JPH02304024A

JPH02304024A - エイズウィルス増殖抑制剤

Info

Publication number: JPH02304024A
Application number: JP1125251A
Authority: JP
Inventors: Kanji Miyamoto; 宮本　寛治; Takuo Okuda; 奥田　拓男; Kazuhiro Hirabayashi; 平林　一広
Original assignee: Minophagen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Minophagen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1989-05-18
Filing date: 1989-05-18
Publication date: 1990-12-17

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、グリシクマリン（Ｇｌｙｃｙｃｏｕｍａｒｉ
ｎ　）、リコカルコンＡ　（ＬｉｃｏｃｈａｌｃｏｎΔ
）、イソリコフラボノール（Ｉｓｏｌｉｃｏｆｌａｖｏ
ｎｏｌ）を含有するエイズウィルス増殖抑制剤に関する
ものである。

［従来の技術及び解決しようとする課題］後天性免疫不
全症候群（ＡＩＤＳ、　−ｆ−イズ）の原因はウィルス
によるものであり、このウィルスは□Ｈｕｍａｎ　Ｉｍ
ｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ（ＨＩＶ）
と呼ばれている。これはヒトレトロウィルスに属し、こ
のウィルスによりリンパ球のヘルパーＴ細胞が破棄され
、その結果、細胞性免疫不全となり、原虫、真菌、ウィ
ルス、細菌などによる日和見感染、カポジ肉腫などが発
生する。

エイズに対する治療剤は、従来からいくつか報告されて
いるが、それらの多くは、ＨＩＶ中に含まれているレト
ロウィルスの複製に重要な役割をもつ逆転写酵素活性を
抑制する作用をもつものである。これらは例えば３゛−
アジド−デオキシチミジン、２’、３’−ジブオキシチ
ジン、スラミンなどであるが、これらは副作用が強い欠
点があり、また、工業的な製造が困難である。

一方、本願出願人は、甘草中に含まれるグリチルリチン
を有効成分とするエイズウィルス増殖抑制剤を特開昭６
３−３３３３２号公報において提供した。

このグリチルリチンを有効成分とする上記増殖抑制剤は
副作用がなく、工業的な製造も可能である点において優
れている。

本願発明者等は、きらに種々の物質を検索中、甘草中の
グリチルリチン以外の副成分にも、ＨＩＶ増殖抑制作用
のあることを見出した。また、これらをグリチルリチン
と併用することにより、エイズウィルスの増殖抑制作用
について相乗効果のあることを発見し、本発明を完成す
るに至ったものである。

本発明は、甘草中のグリチルリチン以外の副成分を含有
するエイズウィルス増殖抑制剤を提供することを目的し
、さらにこれらをグリチルリチンと併用することにより
、各々を単独に用いた場合に比較して、より優れた効果
を発揮するエイズウィルス増殖抑制剤を提供することを
目的とする。

［発明の構成］本発明に係るエイズウィルス増殖抑制剤は、式：で表わされるグリシクマリン、式：で表わされるリコカルコンＡ、及び式：して含有するものである。また、これらの１／＼ずれか
一つ、又は二つ以上を式：で示きれるグリチルリチンと併用することができる。

これらは公知化合物であり、甘草抽出物を精製すること
により得られる。以下これらの化合物の製造について製
造例を掲げる。

［製造例１］グリシクマリンの製〕告西北甘草１０ｇを、ヘキサンにて脱脂した後、酢酸エチ
ルにて抽出する。エバポレーターにて上記酢酸エチル抽
出物の溶液を留去し、粗結晶を得る。これをシリカゲル
カラムクロマトグラフィーにてクロロポルム／メタノー
ル系の溶媒を用いて精製するとグリシクマリンが得られ
る。

［製造例２コインリフフラポノールの製造西北甘草１０ｇを、ヘキサンにて脱脂した後、酢酸エチ
ルにて抽出する。この酢酸エチル抽出物よりＤ　ＣＣＣ
［ｄｒｏｐｌｅｔ　ｃｏｕｎｔｅｒ−ｃｕｒｒｅｎｔ　
ｃｈｒｏｍａｔｏ−ｇｒａｐｈｙ　（液滴向流クロマト
グラフィー）］にてクロロホルム／メタノール／水系の
溶媒にて精製するとイソリフフラボノールが得られる。

［製造例３］リコカルコンＡの製造新キョウ甘草を、７０％アセトン、エチルエーテルを用
いて抽出を行なった後、抽出液をＣＰＥ（遠心向流分配
クロマトグラフィー）にて分離して、タンニン活性画分
を得る。また、この分画を＝８− シリカゲルト力うムクロマトグラフィーによりクロロホ
ルム／メタノール系の溶媒にて精製を行ない、リコカル
コンＡｌ＊だ。

上記の各々の化合物は、以下の実験例に示すように、顕
著なエイズウィルス増殖抑制作用を有するので、エイズ
ウィルス増殖抑制剤として用いることが期待できる。

また、これらの化合物はいずれも極めて低毒性であり、
かつ副作用がない利点がある。

さらに、グリチルリチンと併用することにより、より優
れたエイズウィルス増殖抑制剤が提供できる。

これらを投与する方法としては、いずれも経口、または
非経口のどちらをも選択することカーでき、投与量は、
患者の年齢、症状等により異なるが、一般には、経口投
与では成人−日当り２００〜４００　ｍｇ程度の範囲に
おいて用いることにより所定の効果が期待できる。

剤形は、製剤上許容される無害の一種或いは数種の賦形
剤、例えば灰酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、乳糖
、バレイショデンプン、アルギン酸ナトリウム、ケイ酸
マグネシウム、羨酸マグネシウム、炭酸カルシウム、ヒ
ドロキシプロピルセルロース等を配剤し、常法により、
散剤、顆粒剤、糖衣錠、及びカプセル剤とすることがで
きる。　一方、非経口投与の場合の投与量は、成人−日
当り１２０〜２００　ｍｇの範囲で用いることにより所
定の効果が期待できる。注射剤の場合の溶媒は、例えば
生理食塩液、或いは５％ブドウ糖液が適当である。

以下に、グリシクマリン、リコカルコンＡ１イソリフフ
ラボノールのエイズウィルス増殖抑制作用についての実
験例を掲げるが、これらの実験により、以上の化合物は
エイズウィルスの増殖を強く抑制し、且つ感染細胞の変
性抑制効果のあることが明らかになった。また、グリチ
ルリチンと併用することにより、その効果が増強するこ
とが観察された。

［実験例コ（材料）（１）細胞とウィルス感染細胞はＭＴ−４細胞を用いた。ウィルスはＭｏ１ｔ
　−４／ＨＩＶ産生株より得たものを使用した。

（２）被験薬上記製造例１〜３に従って得たグリシクマリン、リコカ
ルコンＡ２及びイソリフフラボノールを用いた。

グリチルリチン溶液はグリチロン注１号（商標名、合資
会社ミノファーゲン製薬製）を使用した。

［Ｉ］感染細胞の変性抑制実験本実験は、グリシクマリン、リコカルコンＡ、イソリコ
フラボノール、グリチルリチン及びそれらを併用した場
合のＭＴ−４細胞に対するＨＩＶの感染細胞変性の抑制
効果に関するものであり、アガロースなしの培養条件に
おいて実施した。

ＭＴ−４細胞を３０Ｘ１０’／１穴に調整し、ウィルス
液を３７°Ｃで１時間感染させ、種々の濃度のグリシク
マリン、リコカルコンＡ１イソリコフラボノールを加え
て３日間、抗生物質と１０％胎児ウシ血清を含むＲＰ　
Ｍ　Ｉ　１６４０培養液で培養した。

対照として、非感染細胞にも同様の実験を行なった。

トリバンブルー排除法による三日間の培養において、グ
リシクマリン、リコカルコンＡ１イソリコフラボノール
、グリチルリチン、及び前王者とグリチルリチンを併用
したものに細胞変性抑制が見られた。その結果を第１図
に示す。

第１図は、グリシクマリン、リコカルコンＡ５イソリコ
フラボノール、グリチルリチン及びそれらを併用した場
合に、これらがＨＩＶ非感染細胞、及びＨＩＶ感染細胞
の増殖に対して及ぼす影響を表す。

第１図において示すように、上記の夫々の化合物と、ま
た夫々の化合物にグリチルリチンをイ〕１川したものに
は細胞の増強作用が見られた。

リコカルコンＡはグリチルリチンと併用することにより
、上記増強作用が向上した。

［ＩＩ］ウィルス抗原の検出１〉間接螢光抗体法感染細胞について、抗ＨＩＶ抗体陽性血清を使用した間
接螢光抗体法を行なった。

その結果を第２図に示す。

リコカルコンＡ１グリシクマリン、イソリフフラボノー
ル、及びこれらをグリチルリチンと併用したものは、Ｈ
ＩＶ抗原陽性細胞の出現を著しく抑制した。また、リコ
カルコンＡはグリチルリチン泥併用することにより、抑
制率が向上した。

２）ＥＬＩＳＡ法オルガノテクニカ株式会社製のＨＩＶ抗原検出用、ＥＬ
ＩＳＡ法を用いて抗原を検出した。

この反応はキット化されており、キット内容はマイクロ
プレート、ペロキシダーゼ標識抗ヒトＨＩＶ抗体、酵素
標識抗体希釈液、濃縮テトラメチルベンジジン液、及び
基質バッファー等から成り立っている。反応時間は全反
応過程で約３時間を必要とする。また反応は１次、２次
、及び３次反応からなり、１次反応はサンプルとの反応
、２次反応は酵素標識抗体との反応、また３次反応は基
質との反応である。

結果を第３図に示す。結果は吸光度の値で判定した。リ
コカルコンＡ、グリシクマリン、イソリコフラボノール
、及びこれらをグリチルリチンと併用したものは、吸光
度の値が減少している。特にイソリコフラボノール、及
びこれらをグリチルリチンと併用したものは、吸光度の
値が低く、両者の組合わせにより、各々の化合物を単独
で用いた場合に比べて効果が著しいことがわかる。した
がって、より少ない用量で有効なＨＩＶ増殖抑制が可能
であると思われる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本願の増殖抑制剤による感染細胞の変性抑制
率を示す図、第２図は、間接螢光抗体法によるＨＩＶ抗
原陽性細胞の出現率を示す図、第３図は、ＨＩＶ抗原検
出用のＥＲＩＳＡ法による吸光度を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）グリシクマリン、リコカルコンＡ、及びイソリコ
フラボノールのいずれか一つ、または二つ以上をグリチ
ルリチンと共に含有することを特徴とするエイズウィル
ス増殖抑制剤。
（２）グリシクマリンを有効成分として含有することを
特徴とするエイズウィルス増殖抑制剤。
（３）リコカルコンＡを有効成分として含有することを
特徴とするエイズウィルス増殖抑制剤。
（４）イソリコフラボノールを有効成分として含有する
ことを特徴とするエイズウィルス増殖抑制剤。