JPH0438727B2

JPH0438727B2 -

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Publication number: JPH0438727B2
Application number: JP61254552A
Authority: JP
Priority date: 1986-10-25
Filing date: 1986-10-25
Publication date: 1992-06-25
Also published as: JPS63107924A

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕本発明は抗レトロウイルス剤に関するものであ
る。〔従来の技術〕レトロウイルスの感染によつて発症する後天性
免疫不全症候群（AIDS）や成人Ｔ細胞白血病
（ATL）は最近ようやくその発症原因が究明され
たばかりである。すなわち、AIDSの場合は
AIDSの原因であるヒト免疫不全ウイルス
（HIV）がヒトのリンパ球のＴ細胞に好んで感染
し、選択的にＴ細胞を殺すという細胞変性を起こ
して免疫不全になると考えられている（医学のあ
ゆみ、第137巻、第12号、973頁（1986））。 AIDSに対しては有効な治療法はまだ確立され
ていないが、その対策が種々検討され、現在治療
に関しては３つの方面から考えられている（月刊
薬事、第28巻、３月号、第61〜65頁（1986））。Ａ HIVに対する抗ウイルス剤による治療 HIVに対する抗ウイルス剤としては、スラ
ミン、リバビリン、HPA−23、アジドチミジ
ン、インターフエロンが現在最も研究されてい
る。しかしながら、いずれも薬効が十分ではな
いか、または副作用のために使用に問題がある
ものが多い。Ｂ免疫増強剤による治療本治療法は、ウイルスにより低下した免疫機
能を免疫増強剤により正常化する方法である。
インターロイキン、イソプリノシンなどの適
用が研究されているが、この方法は対症療法で
あるので前記の抗ウイルス剤との併用が必要と
される。Ｃワクチン過去において多くのウイルス疾患がワクチン
により絶滅ないし、著しく軽減されてきた。し
かしHIVは変異が頻発し、AIDSのワクチンの
開発は著しく困難と考えられている。〔発明が解決しようとする問題点〕前記のとおり、抗HIV作用を有する数種の化
合物が報告されているが、すぐれた抗レトロウイ
ルス作用を有し、しかも毒性や副作用が少なくて
長期の連用に付することができる抗ウイルス剤の
開発が強く望まれているのが現状である。しかして、本発明の目的は、すぐれた抗レトロ
ウイルス作用を有し、かつ安全性の高い薬剤を提
供するところにある。〔問題点を解決するための手段〕本発明者らは、新規な抗レトロウイルス剤とし
て有用なピリミジンヌクレオシド誘導体を開発す
べく研究を重ねた結果、2′，3′−ジデヒドロピリ
ミジンヌクレオシドが抗レトロウイルス剤として
すぐれた特性を示すことを見い出し、本発明を完
成した。すなわち、本発明は、一般式〔〕〔式中、Ｘはアミノ基または水酸基を示し、Ｙは
Ｘがアミノ基のとき水素原子、Ｘが水酸基のとき
メチル基を示す。〕で表わされる2′，3′−ジデヒ
ドロピリミジンヌクレオシドを有効成分として含
有することを特徴とする抗レトロウイルス剤を提
供するものである。本発明薬剤の有効成分である一般式〔〕で表
わされる2′，3′−ジデヒドロピリミジンヌクレオ
シドは具体的には2′，3′−ジデオキシ−2′，3′−
ジデヒドロシチジン（以下「dd−Cyd」と略記す
る。）または3′−デオキシ−2′，3′−ジデヒドロチ
ミジン（以下、「dd−Thd」と略記する。）であ
る。またこれらの塩酸塩、硫酸塩などの任意の薬
学的に許容される塩としての使用も包含する。こ
れら化合物は公知化合物であり、たとえば一般式
〔〕〔式中、Ｘ、Ｙは前記と同意義。〕で表わされる
3′，5′−アンヒドロピリミジンヌクレオシドをジ
メチルスルホキシド中、カリウムｔ−ブトキシド
で処理することにより合成することができる（J.
Org.Chem.、Vol.31、p205（1966））、J.Org.
Chem.、Vol.32、p817（1967））。該反応は、反応溶媒としてジメチルスルホキシ
ド以外にジメチルアセトアミド、ジメチルホルム
アミド、ヘキサメチルりん酸トリアミドなどの非
プロトン性極性溶媒、また反応試薬としてカリウ
ムｔ−ブトキシド以外にナトリウムメトキシド、
ナトリウムイソプロポキシド、ジアザビシクロウ
ンデセン、ｎ−ブチルリチウムなどの強塩基を適
用して行うことができる。反応条件は、０〜100
℃で数時間である。反応生成物の単離は常法によればよく、たとえ
ば抽出、再結晶、吸着クロマトグラフイー、イオ
ン交換クロマトグラフイーなどを適宜に選択、採
用して行うことができる。本発明薬剤は、レトロウイルス感染症の治療の
場で用いられる。本発明薬剤の有効成分である2′，3′−デヒドロ
ピリミジンヌクレオシドの投与量は、患者の重篤
度、薬物に対する忍容性などにより異なり、最終
的には医師の判断により決定されるべきものであ
るが、通常成人１日あたり0.1〜10ｇ、好ましく
は0.2〜５ｇであり、これを１回または分割して
投与する。投与方法は投与ルートに適した任意の
形態をとることができる。本発明薬剤は任意慣用の製剤方法により投与用
に調製することができる。したがつて、本発明は
人体医薬として好適な一般式〔〕で表わされる
2′，3′−デヒドロピリミジンヌクレオシドを含有
する製剤組成物を包含するものである。このような組成物は任意所要の製薬用担体また
は補助剤により慣用の方法で投与に供される。たとえば経口投与用の組成物製剤である場合に
は、消化管からの吸収に好適な形態で提供され、
錠剤、カプセル剤、散剤、糖衣錠、顆粒剤など固
型剤、シロツプ剤、懸濁剤、エリキシル剤などの
液剤として調製すればよい。固型剤の場合、シロ
ツプ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビツト、ト
ラガカント、ポリビニルピロリドンなどの結合
剤、乳糖、砂糖、コーンスターチ、りん酸カルシ
ウム、ソルビツト、グリシンなどの賦形剤、ステ
アリン酸マグネシウム、タルク、ポピエチレング
リコール、シリカなどの潤滑剤、馬鈴薯でんぷん
などの崩壊剤、湿潤剤、安定化剤、矯味剤などの
補助剤を製剤学的配慮により適宜に選択使用して
製剤化することができる。液剤の場合は、補助剤
として、必要に応じてソルビツトシロツプ、メチ
ルセルロース、グルコース／糖シロツプ、ゼラチ
ン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメ
チルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲ
ル、水素化食用脂などの懸濁化剤、乳化剤、ｐ−
ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息
香酸プロピル、ソルビン酸などの防腐剤を用いる
ことができる。また、注射投与用の組成物製剤を調製する場合
は、本発明の有効成分である2′，3′−ジデヒドロ
ピリミジンヌクレオシドに必要によりPH調整剤、
緩衝剤、安定化剤、保存剤、可溶性化剤などを添
加し、常法により、皮下、筋肉内、静脈内注射剤
とする。〔発明の効果〕以下に、本発明薬剤の有効成分である2′，3′−
ジデヒドロピリミジンヌクレオシドの抗HIV作
用についての試験結果を示す。試験例１細胞の増殖率測定による薬剤の抗HIV活性の
測定本試験には、成人Ｔ細胞白血病ウイルス型
（HTLV−）陽性の樹立されたヒトＴ細胞株
MT−４細胞（Gann monogr.、Vol.28、pp219
〜228（1982））とHIVの一種であるHTL−型ウ
イルスを使用した。 HTL−型ウイルス感染MT−４細胞を、各
種濃度の薬剤を添加した補体除去牛胎児血清10
％、ペニシリン100IU／mlおよびストレプトマイ
シン100μｇ／mlを含むRPMI1640培地中に、30万
個／ml播き、37℃で炭酸ガスインキユベーター内
で培養した。３日後に培養物半分を分取し、それ
ぞれの生細胞数（×10⁴／ml）および生存率（％）
をトリパンブルー染色法によつて測定した。残余
の培養物にそれぞれ同濃度の薬剤を含む培地を等
量添加し、さらに３日間培養を続け、同様に生細
胞数を計数した。それぞれの測定値を第１表に示す。表中の数値
は生細胞数（×10⁴／ml）とカツコ内に生存率
（％）を示す。

【表】第１表から明らかなように、対照（薬剤濃度
0μｇ／ml）においてはウイルスの増殖のため３
日後で細胞の増殖はほとんどみられず。６日後で
大半が死滅しているのに対し、dd−Thd 0.125μ
ｇ／ml以上およびdd−Cyd0.25μｇ／ml以上の存
在によつてHTL−型ウイルスによる細胞の死
滅がほぼ完全に防止できる。試験例２Ｔ細胞の増殖に対する薬剤の影響試験例１と同様にしてHTL−型ウイルス非
感染MT−４細胞の増殖に及ぼす薬剤の影響を観
察した。その結果を第２表に示す。表中の数値は
生細胞数（×10⁴／ml）とカツコ内に生存率を示
す。

【表】第２表から明らかなとおり、dd−Thdは10μ
ｇ／ml、dd−Cydは2μｇ／ml以下の濃度ではMT
−４細胞の増殖に何ら影響しない。試験例３間接蛍光抗体法による抗HIV活性の検定試験例１で測定されたそれぞれの生細胞を、そ
れぞれ３分間固定し、1/1000に希釈したヒト抗
HTLV−陽性血清で37℃、30分間処理した。
その後、りん酸緩衝生理食塩水（PBS）で15分
間洗浄し、フルオレセイン−イソチオシアネート
の結合した抗ヒトIgGで37℃、30分間処理した。
再びPBSで洗浄後、蛍光顕微鏡で蛍光を発する
細胞数を測定した。その結果を第３表に示す。表中の数値は、全細
胞数に対する発蛍光細胞数の割合（％）である。

【表】第３表から明らかなように、感染６日目で薬剤
無添加の対照ではほぼ100％の細胞がウイルス抗
原陽性であつたのに対し、薬剤処理群ではdd−
Thd、dd−Cydとも0.5μｇ／ml以上の濃度で１％
以下の抗原陽性細胞が認められたのみで、ウイル
ス抗原の発現は有意に抑制されていた。試験例４ウイルス産生抑制法による抗HIV活性の検定試験例１と同様にHTLV−感染MT−４細
胞を種々の濃度の薬剤存在下で４日間培養し、培
養液中に放出されたウイルス量をプラークアツセ
イにより次のように測定した。 35mmプラスチツクシヤーレに50μｇ／mlのポリ
−Ｌ−リジン溶液１mlを滴下し、室温で１時間処
理してポリ−Ｌ−リジンで被膜したシヤーレを調
製した。各シヤーレをPBSで３回洗浄後、150×
10⁴個／mlのMT−４細胞1.5mlを加え、室温で１
時間処理した。これをPBSで２回静かに洗浄し、
上記の薬剤存在下でのHTLV−感染細胞の培
養上清液100μを静かに加え、室温で１時間放
置してウイルスを吸着させた。各シヤーレにアガ
ロース重層培地（RPMI1640培地に10％牛胎児血
清、抗生物質および0.6％アガロースを添加した
もの）１mlを加え、炭酸ガスインキユベーター中
で37℃、３日間培養した後、ニユートラル・レツ
ドを含むアガロース重層培地１mlを加えてさらに
37℃、３日間培養し、ウイルス量を測定した。以上の検定を３回繰り返し、その平均のウイル
ス量を算出した。その結果を第４表に示す。表中の数値は平均ウ
イルス量（PFU／ml±S.D.、ｎ＝３）である。

【表】第４表から明らかなように、薬剤無添加の対照
のウイルス量が25.7×10⁴PFU／mlであつたのに
対し、薬剤処理群ではウイルス量が有意に減少し
ていた。試験例５プラーク法による抗HIV活性の検定試験例４と同様に処理したポリ−Ｌ−リジン被
膜シヤーレ中のMT−４細胞培養液中に、
2000PFU／mlのウイルス溶液100μを静かに加
え、室温で１時間放置してウイルスを吸着させ
た。各シヤーレにアガロース重層培地１mlを加
え、炭酸ガスインキユベーター中で37℃、３日間
培養した後、ニユートラル・レツドを含むアガロ
ース重層培地１mlを重層した。各シヤーレをさら
に37℃、３日間培養してプラーク数を測定した。以上の検定を３回繰り返し、その平均値を求め
た。その結果を第５表に示す。表中の数値は平均プ
ラーク数（／dish±S.D.、ｎ＝３）である。

〔実施例〕

以下に、本発明の実施例を示し、より具体的な
説明とする。ただし、本発明はこれらの実施例に
より限定されるものではない。実施例１錠剤 dd−Thd 10ｇコーンスターチ 65ｇカルボキシセルロース 20ｇポリビニルピロリドン３ｇステアリン酸カルシウム２ｇ全量 100ｇ常法により１錠100mgの錠剤を調製する。錠剤
１錠中、dd−Thdを10mgを含有する。実施例２散剤、カプセル剤 dd−Cyd 20ｇ結晶セルロース 80ｇ全量 100ｇ両粉末を混合して散剤とする。また散剤100mg
を５号のハードカプセルに充填してカプセル剤と
する。合成例１ dd−Thdの合成カリウムｔ−ブトキシド3.6ｇをジメチルスル
ホキシド100mlに加え、さらに3′−デオキシ−3′，
5′−アンヒドロチミジン3.6ｇを加えて室温で２
時間撹拌した。酢酸−エタノール溶液で中和後、
約50℃で減圧濃縮乾固した。これをアセトンに懸
濁して不溶の塩を濾別し、濾液を濃縮乾固した。
残渣をエタノール50mlに溶解させ、ベンゼン250
mlを加え、この溶液を約50mlまで濃縮放置して
3.2ｇの結晶を得た。これをエタノール−ベンゼ
ンより再結晶してdd−Thd2.9ｇ（収率80％）を
得た。融点：165〜166℃ 紫外部吸収：λ^H2O _nax 266nｍ（ε9910）元素分析：C₁₀H₁₂N₂H₄として計算値Ｃ、53.56 Ｈ、5.40 Ｎ、12.50 実測値Ｃ、53.39 Ｈ、5.43 Ｎ、12.38 実施例２ dd−Cydの合成 5.3ｇのカリウムｔ−ブトキシドを含むジメチ
ルするホキシド溶液150mlに2′，3′−ジデオキシ
−3′−5′−アンヒドロシチジン4.8ｇを加えて溶解
させ、室温で２時間撹拌した。この反応液を約50
℃で減圧濃縮乾固し、残渣を約20mlの水に溶解さ
せ、弱酸性カチオン交換樹脂アンバーライトIRC
−50（H⁺型）のカラムを通過させて中和した。通
過液を濃縮乾固し、残渣を30％メタノール50mlに
溶解させ、強塩基性アニオン交換樹脂ダウエツク
ス−１（OH^-型）のカラム（２×45cm）に展開
し、メタノール−水で溶出した。目的化合物を含
む画分を集め、濃縮乾固し、これをエタノールよ
り結晶化し、dd−Cyd2.9ｇ（収率61％）を得た。融点：160〜162℃ 紫外部吸収：λ^H2O _nax 271nｍ（ε8710）元素分析：C₉H₁₁N₃O₃として計算値Ｃ、51.67 Ｈ、5.30 Ｎ、20.09 実測値Ｃ、51.89 Ｈ、5.41 Ｎ、19.94

Claims

【特許請求の範囲】１式（）（式中、Ｘは水酸基、Ｙはメチル基を示す。）で
表される3′−デオキシ−2′，3′−ジデヒドロチミ
ジンまたはその塩を有効成分として含有すること
を特徴とする抗レトロウイルス剤。２レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス
（HIV）である特許請求の範囲第１項記載の抗レ
トロウイルス剤。３後天性免疫不全症候群（AIDS）の患者の治
療のために使用する、特許請求の範囲第１項記載
の抗レトロウイルス剤。