JP3122990B2 - Ｏ−メチル−ｌ−チロシン及びｌ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法 - Google Patents
Ｏ−メチル−ｌ−チロシン及びｌ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、Ｏ−メチル−Ｌ−チロ
シン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法
に関する。Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１
−ナフチル）アラニンは医薬品の合成中間体として有用
である。
シン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法
に関する。Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１
−ナフチル）アラニンは医薬品の合成中間体として有用
である。
【０００２】
【従来の技術】天然に存在する光学活性アミノ酸の多く
は、微生物を用いた発酵法や天然原料からの抽出法によ
り製造される。しかしながら、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシ
ンやＬ−３−（１−ナフチル）アラニンは、非天然型ア
ミノ酸であるため発酵法や抽出法によって製造すること
はできない。
は、微生物を用いた発酵法や天然原料からの抽出法によ
り製造される。しかしながら、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシ
ンやＬ−３−（１−ナフチル）アラニンは、非天然型ア
ミノ酸であるため発酵法や抽出法によって製造すること
はできない。
【０００３】一方、光学活性アミノ酸の製造方法として
は、有機化学合成により製造したＤＬ−アミノ酸を光学
分割する方法がよく知られている（Bull. Agr. Chem. S
oc.Jap., 21, 304 (1957)、J. Am. Chem. Soc., 76, 60
45 (1954)、J. Biol. Chem., 188, 657 (1951)）。しか
し、ＤＬ−アミノ酸の光学分割は操作が煩雑なものにな
り、収率も低くなるという欠点がある。
は、有機化学合成により製造したＤＬ−アミノ酸を光学
分割する方法がよく知られている（Bull. Agr. Chem. S
oc.Jap., 21, 304 (1957)、J. Am. Chem. Soc., 76, 60
45 (1954)、J. Biol. Chem., 188, 657 (1951)）。しか
し、ＤＬ−アミノ酸の光学分割は操作が煩雑なものにな
り、収率も低くなるという欠点がある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、簡便
かつ効率的なＯ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−
（１−ナフチル）アラニンの製造方法を提供することに
ある。
かつ効率的なＯ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−
（１−ナフチル）アラニンの製造方法を提供することに
ある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、Ｏ−メチ
ル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラニ
ンの製造方法について鋭意検討を重ねた結果、化学合成
法によって得られるＤＬ−５−（４−メトキシベンジ
ル）ヒダントイン及びＤＬ−５−（１−ナフチル）メチ
ルヒダントインにフラボバクテリウム属に属する微生物
の菌体もしくは菌体処理物を作用せしめることにより、
そのヒダントイン環が光学特異的に加水分解されてＯ−
メチルチロシン及び３−（１−ナフチル）アラニンのＬ
体のみが収率よく生成されることを見いだし、本発明を
完成するに至った。
ル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラニ
ンの製造方法について鋭意検討を重ねた結果、化学合成
法によって得られるＤＬ−５−（４−メトキシベンジ
ル）ヒダントイン及びＤＬ−５−（１−ナフチル）メチ
ルヒダントインにフラボバクテリウム属に属する微生物
の菌体もしくは菌体処理物を作用せしめることにより、
そのヒダントイン環が光学特異的に加水分解されてＯ−
メチルチロシン及び３−（１−ナフチル）アラニンのＬ
体のみが収率よく生成されることを見いだし、本発明を
完成するに至った。
【０００６】すなわち、本発明は、フラボバクテリウム
属に属し、ＤＬ−５−（４−メトキシベンジル）ヒダン
トイン及びＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒダント
インを各々Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１
−ナフチル）アラニンに変換する能力を有する微生物の
菌体もしくは菌体処理物をＤＬ−５−（４−メトキシベ
ンジル）ヒダントイン及びＤＬ−５−（１−ナフチル）
メチルヒダントインに作用せしめ、各々生成するＯ−メ
チル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラ
ニンを採取することを特徴とするＯ−メチル−Ｌ−チロ
シン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法
を提供するものである。
属に属し、ＤＬ−５−（４−メトキシベンジル）ヒダン
トイン及びＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒダント
インを各々Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１
−ナフチル）アラニンに変換する能力を有する微生物の
菌体もしくは菌体処理物をＤＬ−５−（４−メトキシベ
ンジル）ヒダントイン及びＤＬ−５−（１−ナフチル）
メチルヒダントインに作用せしめ、各々生成するＯ−メ
チル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラ
ニンを採取することを特徴とするＯ−メチル−Ｌ−チロ
シン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法
を提供するものである。
【０００７】本発明で使用する微生物は、フラボバクテ
リウム属に属し、ＤＬ−５−（４−メトキシベンジル）
ヒダントイン及びＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒ
ダントインを各々Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３
−（１−ナフチル）アラニンに変換する能力を有する微
生物であれば特に限定されないが、具体的に例示すると
フラボバクテリウム・アミノゲネス ＡＪ３９４０（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−３１３５）を挙げることができる。また、
この微生物より自然変異、紫外線照射もしくは化学変異
剤による変異処理等の方法により誘導された変異株も使
用することができる。
リウム属に属し、ＤＬ−５−（４−メトキシベンジル）
ヒダントイン及びＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒ
ダントインを各々Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３
−（１−ナフチル）アラニンに変換する能力を有する微
生物であれば特に限定されないが、具体的に例示すると
フラボバクテリウム・アミノゲネス ＡＪ３９４０（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−３１３５）を挙げることができる。また、
この微生物より自然変異、紫外線照射もしくは化学変異
剤による変異処理等の方法により誘導された変異株も使
用することができる。
【０００８】フラボバクテリウム・アミノゲネス ＡＪ
３９４０の菌学的性質は以下の通りである。なお、フラ
ボバクテリウム・アミノゲネス ＡＪ３９４０は微工研
菌寄第３１３５号として工業技術院微生物工業技術研究
所に寄託されている。 （ａ）形態 細胞の形および大きさ；桿菌、０．３〜０．５×０．７
〜０．９μｍ 細胞の多形性；なし 運動性；なし 胞子；形成しない グラム染色性；陰性 抗酸性；なし （ｂ）各培地における生育状態 肉汁寒天平板培養 コロニ−の生育状態；貧弱 コロニ−の形状；円形 コロニ−の隆起；凸円状から隆起状 コロニ−の周縁；全縁 コロニ−の色状；ストロ−色 肉汁寒天斜面培養 生育状態；適度 表面の状態；円滑 光沢；半透明、内光 形状；糸状 色状；アンバ−色 肉汁液体培養 混濁の程度；適度、均一に濁る 液面の生育；特になし 沈澱；粘質性 肉汁ゼラチン穿刺培養；層状に液化する。 リトマス・ミルク；リトマスを還元せず、液化せず、中
性 Ｂ．Ｃ．Ｐ．ミルク；弱酸性、液化せず （ｃ）生理学的性質 硝酸塩の還元；還元する 脱窒反応；陰性 ＭＲテスト；陰性 ＶＰテスト；陰性 インド−ルの生成；陰性 硫化水素の生成；陽性 澱粉の加水分解；陰性 クエン酸の利用；Koser培地では利用しないが、Christe
nsen培地では利用する 無機窒素源の利用；硝酸塩およびアンモニウム塩を利用
しない 色素の生成；水溶性色素を生成しない ウレア−ゼ；陰性 オキシダ−ゼ；弱陽性 カタラ−ゼ；陽性 生育の範囲 生育できるｐＨ範囲；６〜９ 生育限界最高温度；３４℃ 酸素に対する態度；好気性 Ｏ−Ｆテスト；オキシデイティブ 糖類から酸およびガスの生成 カゼインの分解性；分解する ＤＮＡの分解性；分解する 塩化ナトリウムの耐性；２％で生育するが、５％で生育
しない デソキシコレ−ト培地における生育；生育しない
３９４０の菌学的性質は以下の通りである。なお、フラ
ボバクテリウム・アミノゲネス ＡＪ３９４０は微工研
菌寄第３１３５号として工業技術院微生物工業技術研究
所に寄託されている。 （ａ）形態 細胞の形および大きさ；桿菌、０．３〜０．５×０．７
〜０．９μｍ 細胞の多形性；なし 運動性；なし 胞子；形成しない グラム染色性；陰性 抗酸性；なし （ｂ）各培地における生育状態 肉汁寒天平板培養 コロニ−の生育状態；貧弱 コロニ−の形状；円形 コロニ−の隆起；凸円状から隆起状 コロニ−の周縁；全縁 コロニ−の色状；ストロ−色 肉汁寒天斜面培養 生育状態；適度 表面の状態；円滑 光沢；半透明、内光 形状；糸状 色状；アンバ−色 肉汁液体培養 混濁の程度；適度、均一に濁る 液面の生育；特になし 沈澱；粘質性 肉汁ゼラチン穿刺培養；層状に液化する。 リトマス・ミルク；リトマスを還元せず、液化せず、中
性 Ｂ．Ｃ．Ｐ．ミルク；弱酸性、液化せず （ｃ）生理学的性質 硝酸塩の還元；還元する 脱窒反応；陰性 ＭＲテスト；陰性 ＶＰテスト；陰性 インド−ルの生成；陰性 硫化水素の生成；陽性 澱粉の加水分解；陰性 クエン酸の利用；Koser培地では利用しないが、Christe
nsen培地では利用する 無機窒素源の利用；硝酸塩およびアンモニウム塩を利用
しない 色素の生成；水溶性色素を生成しない ウレア−ゼ；陰性 オキシダ−ゼ；弱陽性 カタラ−ゼ；陽性 生育の範囲 生育できるｐＨ範囲；６〜９ 生育限界最高温度；３４℃ 酸素に対する態度；好気性 Ｏ−Ｆテスト；オキシデイティブ 糖類から酸およびガスの生成 カゼインの分解性；分解する ＤＮＡの分解性；分解する 塩化ナトリウムの耐性；２％で生育するが、５％で生育
しない デソキシコレ−ト培地における生育；生育しない
【０００９】以上の菌学的諸性状を基準としてBergey's
Manual of Determinative Bacteriology第８版（197
4）の分類基準により検索すると、ＡＪ３９４０菌は
グラム陰性桿菌、非運動性、好気性、オキシダ−
ゼ陽性（但し微弱）、グルコ−スを酸化的に徐々に分
解する、カタラ−ゼ陽性、集落は黄色、であること
からフラボバクテリウム（Flavobacterium）属に属する
細菌である。
Manual of Determinative Bacteriology第８版（197
4）の分類基準により検索すると、ＡＪ３９４０菌は
グラム陰性桿菌、非運動性、好気性、オキシダ−
ゼ陽性（但し微弱）、グルコ−スを酸化的に徐々に分
解する、カタラ−ゼ陽性、集落は黄色、であること
からフラボバクテリウム（Flavobacterium）属に属する
細菌である。
【００１０】更に、Bergey's Manual of Determinative
Bacteriology 第８版の記載によると、フラボバクテリ
ウム属の菌種はＤＮＡ中のＧＣ含量により２つのセクシ
ョンに分かれていて、セクションＩはＧＣ含量２６〜４
３％、セクションＩＩは６３〜７０％となっている。Ａ
Ｊ３９４０菌のＧＣ含量は６９％であるのでセクション
ＩＩに入る。セクションＩＩの中には６つの種があげら
れているが、そのうち４種は運動性があり、２種は運動
性がない。
Bacteriology 第８版の記載によると、フラボバクテリ
ウム属の菌種はＤＮＡ中のＧＣ含量により２つのセクシ
ョンに分かれていて、セクションＩはＧＣ含量２６〜４
３％、セクションＩＩは６３〜７０％となっている。Ａ
Ｊ３９４０菌のＧＣ含量は６９％であるのでセクション
ＩＩに入る。セクションＩＩの中には６つの種があげら
れているが、そのうち４種は運動性があり、２種は運動
性がない。
【００１１】ＡＪ３９４０菌は運動性がないのでF. cap
sulatum及びF. letescensのいずれかに該当すると考え
られる。しかし、F. capsulatumは耐塩性が高く、ゼラ
チンを液化せず、グルコ−ス以外の糖類ラクト−ス、シ
ュ−クロ−ス、マルト−ス、キシロ−ス、ソルビット、
ラフィノ−スより塩を生成するのに対し、ＡＪ３９４０
菌は耐塩性が低く、ゼラチンを液化し、グルコ−ス以外
の糖類からは酸の生成が認められない点で相違する。ま
た、F. letescensとＡＪ３９４０菌を比較すると、F. l
etescensは耐塩性が高く、３７℃で生育し、デンプンを
加水分解するが、ＡＪ３９４０菌は耐塩性が低く、３７
℃で生育せず、デンプンを加水分解しない点で異なる。
sulatum及びF. letescensのいずれかに該当すると考え
られる。しかし、F. capsulatumは耐塩性が高く、ゼラ
チンを液化せず、グルコ−ス以外の糖類ラクト−ス、シ
ュ−クロ−ス、マルト−ス、キシロ−ス、ソルビット、
ラフィノ−スより塩を生成するのに対し、ＡＪ３９４０
菌は耐塩性が低く、ゼラチンを液化し、グルコ−ス以外
の糖類からは酸の生成が認められない点で相違する。ま
た、F. letescensとＡＪ３９４０菌を比較すると、F. l
etescensは耐塩性が高く、３７℃で生育し、デンプンを
加水分解するが、ＡＪ３９４０菌は耐塩性が低く、３７
℃で生育せず、デンプンを加水分解しない点で異なる。
【００１２】以上のことから、ＡＪ３９４０菌はフラボ
バクテリウム属に属する新菌種と認め、フラボバクテリ
ウム・アミノゲネス（Flavobacterium aminogenes）と
命名した。
バクテリウム属に属する新菌種と認め、フラボバクテリ
ウム・アミノゲネス（Flavobacterium aminogenes）と
命名した。
【００１３】このような微生物の菌体を得るには、当該
微生物を適当な培地で培養増殖せしめるとよい。そのよ
うな培地には格別の制限はなく、通常の炭素源、窒素
源、無機イオン、更に必要ならば有機栄養源等を含む通
常の培地でよい。
微生物を適当な培地で培養増殖せしめるとよい。そのよ
うな培地には格別の制限はなく、通常の炭素源、窒素
源、無機イオン、更に必要ならば有機栄養源等を含む通
常の培地でよい。
【００１４】炭素源としては、グルコ−ス等の炭水化
物、グリセロ−ル等のアルコ−ル類、有機酸その他が適
宜使用される。窒素源としては、アンモニアガス、アン
モニア水、アンモニウム塩その他が用いられる。無機イ
オンとしては、マグネシウムイオン、リン酸イオン、カ
リウムイオン、鉄イオン、マンガンイオンその他が必要
に応じ適宜使用される。有機栄養源としては、ビタミ
ン、アミノ酸等またはこれらを含有する酵母エキス、ペ
プトン、肉エキス、コ−ンスティ−プリカ−、カゼイン
分解物その他が適宜用いられる。
物、グリセロ−ル等のアルコ−ル類、有機酸その他が適
宜使用される。窒素源としては、アンモニアガス、アン
モニア水、アンモニウム塩その他が用いられる。無機イ
オンとしては、マグネシウムイオン、リン酸イオン、カ
リウムイオン、鉄イオン、マンガンイオンその他が必要
に応じ適宜使用される。有機栄養源としては、ビタミ
ン、アミノ酸等またはこれらを含有する酵母エキス、ペ
プトン、肉エキス、コ−ンスティ−プリカ−、カゼイン
分解物その他が適宜用いられる。
【００１５】培地には更に５−インドリルメチルヒダン
トイン等の５−置換ヒダントインを少量添加すれば、Ｄ
Ｌ−５−（４−メトキシベンジル）ヒダントイン及びＤ
Ｌ−５−（１−ナフチル）メチルヒダントインを各々Ｏ
−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフチル）
アラニンに変換する活性の高い菌体が得られる場合があ
る。
トイン等の５−置換ヒダントインを少量添加すれば、Ｄ
Ｌ−５−（４−メトキシベンジル）ヒダントイン及びＤ
Ｌ−５−（１−ナフチル）メチルヒダントインを各々Ｏ
−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフチル）
アラニンに変換する活性の高い菌体が得られる場合があ
る。
【００１６】培養条件にも格別の制限はなく、例えば、
好気的条件下でｐＨ５〜８及び温度２５〜４０℃の範囲
内でｐＨ及び温度を適当に制御しつつ１２〜４８時間程
度培養を行なえばよい。
好気的条件下でｐＨ５〜８及び温度２５〜４０℃の範囲
内でｐＨ及び温度を適当に制御しつつ１２〜４８時間程
度培養を行なえばよい。
【００１７】５−（４−メトキシベンジル）ヒダントイ
ン及び５−（１−ナフチル）メチルヒダントインに作用
せしめるべき菌体としては、菌体を含む培養液をそのま
ま用いてもよい。また、これを一旦培養液より分離して
洗浄もしくは洗浄せずに使用してもよい。また、菌体処
理物としては、凍結乾燥菌体、アセトン処理菌体、界面
活性剤、トルエン等で処理した菌体その他が適宜用いら
れる。更には、菌体をカラギ−ナンなどの高分子に包括
させて固定化した菌体処理物としても使用できる。菌体
もしくは菌体処理物の使用量は所与の反応の場合におい
て目的とする効果を発揮する量であればよく、この有効
量は当業者であれば簡単な予備実験により容易に求めら
れるが、例えば洗浄湿潤菌体の場合は反応液１００ｍｌ
当り１〜４０ｇである。
ン及び５−（１−ナフチル）メチルヒダントインに作用
せしめるべき菌体としては、菌体を含む培養液をそのま
ま用いてもよい。また、これを一旦培養液より分離して
洗浄もしくは洗浄せずに使用してもよい。また、菌体処
理物としては、凍結乾燥菌体、アセトン処理菌体、界面
活性剤、トルエン等で処理した菌体その他が適宜用いら
れる。更には、菌体をカラギ−ナンなどの高分子に包括
させて固定化した菌体処理物としても使用できる。菌体
もしくは菌体処理物の使用量は所与の反応の場合におい
て目的とする効果を発揮する量であればよく、この有効
量は当業者であれば簡単な予備実験により容易に求めら
れるが、例えば洗浄湿潤菌体の場合は反応液１００ｍｌ
当り１〜４０ｇである。
【００１８】上記菌体もしくは菌体処理物を５−（４−
メトキシベンジル）ヒダントインまたは５−（１−ナフ
チル）メチルヒダントインに作用させるには、菌体もし
くは菌体処理物と５−（４−メトキシベンジル）ヒダン
トインもしくは５−（１−ナフチル）メチルヒダントイ
ンとを水に懸濁もしくは溶解し、温度を１０〜７０℃、
好ましくは２０〜５０℃に、ｐＨを５〜１１、好ましく
は６．５〜９に保てばよい。
メトキシベンジル）ヒダントインまたは５−（１−ナフ
チル）メチルヒダントインに作用させるには、菌体もし
くは菌体処理物と５−（４−メトキシベンジル）ヒダン
トインもしくは５−（１−ナフチル）メチルヒダントイ
ンとを水に懸濁もしくは溶解し、温度を１０〜７０℃、
好ましくは２０〜５０℃に、ｐＨを５〜１１、好ましく
は６．５〜９に保てばよい。
【００１９】反応系における５−（４−メトキシベンジ
ル）ヒダントインもしくは５−（１−ナフチル）メチル
ヒダントインの濃度は反応混合物全量（重量）の０．１
〜３０％、好ましくは０．１〜１０％であるが、必要な
らば、例えば高濃度の５−置換ヒダントインが反応を阻
害するような場合には、各５−置換ヒダントインは反応
の間追補添加することができる。
ル）ヒダントインもしくは５−（１−ナフチル）メチル
ヒダントインの濃度は反応混合物全量（重量）の０．１
〜３０％、好ましくは０．１〜１０％であるが、必要な
らば、例えば高濃度の５−置換ヒダントインが反応を阻
害するような場合には、各５−置換ヒダントインは反応
の間追補添加することができる。
【００２０】反応混合物には界面活性剤、有機溶媒、補
酵素、ヒドロキシルアミン、コバルトイオンその他の金
属イオン等を添加すると反応収率が向上する場合があ
る。
酵素、ヒドロキシルアミン、コバルトイオンその他の金
属イオン等を添加すると反応収率が向上する場合があ
る。
【００２１】かくして５〜１００時間も経過すれば、Ｄ
Ｌ−５−（４−メトキシベンジル）ヒダントインからＯ
−メチル−Ｌ−チロシンが、またＤＬ−５−（１−ナフ
チル）メチルヒダントインからＬ−３−（１−ナフチ
ル）アラニンが反応混合物中に著量生成蓄積する。
Ｌ−５−（４−メトキシベンジル）ヒダントインからＯ
−メチル−Ｌ−チロシンが、またＤＬ−５−（１−ナフ
チル）メチルヒダントインからＬ−３−（１−ナフチ
ル）アラニンが反応混合物中に著量生成蓄積する。
【００２２】このようにして生成蓄積したＯ−メチル−
Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラニンを
反応終了混合物より採取分離するには、本発明の方法に
よればラセミ体の５−（４−メトキシベンジル）ヒダン
トイン及び５−（１−ナフチル）メチルヒダントインを
各々Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフ
チル）アラニンに変換できＤ体の副生物は生成しないの
で、合成吸着樹脂を用いる方法、等電点にて沈澱せしめ
る方法等、通常のＬ−アミノ酸の採取分離方法が採用で
きる。
Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフチル）アラニンを
反応終了混合物より採取分離するには、本発明の方法に
よればラセミ体の５−（４−メトキシベンジル）ヒダン
トイン及び５−（１−ナフチル）メチルヒダントインを
各々Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン及びＬ−３−（１−ナフ
チル）アラニンに変換できＤ体の副生物は生成しないの
で、合成吸着樹脂を用いる方法、等電点にて沈澱せしめ
る方法等、通常のＬ−アミノ酸の採取分離方法が採用で
きる。
【００２３】
【実施例】以下、本発明を実施例により更に詳細に説明
する。なお、生成したＯ−メチル−Ｌ−チロシンは、高
速液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセル社製ＣＲ
ＯＷＮ ＰＡＫ ＣＲ（＋）、溶離液：ＨＣｌＯ4水溶
液（ｐＨ２．０）＋１５％（ｖ／ｖ）メタノ−ル、流速
１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度２５℃、検出２２４ｎｍ）に
よって定量した。また、Ｌ−３−（１−ナフチル）アラ
ニンは、高速液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセ
ル社製 ＣＲＯＷＮ ＰＡＫ ＣＲ（＋）、溶離液：Ｈ
ＣｌＯ4水溶液（ｐＨ２．０）＋１５％（ｖ／ｖ）メタ
ノ−ル、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度４０℃、検出２
２０ｎｍ）によって定量した。
する。なお、生成したＯ−メチル−Ｌ−チロシンは、高
速液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセル社製ＣＲ
ＯＷＮ ＰＡＫ ＣＲ（＋）、溶離液：ＨＣｌＯ4水溶
液（ｐＨ２．０）＋１５％（ｖ／ｖ）メタノ−ル、流速
１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度２５℃、検出２２４ｎｍ）に
よって定量した。また、Ｌ−３−（１−ナフチル）アラ
ニンは、高速液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセ
ル社製 ＣＲＯＷＮ ＰＡＫ ＣＲ（＋）、溶離液：Ｈ
ＣｌＯ4水溶液（ｐＨ２．０）＋１５％（ｖ／ｖ）メタ
ノ−ル、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度４０℃、検出２
２０ｎｍ）によって定量した。
【００２４】実施例１ グルコ−ス０．５％、（ＮＨ4）2ＳＯ4０．５％、ＫＨ2
ＰＯ4０．１％、Ｋ2ＨＰＯ4０．３％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ０．０５％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．００１％、Ｍ
ｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ０．００１％、ＣａＣｌ2０．００１
％、酵母エキス１．０％、ペプトン１．０％及びＤＬ−
５−インドリルメチルヒダントイン０．３５％から成る
組成の培地（ｐＨ７．０）を５００ｍｌ容振とうフラス
コに５０ｍｌ入れ、１２０℃で１５分間殺菌した。
ＰＯ4０．１％、Ｋ2ＨＰＯ4０．３％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ０．０５％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０．００１％、Ｍ
ｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ０．００１％、ＣａＣｌ2０．００１
％、酵母エキス１．０％、ペプトン１．０％及びＤＬ−
５−インドリルメチルヒダントイン０．３５％から成る
組成の培地（ｐＨ７．０）を５００ｍｌ容振とうフラス
コに５０ｍｌ入れ、１２０℃で１５分間殺菌した。
【００２５】これにあらかじめブイヨン寒天培地で３０
℃にて２４時間培養したフラボバクテリウム・アミノゲ
ネス ＡＪ３９４０の菌体を一白金耳量接種し、３０℃
にて１６時間振とう培養した。この培養物より菌体を遠
心分離により集め、培養液と同量の生理食塩水で一回洗
浄し、再び遠心分離して洗浄湿菌体を調製した。この菌
体をＤＬ−５−（４−メトキシベンジル）ヒダントイン
を１％含む０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）５
０ｍｌに５％濃度で添加し、４０℃にて２４時間保持反
応した。
℃にて２４時間培養したフラボバクテリウム・アミノゲ
ネス ＡＪ３９４０の菌体を一白金耳量接種し、３０℃
にて１６時間振とう培養した。この培養物より菌体を遠
心分離により集め、培養液と同量の生理食塩水で一回洗
浄し、再び遠心分離して洗浄湿菌体を調製した。この菌
体をＤＬ−５−（４−メトキシベンジル）ヒダントイン
を１％含む０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）５
０ｍｌに５％濃度で添加し、４０℃にて２４時間保持反
応した。
【００２６】反応終了後、遠心分離により菌体を除き、
生成したＯ−メチル−Ｌ−チロシンを高速液体クロマト
グラフィーで測定したところ、７９８ｍｇ／ｄｌのＯ−
メチル−Ｌ−チロシンが生成していた。また、このＯ−
メチル−Ｌ−チロシンを合成吸着剤（三菱化成社製ＳＰ
２０７）を用いた疎水吸着クロマトグラフィーによって
反応液より分離精製し、ＮＭＲスペクトル、光学活性カ
ラムによる高速液体クロマトグラフィー及び比旋光度測
定などの方法で分析した結果、いずれも標品（シグマ社
製）と一致することを認めた。
生成したＯ−メチル−Ｌ−チロシンを高速液体クロマト
グラフィーで測定したところ、７９８ｍｇ／ｄｌのＯ−
メチル−Ｌ−チロシンが生成していた。また、このＯ−
メチル−Ｌ−チロシンを合成吸着剤（三菱化成社製ＳＰ
２０７）を用いた疎水吸着クロマトグラフィーによって
反応液より分離精製し、ＮＭＲスペクトル、光学活性カ
ラムによる高速液体クロマトグラフィー及び比旋光度測
定などの方法で分析した結果、いずれも標品（シグマ社
製）と一致することを認めた。
【００２７】実施例２ 実施例１と同様の方法により、フラボバクテリウム・ア
ミノゲネス ＡＪ３９４０の洗浄湿菌体を調製した。こ
の菌体をＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒダントイ
ンを０．２５％含む０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
８．０）５０ｍｌに２０％濃度で添加し、４０℃にて４
８時間保持反応した。
ミノゲネス ＡＪ３９４０の洗浄湿菌体を調製した。こ
の菌体をＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒダントイ
ンを０．２５％含む０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
８．０）５０ｍｌに２０％濃度で添加し、４０℃にて４
８時間保持反応した。
【００２８】反応終了後、遠心分離により菌体を除き、
生成したＬ−３−（１−ナフチル）アラニンを高速液体
クロマトグラフィーで測定したところ、ＤＬ−５−（１
−ナフチル）メチルヒダントインから２２０ｍｇ／ｄｌ
のＬ−３−（１−ナフチル）アラニンが生成した。ま
た、このＬ−３−（１−ナフチル）アラニンを合成吸着
剤（三菱化成社製ＳＰ２０７）を用いた疎水吸着クロマ
トグラフィーによって反応液より分離精製し、ＮＭＲス
ペクトル、光学活性カラムによる高速液体クロマトグラ
フィー及び比旋光度測定などの方法で分析した結果、い
ずれも標品（シグマ社製）と一致することを認めた。
生成したＬ−３−（１−ナフチル）アラニンを高速液体
クロマトグラフィーで測定したところ、ＤＬ−５−（１
−ナフチル）メチルヒダントインから２２０ｍｇ／ｄｌ
のＬ−３−（１−ナフチル）アラニンが生成した。ま
た、このＬ−３−（１−ナフチル）アラニンを合成吸着
剤（三菱化成社製ＳＰ２０７）を用いた疎水吸着クロマ
トグラフィーによって反応液より分離精製し、ＮＭＲス
ペクトル、光学活性カラムによる高速液体クロマトグラ
フィー及び比旋光度測定などの方法で分析した結果、い
ずれも標品（シグマ社製）と一致することを認めた。
【００２９】実施例３ 実施例１と同様の方法により、フラボバクテリウム・ア
ミノゲネス ＡＪ３９４０の洗浄湿菌体を調製した。こ
の菌体をＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒダントイ
ンを０．１％含む０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．
０）５ｍｌに５％濃度で添加し、更にジメチルスルフォ
キシドまたは２−メトキシエタノ−ルを反応混合物（体
積）の２０％となるように添加し、４０℃にて２０時間
保持反応した。
ミノゲネス ＡＪ３９４０の洗浄湿菌体を調製した。こ
の菌体をＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒダントイ
ンを０．１％含む０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．
０）５ｍｌに５％濃度で添加し、更にジメチルスルフォ
キシドまたは２−メトキシエタノ−ルを反応混合物（体
積）の２０％となるように添加し、４０℃にて２０時間
保持反応した。
【００３０】反応終了後、遠心分離により菌体を除き、
生成したＬ−３−（１−ナフチル）アラニンを高速液体
クロマトグラフィーで測定した。有機溶媒無添加の系で
は３６ｍｇ／ｄｌのＬ−３−（１−ナフチル）アラニン
が生成したのに対し、ジメチルスルフォキシド添加系で
は７１ｍｇ／ｄｌ、２−メトキシエタノ−ル添加系では
４２ｍｇ／ｄｌのＬ−３−（１−ナフチル）アラニンが
生成していた。
生成したＬ−３−（１−ナフチル）アラニンを高速液体
クロマトグラフィーで測定した。有機溶媒無添加の系で
は３６ｍｇ／ｄｌのＬ−３−（１−ナフチル）アラニン
が生成したのに対し、ジメチルスルフォキシド添加系で
は７１ｍｇ／ｄｌ、２−メトキシエタノ−ル添加系では
４２ｍｇ／ｄｌのＬ−３−（１−ナフチル）アラニンが
生成していた。
【００３１】実施例４ フラボバクテリウム・アミノゲネス ＡＪ３９４０を実
施例１と同様の方法で３０℃、１６時間振とう培養し
た。この培養液にＤＬ−５−（４−メトキシベンジル）
ヒダントインを１％濃度で無菌的に添加し、更に３０℃
にて２４時間培養を続けた。この結果、培養液中には７
７０ｍｇ／ｄｌのＯ−メチル−Ｌ−チロシンが生成して
いた。
施例１と同様の方法で３０℃、１６時間振とう培養し
た。この培養液にＤＬ−５−（４−メトキシベンジル）
ヒダントインを１％濃度で無菌的に添加し、更に３０℃
にて２４時間培養を続けた。この結果、培養液中には７
７０ｍｇ／ｄｌのＯ−メチル−Ｌ−チロシンが生成して
いた。
【００３２】実施例５ フラボバクテリウム・アミノゲネス ＡＪ３９４０を実
施例１と同様の方法で３０℃、１６時間振とう培養し
た。この培養液にＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒ
ダントインを０．１％濃度で無菌的に添加し、更に３０
℃にて４８時間培養を続けた。この結果、培養液中には
７４ｍｇ／ｄｌのＬ−３−（１−ナフチル）アラニンが
生成していた。
施例１と同様の方法で３０℃、１６時間振とう培養し
た。この培養液にＤＬ−５−（１−ナフチル）メチルヒ
ダントインを０．１％濃度で無菌的に添加し、更に３０
℃にて４８時間培養を続けた。この結果、培養液中には
７４ｍｇ／ｄｌのＬ−３−（１−ナフチル）アラニンが
生成していた。
【００３３】実施例６ 実施例１と同様の方法により、フラボバクテリウム・ア
ミノゲネス ＡＪ３９４０の洗浄湿菌体を調製した。こ
の菌体を５％の濃度で１００ｐｐｍの濃度のコバルトイ
オンを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、１０
Ｋｃの超音波にて１０分間処理した。この処理物を遠心
分離し上清液を取得した。この上清液５ｍｌにＤＬ−５
−（４−メトキシベンジル）ヒダントインを１ｇ／ｄｌ
となるように添加し、ｐＨを８．０に調整した後４０℃
で２４時間反応させた。
ミノゲネス ＡＪ３９４０の洗浄湿菌体を調製した。こ
の菌体を５％の濃度で１００ｐｐｍの濃度のコバルトイ
オンを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に添加し、１０
Ｋｃの超音波にて１０分間処理した。この処理物を遠心
分離し上清液を取得した。この上清液５ｍｌにＤＬ−５
−（４−メトキシベンジル）ヒダントインを１ｇ／ｄｌ
となるように添加し、ｐＨを８．０に調整した後４０℃
で２４時間反応させた。
【００３４】反応終了後、生成したＯ−メチル−Ｌ−チ
ロシンを高速液体クロマトグラフィーで定量したところ
７９２ｍｇ／ｄｌのＯ−メチル−Ｌ−チロシンが生成し
ていた。また、このＯ−メチル−Ｌ−チロシンを分離精
製し、ＮＭＲスペクトル、光学活性カラムによる高速液
体クロマトグラフィー及び比旋光度測定などの方法で分
析した結果いずれも標品（シグマ社製）と一致すること
を認めた。
ロシンを高速液体クロマトグラフィーで定量したところ
７９２ｍｇ／ｄｌのＯ−メチル−Ｌ−チロシンが生成し
ていた。また、このＯ−メチル−Ｌ−チロシンを分離精
製し、ＮＭＲスペクトル、光学活性カラムによる高速液
体クロマトグラフィー及び比旋光度測定などの方法で分
析した結果いずれも標品（シグマ社製）と一致すること
を認めた。
【００３５】実施例７ 実施例１と同様の方法により、フラボバクテリウム・ア
ミノゲネス ＡＪ３９４０の洗浄湿菌体を調製した。こ
の菌体を実施例６と同様にして超音波処理し、処理物を
遠心分離し上清液を取得した。この上清液４．５ｍｌに
ジメチルスルフォキシド０．５ｍｌを添加し、更にＤＬ
−５−（１−ナフチル）メチルヒダントインを ０．１
％濃度で添加し、ｐＨを８．０に調整した後４０℃で４
８時間反応させた。
ミノゲネス ＡＪ３９４０の洗浄湿菌体を調製した。こ
の菌体を実施例６と同様にして超音波処理し、処理物を
遠心分離し上清液を取得した。この上清液４．５ｍｌに
ジメチルスルフォキシド０．５ｍｌを添加し、更にＤＬ
−５−（１−ナフチル）メチルヒダントインを ０．１
％濃度で添加し、ｐＨを８．０に調整した後４０℃で４
８時間反応させた。
【００３６】反応終了後、生成したＬ−３−（１−ナフ
チル）アラニンを高速液体クロマトグラフィーで定量し
たところ、８１ｍｇ／ｄｌのＬ−３−（１−ナフチル）
アラニンが生成していた。また、このＬ−３−（１−ナ
フチル）アラニンを分離精製し、ＮＭＲスペクトル、光
学活性カラムによる高速液体クロマトグラフィー及び比
旋光度測定などの方法で分析した結果いずれも標品（シ
グマ社製）と一致することを認めた。
チル）アラニンを高速液体クロマトグラフィーで定量し
たところ、８１ｍｇ／ｄｌのＬ−３−（１−ナフチル）
アラニンが生成していた。また、このＬ−３−（１−ナ
フチル）アラニンを分離精製し、ＮＭＲスペクトル、光
学活性カラムによる高速液体クロマトグラフィー及び比
旋光度測定などの方法で分析した結果いずれも標品（シ
グマ社製）と一致することを認めた。
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 13/04 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】フラボバクテリウム属に属し、ＤＬ−５−
（１−ナフチル）メチルヒダントインをＬ−３−（１−
ナフチル）アラニンに変換する能力を有する微生物の菌
体もしくは菌体処理物をＤＬ−５−（１−ナフチル）メ
チルヒダントインに作用せしめ、生成するＬ−３−（１
−ナフチル）アラニンを採取することを特徴とするＬ−
３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3969492A JP3122990B2 (ja) | 1992-02-26 | 1992-02-26 | Ｏ−メチル−ｌ−チロシン及びｌ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3969492A JP3122990B2 (ja) | 1992-02-26 | 1992-02-26 | Ｏ−メチル−ｌ−チロシン及びｌ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05236978A JPH05236978A (ja) | 1993-09-17 |
| JP3122990B2 true JP3122990B2 (ja) | 2001-01-09 |
Family
ID=12560148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3969492A Expired - Fee Related JP3122990B2 (ja) | 1992-02-26 | 1992-02-26 | Ｏ−メチル−ｌ−チロシン及びｌ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3122990B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100491842C (zh) * | 2004-03-16 | 2009-05-27 | 松下电器产业株式会社 | 嵌入式加热烹调器 |
| US8161960B2 (en) | 2007-01-09 | 2012-04-24 | Lg Electronics Inc. | Built-in cooking appliance |
| US8367982B2 (en) | 2006-12-29 | 2013-02-05 | Lg Electronics Inc. | Built-in cooking appliance and installation apparatus for the same |
-
1992
- 1992-02-26 JP JP3969492A patent/JP3122990B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100491842C (zh) * | 2004-03-16 | 2009-05-27 | 松下电器产业株式会社 | 嵌入式加热烹调器 |
| US8367982B2 (en) | 2006-12-29 | 2013-02-05 | Lg Electronics Inc. | Built-in cooking appliance and installation apparatus for the same |
| US8161960B2 (en) | 2007-01-09 | 2012-04-24 | Lg Electronics Inc. | Built-in cooking appliance |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05236978A (ja) | 1993-09-17 |
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