JPH02107966A - 特異的に結合性の物質の測定法及び測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は試薬溶液と少なくとも２種のレセプターＲ１及
びＲ２、ここでＲ１とＲ２とは相互に結合性であり、か
つＲ１は測定すべき物質と特異的に結合性である、との
恒温保持及び反応において生じる凝集の測定により特異
的に結合性の物質を測定するための方法及び試薬に関す
る。

従来の技術 体液及び組織中には、特異的な結合成分と結合性であり
、人体の一定の疾患又は健康状態に関するパラメーター
として働ら〈非常に多くの物質が存在する。これには特
にハプテン、例えばホ、ルモン、蛋白質例えば腫瘍マー
カー、蛋白質ホルモン及びウィルス蛋白質並びに抗体を
挙げることができる。薬剤による治療を監視するために
もしばしば血液中の薬剤の測定が必要である。しばしば
この物質は非常にわずかな量で存在するので、その検出
のためにイムノアッセイ原理による方法を使用する。こ
のためには多くの方法がある。多くの免疫学的測定法は
均一系法と不均一系法とに分類される。不均一系法にお
いては、標識化成分の結合した部分を結合していない部
分から分離するために、固相反応が常に関与する。この
方法においては、標識化したものを良好に測定すること
ができることであるが、欠点は不均一系反応が長く続く
ことである。

均一系法においては、結合した標識化物質と結合してい
ない標識化物質との分離が行なわれず、結合した及び結
合していない標識化物質の差異を他の方法によりつけな
ければならない。

このためには種々の可能性がある。こうして、例えば測
定すべきノ・ブテン又は抗原に結合する時又は測定すべ
き物質により活性化される時だけその酵素活性が得られ
る、結合酵素を標識として使用することができる。もう
１つの可能性は、標識として測定すべき物質に結合する
ことによりその螢光が他の波長範囲に移動するか又はそ
の偏光か変わる螢光物質を使用することである。

この公知法の欠点は、試料がしばしばこのテストを妨害
する成分を含有し、このことはこの妨害成分を除去する
ために試料前処置を必要とするというにある。更に、各
パラメーターに関する費用のかかる最適化が必要である
。例えば酵素はパラメーターに依存して変えなければな
らない。

更に、ヨーロッパ特許公開第７９９６２号公報から測定
すべき・・ブテンを含有する溶液をノ・ブテンを被覆し
たラテックス粒子又はノ・ブテンを被覆したアルブミン
と接触させる方法が公知である。ハプテンと結合性の抗
体添加により凝集反応が行なわれる。ラテックス粒子に
、もしくはアルブミンに結合したハプテンは試料中に含
有されるハプテンと競合するので試料中にノ・ブテンが
多く含有されている程凝集反応は小さい。この方法の欠
点はそれぞれの測定すべき物質に関し特異的な粒子を提
供しなければならず、それぞれのパラメーターを個ｋに
最適化しなければならないということにある。

凝集反応の評価による蛋白質のもう１つの検出法は西ド
イツ国特許公開第２７４９９５６号公報から公知である
。この際、測定すべき物質に対する抗体は直接凝集性粒
子に結合する。しかしながら、この結合により抗体の反
応性は影響を受ける。更に、この種の測定法はリウマチ
因子により妨害される。

スヘての公知の競合均一系凝集イムノアッセイの欠点は
、原料を著しく費用をかけてパラメター特異的に最適化
しなければならないということである。これらのすべて
のテストにおいて、一方では試料との競合反応を意味の
あるものとするために粒状試薬の濃度を制限しなければ
ならず、他方では単位時間あたり十分なシグナル変化を
達成するために粒状試薬が高濃度でかつ高く標識化され
ているべきであるので、最適な識別と最適な感度に関し
て相互に反対の要求がある。これらの要求の調整は制限
された感度と妨害の受けやすさに導ひき、これらはしば
しば特異的な試料前処置によってのみ回避される。

発明が解決しようとする課題 従って、本発明の課題は高い感度と精確さで物質の検出
を可能とし、前記の欠点を有さない均一系測定法を提供
することである。

課題を解決するための手段 この課題は試料溶液と少なくとも２種のレセプターＲ１
及びＲ２、ここでＲ１とＲ２とは相互に結合性であり、
かつＲ１は測定すべき物質と特異的に結合性である、と
の恒温保持及び反応において生じる凝集の測定により特
異的に結合性の物質を測定するための方法において、レ
セプタＲ１として特異的に結合するペアの片側成分Ｐと
測定すべき物質と特異的に結合性の成分にとからなる結
合体ｋ、Ｒ２として少なくともＰに関する結合位２つを
有するレセプターを使用することを特徴とする特異的に
結合性の物質の測定法により解決する。

本発明方法は体液又は組織抽出物中で検出すべき特異的
な結合能力のある実質的にすべての物質に好適であり、
この際低濃度の物質も、高濃度の物質と同じように良好
に検出可能である。

この方法の感度及び精確さは従来公知の方法に対して改
良されている。本発明は簡単な試薬を用いて迅速で信頼
性のある測定を実施する可能性を提供する。

この方法は１価の特異的結合性物質の測定にも２価又は
多価の特異的結合性物質の測定にも好適である。この際
、１価の特異的結合性物質とは特異的に結合性の片側成
分に対して１つの結合位のみを有する物質である。例と
してはノ・ブテン、例えば薬剤を挙げることができる。

２価又は多価の特異的結合性物質とは特異的に結合性の
片側成分に対して２つ又はそれ以上の結合位を有する物
質、例えば蛋白質ホルモン、例えばＨＣＧ又はＴＳＨ、
抗原及び蛋白質、腫瘍マカー、例えばＣＥＡ、ビールス
蛋白質及び抗体である。

エピトープとはここでは他の物質と特異的結合すること
のできる結合位である。エピトープの例は抗原及びハプ
テンへの抗原決定基又は蛋白質への特異的な結合位であ
る。

測定のためには試料溶液を少なくとも二種のレセプター
Ｒ工及びＲ２と恒温保持する。レセプターＲ１及びＲ２
はこの際相互に結合性であり、更にＲｏは測定すべき物
質と特異的に結合性である。本発明方法を用いて種々の
反応原理を実施することができる。第１図には二価もし
くは多価物質を検出するために好適である二つの方法が
図示されている。

第１図のａ）に図示された実施形においては試料溶液に
、特異的に相互に結合するペアの片側成分Ｐと測定すべ
き物質と特異的に結合性の成分にとからなる結合体であ
るレセプターＲ１を添加する。次いでレセプターＲ１は
成分Ｋを介して測定すべき物質に結合する。第１図に示
した概略図においては抗体である。この際、各抗体はそ
れぞれ２つのレセプターＲ１にＫを介して結合している
複合体を形成する。

Ｒ１と同時に、又は一定の時間の後レセプタＲ２を添加
する。このレセプターＲ２は少なくとも２つ、有利には
多数のＰへの結合位を有する。この際Ｐを介してのレセ
プターＲ工のレセプターＲ２への結合が生じる。各抗体
は２つのレセプターＲ１、こうしてＲ２への結合能力を
有する片側成分Ｐ２つを有しているので、架橋もしくは
凝集が生じ、これは他方では測光法により測定可能な混
濁もしくは混濁変化を惹起する。

測定すべき抗体を溶液中に多量に含有すればする程、架
橋は強くなり、混濁もより強力になる。

こうして凝集の量は測定すべき物質の直接の尺度である
。評価はこの際検量線を用いて行なう。

実施法第１図のｂ）は多価物質、例えば、多数の特異的
結合位を有する蛋白質の検出のために用いられる。この
際この原理は第１図のａ）と同じである。しかしながら
、この際測定すベキ物質は２つより多いレセプターＲ１
と結合することかできるので、レセプターＲ２の添加後
単に線状の架橋だけでなく、三次元的架橋も行なわれる
。ここでも凝集の量が測定すべき物質に関する直接の尺
度であり、この際評価は検量線を介して行なわれる。

本発明による方法は同様にいわゆるアップティクテスト
（Ｕｐｔａｋｅ−Ｔｅｓｔ　）を実施するために好適で
ある。このためには少なくとももう１つのレセプターＲ
３及び場合によりＲ４を使用する。

２つの方法を第２図に図示する。有利な実施形は第２図
のａ）である。ここではチロキシン結合能の測定法であ
る。すなわちＴＢＧ　（チロキシン結合グロブリン）に
より提供される遊離結合位の数が測定される。このため
には試料溶液にチ チロキシンとビオ７ンとからなる結合体であるレセプタ
ーＲ工及び抗−Ｔ４−抗体であるレセプタ ターＲ３を添加する。この際、チロキシに対して遊離結
合位を有する試料溶液中のＴＢＧとレセプターＲ３とは
レセプターＲ工中に含有されているチロキシンへの結合
に関して競合する。レセブターＲ工及びＲ３と同時に、
又は恒温保持に弓き続いてレセプターＲ２（この場合に
はストレプトアビジンである）ｔ−添加する。ＴＢＧも
しくはレセプターＲ３とレセプターＲ１とから形成され
たすべての複合体はストレプトアビジンと結合すること
ができる。しかしながら架橋はレセプタ−Ｒ３に２つの
レセプターＲ１が結合している複合体によってのみ行な
われる。遊離結合位を有するＴＢＧで試料溶液中に多量
に存在すればする程レセプターＲ１はＴＢＧに結合し、
架橋もしくは凝集及び混濁の上昇がわずかとなる。こう
して混濁の上昇はチロキシンに関する遊離結合位の量に
関する間接的な尺度である。評価は検量線を介して行な
われる。

アップティクテストの変法を第２図のｂ）に示した。こ
こでは第２図のａ）に使用した３種のレセプターに加え
て第４のレセプターＲ４としてチロキシンを使用した。

レセプターＲ１゜Ｒ３及びＲ４の添加後、遊離結合位を
有するＴＢＧとレセプターＲ３とが、レセプターＲ１及
びＲ４への結合に関して競合する。レセプターＲ１が結
合している複合体だけがレセプターＲ２の添加後、Ｒ２
に結合することができる。レセプタＲ３トレセプターＲ
０２つとからなる複合体だけがレセプターＲ２の添加後
架橋し、こうして混濁上昇に導び〈。遊離結合位を有す
るＴＢＧが試料溶液中に多量に存在すればする程、多く
のレセプターＲ１がＴＢＧに結合する。ＴＢＧとレセプ
ターＲ１とからなる複合体は全く架橋をおこすことがで
きず、従って架橋の量は減少し、こうして混濁の上昇も
減少する。こうしてここでも混濁の上昇は遊離結合位を
有する試薬溶液中に存在するＴＢＧ　ＶＣ関する間接的
な尺度である。

本発明により定義された方法原理は多くの実施変法を提
供する。それぞれの場合において、少なくとも２種のレ
セプターが必要である。測定すべき物質は特異的に結合
性の物質であり、特に前記のように二価又は多価の抗原
、抗体又は蛋白質であってよい。

第１のレセプターＲ１としては、特異的に結合するペア
の片側成分Ｐと測定すべき物質と特異的に結合性の成分
にとからなる結合体を使用する。特異的に相互に結合す
るペアは自体公知あ で７る。好適な結合ペア（Ｐ　−Ｒ２）は特にピオチン
−ストレプトアビジンもしくはアビジン；ハプテン−抗
体；抗原−抗体；コンカバリン抗体；糖−レクチン；ノ
・ブテン−結合蛋白質、例工ばチロキシン結合グロブリ
ン及びチロキシン又はオリゴペプチド−抗体である。

結合するペアとしてはピオチンとストレプトアビジンも
しくはアビジンを使用するのが特に有利であり、レセプ
ターＲ１は特にピオチンを含有するのが有利である。

レセプターＲ０の成分には測定すべき物質と結合性であ
る。成分にはその都度測定すべき物質により選択される
。ここでは多くのレセプタが好適である。ハプテン、蛋
白質、ＤＮＡ又は糖の測定のためには、これらの物質又
はそのフラグメントに対する抗体又はその他のレセプタ
、例えば天然に存在する結合蛋白質、例えばチロキシン
結合グロブリンを使用することが特に有利である。成分
にとしてＦａｂ　−７ラグメントを使用するのが特に有
利である。抗体の測定のためには、成分には有利に抗体
に結合性であるエピトープを有する物質又はハプテンが
有利である。

結合体の製造は自体公知法で行なわれる（例えばＥｕｒ
、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、第１３１巻、１９８０年、
第５３６〜３′５８頁に類似の方法）。

本発明による方法に必要な第２のレセプタＲ２は少なく
とも２つのＰに関する結合位を有し、かつ有利に特異的
に結合するペアのＰに対し、て相補的片側成分を多数有
している。レセプターＲ２は反応の際に生じる複合体の
凝集を仲介する。この特異的に結合性のペアの他の片側
成分の多数が反応系に存在するので、天然に試料溶液中
に存在する、この片側成分と結合性物質のわずかな量は
妨害に導びかない。レセプタＲ２はすでに天然に多くの
Ｐに対する結合位を有する物質であってよく、例乏ばス
トレプトアビジン又は抗体である。レセプターＲ２は多
価であってよく、多数のＰに対する結合位を有している
か又は特異的に結合するペアのＰに相補的な片側成分の
ポリマー、例えばポリストレプトアビジンであってよい
。この際、この個々の成分が相互に直接結合しているか
、又は橋を介して相互に結合している。この種のポリマ
の製法は専門家に公知であり、より詳細な説明は必要な
い。

もう１つの実施形によれば、レセプターＲ２は多数のＰ
に相補的な特異的に結合性の片側成分が結合している担
体材料からなる。担体材料としては通常５０〜１１００
０ｎの大きさを有する粒子を使用することができる。好
適な材料はポリスチロール、微細粉二酸化珪素、赤血球
又は架橋アルジミンである。特異的に結合性の片側成分
でのこれらの粒子の被覆は専門家により常用の方法で行
なわれる。例えばヨーロッパ特許筒７３６１１号明細書
及び米国特許筒４７０３０１８号明細書中に記載されて
いる。

このように被覆されたもしくは重合されたレセプターＲ
２は本発明による方法に一般的に使用され、従ってパラ
メーター特異性ではない。

本発明による方法の実施にとって、レセプタＲ１がＲ２
に対する結合位をただ１つ有するということ、すなわち
各々のレセプターＲ１がただ１つのＲ２と反応すること
ができるということは重要である。このことは重要な前
提条件である、それというのもそうでなければＲ２は単
独でレセプターＲ１により架橋され、こうして検出すべ
き物質に起因しない凝集に作用するためである。

本発明方法をアップティクテストの実施のために使用す
る時、少なくとも２つの測定すべき物質のエピトープを
有し、Ｒ１と結合性である、更々るレセプターＲ３ｆ使
用する。こうして、レセプターＲ３のエピトープは測定
すべき物質のエピトープに相応し、これはＲ工のＫへの
結合に作用する。レセプターＲ３としては成分Ｋに対す
る結合位を有する抗体又はＦａ　ｂ　２−７ラグメント
が有利である。この方法の実施の際にはレセプターＲ３
が試料とＲ１への結合に関して競合する。

本発明方法のもう１つの変法においてはレセプターＲ３
に加えて更にレセプターＲ４ヲ使用する。この際、この
レセプターＲ４はレセプタＲ１の成分にである。この方
法の実施の際にはレセプターＲ３と試料がレセプターＲ
１とレセプターＲ４への結合に関して競合する。

この方法は１工程又は多工程で実施することができる。

評価は凝集の量の測定により行なわれる。このための方
法は公知である。好適であるのは例えば測光法による混
濁の測定、比濁法による散乱光測定、粒子の数え上げ又
は光子−相関−分光法（ＰＯ２）である。

各レセプターも、測定すべき物質もそれに決められた反
応成分とそれぞれ特異的に反応することができるので、
すべてのレセプター及び試料を一緒に恒温保持し、この
方法を１工程で実施することが可能である。これは特に
自動分析機中でこの方法を実施する際に有利である。

すべての変法の実施は有利に緩衝液中で行なわれる。こ
の方法の緩衝系は自体公知である。

このために特に好適であるのは（）ＯＯＤ−緩衝液及び
燐酸塩緩衝液である。

本発明により、簡単で迅速に実施され、測定すべき物質
の濃度に依存する測定シグナルを提供する方法が得られ
る。免疫学的な拮抗にある系とシグナル形成系とが分離
しているので、本発明により検出の感度は高められる。

これにより簡単な試薬で低濃度の物質を、迅速かつ確実
に定量測定することができる。

本発明のもう１つの課題は特異的に結合性の物質の測定
試薬であり、これは特異的に結合するペアの片側成分Ｐ
と測定すべき物質と特異的に結合性の成分にとからなる
結合体であるレセプターＲ０と、Ｐに関する少なくとも
２つの結合位を有するレセプターＲ２を含有することを
特徴とする。

本発明による試薬は個々のレセプターＲ工及びＲ２並び
に場合によ！Ｊ　Ｒ３及びＲ４ヲあらかじめ混合して含
有するか、又は物理的に相互に分離して含有していてよ
い。

この試薬は体液及び組織抽出液中の多数のパラメーター
を測定するために好適である。

有利な実施形においては試薬は付加的に緩衝物質を含有
する。特に燐酸塩緩衝物質又はＧ００Ｄ緩衝物質を含有
するのが有利である。

実施例 次に図面及び実施例につき本発明の詳細な説明する。

第１図は本発明による方法の２つの反応原理に関する概
略図である。

第２図はアップティクテストの２つの反応原理に関する
概略図である。

すべての示した方法においては、レセプタＲ２としては
Ｐに関する４つの結合位を有するストレプトアビジンを
使用する。レセプターＲ０としては測定すべき物質と結
合性のレセプタとビオチンとからなる結合体を使用する
。

第１図のａ）は抗体の検出に好適である変法を示す。そ
のためにレセプターＲ１１ｄ測定すべき抗体と結合性の
エピトープを含有する。

第１図のｂ）は多価物質、例えば蛋白質の測定のために
働らく。

第２図のａ）はチロキシンに関するアップティクテスト
を実施するための変法である。ここには前記のレセプタ
ーＲ１及びＲ２の他に付加的に更にレセプターＲ３を使
用する。これは抗Ｔ４−抗体である。

第２図のｂ）はアップティクテストのもう１つの実施形
であり、ここではレセプターＲよ、Ｒ２及びＲ３に付加
的にレセプターＲ４としてチロキシンを使用する。

第６図は抗−Ｔ４−抗体テストに関する検量曲線を示し
、第４図はＡＦＰ−測定に関する検量曲線を示し、第５
図はＴ−アップティクテストに関する検量曲線を示す（
原理は第２図のａ）。

第６図はＴ４−量を変化させることによるＴ−アップテ
ィクテストに関する検量曲線を示す（原理は第２図のｂ
に類似）。

例　　１ ａ）　　ストレプトアビジン−ラテックスの製造２　ｒ
ｎ９／　ｒｕｇの濃度のストレプトアビジンをイミダゾ
ール緩衝液、ｐＨ７，５、ｉ　５　ｍＭｏｔ／　ｌ　、
　ＮａＣ１ＮａＣ１１Ｏ０／を中でクロルメチルスチロ
ール粒子（ラテックス、ｄ＝７Ｑｎｍ、米国特許第４７
０３０１８号明細書）と２重量％の濃度で２４時間−緒
に５５°Ｃで恒温保持し、攪拌する。

反応混合物を６０分間２０００　Ｏｒｐｍで遠心分離し
たあと、上溌を傾潟し、沈殿を牛血清アルブミン０．５
　％　’に有するグリシン緩衝液２００ｍＭｏｔ／　ｌ
中に取り込む。相応する希釈により１重量％のストレプ
トアビジン／ラテックス試薬を製造する。

ｂ）　　ハプテン／ビオチン結合体の製造このためには
ｎ−プチルオキシ力ルポニルテトラヨードチロニン（西
ドイツ国特許公開第２８０５９６１号公報）をペンタメ
チレンジアミンを介してビオチンと結合する（　Ｅｕｒ
、　Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、第１６１巻、１９８０年、第３６３〜
６５８頁に記載と同様に行なう）。Ｔ４−ビオチン結合
体が得られる。

例　　２ Ｔ４に対する抗体の測定 試薬１： Ｔ４−ビオチン結合体　　　　　０．１　μｍｏｔ／ｌ
バルビッール酸ナトリウム 緩衝液、ＰＨ８，５０，１ｒｎｏＬ／１デキストラン　
　　　　　　　　２重量係試薬２： ストレプトアビジン−ラテックス１ＣＪｍｙ／ｍｌグリ
シン緩衝液、ｐＨ７，５２００ｍｍｏｔ／ｌナトリウム
アジド　　　　　　０．１重量％試料としては生理学的
食塩溶液中のＴ４に対するポリクローナル抗体を非特異
的羊−免疫グロブリン（ＩｇＧ　）　０．１　％の添加
下に使用する。

測定の実施： 試料２０μを及び試薬１９６０μｔを３７°Ｃで５分間
恒温保持する。その後、凝集反応を試薬２２０μｔの添
加により開始し、測光機で４０５　ｎｍで単位時間あた
りの光学密度の変化を測定する。結果を第６図に示す。

例　　３ ＡＦＰ　（α−フェト蛋白質：α−Ｆｏｅｔｏｐｒｏｔ
ｅｉｎ）の測定 ａ）抗−ＡＦＰ−抗体のＦａｂ−７ラグメントとビオチ
ンとからなる結合体の製法（抗−ＡＦＰ　−Ｆａｂ−ビ
オチン） ＡＦＰに対するポリクローナル抗体を免疫吸着法により
精製しかつ”　Ａｎａｌｙｔ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

１６１巻、２６２〜２７１頁（１９８７年）もＬ〈は”
　Ａｎａｌｙｔ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、＋　”　１４９巻
、５２９〜５６６頁（１９８５年）によりビオチンに結
合させる。

ｂ）試験の実施 試薬１： 抗−ＡＦＰ　−Ｆａｂ−ビオチン　　５μｇ／ｌバルビ
ッール酸ナトリウム 緩衝液、ｐＨ８，５０−１ｒｎｏｔ／１試薬２： ストレプトアビジン−ラテックス　　１０　ｍｇ／ｒｎ
Ａ！グリシン緩衝液、ｐＨ７−５２０Ｑ　ｍｍｏｔ／ｌ
ナトリウムアジド　　　　　　０．１重量％試料として
はヒト血清中のＡＦＰを使用する。

試料５０μを及び試薬１９００μｔを３７°Ｇで５分間
恒温保持する。その後、凝集反応を試薬２２０μｔの添
加により開始し、かつ単位時間当りの光学密度の変化を
測光機により４０５ｎｍで測定する。結果は第４図に示
されている。

例　　４ Ｔ−アップティクテスト（第２図のａ）による反応原理
） 試験原理は、抗−Ｔ４−抗体とＴ４−ビオチン結合体が
試料のＴＢＧ　（チロキシン結合グロブリン）に対して
競合するという点にある。

測定の実施 試薬１： Ｔ４−ビオチン結合体　　　　　４０　ｒ１ｍｏｔ／Ｚ
リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７，５０，１ｍｏｔ／１
デキストランサルフェート　　　　１重量％試薬２： 羊（ＩｇＧ　）からのポリクローナル 抗−Ｔ４−抗体　　　　　　　０．１η／ｍｌストレプ
トアビジンーラテックス　１０ｍ９／ｎｌｌグリシン緩
衝液ｐＨ７−５２００ｍｍｏｔ／ｌナトリウムアジド　
　　　　　　０．１重量％試料として生理食塩溶液（Ａ
）及び生理食塩溶液中のＴＢｏ　１００μｇ／ｍｌｌを
使用する。

試料２０μを及び試薬１９６ｏμｔを６７°Ｃで５分間
恒温保持する。その後、凝集反応を試薬２２０μｔの添
加により開始し、かつ測光機を用いて４０５　ｎｍで単
位時間当りの光学密度の変化を測定する。結果を第５図
に示す。

例　　５ Ｔ−アップティクテスト（第２図のｂ）による反応原理
） 測定は、過剰のＴＢＧを飽和するためＫＴ４を試料に添
加して行なう。その後、結合していないＴ４を測定する
。これにより、チロキシン結合指数（ＴＢＩ　）に正比
例する検量曲線が得られる。

試薬１： Ｔ４　　　　　　　　　　　　　　１４　／　ｒｎｌリ
ン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７，５０，１ｍｏｔ／Ｚ試薬
２： バルビッール酸ナトリウム緩衝 液ｐＨ８，５’　　　　Ｏ−１ｍｏｔ／１デキストラン
サルフェート　　　２重ｉ％ストレプトアビジンーラテ
ックス　０．２　ｍ９７ｒｎｌ羊からのポリクローナル
抗体 Ｔ４−抗体（ＩｇＧ　）　　　　　　２　ｔｔｆｌ／ｒ
ｎｌ試薬３： エタノール／水（１：１）中の Ｔ４−ビオチン結合体　　　　２μｍｏｔ／を試料とし
ては、規定されたチロキシン結合指数（ＴＢＩ　）目標
値を有するヒト血清を使う（試料Ａ　：　ＴＢＩ　Ｏ，
１９、試料Ｂ：ＴＢ１１．６４）測定の実施 試料２０μｔ、試薬１２０μｌ及び試薬２９００μ１ｅ
５７°Ｃで５分間恒温保持する。その後、凝集反応を試
薬６２０μｔの添加により開始し、かつ測光機を用いて
単位時間当りの光学密度の変化を４０５　ｎｍで測定す
る。結果を第６図に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明による方法の２つの反応原理に関する概
略図、第２図はアップティクテストの２つの反応原理に
関する概略図、第３図は抗−Ｔ４−抗体テストに関する
検量曲線、第４図はＡＦ’Ｐ−測定に関する検量曲線、
第５図はＴ−アップティクテストに関する検量曲線、第
６図はＴ４−量を変化させることによるＴ−アップティ
クテストに関する検量曲線を示す。 ＦＩＧ、１ ○ 測定すべき物質の結合位 Ｒ１の成分Ｋ 〈 Ｒｏの片側成分Ｐ 覆 Ｒ２のＰに関する結合位

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、試料溶液と少なくとも２種のレセプターＲ＿１及び
   Ｒ＿２、ここでＲ＿１とＲ＿２とは相互に結合性であり
   、かつＲ＿１は測定すべき物質と特異的に結合性である
   、との恒温保持及び反応において生じる凝集の測定によ
   り特異的に結合性の物質を測定するための方法において
   、レセプターＲ＿１として特異的に結合するペアの片側
   成分Ｐと測定すべき物質と特異的に結合性の成分にとか
   らなる結合体を、Ｒ＿２として少なくともＰに関する結
   合位２つを有するレセプターを使用することを特徴とす
   る特異的に結合性の物質の測定法。 ２、特異的に結合性のペアの片側成分Ｐと測定すべき物
   質と特異的に結合性の成分にとからなる結合体であるレ
   セプターＲ＿１と、少なくとも２つのＰに対する結合位
   を有するレセプターＲ＿２とを含有することを特徴とす
   る請求項１による特異的に結合性の物質の測定試薬。