％であった。

実施例８５（１０ｍｌ容三角フラスコに、グルコース１％、塩化
アンモニウム１％、燐＃２水素カリウム０．１％、燐酸
ｌ水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．（１２
５％、硫酸マンガン０．（１０１％、硫酸第ｌ鉄０．（
１０１％、塩化コバルトｏ．ｏｏｉ％、酵母エキス０．
０５％（ｐｌ１　７．０）の組成からなる滅菌培地１（
１０ｍｌを加え、これにアルカリゲネ・レイタスＮＣＢ
　４−１２のスラントから１白金耳を植菌し、３０゜Ｃ
で７２時間１分間１５０回転で旋回振盪培養を行った。

培養液を遠心分離（８　０　０　０ｒｐｍ．　２　０分
間）し、菌体を得た。得られた菌体５（１０ｍｇを、ｌ
％のＮアセチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４−メチルホス
フィノ酪酸を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐｔｌ　７．
５）　１　０ｍｌに懸濁した。

この懸濁液を１（１０ｍｌ容三角フラスコに加え、１分
間１（１０回転で旋回振盪しつつ、３０゜Ｃで４８時間
反応を行った。

反応終了後遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体分
離カラム（ＭＣＩ　ＧＥＬ　　三菱化戒製、キラルパッ
クＷｌ＋　　ダイセル化学工業製）を用いて実施例１と
同様の条件で分析を行ったところ、反応生戒物はＬ−２
−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸であった。

Ｎ−アセチルーＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ
酪酸からＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸へ
の変換率は７８％であった。

実施例９５（１０ｍｌ容三角フラスコに、マルトース１％、ポリ
ペプトン０．５％、酵母エキス０．０５％、燐酸２水素
カリウム０．１％、燐酸１水素カリウム０．１％、硫酸
マグネシウム７水塩０．（１２５％、硫酸マンガン４水
塩０．（１０１％、硫酸第１鉄７水塩０．（１０１％（
ｐＨ　７．０）の組成からなる滅菌培地１（１０ｍｌを
加え、これにセベキア・ベニハナＩＦＯ　１４３０９　
（７）スラントから１白金耳を植菌し、２８゜Ｃで６０
時間ｌ分間１５０回転で旋回１ｌｉ盪培養を行った。

培養液を遠心分離（８　０　０　０ｒｐｍ，　１　５分
間）し、菌体を得た。得られた菌体５（１０ｍｇを、１
％のＮ−アセチルーＤ，Ｌ−２−ア〕ノー４−メチルホ
スフィノ酪酸を含む０．　１　Ｍリン酸緩衝液（ｐｌｌ
　７．５）　１　０＋１に懸濁した。

この懸濁液を１（１０ｍｌ容三角フラスコに加え、■分
間１（１０回転で旋回振盪しつつ、２８゜Ｃで４８時間
反応を行った。

反応終了後遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体分
離力ラム（ＭＣＩ　ＧＥＬ　　三菱化戒製、キラルバソ
クＷｌ｛　　ダイセル化学工業製）を用いて実施例１と
同様の条件で分析を行ったところ、反応生成物はＬ−２
−ア旦ノー４−メチルホスフィノ酪酸であった。

Ｎ−アセチルーＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ
酪酸からＬ−２−アミノ−４−メチルホスフィノ酪酸へ
の変換率は２３％であった。

Ｎ−アセチルーＤ，　Ｌ−２−アミノー４−メチルホス
フィノ酪酸のＬ体だけの脱アセチル化反応（加水分解反
応）の選択率は１（１０％であった。

実施例１０５　０　０　ｍｌ容三角フラスコに、マルトース１％、
ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．０５％、燐蒙２
水素カリウム０．１％、燐酸ｌ水素カリウム０．１％、
硫酸マグネシウム７水塩０．（１２５％、硫酸マンガン
４水塩０、（１０１％、硫酸第１鉄７水塩０，（１０１
％（ｐＨ　７．０）の組或からなる滅菌培地１（１０ｍ
ｌを加え、これにストレプトスポランジウム・エスビー
ＮＣ　２６のスラントから１白金耳を植菌し、２８゜Ｃ
で６０時間１分間１５０回転で旋回振盪培養を行い種菌
を調製した。

この様にして調製した種培養液を１％となるように上記
と同じ組威の培地５（１０ｍｌを加えた５ｌ容三角フラ
スコに植菌し、２８℃で６０時間１分間１８０回転で旋
回振盪培養を行った。

培養液を遠心分離（１（１０（１０ｒｐｍ，２０分間）
して集菌し、菌体を５（１０ｍｌの生理食塩水で洗浄し
た。

計２１の培養液から、ストレプトスポランジウム・エス
ピーＮＣ　２６株の洗浄菌体６７ｇ（湿菌体重量）を得
た。

実施例１１実施例９で得られた湿菌体１．５ｇと濃アンモニア水で
ｐＨ７．８に調製したＮ−アセチルーＤ，Ｌ−２−アミ
ノー４−メチルホスフィノ酪酸３ｇを蒸留水２０ｍｔに
懸濁した。

この懸濁液を５０ｍｌ容円筒チューブに加え、振盪しつ
つ、４０″Ｃで４８時間反応を行った。

反応終了後遠心分離により除菌し、上澄を光学異性体分
離カラム（ＭＣＩ　ＧＥＬ　　三菱化或製、キラルパッ
ク問　ダイセル化学工業製）を用いて実施例ｌと同様の
条件で分析した。第１図にこの高速液体クロマトグラフ
ィーチャートを示した。

又、第２図にラセミ体Ｎ〜アセチルー２−７１ノー４−
メチルホスフィノ酪酸の高速液体クロマトグラフィーチ
ャートを示した。

反応生戊物はＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪
酸のみであり、ロ一体は全く検出されなかった。

Ｎ−アセチルーＬ−２−ア果ノー４−メチルホスフィノ
酪酸からＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸へ
の変換率は１（１０％であった。

Ｎ−アセチルーＤ．Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフ
ィノ酪酸のＬ体だけの脱アセチル化反応（不斉加水分解
反応）の選択率は１（１０％であった。

実施例１２実施例９で得られたストレプトスボランジウム・エスビ
ーＮＣ　２６株の培養洗浄湿菌体５（１０ｍｇを５（１
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ　７．５）　　５ｍｌによ＜
懸濁し、Ｎ−アセチルーＤ．Ｌ−２−アミノー４−メチ
ルホスフィノ酪酸のナトリウム塩５０ｍｇを加え、３０
゜Ｃで振盪しつつ２４時間反応させた。

反応終了後、遠心分離（１　２　０　０　Ｏｒｐｍ，２
　０分間）により菌体を分離した。分離した菌体に再び
１％Ｎ−アセチルーＤ，　Ｌ−２−アミノー４−メチル
ホスフィノ酪酸のナトリウム塩を含んだ１（１０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ρＩＩ　７．５）　５ｍｌを加え、全く同
様に反応を繰り返した。

この反応を同一菌体を用いて計３回行い、得られた反応
上澄液を光学．異性体分離カラム（ＭＣＩ　ＧＥＬ三菱
化戒製）を用いて定量を行い、Ｎ−アセチルＤ，Ｌ−２
−ア稟ノー４−メチルホスフィノ酪酸からＬ−２−アミ
ノー４−メチルホスフィノ酪酸への変換率（％）及びＮ
−アセチルーＤ，　Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフ
ィノ醋酸のＬ体だけの脱アセチル化反応（不斉加水分解
反応）の選択率（％）を求めた。

結果は以下の通りであった。

変換率　　　選択率第１回目　　１（１０％　　１（１０％第２回目　　１
（１０％　　１（１０％第３回目　　　９７％　　１（
１０％実施例ｌ４実施例９で得られたス１・レブトスポランジウム・エス
ピーＮＣ　２６株の培養洗浄湿菌体１ｇに、予め６０゜
Ｃで加温溶解させた３％のカッパ−（κ）カラギーナン
５ｍｌを加えよく混合させた。

この混合液を冷却し、２％塩化カリウム溶液を加えるこ
とによりゲル化し、固化させた。

これを５ｍｎ＋角の大きさに切断し、洗浄した物を固定
化菌体とした。この様に調製した固定化菌体を用いて以
下の実験を行った。

湿菌体５（１０ｍｇ相当の固定化菌体を、水酸化ナトリ
ウム溶液でｐｕを７．５に調製した２．５％のＮ−アセ
チルーＤ．　Ｌ−２−アごノー４−メチルホスフィノ醋
酸を含む水溶液１０ｍｌに加え、３０″Ｃ又は４０゜Ｃ
で２４時間反応させた。

反応終了後、遠心分離により固定化菌体を分離した．分
離した固定化菌体に再び２．５％のＮ−アセチルーＤ，
Ｌ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸のナトリウ
ム塩（ｐＨ　７．５）を含んだ水溶液１０ｍｌを加え、
全く同様に反応を繰り返した。

生威したＬ−２−アミノー４−メチルホスフィノ酪酸は
実施例１の方法と同様の方法で定量した。

上記反応を繰り返し７回行った後の、固定化菌体の活性
低下率は、３０”Ｃで反応させた場合は７％、４０℃で
反応させた場合は８％であった。

実施例１３ストレプトスポランジウム・エスピーＮＣ　２６株の培
養菌体を用い、反応温度を２５、３０、４０、５０″Ｃ
と変えて、Ｎ−アセチルーＤ，Ｌ−２−アミノー４ーメ
チルホスフィノ酪酸からＬ−２−ア旦ノー４−メチルホ
スフィノ酪酸の生戊量を、高速液体クロマトグラフィー
を用いて検定した。

５％Ｎ−アセチルーＤ．Ｌ−２−アミノー４−メチルホ
スフィノ酪酸１　ｍｌ（ｐＨ　７．０）に２０ｍｇの湿
菌体を加え３０゜Ｃで２４時間反応後のＬ−２−アミノ
ー４一メチ・ルホスフィノ酪酸の生或量を下表に示しだ
。

レブトスポランジウム・エスピーＮＣ　２６株の培養菌
体を用いて、Ｎ−アセチルーＤ，Ｌ−アミノ酸から対応
するし−アミノ酸の生戒を検討した結果を下表に示した
。

表中の相対活性は、生成したＬ−２−アミノー４−メチ
ルホスフィノ酪酸のｉｉ　（ｍｇ／ｍｌ）を１（１０と
した相対値である。

実施例ｌ５アルカリゲネス・レイタスＮＣＢ　４−１２又はスト実
施例１６実施例９と同様に調製したストレプトスプランジウム・
エスピーＮＣ　２６株の培養洗浄菌体１（１０ｍｇを蒸
留水２ｆｆ＋１によく懸濁し、Ｎ−アセチルー２−アミ
ノー４−エチルーメチルホスフイノ酪酸のナトリウム塩
２０ｍｇを加え、３０゜Ｃで振盪しつつ４８時間反応さ
せた。

反応終了後、遠心分ｉｔＩ　（１　２　０　０　Ｏｒｐ
ｍ，２　０分間）により菌体を分離した。

得られた反応上澄液を光学異性体分離力ラム（ＭＣＩ　
ＧＥＬ　　三菱化或製、キラルパックＷｌ１　　ダイセ
ル化学工業製）を用いて実施例１と同様の条件で分析し
たところ、生戒物はＬ−２−アミノー４−エチルーメチ
ルホスフィノ酪酸であった。

基質としてＮ−アセチル〜２−アミノー４−（２−クロ
ロエチル〉−メチルホスフィノ酪酸のナトリウム塩２０
ｍｇを用いて上記と同様に反応を行い、反応生戒物を上
記の条件で分析したところ、反応生戒物はＬ−２−アミ
ノー４−（２−クロロエチル）一メチルホスフィノ酪酸
であった。

尚、反応生戒物のＬ−２−アミノー４−エチルーメチル
ホスフィノ酪酸及びＬ−２−アミノー４−（２−クロロ
エチル）一メチルホスフィノ酪酸は市販のアセチルコリ
ンエステラーゼの酵素を用いることにより、エステル部
分が容易に加水分解されＬ−２−アミノー４−メチルホ
スフィノ酪酸が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１１の反応生成物の高速液体クロマト
グラフィーチャー｝　（ＭＣＩ　ＧＥＬ　ＣＲＳＩＯＷ
カラム）、第２図はラセξ体２−アミノー４−メチルホ
スフィノ酪酸の高速液体クロマトグラフィーチャート（
ＭＣＩ　ＧＥＬ　ＣＲＳＩＯ一カラム）である。縦軸はピーク高さ、横軸は保持時間（分）を示す。

Claims

【特許請求の範囲】（１）一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕（式中、Ｒは▲数式、化学式、表等があります▼、−Ｃ
Ｈ＿２ＣＯＯＨ、−ＣＨ＿２ＣＯＮＨ＿２、−ＣＯＯＨ
を、Ｒ＿１は水素原子、炭素数１〜１０のアルキル基、
ハロゲン置換炭素数１〜１０のアルキル基を、Ｒ＿２は炭素数１〜５のアルカノイ
ル基、ベンゾイル基、ハロゲン置換炭素数１〜５のアルカノイル基、ハロゲン置換ベンゾイル基を示す。）で表されるＮ−置換カルボニル−Ｄ，Ｌ−アミノ酸及び
／又はその塩に、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、ス
タフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属
、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、フラボバクテリウ
ム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アクロモバク
ター（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）属、アルカリゲネ
ス（Ａｌｃａｌｉｇｅ−ｎｅｓ）属から選ばれる細菌及
び／又はアクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ
）属、ストレプトスポランジウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐ
ｏｒａｎｇｉｕｍ）属、セベキア（Ｓｅｂｅ−ｋｉａ）
属から選ばれる放線菌から選ばれた微生物の培養菌体及
び／又はその培養処理物を作用させ光学分割を行うこと
を特徴とするＬ−アミノ酸及びＮ−置換カルボニル−Ｄ
−アミノ酸の製造方法。（２）微生物がセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、スタ
フィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属、
バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、フラボバクテリウム
（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アクロモバクタ
ー（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ）属、アルカリゲネス
（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属から選ばれる細菌である
請求項（１）記載のＬ−アミノ酸及びＮ−置換カルボニ
ル−Ｄ−アミノ酸の製造方法。（３）微生物がアクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａ
ｎｅｓ）属、ストレプトスポランジウム（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）属、セベキア（Ｓｅｂｅｋｉ
ａ）属から選ばれる放線菌である請求項（１）記載のＬ
−アミノ酸及びＮ−置換カルボニルアルカノイル−Ｄ−
アミノ酸の製造方法（４）セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ
）属から選ばれる細菌がセラチア・マルセッセンスＩＦ
Ｏ１２６４８（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ
ＩＦＯ１２６４８）株である請求項（２）記載のＬ−ア
ミノ酸及びＮ−置換カルボニル−Ｄ−アミノ酸の製造方
法。（５）スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ）属から選ばれる細菌がスタフィロコッカス・アウ
レウス（ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＩ
ＦＯ１２７３２）株である請求項（２）記載のＬ−アミ
ノ酸及びＮ−置換カルボニル−Ｄ−アミノ酸の製造方法
。（６）バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属から選ばれる細
菌がバチルス・セレウスＮＣＢ１９−１（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓｃｅｒｅｕｓＮＣＢ１９−１）株又はバチルス・ブ
レビスＮＣＢ１１（ＢａｃｉｌｌｕｓｂｒｅｖｉｓＮＣ
Ｂ１１）株である請求項（２）記載のＬ−アミノ酸及び
Ｎ−置換カルボニル−Ｄ−アミノ酸の製造方法。（７）フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）属から選ばれる細菌がフラボバクテリウム・エス
ピーＮＣＢ１２−２（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｍｓｐ
、ＮＣＢ１２−２）株である請求項（２）記載のＬ−ア
ミノ酸及びＮ−置換カルボニル−Ｄ−アミノ酸の製造方
法。（８）アクロモバクター（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
）属から選ばれる細菌がアクロモバクター・エスピーＩ
ＦＯ１３４９５（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｓｐ、Ｉ
ＦＯ１３４９５）株である請求項（２）記載のＬ−アミ
ノ酸及びＮ−置換カルボニル−Ｄ−アミノ酸の製造方法
。（９）アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属か
ら選ばれる細菌がアルカリゲネス・レイタスＮＣＢ４−
１２（ＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｌａｔｕｓＮＣＢ４−１
２）株である請求項（２）記載のＬ−アミノ酸及びＮ−
置換カルボニル−Ｄ−アミノ酸の製造方法。（１０）アクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ
）属から選ばれる放線菌がアクチノプラネス・リグリア
エＩＦＯ１３９９７（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｌｉｇ
ｕｒｉａｅＩＦＯ１３９９７）株である請求項（３）記
載のＬ−アミノ酸及びＮ−置換カルボニル−Ｄ−アミノ
酸の製造方法。（１１）ストレプトスポランジウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓ
ｐｏｒａｎｇｉｕｍ）属から選ばれる放線菌がストレプ
トスポランジウム・エスピーＮＣ２６（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｓｐｏｒａｎｇｉｕｍｓｐ、ＮＣ２６）株である請求項
（３）記載のＬ−アミノ酸及びＮ−置換カルボニル−Ｄ
−アミノ酸の製造方法。（１２）セベキア属から選ばれる放線菌がセベキア・ベ
ニハナＩＦＯ１４３０９（Ｓｅｂｅｋｉａｂｅｎｉｈａ
ｎａＩＦＯ１４３０９）株である請求項（３）記載のＬ
−アミノ酸及びＮ−置換カルボニル−Ｄ−アミノ酸の製
造方法。（１３）置換カルボニル基Ｒ＿２がアセチル基である請
求項（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）
、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１
２）の何れにか記載のＬ−アミノ酸及びＮ−置換カルボ
ニル−Ｄ−アミノ酸の製造方法。