JPH01502027A - ３’―アジド―２’，３’―ジデオキシウリジン抗レトロウィルス組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３′−アジド−２’、　３’−ジデオキシウリジン抗レトロウイルス組成物 ＶＡ　Ｍｅｒｉｔ　Ｒｅｖｉｅｗ　Ａｉｅａｒｄが一部資金援助し９本発明をも たらした研究の結果として、米国政府は本発明において権利を有する。 これは１９８７年１月２８日にＣｈｕｎｇ　Ｋ、Ｃｕ及びＲａｙｔｎｏｎｄ　Ｆ 、５ｃｈｉｎａｚｉが出願した「抗ウイルス性薬剤としての３′−アジド−２° 、３゛−ジデオキシピリミジンおよび関連組成物」というタイトルの。 米国特許出願筒００７，４７３号の一部継続出願である。 主里■宜員 本発明はレトロウィルス性疾患、特に後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を引き 起こす後天性ヒト免疫不全（ＡＩＤＳ）ウィルス（ＨＩＶ−１；ＨＴＬＶ−ＩＩ Ｉ／ＬＡＶとしても知られている）の予防薬および治療薬としての３”−アジド −２’、　３’−ジデオキシウリジン（ここでは以下Ｃ５−８７と称す）及び３ ゛−アジド−２゛、３”−ジデオキシウリジンの組成物に関する。 ｌ米■茨盪 エイズ（ＡＩＤＳ）は早くも１９７９年に認められた。　Ｃｅｎｔｅｒｓ　ｆｏ ｒＤｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　（ＣＤＣ）に報告された症例の件数は以後 年々急激に増加し、　ＣＤＣは１９８２年にエイズが新しい伝染病であると宣言 した。この頃エイズは一般に、ヒト向Ｔリンパ球性つィルス■型（ＨＴＬＶ−Ｉ ［１）　、リンパ節疾患関連ウィルス（ＬＡＶ）　。 エイズ関連レトロウィルス（ＡＲＶ）　、またはヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ −１）等様々に呼称されるレトロウィルスの感染の結果であるとみなされていた 。これらのウィルスに対する抗体はエイズまたは前エイズ症候群を有すると診断 された患者の８０％以上に存在し、また危険性を有すると診断されたグループに 高頻度で発見されている。 エイズの発病の危険性を診断することは比較的困難である。 エイズは旧Ｖに感染した個体の少なくとも１０％において発病することが知られ ているが、これはさらに高い割合であろうと疑われている。 かっては完全な免疫系を備え、健康であった成人が欠陥のあるＴ細胞免疫を獲得 した時、患者は一般にエイズを有すると診断される。欠陥のある免疫の症状は２ 通常１８ケ月間ないし３年間に渡り現れる。この欠陥のある免疫の結果、患者は 日和見性感染、カボージ肉腫等の種々の癌、および免疫系の機能の低下に関連し た他の疾病に対し感受性が強くなる。 旧νに関連した他の状態はエイズ関連コンプレックス、つまりＡＲＣである。こ の状態は結局エイズに至ると考えられている。 ＡＩＤＳまたはＡＲＣの免疫不全を予防するかあるいは好転させうる療法は現在 のところ獲得されていない０日和見性感染を有する患者全員およびカボージ肉腫 を有する患者の約半数が診断後２年以内に死亡している。エイズを有する患者の 免疫系を回復させようとする試みはこれまでのところ成功していない。 ＨＰＡ−２３，インターフェロン、リバビリン、ホスホノホーメート、アンサマ イシン、スラミン、イムチオール、ペニシラミン、リファブチン、　ＡＬ−７２ １，３°−アジド−３°−デオキシチミジン（ＡＺＴ）　、および他の２’、３ ’−ジデオキシヌクレオシドを包含する多数の組成物がこのウィルスに対する抗 ウィルス活性を示した。 現時点ではＡＺＴが最良の薬剤であるように思われるが、　ＡＺＴの臨床的な使 用においては毒性を示すことが予備試験の結果指摘されている。Ｙａｒｃｈｏａ ｎらによるＬａｎｃｅｔ　５７５−５８０　（１９８６年）を参照のこと。ＡＺ Ｔは最初、　Ｈｏｒｗｉｔｚ等により合成された（Ｊ、　Ｏｒ　、　Ｃｈｅｍ、 ２９．２０７６−２０７８．　（１９７４））　、フレンド白血病ウィルス（レ トロウィルス）に対するＡＺＴの活性は早くも１９７３年に報告されている。（ ＱｇｔｅｒｔａｇらによるＰｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ ７１、４９８０−４９８５　（１９７４年）　；　Ｋｒｉｅｇらにょろす徂υ工 」屡ユ、　Ｒｅｓ。 １１６、２１−２９　（１９７８年）およびそこに記載されている引用文献を参 照のこと）。 −Ｃに、細胞プロセスの阻害剤はしばしばウィルスの複製を制限するが、この様 な薬剤は通常宿主にとっても有害である。これまでに発見された抗ウィルス剤の うち大部分のものは、その毒性のため長期間処方することはできなかった０例え ば、構造上本発明の組成物と関連のある組成物であるイドクスウリジンは、正常 な細胞に対し毒性を有するため、その臨床的有用性はヘルペス性角膜炎の治療用 点眼剤としての局部的適用に限定されている。明らかに、毒性の低い、新しい抗 ウィルス剤に対する需要が高まっている。 Ｃ５−８７は公知の化合物である０例えば、　ＬｉｎらによるＪ、Ｍｅｄ、Ｃｈ ｅｍ。 ２９５−３０１　（１９８５年）を参照されたい。 ＬｉｎらはＣ５−８７およびＤＤＣＣ両化合物）の、　Ｌ１２１０およびサルコ ーマ１８０細胞に対するインビトロでの活性を試験し。 これらの化合物が共に２両細胞系列に対して非活性であることを発見した。　Ｌ ｉｎらはまた。　Ｃ５−８７およびＤＤＣは共に、　Ｌ１２１０細胞から単離し た２種の特定の酵素に対し最低の阻害活性しか示さないことを記載している。　 Ｌｉｎらはこれらの化合物を低濃度で含有し、　ＨＩＶの複製を阻害するに充分 な組成物を開示しておらず、またこれらの組成物がＨＩＶの治療に使用され得る ということを開示していない。 ＬｉｎおよびＭａｎｃｉｎｉはＣ５−８７およびＤＤＣが共にＬ１２１０細胞に 対して非活性であると記載している。これらの化合物に関する他の活性について は記載されていない。 Ｃｏ１１ａらはＣ５−８７が種々のウィルスに対して非活性であると記載してい る。特に、　Ｃｏ１１ａらはＣ５−８７がコクサッキーウィルスＢ４．ポリオウ ィルス−１，レトロウィルス−１，パラインフルエンザウィルス−３，シンドビ ス（Ｓｉｎｄｂｉｓ）ウィルスおよびはしかに対し非活性であることを記載して いる。従って、　Ｃｏ１１ａ　らはＣ５−８７の様なアジド誘導体は重要な抗ウ イルス性の活性を備えていないと結論している。 当該分野の現状にかんがみて、新しい抗ウイルス性薬剤。 それも特に正常な細胞への毒性の低い抗ウィルス剤に対する強い要望が依然とし て存在していることは明らかである。より詳細には、エイズの死亡率が高くエイ ズに対する有効な治療法が存在しないことから、この様な治療用に新しい低毒性 の薬剤を開発することが大いに必要とされている。というのも、エイズ患者は長 期間、恐らくは生涯に渡る治療を必要とするためである。本発明はこの様な状況 下でなされたものである。 従って１本発明の目的は、非感染細胞に対する毒性の低い。 新しい抗ウイルス性組成物を提供することにある。 本発明の他の目的は、　ＨＴＶの増殖を阻害するための組成物を提供することに ある。 本発明の更に他の目的は、　ＨＩＶによる感染を予防しかつ治療するための方法 を提供することにある。 １里少！豆 本発明のこれらの目的および他の目的は以下においてさらに明確となるが、活性 成分として次に示す化合物を有する組成物を提供することによって達成された。 （以下余白） ここで、Ｒ１はＯＨ，モノホスフェート、ジホスフェート、もしくはトリホスフ ェート；またはこれらの薬理学的に許容されうる塩類である。 この化合物の主要な利点は、その高い選択的抗ウィルス活性である。すなわち、 この化合物は逆転写酵素活性で測定するとウィルスの複製を有意に低減し、そし て、他方ＡＺＴの様な他の抗ウイルス性の化合物よりもはるかに低い細胞毒性度 を示す。 この化合物は患者に投与するのに適した組成物中に活性成分として提供され、イ ンビトロあるいはインビボで旧Ｖに対して充分な活性を示す量で組成物中に含有 される。好ましい実施態様では、該化合物は旧Ｖの逆転写活性を阻害するが。 ヒトのＤＮＡポリメラーゼ活性を有意に阻害しない程度の量で存在する。また、 ３゛−アジド−２°、３′−ジデオキシウリジンモノ−、ジー、およびトリホス フェートならびにこれらの化合物を活性剤として含有する組成物も本発明の範囲 に含まれる。 本発明はまた。　ＡＩＤＳあるいはＡＲＣの予防法または治療法を包含し、該方 法は上記化合物を含有する組成物をＨＩＶに感染している人あるいはウィルスを 獲得する危険のある人に投与することを包含する。該薬剤の投与は制御された放 出デバイスを用いて経口で行われるか、またはリポソーム供給システムと組み合 わせて注射または当該分野で公知の他の方法により単独であるいは他の活性剤と 組み合わせて行われうる。 皿Ｉ企呈垂星脱更 第１図はＡＺＴ　、　Ｃ５−８５（３’−アジド−２’、　３’−ジデオキシ− ５−エチル−ウリジン）およびＣ５−８７がヒトの顆粒球−マクロファージ前駆 細胞のコロニー形成に及ぼす相対的な影響を示すグラフである。 第２図はＣ５−８７が（ａ）Ｖｅｒｏ細胞および（ｂ）ヒト血液表面単核（ＰＢ Ｍ）細胞の成長に与える影響を示す。 第３図はＣ５−８５およびＣ５−８７がＢＡＬＢ／ｃマウスの体重に及ぼす影響 を示すグラフである。 第４図はＣ５−８５およびＣ５−８７がアカゲザルの肝臓酵素（ａ）ＳＧＰ？お よび（ｂ）Ｓ　Ｇ　ＯＴに対して及ぼす影響を示す。 第５図はＨｅＬａ　−Ｔ４細胞においてＣ５−８７、ＡＺＴおよびｄ２ｃ　（２ ”、３゛−ジデオキシシチジン）が旧Ｖ　（ＲＦＩＩ株）に対して及ぼす影響を 比較し、阻害の割合（％）と濃度との関係を示す。 第６図はヒトのＰＢＩ’ｌ細胞における数種のヌクレオシドｉ（Ｕ体のＩＩシー １およびサルの免疫不全ウィルス（Ｓｍ　に対する活性を５０％有効濃度の関数 として示すグラフである。 第７図ａ、ｂおよびＣはヒトのＰＢＭ細胞におけるＡＺＴ　（ａ）。 Ｃ５−８７（ロ）、およびｃｓ−９１（３”−アジド−２゛、３”−ジデオキシ シチジン）（Ｃ）を用いた遅延処置の影響を、阻害の割合（％）と薬剤を投与し た日との関係として示すグラフである。 主里二盪底 本発明は、３゛−アジド−２“、３゛−ジデオキシウリジン（ＣＳ−８７）およ びそのアシル化誘導体とリン酸化誘導体がＨＩＶに対し高度に選択的な抗ウィル ス活性を発揮し、同時に正常な細胞に対しては低い毒性を示すという発見に基＜ 、Ｃ５−８７はそれ自体は公知の化合物であるが、この化合物がＨＩＶに対して 強い抗ウィルス活性を発揮することはこれまで知られていない。 従って、　ＨＩＶに対してこの様な活性を発揮し、しかも副作用は最小限にとど める程度の低濃度でこの化合物を含有する組成物はこれまでのところ知られてい ない、以前に様々な研究者によってＣ５−８７は多種多様のウィルスおよびある 種の腫瘍細胞の両方に対してほとんど活性を有さないかまたは全く活性を有さな いと報告された。活性が低いかまたは非活性であるために、この化合物は比較的 高い濃度の溶液で利用されたが、これらの組成物でさえ重要な活性をもたらさな かった。 細胞培養物において、旧νに対するＣ５−８７の５０％有効量（ＥＣ５゜）は、 該化合物の有効量および相対的毒性が細胞の種類によって変わることを考慮して も、１マイクロモル未満、より正確には２００ナノモルであることがこれまでに 見い出されている。 該化合物の相対的非毒性は、細胞培養物およびマウスとサルを含む動物の両方で 観察されている。　Ｃ５−８７および関連化合物は正常な細胞に対して低い毒性 を示してはいるが（以下の図面および生物学的データの項を参照のこと）、それ にもかかわらずこの様な薬剤を高濃度で投与すると何らかの有害な副作用が起こ る。高濃度とは最終血清濃度が約１００　ｕｎまたはそれ以上となるような量を 指している。従って、高濃度の活性成分を有する化合物は治療上有効であると見 なされない。 ＡＺＴはＣ５−８７よりもＨＩＶに対して幾分活性度が高いが、同じタイプの細 胞培養物で試験した場合、　Ｃ５−８７は同様の治療指数を有する。ある化合物 の治療指数は、集団についての５０％阻害量または致死量ＣＴＣｓ。またはＬＤ ｓ。）を集団についての５０％有効量（ＥＣ，。）で割ることによって算定され る。 該化合物は低濃度で旧Ｖに対し活性であり、同時に低濃度において正常な宿主細 胞に対する毒性が極めて低いという発見は、驚くべきことであった。なぜなら現 在臨床的に試用されている。近似の構造を有する公知の化合物であるＡＺＴが。 種々の実験によって判定するとはるかに高い毒性を示すためである。第１図に示 されている結果から、ヒトの顆粒球−マクロファージ前駆細胞のコロニー形成に 及ぼすＣ５−８７の影響はＡＺＴと比較すると有意に異なることがわかる。Ｃ５ −８７はＣ５−８５よりもこれらの細胞に対して発揮する毒性が見かけ上低いと いうことを銘記すべきである。　Ｃ５−８５は本発明者らが１９８６年５月１日 に出願し、現在米国特許第４．６８１，９３３号となっている。米国特許出願第 ８５７．９４７号の主題であり、ここでは参考文献によって援用されている。 抗ウィルス活性は本発明に用いられているように、　ＨＩＶの増殖を阻害する組 成物の能力を指している。請求の範囲に記載されている組成物はまた。他のレト ロウィルスに対しても抗ウィルス活性を示す。 該組成物のＨＩＶを阻害する能力は種々の実験的手法によって測定され得る。こ の様な手法のひとつとして、ヒト血液表面単核細胞におけるウィルスの複製の阻 害が含まれる。生産されるウィルスの量は、ウィルスにコードされた逆転写酵素 （レトロウィルスにおいて見い出される酵素）を測定することにより算定される 。この分析の結果を表３に示しくこの明細書の生物学的データの項を参照のこと ）、以下の実験的実施例でさらに説明する。他の検定は以下に説明する。 （以下余白） 方ユ ウィルス　の 旧■−（ＬＡｖ　に票汎した　フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ　に↑゛　れたヒ ト　血゛単玄（ＰＢＭ）細　の苦・Ａ、健康な個体から得たＰＢｌｌであって、 ＰＨＡ刺激刺激−３〜４週間培養ＰＢＭ　（２Ｘｌ０ｈ細胞／ｌｄ、容量５ｉ） を２５ｄフラスコに入れた（２組）。 ３１次に、薬物を含む（最終濃度の２倍）あるいは含まない培地を、上記フラス コに入れた（５ｊｄ　；最終容量１０ｄ）。ＡＺＴが正のコントロールとして包 含される。 Ｃ１細胞をウィルス（逆転写酵素により決定すると、約１０，０００カウント／ ｄである）にさらし、ＣＯ□インキュベーターに入れる。ＨＩＶ−１（ＬＡＶ株 ）は、　Ｃｅｎｔｅｒｓ　ｆｏｒ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ。 Ａｔ１ａｎｔａ、　Ｇｅｏｒｇｉａ、から入手する。ストックされているウィル スのＲＴレベルは９通常、　１０’ｃｐｍ　ＲＴ／ａｔである。工程Ｂの前に工 程Ｃがなされた場合にも同様の結果が得られる。 Ｄ、５日目に３細胞および上滑を１５ｄ容の管に移し、約９００×ｇで１０分間 遠心分離にかけた。上清５ｄを除去し、　４０．０００’Ｐｍ＋　３０分間の遠 心分離にかけ、ウィルスを濃縮した（Ｂｅｃｋｍａｎ７０、Ｉ　Ｔｉ　ｒｏｔｏ ｒ）。可溶化したウィルスのペレットを、逆転写酵素のレベルを測定するために 使用する。結果を、採取した上清のｄｐｍ／Ｊｌ＋１！で示す。 この実験により、インビトロで旧Ｖを複製するのを阻害するのに、　Ｃ５−８７ は有意な働きをすることが示される。 ＨＩＶ−（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ　ニｍ”したＡＴＨ−８）＋Ｃ５−８７を、ＡＴＢ −８細胞（Ｓ、Ｂｒｏｄｅｒら、　ＮＣＩ／ＮＩＨ＋　Ｂｅｔｈｅｓｄａ。 Ｍａｒｙｌａｎｄ）に対する抗ウィルス活性についてスクリーニングした。ＡＴ Ｈ−８細胞をまず、３７℃においてポリブレン（２ｇ／ｄ培養物中）で３０分間 にわたり処理した。その細胞を次に、穏やかに遠心分離にかけて（４０％ｇ、４ ℃にて１５分間）集め。 １９／ＨＴＬＶＩＩＩＩ感染細胞により得られた２日後の清澄化した上滑（８， ０００Ｘｇ、４°Ｃにて１５分間）に再懸濁させた。３７°Ｃにおける６０分間 の吸着の後、細胞をＵ字状の底の９６穴ウエルのトレーに分配した（２Ｘ１０’ 細胞、０．１ａｄ／ウエル）０次に。 試験すべき化合物および通常の濃度の２倍のインターロイキンを含む補足ＲＰＭ Ｉ　１６４０培地を等量（０，１ａｄ）を、それぞれのウェルに加える。 試験すべき化合物は１片対数希釈を７回行い、１００〜０．１μｇ／ａｄ！の範 囲において評価を行う、ウィルスに感染した培養物３つ、および感染していない 化合物細胞毒性コントロール培養物１つについて、それぞれ各化合物のレベルで インキュベートを行う、培養物は、Ｃ０７−空気（５％：９５％）の湿雰囲気下 のインキュベーター中で３７°Ｃにてインキュベートを行う。 試験すべき化合物のウェル中の細胞ペレットのサイズを、感染している細胞およ び感染していないコントロールの細胞について、１０日間、毎日比較した。感染 後１０日目に、各ウェルから内容物の一部をそれぞれ採取し、総細胞数および細 胞生存数を測定した（トリパンブルーに色素排除試験に基づく）。 ２’　、　３’−ジデオキシシチジンおよびＡＺＴが正のコントロールとして包 含される。 ）ＩＩＶ−１（ＲＦ−ｎ　に感仇した１１ｅＬａ−Ｔ４　の１ＨａＬａ−７４細 胞（釦旦４７：３３３．１９８６に記載）を、不活性化ウシ胎児血清１０％、ペ ニシリン（１０００／ｄ）　、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｄ）、および 抗生物質Ｇ４１８（１■／ｄ）を含むダルベツコの改変イーグル培地中に保持す る。細胞を９６穴ウエルのプレートにシードしく２Ｘ１０’細胞１０．１　ｄ／ ウェル）。 ２日後に、上清を除去し、ウィルスを加える。４５分間吸着させた後、接種材料 を除去し、細胞をリン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７，２）で洗浄する０種々の濃 度の化合物を保持媒質（２％の血清を含有する）に加える。このプレートをＣＯ ２−空気（５％：９５％）の湿雰囲気下のインキュベーター中でインキュベート し、固定前４８時間の間に融合細胞を生じさせた。細胞を氷酢酸−エタノール（ ５％：９５％）の混合物で固定化し、ギムザ（ＰＢＳ中２０％）で４時間にわた り染色を行う０次に、プレートを洗浄し、乾燥する０次に、細胞増殖巣を立体解 剖顕微鏡で数える。 婬土ＲＩＡ二汰 ＤｕＰｏｎ　ｔのｆｌＩＡキットを用いて旧Ｖ−１ｐ２４のレベルを測定するの に先立ち、細胞を含まない培養物上清をＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００が０．５％と なるように調整する０部分的に精製された不活性化ウィルス溶菌産物を用い、ｐ ２４が０．６２５〜２０■／ｄの範囲で。 標準曲線を作成する（精製ｐ２４に対して較正される）。この定量法の怒度の最 低の限度はｐ２４が３　ｐｇ／−である。 ウェス　ンブロ・ト ウィルスのペレットを、１％ＳＤＳ、　５０ｍＭ　ＤＴＴおよび追跡用色素を含 む２．５ｍＭ　）リス緩衝液（ｐＨ８，０）に溶解させ、そして。 ウェスタンプロット分析を行う。ウェスタンプロット分析は。 Ｂｕｒｎｅｔｔｅにより　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１１２．１９５−２ ０３（１９８１）に記載されたのと類似の手法により行う。出所のはっきりした エイズ患者から得られた抗血清を分離されたタンパクを検出するのに用いた。バ ンドの強度を目視観察により半定量的に。 あるいは、レーザーデンシトメーターを用いて測定した。 本発明の化合物は１次の構造式を有する化合物またはその薬理学的に受容され得 る塩であり、薬学的に受容され得るキャリアと組み合わせて用いられる： ここでＲ’はＯｆｆ、モノホスフェート、ジホスフェート、またはトリホフェー トである。 本発明に包含される化合物はまた。カリウム、ナトリウムおよび４級アミン塩な どの形であり得る。本発明の化合物のリキソ（ｌｙｘｏ）類似体もまた１本発明 の範囲に包含される０例えば、３”置換体は、該構造式に示されるのとは逆の立 体配置を有し得る。 本発明の化合物は、既知の方法により合成され得る。　Ｌｉｎら、　Ｃｏ１１ａ ら、およびＬｉｎおよび！’！ａｎｃｉｎｉは上記について述べており、それぞ れ、これらの化合物を調製するのに使用され得る合成法を提供している。Ｃ５− ８７を調製するのに用いられる特定の合成法は次のとおりである。 ５’−０−）ジチル−２゛−デオキシウリジン（２）２”−デオキシウリジン５ ０　ｇ　（０，２２モル）およびトリチルクロリド６２ｇ　（０，２２モル）の 乾燥ピリジン（３５０ａｄ）溶液を予備加熱（１００°Ｃ）したフラスコに入れ 、エアーコンデンサーをとりつけて１００°Ｃで２時間にわたり撹拌する。反応 混合物を室温にまで冷却し、充分に撹拌している氷中４！中にゆっくりと注いだ 。得られた固形物を濾過し、ピリジンがなくなるまで水洗し、クロロホルムに溶 解させて乾燥した（Ｎａ、ＳＯ，またはＭｇ５Ｏａ）。濾過し、クロロホルムを エバボレートすると生成物がシロップとして得られる（９６ｇ、９３％）。この 生成物は。 さらに精製することなく９次の反応に使用した。 ３′−〇−メチルー５１−トリチルー２′−デオキシウリジン（３）上記（λ） 　９６　ｇ　（０，２モル）の氷冷した乾燥ピリジン（３５０ｄ　）溶液に、メ シルクロリド（９８％、　ｓｐ、ｇｒ、　１４８０）７０ｍｍを滴下して加えた 。この混合物を氷水浴中で３時間撹拌し、充分に撹拌している氷水中にゆっくり と注いだ、析出した固形物を濾過し、水洗して乾燥した（１０１ｇ、　９４％） 。 ２．３′−アンヒドロ−５゛−０−ト１チルー２′−デオキシウリジン（土）３ ’−０−メジ）Ｌｔ−５’−０−）　ＩＪ　チ）Ｌｔ−２’−チオキシウリシフ １０１ｇ（０，１９モル）をエタノール（９５％）３５０ｍに溶解させ、その混 合物を加熱還流した。還流している混合物に、　２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１ ２５ｄを滴下して加えた０反応混合物を減圧下で濃縮した。シロップ状の残渣を シリカゲルカラムを用いたフラッシュバキュームクロマトグラフィーにより精製 した。 ’１ｇ　出ハ、クロロホルム、クロロホルム−メタノール（５０：　１）。 そして最後にクロロホルム−メタノール（３０：　１）で順次行った。精製され 百分をエバボレートすると白色粉末７２ｇ　（８８％）が得られた。 ３′−アジド−５’−０−）リチルー２”−３′−ジデオキシウリジン（５）上 記（４）　７２ｇ　（０，１６５モル）およびリチウムアジド５０ｇの混合物の 乾燥ジメチルホルムアミド（２５０ｄ）溶液を、１２時間にわたり１１０〜１２ ０°Ｃに加熱した０反応混合物を冷却し、氷水４！中にゆっくりと注いだ、得ら れた固形物を濾過し、水洗し、そしてクロロホルムに溶解させて乾燥した（Ｍｇ ＳＯａ）。クロロホルムを濾過し、エバポレートシ、シロップ状の生成物６３ｇ 　（８０％）を得た。 工二１１」」亡Ｊ二」弓シ２Ｌ次ｔ　ＩＪ　ｙ乙坦辷旺）（６）３゛−アジド− ５′−０−トリチル−２゛−３°−ジデオキシウリジン（ｉ）６３ｇ　（０，１ ３２モル）および８０％酢酸３０Ｍ（７）混合物を、２時間にわたり９５〜１０ ０°Ｃに加熱した。反応混合物を氷水浴中で冷却し５分離した固形物を濾過した 。濾液をエバボレート・乾固した。残渣をメタノール−クロロホルム混合液に溶 解させ。 シロップ状に濃縮した。残渣をシリカゲルカラムを用いたフラッシュバキューム クロマトグラフィーにより精製した。溶出は、クロロホルム−メタノール（７０ ：　１）、クロロホルム−メタノール（５０：１）、そして最後にクロロホルム −メタノール（３０：　１）で順次行い、無色の生成物２３ｇ　（７０％）を得 た。 金底 ＯＨＱｌ ０Ｍ５ ）ＩＩＶが引き起こす疾病に罹患しているヒトは、薬学的に有効な量のＣ５−８ ７を薬学的に受容され得るキャリアまたは希釈液の存在下で患者に投与すること によって治療され得る。経口投与のための好ましいキャリア／希釈液は水、特に 滅菌した水である。静脈内投与する場合、好ましいキャリア／希釈液は生理食塩 水またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）である。 本発明による組成物は、治療する患者に有害な副作用を及ぼすことなくインビボ で治療上有効な阻害的影響を旧Ｖに与える量で、薬学的に受容し得るキャリアま たは希釈液に含有される。ｒ）ＩＩＶを阻害する量」とは１例えばここに記載さ れているような分析によって測定される。　ＨＥＶを阻害する効果を発揮し得る 活性成分の量を指している。 組成物の一部として、薬学的に適合し得る結合剤および／またはアジュバント物 質も含有され得る。活性物質はまた。 所望の作用をそこなわず、および／または所望の作用を補うような他の活性物質 とも混合され得る。本発明による活性物質は、液体または固体の形態で５例えば 経口で、非経口で。 静脈内に、皮内に、皮下に、あるいは局部に、いかなる経路によっても投与され 得る。 本発明の化合物の好ましい投与方法は、経口によるものである。経口組成物は一 般に、非活性の希釈液または食用可能なキャリアを含有する。これらはゼラチン のカプセルの中に封入されるかあるいは加圧されて錠剤となる。経口による治療 的な投与のためには、上記化合物を賦形剤と混合し２錠剤。 トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、オブラート、チ ューインガム等の形態で使用することができる。これらの製剤は約Ｏ２２〜４０ μＨの活性成分の血清濃度を生じるべきである。好ましい濃度範囲は０．２〜２ ０μｉであり、最も好ましくは約１〜１０μＨである。しかしながら。 薬剤組成物それ自体の活性成分の濃度は薬剤の生物学的利用能および当業者に公 知の他の要因に依存する。 投薬量の値も、軽減されるべき病状の特定の程度によって変わることを銘記すべ きである。さらに特定の被検者に対し。 特定の投薬量の処方は個人的な必要性および上記組成物を投与または管理する者 の職業的な判断に合わせるべきであることも理解すべきである。更にここで前述 した濃度範囲は単なる例示にすぎず、これらの濃度範囲は本発明の範囲または実 施例を限定するものではないことも理解すべきである。 活性成分は一度に投与しても、あるいは数回分のより少量の投与量に分け、投与 の間隔を変化させて投与してもよい。 錠剤（ｔａｂｌｅｓ、　ｐｉｌｌｓ）　、カプセル剤、トローチ剤等は以下の成 分を含有し得る：微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンのよう な結合剤；でんぷんまたはラクトースのような賦形剤、アルギン剤、プリモゲル （Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）　。 コーンスターチ等のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはステロート 等（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）のような潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素のような滑剤 ；およびスクロースもしくはサッカリンのような甘味剤；またはペパーミント、 サリチル酸メチルもしくはオレンジ香味料等の香味剤が添加され得る。 投与単位形態がカプセルである場合、上記の種類の物質の他に脂肪油等の液体の キャリアを含有し得る。他の投与単位形態は、投与単位の物質的形態を変える他 の種々の物質を、（例えばコーティングとして）包含し得る。従って錠剤（ｔａ ｂｌｅｔｓまたはｐｉｌｌｓ）は砂糖、シェラツク、または他の腸溶丸剤の被覆 剤で被覆される。シロップ剤は活性化合物の他に、甘味剤としてのスクロース、 および所定の保存料９着色料９色素および香料を含有し得る。これらの種々の組 成物を調製する際に使用される物質は、使用される量において薬学的に純粋であ り、かつ無毒であるべきである。 該溶液あるいは懸濁液はまた。以下の成分を含有し得る：注射用蒸留水２食塩溶 液、調整油（ｆｉｘｅｄ　ｏｉｌｓ）　、ポリエチレングリコール、グリセリン 、プロピレングリコールまたは他の合成溶剤のような滅菌した希釈剤；ベンジル アルコールまたはメチルパラベンのような抗菌性物質；アスコルビン酸または亜 硫酸水素ナトリウムのような酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレ ート試薬；アセテート、クエン酸塩またはリン酸塩、および張度調整用薬剤（例 えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース）のような緩衝剤。非経口調製物は アンプル、使い捨ての注射器、またはガラス製またはプラスチック製の複数回投 与用バイアルに封入され得る。 本発明の組成物は薬学的に受容され得るキャリアを有する製剤として調製される 。インブラントおよびマイクロカブセル化供給システムを包含する制御された放 出製剤のように。 活性化合物を身体からすみやかに排出されないよう保護するキャリアが好ましい 。ポリアンヒドリド、グリコール酸、コラーゲン、およびポリ乳酸等のような生 分解性、生体適合性のポリマーを使用し得る。この様な製剤の調製法は当業者に 明らかである。 リポソーム懸濁液（ウィルスの抗原に対するモノクロナール抗体を有する怒染細 胞に標的とするリポソームを含む）もまた薬学的に受容し得るキャリアとして好 ましい。これらは。 例えば米国特許第４．５２２．８１１号（この特許の直接関連する部分はここで は文献として示されている）に記載されているような、当業者に公知の方法によ って調製され得る。例えば。 リポソーム製剤は適当な脂質（例えば、ステアロイルホスファチジルエタノール アミン、ステアロイルホスファチジルクロリン、アラカドイルホスファチジルク ロリン、およびコレステロール）を無機溶剤に溶解し９次いでこの無機溶剤を蒸 発させて容器の表面に乾燥した脂質の薄膜を残存させる。次いで活性化合物（例 えばＣ５−８７，Ｃ５−８７モノホスフエート。 Ｃ５−８７ジホスフエート、および／またはＣ５−８７）ジホスフェート）の水 溶液を容器に導入する。次いで容器を手動式で撹拌し脂質物質を容器の側壁から 分離し、脂質会合体を分散させてリポソームの懸濁液を形成する。 本発明のホスフェート化合物は以下に記載するようにＣ３−８７のリン酸化によ って調製される。 モノホスフェートはＩｍａｔのＪ、Ｏｒ　、Ｃｈｅａ＋、、３４（６）、１５４ ７−１５５０（１９６９年６月）の方法によって調製され得る０例えば、　Ｃ５ −８７約１００■とホスフォリルクロリド約２８０μｌとを乾燥酢酸エチル約８ ｄ中で約Ｏ′Ｃで約４時間撹拌して反応させる。反応液を氷で冷却する。水相を 活性炭のカラムで精製し、５％水酸化アンモニウムをエタノール−水混合物（１ ：　１）中に含む溶離液を用いて溶出する。溶出液を蒸発させると３゛−アジド −２゛、３−ジデオキシウリジンモノホスフェート１００ｍｇがアンモニウム塩 として得られる。 ジホスフェートはＤａｖｉｓｓｏｎらのＪ、Ｏｒ　、Ｃｈｅｍ、、　５２（９） 、１７９４−１８０１（１９８７年）の方法によって調製され得る。３′−アジ ド−２゛。 ３′−ジデオキシウリジンジホスフェートは、　Ｃ５−８７のトシレートから調 製される。Ｃ５−８７のトシレートは２例えば、ピリジン中、室温にて約２４時 間にわたりトシルクロリドと反応させ、常法（例えば、洗浄、乾燥および結晶化 ）処理することによって調製される。 トリホスフェートはＨｏａｒｄ　らのＪ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、８７（８ ）＋１７８５−１７８８　（１９６５年）の方法によって調製され得る。例えば 。 ３”−アジド−２゛、３−ジデオキシウリジンモノホスフェートを（当業者に公 知の方法によってイミダゾリドを作ることによって）活性化し、　ＤＭＦ中でト リブチルアンモニウムピロホスフェートで処理する。反応によって、主として３ ゛−アジド−２”、３−ジデオキシウリジントリホスフェートが得られ、いくら かの未反応モノホスフェートおよびいくらかのジホスフェートが得られる。ＤＥ ＡＥカラムの陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製の後１例えば４−ナト リウム塩として、　Ｃ５−８７トリホスフエートが単離される。 Ｃ５−８７のリン酸化およびアクリレート化誘導体等の構造的に関連のある類似 化合物、ならびにそのウリジンおよびＣ−ヌクレオシド誘導体はインビボでほぼ 同じ濃度範囲で同様の活性を有する。 本発明は一般的に記載されているが１本発明は、ある特定の実施例を参照するこ とによってより良く理解される。この実施例は９本発明を説明するためにのみこ こに包含され、特に指示されない限りは本発明と本発明のいかなる実施態様をも 限定することを意図しない。 Ｃ５−８７が所定の細胞の増殖に対しておよぼす影響、　Ｃ５−８７をインビボ で投与した時の影響、およびＣ５−８７がＲＩＶの複製に対して及ぼす影響を示 すために種々の実験が行われた。 Ｃ５−８７か　の　に・して　ぼ″５ Ｃ５−８７がヒトの顆粒球−マクロファージ前駆体細胞のコロニー形成に対して 及ぼす影響を、第１図で、　ＡＺＴおよびＣ５−８７による影響と比較した。　 Ｃ５−８７がＶｅｒｏ細胞に対して及ぼす影響を第２図ａに示す。Ｖｅｒｏ細胞 は極めて成長速度の速い細胞であり、第２図ａから約４００＋ｓＭの濃度まで、 これらの細胞に対する毒性は比較的低いことがわかる。　ＰＢＭ細胞はＶｅｒｏ 細胞よりもＣ５−８７に対する感度が幾分高いが、それでもこれらの細胞は、有 意な阻害が観察される以前に約２００＋＋＋ＭまでのＣ５−８７の濃度を依然と して許容する（第２図すを参照のこと）。 Ｃ５−８７か　に・して　ぼす≦優 男３図は、　Ｃ５−８５およびＣ５−８１が非感染ＢＡＬＢ／ｃマウスの体重に 及ぼす影響を示す。Ｃ５−８７と、　Ｃ５−８５と、対照との間に何ら有意の相 違が存在しないことがわかる。　ＡＺＴおよびＣ５−８７で処置したＮＩＨ５ｗ １ｓｓマウス（計６７日間０．５ｕａｇ／　ｄの割合で随時経口投与した）の血 液検査の数値を表１に示す、　ＲＢＣおよびＭＣＶの数値の相違から、　ＡＺＴ と比較してＣ５−８７の毒性が非常に低いことが明らかである。 第４図かられかるように、　Ｃ５−８７を静脈内に投与すると。 サルにおいて５ＧＰＴおよび５ＧＯＴが一時的に上昇した。しかしながら、動物 は１週間の後正常に戻った。経口投与（ｐＯ）は静脈内投与よりも毒性が低いこ とが第４図かられかる。 マウスの生体におけるＣ５−８７の薬物動Ｂ（血清および脳中のレベル）を表２ に示す、アカゲザルにおける。　Ｃ５−８７９２０ｍｇ経口投与後の薬物動態パ ラメーターは以下の通りである。 排出　ｔｌ／□Ｋ　＝　０．４８ｈ クリアランス＝　１．７４Ｌ／ｈ／ｋｇＡＵＧ　＝　１１３．４３■ｈ／Ｌ 分布容積（Ｖｓｓ）　＝１．２Ｌ／ｋｇ吸収速度定数（Ｋａ）　−Ｌ７３ｈ　− ’吸収速度ｔ＋ｚ＊　＝　０．４０ｈ 排出速度定数　ｋ　＝　１．４３ｈ　−’々の　におい　ＣＳ−＜ＨＴＶ　（７ ）　”’ニ、　ケー＆−５上記のデータと共に表３が示すように、　Ｃ５−８７ はヒト表面血液単核（ＰＢＭ）細胞において選択的抗ＨＥＶ　−１活性を有する 。 ヌクレオシド類似体の抗ウィルス活性は分析の種類と使用される細胞の種類によ るため、　Ｃ５−８７の活性は１種々の）ＩＥシー１怒受性細胞において決定さ れる。ＰＢＭ細胞の他に、ＡＴＨ−８および最近報告されているＨｅＬａ−Ｔ４ 細胞（伽旦４７：３３３．１９８６年）が用いられた。Ｃ５−８７の、３′アジ ド−３”−デオキシチミジン（ＡＺＴ）および２’、３’−ジデオキシシチジン （ｄ２Ｃ）に関する５０％有効量または最小阻害濃度を表４に記載する。 結果から、　Ｃ５−８７および関連化合物の効力が使用される細胞系列によって 変わることがわかる。　Ｃ５−８７は、　ＡＴＨ−８細胞においてはｄ２Ｃに対 しかなりの活性を有していたが、　ＨｅＬａ−Ｔ４およびＰＢＭ細胞においては 活性の度合がより低かった。Ｃ３−８７は２００μ−までの試験によれば、非感 染細胞に対し毒性を示さなかった。　ＨｅＬａ−７４細胞におけるＣ５−８７　 、　ＡＺＴ、およびｄ２Ｃの、　ＨＩＶ−１に対する阻害の割合（％）を、濃度 の関数として第５図に示す。 Ｃ５−８７がヒトレトロウィルス　ヒト　レトロウィルスおよびネズミレトロウ ィルスに・して　ぼ′″′５１′５１ヒトレトロウイルスト霊長類レトロウィル スと。 ネズミレトロウィルスとの間の抗ウイルス性の５０％有効濃度の相違の比較を表 ５に示す。Ｃ５−８７はフレンド（ＥＹ−１０）またはマウスエコトロピック（ Ｃａｓ−Ｂｒ−Ｍ　ウィルス）に対してよりも、　ＨＩＶ（ＬＡＶ−１）および ＳＩＶ　（ＳＭＮ）　ニ対しテ、ハルカニ効果的である。さらに、　Ｃ５−８７ を含む数種のヌクレオシド類似体の、ヒトのＰＢＭ細胞における活性の比較を第 ６図に示す。ＡＺＴ。 Ｃ５−８７またはＣ５−９１を用いた遅延処置が、ヒトＰＢＭ細胞におけるｔｌ ＩＶ−１およびＳＩＶの複製に対して及ぼす影響を第７図ａ。 ｂ、およびＣに示す。投与の時期が処置の効果にとって重大であることは明らか である。 表６はＣ５−８７およびＡＺＴの５゛−トリホスフェートが旧Ｖ逆転写酵素およ びアルファＤＮＡポリメラーゼに対して及ぼす影響を示し、さらに宿主細胞α− ＤＮＡポリメラーゼ活性ではなく。 旧νに対するＣ５−８７化合物の極度の選択性を示している。 本発明、すなわち３“−アジド−２°１３゛−ジデオキシウリジンおよびその誘 導体を含有する。　ＨＩＶの処置用の組成物の改変は、上記の本発明の詳細な説 明から当業者に明らかである。 このような改変は、添付の特許請求の範囲内にあるよう意図されたものである。 ＦＩＧＵＲＥ　７ 日イ芝 ＦＩＧＵＲＥ２ａ ＦＩＧＵＲＥ２ｂ （ダ　Ｅｊ８ｒ、シタＪ　オレ） ＦＩＧＵＲＥ　４゜ Ｏｈｒ　１　ｈｒ　２４　ｈｒ　１　ｗｋ処！待６柱派時間 Ｏｈｒ　１ｈｒ　２４ｈｒ　ｉｗｋ 々・萱鍾ψ、玲過一時間 ＣＳ　−Ｊ’７．　Ａｌ１　Ｊ−’Ｊ　ｈ”　ｃ１２ｃ　ｐｖ　ＨｅムーＴ−ｔ ｒ　４１ムＺＴ　Ｃ５−ε７　ｄ６Ｃご２丁　ご４Ｃご４丁に−−−ｙ　ａｅｅ −−−−１ｍ、　Ｐ　ＣＴ　／　ＵＳ　εε１０００７３国際調査報告 ｕＳεε０００７３

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. １．次の構造式を有する化合物またはその薬理学的に受容され得る塩を，ＨＩＶ を阻害し得る量で，薬学的に受容され得るキャリアと組み合わせて含有する薬剤 組成物：▲数式、化学式、表等があります▼ ここで，ＲＩはＯＨ，モノホスフェート，ジホスフェートまたはトリホスフェー トである。
2. ２．前記薬学的に受容され得るキャリアにより，前記化合物が体内から急速に排 出されるのが防止される，請求の範囲第１項に記載の薬剤組成物。
3. ３．前記薬学的に受容され得るキャリアがリボソーム懸濁液を包含する請求の範 囲第１項に記載の薬剤組成物。
4. ４．Ｒ１がモノホスフェート，ジホスフェートまたはトリホスフェートである請 求の範囲第３項に記載の薬剤組成物。
5. ５．Ｒ１がモノホスフェート，ジホスフェートまたはトリホスフェートである請 求の範囲第１項に記載の薬剤組成物。
6. ６．Ｒ１がＯＨである請求の範囲第１項に記載の薬剤組成物。
7. ７．前記化合物が，ＨＩＶ逆転写酵素を阻害し得る量で含有される，請求の範囲 第１項に記載の薬剤組成物。
8. ８．前記化合物が，ヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害しない量で含有される，請求 の範囲第７項に記載の薬剤組成物。
9. ９．ヒトにおいてＨＩＶを処置し，そしてＨＩＶ感染を防止する方法であって， 該方法は，ＨＩＶに感染したヒトに，次の構造式を有する化合物またはその薬理 学的に受容され得る塩をＨＩＶを阻害し得る量で，薬学的に受容され得るキャリ アと組み合わせて投与することを包含する： ▲数式、化学式、表等があります▼ ここで，Ｒ１はＯＨ，モノホスフェート，ジホスフェートまたはトリホスフェー トである。
10. １０．前記化合物が体内から急速に排出されるのが保護される，請求の範囲第９ 項に記載の方法。
11. １１．前記薬学的に受容され得るキャリアがリボソーム懸濁液を包含する請求の 範囲第９項に記載の方法。
12. １２．ＲＩがモノホスフェート，ジホスフェートまたはトリホスフェートである 請求の範囲第１１項に記載の方法。
13. １３．ＲＩがモノホスフェート，ジホスフェートまたはトリホスフェートである 請求の範囲第９項に記載の方法。
14. １４．ＲＩがＯＨである請求の範囲第９項に記載の方法。
15. １５．前記化合物を，ＨＩＶ逆転写酵素を阻害し得る量で投与することを包含す る，請求の範囲第９項に記載の方法。
16. １６．ヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害しない量で前記化合物を投与することを包 含する請求の範囲第１５項に記載の方法。
17. １７．ウィルス性疾患を処置するための組成物を調製するための方法であって， 該方法は，３′−アジド−２′，３′−ジデオキシウリジンを，患者の血液中の 濃度が約０．２〜４０ｕｍとなるような量で投与すること，を包含する。
18. １８．さらに，前記３′−アジド−２−，３′−ジデオキシウリジンの合成を包 含する請求の範囲第１７項の方法であって，該合成は，２′−デオキシウリジン とトリチルクロリドとを反応させて５′−Ｏ−トリチル−２′−デオキシウリジ ンを調製し，該５′−Ｏ−トリチル−２′−デオキシウリジンにメシルクロリド を反応させて３′−Ｏ−メシル−５′−トリチル−２′−デオキシウリジンを調 製し，該３′−Ｏ−メシル−５′−トリチル−２′−デオキシウリジンをアルカ リ条件下で還流して２，３′−アンヒドロ−５′−Ｏ−トリチル−２′−デオキ シウリジンを得，リチウムアジドを２，３′−アンヒドロ−５′−Ｏ−トリチル ー２′−デオキシウリジンに反応させて３′−アジド−５′−Ｏ−トリチル−２ ′，３′−ジデオキシウリジンを調製し，該３′−アジド−５′−０−トリチル ー２′，３′−ジデオキシウリジンを酢酸中で加熱することにより行われる。
19. １９．前記３′−アジド−２′，３′−ジデオキシウリジンを，薬学的に受容さ れ得る腸溶剤皮としてのキャリアでカプセル化することを包含する，請求の範囲 第１７項に記載の方法。
20. ２０．前記３′−アジド−２′，３′−ジデオキシウリジンを生物分解性移植物 中にカプセル化することをさらに包含する，請求の範囲第１７項に記載の方法。
21. ２１．３間−アジド−２′，３′−ジデオキシウリジンの供給にリボソーム懸濁 液を使用することをさらに包含する，請求の範囲第１７項に記載の方法。
22. ２２．３′−アジド−２′，３′−ジデオキシウリジンをリン酸化し，モノ，ジ またはトリホスフェートを形成することをさらに包含する，請求の範囲第１７項 に記載の方法。
23. ２３．前記３′−アジド−２′，３′−ジデオキシウリジンをアセチル化するこ とをさらに包含する，請求の範囲第１７項に記載の方法。
24. ２４．注射用の水，生理食塩水，油，ポリエチレングリコール，グリセリン．プ ロピレングリコール，抗菌剤，抗酸化剤，キレート剤，キレート剤，および等張 性を調整するための緩衝剤でなる群から選択される化合物を，該３′−アジド− ２′，３′−ジデオキシウリジンと混合することを包含する，請求の範囲第１７ 項に記載の方法。 表１▲数式、化学式、表等があります▼表２▲数式、化学式、表等があります▼ 表５▲数式、化学式、表等があります▼表３▲数式、化学式、表等があります▼ 表４▲数式、化学式、表等があります▼表６▲数式、化学式、表等があります▼ 発明の詳細な説明