JPH0143554B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、セリンをラセミ化する酵素であるセ
リン・ラセマーゼを含有するシユードモナス・プ
チダ（Pseudmonas putida）またはアエロモナ
ス・プンクタータ・サブスピプーシーズ・キヤビ
エ（Aeromonas punctata subsp.caviae）に属
する微生物菌体を、40〜60℃で例えば10〜30分間
処理することによつて菌体内に含まれるセリン・
ラセマーゼの活性を低下させることなく副反応で
あるセリン分解酵素活性だけを抑制する菌体内セ
リン分解酵素活性の抑制方法に関するものであ
る。 近年、Ｌ−セリンは医薬用のみならず、Ｌ−ト
リプトフアン合成の原料として世の注目を集める
に至り、工業的規模による安価な生産の期待が高
まつてきている。Ｌ−セリンを生産する方法とし
て、いわゆる発酵法による方法が知られている
が、蓄積量、収率、精製、廃液処理などに問題が
あり、安価な工業的生産方法には至つていない。
これに代つて、有機合成的にDL−セリンを合成
し、Ｌ−トリプトフアンの酵素的生産方法の原料
としてインドールとＬ−セリンの代りにDL−セ
リンを使用し、酵素としてトリプトフアン・シン
セターゼとセリン・ラセマーゼとを用いる方法が
あるが、この場合は残つたＤ−セリンを順次ラセ
ミ化して最終的には全てＬ−セリンに変える必要
がある。このようにＤ−またはＬ−セリンをラセ
ミ化する酵素がセリン・ラセマーゼであり、シユ
ードモナス属またはアエロモナス属に属する微生
物の菌体内に大量に生産される。本酵素は菌体内
に生産されるので菌体そのものを酵素源として利
用するのが工業的見地から有利であるが、該菌体
はセリン・デヒドラターゼ、スレオニン・デヒド
ラターゼなどのセリンを分解する酵素をも含んで
いるので、トリプトフアン合成反応中に原料であ
るセリンが同時に分解され、対セリン反応収率が
低下するという大きな問題があつた。 従来、トリプトフアン合成反応中のセリンの分
解を抑制する方法として該反応液にアンモニウム
イオンを添加する方法が知られているが、この方
法は反応終了後の精製工程に負荷がかかるという
欠点を有しており、実用的により有利な方法が望
まれていた。 本発明者らは、反応液中に化学物質を添加する
ことなく、セリン・ラセマーゼ含有菌体を物理的
に処理することにより、その酵素活性の低下がな
くて、セリン分解酵素活性のみを低下させる方法
を種々検討した結果、該菌体培養液または集菌し
て得られた湿菌体を40°〜60℃で加熱処理した場
合、セリン・ラセマーゼの活性を保持したまま、
セリン分解酵素活性を著しく低下させ得ることを
見出し、本発明を完成した。 本発明に使用するセリン・ラセマーゼを菌体内
に多量に生産する微生物としては、シユードモナ
ス・プチダおよびアエロモナス・プンクタータ・
サブスピーシーズ・キヤビエが用いられる。加熱
処理に供する菌体は、菌体培養液でも良いし、集
菌して得られる湿菌体を緩衡液に懸濁させたもの
でも良いし、更に湿菌体そのものでも良い。 加熱処理時のPHは特に制限はないが、４〜10の
範囲が好ましい。加熱時間はそれぞれ40〜60℃で
通常５〜30分間、好ましくは10〜30分間、更に好
ましくは50〜60℃で５〜15分間程度である。加熱
処理温度と時間の関係は、処理温度が高ければ短
時間で処理し、逆に処理温度が低くければ長時間
処理することが好ましい。 何故ならば、セリン分解酵素活性は処理温度が
高ければ高いほど、処理時間が長ければ長いほど
失活し易いが、セリン・ラセマーゼもまた、同様
の傾向を示すからである。 本発明の方法によれば、菌体内に含まれるセリ
ン・ラセマーゼの活性を低下させることなく、セ
リン分解酵素活性のみを低下させ得るので、本発
明の方法による菌体をトリプトフアンの合成に使
用すれば、反応液中に化学物質を添加することな
くセリンに対する反応収率を向上させることがで
きるので、本発明はＬ−トリプトフアンの酵素的
工業生産に大いに貢献し得る。 以下、実施例により本発明を更に詳細に説明す
る。 実施例 １ セリン・ラセマーゼ生産菌であるシユードモナ
ス・プチダIFO12996を500mlの坂口フラスコ中の
第１表に示す組成の培地100mlに接種し、30℃で
24時間振盪しながら培養した。培養終了後、遠心
分離機で集菌し、乾燥菌体濃度が40ｇ／になる
ように、培養液で希釈した。この菌体懸濁液
を、第４表に示す処理、処理時間で加熱処理した
後遠心集菌して該加熱処理菌体のセリン分解能お
よびセリン・ラセマーゼ活性を測定した。セリン
分解能は第２表に示した反応組成液40mlを30℃24
時間振盪させた後の残セリン量を測定することに
よつて求め、セリン・ラセマーゼ活性は第３表に
示した活性測定用反応液を35℃で２時間反応さ
せ、生成したＬ−トリプトフアンの量を液体クロ
マトグラフイーで測定し、酵素活性は単位時間、
単位菌体量当りのＬ−トリプトフアン生成量で表
示した。得られた結果を第４表に示した。 第１表 エールリツヒ肉エキス 10ｇ ポリペプトン 10ｇ NaCl ５ｇ 蒸溜水で１に希釈して使用（PH6.8） 第２表 DL−セリン 60ｇ ピリドキサールリン酸 0.01ｇ 菌体量（乾燥菌体換算） 8.5ｇ 蒸溜水で１に希釈して使用（PH8.5） 第３表 （重量％） インドール ２％ Ｄ−セリン 1.8％ トリトンＸ−100 ５％ ピリドキサールリン酸 0.001％ シユードモナス・プチダ IFO12996菌体量（乾
燥菌体換算） 0.02％ エツシエリヒア・コリ MT10242（FERM BP−
20） 菌体量（乾燥菌体換算）註） 0.2％ PH 8.5 （註）酵素活性は5.0〔ｇTrp.／ｇ．cell.hr〕

【表】 〓註〓 上表中の※印は比較例を示す。
実施例 ２ セリン・ラセマーゼ生産菌であるアエロモナ
ス・プンクタータ・サブスピーシーズ・キヤビエ
MT−10243（FERM BP−21）を用いて、実施例
１と同様の操作を行なつた。得られた結果を第５
表に示した。

【表】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ セリン・ラセマーゼを含有するシユードモナ
   ス・プチダまたはアエロモナス・プンクタータ・
   サブスピーシーズ・キヤビエに属する微生物菌体
   を40〜60℃で加熱処理することを特徴とする菌体
   内セリン分解酵素活性の抑制方法。