JP7086060B2 - 組成物、植物の成長に有益で又は植物有害生物に対する保護をもたらすための方法及び植物種子 - Google Patents

組成物、植物の成長に有益で又は植物有害生物に対する保護をもたらすための方法及び植物種子 Download PDF

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Description

ATCC PTA-122161
（関連出願の相互参照）
本願は２０１６年１０月５日に出願された米国仮出願番号６２／４０４，２７５の利益を主張し、その全体を参照することでその開示が本明細書に組み入れられる。
（技術分野）
本開示の内容は、植物の成長に有益で、植物有害生物を防除するために植物の種子及び根、並びに植物周辺の土壌に適用するための単離されたバチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）細菌の菌株を含む組成物に関する。
植物の成長及び健康に有利な効果をもたらす多くの微生物が土壌に存在し、植物、特に根域に関連して生存し（根圏関連細菌）、あるいは植物内の内生植物として生きていることが知られている。それらの有益な植物成長促進特性は、窒素固定、鉄キレート化、リン酸塩可溶化、無益な微生物の阻害、有害生物への耐性又は有害生物の排除、全身的な抵抗性誘導（ＩＳＲ）、全身的な獲得耐性（ＳＡＲ）、有用な土壌有機物を増加させる土壌中での植物物質の分解、及び植物の成長、発達及び干ばつのような環境的ストレスに対する応答を刺激するインドール酢酸（ＩＡＡ）、アセトイン及び２，３－ブタンジオールのような植物ホルモンの合成等である。さらに、これら微生物は、前駆体分子、１－アミノシクロプロパン－１－カルボン酸塩（ＡＣＣ）を崩壊させることで植物のエチレンストレス応答を妨げることによって、植物の成長を刺激し、果実の熟成を遅らせる。これらの有益な微生物は、土壌の質、植物の成長、産出、及び作物の品質を改善できる。様々な微生物が植物病害を防除するのに有用となる等の生物学的活性を示す。一般に生物農薬（バイオペスティサイド、生命体及び当該生命体によって自然に産生される化合物）は合成した肥料及び農薬よりも安全でより生分解可能であると考えられている。
例えば、根圏の及び内生の両方の細菌に関連する有益な植物が、病害及び害虫への抵抗性から低温、塩分及び乾燥ストレス等の環境ストレスに対する耐性に及ぶ宿主植物への多くの利益をもたらすことで知られている。植物成長促進細菌を植菌された植物がより多くの水分と栄養とを、例えば根系をより発達させることで土壌から獲得するため、植物はより健康に育ち、生物的及び非生物的ストレスの影響を受けにくくなる。したがって、本発明に係る微生物組成物は、作物の生産性を最大化するために、単独で、あるいは化学的な肥料、除草剤及び農薬等の従来の作物管理材料と組み合わせて使用される。植物成長促進効果は、より早い植物の成長及び地上バイオマスの増加、早期の生命力を改善するのに応用され得る特性となる。早期の生命力の改善の利益の１つは、植物がより競争的になり、雑草を打ち負かすことで、作業及び除草剤の使用を最小化することによって雑草管理のためのコストを直接減らせる。また、植物成長促進効果は、水及び栄養の取り込みに関わる根の発達の改善、例えばより多くの細根を有するより深い、幅広い根をもたらすことになる。この特性によって、農業資源のより良好な使用、そして灌漑の必要性及び／又は農薬使用で用いられる水の削減が可能になる。根の発達及び根の構造における変化は、窒素固定及びリン酸塩可溶化等の栄養取り込みに関して植物を助ける有益な真菌及び細菌のような他の土壌微生物と植物との相互作用に影響する。また、これらの有益な微生物は、植物病原菌と競争し、植物全体の健康を向上させ、化学殺真菌剤及び農薬の必要性を低下させる。また、より発達した根系によって、有害生物がいる場合でも生産の改善が可能となる。
限定されないが、ボトリチス属種（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｐｐ．）（例えばボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ））、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ．）（例えばＦ．オキシスポラム（Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）及びＦ．グラミネアラム（Ｆ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ））、リゾクトニア属種（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ．）（例えば、Ｒ．ソラニ（Ｒ．ｓｏｌａｎｉ））、マグナポルテ属種（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｓｐｐ．）、マイコスフェレラ属種（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｓｐｐ．）、プシニア属種（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｐｐ．）（例えば、Ｐ．レコンディタ（Ｐ．ｒｅｃｏｎｄｉｔａ））、フィトプツロラ属種（Ｐｈｙｔｏｐｔｈｏｒａ ｓｐｐ．）及びファコプソラ属種（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｓｐｐ．）（例えば、Ｐ．パキリジ（Ｐ．ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ））等の真菌植物病原体が、農業及び園芸業において深刻な経済的損失を引き起こす植物有害生物の１つのタイプである。化学剤が真菌の植物病原体の防除に使用されるが、化学剤の使用は高コスト、有害生物の耐性株の出現、及び潜在的な望ましくない環境への影響等の欠点を抱えている。さらに、上記のような化学的処理は、当該処理が標的とする植物有害生物の他に、有益な細菌、真菌及び節足動物に悪影響を及ぼす。植物有害生物の第２のタイプは、限定されないがエルウィニア属種（Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｐｐ．）（例えば、エルウィニア・クリサンチミー（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ））、パントエア属種（Ｐａｎｔｏｅａ ｓｐｐ．）（例えばＰ．シトレア（Ｐ．ｃｉｔｒｅａ））、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）（例えばキサントモナス・カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ））、シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）（例えばＰ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ））及びラルストニア属種（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｐｐ．）（例えばＲ．ソラナセラム（Ｒ．ｓｏｌｅａｃｅａｒｕｍ））等の農業及び園芸業において深刻な経済的損失を引き起こす細菌性病原体である。病原性真菌と同様に、これら細菌性病原体に対する化学薬品の使用は欠点を抱えている。ウイルス及びウイルス様生命体は、第３の植物病害原因因子を含み、その防除は難しいが、細菌性微生物は、全身的な抵抗性誘導（ＩＳＲ）を介して植物に抵抗性を与えることがある。このため、病原性真菌、ウイルス及び細菌を防除する生物肥料及び／又は生物農薬として使用できる微生物は好ましく、農業持続性を改善するために大いに求められている。植物病原体の最後のタイプには、植物病原性の線虫及び昆虫が含まれ、これは深刻な被害と植物の損失と収穫量の減少の原因となる。
バチルス種のいくつかが生物防除株として報告され、中には市販の製品に適用されたものもある（非特許文献１）。例えば、市販の生物防除製品に現在使用されている株は、ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰ ＳＣＩＥＮＣＥによって製造されるＳＯＮＡＴＡ及びＢＡＬＬＡＤ－ＰＬＵＳにおける活性成分として使用されるバチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）株ＱＳＴ２８０８、ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰ ＳＣＩＥＮＣＥによって製造されるＹＩＥＬＤＳＨＩＥＬＤにおける活性成分として使用されるバチルス・プミルス株ＧＢ３４、ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰ ＳＣＩＥＮＣＥによって製造されるＳＥＲＥＮＡＤＥにおける活性成分として使用されるバチルス・サブチィリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）株ＱＳＴ７１３、ＨＥＬＥＮＡ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＣＯＭＰＡＮＹによって製造されるＫＯＤＩＡＫ及びＳＹＳＴＥＭ３における活性成分として使用されるバチルス・サブチィリス株ＧＢＯ３等である。バチルス・チューリンゲンシス及びバチルス・フィルムス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｉｒｍｕｓ）の種々の株が線虫及び昆虫に対する生物防除剤に適用され、これらの株が、ＶＡＬＥＮＴ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮによって製造される、バチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ株を含むＤＩＰＥＬ、ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰ ＳＣＩＥＮＣＥによって製造される、Ｂ．フィルムス株を含むＮＯＲＴＩＣＡ及びＰＯＮＣＨＯ－ＶＯＴＩＶＯ等の多数の市販の生物防除製品の基礎を担っている。さらに現在は、バチルス株は、ＡＢｉＴＥＰ ＧｍｂＨによって製造されるＲＨＩＺＯＶＩＴＡＬ ４２における活性成分として使用されるバチルス・サブチィリス変種アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｖａｒ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）株ＦＺＢ４２等の市販の生物刺激剤製品に使用されるのに加え、ＪＨＢｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃによって製造されるＦＵＬＺＹＭＥのような生物刺激剤にそれらの発酵抽出物を含む細胞全体が含まれる。
しかし、有益な植物の成長及び植物有害生物の制御のための新たな組成物及び方法の開発が求められている。
Ｊｏｓｅｐｈ Ｗ．Ｋｌｏｅｐｐｅｒ，ｅｔ ａｌ．２００４，Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．９４，Ｎｏ．１１，１２５９－１２６６
本開示の主題は、微生物組成物及び有益な植物の成長及び植物有害生物の防除におけるその使用方法を提供することである。
１つの実施の形態において、提供される組成物は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を含み、植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のために植物に適用される。
１つの実施の形態において、植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のために方法が提供され、該方法は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を含む組成物を、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で、植物、植物の一部、植物の種子、植物の根、植物若しくは植物の種子の周辺の土壌若しくは成長培地、又は植物を植える前若しくは植物の種子をまく前に土壌若しくは成長培地に送達することを含む。
１つの実施の形態では、植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のための方法が提供され、該方法は、植物、植物の一部、植物の種子、植物の根、植物若しくは植物の種子の周辺の土壌若しくは成長培地、又は植物を植える若しくは植物の種子を植える前に土壌若しくは成長培地に、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で含む組成物と、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量の、殺虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺細菌剤、バイオスティミュラント、除草剤、植物抽出物、微生物抽出物、植物成長調整物質、又は肥料の１種又は組み合わせと、の組み合わせを送達することを含む。これらの追加の各作用物質は、生物剤又は化学剤のいずれかであってもよい。
１つの実施の形態では、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で含む組成物で被覆されている植物の種子が提供される。
１つの実施の形態では、植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のための方法が提供され、当該方法は、植物の種子を植えることを含み、当該種子は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を含む組成物で被覆され、当該種子からの植物の成長に有益であって、及び／又は植物有害生物に対する保護がもたらされる。
１つの実施の形態では、植物の成長に有益な組成物が提供され、該組成物は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物と、ビフェントリン殺虫剤と、を含む。
本開示の主題を一般的に説明するために、これから下記の添付された図が参照される。
図１Ａは、もっとも左に化学殺虫剤（内側の円周囲の暗い帯）で被覆された、植物根圏における水平のマークで表された植物害虫とともにある植物の種子（内側の円）を示す模式図である。図の中央の部分は、拡散した害虫から植物の種子の根を保護している殺虫剤とともにある発芽した種子を示す（保護が“Ｘ”印で表されている）。図のもっとも右には、根が化学殺虫剤の拡散領域を超えて成長したために、害虫からの植物の種子の根の保護が低下したことが示されている。図１Ｂは、本開示の１つ以上の実施の形態に応じて、植物の種子に対する被覆又は植物の種子周辺の土壌にバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５が追加された図１Ａの模式図を示す。図のもっとも右が、根が化学殺虫剤の拡散領域を超えて成長しても、植物根圏にバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５がある結果として、植物の種子の根が害虫から継続的に保護されることを示す。 図２は、本開示の１つ以上の実施の形態に応じて、ハウスキーピング遺伝子ｒｐｏＢを用いたＲＴＩ５４５株の系統発生を示す模式図である。ブートストラップ値は、１０００回反復の結果を示す。外集団の配列は、超好熱性古細菌ピュロコックス・フリオスス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ）ＤＳＭ３６３８由来である。 図３Ａは、本開示の１つ以上の実施の形態に応じて、灌注による栽培でのバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株の栄養細胞で処理された種子の植え付けから１２日経過したトウモロコシの苗の画像である。 図３Ｂは、図３Ａと同様に処理された種子の植え付けから１２日経過したトウモロコシの苗の画像であるが、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５細胞は加えられていない。 図４は、本開示の１つ以上の実施の形態に応じて、トウモロコシの苗に係る選択摂食アッセイにおいてサザン・コーン・ルートワーム（ＳＣＲＷ）の幼虫が忌避するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５細胞の能力を示す画像である。画像では、左のろ紙がバチルス・チューリンゲンシスのＲＴＩ５４５株の細胞で処理され、右のろ紙が対照として水で処理された。 図５は、本開示の１つ以上の実施の形態に応じて、線虫グロボデラ種（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ ｓｐ．）が自然に蔓延した土壌に植えられ、土壌１リットルあたり１０９ｃｆｕのバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５細胞（ＲＴＩ５４５）の芽胞で強化されたジャガイモ植物体の根バイオマスのグラムあたり嚢胞の個数を、対照及びＶｙｄａｔｅ（ＤＵＰＯＮＴ、Ａ．Ｉ．＝オキサミル［メトイルＮ’Ｎ’－ジメチル－Ｎ－［（メチルカルバモイル）オキシル）オキシ］－１－チオオキサムイミデート）、ＢＩＯＡＣＴ（ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰＳＣＩＥＮＣＥＳ ＬＰ、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｌｉｌａｃｉｎｕｓ ２５１株）、ＣＡＲＥＸ（ＮＵＦＡＲＭ、ピリダベン）、及びＨＤ－１（バチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ ＨＤ－１）での土壌処理と比較して示すグラフである。 図６Ａは、線虫に対する試験試料の誘引／忌避評価のための走化性試験領域の基本構想図を示す。 １００μｇ／ｍｌで試験されたカノサミンに係るアッセイの写真であって、線虫の位置を表す点は中立の分布を示す。 １００％濃度で試験されたＲＴＩ５４５の上清に係るアッセイの写真であって、線虫の位置を表す点は忌避の分布を示す。
本明細書及び特許請求の範囲の全体にわたって、用語“含む”、“有する”及び“含んでいる”は、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、非排他的な意味で使用される。同様に、用語“含有する”及びその文法上の変形は非限定を意図し、リストにおける項目の列挙は、挙げられた項目に代えて、又は追加できる他の類似の項目を排除するものではない。
本明細書及び添付の特許請求の範囲のために、用語“約”が、１個以上の数又は数値的範囲に関連付けて用いられた場合、範囲に含まれるすべての数値を含むと理解されるべきであって、記載された数値の上限及び下限を拡張することによって範囲が変更される。端点による数値範囲の列挙は、整数等のすべての数を含み、当該範囲内に含まれるその分数（例えば、１～５の記載は、１、２、３、４及び５に加え、例えば１．５、２．２５、３．７５、４．１等その分数も含む）及び当該範囲内のあらゆる範囲を含む。範囲が下限のリストから上限のリストのように記載される場合、範囲は、任意の１つの記載された下限から任意の１つの記載された上限までとして定義される。
本明細書では、商品名が大文字で示されている。
１つの実施の形態において、本明細書及び特許請求の範囲のために用いられた場合、語句“バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物”は、細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の芽胞、細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の栄養細胞、１種以上の細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の生成物、細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の固体培養物、細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の培養上清、及び細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の無細胞抽出物の１つ又は組み合わせを意味する。
他の実施の形態では、語句“バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５”の生物学的に純粋な培養物”は、細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の芽胞、細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の栄養細胞、１種以上の細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の生成物、及び細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の固体培養物の１つ又は組み合わせを意味する。本実施の形態の１つの変形では、当該語句は、細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の芽胞を意味してもよい。
さらに他の実施の形態では、語句“バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物”は、細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の培養上清、及び細菌株の生物学的に純粋な発酵培養の無細胞抽出物の１つ又は組み合わせを意味する。
特に、“バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物”は、生物学的に純粋な培養物の芽胞、栄養細胞又は無細胞抽出物の形態であってもよい。
本明細書及び特許請求の範囲のために用いられた場合、語句“植物有害生物”は、植物に対して有害な及び／又は病原性のあらゆる有害生物を意味し、植物有害生物は、限定されずに昆虫、寄生虫、線虫、真菌、細菌、又はウイルス等を含む。
イネ科の植物（ｆｅｓｃｕｅ ｇｒａｓｓ）の土壌から単離された新たな植物関連細菌が本明細書で提供され、“ＲＴＩ５４５”とされた。この株は、配列解析に基づいてバチルス・チューリンゲンシス株であることが同定されたが、当該株は、Ｂ．チューリンゲンシス株でよく見られる結晶タンパク質に関する遺伝子を欠く。予期せぬことに、ＲＴＩ５４５株は、強い昆虫忌避活性を示すが、直接的接触アッセイ及び選択摂食アッセイでは昆虫の幼虫を殺さなかった。本明細書で提供される組成物及び方法は、植物の成長に有益で、植物有害生物に対する保護をもたらすために、植物、植物の一部、植物の種子、植物の根、又は土壌に送達されるバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株の生物学的に純粋な培養物を含む。成長の利益及びもたらされる保護は、改善された苗の活力、改善された根の成長、改善された植物の成長、改善された植物の健康、増加した収穫量、改善された外観、改善された植物有害生物への抵抗性、減少した病原性感染、又はその組み合わせ等である。
植物又は植物の一部に組成物を送達することは、葉の一部のような地上部等の植物のあらゆる部分、及び苗、移植片、挿し木（例えば、茎、根、葉、及び類似するもの）、根茎、胞子、苗（例えば、サトウキビ）、球根、球茎、塊茎、若しくはその一部、又は完全な植物が得られる他の植物組織のような植物を繁殖させるための植物の一部に送達することを含む。植物又は植物の種子の周辺の土壌若しくは成長培地、又は植物を植える若しくは植物の種子を植える前に土壌若しくは成長培地に送達することは、植える時点での組成物の畝間への適用を含み、組成物の土壌又は成長培地への組み入れ又は混合、例えば土壌潅注による土壌又は成長培地の表面への組成物の適用、及び類似のものが含まれる。
１つの実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株が、植物、植物の一部、植物の種子、植物の根又は土壌に、植物根圏でのＲＴＩ５４５株の確立を介して化学殺虫剤の防除を拡張するために化学殺虫剤と組み合わされて送達される。ＲＴＩ５４５株によるこの昆虫防除の考えられる機序が図１に示されている。図１Ａは、化学殺虫剤のみ（すなわちＲＴＩ５４５なし）で被覆された種子による昆虫防除を示す。殺虫剤（内側の円周囲の暗い帯）で被覆された植物の種子（内側の円）が図１Ａの図のもっとも左に示されており、植物の種子は、植物根圏における水平のマークで表された植物害虫に取り囲まれている。図の中央の部分は、拡散した害虫から植物の種子の根を保護している殺虫剤とともにある発芽した種子を示す（保護が“Ｘ”印で表されている）。図のもっとも右には、根が化学殺虫剤の拡散領域を超えて成長したために、害虫からの植物の種子の根の保護が低下したことが示されている。図１Ｂは、植物の種子の被覆へのバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞の追加、又は畝間への適用がどのように殺虫剤被覆のみの使用を上回って昆虫防除を改善するかを示す。具体的には、図１Ｂの図のもっとも右は、根が化学殺虫剤の拡散領域を超えて成長しても、植物の根圏にバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５がある結果として、植物の種子の根を害虫から継続的に保護されることを示す。一例では、植物の成長に利益をもたらし、害虫を防除するために、ＲＴＩ５４５細胞で被覆された、あるいはＲＴＩ５４５で処理された種子が化学殺虫剤であるビフェントリン及び液体肥料の適用と組み合わせて植えられる。
ＲＴＩ５４５株の単離及び特徴づけが本明細書に記載の実施例でさらに具体的に説明されている。実施例１は、ＢＬＡＳＴを用いた、ＲＴＩ５４５株の１６Ｓ ｒＤＮＡ遺伝子（配列番号１）及びｒｐｏＢ遺伝子（配列番号２）の配列とＮＣＢＩ及びＲＤＰデータベースにおける他の既知の細菌株との比較を説明する。この解析は、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）／チューリンゲンシス／アンシラシス（ａｎｔｈｒａｃｉｓ）分岐群の中にＲＴＩ５４５株を位置づけた。さらに、ＲＴＩ５４５株と関連するバチルス属の系統発生解析がｒｐｏＢ遺伝子に関してブートストラップ合意樹（１０００回反復）を用いて行われた。ｒｐｏＢ遺伝子に関する合意樹が図２に示される。図２に示されるように、ＲＴＩ５４５株がバチルス・セレウス／チューリンゲンシス／アンシラシス分岐群において独立した枝を形成することは、ＲＴＩ５４５がバチルス・セレウス／チューリンゲンシス／アンシラシス分岐群に含まれる新たな株であることを示している。さらなる配列解析によって、ＲＴＩ５４５株がＢ．チューリンゲンシス株でよく見られる結晶タンパク質に関する遺伝子を欠くことが明らかになった。
さらに、ＭＵＭｍｅｒ－及びＢＬＡＳＴｎ－をベースとする平均ヌクレオチド同一性（ＡＮＩ）計算及びＵＮＩＰＥＰＴ解析の両方を用いてバチルス属の関連する近い株とＲＴＩ５４５株とを比較するために、全ゲノム配列解析が行われ、その系統発生的分類が確認された。ＭＵＭｍｅｒ及びＢＬＡＳＴｎをベースとするＡＮＩ計算の結果が下の表１に示されている。ＡＮＩ及びＵＮＩＰＥＰＴ（データを示さない）両方の解析によって、Ｂ．チューリンゲンシス及びＢ．セレウス双方として示される株の公知の配列とＲＴＩ５４５との間にかなりの程度の配列類似性が明らかとなった。認められた株に対して最も高い配列類似性は、認められた株Ｂ．チューリンゲンシスＢｅｒｌｉｎｅｒ ＡＴＣＣ１０７９２に対してであった。さらに、全ゲノムに配列における以前から公知のそれらとの違いは、ＲＴＩ５４５がバチルス・セレウス／チューリンゲンシス／アンシラシス分岐群に入る新たなバチルス・チューリンゲンシス株であることを示している。
上記の配列解析に基づいて、ＲＴＩ５４５株が新規の株であることが同定され、これは本明細書においてバチルス・チューリンゲンシス株とされる。
ＲＴＩ５４５の株は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約に従って、米国バージニア州マナッサスのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）に２０１５年５月１２日に寄託され、特許受託番号ＰＴＡ－１２２１６１を有する。
いくつかの植物において、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、温室及び野外試験等の様々な条件下で、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株の成長促進、抗菌性、並びに昆虫、線虫及び真菌に対する防除活性を示す実験結果が本明細書における図３～５及び実施例２～１７に提示されている。具体的には、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株が植物の成長に有益で、サザン・コーン・ルートワーム（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｃｏｒｎ ｒｏｏｔｗｏｒｍ、ＳＣＲＷ）等のルートワーム、コムギハリガネムシ（ｗｈｅａｔ ｗｉｒｅｗｏｒｍ）及びコーンハリガネムシ（ｃｏｒｎ ｗｉｒｅｗｏｒｍ）等のハリガネムシ（ｗｉｒｅｗｏｒｍ）、地虫複合有害生物、種トウモロコシウジ虫（ｓｅｅｄ ｃｏｒｎ ｍａｇｇｏｔ）及び種子ウジ虫（ｓｅｅｄ ｍａｇｇｏｔ）等の土壌中にすむウジ虫、ウエスタン・カスミカメムシ（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｐｌａｎｔ ｂｕｇ、ＷＰＢ）等のカスミカメムシ（ｐｌａｎｔ ｂｕｇ）、線虫、並びにリゾクトニア種属等の真菌性病原体に対する防除をもたらすことが示されている。いくつかの場合、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株での種子処理は、生物学的活性物質及び化学活性物質の組み合わせ又は化学活性物質のみをベースとする市販の製品と比較して同等又はより優れた結果をもたらす。
プレートアッセイにおけるいくつかの主な植物病原体に対するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の拮抗特性が実施例２で説明され、株の植物ホルモン産生、アセトイン及びインドール酢酸（ＩＡＡ）並びに栄養循環等の表現型形質が実施例３で説明される。
実施例４は、ＲＴＩ５４５細胞とともにインキュベーションされたトウモロコシの種子に対する種子の発芽、根の成長、及び初期の成長における有利な効果を説明する。結果が、１２日後のＲＴＩ５４５株存在下（図３Ａ）及び非存在下（図３Ｂ）で成長したトウモロコシの苗の画像である図３Ａ及び図３Ｂに示されている。図から分かるように、ＲＴＩ５４５株の存在によって顕著な成長促進がみられた。
実施例５は、ＲＴＩ５４５細胞を接種したトウモロコシの種子の初期の植物成長及び活力における有利な効果を説明する。滅菌された発芽トウモロコシの種子表面が２日間室温で、１０８ＣＦＵ／ｍｌのＲＴＩ５４５の懸濁液で接種された。続いて、接種された種子がポットに植えられ、温室でインキュベートされた。トウモロコシの芽のバイオマスの湿潤重量及び乾燥重量が４２日の成長後に測定された。トウモロコシの芽のバイオマスの湿潤重量及び乾燥重量は、非接種の対照と比較してバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株を接種した植物において増加した。湿潤及び乾燥の両方のバイオマスでの有意な増加から識別されるように、ＲＴＩ５４５株の存在によって顕著な成長促進が見られた。
実施例６は、予期できないＲＴＩ５４５株の昆虫忌避活性を説明する。ウエスタン・カスミカメムシ（ＷＰＢ）に対する拮抗に関して、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５が培地なし、化学活性物質（Ｏ，Ｓ－ジメチルアセチルホスホラミドチオエート）、及びバチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ ＨＤ－１（ＨＤ－１）を含む対照とともに直接噴霧、選択摂食、及び非選択摂食アッセイで評価された。予期されるように、培地なし又はＨＤ－１処理に関して、有意な死亡率（直接噴霧及び非選択摂食アッセイ）又は忌避性（選択摂食アッセイ）は見られなかったが化学対照は、ＷＰＢを殺し（直接噴霧及び非選択摂食アッセイ）、忌避させた（選択摂食アッセイ）。バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５は、直接噴霧及び非選択摂食アッセイの両方で適用された場合に、ＷＰＢの有意な死亡率をもたらさなかったが、予期せぬことにＲＴＩ５４５は、ＷＰＢが選択アッセイ領域に置かれた１２４時間後に忌避作用を示した。具体的には、処理した及び非処理の食物源を含む容器にＷＰＢが入れられた際、ＷＰＢが非処理の食物源のみを摂食することが観察された（データ示さず）。
サザン・コーン・ルートワーム（ＳＣＲＷ）の幼虫に対する拮抗に関して、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の細胞がトウモロコシの苗の選択摂食アッセイで評価され、水対照と比較された。水対照と比較された追加の処理は、ｉ）バチルス・チューリンゲンシス亜種であるｋｕｒｓｔａｋｉ ＨＤ－１（ＨＤ－１）、ｉｉ）化学対照ＣＡＰＴＵＲＥ ＬＦＲ（Ａ．Ｉ．＝１７．１５％ ビフェントリン）、及びｉｉｉ）８６９培地とした。ろ紙が半分に切断され、各部分がペトリ皿に置かれ、処理又は脱イオン化された水が紙の各半分に適用された。１個の発芽したトウモロコシの種子が湿らせた半分のろ紙それぞれに置かれた。２齢幼虫が処理されたろ紙と非処理のろ紙との間の正中に置かれた。皿はパラフィルムで密封され、６日間維持された。６日後のＲＴＩ５４５細胞に係るプレートアッセイの画像が図４に示されており、すべてのプレートアッセイのデータが表ＩＶにまとめられている。ＷＰＢに対する上述のアッセイで観察されたように、ＲＴＩ５４５は予期せぬことに忌避されたが、ＳＣＲＷの幼虫を殺さなかった。図４及び表ＩＶに示されたように、ＲＴＩ５４５培養物は、ＳＣＲＷの幼虫を忌避させる点で優れていた。１００％の幼虫が水で処理した半分のろ紙上に存在し、ＲＴＩ５４５で処理したろ紙には幼虫はいなかった。これに対し、ＨＤ－１株では、幼虫が統計的には均等に処理と水対照に分かれた。化学対照では、約１９％の幼虫が処理されたろ紙上に存在していた。表Ｖは同様の結果を示す。この結果は、ＲＴＩ５４５株が予期せぬことに、トウモロコシの種子から昆虫を忌避させるが昆虫を殺さないという点で化学殺虫剤よりも優れていることを示す。
表ＶＩはカノサミン、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株及びＦＤ３０のＳＣＲＷに対する忌避効果を比較し、昆虫に対するＲＴＩ５４５の忌避作用がカノサミンの産生によるものであることを示す。
実施例７は、ＲＴＩ５４５上清に暴露したネコブセンチュウの、カノサミンと比較した忌避性及び卵の孵化の阻害を示す。表ＶＩＩ及びＶＩＩＩにまとめられたこの結果は、線虫に対するＲＴＩ５４５の効果が、カノサミンの産生によって起こるわけではないと考えられることを示唆する。
実施例８は、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞でトウモロコシ及びダイズを処理することによる、昆虫圧力下での野外及び温室試験における成長及び収穫量に対する有利な効果を説明する。成長、収穫量、及びトウモロコシの有害生物であるハリガネムシ及び種子ウジ虫の防除に対する影響がウィスコンシン州での野外試験で評価された。温室で追加の実験が行われ、ハリガネムシの存在下での初期の植物成長への影響が評価された。
野外試験では、トウモロコシの種子が、１）ＭＡＸＩＭ＋ＡＰＲＯＮ ＸＬを含む化学的な真菌対照処理（“ＦＣ”とする）、２）ＦＣ＋殺虫剤ビフェントリン０．１２５ｍｇ／種子、３）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ １２５０（クロチアニジン １．２５ｍｇ／種子）及びＶＯＴＩＶＯ（バチルス・フィルムスＩ－１５８２）、４）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ ２５０（クロチアニジン ０．２５ｍｇ／種子）、５）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ ５００（クロチアニジン ０．５ｍｇ／種子）及びＶＯＴＩＶＯ （バチルス・フィルムスＩ－１５８２）、及び６）ＦＣ＋ビフェントリン（０．１２５ｍｇ／種子）＋Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞を含む懸濁液で処理された。処理されたトウモロコシの種子が、ウィスコンシン州の別の野外試験でハリガネムシ及び種子ウジ虫が蔓延した土壌に植えられた。結果が下の表ＩＸに示されている。殺虫剤ビフェントリンと組み合わされたＢ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の含有物は、ビフェントリンのみで処理された種子を上回ってパーセント出芽、植物の立ち性、活力並びにハリガネムシ及び種子ウジ虫の防除において顕著な改善を示した。さらに、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５及びビフェントリンの組み合わせの結果は、ハリガネムシの防除の点で製品ＰＯＮＣＨＯ １２５０ ＶＯＴＩＶＯと統計的に同等で、種子ウジ虫の防除においてはこの製品を超える改善を示した。これらのデータは、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５とビフェントリンのような化学殺虫剤との組み合わせでのトウモロコシの種子の処理が化学殺虫剤のみの含有物を上回って昆虫の防除を顕著に改善し、何らかの種類の昆虫防除のための市販されている製品よりも優れていることを示す。
２番目の野外試験で、トウモロコシの種子が最初の試験と同様に、１）化学対照ＭＡＸＩＭ＋ＡＰＲＯＮ ＸＬ（“ＦＣ”という）、２）ＦＣ＋ビフェントリン、３）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ １２５０ ＶＯＴＩＶＯ、４）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ ２５０及び５）ＦＣ＋ビフェントリン＋ＲＴＩ５４５の芽胞を含む懸濁液で処理された。ウィスコンシン州での種子ウジ虫はいないがハリガネムシがいる別の野外試験において、処理されたトウモロコシの種子が植えられた。トウモロコシの根におけるハリガネムシによる摂食の被害が植えてから４１日後に評価された。結果が下の表Ｘに示されており、前の試験と同様の結果を示す。具体的には、殺虫剤ビフェントリンと組み合わされたＢ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の含有物は、ビフェントリンのみで処理された種子を上回ってパーセント出芽、植物の立ち性、活力並びにハリガネムシの防除において顕著な改善を示した。さらに、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５及びビフェントリンの組み合わせの結果は、ハリガネムシの防除の点で製品ＰＯＮＣＨＯ １２５０ ＶＯＴＩＶＯと統計的に同等か、あるいはそれよりも優れていた。
また、ＰＯＮＣＨＯ ＶＯＴＩＶＯと比較することで、化学殺虫剤とＲＴＩ５４５の芽胞との組み合わせでの種子の処理後のトウモロコシの野外試験における平均収穫量が評価された。結果が下の表ＸＩに示されている。殺虫剤ビフェントリンと組み合わせたＢ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の含有物がビフェントリンのみで処理された種子と比較して収穫量に顕著な改善を示した。さらに、ＲＴＩ５４５とビフェントリンとの組み合わせがＰＯＮＣＨＯ ５００ ＶＯＴＩＶＯ及びＰＯＮＣＨＯ １２５０ ＶＯＴＩＶＯの両方よりも優れており、収穫量を１３ブッシェル／エーカー（それぞれ１８０．５から１９３．７及び１８５．５から１９３．７ブッシェル／エーカー）増加させ、これは穀粒収量でそれぞれ６．８％及び４．２％増加を意味する。これらのデータは、ＲＴＩ５４５及びビフェントリンのような化学殺虫剤の組み合わせでのトウモロコシの種子の処理が化学殺虫剤のみの含有物を上回って収穫量を顕著に改善し、昆虫による被害を防除するために必要となる畝間への大量の化学殺虫剤の適用を減らすことを示唆する。
ＲＴＩ５４５の芽胞でトウモロコシの種子を処理することによる昆虫の圧力下での成長への影響がさらに評価された。一組の温室試験において、トウモロコシの種子が次に説明されるように種子処理懸濁液で最初に処理され、続いて、土壌にハリガネムシがいない対照セットと併せて、有害生物であるハリガネムシが蔓延した土壌に植えられた（１個の種子を有するポットあたり１０匹のハリガネムシ）。種子処理懸濁液は次の通りである。１）化学対照ＭＡＸＩＭ＋ＡＰＲＯＮ ＸＬ（“ＦＣ”という）、２）ＦＣ、３）ＦＣ＋ビフェントリン（すべての処理に関して０１２５ｍｇ／種子）、４）ＦＣ＋ビフェントリン＋ＲＴＩ５４５ ５．０×１０６、５）ＦＣ＋ビフェントリン＋ＲＴＩ５４５ ５．０×１０６及び熱処理、６）ＦＣ＋ビフェントリン＋ＲＴＩ５４５ １．０×１０６、７）ＦＣ＋ＲＴＩ５４５ ５．０×１０６及び８）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ １２５０。処理された種子が％出芽に関して評価された。
結果が下の表ＸＩＩに示されている。殺虫剤ビフェントリンと組み合わされたＢ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の含有物の結果は、１００％出芽であって、ビフェントリンのみの含有物を上回って改善し、ハリガネムシなしの対照及びＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ １２５０化学処理と同等の結果をもたらした。ハリガネムシによる根の削り取り摂取によってトウモロコシ植物成長阻害が起こり、ＲＴＩ５４５のみ又はビフェントリンと組み合わせたＲＴＩ５４５が、生存している植物における植物成長阻害を減少させた。ＲＴＩ５４５のみは植物損失を防ぐ活性を示したが、成長阻害に対する早期の保護の付与において殺虫剤ビフェントリンよりも劣っていた。しかし、ＲＴＩ５４５は、植物の成長時の植物成長阻害を防ぐ点ではより効果的であった（データ示さず）。これらのデータは、トウモロコシの種子の処理におけるＲＴＩ５４５の芽胞含有物が単独で又はビフェントリンのような化学殺虫剤との組み合わせで、害虫ハリガネムシが存在していても植物の健康を顕著に向上させることを示唆する。
化学殺虫剤との組み合わせにおいて、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞に追加された化学的に活性な成分の標準的な殺菌性の組み合わせでダイズ種子を処理することによる収穫量への影響を評価するために、実験が行われた。実験は次に記載のように行われた。実験では、１）化学対照であるフルジオキソニル／ＴＰＭ／メフェノキサム（“ＦＣ”）、２）ＦＣ＋殺虫剤チアメトキサム、及び３）ＦＣ＋チアメトキサム＋Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞を含む溶液とダイズ種子が混合された。処理したダイズ種子が、ハリガネムシが蔓延している３箇所（Ｎ＝３）に植えられ、収穫量が解析された。結果が下の表ＸＩＩＩに示されている。チアメトキサムと組み合わされたＲＴＩ５４５の芽胞含有物は、チアメトキサムのみで処理された種子と比較して収穫量に顕著な改善をもたらした。これらのデータは、ＲＴＩ５４５と化学殺虫剤との組み合わせで処理されたダイズ種子が殺虫剤のみの含有物を上回って収穫量を有意に改善し、昆虫による被害を防除するために必要となる畝間への大量の化学殺虫剤の適用を減らすことを示唆する。
実施例９は、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株の、ダイズ及びジャガイモにおける線虫の感染を抑制する能力を説明する。サザン・ネコブセンチュウ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）が蔓延した土壌に植えられた、ＲＴＩ５４５細胞で処理された及びＲＴＩ５４５細胞で処理されていない種子からのダイズ植物体で温室試験が行われた。種子処理は、製品ＰＯＮＣＨＯ ＶＯＴＩＶＯ（ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰＳＣＩＥＮＣＥ ＬＰ；Ａ．Ｉ．＝４０．３％ クロチアニジン、８．１％バチルス・フィルムスＩ－１５８２）及びＡＶＩＣＴＡ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（ＳＹＮＧＥＮＴＡ；Ａ．Ｉ．＝１１．７％ チアメトキサム、１０．３％ アバメクチン、２．３４％ チアベンダゾール、０．３％ フルジオキソニル、０．２３％ メフェノキサム、０．１２％ アゾキシストロビン）を含む。結果が表ＸＩＶに示されている。開始から６３日後、ＲＴＩ５４５細胞及び化学的組み合わせＡＶＩＣＴＡ ＣＯＭＰＬＥＴＥで処理された種子においてポットあたりの線虫の卵の個数に統計的な差はなかった。しかし、ＲＴＩ５４５で処理した種子におけるポットあたりの線虫の卵の個数は、ＰＯＮＣＨＯ ＶＯＴＩＶＯで処理された種子のそれよりも少なかった。これは、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５によってもたらされるダイズに対する線虫防除における有利な効果を示し、これは市販の生物学的及び化学的かつ化学活性をベースとする製品を上回る防除に相当する。
線虫グロボデラ種が自然に蔓延した土壌に植えられたジャガイモ植物体で温室試験が行われ、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５細胞での土壌の処理の効果が評価された。ジャガイモ（線虫に感受性のある種“Ｂｉｎｔｊｅ”）が、グロボデラ種が蔓延する土壌に植えられ（対照）、土壌１リットルあたり１０９ｃｆｕのＲＴＩ５４５の芽胞で強化された。結果が図５のグラフに示されている。追加の土壌処理：ＶＹＤＡＴＥ製品（ＤＵＰＯＮＴ、Ａ．Ｉ．＝オキサミル［メトイルＮ’Ｎ’－ジメチル－Ｎ－［（メチルカルバモイル）オキシル）オキシ］－１－チオオキサムイミデート）、ＢＩＯＡＣＴ製品（ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰＳＣＩＥＮＣＥＳ ＬＰ、Ａ．Ｉ．＝Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｌｉｌａｃｉｎｕｓ株２５１）、ＣＡＲＥＸ製品（ＮＵＦＡＲＭ、ピリダベン）、及びバチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ ＨＤ－１がこの試験に含まれている。製品は、製品のラベルで示された割合で適用された。図５に見られるように、ＲＴＩ５４５細胞で処理された土壌における根バイオマスのｇあたりの嚢胞の個数は、化学的活性成分を含有する製品を含むすべての処理と比較して有意に抑制された。これは、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５によってもたらされるジャガイモに対する線虫防除における有利な効果を示し、これは市販の生物学的及び化学活性をベースとする製品を上回る防除をもたらす。
実施例１０は、病原体防除に関して、種子が化学活性物質に加えてＲＴＩ５４５株で処理された場合の黒変病の圧力がある中での綿における出芽、根病害、及び収穫量に与える影響を調べるために行われた実験を説明する。
具体的には、綿における実験が次のように構築された。１）非処理の種子（ＵＴＣ）、２）製造者のラベルに従ったフルジオキソニル＋メフェノキサム＋イミダクロプリドのベース組み合わせで処理された種子（“Ｂ”とする）、３）５×１０５ｃｆｕ／種子のＲＴＩ５４５を加えたベースで処理された種子（Ｂ＋ＲＴＩ５４５）、及び４）表示された指示書に従ってＶＩＢＲＡＮＣＥ（活性成分セダキサン、ＳＹＮＧＥＮＴＡ ＣＲＯＰ ＰＲＯＴＥＣＴＩＯＮ，ＩＮＣ）を加えたベースで処理された種子（Ｂ＋ＶＩＢＲＡＮＣＥ）。野外試験がジョージア州で行われた。試験では、種子が成長し始めたときに感染させるために、所定の割合で植え付け時に種子を乾燥接種物に混合することで、リゾクトニア菌が接種された。綿の平均パーセント出芽が下の表ＸＶに示されている。
表ＸＶの結果は、ベースに加えられたＲＴＩ５４５の芽胞での処理は、パーセント出芽において化学的ベースのみのそれを超える有意な改善を示した。さらに、ＲＴＩ５４５での処理は、化学的活性体を含む市販製品ＶＩＢＲＡＮＣＥを追加したベースと同様に機能した。このため、ＲＴＩ５４５での種子処理は、過酷な病原体の圧力条件下でさえも出芽に有意な改善をもたらす。
実施例１１は、病原体防除に関して、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞で処理されたコムギ種子、及び化学活性物質と組み合わせたＲＴＩ５４５で処理された種子による、昆虫の圧力下での成長及び収穫量に与える影響を調べるために行われた実験を説明する。より具体的には、成長、収穫量への影響及びコムギに対する有害生物であるコメツキムシ及び地虫の防除がウィスコンシン州の野外試験で測定された。コムギ種子が１）化学殺真菌剤ベースのジフェノコナゾール／テブコナゾール／ＴＰＭ／メフェノキサム（“ＦＣ”という）、２）ＦＣ＋Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞（ＲＴＩ５４５ １０６ｃｆｕ／ｇ種子）、３）ＦＣ＋ビフェントリン（２０ｇ／種子）、４）ＦＣ＋ビフェントリン（２０ｇ／種子）＋ＲＴＩ５４５ １０６ｃｆｕ／ｇ種子、５）ＦＣ＋ビフェントリン（５０ｇ／種子）、及び６）ＦＣ＋ビフェントリン（５０ｇ／種子）＋ＲＴＩ５４５ １×１０６ｃｆｕ／ｇ種子を含む懸濁液で処理された。結果が下の表ＸＶＩに示されている。Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞それぞれでの種子処理、及び殺真菌剤ベースのみ又は殺虫剤のビフェントリンと組み合わせたＲＴＩ５４５の芽胞での処理は、パーセント出芽、活力、ハリガネムシ及び地虫の防除、並びに収穫量において有意な改善をもたらした。試験されたすべての場合において、コムギ種子処理でのＲＴＩ５４５の芽胞含有物は、成長、活力、有害生物防除及び収穫量で有意な改善をもたらした。
実施例１２は、リゾクトニア真菌性病原体に対する成長及び収穫量におけるＲＴＩ５４５ダイズ種子処理の影響を示す。表ＸＶＩＩは、ベースの処理のみ及び他の化学的活性成分に加えられたベースの処理に対するベースの化学的種子処理に加えられたＲＴＩ５４５の比較を示す。ベースの化学的処理へのＲＴＩ５４５の追加によって、立ち性、活力及び収穫量が化学的なベースと比較して有意に増加した。
実施例１３は、ハリガネムシ及び種子ウジ虫に対するＲＴＩ５４５でのトウモロコシの種子処理の成長及び収穫量への影響を示す。表ＸＶＩＩＩは、クロチアニジン、ビフェントリン及びクロラントラニリプロール等の化学殺虫剤に加えられた場合、これら有害生物に対してＲＴＩ５４５がある程度の保護をもたらし、殺虫性保護を強化することを示す。
実施例１４は、トウモロコシハリガネムシ及びコーンハリガネムシに対する畝間への適用においてＲＴＩ５４５が有効であることを示し、結果として、表ＸＩＸ及びＸＸに示されるように、単独で、特に化学殺虫剤ビフェントリンとの組み合わせで、収穫量の増加及び根の被害が抑制された。
実施例１５は、リゾクトニア真菌性病原体に対する成長及び収穫量におけるＲＴＩ５４５でのピーナッツ種子処理の影響を示す。表ＸＸＩは、ベースでの処理のみに対するベースでの化学的種子処理に加えられたＲＴＩ５４５の比較を示す。ベースでの化学的処理へのＲＴＩ５４５の追加によって、立ち性、活力及び収穫量が化学的なベースと比較して有意に増加した。
実施例１６は、ネグサレセンチュウ（ｌｅｓｉｏｎ ｎｅｍａｔｏｄｅ）に対するＲＴＩ５４５でのトウモロコシの種子処理の温室アッセイを示す。表ＸＸＩＩは、ベースでの処理のみ及びベースでの処理に加えられたＰＯＮＣＨＯ／ＶＯＴＩＶＯに対するベースでの殺真菌剤化学的種子処理に加えられたＲＴＩ５４５の比較を示す。ベースでの処理に加えられたＲＴＩ５４５は、ベースでの処理に加えられたＰＯＮＣＨＯ／ＶＯＴＩＶＯによってもたらされるよりも、非処理を上回る優れた根長の増加をもたらした。表ＸＸＩＩＩは、ＲＴＩ５４５＋ベースでの処理によって、透過及び乾燥させていない頂部の重量がベースでの処理、及びベースでの処理＋ＰＯＮＣＨＯ／ＶＯＴＩＶＯよりも大きく減少したことを示す。また、この表は、ＲＴＩ５４５が他の生物学的防除剤と組み合わされた場合の結果を示す。
実施例１７は、ダイズシストセンチュウ（ｓｏｙｂｅａｎ ｃｙｓｔ ｎｅｍａｔｏｄｅ）に対するＲＴＩ５４５ダイズ種子処理の土壌潅注アッセイを示す。表ＸＸＩＶは非処理対照と比較した嚢胞の減少を示す。
実施例１８及び１９は、ＲＴＩ５４５（表ＸＸＶ）の及びビフェントリンに加えられたＲＴＩ５４５（表ＸＸＶＩ及びＸＸＶＩＩ）の懸濁剤を示す。表ＸＸＶＩＩＩは、ＳＣ製剤中の芽胞が高温での２週間の保管にわたって安定に維持されたことを示す。
本開示の１つの実施の形態では、提供される組成物は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を含み、植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のために植物に適用される。
他の実施の形態では、提供される方法は、植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のための方法であって、方法は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を含む組成物を、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で、植物、植物の一部、植物の種子、植物の根、植物若しくは植物の種子の周辺の土壌若しくは成長培地、又は植物を植える若しくは植物の種子を植える前に土壌若しくは成長培地に送達することを含む。
本開示に係る組成物及び方法では、植物の成長利益及び／又はもたらされる保護は、改善された苗の活力、改善された根の成長、改善された植物の成長、改善された植物の健康、増加した収穫量、改善された外観、改善された植物有害生物への抵抗性、減少した病原性感染、又はその組み合わせによって示される。
本発明の組成物及び方法は、広い範囲の植物に有益であって、該植物は、限定されないが、単子葉植物、双子葉植物、穀物、例えば、コーン（トウモロコシ）、スイートコーン、ポップコーン、シードコーン、サイレージコーン、フィールドコーン、米、小麦、大麦、ソルガム、アスパラガス、ベリー、例えば、ブルーベリー、ブラックベリー、ラズベリー、ローガンベリー、ハックルベリー、クランベリー、グーズベリー、エルダーベリー、カラント、カンベリー（ｃａｎｅｂｅｒｒｙ）、ブッシュベリー、アブラナ科野菜、例えば、ブロッコリー、キャベツ、カリフラワー、芽キャベツ、コラード、ケール、マスタードグリーン、コールラビ、ウリ科野菜、例えば、キュウリ、カンタロープ、メロン、マスクメロン、スカッシュ、スイカ、カボチャ、ナス、球根野菜、例えば、玉ネギ、ニンニク、エシャロット、柑橘類、例えば、オレンジ、グレープフルーツ、レモン、タンジェリン、タンジェロ、ブンタン、フルーツ野菜、例えば、ペッパー、トマト、グラウンドチェリー、トマティロ、オクラ、ブドウ、ハーブ、スパイス、葉野菜、例えば、レタス、セロリ、ホウレン草、パセリ、ラディッキオ、マメ科植物又は野菜、例えば、サヤ豆、スナップ豆、シェルビーンズ、ダイズ、ドライビーンズ、ガルバンゾー豆、リマ豆、エンドウ豆、ヒヨコ豆、スプリットピー、レンズ豆等の豆類、油糧種子作物、例えば、キャノーラ、キャスター、ココナッツ、綿、亜麻、オイルパーム、オリーブ、ピーナッツ、菜種、ベニバナ、ゴマ、ヒマワリ、ダイズ、ナシ状果類、例えば、リンゴ、クラブアップル、ナシ、マルメロ、サンザシ（ｍａｙｈａｗ）、根、塊茎及び球茎野菜、例えば、ニンジン、ジャガイモ、サツマイモ、キャッサバ（ｃａｓｓａｖｅ）、ビーツ、ショウガ、西洋ワサビ、ダイコン、朝鮮人参、カブ、核果類、例えば、アプリコット、チェリー、ネクタリン、桃、プラム、プルーン、イチゴ、ツリーナッツ、例えば、アーモンド、ピスタチオ、ピーカン、クルミ、ハシバミ、クリ（ｃｈｅｓｔｎｕｔ）、カシュー、ブナ（ｂｅｅｃｈｎｕｔ）、バタグルミ（ｂｕｔｔｅｒｎｕｔ）、マカダミア、キウイ、バナナ、（ブルー）アガペ、草（ｇｒａｓｓ）、芝草（ｔｕｒｆ ｇｒａｓｓ）、観葉植物、ポインセチア、広葉樹の伐採片（ｈａｒｄｗｏｏｄ ｃｕｔｔｉｎｇｓ）、例えば、クリ、オーク、カエデ、サトウキビ及びテンサイ等である。１つ以上の実施の形態では、植物は、コーン、ダイズ、ジャガイモ、綿、トマト、コショウ、ウリ科植物、サトウキビ、ピーナッツ又はコムギであってもよく、ダイズ、綿、コムギ、トウモロコシ又はジャガイモであってもよい。
本発明の組成物及び方法では、植物の被害は幅広い種類の植物有害生物によって引き起こされ、例えば、植物有害生物は、限定されないが、ウエスタン・カスミカメムシ（ＷＰＢ）ライガス・ヘスペルス（Ｌｙｇｕｓ ｈｅｓｐｅｒｕｓ）、コレオプテラ種（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ ｓｐ．）、ウエスタン・コーン・ルートワーム（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｃｏｒｎ ｒｏｏｔｗｏｒｍ）（Ｄ．ヴァージフェラ（Ｄ．ｖｉｒｇｉｆｅｒａ））、サザン（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ）・コーン・ルートワーム（Ｄ．アンデシムプンクタタ（Ｄ．ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ））、ノーザン（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ）・コーン・ルートワーム（Ｄ．バルベリ（Ｄ．ｂａｒｂｅｒｉ））、Ｄ．ベルチアタ（Ｄ．ｂａｌｔｅａｔａ）及びＤ．ロギコルニス（Ｄ．ｌｏｎｇｉｃｏｒｎｉｓ）等のディアブロティカ種（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｓｐ．）、メラノタス属種（Ｍｅｌａｎｏｔｕｓ ｓｐｐ．）（コーンハリガネムシ、メラノタス・コミュニス（Ｍｅｌａｎｏｔｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ）及びメラノタス・クリブロサス（Ｍｅｌａｎｏｔｕｓ ｃｒｉｂｕｌｏｓｕｓ）等）、ヒロファガ属種（Ｐｈｙｌｌｏｐｈａｇａ ｓｐｐ．）（地虫（ｗｈｉｔｅ ｇｒｕｂｓ）、ワイヤーワーム、フォールス（ｆａｌｓｅ）・ワイヤーワーム及びヒロファガ・ルゴサ（Ｐｈｙｌｌｏｐｈａｇａ ｒｕｇｏｓａ）等）、リモニアス属種（Ｌｉｍｏｎｉｕｓ ｓｐｐ．）（シュガービート・ワイヤーワーム（ｓｕｇａｒｂｅｅｔ ｗｉｒｅｗｏｒｍｓ）及びリモニアス・アグロナス（Ｌｉｍｏｎｉｕｓ ａｇｒｏｎｕｓ））、アグリオテス種属（Ａｇｒｉｏｔｅｓ ｓｐｐ．）（例えばコムギハリガネムシのアグリオテス・マンカス（Ａｇｒｉｏｔｅｓ ｍａｎｃｕｓ）、コーンハリガネムシ、地虫及び種子ウジ虫）、レピドプテラ種（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ ｓｐ．）、ペリドロマ種属（Ｐｅｒｉｄｒｏｍａ ｓｐｐ．）（例えばバリエゲイテッド・カットワーム（ｖａｒｉｅｇａｔｅｄ ｃｕｔｗｏｒｍ））、エウクソア種属（Ｅｕｘｏａ ｓｐｐ．）（例えばアーミー・カットワーム（ａｒｍｙ ｃｕｔｗｏｒｍ））、アグロチス種属（Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｐｐ．）（例えばブラック・カットワーム（ｂｌａｃｋ ｃｕｔｗｏｒｍ）アグロチス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓ ｉｐｓｉｌｏｎ））、ディプテラ種（Ｄｉｐｔｅｒａ ｓｐ．）、ヒレムヤ種属（Ｈｙｌｅｍｙａ ｓｐｐ．）（例えば種トウモロコシウジ虫のデリア・プラツラ・メイゲン（Ｄｅｌｉａ ｐｌａｔｕｒａ Ｍｅｉｇｅｎ）及びヒレミヤ・シリクルラ（Ｈｙｌｅｍｙａ ｃｉｌｉｃｒｕｒａ））、テタノプス種属（Ｔｅｔａｎｏｐｓ ｓｐｐ．）（例えばシュガービート種子ウジ虫（ｓｕｇａｒｂｅｅｔ ｒｏｏｔ ｍａｇｇｏｔ））、ホモプテラ種（Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ ｓｐ．）、ペムヒガス種（Ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｓｐ．）（例えばシュガービート根アブラムシ（ｓｕｇａｒｂｅｅｔ ｒｏｏｔ ａｐｈｉｄ）、カットワーム及び地虫）、アフィス種属（Ａｐｈｉｓ ｓｐｐ．）（例えばコーン根アブラムシ（ｃｏｒｎ ｒｏｏｔ ａｐｈｉｄ））、種子－コーン甲虫（ｓｅｅｄ－ｃｏｒｎ ｂｅｅｔｌｅ） アゴノデラス・レコンテイ（Ａｇｏｎｏｄｅｒｕｓ ｌｅｃｏｎｔｅｉ）、フェルチア・サブゴチア（Ｆｅｌｔｉａ ｓｕｂｇｏｔｈｉｃａ）又はその組み合わせである。重要な昆虫は、ウエスタン・カスミカメムシ、サザン・コーン・ルートワーム、コーンハリガネムシ、種子コーンウジ虫、種子ウジ虫、コムギハリガネムシ及び地虫等である。
本発明に係る組成物及び方法では、植物有害生物は、限定されないが例えば、植物病原性の線虫、レニフォーム線虫、ロトリエンキュラス属種（Ｒｏｔｌｙｅｎｃｈｕｌｕｓ ｓｐｐ．）、ダガー線虫、キシヒネマ属種（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ ｓｐｐ．）、ランス線虫、ホプロライマス属種（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ ｓｐｐ．）、ピン（レシオン）線虫、パラチレンカス属種（Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、リング線虫、クリコネモイデス属種（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．）、ネコブセンチュウ、メロイドギネ属種（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｓｐｐ．）、シース線虫、ヘミシクリオフォーラ属種（Ｈｅｍｉｃｙｃｌｉｏｐｈｏｒａ ｓｐｐ．）、スピリアル線虫、ヘリコチレンカス属種（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、スツビールート線虫、トリコドラス属種（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ ｓｐｐ．）、シスト線虫、ヘテロデラ属種（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｓｐｐ．）及びグロボデラ属種、スティング線虫、ベロノライマス属種（Ｂｅｌｏｎｏｌａｉｍｕｓ ｓｐｐ．）、スタント線虫及びチレンコリンカス属種（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、ブローイング線虫、ラドフォラス属種（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ ｓｐｐ．）又はそれらの組み合わせである。重要な線虫は、ネコブセンチュウ（メロイドギネ属種）、レシオン線虫、（パラチレンカス属種．）及びシスト線虫（ヘテロデラ属種及びグロボデラ属種）等である。
本発明に係る組成物及び方法では、植物有害生物は、限定されないが例えば、サビ菌、ボトリチス属種、エルウィニア属種、ディケヤ属種（Ｄｉｃｋｅｙａ ｓｐｐ．）、アグロバクテリウム属種（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、キサントモナス属種（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）、キシレラ属種（Ｘｙｌｅｌｌａ ｓｐｐ．）、カンジダタス属種（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ ｓｐｐ．）、フザリウム属種、スクレロチニア属種（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｐｐ．）、セルコスポラ／セルコスポリディウム属種（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ／Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．）、ウンシヌラ属種（Ｕｎｃｉｎｕｌａ ｓｐｐ．）、ポドスフェラ属種（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ ｓｐｐ．）（うどんこ病菌）、ホモプシス属種（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｓｐｐ．）、アルテルナリア属種（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐｐ．）、シュードモナス属種、フィトフトラ属種（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｐｐ．）、ファコプソラ属種、アスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ウロマイセス属種（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、例えば、ウロマイセス・アペンディキュラタス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ）、クラドスポリウム属種（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、リゾプス属種（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐｐ．）、ペニシリウム属種（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、リゾクトニア属種、マクロフォミナ・ファソリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）、マイコスフェレラ属種、マグナポルテ属種、例えば、マグナポルテ・オリザエ（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ）又はマグナポルテ・グリセア（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ）、モニリニア属種（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｓｐｐ．）、コレトトリカム属種（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｓｐｐ．）、ディアポルテ属種（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｓｐｐ．）、コリネスポラ属種（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ ｓｐｐ．）、ギムノスポランギウム属種（Ｇｙｍｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ ｓｐｐ．）、シゾチリウム属種（Ｓｃｈｉｚｏｔｈｙｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、ゴレオデス属種（Ｇｌｏｅｏｄｅｓ ｓｐｐ．）、ボトリオスフェリア属種（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｓｐｐ．）、ネオファブラエア属種（Ｎｅｏｆａｂｒａｅａ ｓｐｐ．）、ウィルソノマイセス属種（Ｗｉｌｓｏｎｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、スフェロテカ属種（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ ｓｐｐ．）、エリシフェ属種（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｓｐｐ．）、スタゴノスポラ属種（Ｓｔａｇｏｎｏｓｐｏｒａ ｓｐｐ．）、ピチウム属種（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｐ．）、ベンチュリア属種（Ｖｅｎｔｕｒｉａ ｓｐｐ．）、ウスチラゴ属種（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｐｐ．）、クラビセプス属種（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｓｐｐ．）、ティレチア属種（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｓｐｐ．）、フォーマ属種（Ｐｈｏｍａ ｓｐｐ．）、コクリオボラス・サチバス（Ｃｏｃｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）、ガエウマノマイセス・ガミニス（Ｇａｅｕｍａｎｏｍｙｃｅｓ ｇａｍｉｎｉｓ）、リンコスポリウム属種（Ｒｈｙｎｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、ビオポラリス属種（Ｂｉｏｐｏｌａｒｉｓ ｓｐｐ．）、及びヘルミントスポリウム属種（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、又はそれらの組み合わせ等の植物真菌性病原体又は植物細菌性病原体によって特徴付けられる。
重要な真菌性病原体は、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、ボトリチス属種、例えば、ボトリチス・シネレア、フザリウム属種、例えば、フザリウム・コルモラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｏｌｍｏｒｕｍ）、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）又はフザリウム・ビルグリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｉｒｇｕｌｉｆｏｒｍｅ）、フィトフトラ属種、例えば、フィトフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ）、リゾクトニア属種、例えば、リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）、マグナポルテ属種、例えば、マグナポルテ・グリセア、マグナポルテ・オリザエ、及びピチウム属種、例えば、ピチウム・アファニデルマタム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）及びピチウム・シルバチウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｙｌｖａｔｉｕｍ）、モニリニア属種、例えば、モニリニア・フルクチコラ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｆｒｕｃｔｉｃｏｌａ）、コレトトリカム属種、例えば、コレトトリカム・グロエオスポリオイデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）（有性段階のグロメレラ・シングラータ（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ ｃｉｎｇｕｌａｔａ））、すなわち炭疽病、スクレロチニア属種、例えば、スクレロチニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）及びスクレロチニア・ホメオカルパ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｈｏｍｅｏｃａｒｐａ）等で、より重要なのは、リゾクトニア属種である。重要な細菌性病原体は、エルウィニア・アミロボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ）のようなエルウィニア属種等である。
本開示に係る組成物及び方法では、ＲＴＩ５４５株を含む組成物は液体、懸濁剤、油分散、細粉、乾燥水和剤、延展可能な顆粒、又は乾燥可溶性顆粒の形態であってもよい。実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５は、約１．０×１０８ＣＦＵ／ｍｌから約１．０×１０１２ＣＦＵ／ｍｌまでの濃度で組成物に含まれてもよい。実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５は、約１．０×１０８ＣＦＵ／ｇから約１．０×１０１２ＣＦＵ／ｇまでの量で含まれてもよい。バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５は、芽胞又は栄養細胞の形態であってもよい。
本開示の組成物及び方法において、ＲＴＩ５４５株を含む組成物は、１種又は組み合わせたアジュバントを含んでもよく、例えば、アジュバントは担体、結合剤、界面活性剤、分散剤、又は酵母抽出物等である。担体、結合剤、界面活性剤、分散剤、及び／又は酵母抽出物は、植物の成長に有益である、及び／又は植物有害生物に対する保護をもたらすのに使用される組成物の特性を改善し、該特性は、改善された取扱特性、改善された吸湿性、改善された流動性、種子への改善された付着、ＲＴＩ５４５株の改善された安定性、及び植物の種子、根、又は土壌に送達された又は適用された後のＲＴＩ５４５株の改善された活性の１つ以上を含む。酵母抽出物は、植物成長に有益であるために約０．０１％から約０．２％ｗ／ｗの範囲の割合で送達される。
ＲＴＩ５４５株を含む組成物は、植え付けマトリックスの形態であってもよい。植え付けマトリックスは、鉢植え用の土混合物の形態であってもよい。
本開示の組成物及び方法において、組成物は、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で１種の又は組み合わせた追加の農薬を含んでもよく、例えば、農薬は、殺虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺細菌剤、バイオスティミュラント、除草剤、植物抽出物、微生物抽出物、植物成長調整物質、肥料又は農作物栄養生成物等である。１つの実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物と、１種又は組み合わせた殺虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺細菌剤、バイオスティミュラント、除草剤、植物抽出物、微生物抽出物、植物成長調整物質、肥料又は農作物栄養生成物と、を含む組成物は、一つに製剤化される。任意の追加の農薬は、生物剤でも化学剤であってもよい。他の実施の形態では、ＲＴＩ５４５株を含む組成物は、追加の農薬と別個に製剤化されてもよく、製剤化された追加の農薬と、例えばタンク混合で混合される。
肥料は、液体肥料であってもよい。用語“液体肥料”は、様々な割合の窒素、リン及びカリウム（例として、限定されないが５～１５％、例えば１０％の窒素、２０～５０％、例えば３４％のリン及び０～１５％、例えば０％のカリウム）と、任意で第２の栄養及び／又は微量栄養素を含む流体又は液体状の肥料を意味し、これは、リンを豊富に含み、速くて活力のある根成長を促すスターター肥料として一般に知られている。
本明細書で用いられた場合、用語“バイオスティミュラント”は、農作物の活力、収穫量及び／又は栄養素含有量、外観及び保存可能期間のような、農作物の品質形質を、その栄養素含有量に関わらず改善するために、栄養取り込み、栄養効率及び／又は非生物的ストレス耐性を強化する目的で植物に適用される物質又は微生物を意味する。バイオスティミュラントは、肥料と異なる機序を介して効果を発揮し、有害生物又は病害に対する直接の作用を有していない。
１つの実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物を含む組成物は、化学殺虫剤ビフェントリンをさらに含む。
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株と他の生物防除株との混合物が重要であって、生物防除株は、バチルス・チューリンゲンシス亜種ａｉｚａｗａｉ又はバチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ、ＣＨ２０１、ＱＳＴ７１３、ＭＢＩ６００又はＲＴＩ４７７等のバチルス・サブチィリス株、ＣＨ２００又はＲＴＩ１８４等のバチルス・リケニフォルミス株、ＲＴＩ３０１等のバチルス・ベレゼンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｖｅｌｅｚｅｎｓｉｓ）株、バチルス・サブチィリス変種アミロリケファシエンス株ＦＺＢ４２、若しくはバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）Ｄ７４７、又はそれらの組み合わせ等の他のバチルス・チューリンゲンシス株を含む。
ＲＴＩ５４５を含む微生物菌株の混合物は、特定の標的有害生物に対する活性を強化するために使用されるが、有用性の幅を拡大するために使用されてもよい。組み合わせを例示すると、土壌の昆虫に対して強い活性を有する株を、線虫、真菌に対する強い活性を有するか、植物成長にかなり有益な他の株と組み合わせることができる。さらに、利益を追加するために、株の当該混合物は合成された（化学的な）農業用殺虫剤と組み合わされてもよい。
１つの実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物を含む組成物は、過去に同定された株としてＡＴＣＣに番号ＰＴＡ－１２１１６５で寄託されたバチルス・アミロリケファシエンスＲＴＩ３０１（米国特許出願公開第２０１６／０１８６２７３号明細書）をさらに含む。最近、この株は、バチルス・ベレゼンシス株として再分類された。本明細書の以下では、ＡＴＣＣに番号ＰＴＡ－１２１１６５で寄託された株を“ＲＴＩ３０１”又は“バチルス・ベレゼンシスＲＴＩ３０１”と称する。１つの実施の形態では、ＲＴＩ５４５とＲＴＩ３０１株との組み合わせは、一方又は両方の株が植物真菌性病原体を含む植物有害生物に対する最大の保護を与える温度域を広げかつ増大させることで、植物成長及び植物有害生物に対する保護にもたらす利益を拡大する。
他の実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物を含む組成物は、ＤＳＭ１７２３６として寄託されたバチルス・リケニフォルミスＣＨ２００若しくはそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物、ＤＳＭ１７２３１として寄託されたバチルス・サブチィリスＣＨ２０１若しくはそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２１１６７で寄託されたバチルス・サブチィリスＲＴＩ４７７若しくはそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物、ＦＥＲＭ ＢＰ－８２３４として寄託されたバチルス・アミロリケファシエンスＤ７４７株の生物学的に純粋な培養物、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２１７２２として寄託されたバチルス・リケニフォルミスＲＴＩ１８４若しくはそのすべての同定特徴を有するその突然変異体、又はＲＴＩ３０１も含む組み合わせ等のそれらの任意の組み合わせをさらに含む。
１つの実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物を含む組成物は、化学殺虫剤、ビフェントリンをさらに含み、組成物は、植物、植物の一部、植物の種子、植物の根、植物若しくは植物の種子の周辺の土壌若しくは成長培地、又は植物を植える若しくは植物の種子を植える前に土壌若しくは成長培地に液体肥料と組み合わせて送達される。植物成長に有益な液体肥料との組み合わせにおける殺虫剤、ビフェントリンの使用例は、例えば、その全体を参照することで本明細書に組み入れられる国際公開第２０１６／１０８９７２号に開示されている。
他の実施の形態では、植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のために方法が提供され、該方法は、植物、植物の一部、植物の種子、植物の根、植物若しくは植物の種子周辺の土壌若しくは成長培地、又は植物を植える若しくは植物の種子を植える前に土壌若しくは成長培地に、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量の、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を含む組成物と、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量の、本明細書に記載された殺虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺細菌剤、除草剤、植物抽出物、植物成長調整物質、又は肥料等の追加の農薬の１種又は混合物と、の組み合わせを送達することを含む。任意の追加の農薬は、生物剤でも化学剤であってもよい。本実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物及び本明細書に記載された追加の農薬の１種又は混合物を含む組成物は、１つの製剤としてよりもむしろ別個に影響を受けやすい植物に送達される。
１つの実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物を含む組成物は、液体肥料と組み合わせて、植物、植物の一部、植物の種子、植物の根、植物若しくは植物の種子の周辺の土壌若しくは成長培地、又は植物を植える若しくは植物の種子を植える前に土壌若しくは成長培地に送達される。
１つの実施の形態では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物を含む組成物は、化学殺虫剤、ビフェントリンと、液体肥料と組み合わせて、植物、植物の一部、植物の種子、植物の根、植物若しくは植物の種子の周辺の土壌若しくは成長培地、又は植物を植える若しくは植物の種子を植える前に土壌若しくは成長培地に送達される。
１つの実施の形態では、提供される植物の種子は組成物で被覆され、該組成物は、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で含有される、例えば、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２１１６５として寄託されたバチルス・ベレゼンシスＲＴＩ３０１又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物の芽胞のような追加の生物学的農薬を含む。組成物は、約１．０×１０２ＣＦＵ／種子から約１．０×１０９ＣＦＵ／種子の量のバチルス・ベレゼンシスの芽胞を含んでもよい。
本発明に係る被覆された種子組成物は、広い範囲の植物の種子に有益であって、該植物の種子は、限定されないが、単子葉植物、双子葉植物、穀物、例えば、コーン、スイートコーン、ポップコーン、シードコーン、サイレージコーン、フィールドコーン、米、小麦、大麦、ソルガム、アスパラガス、ベリー、例えば、ブルーベリー、ブラックベリー、ラズベリー、ローガンベリー、ハックルベリー、クランベリー、グーズベリー、エルダーベリー、カラント、カンベリー、ブッシュベリー、アブラナ科野菜、例えば、ブロッコリー、キャベツ、カリフラワー、芽キャベツ、コラード、ケール、マスタードグリーン、コールラビ、ウリ科野菜、例えば、キュウリ、カンタロープ、メロン、マスクメロン、スカッシュ、スイカ、カボチャ、ナス、球根野菜、例えば、玉ネギ、ニンニク、エシャロット、柑橘類、例えば、オレンジ、グレープフルーツ、レモン、タンジェリン、タンジェロ、ブンタン、フルーツ野菜、例えば、ペッパー、トマト、グラウンドチェリー、トマティロ、オクラ、ブドウ、ハーブ、スパイス、葉野菜、例えば、レタス、セロリ、ホウレン草、パセリ、ラディッキオ、マメ科植物又は野菜、例えば、サヤ豆、スナップ豆、シェルビーンズ、ダイズ、ドライビーンズ、ガルバンゾー豆、リマ豆、エンドウ豆、ヒヨコ豆、スプリットピー、レンズ豆等の豆、油糧種子作物、例えば、キャノーラ、キャスター、ココナッツ、綿、亜麻、オイルパーム、オリーブ、ピーナッツ、菜種、ベニバナ、ゴマ、ヒマワリ、ダイズ、ナシ状果類、例えば、リンゴ、クラブアップル、ナシ、マルメロ、サンザシ、根、塊茎及び球茎野菜、例えば、ニンジン、ジャガイモ、サツマイモ、キャッサバ、ビーツ、ショウガ、西洋ワサビ、ダイコン、朝鮮人参、カブ、核果類、例えば、アプリコット、チェリー、ネクタリン、桃、プラム、プルーン、イチゴ、ツリーナッツ、例えば、アーモンド、ピスタチオ、ピーカン、クルミ、ハシバミ、クリ、カシュー、ブナ、バタグルミ、マカダミア、キウイ、バナナ、アガペ、草、芝草、観葉植物、ポインセチア、広葉樹の伐採片、例えば、クリ、オーク、カエデ、サトウキビ及びテンサイ等の種子である。１つ以上の実施の形態では、植物の種子は、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、綿、トマト、コショウ、ウリ科植物、サトウキビ、ピーナッツ又はコムギであってもよく、ダイズ、綿、コムギ、コーン又はジャガイモであってもよい。
組成物で被覆された植物の種子に係る１つの実施の形態において、組成物は、植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で含有される、本明細書に記載された追加の農薬の１種又は組み合わせをさらに含む。
１つの実施の形態では、植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のために方法が提供され、該方法は、植物の種子を植えることを含み、種子は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物体を含む組成物で被覆され、当該種子からの植物の成長に有益であって、及び／又は植物有害生物に対する保護がもたらされる。
１つの実施の形態では、方法は、植物の被覆された種子、植物の被覆された種子の周辺の土壌若しくは成長培地に、又は植物の被覆された種子を植える前に土壌若しくは成長培地に液体肥料を送達することをさらに含む。
方法に係る１つの実施の形態では、植物の種子が、ＡＴＣＣに番号ＰＴＡ－１２１１６５で寄託されたバチルス・ベレゼンシスＲＴＩ３０１等の追加の生物学的農薬をさらに含む組成物で被覆される。１つの実施の形態では、ＲＴＩ５４５及びＲＴＩ３０１株の組み合せが、一方又は両方の株が植物真菌性病原体を含む植物有害生物に対する最大の保護を与える温度域を広げかつ増大させることで、植物成長及び植物有害生物に対する保護にもたらす利益を拡大する。
１つの実施の形態では、植物の種子が化学殺虫剤をさらに含む組成物で被覆され、方法は、植物の被覆された種子、植物の被覆された種子の周辺の土壌若しくは成長培地、又は植物の被覆された種子を植える前に土壌若しくは成長培地に液体肥料を送達することをさらに含む。１つの実施の形態では、化学殺虫剤はビフェントリンである。
被覆された種子を含む本明細書における実施の形態では、用語“種子”は、単なる種子だけではなく、苗、移植片、挿し木（例えば、茎、根、葉、及び類似するもの）、胞子、苗（例えば、サトウキビ）、球根、球茎、根茎、塊茎、若しくはその一部、又は完全な植物が得られる他の植物組織のような植物を繁殖させるための植物の他の一部も意味する。
本開示に係る組成物及び方法において、組成物は殺真菌剤を含んでもよい。殺真菌剤は、ルピナス・アルブス（Ｌｕｐｉｎｕｓ ａｌｂｕｓ）からの抽出物を含んでもよい。１つ以上の実施の形態では、殺真菌剤は、ＢＬＡＤポリペプチドを含んでもよい。ＢＬＡＤポリペプチドは、真菌の細胞壁を損傷させ、内部細胞膜を破壊することによって感受性真菌性病原体に作用する甘ルーピン豆（ルピナス・アルブス）由来の天然の種子貯蔵タンパク質の断片であってもよい。組成物は、約２０％のＢＬＡＤポリペプチドを含み得る。
さらに、１つ以上の実施の形態では、本発明の組成物及び方法の適切な殺虫剤、除草剤、殺真菌剤、及び殺線虫剤は以下を含み得る。
殺虫剤：Ａ０）アグリガタ（ａｇｒｉｇａｔａ）、アル－ホスフィド、アンブリセイウス、アフェリヌス（ａｐｈｅｒｉｎｕｓ）、アフィディウス、アフィドレテス、アルテミシニン、オートグラファ・カリフォルニカＮＰＶ、アゾシクロチン、バチルス・サブチィリス、バチルス・チューリンゲンシス亜種アイザワイ（ａｉｚａｗａｉ）、バチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ、バチルス・チューリンゲンシス、ボーベリア（ｂｅａｕｖｅｒｉａ）、ボーベリア・バシアーナ（ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ）、ベータシフルトリン、生物学的製剤、ビスルタップ、ブロフルトリネート、ブロモホス－ｅ、ブロモプロピレート、Ｂｔ遺伝子組換トウモロコシ、Ｂｔ遺伝子組換大豆、カプサイシン、カルタップ、セラストラス（ｃｅｌａｓｔｒｕｓ）抽出物、クロルアントラニリプロール、クロルベンズロン、クロルエトキシフォス、クロルフルアズロン、クロルピリフォス－ｅ、シニジアジン（ｃｎｉｄｉａｄｉｎ）、クリオライト、シアノホス、シアントラニリプロール、シクラニリプロール、シハロトリン、シヘキサチン、シペルメトリン、ダクヌサ、ＤＣＩＰ、ジクロロプロペン、ジコホル、ジグリファス、ジグリファス＋ダクヌサ、ジメタカルブ、ジチオエーテル、酢酸ドデシル、エマメクチン、エンカルシア（ｅｎｃａｒｓｉａ）、ＥＰＮ、エレツモセルス（ｅｒｅｔｍｏｃｅｒｕｓ）、エチレン－ジブロミド、ユーカリプトール、脂肪酸、脂肪酸／塩、フェナザキン、フェノブカルブ（ＢＰＭＣ）、フェンピロキシメート、フルブロシトリネート（ｆｌｕｂｒｏｃｙｔｈｒｉｎａｔｅ）、フルフェンジン、フルピラジフロン、ホルメタネート、ホルモチオン、フラチオカルブ、ガンマ－シハロトリン、ニンニクジュース、グラニュロシス－ウイルス、ハルモニア（ｈａｒｍｏｎｉａ）、オオタバコガ（ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ａｒｍｉｇｅｒａ）ＮＰＶ、不活性細菌、インドール－３－イル酪酸、ヨードメタン、鉄、イソカルボフォス（ｉｓｏｃａｒｂｏｆｏｓ）、イソフェンホス、イソフェンホス－ｍ、イソプロカルブ、イソチオエート（ｉｓｏｔｈｉｏａｔｅ）、カオリン、リンダン、リウヤンマイシン（ｌｉｕｙａｎｇｍｙｃｉｎ）、マトリン、メホスホラン、メタアルデヒド、メタリジウム－アニソプリエ、メタミドホス、メトルカルブ（ＭＴＭＣ）、鉱物油、マイレックス、ｍ－イソチオシアネート、モノスルタップ、ミロテシウム・ベルカリア（ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒｉａ）、ナレド、ハモグリミドリヒメコバチ（ｎｅｏｃｈｒｙｓｏｃｈａｒｉｓ ｆｏｒｍｏｓ）、ニコチン、ニコチノイド、油脂、オレイン酸、オメトエート、オリウス（ｏｒｉｕｓ）、オキシマトリン、ペシロマイセス、パラフィン油、パラチオン－ｅ、パスツリア、石油、フェロモン、リン酸、ホトラブダス、ホキシム、フィトセイウルス（ｐｈｙｔｏｓｅｉｕｌｕｓ）、ピリミホス－ｅ、植物油、プルテラ・キシロステラ（ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）ＧＶ、多角体病（ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ）ウイルス、ポリフェノール抽出物、オレイン酸カリウム、プロフェノフォス、プロスレル（ｐｒｏｓｕｌｅｒ）、プロチオフォス、ピラクロフォス、ピレトリン、ピリダフェンチオン、ピリミジフェン、ピリプロキシフェン、キラヤ（ｑｕｉｌｌａｙ）抽出物、キノメチオネート、菜種油、ロテノン、サポニン、サポノジット（ｓａｐｏｎｏｚｉｔ）、ナトリウム化合物、フルオロケイ酸ナトリウム、スターチ、ステイネルネマ（ｓｔｅｉｎｅｒｎｅｍａ）、ストレプトマイセス、スルフルラミド、硫黄、テブピリムフォス、テメホス、テトラジホン、テトラニリプロール、チオファノックス、チオメトン、トランスジェニクス（例えば、Ｃｒｙ３Ｂｂ１）、トリアザメート、トリコデルマ、トリコグランマ、トリフルムロン、ベルチシリウム、ベルトリン、殺虫剤の異性体（例えば、カッパー－ビフェントリン、カッパー－テフルトリン）、ジクロロメゾチアズ、ブロフラニリド、ピラジフルミド等の様々な殺虫剤；Ａ１）アルジカルブ、アラニカルブ、ベンフラカルブ、カルバリル、カルボフラン、カルボスルファン、メチオカルブ、メソミル、オキサミル、ピリミカルブ、プロポクスル及びチオジカルブ等のカーバメート類；Ａ２）アセフェート、アジンホス－エチル、アジンホス－メチル、クロルフェンビンホス、クロルピリフォス、クロルピリフォス－メチル、デメトン－Ｓ－メチル、ダイアジノン、ジクロルボス／ＤＤＶＰ、ジクロトホス、ジメトエート、ジスルホトン、エチオン、フェニトロチオン、フェンチオン、イソキサチオン、マラチオン、メタミダホス（ｍｅｔｈａｍｉｄａｐｈｏｓ）、メチダチオン、メビンホス、モノクロトホス、オキシメトエート（ｏｘｙｍｅｔｈｏａｔｅ）、オキシデメトン－メチル、パラチオン、パラチオン－メチル、フェントエート、ホレート、ホサロン、ホスメット、ホスファミドン、ピリミホス－メチル、キナルホス、テルブフォス、テトラクロルビンホス、トリアゾホス及びトリクロルホン等の有機ホスフェート類；Ａ３）エンドスルファン等のシクロジエン有機塩素化合物類；Ａ４）エチプロール、フィプロニル、ピラフルプロール及びピリプロール等のフィプロール（ｆｉｐｒｏｌｅ）類；Ａ５）アセタミプリド、クロチアニジン（ｃｈｌｏｔｈｉａｎｉｄｉｎ）、ジノテフラン、イミダクロプリド、ニテンピラム、チアクロプリド及びチアメトキサム等のネオニコチノイド類；Ａ６）スピノサド及びスピネトラム等のスピノシン類；Ａ７）アバメクチン、エマメクチン安息香酸塩、イベルメクチン、レピメクチン及びミルベメクチン等のメクチン類由来のクロリドチャネルアクティベーター；Ａ８）ヒドロプレン、キノプレン、メトプレン、フェノキシカルブ及びピリプロキシフェン等の幼若ホルモン模倣物；Ａ９）ピメトロジン、フロニカミド及びピリフルキナゾン等の選択的同翅類摂食遮断薬；Ａ１０）クロフェンテジン、ヘキシチアゾクス及びエトキサゾール等のダニ成長阻害剤；Ａ１１）ジアフェンチウロン、フェンブタチン酸化物及びプロパルギット等のミトコンドリアＡＴＰシンターゼ阻害剤；クロルフェナピル等の酸化的リン酸化の脱共役剤；Ａ１２）ベンスルタップ、カルタップ塩酸塩、チオシクラム及びチオスルタップ（ｔｈｉｏｓｕｌｔａｐ）ナトリウム等のニコチン性アセチルコリン受容体チャネル遮断薬；Ａ１３）ビストリフルロン、ジフルベンズロン、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン、ルフェヌロン、ノバルロン及びテフルベンズロン等のベンゾイル尿素類由来のキチン生合成のタイプ０の阻害剤；Ａ１４）ブプロフェジン等のキチン生合成のタイプ１の阻害剤；Ａ１５）シロマジン等の脱皮撹乱剤（ｍｏｌｔｉｎｇ ｄｉｓｒｕｐｔｏｒ）；Ａ１６）メトキシフェノジド、テブフェノジド、ハロフェノジド及びクロマフェノジド（ｃｈｒｏｍａｆｅｎｏｚｉｄｅ）等のエクジソン受容体アゴニスト；Ａ１７）アミトラズ等のオクトパミン受容体アゴニスト；Ａ１８）ミトコンドリア複合体の電子伝達阻害剤であるピリダベン、テブフェンピラド、トルフェンピラド、フルフェネリム（ｆｌｕｆｅｎｅｒｉｍ）、シエノピラフェン（ｃｙｅｎｏｐｙｒａｆｅｎ）、シフルメトフェン、ヒドラメチルノン、アセキノシル又はフルアクリピリム；Ａ１９）インドキサカルブ及びメタフルミゾン等の電位依存性ナトリウムチャネル遮断薬；Ａ２０）スピロジクロフェン、スピロメシフェン及びスピロテトラマト等の脂質合成の阻害剤；Ａ２１）フルベンジアミド、フタルアミド化合物（Ｒ）－３－クロル－Ｎ１－｛２－メチル－４－［１，２，２，２－テトラフルオロ－１－（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝－Ｎ２－（１－メチル－２－メチルスルホニルエチル）フタルアミド、及び（Ｓ）－３－クロル－Ｎ１－｛２－メチル－４－［１，２，２，２－テトラフルオロ－１－（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝－Ｎ２－（１－メチル－２－メチルスルホニルエチル）フタルアミド、クロラントラニリプロール、シクラニリプロール及びシアントラニリプロール等のジアミド類由来のリアノジン受容体モジュレーター；Ａ２２）アザジラクチン、アミドフルメト、ビフェナゼート、フルエンスルホン（ｆｌｕｅｎｓｕｌｆｏｎｅ）、ピペロニルブトキシド、ピリダリル、スルホキサフロル（ｓｕｌｆｏｘａｆｌｏｒ）等の作用機序の不明又は不確かな化合物；あるいはＡ２３）アクリナトリン、アレトリン、ビフェントリン、シフルトリン、ラムダ－シハロトリン、シペルメトリン、アルファ－シペルメトリン、ベータ－シペルメトリン、ゼータ－シペルメトリン、デルタメトリン、エスフェンバレレート、エトフェンプロックス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、フルシトリネート、タウ－フルバリネート、ペルメトリン、シラフルオフェン、テフルトリン及びトラロメトリン等のピレスロイド類由来のナトリウムチャネルモジュレーター。
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株と他の生物防除株との混合物が重要であって、生物防除株は、昆虫防除ためのＣＨ２０１等のバチルス・サブチィリス株、ＣＨ２００等のバチルス・リケニフォルミス株、バチルス・チューリンゲンシス亜種ａｉｚａｗａｉ、バチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ、又はそれらの組み合わせ等である。
本開示に係る組成物及び方法では、組成物は、化学殺虫剤を含んでもよい。化学殺虫剤は、ピレスロイド、例えば、ビフェントリン、テフルトリン、ゼータ－シペルメトリン、シフルトリン、有機ホスフェート、例えば、クロレトキシホス、クロルピリフォス、テブピリムホス、フィプロール（ｆｉｐｒｏｌｅ）、例えば、フィプロニル、ネオニコチノイド、例えば、イミダクロプリド、チアメトキサム、クロチアニジン、ジアミド、例えば、クロラントラニリプロール、シアントランニリプロール、シクラニリプロール、又はそれらの混合物等であってもよい。
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株と化学昆虫防除剤との混合物が好ましく、該化学昆虫防除剤は、クロラントラニリプロール、クロレトキシフォス、クロルピリフォス－ｅ、シアントラニリプロール、シクラニリプロール、シペルメトリン、ジクロロプロペン、フルピラジフロン、ガンマ－シハロトリン、プロフェノフォス、テブピリムフォス、テフルトリン、カッパー－ビフェントリン、カッパー－テフルトリン、カルボフラン、カルボスルファン、オキサミル、チオジカルブ、クロルピリフォス、クロルピリフォス－ｅ、クロルピリフォス－メチル、ジアジノン、フォレート、テルブフォス、フィプロニル、アセタミプリド、クロチアニジン、イミダクロプリド、チアクロプリド、チアメトキサム、アバメクチン、フロニカミド、フルベンジアミド、ビフェントリン、ラムダ－シハロトリン、シペルメトリン、ゼータ－シペルメトリン、デルタメトリン又はそれらのあらゆる混合物を含む。
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株と、クロチアニジン、チアメトキサム、イミダクロプリド、テフルトリン、フィプロニル、クロルピリフォス－ｅ、テブピリムフォス、ビフェントリン、シペルメトリン、ゼータ－シペルメトリン、ガンマ－シハロトリン、オキサミル、クロラントラニリプロール、シアントラニリプロール、シクラニリプロール、又はそれらの混合物との混合物がより好ましい。
１つ以上の実施の形態では、殺虫剤はビフェントリンを含み、該組成物は液体として製剤化される。１つ以上の実施の形態では、殺虫剤は、ビフェントリン及びクロチアニジンを含んでもよい。１つ以上の実施の形態では、殺虫剤は、ビフェントリン及びクロチアニジンを含み、該組成物は液体として製剤化される。１つ以上の実施の形態では、殺虫剤は、ビフェントリン又はゼータ－シペルメトリンを含んでもよい。１つ以上の実施の形態では、組成物は液体として製剤化されてよく、殺虫剤は、ビフェントリン又はゼータ－シペルメトリンを含んでもよい。
１つの実施の形態では、化学殺虫剤はビフェントリンを含む。１つの実施の形態では、化学殺虫剤はビフェントリンを含み、組成物は、さらに水和アルミニウム－マグネシウムケイ酸塩と、スクロースエステル、リグノスルホネート、アルキルポリグリコシド、ナフタリンスルホン酸ホルムアルデヒド縮合物及びリン酸エステルからなる少なくとも１種の分散剤と、をさらに含む。ビフェントリン殺虫剤は、０．１ｇ／ｍｌから０．２ｇ／ｍｌの範囲の濃度で含まれてもよい。ビフェントリン殺虫剤は、０．１７ｇ／ｍｌの濃度で含まれてもよい。ビフェントリン殺虫剤の適用割合は、ヘクタールあたり約０．１グラムのビフェントリン（ｇ ａｉ／ｈａ）から約１０００ｇ ａｉ／ｈａの範囲、より好ましくは約１ｇ ａｉ／ｈａから約１００ｇ ａｉ／ｈａの範囲であってもよい。
ビフェントリンは、組成物におけるすべての成分の総重量に対して、好ましくは１．０重量％から３５重量％の濃度で、より好ましくは、１５重量％から２５重量％で含まれる。ビフェントリン殺虫剤組成物は、肥料との混合に適するように液体として製剤化される。
殺真菌剤：Ｂ０）ベンゾビンジフルピル、アンチペロノスポリック（ａｎｉｔｉｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒｉｃ）（例えば、アメトクトラジン、アミスルブロム、ベンチアバリカルブ、シアゾファミド、シモキサニル、ジメトモルフ、エタボキサム、ファモキサドン、フェンアミドン、フルメトベル（ｆｌｕｍｅｔｏｖｅｒ）、フルモルフ、フルオピコリド、イプロバリカルブ、マンジプロパミド、バリフェナレート、ベナラキシル、ベナラキシル－Ｍ、フララキシル、メタラキシル、及びメタラキシル－Ｍ）、アメトクトラジン、アミスルブロム、銅塩（例えば、水酸化銅、酸塩化銅、硫酸銅、過硫酸銅）、ボスカリド、チフルザミド（ｔｈｉｆｌｕｍａｚｉｄｅ）、フルチアニル、フララキシル、チアベンダゾール、ベノダニル、メプロニル、イソフェタミド、フェンフラム、ビキサフェン（ｂｉｘａｆｅｎ）、フルキサピロキサド、ペンフルフェン、セダキサン、クモキシストロビン、エノキサストロビン、フルフェノキシストロビン、ピラオキシストロビン、ピラメトストロビン、トリクロピリカルブ（ｔｒｉｃｌｏｐｙｒｉｃａｒｂ）、フェナミンストロビン、メトミノストロビン、ピリベンカルブ、メプチルジノカップ（ｍｅｐｔｙｌｄｉｎｏｃａｐ）、酢酸フェンチン、塩化フェンチン、水酸化フェンチン、オキシテトラシクリン、クロゾリネート（ｃｈｌｏｚｏｌｉｎａｔｅ）、クロロネブ、テクナゼン、エトリジアゾール、ヨードカルブ、プロチオカルブ、様々なバチルス株（例えば、ＣＨ２００、ＣＨ２０１、ＲＴＩ１８４、ＲＴ１３０１、ＱＳＴ７１３、ＦＺＢ２４、ＭＢＩ６００、Ｄ７４７で同定される株）、メラレウカ・アルテルニフォリア（Ｍｅｌａｌｅｕｃａ ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）抽出物、ルピナス・アルブス・ドーセ（Ｌｕｐｉｎｕｓ ａｌｂｕｓ ｄｏｃｅ）抽出物、ＢＬＡＤポリペプチド、ピリソキサゾール（ｐｙｒｉｓｏｘａｚｏｌｅ）、オキスポコナゾール、エタコナゾール（ｅｔａｃｏｎａｚｏｌｅ）、フェンピラザミン、フェンピコキサミド、メフェントリフルコナゾール、ナフチフィン、テルビナフィン、バリダマイシン、ピリモルフ、バリフェナレート、フタリド、プロベナゾール、イソチアニル、ラミナリン、レイノウトリア・サチャリネンシス（Ｒｅｙｎｏｕｔｒｉａ ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ）抽出物、亜リン酸及び塩、テクロフタラム（ｔｅｃｌｏｆｔｈａｌａｍ）、トリアゾキシド（ｔｒｉａｚｏｘｉｄｅ）、ピリオフェノン、有機油、炭酸水素カリウム、クロロタロニル、フルオロイミド；Ｂ１）ビテルタノール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール（ｄｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、エニルコナゾール、エポキシコナゾール、フルキンコナゾール、フェンブコナゾール、フルシラゾール、フルトリアフォル、ヘキサコナゾール、イミベンコナゾール（ｉｍｉｂｅｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ペンコナゾール、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、シメコナゾール、トリアジメフォン、トリアジメノール、テブコナゾール、テトラコナゾール、トリチコナゾール、プロクロラズ、ペフラゾエート（ｐｅｆｕｒａｚｏａｔｅ）、イマザリル、トリフルミゾール、シアゾファミド、ベノミル、カルベンダジム、チアベンダゾール、フベリダゾール、エタボキサム、エトリジアゾール及びヒメキサゾール、アザコナゾール、ジニコナゾール－Ｍ（ｄｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ－Ｍ）、オキスポコナゾール（ｏｘｐｏｃｏｎａｚｏｌ）、パクロブトラゾール、ウニコナゾール、１－（４－クロロ－フェニル）－２－（［１，２，４］トリアゾール－１－イル）－シクロヘプタノール並びにイマザリルスルフェート（ｉｍａｚａｌｉｌｓｕｌｆｐｈａｔｅ）等のアゾール；Ｂ２）アゾキシストロビン、ジモキシストロビン、エネストロブリン（ｅｎｅｓｔｒｏｂｕｒｉｎ）、フルオキサストロビン、クレソキシム－メチル、メトミノストロビン、オリサストロビン、ピコキシストロビン、ピラクロストロビン、トリフロキシストロビン、エネストロブリン、メチル（２－クロロ－５－［１－（３－メチルベンジルオキシイミノ）エチル］ベンジル）カルバメート、メチル（２－クロロ－５－［１－（６－メチルピリジン－２－イルメトキシイミノ）エチル］ベンジル）カルバメート及びメチル２－（オルト－（２，５－ジメチルフェニルオキシメチレン）－フェニル）－３－メトキシアクリレート、２－（２－（６－（３－クロロ－２－メチル－フェノキシ）－５－フルオロ－ピリミジン－４－イルオキシ）－フェニル）－２－メトキシイミノ－Ｎ－メチル－アセトアミド及び３－メトキシ－２－（２－（Ｎ－（４－メトキシ－フェニル）－シクロプロパンカルボキシイミドイルスルファニルメチル）－フェニル）－アクリル酸メチルエステル等のストロビルリン；Ｂ３）カルボキシン、ベナラキシル、ベナラキシル－Ｍ、フェンヘキサミド、フルトラニル、フラメトピル、メプロニル、メタラキシル、メフェノキサム、オフレース（ｏｆｕｒａｃｅ）、オキサジキシル、オキシカルボキシン、ペンチオピラド、イソピラザム、チフルザミド、チアジニル、３，４－ジクロロ－Ｎ－（２－シアノフェニル）イソチアゾール－５－カルボキサミド、ジメトモルフ、フルモルフ、フルメトベル、フルオピコリド（ピコベンズアミド）、ゾキサミド、カルプロパミド、ジクロシメット、マンジプロパミド、Ｎ－（２－（４－［３－（４－クロロフェニル）プロパ－２－インイルオキシ］－３－メトキシフェニル）エチル）－２－メタンスルホニル－アミノ－３－メチルブチルアミド、Ｎ－（２－（４－［３－（４－クロロ－フェニル）プロパ－２－インイルオキシ］－３－メトキシフェニル）エチル）－２－エタンスルホニルアミノ－３－メチルブチルアミド、メチル－３－（４－クロロフェニル）－３－（２－イソプロポキシカルボニル－アミノ－３－メチル－ブチリルアミノ）プロピオネート、Ｎ－（４’－ブロモビフェニル－２－イル）－４－ジフルオロメチル－２－メチルチアゾール－５－カルボキサミド、Ｎ－（４’－トリフルオロメチル－ビフェニル－２－イル）－４－ジフルオロメチル－２－メチルチアゾール－５－カルボキサミド、Ｎ－（４’－クロロ－３’－フルオロビフェニル－２－イル）－４－ジフルオロメチル－２－メチル－チアゾール－５－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－４－フルオロビフェニル－２－イル）－３－ジフルオロ－メチル－１－メチル－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－３－ジフルオロメチル－１－メチルピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（２－シアノ－フェニル）－３，４－ジクロロイソチアゾール－５－カルボキサミド、２－アミノ－４－メチル－チアゾール－５－カルボキシアニリド、２－クロロ－Ｎ－（１，１，３－トリメチル－インダン－４－イル）－ニコチンアミド、Ｎ－（２－（１，３－ジメチルブチル）－フェニル）－１，３－ジメチル－５－フルオロ－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－クロロ－３’，５－ジフルオロ－ビフェニル－２－イル）－３－ジフルオロメチル－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－クロロ－３’，５－ジフルオロ－ビフェニル－２－イル）－３－トリフルオロメチル－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－５－フルオロ－ビフェニル－２－イル）－３－トリフルオロメチル－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，５－ジフルオロ－４’－メチル－ビフェニル－２－イル）－３－ジフルオロメチル－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，５－ジフルオロ－４’－メチル－ビフェニル－２－イル）－３－トリフルオロメチル－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（シス－２－ビシクロプロピル－２－イル－フェニル）－３－ジフルオロメチル－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（トランス－２－ビシクロプロピル－２－イル－フェニル）－３－ジフルオロ－メチル－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、フルオピラム、Ｎ－（３－エチル－３，５－５－トリメチル－シクロヘキシル）－３－ホルミルアミノ－２－ヒドロキシ－ベンズアミド、オキシテトラサイクリン、シルチオファム、Ｎ－（６－メトキシ－ピリジン－３－イル）シクロプロパンカルボキサミド、２－ヨード－Ｎ－フェニル－ベンズアミド、Ｎ－（２－ビシクロ－プロピル－２－イル－フェニル）－３－ジフルオロメチル－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－１，３－ジメチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－１，３－ジメチル－５－フルオロピラゾール－４－イル－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－５－クロロ－１，３－ジメチル－ピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－フルオロメチル－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－（クロロフルオロメチル）－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－ジフルオロメチル－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－ジフルオロメチル－５－フルオロ－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－５－クロロ－３－ジフルオロメチル－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－（クロロジフルオロメチル）－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－５－フルオロ－１－メチル－３－トリフルオロメチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－５－クロロ－１－メチル－３－トリフルオロメチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－１，３－ジメチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－１，３－ジメチル－５－フルオロピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－５－クロロ－１，３－ジメチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－フルオロメチル－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－（クロロフルオロメチル）－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－ジフルオロメチル－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－ジフルオロメチル－５－フルオロ－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－５－クロロ－３－ジフルオロメチル－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－３－（クロロジフルオロメチル）－１－メチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２
－イル）－５－フルオロ－１－メチル－３－トリフルオロメチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（２’，４’，５’－トリフルオロビフェニル－２－イル）－５－クロロ－１－メチル－３－トリフルオロメチルピラゾール－４－イルカルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－３－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－３－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－ジフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジフルオロ－３－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジフルオロ－３－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－Ｓ－ジフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’－クロロ－４’－フルオロ－３－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－ジフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－４－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジフルオロ－４－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－Ｓ－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－４－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－ジフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジフルオロ－４－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－ジフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’－クロロ－４’－フルオロ－４－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－Ｓ－ジフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジフルオロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－Ｓ－ジフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾールカルボキサミド、Ｎ－（３’，４－ジフルオロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－ジフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’，４’－ジクロロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１，３－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（３’－クロロ－４’－フルオロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－ジフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４－フルオロ－４－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－フルオロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－クロロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－メチル－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－フルオロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１，３－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－クロロ－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１，３－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－メチル－５－フルオロビフェニル－２－イル）－１，３－ジメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－フルオロ－６－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－（４’－クロロ－６－フルオロビフェニル－２－イル）－１－メチル－３－トリフルオロメチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－［２－（１，１，２，３，３，３－ヘキサフルオロプロポキシ）－フェニル］－３－ジフルオロメチル－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、Ｎ－［４’－（トリフルオロメチルチオ）－ビフェニル－２－イル］－３－ジフルオロメチル－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、及びＮ－［４’－（トリフルオロメチルチオ）－ビフェニル－２－イル］－１－メチル－３－トリフルオロメチル－ｌ－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミド、３－ジフルオロメチル－Ｎ－（７－フルオロ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－１－メチル－４－ピラゾールカルボキサミド（フルインダピル）、４－ジフルオロメチル－Ｎ－（７－フルオロ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－２－メチル－５－チアゾールカルボキサミド、３－ジフルオロメチル－１－メチル－Ｎ－（１，１，３，７－テトラメチル－４－インダニル）－ピラゾールカルボキサミド、４－ジフルオロメチル－２－メチル－Ｎ－（１，１，３，７－テトラメチル－４－インダニル）－５－チアゾールカルボキサミド、３－ジフルオロメチル－１－メチル－Ｎ－（７－メトキシ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－４－ピラゾールカルボキサミド、４－ジフルオロメチル－２－メチル－Ｎ－（７－メトキシ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－５－チアゾールカルボキサミド、３－ジフルオロメチル－１－メチル－Ｎ－（７－メチルチオ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－４－ピラゾールカルボキサミド、４－ジフルオロメチル－２－メチル－Ｎ－（７－メチルチオ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－５－チアゾールカルボキサミド、３－ジフルオロメチル－１－メチル－Ｎ－（７－トリフルオロメトキシ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－４－ピラゾールカルボキサミド、４－ジフルオロメチル－２－メチル－Ｎ－（７－トリフルオロメトキシ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－５－チアゾールカルボキサミド、３－ジフルオロメチル－Ｎ－（７－フルオロ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－４－フラザンカルボキサミド（ｆｕｒａｚａｎｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ）、４－ジフルオロメチル－Ｎ－（７－フルオロ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－２－メチルチオ－５－ピリミジンカルボキサミド、３－ジフルオロメチル－Ｎ－（７－クロロ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－１－メチル－４－ピラゾールカルボキサミド、３－ジフルオロメチル－Ｎ－（７－クロロ－１，１－ジエチル－３－メチル－４－インダニル）－１－メチル－４－ピラゾールカルボキサミド、又は４－ジフルオロメチル－Ｎ－（７－フルオロ－１，１，３－トリメチル－４－インダニル）－５－チアジアゾールカルボキサミド等のカルボキサミド；Ｂ４）フルアジナム、ピリフェノックス（ｐｙｒｉｆｅｎｏｘ）、ブピリメート、シプロジニル、フェナリモル、フェリムゾン、メパニピリム、ヌアリモル、ピリメタニル、トリフォリン、フェンピクロニル、フルジオキソニル、アルジモルフ、ドデモルフ、フェンプロピモルフ、トリデモルフ、フェンプロピジン、イプロジオン、プロシミドン、ビンクロゾリン、ファモキサドン、フェンアミドン、オクチリノン（ｏｃｔｈｉｌｉｎｏｎｅ）、プロベナゾール（ｐｒｏｂｅｎａｚｏｌｅ）、５－クロロ－７－（４－メチル－ピペリジン－１－イル）－６－（２，４，６－トリフルオロフェニル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン、アニラジン、ジクロメジン、ピロキロン、プロキナジド（ｐｒｏｑｕｉｎａｚｉｄ）、トリシクラゾール、２－ブトキシ－６－ヨード－３－プロピルクロメン（ｐｒｏｐｙｌｃｈｒｏｍｅｎ）－４－オン、アシベンゾラル－Ｓ－メチル、カプタホール、キャプタン、ダゾメット、ホルペット、フェノキサニル、キノキシフェン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（３－ブロモ－６－フルオロ－２－メチルインドール－１－スルホニル）－［１，２，４］トリアゾール－１－スルホンアミド、５－エチル－６－オクチル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２，７－ジアミン、２，３，５，６－テトラクロロ－４－メタンスルホニル－ピリジン、３，４，５－トリクロロ－ピリジン－２，６－ジカルボニトリル、Ｎ－（１－（５－ブロモ－３－クロロ－ピリジン－２－イル）－エチル）－２，４－ジクロロ－ニコチンアミド、Ｎ－（（５－ブロモ－３－クロロピリジン－２－イル）－メチル）－２，４－ジクロロ－ニコチンアミド、ジフルメトリム、ニトラピリン、ドデモルフアセテート（ｄｏｄｅｍｏｒｐｈａｃｅｔａｔｅ）、フルオロイミド、ブラストサイジン－Ｓ、キノメチオネート、デバカルブ、ジフェンゾクワット、ジフェンゾクワット－メチルスルフェート（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｐｈａｔ）、オキソリン酸及びピペラリン等の複素環式化合物；Ｂ５）マンコゼブ、マネブ、メタム、メタスルホカルブ（ｍｅｔｈａｓｕｌｐｈｏｃａｒｂ）、メチラム、フェルバム、プロピネブ、チラム、ジネブ、ジラム、ジエトフェンカルブ、イプロバリカルブ、ベンチアバリカルブ、プロパモカルブ、プロパモカルブ塩酸塩、４－フルオロフェニル－Ｎ－（１－（１－（４－シアノフェニル）－エタンスルホニル）ブト－２－イル）カルバメート、メチル３－（４－クロロ－フェニル）－３－（２－イソプロキシカルボニルアミノ－３－メチル－ブチリルアミノ）プロパノエート等のカルバメート；又はＢ６）グアニジン、ドジン、ドジン遊離塩基、イミノクタジン、グアザチン、抗生物質、例えば、カスガマイシン、オキシテトラサイクリン及びその塩、ストレプトマイシン、ポリオキシン、バリダマイシンＡ、ニトロフェニル誘導体、例えば、ビナパクリル、ジノカップ、ジノブトン、硫黄含有複素環式化合物、例えば、ジチアノン、イソプロチオラン、有機金属化合物、例えば、フェンチン塩、有機リン化合物、例えば、エジフェンホス、イプロベンフォス、フォセチル、フォセチル－アルミニウム、亜リン酸及びその塩、ピラゾホス、トルクロフォス－メチル、有機塩素化合物、例えば、ジクロフルアニド、フルスルファミド、ヘキサクロロ－ベンゼン、フタリド、ペンシクロン、キントゼン、チオファネート、チオファネートメチル、トリルフルアニド、その他、例えば、シフルフェナミド、シモキサニル、ジメチリモール、エチリモール、フララキシル、メトラフェノン及びスピロキサミン、グアザチン酢酸塩、イミノクタジン－トリアセテート、イミノクタジン－トリス（アルベシレート（ａｌｂｅｓｉｌａｔｅ））、カスガマイシン塩酸塩水和物、ジクロロフェン、ペンタクロロフェノール及びその塩、Ｎ－（４－クロロ－２－ニトロ－フェニル）－Ｎ－エチル－４－メチル－ベンゼンスルホンアミド、ジクロラン、ニトロタール－イソプロピル、テクナゼン、ビフェニル、ブロノポール、ジフェニルアミン、ミルジオマイシン、オキシン銅（ｏｘｉｎｃｏｐｐｅｒ）、プロヘキサジオンカルシウム、Ｎ－（シクロプロピルメトキシイミノ－（６－ジフルオロメトキシ－２，３－ジフルオロ－フェニル）－メチル）－２－フェニルアセトアミド、Ｎ’－（４－（４－クロロ－３－トリフルオロメチル－フェノキシ）－２，５－ジメチル－フェニル）－Ｎ－エチル－Ｎ－メチルホルムアミジン、Ｎ’－（４－（４－フルオロ－３－トリフルオロメチル－フェノキシ）－２，５－ジメチル－フェニル）－Ｎ－エチル－Ｎ－メチルホルムアミジン、Ｎ’－（２－メチル－５－トリフルオロメチル－４－（３－トリメチルシラニル－プロポキシ）－フェニル）－Ｎ－エチル－Ｎ－メチルホルムアミジン及びＮ’－（５－ジフルオロメチル－２－メチル－４－（３－トリメチルシラニル－プロポキシ）－フェニル）－Ｎ－エチル－Ｎ－メチルホルムアミジン等の他の殺真菌剤。
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株と他の生物防除株との混合物が重要であって、生物防除株は、真菌病害防除ためのＣＨ２０１、ＱＳＴ７１３、ＭＢＩ６００若しくはＲＴＩ４７７等のバチルス・サブチィリス株、ＣＨ２００若しくはＲＴＩ１８４等のバチルス・リケニフォルミス株、ＲＴＩ３０１等のバチルス・ベレゼンシス株、ＦＺＢ２４等のバチルス・サブチィリス変種アミロリケファシエンス若しくはバチルス・アミロリケファシエンスＤ７４７、又はそれらの組み合わせを含む。
本開示に係る組成物及び方法では、組成物は、化学殺真菌剤を含んでもよい。
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株と化学菌防除剤との混合物が好ましく、該化学菌防除剤は、チアベンダゾール、フルキサピロキサド、ペンフルフェン、セダキサン、ビテルタノール、シプロコナゾール、ジフェノコナゾール、フルキンコナゾール、フルトリアフォル、イプコナゾール、ミクロブタニル、プロチオコナゾール、トリアジメフォン、トリアジメノール、テブコナゾール、トリチコナゾール、プロクロラズ、イマザリル、ベノミル、カルベンダジム、ヒメキサゾール、アゾキシストロビン、フルオキサストロビン、ピラクロストロビン、トリフロキシストロビン、カルボキシン、フルトラニル、メタラキシル、メフェノキサム、ペンチオピラド、フルオピラム、シルチオファム、フルアジナム、ピリメタニル、フルジオキソニル、イプロジオン、トリシクラゾール、カプタン、ダゾメット、マンコゼブ、メタム、チラム、グアザチン、トルクロフォス－メチル、ペンシクロン、チオファネート－メチル、フェンピコキサミド、メフェントリフルコナゾール、フルインダピル、又はそれらのあらゆる混合物を含む。
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株と、フルジオキソニル、プロチオコナゾール、メフェノキサム、メタラキシル、テブコナゾール、ジフェノコナゾール、チラム、カルボキシン、カルベンダジム、トリチコナゾール、ペンシクロン、イマザリル、ピラクロストロビン、セダキサン、トリフロキシストロビン、フルキンコナゾール、フルオキサストロビン、アゾキシストロビン、フルトリアフォル、フルキサピロキサド、ペンチオピラド、フェンピコキサミド、メフェントリフルコナゾール、フルインダピル、又はそれらの混合物との混合物がより好ましい。
除草剤：Ｃ１）アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤（ＡＣＣ）、例えば、アロキシジム、クレトジム、クロプロキシジム（ｃｌｏｐｒｏｘｙｄｉｍ）、シクロキシジム、セトキシジム、トラルコキシジム、ブトロキシジム、クレフォキシジム（ｃｌｅｆｏｘｙｄｉｍ）又はテプラロキシジム等のシクロヘキセノンオキシムエーテル；クロジナホッププロパルギル、シハロホップ－ブチル、ジクロホップ－メチル、フェノキサプロップ－エチル、フェノキサプロップ－Ｐ－エチル、フェンチアプロップエチル（ｆｅｎｔｈｉａｐｒｏｐｅｔｈｙｌ）、フルアジホップ－ブチル、フルアジホップ－Ｐ－ブチル、ハロキシホップ－エトキシエチル、ハロキシホップ－メチル、ハロキシホップ－Ｐ－メチル、イソキサピリホップ、プロパキザホップ、キザロホップ－エチル、キザロホップ－Ｐ－エチル又はキザロホップ－テフリル等のフェノキシフェノキシプロピオン酸エステル；又はフランプロップ（ｆｌａｍｐｒｏｐ）－メチル又はフランプロップ－イソプロピル等のアリールアミノプロピオン酸；Ｃ２）アセト乳酸塩合成酵素阻害剤（ＡＬＳ）、例えば、イマザピル、イマザキン、イマザメタベンズ－メチル（ｉｍａｚａｍｅ）、イマザモックス、イマザピック又はイマゼタピル等のイミダゾリノン；ピリチオバック酸、ピリチオバック－ナトリウム、ビスピリバック－ナトリウム、ＫＩＨ－６１２７又はピリベンゾキシム（ｐｙｒｉｂｅｎｚｏｘｙｍ）等のピリミジルエーテル；フロラスラム、フルメトスラム又はメトスラム等のスルホンアミド；又はアミドスルフロン、アジムスルフロン、ベンスルフロン－メチル、クロリムロン－エチル、クロルスルフロン、シノスルフロン、シクロスルファムロン、エタメトスルフロン－メチル、エトキシスルフロン、フラザスルフロン、ハロスルフロン－メチル、イマゾスルフロン、メトスルフロン－メチル、ニコスルフロン、プリミスルフロン－メチル、プロスルフロン、ピラゾスルフロン－エチル、リムスルフロン、スルホメツロン－メチル、チフェンスルフロン－メチル、トリアスルフロン、トリベヌロン－メチル、トリフルスルフロン－メチル、トリトスルフロン、スルホスルフロン、ホラムスルフロン又はヨードスルフロン等のスルホニル尿素；Ｃ３）アミド、例えば、アリドクロル（ＣＤＡＡ）、ベンゾイルプロップ－エチル、ブロモブチド、クロルチアミド、ジフェナミド、エトベンザニジベンズクロメト（ｅｔｏｂｅｎｚａｎｉｄｉｂｅｎｚｃｈｌｏｍｅｔ）、フルチアミド、フォサミン（ｆｏｓａｍｉｎ）、又はモナリド（ｍｏｎａｌｉｄｅ）；Ｃ４）オーキシン除草剤、例えば、クロピラリド若しくはピクロラム等のピリジンカルボン酸；又は２，４－Ｄ若しくはベナゾリン；Ｃ５）オーキシン輸送阻害剤、例えば、ナプタラメ（ｎａｐｔａｌａｍｅ）又はジフルフェンゾピル；Ｃ６）カロテノイド生合成阻害剤、例えば、ベンゾフェナップ、クロマゾン（ジメタゾン）、ジフルフェニカン、フルオロクロリドン、フルリドン、ピラゾリネート、ピラゾキシフェン、イソキサフルトール、イソキサクロルトール、イソキサフルトール、メソトリオン、スルコトリオン（クロルメスロン）、ケトスピラドックス、フルルタモン、ノルフルラゾン又はアミトロール（ａｍｉｔｒｏｌ）；Ｃ７）エノールピルビルシキミ酸塩－３－ホスフェート合成酵素阻害剤（ＥＰＳＰＳ）、例えば、グリホサート又はスルホサート；Ｃ８）グルタミン合成酵素阻害剤、例えば、ビラナフォス（ｂｉｌａｎａｆｏｓ）（ビアラホス（ｂｉａｌａｐｈｏｓ））又はグルホシネート－アンモニウム；Ｃ９）脂質生合成阻害剤、例えば、アニロフォス若しくはメフェナセット等のアニリド；ジメテナミド、Ｓ－ジメテナミド、アセトクロール、アラクロール、ブタクロール、ブテナクロール、ジエタチル－エチル、ジメタクロール、メタザクロール、メトラクロール、Ｓ－メトラクロール、プレチラクロール、プロパクロール、プリナクロール、テルブクロール、テニルクロール若しくはキシラクロール等のクロロアセトアニリド；ブチレート、シクロエート、ジアレート、ジメピペレート、ＥＰＴＣ．エスプロカルブ、モリネート、ペブレート、プロスルホカルブ、チオベンカルブ（ベンチオカルブ）、トリアレート若しくはバーナレート（ｖｅｍｏｌａｔｅ）のようなチオ尿素、又はベンフレセート又はパーフルイドン；Ｃ１０）有糸分裂阻害剤、例えば、アシュラム、カルベタミド（ｃａｒｂｅｔａｍｉｄ）、クロルプロファム、オルベンカルブ、プロナミド（ｐｒｏｎａｍｉｄ（プロピズアミド（ｐｒｏｐｙｚａｍｉｄ））、プロファム若しくはチオカルバジル等のカルバメート；ベネフィン、ブトラリン、ジニトラミン（ｄｉｎｉｔｒａｍｉｎ）、エタルフルラリン、フルクロラリン、オリザリン、ペンジメタリン、プロジアミン若しくはトリフルラリン等のジニトロアニリン；ジチオピル若しくはチアゾピル等のピリジン；又はブタミフォス、クロルタールジメチル（ＤＣＰＡ）若しくはマレイン酸ヒドラジド；Ｃ１１）プロトポルフィリノーゲンＩＸオキシダーゼ阻害剤、例えば、アシフルオルフェン、アシフルオルフェン－ナトリウム、アクロニフェン、ビフェノックス、クロロニトロフェン（ＣＮＰ）、エトキシフェン、フルオロジフェン、フルオログリコフェンエチル、フォメサフェン、フリロキシフェン、ラクトフェン、ニトロフェン、ニトロフルオルフェン若しくはオキシフルオルフェン等のジフェニルエーテル；オキサジアルギル若しくはオキサジアゾン等のオキサジアゾール；アザフェニジン、ブタフェナシル、カルフェントラゾン－エチル、シニドン－エチル、フルミクロラック－ペンチル、フルミオキサジン、フルミプロピン、フルプロパシル（ｆｌｕｐｒｏｐａｃｉｌ）、フルチアセット－メチル、スルフェントラゾン若しくはチジアジミンのような環状イミド；又はＥＴ－７５１．ＪＶ ４８５若しくはニピラクロフェン等のピラゾール；Ｃ１２）光合成阻害剤、例えば、プロパニル、ピリデート若しくはピリダフォル；ベンタゾン等のベンゾチアジアジノン；ジニトロフェノール、例えば、ブロモフェノキシム、ジノセブ、ジノセブ－アセテート、ジノテルブ若しくはＤＮＯＣ；シペルクアット－塩化物、ジフェンゾクワット－メチルスルフェート、ジクワット若しくはパラコートジクロリド等のジピリジレン；クロルブロムロン、クロロトルロン、ジフェノクスロン（ｄｉｆｅｎｏｘｕｒｏｎ）、ジメフロン、ジウロン、エチジムロン、フェヌロン、フルオメツロン、イソプロツロンソ（ｉｓｏｐｒｏｔｕｒｏｎ）、イソウロン（ｉｓｏｕｒｏｎ）、リヌロン、メタベンズチアズロン、メタゾール、メトベンズロン、メトクスロン、モノリニュロン、ネブロン、シデュロン若しくはテブチウロン等の尿素；ブロモキシニル若しくはイオキシニル等のフェノール；クロリダゾン；アメトリン、アトラジン、シアナジン、デスメイン、ジメタメトリン、ヘキサジノン、プロメトン、プロメトリン、プロパジン、シマジン、シメトリン、テルブメトン、テルブトリン、テルブチラジン若しくはトリエタジン等のトリアジン；メタミトロン若しくはメトリブジン等のトリアジノン；ブロマシル、レナシル若しくはテルバシル等のウラシル；又はデスメジファム若しくはフェンメジファム等のビスカルバメート；Ｃ１３）相乗剤、例えば、トリジファン等のオキシラン；Ｃ１４）ＣＩＳ細胞壁合成阻害剤、例えば、イソキサベン又はジクロベニル；Ｃ１５）様々な他の除草剤、例えば、ダラポン等のジクロロプロピオン酸；エトフメセート等のジヒドロベンゾフラン；クロルフェナック（フェナック（ｆｅｎａｃ））等のフェニル酢酸；又はアジプロトリン、バルバン、ベンスリド、ベンズチアズロン、ベンゾフルオール、ブミナフォス、ブチダゾール、ブツロン、カフェンストロール、クロルブファム、クロルフェンプロップ－メチル、クロロクスロン、シンメチリン、クミルロン、シクルロン、シプラジン、シプラゾール、ジベンジルロン、ジプロペトリン、ダイムロン、エグリナジン－エチル、エンドタール、エチオジン、フルカバゾン、フルオルベントラニル、フルポキサム、イソカルバミド、イソプロパリン、カルブチレート、メフルイジド、モヌロン、ナプロップアミド、ナプロップアミド－Ｍ、ナプロップアニリド、ニトラリン、オキサシクロメフォン（ｏｘａｃｉｃｌｏｍｅｆｏｎｅ）、フェニソファム、ピペロホス、プロシアジン、プロフルアリン、ピリブチカルブ、セクブメトン、スルファレート（ＣＤＥＣ）、テルブカルブ、トリアジフラム、トリアゾフェナミド若しくはトリメツロン；又はそれらの環境適合性塩。
殺線虫剤又はバイオ殺線虫剤：ベノミル、クロエトカルブ、アルドキシカルブ、チルパート、ジアミダフォス、フェナミホス、カズサフォス、ジクロフェンチオン、エトプロホス、フェンスルホチオン、フォスチアゼート、ヘテロホス、イサミドホフ（ｉｓａｍｉｄｏｆｏｆ）、イサゾフォス、ホスホカルブ、チオナジン、イミシアフォス、メカルホン、アセトプロール、ベンクロチアズ、オキサミル、クロロピクリン、ダゾメット、フルエンスルホン、１，３－ジクロロプロペン（ｔｅｌｏｎｅ）、ジメチルジスルフィド、メタムナトリウム、メタムカリウム、メタム塩（すべてＭＩＴＣ生成）、臭化メチル、生物学的土壌改善物（例えば、マスタード種子、マスタード種子抽出物）、土壌の蒸気燻蒸、アリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、硫酸ジメチル、フルフラル（アルデヒド）、フルアザインドリジン（ＤＰＸ－Ｑ８Ｕ８０）、フルオピラム又はチオキサザフェン。
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株と化学線虫防除剤との混合物が好ましく、該化学線虫防除剤は、ベノミル、フェナミホス、カジュサフォス、エトプロホス、フォスチアゼート、クロロピクリン、ダゾメット、フルエンスルホン、オキサミル、１，３－ジクロロプロペン（テロン）、メタムナトリウム、メタムカリウム、メタム塩（すべてのＭＩＴＣジェネレータ）、臭化メチル、アリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、フルアザインドリジン（ＤＰＸ－Ｑ８Ｕ８０）、チオキサザフェン、フルオピラム、又はそれらのあらゆる混合物を含む。
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株と、カジュサフォス、エトプロホス、フォスチアゼート、フルエンスルホン、オキサミル、フルアザインドリジン（ＤＰＸ－Ｑ８Ｕ８０）、チオキサザフェン、又はそれらの混合物との混合物がより好ましい。本開示に係る組成物及び方法において、組成物は殺線虫剤であるカジュサフォスを含んでもよい。
本発明に係る適切な植物成長調節剤は、次の植物成長調節剤を含む。植物成長調節剤：Ｄ１）クロフィブリン酸、２，３，５－トリ－ヨード安息香酸等のアンチオーキシン；Ｄ２）４－ＣＰＡ、２，４－Ｄ、２，４－ＤＢ、２，４－ＤＥＰ、ジクロルプロップ、フェノプロップ、ＩＡＡ、ＩＢＡ、ナフタレンアセトアミド、α－ナフタレン酢酸、１－ナフトール、ナフトキシ酢酸、ナフテン酸カリウム、ナフテン酸ナトリウム、２，４，５－Ｔ等のオーキシン；Ｄ３）２ｉＰ、ベンジルアデニン、４－ヒドロキシフェンエチルアルコール、カイネチン、ゼアチン等のサイトカイニン；Ｄ４）カルシウムシアナミド、ジメチピン、エンドタール、エテホン、メルホス、メトクスロン、ペンタクロロフェノール、チジアズロン、トリブフォス等の枯葉剤；Ｄ５）アビグリシン、１－メチルシクロプロペン等のエチレン阻害剤；Ｄ６）ＡＣＣ、エタセラシル、エテホン、グリオキシム等のエチレン放出剤；Ｄ７）フェンリダゾン、マレイン酸ヒドラジド等のガメトシド；Ｄ８）ジベレリン、ジベレリン酸等のジベレリン；Ｄ９）アブシジン酸、アンシミドール、ブトラリン、カルバリル、クロルホニウム、クロルプロファム、ジケグラック、フルメトラリン、フルオリドアミド、フォサミン、グリホジン、イソピリモル、ジャスモン酸、マレイン酸ヒドラジド、メピコート、ピプロクタニル、プロヒドロジャスモン、プロファム、チアオジアン（ｔｉａｏｊｉｅａｎ）、２，３，５－トリ－ヨード安息香酸等の成長阻害剤；Ｄ１０）クロルフルレン、クロルフレノール、ジクロルフルレノール、フルレノール等のモルファクチン；Ｄ１１）クレルメコート、ダミノジド、フルルプリミドール、メフルイジド、パクロブトラゾール、テトシクラシス、ウニコナゾール等の成長抑制剤；Ｄ１２）ブラシノリド、ブラシノリド－エチル、ＤＣＰＴＡ、ホルクロルフェヌロン、ヒメキサゾール、プロスレル（ｐｒｏｓｕｌｅｒ）、トリアコンタノール等の成長刺激剤；Ｄ１３）バクメデシュ（ｂａｃｈｍｅｄｅｓｈ）、ベンゾフルオール（ｂｅｎｚｏｆｌｕｏｒ）、ブミナフォス、カルボン、塩化コリン、シオブチド（ｃｉｏｂｕｔｉｄｅ）、クロフェンセット、シアナミド、シクラニリド、シクロヘキシミド、シプロスルファミド、エポコレオン、エチクロゼート、エチレン、フフェンチオウレア（ｆｕｐｈｅｎｔｈｉｏｕｒｅａ）、フララン（ｆｕｒａｌａｎｅ）、ヘプトパルギル、ホロスルフ、イナベンフィド、カレタザン（ｋａｒｅｔａｚａｎ）、ヒ酸鉛、メタスルホカルブ、プロヘキサジオン、ピダノン、シントフェン、トリアペンテノール、トリネキサパック等の分類されていない植物成長調節剤。
本発明に係る化学的な製剤は、例えば、乳剤（ＥＣ）、懸濁剤（ＳＣ）、サスポエマルジョン剤（ＳＥ）、カプセル懸濁剤（ＣＳ）、水分散性粒剤（ＷＧ）、乳化性粒剤（ＥＧ）、油中水型エマルジョン剤（ＥＯ）、水中油型エマルジョン剤（ＥＷ）、マイクロエマルジョン剤（ＭＥ）、油分散剤（ＯＤ）、油混和性フロアブル剤（ＯＦ）、油混和性液剤（ＯＬ）、可溶性濃縮剤（ＳＬ）、発泡性（ＥＦ）懸濁液、超低体積懸濁剤（ＳＵ）、超低体積液剤（ＵＬ）、分散性濃縮剤（ＤＣ）、水和剤（ＷＰ）、実施の形態では植えるのと同時に置かれてもよい様々な大きさの顆粒（Ｇ）等、又は農薬的に許容されるアジュバントと組み合わせた任意の技術的に可能な製剤等の任意の適切な典型的な形態であってもよい。
実施の形態では、組成物は、約１×１０１１ＣＦＵ／ｇ以上の、０．５～９９重量％のＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物と、農学的に許容されるアジュバントと、を含む。少なくとも１つの実施の形態では、バチルス種を含む活性成分は、農学的組成物の０．５％から約９５重量％の間の範囲の総濃度で含まれ、バチルス種は、組成物全体の１、２、３、４若しくは５、７、８、又は１０重量％の下限から１０、１５、２０、２５、４０、５０、６０、７０、８０又は９０重量％の上限までから独立して選択される量で含まれる。他の実施の形態では、農学的に許容されるアジュバントは、組成物全体の約１％から約９９．５％、例えば１、２、３、４又は５重量％の下限から１０、１５、２０、２５、４０、５０、６０、７０、８０、９０又は９５重量％の上限で含まれる。
実施の形態では、アジュバントは、液体担体、固体担体、界面活性剤（サーファクタント）、粘度調整剤、増粘剤、レオロジー添加剤、構造化剤、防腐剤、殺生物剤又はバイオスタティック剤、不凍剤、結晶化阻害剤、懸濁化剤、染料、抗酸化剤、発泡剤、光吸収体、混合補助剤、消泡剤、錯化剤、中和剤又はｐＨ調整物質及び緩衝剤、防蝕剤、香料、湿潤剤、吸収増強剤、微量栄養素、可塑剤、流動促進剤、潤滑油、及び分散剤からなる群から選択される。
担体は、液体又は固体であってもよい。上記製剤で用いられるアジュバントは、界面活性物質、増粘剤等の粘度調整剤、防腐剤、殺生物剤又はバイオスタティック剤、不凍剤、結晶化阻害剤、懸濁化剤、染料、抗酸化剤、発泡剤、光吸収体、混合補助剤、消泡剤、錯化剤、中和又はｐＨ調整物質及び緩衝剤、防蝕剤、香料、湿潤剤、吸収増強剤、微量栄養素、可塑剤、流動促進剤、潤滑油、分散剤等で、液体及び固体肥料であってもよい。
実施の形態では、本発明に係る組成物は、例えば、懸濁剤（ＳＣ）、水和剤（ＷＰ）又は水分散性粒剤（ＷＧ）として製剤化されてもよい。他の製剤の種類は、スラリー処理のための水分散粉末（ＷＳ）、油分散剤（ＯＤ）、全面散布のための顆粒（ＧＲ）、カプセル懸濁剤（ＣＳ）、乳剤（ＥＣ）、水中油型エマルジョン剤（ＥＷ）、可溶性濃縮剤（ＳＬ）、ＣＳ及びＳＣの混合製剤（ＺＣ）、サスポエマルジョン剤（ＳＥ）としてのＳＣ及びＥＷの混合製剤、発泡性（ＥＦ）懸濁液、又はＣＳ及びＥＷの混合製剤（ＺＷ）等である。いくつかの実施の形態では、組成物は、植物、植物の一部、種子、又は土壌に乾燥製剤として適用され得る細粉、粉末又は顆粒として製剤化されてもよい（例えば、ピーナッツへの乾燥種子被覆又は土壌に取り込まれるための様々な大きさの細粉、粉末又は顆粒）。
液体担体は、水、石油エーテル、植物油、酸無水物、酢酸アミル、炭酸ブチレン、シクロヘキサン、シクロヘキサノール、ジアセトンアルコール、１，２－ジクロロプロパン、ジエタノールアミン、ジエチレングリコール、アビエチン酸ジエチレングリコール、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールエチルエーテル、ジエチレングリコールメチルエーテル、１，４－ジオキサン、ジプロピレングリコール、ジプロピレングリコールメチルエーテル、二安息香酸ジプロピレングリコール、ジプロキシトール、アルキルピロリドン、２－エチルヘキサノール、炭酸エチレン、１，１，１－トリクロロエタン、アルファ－ピネン、ｄ－リモネン、乳酸エチル、エチレングリコール、エチレングリコールブチルエーテル、エチレングリコールメチルエーテル、ガンマ－ブチロラクトン、グリセロール、酢酸グリセロール、二酢酸グリセロール、三酢酸グリセロール、ヘキサデカン、ヘキシレングリコール、酢酸イソボルニル、イオソクタン、イソホロン、ミリスチン酸イソプロピル、乳酸、ラウリルアミン、メシチルオキシド、メトキシプロパノール、ラウリン酸メチル、オクタン酸メチル、オレイン酸メチル、塩化メチレン、ｎ－ヘキサン、ｎ－オクチルアミン、オクタデカン酸、酢酸オクチルアミン、オレイン酸、オレイルアミン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピオン酸、乳酸プロピル、炭酸プロピレン、プロピレングリコール、プロピレングリコールメチルエーテル、リン酸トリエチル、トリエチレングリコール、キシレンスルホン酸、パラフィン、鉱油、トリクロロエチレン、ペルクロロエチレン、アミルアルコール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ヘキサノール、オクタノール等の高分子量アルコール、Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタンアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルデカンアミド、Ｎ－メチル－Ｎ－（２－プロピルヘプチル）－アセトアミド、Ｎ－メチル－Ｎ－（２－プロピルヘプチル）－ホルムアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドン等の液体アミド及びその類似物等の溶媒及び共溶媒を含む。好ましくは、液体担体は、防除の場所への適用後まで組成物において本質的に変化しないままの生物活性剤のようなものである。一般には、水が濃縮製剤を希釈するために選択される担体である。
適した固体担体は、例えば、スクロース等のモノ－炭水化物又はジ－炭水化物を含む炭水化物、マルトデキストリン又はペクチン等のオリゴ糖若しくは多糖、タルク、二酸化チタン、パイロフィライトクレイ、アタパルジャイトクレイ、珪藻土、シリカ（二酸化ケイ素）、石灰岩、ベントナイト、カルシウムモンモリロナイト、炭酸カルシウム等のナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム又はアンモニウムの酢酸塩、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、リン酸塩又は硫酸塩のような水溶性の塩、綿実の殻、小麦粉、大豆粉、軽石、木粉、細かいクルミ粉、リグニン及び類似の物質、酵母抽出物、魚粉、又はそれらの混合物等である。重要な固体担体は、マルトデキストリン、シリカ、炭酸カルシウム又はそれらの任意の混合物等である。
界面活性剤を含む界面活性物質は、分散剤及び乳化剤、粘度強化剤、溶媒及び他のアジュバントが独立して最終製剤の約０．１重量％から約２５重量％の間で含まれてもよい。
組成物は、市販もされている本技術分野で知られたかなり幅広い種類の物質由来の界面活性物質（界面活性剤、分散剤及び乳化剤）を含んでもよい。界面活性物質（本明細書では通常、界面活性剤として記載される）は、アニオン性の、カチオン性の、非イオン性のポリマーであってもよく、それらは界面活性剤、分散剤、乳化剤、湿潤剤又は懸濁化剤として、又は他の目的のために用いられてもよい。
界面活性剤は、カチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、イオン性界面活性剤、及び両性界面活性剤等のいくつかの種類に属する。本発明によれば、界面活性剤は、製剤中で生物学的活性成分を分散させるため、又は適用のためのタンク混合で有用な任意の界面活性剤又は２種以上の界面活性剤の組み合わせであってもよい。本発明の組成物における界面活性剤の量は、約１から約１５％、又は約１から約１０％、好ましくは約３から約８％、より好ましくは、約５から約７％ｗ／ｗの範囲であってよい。
好ましい界面活性剤の例は、カチオン性、非イオン性、アニオン性及び／又は両性の界面活性剤を含む。
本発明に適した非イオン性界面活性は、エトキシ化直鎖アルコール、エトキシ化アルキルフェノール、アルキルＥＯ／ＰＯ共重合体、ポリアルキレングリコールモノブチルエーテルエトキシ化脂肪酸／油、ラウリン酸ソルビタン、ポリソルベート、オレイン酸ソルビタン、エトキシ化脂肪酸アルコール、又はアルキルフェノール、アルカノールアミド又はアルキロアミド（例えば、ジエタノールアミド、ラウリン酸モノイソプロパノールアミド、及びエトキシ化ミリスタミド等）、キシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル（例えばアルキルアリールポリグリコールエーテル等）、例えばノニルフェノールエトキシレート等のアルキルフェノール／アルキレンオキシド添加生成物、例えばトリデシルアルコールエトキシレート等のアルコール／アルキレンオキシド添加生成物を含む。
アニオン性界面活性は、アルキルスルホネート、アルキルアリールスルホネート及びアリールスルホネート又はその塩（例として、ラウリルサルコシネート、アルキルベンゼンスルホネート、ドデシルベンゼンスルホネート、例えばジブチルナフタレンスルホネート等のアルキルナフタレンスルホネート、又はＣ１４－１６オレフィンスルホネートのナトリウム塩、カリウム塩又はカルシウム塩）、アルキルスルホネート、アルキルアリールスルホネート及びアリールスルホネート又はその塩（例として、トリデデススルフェート、ラウリルスルフェート、デシルスルフェート、及びジエタノールアンモニウムラウリルスルフェートのナトリウム塩、カリウム塩又はカルシウム塩）、タンパク質加水分解物、ポリカルボン酸（例として、アンモニウムラウリルエーテルカルボキシレート）、オレフィンスルホン酸（例として、アルファオレフィンスルホネートナトリウム）、サルコシネート（例として、アンモニウムシクロヘキシルパルミトイルタウリネート）、コハク酸（例として、Ｎ－オクタデシルスルホスクシン二ナトリウム）、リン誘導体（例として、リン酸エステル及びそれらと同等の塩）を含む。
カチオン性界面活性剤は、塩化アルキルベンジルトリメチルアンモニウム、ラウリル硫酸アンモニウム及び酸化ラウラミン等である。
いくつかの実施の形態では、界面活性は、種子に、又は植えると同時に畝間に適用するために製剤を発泡させることができる発泡剤として用いられてもよい。発泡組成物は、任意に水で希釈され、複数のガラスビーズのような発泡媒体を備える発泡チャンバーで、例えば空気等の加圧ガスと混合される。
適切な発泡剤は、アルカノールアミド又はアルキロアミド（例えば、コカミドジエタノールアミド、ラウリン酸モノイソプロパノールアミド、及びエトキシル化ミリスタミド）、キシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル（例えば、アルキルアリールポリグリコールエーテル）及びフルオロカーボン（例えば、エトキシル化ポリフッ素化アルコール）等の非イオン性界面活性剤；アルキルスルホネート、アルキルアリールスルホネート及びアリールスルホネート（例えば、ラウリルサルコシン酸ナトリウム及び例えばアルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム）、アルキルスルフェート、アルキルアリールスルフェート及びアリールスルフェート、タンパク質加水分解物、ポリカルボン酸誘導体（例えば、アンモニウムラウリルエーテルカルボキシレート）、オレフィンスルホネート（例えば、アルファオレフィンスルホン酸ナトリウム）、サルコシネート（例えば、アンモニウムシクロヘキシルパルミトイルタウリネート）、スクシネート（例えば、Ｎ－オクタデシルスルホスクシンアミド酸二ナトリウム）、リン誘導体（例えば、リン酸エステル及びその等価塩）を含むアニオン性界面活性剤；アルキルベンジルトリメチルアンモニウムクロリドを含むカチオン性界面活性剤；並びにベタインを含む両性界面活性剤であってもよい。特に好ましい発泡剤は、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム（例えばＢｉｏ－Ｓｏｆｔ（登録商標） Ｄ－４０）、Ｃ１４－１６オレフィンスルホン酸ナトリウム（例えばＢｉｏｔｅｒｇｅ（登録商標） ＡＳ－４０）、ラウラミンオキシド（例えばＡｍｍｏｎｙｘ（登録商標） ＤＯ、Ａｍｍｏｎｙｘ（登録商標） ＬＯ）、アンモニウムラウリルスルフェート（例えば、Ｓｔｅｏｌ（登録商標））、硫酸ナトリウム（Ｃｅｄｅｐａｌ（登録商標） ＴＤ－４０７）及びアルキルスルフェート（例えばＰｏｌｙｓｔｅｐ（登録商標） Ｂ－２５）である。製剤中の発泡剤の総濃度は、使用される発泡剤に依存し、濃縮発泡製剤の約０．１％と約５０％の間、好ましくは約０．３％と約３０％の間、より好ましくは約５％と２５％の間、さらにより好ましくは約１７％と約２３％の間である。
重要な実施の形態は、製剤によって発生した泡の体積が、約４５分後かそれ以後に２５％（又はそれ未満）だけ減少する。他の界面活性物質は、ステアリン酸ナトリウム等のせっけん；ジ（２－エチルヘキシル）スルホスクシン酸ナトリウム等のスルホスクシン酸塩のジアルキルエステル；ソルビトールオレエート等のソルビトールエステル；ラウリルトリメチルアンモニウムクロリド等の第４級アミン、ポリエチレングリコールステアレート等の脂肪酸のポリエチレングリコールエステル；エチレンオキシド及びプロピレンオキシドのブロック共重合体；及びモノアルキルホスフェートエステル及びジアルキルホスフェートエステル等の塩である。
また、シリコーン界面活性剤、特に例えばＳｉｌｗｅｔ Ｌ－７７（登録商標）として市販されているポリアルキル－オキシド－修飾ヘプタメチルトリロキサンも適しており、ペルフルオリネート化界面活性剤も適している。
上記のいくつかのさらに具体的な種類の好ましい界面活性剤は、非イオン性の直鎖又は分岐アルコールエトキシレート界面活性剤、アニン性リン酸エステル界面活性剤（たまに“リン酸エステル”界面活性剤という）、及びカチオン性エトキシ化獣脂アミン界面活性等である。
重要な界面活性（分散剤）は、好ましくはＣ８－Ｃ１４アルキル基を有する少なくとも１種のアルキルアルキルポリグリコシドを含む。ＢＡＳＦ社（Ｃｏｇｎｉｓ）のＡｇｎｉｑｕｅ（登録商標）製品が代表的である。１つの実施の形態では、アルキルｄ－グリコピラノシド界面活性剤は、Ｃ８－Ｃ１４アルキルｄ－グルコピラノシド、例えばＡｇｎｉｑｕｅ（登録商標） ＰＧ８１０５－Ｇの混合物を含む。他の実施の形態では、アルキルｄ－グリコピラノシド界面活性剤は、Ｃ９－Ｃ１１アルキルｄ－グルコピラノシドの混合物を含む。好ましい製品は、約１．６の重合度と約１３．１の親水性親油性バランス（ＨＬＢ）とを有する、Ｃ９－Ｃ１１アルキルｄ－グルコピラノシドの混合物であるＡｇｎｉｑｕｅ（登録商標） ＰＧ９１１６である。
リン酸エステル界面活性剤（分散剤）は、アルコール、エトキシ化アルコール又はエトキシ化フェノールのリン酸エステルを含んでもよい。それらは遊離酸形態であっても、又はナトリウム塩、カリウム塩又はアンモニウム塩のように中和されていてもよい。Ａｓｈｌａｎｄ社のＤｅｘｔｒｏｌ（登録商標）製品が代表的で、例えばＤｅｘｔｒｏｌ（登録商標） ＯＣ－１８０である。リン酸エステルは、好ましくは、ノニルフェノールリン酸エステル及びトリデシルアルコールエトキシ化リン酸カリウム塩から選択される。
他の態様では、組成物は、沈殿又は沈降に対して、例えば懸濁剤又は油分散剤のように製剤を安定化させる増粘剤、粘度調整剤、レオロジー添加剤又は構造化剤を含んでもよい。適した増粘剤は、コメ、でんぷん、アラビアゴム、トラガカントゴム、グァー粉末、ブリティッシュガム、でんぷんエーテル及びでんぷんエステル、ゴム樹脂、ガラクトマンナン、マグネシウムアルミニウムケイ酸塩、キサンタンガム、カラギナン、セルロース誘導体、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アルギネート及びそれらの組み合わせである。他の公知の市販製品は、Ｌａｔｔｉｃｅ ＮＴＣ５０、Ｌａｔｔｉｃｅ ＮＴＣ６０、メトセル、粘土、及びビーガムシリカを含んでもよい。
他の実施の形態では、本発明に係る組成物は、例えばグリセリン、エチレングリコール、尿素、塩化カルシウム、硝酸ナトリウム、塩化マグネシウム及び硫酸アンモニウム等の不凍剤を含んでもよい。
好ましい防腐剤は、限定されないが、Ｃ１２－Ｃ１５アルキルベンゾエート、アルキルｐ－ヒドロキシベンゾエート、アロエベラ抽出物、アスコルビン酸、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、Ｃ９－Ｃ１５アルコールの安息香酸エステル、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロキノン、キャスターオイル、セチルアルコール、クロロクレゾール、クエン酸、ココアバター、ココナッツオイル、ジアゾリジニル尿素、アジピン酸ジイソプロピル、ジメチルポリシロキサン、ＤＭＤＭヒダントイン、エタノール、エチレンジアミン四酢酸、脂肪酸、脂肪アルコール、ヘキサデシルアルコール、ヒドロキシベンゾエートエステル、ヨードプロピニルブチルカーバメート、イソノニルイソノナノエート、ホホバ油、ラノリンオイル、鉱油、オレイン酸、オリーブオイル、パラベン、ポリエーテル、ポリオキシプロピレンブチルエーテル、ポリオキシプロピレンセチルエーテル、ソルビン酸カリウム、没食子酸プロピル、シリコーン油、プロピオン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ソルビン酸、ステアリン脂肪酸、二酸化硫黄、ビタミンＥ、ビタミンＥ酢酸塩並びにそれらの誘導体、エステル、塩及び混合物等である。好ましい防腐剤は、ｏ－フェニルフェネートナトリウム、５－クロロ－２－メチル－４－イソチアゾリン－３－オン、２－メチル－４－イソチアリゾン－３－オン、及び１，２－ベンイソチアゾリン－３－オン等である。
消泡剤、例えばＸｉａｍｅｔｅｒ ＡＦＥ－１００、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ ＡＦｓ、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ１５２０、１５３０又は１５４０等も、本願の請求項に係る製剤に用いられてよい。
実施の形態では、組成物は、水と、少なくとも１種の界面活性物質と、１種以上の追加のアジュバントと、を含む液体懸濁液であってもよい。実施の形態では、１種以上のアジュバントが増粘剤、粘度調整剤、構造化剤又はレオロジー添加剤、溶媒、防腐剤、不凍剤、及び消泡剤から選択される。通常、懸濁液は、組成物の送達前に水でさらに希釈される。実施の形態では、液体組成物は、０．５から２０重量％のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物と、１から５重量％の１種以上の界面活性物質と、組成物の約１重量％まででそれぞれ含まれる少なくとも１種の増粘剤、溶媒、防腐剤、不凍剤又は消泡剤と、を含む懸濁液であってもよい。
他の実施の形態では、組成物は、植物油等の油及び少なくとも１種の界面活性物質に分散した固体活性成分と、１種以上の追加のアジュバントと、を含む液体の油分散であってもよい。実施の形態では、１種以上のアジュバントが増粘剤、粘度調整剤、構造化剤又はレオロジー添加剤、溶媒、防腐剤、不凍剤、消泡剤及び類似物から選択される。通常、油分散は、組成物の送達前に水でさらに希釈される。実施の形態では、液体組成物は、０．５から２０重量％のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物と、１から１０重量％の１種以上の界面活性物質と、組成物の約５重量％まででそれぞれ含まれる少なくとも１種の増粘剤、粘度調整剤、構造化剤、レオロジー添加物、溶媒、防腐剤、不凍剤又は消泡剤と、を含む油分散であってもよい。
実施の形態では、組成物は、細粉、粉末、顆粒、乾燥可溶性粉末、塗布可能な顆粒、又は乾燥可溶性顆粒の形態で、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を約１．０×１０８ＣＦＵ／ｇから約５×１０１３ＣＦＵ／ｇの量で含んでもよい。実施の形態では、組成物は、単糖、二糖、オリゴ糖又は多糖、タルク、二酸化チタン、パイロフィライトクレイ、アタパルジャイトクレイ、珪藻土、シリカ、石灰岩、ベントナイト、カルシウムモンモリロナイト、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム又はアンモニウムの酢酸塩、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、リン酸塩又は硫酸塩、綿実の殻、小麦粉、大豆粉、軽石、木粉、細かいナッツ（例えばピーナッツ又はクルミ）殻、リグニン、酵母抽出物、魚粉、又はそれらの混合物からなる群から選択される固体担体を含んでもよい。
実施の形態では、組成物は、約１×１０１１ＣＦＵ／ｇ以上の、５～４０％の生物学的に純粋な培養物と、マルトデキストリン、シリカ、炭酸カルシウム、又はそれらのあらゆる混合物と、を含む。実施の形態では、組成物は、５～１５％のマルトデキストリンを含む。
実施の形態では、組成物は、重量％で、５～４０％の、約１×１０１１ＣＦＵ／ｇ以上のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物と、５～１５％のマルトデキストリンと、３５～４５％の炭酸カルシウムと、５～１５％のシリカと、を含んでもよい。実施の形態では、組成物は、可溶性粉末製剤であってもよい。
実施の形態では、組成物は、重量％で、約４０％の、約１×１０１１ＣＦＵ／ｇ以上のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物と、１０％のマルトデキストリンと、４０％の炭酸カルシウムと、１０％のシリカと、を含む可溶性粉末製剤であってよい。
実施の形態では、組成物は、植物真菌性病原体感染に対する保護をもたらすための、又は植物真菌性病原体感染を防除するための、植物の種子処理又は畝間への適用のいずれかに有用である。種子処理に関して、組成物の溶液又は懸濁液は、標準の種子処理方法を用いて種子に適用される。組成物は、非処理の種子又は本明細書に記載されたように少なくとも１種の追加の作物保護剤で処理された種子に適用されてもよい。また、組成物は種子処理又は畝間への適用のための追加の作物保護剤と混合されてもよい。いくつかの実施の形態では、組成物は、保護される植物の葉枝に適用されてもよく、任意に追加の作物保護剤と混合される。
組成物と方法に係るいくつかの実施の形態では、組成物は、植物の成長に有益であること及び／又は植物有害生物に対する植物の保護をもたらすことに適した量の、本明細書に記載された殺虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺細菌剤、除草剤、植物抽出物、植物成長調整物質、又は肥料等の追加の農薬の１種又は混合物をさらに含む。追加の農薬は、微生物剤、生物剤、又は化学剤を含んでもよい。
組成物と方法に係るいくつかの実施の形態では、組成物は、液体肥料と混合可能に製剤化され得る。
液体肥料と混合可能な製剤は、水和したアルミニウム－マグネシウムケイ酸塩と少なくとも１種の分散剤を含み得る。用語“液体肥料と混合可能な製剤において”は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用され、液体製剤で植物に送達するための肥料との混合を可能にするために、製剤が水溶液中に溶解、分散又は乳化できること意味することが意図される。
重要な実施の形態では、液体肥料と混合可能な製剤は、ビフェントリンを含んでもよく、例えば組成物は、ビフェントリンと、水和したアルミニウム－マグネシウムケイ酸塩と、スクロースエステル、リグノスルホネート、アルキルポリグリコシド、ナフタリンスルホン酸ホルムアルデヒド縮合物及びリン酸エステルから選択される少なくとも１種の分散剤と、を含む。ビフェントリンは、組成物におけるすべての成分の総重量に対して、好ましくは１．０重量％から３５重量％、より好ましくは１５％から２５％重量％の濃度で含まれる。ビフェントリン殺虫剤組成物は、０．１ｇ／ｍｌから０．２ｇ／ｍｌの範囲の濃度で液体製剤に含まれ得る。ビフェントリン殺虫剤は、０．１７ｇ／ｍｌの濃度で液体組成物に含まれてよい。分散剤は、好ましくは、組成物におけるすべての成分の総重量に対して、約０．０２重量％から約２０重量％までの総濃度で含まれ得る。いくつかの実施の形態では、水和したアルミニウム－マグネシウムケイ酸塩は、モンモリロナイト及びアタパルジャイトからなる群から選択されてもよい。いくつかの実施の形態では、リン酸エステルは、ノニルフェノールリン酸エステル及びトリデシルアルコールエトキシ化リン酸カリウム塩から選択される。
分散剤は、好ましくは、組成物におけるすべての成分の総重量に対して、約０．０２重量％から約２０重量％までの総濃度で含まれ得る。
いくつかの実施の形態では、水和したアルミニウム－マグネシウムケイ酸塩は、モンモリロナイト及びアタパルジャイトからなる群から選択されてもよい。
いくつかの実施の形態では、リン酸エステルは、ノニルフェノールリン酸エステル及びトリデシルアルコールエトキシ化リン酸カリウム塩から選択される。
他の実施の形態は、少なくとも１種の不凍剤、消泡剤及び殺生物剤をさらに含む。
他の態様では、組成物は、本明細書に記載された担体及びアジュバントとともに有効量で生物学的活性成分と組み合わせるステップに続く方法で調製されてよい。製剤化された組成物は、細かく分割された固体、顆粒又は分散の形態で組成物を得るために、例えば製剤成分と生物活性剤を混合することで調製され得る。また、活性成分は他の成分、例えば細かく分割された固体、鉱油、植物又は動物由来の油、植物又は動物由来の変性油、有機溶媒、水、界面活性物質又はそれらの組み合わせとともに製剤化され得る。
いくつかの実施の形態では、製剤の成分は、乾燥混合されてもよく、あるいは固体及び液体成分がホモジナイザー又は他の適切な混合容器で一緒に混ぜられてもよい。均質化による成分の単純な混合が任意の破砕の形態より好ましい。他の実施の形態では、混合物は、約１から約２５０ミクロンの適した粒径が得られるまで製粉工程、例えば乾式粉砕及び湿式粉砕等にさらに供されてもよい。組成物は、２５０未満、１００未満又は好ましくは５０ミクロン未満の粒径を有する。好ましい実施の形態では、混合物は、９０％の粒径（Ｄ９０）が約５０ミクロン未満になるまで均質化又は粉砕される。
１つの実施の形態は、ｉ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体と、ｉｉ）ＳＣ製剤のためのアジュバントからなる群から選択される少なくとも１種の製剤成分と、ＷＰ製剤のためのアジュバントと、ＷＧ製剤のためのアジュバントと、を含む組成物を対象とする。
他の実施の形態では、組成物はＳＣの形態であって、それは、例えば水と少なくとも１種の界面活性剤と、増粘剤、溶媒、防腐剤、不凍剤、ｐＨ調整剤及び消泡剤から選択される１種以上の追加のアジュバントと、を含むものの形態である。
実施の形態では、ＳＣは、１から２０重量％のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体と、１から５重量％の１種以上の界面活性剤と、任意で少なくとも１種の増粘剤、溶媒、防腐剤、不凍剤、又は消泡剤と、水と、を含む。任意の増粘剤、溶媒、防腐剤、不凍剤、又は消泡剤は、それぞれ独立してＳＣ製剤の約１重量％までで含まれる。ＳＣは、すべての他の成分に対して組成物全体で１００重量％（ｑｓ）になるように補う量の水を含む。
組成物は、固体の形態、例えば細粉、粉末、顆粒、ＷＰ又はＷＧ製剤であってもよい。これら製剤は、少なくとも１種の上述の固体担体を含む。実施の形態では、ＷＰ又はＷＧ製剤が約１から約５０重量％、例えば１から１０、５から１０、５から５０、７から５０、又は１０から５０重量％のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体と、マルトデキストリン、炭酸カルシウム及びシリカからなる群から選択される少なくとも１種の固体担体と、を含む。可溶性顆粒製剤は可溶性粉末製剤に類似するが、例えば粉末を任意に追加される分散剤とともに水に希釈し、凝集、噴霧乾燥又は噴出によって顆粒を形成することで粉末はより大きい粒に形成される点で異なる。
実施の形態では、組成物は、２から２０重量％のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体と、約８０から約９０重量％のマルトデキストリンと、約０．５から約２重量％のシリカと、を含む。
他の実施の形態では、組成物は、５から６０％（例えば４０％）のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体と、約３０から約５０（例えば４０％）重量％のマルトデキストリンと、約１０から２０（例えば１６％）重量％の炭酸カルシウムと、約０．５から約５（例えば４％）重量％のシリカと、を含む。
他の実施の形態では、組成物は、重量％で、
５から５０％（例えば４０％）のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体と、
５から１５％（例えば１０％）のマルトデキストリンと、
３５から４５％（例えば４０％）の炭酸カルシウムと、
５から１５％（例えば１０％）のシリカと、
を含有する可溶性粉末又は可溶性顆粒製剤を含む。
組成物は、植物の種子処理又は畝間への適用のいずれかに有用である。種子の処理に関しては、組成物の溶液、スラリー、練り物、ゲル又は湿った固体が標準の種子処理方法を用いて種子に適用され得る。組成物は、非処理の種子又は本明細書に記載されたように少なくとも１種の追加の作物保護剤で処理された種子に適用されてもよい。また、組成物は種子処理又は畝間への適用のための追加の作物保護剤と混合されてもよい。
畝間への適用は、畝間、好ましくは、植える際に農作物の種子付近の土壌を処理し、製剤を土壌に組み入れることを含む。畝間への適用は液体又は固体製剤を含んでもよい。いくつかの実施の形態では、畝間への適用は、泡で組成物に適用することを含む。
実施の形態では、製剤化された組成物は、使用前に希釈される濃縮物の形態であってもよいが、すぐに使える製剤が製造されてもよい。市販製品は好ましくは濃縮物として製剤化されるが、利用者は通常は土壌又は植物への適用のために希釈製剤を使用する。この希釈物が例えば、水、液体肥料、微量栄養素、生物有機体、油又は溶媒で製造されてもよい。
実施の形態では、製剤化された組成物は、植物又は動物由来の油、鉱油、当該油又は当該油の混合物のアルキルエステル及び当該油の誘導体を含む添加剤を追加で含んでもよい。本発明に係る組成物における油添加剤の量は、一般に噴霧混合物において０．０１から１０％である。例えば、油添加物は、噴霧混合物が調製された後、所望の濃度で噴霧タンクに加えられる。実施の形態では、油添加物は、鉱油又は植物由来の油、例えば大豆油、菜種油、オリーブ油又はヒマワリ油、乳化野菜油、野菜由来の油のアルキルエステル、例えばメチル誘導体、又は動物由来の油、例えば魚油又は牛脂を含み得る。
以下の実施例は、本開示の主題の代表的な実施の形態を実行するために当業者に指針を提供するために包含される。本発明の観点及び本分野の通常の技術レベルから、以下の実施例が例示のみを意図し、本開示の主題の範囲から逸脱せずに多数の変更、改良及び修正が可能であることを理解できる。
実施例１
配列解析を介した細菌分離株バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の同定
ＲＴＩ５４５として本実施例で特定される植物関連細菌株がノースカロライナ州におけるイネ科ヒロハウシノケグサ（ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ）の周囲の根圏土壌から単離された。ＲＴＩ５４５株のゲノムの配列が決定され、ＲＴＩ５４５株の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の配列（配列番号１）及びｒｐｏＢ遺伝子の配列（配列番号２）がＢＬＡＳＴを用いてＮＣＢＩ及びＲＤＰデータベースにおける他の既知の細菌株のそれらと比較された。これはバチルス・セレウス／チューリンゲンシス／アンシラシス分岐群の中にＲＴＩ５４５株を位置づけた。さらに、ＲＴＩ５４５株と関連するバチルス属の系統発生解析がｒｐｏＢ遺伝子に関してブートストラップ合意樹（１０００回反復）を用いて行われた。ｒｐｏＢ遺伝子に関する合意樹が図２に示される。図２に示されるように、ＲＴＩ５４５株は、バチルス・セレウス／チューリンゲンシス／アンシラシス分岐群において独立した枝を形成する。ＤＮＡレベルでのｒｐｏＢ遺伝子に関する配列の違いは、ＲＴＩ５４５がバチルス・セレウス／チューリンゲンシス／アンシラシス分岐群の中に入る新しい株であることを示している。さらなる配列解析によって、ＲＴＩ５４５株がＢ．チューリンゲンシス株でよく見られる結晶タンパク質（ｃｒｙ遺伝子）に関する遺伝子を欠くことが明らかになった。
さらに、ＭＵＭｍｅｒ－及びＢＬＡＳＴｎ－をベースとする平均ヌクレオチド同一性（ＡＮＩ）計算（Ｒｉｃｈｔｅｒ Ｍ，＆ Ｒｏｓｓｅｌｌｏ－Ｍｏｒａ Ｒ（２００９）Ｓｈｉｆｔｉｎｇ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｇｏｌｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０６（４５）：１９１２６－３１）及びＵＮＩＰＥＰＴ解析（Ｍｅｓｕｅｒｅ，Ｂ．，Ｄｅｂｙｓｅｒ，Ｇ．，Ａｅｒｔｓ，Ｍ．，Ｄｅｖｒｅｅｓｅ，Ｂ．，Ｖａｎｄａｍｍｅ，Ｐ． ａｎｄ Ｄａｗｙｎｄｔ，Ｐ．（２０１５），Ｔｈｅ Ｕｎｉｐｅｐｔ ｍｅｔａｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｐｉｐｅｌｉｎｅ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，１５：１４３７-１４４２．ｄｏｉ：１０．１００２／ｐｍｉｃ．２０１４００３６１）の両方を用いてバチルス属の関連する近い株とＲＴＩ５４５株とを比較するために、全ゲノム配列解析が行われ、その系統発生的分類が確認された。ＭＵＭｍｅｒ及びＢＬＡＳＴｎをベースとするＡＮＩ計算の結果が下の表１に示されている。ＡＮＩ及びＵＮＩＰＥＰＴ（データを示さない）両方の解析によって、Ｂ．チューリンゲンシス及びＢ．セレウス双方として示される株の公知の配列とＲＴＩ５４５との間にかなりの程度の配列類似性が明らかとなった。認められた基準株に対して最も高い配列類似性は、認められた基準株Ｂ．チューリンゲンシスＢｅｒｌｉｎｅｒ ＡＴＣＣ１０７９２に対してであった。さらに、全ゲノム配列における以前から公知のそれらとの違いは、ＲＴＩ５４５がバチルス・セレウス／チューリンゲンシス／アンシラシス分岐群に入る新たなバチルス・チューリンゲンシス株であることを示している。
Figure 0007086060000001
ＲＴＩ５４５の株は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約に従って、米国バージニア州マナッサスのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）に２０１５年５月１２日に寄託され、特許受託番号ＰＴＡ－１２２１６１を有する。
ＲＴＩ５４５ ゲノム１６Ｓ ｒＤＮＡ（配列番号１）
ＡＧＡＡＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＡＧＣＣＧＣＡＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＣＡＡＴＣＡＴＣＴＧＴＣＣＣＡＣＣＴＴＡＧＧＣＧＧＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＡＡＡＧＧＴＴＡＣＣＣＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＧＧＧＴＧＴＴＡＣＡＡＡＣＴＣＴＣＧＴＧＧＴＧＴＧＡＣＧＧＧＣＧＧＴＧＴＧＴＡＣＡＡＧＧＣＣＣＧＧＧＡＡＣＧＴＡＴＴＣＡＣＣＧＣＧＧＣＡＴＧＣＴＧＡＴＣＣＧＣＧＡＴＴＡＣＴＡＧＣＧＡＴＴＣＣＡＧＣＴＴＣＡＴＧＴＡＧＧＣＧＡＧＴＴＧＣＡＧＣＣＴＡＣＡＡＴＣＣＧＡＡＣＴＧＡＧＡＡＣＧＧＴＴＴＴＡＴＧＡＧＡＴＴＡＧＣＴＣＣＡＣＣＴＣＧＣＧＧＴＣＴＴＧＣＡＧＣＴＣＴＴＴＧＴＡＣＣＧＴＣＣＡＴＴＧＴＡＧＣＡＣＧＴＧＴＧＴＡＧＣＣＣＡＧＧＴＣＡＴＡＡＧＧＧＧＣＡＴＧＡＴＧＡＴＴＴＧＡＣＧＴＣＡＴＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＣＣＧＧＴＴＴＧＴＣＡＣＣＧＧＣＡＧＴＣＡＣＣＴＴＡＧＡＧＴＧＣＣＣＡＡＣＴＴＡＡＴＧＡＴＧＧＣＡＡＣＴＡＡＧＡＴＣＡＡＧＧＧＴＴＧＣＧＣＴＣＧＴＴＧＣＧＧＧＡＣＴＴＡＡＣＣＣＡＡＣＡＴＣＴＣＡＣＧＡＣＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＧＡＣＡＡＣＣＡＴＧＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＴＧＣＴＣＣＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＣＣＣＴＡＴＣＴＣＴＡＧＧＧＴＴＴＴＣＡＧＡＧＧＡＴＧＴＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＣＴＴＣＧＣＧＴＴＧＣＴＴＣＧＡＡＴＴＡＡＡＣＣＡＣＡＴＧＣＴＣＣＡＣＣＧＣＴＴＧＴＧＣＧＧＧＣＣＣＣＣＧＴＣＡＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＧＴＴＴＣＡＧＣＣＴＴＧＣＧＧＣＣＧＴＡＣＴＣＣＣＣＡＧＧＣＧＧＡＧＴＧＣＴＴＡＡＴＧＣＧＴＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＡＣＴＡＡＡＧＧＧＣＧＧＡＡＡＣＣＣＴＣＴＡＡＣＡＣＴＴＡＧＣＡＣＴＣＡＴＣＧＴＴＴＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＣＴＡＣＣＡＧＧＧＴＡＴＣＴＡＡＴＣＣＴＧＴＴＴＧＣＴＣＣＣＣＡＣＧＣＴＴＴＣＧＣＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＣＡＧＴＴＡＣＡＧＡＣＣＡＧＡＡＡＧＴＣＧＣＣＴＴＣＧＣＣＡＣＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＣＣＡＴＡＴＣＴＣＴＡＣＧＣＡＴＴＴＣＡＣＣＧＣＴＡＣＡＣＡＴＧＧＡＡＴＴＣＣＡＣＴＴＴＣＣＴＣＴＴＣＴＧＣＡＣＴＣＡＡＧＴＣＴＣＣＣＡＧＴＴＴＣＣＡＡＴＧＡＣＣＣＴＣＣＡＣＧＧＴＴＧＡＧＣＣＧＴＧＧＧＣＴＴＴＣＡＣＡＴＣＡＧＡＣＴＴＡＡＧＡＡＡＣＣＡＣＣＴＧＣＧＣＧＣＧＣＴＴＴＡＣＧＣＣＣＡＡＴＡＡＴＴＣＣＧＧＡＴＡＡＣＧＣＴＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＣＧＴＡＧＴＴＡＧＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＣＴＧＧＴＴＡＧＧＴＡＣＣＧＴＣＡＡＧＧＴＧＣＣＡＧＣＴＴＡＴＴＣＡＡＣＴＡＧＣＡＣＴＴＧＴＴＣＴＴＣＣＣＴＡＡＣＡＡＣＡＧＡＧＴＴＴＴＡＣＧＡＣＣＣＧＡＡＡＧＣＣＴＴＣＡＴＣＡＣＴＣＡＣＧＣＧＧＣＧＴＴＧＣＴＣＣＧＴＣＡＧＡＣＴＴＴＣＧＴＣＣＡＴＴＧＣＧＧＡＡＧＡＴＴＣＣＣＴＡＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＧＴＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＣＣＧＴＧＴＣＴＣＡＧＴＣＣＣＡＧＴＧＴＧＧＣＣＧＡＴＣＡＣＣＣＴＣＴＣＡＧＧＴＣＧＧＣＴＡＣＧＣＡＴＣＧＴＴＧＣＣＴＴＧＧＴＧＡＧＣＣＧＴＴＡＣＣＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＧＣＴＡＡＴＧＣＧＡＣＧＣＧＧＧＴＣＣＡＴＣＣＡＴＡＡＧＴＧＡＣＡＧＣＣＧＡＡＧＣＣＧＣＣＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＧＡＡＣＣＡＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＡＡＴＧＴＴＡＴＣＣＧＧＴＡＴＴＡＧＣＣＣＣＧＧＴＴＴＣＣＣＧＧＡＧＴＴＡＴＣＣＣＡＧＴＣＴＴＡＴＧＧＧＣＡＧＧＴＴＡＣＣＣＡＣＧＴＧＴＴＡＣＴＣＡＣＣＣＧＴＣＣＧＣＣＧＣＴＡＡＣＴＴＣＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＧＣＴＣＴＣＡＡＴＣＣＡＴＴＣＧＣＴＣＧＡＣＴＴＧＣＡＴＧＴＡＴＴＡＧＧＣＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＴＣＡＡＡＣ
ＲＴＩ５４５ ｒｐｏＢ遺伝子（配列番号２）
ＴＴＧＡＣＡＧＧＴＣＡＡＣＴＡＧＴＴＣＡＡＴＡＣＧＧＡＣＧＣＣＡＣＣＧＣＣＡＡＣＧＡＡＧＡＡＧＴＴＡＴＧＣＣＣＧＴＡＴＴＡＧＴＧＡＡＧＴＡＴＴＡＧＡＧＴＴＡＣＣＡＡＡＴＣＴＴＡＴＣＧＡＡＡＴＴＣＡＡＡＣＣＴＣＴＴＣＴＴＡＴＣＡＧＴＧＧＴＴＴＣＴＴＧＡＴＧＡＧＧＧＴＴＴＧＣＧＡＧＡＡＡＴＧＴＴＣＣＡＡＧＡＣＡＴＴＴＣＴＣＣＧＡＴＴＧＡＡＧＡＣＴＴＴＡＣＧＧＧＡＡＡＴＣＴＡＴＣＧＣＴＴＧＡＡＴＴＴＡＴＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＴＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＡＡＡＴＡＣＴＣＴＧＴＡＧＡＣＧＡＡＴＧＣＡＡＡＧＡＧＣＧＴＧＡＴＧＴＧＡＣＧＴＡＴＧＣＡＧＣＡＣＣＡＣＴＴＣＧＴＧＴＡＡＡＡＧＴＧＣＧＴＣＴＡＡＴＣＡＡＣＡＡＧＧＡＡＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＡＡＣＡＡＧＡＴＧＴＧＴＴＣＡＴＧＧＧＡＧＡＴＴＴＣＣＣＡＣＴＣＡＴＧＡＣＡＧＡＧＡＣＴＧＧＡＡＣＡＴＴＣＧＴＡＡＴＴＡＡＣＧＧＴＧＣＡＧＡＡＣＧＴＧＴＴＡＴＣＧＴＴＴＣＣＣＡＧＴＴＡＧＴＴＣＧＣＴＣＴＣＣＡＡＧＣＧＴＡＴＡＣＴＡＴＡＧＴＧＧＣＡＡＡＧＴＧＧＡＴＡＡＡＡＡＣＧＧＡＡＡＡＣＧＴＧＧＴＴＴＴＡＣＴＧＣＴＡＣＴＧＴＡＡＴＴＣＣＡＡＡＣＣＧＣＧＧＡＧＣＴＴＧＧＴＴＡＧＡＧＴＡＴＧＡＧＡＣＡＧＡＴＧＣＴＡＡＧＧＡＴＧＴＴＧＴＡＴＡＴＧＴＧＣＧＴＡＴＴＧＡＣＣＧＴＡＣＧＣＧＴＡＡＡＣＴＴＣＣＴＧＴＡＡＣＴＧＴＴＴＴＧＴＴＡＣＧＣＧＣＡＴＴＡＧＧＧＴＴＴＧＧＣＴＣＴＧＡＴＣＡＡＧＡＡＡＴＣＡＣＣＧＡＧＣＴＴＴＴＡＧＧＴＧＡＴＡＡＣＧＡＡＴＡＣＴＴＡＡＧＣＡＡＣＡＣＡＴＴＡＧＡＡＡＡＡＧＡＣＡＡＣＡＣＡＧＡＴＡＧＴＡＣＡＧＡＡＡＡＡＧＣＡＴＴＧＣＴＴＧＡＡＡＴＴＴＡＴＧＡＧＣＧＴＣＴＡＣＧＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＡＴＧＣＴＡＡＧＡＧＣＴＴＡＣＴＴＧＴＧＴＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＣＧＡＴＣＣＡＡＡＧＣＧＣＴＡＣＧＡＴＴＴＡＧＣＡＡＡＴＧＴＡＧＧＴＣＧＣＴＡＴＡＡＧＡＴＣＡＡＣＡＡＧＡＡＧＴＴＡＣＡＣＡＴＴＡＡＡＡＡＣＡＧＡＴＴＧＴＴＴＡＡＴＣＡＡＣＧＴＴＴＡＧＣＴＧＡＡＡＣＡＴＴＡＧＴＧＧＡＴＣＣＡＧＡＡＡＣＴＧＧＴＧＡＡＡＴＴＴＴＡＧＣＧＧＣＡＧＡＡＧＧＡＡＣＡＡＴＣＴＴＡＧＡＴＣＧＴＣＧＴＡＣＡＣＴＴＧＡＴＣＧＣＡＴＴＴＴＡＣＣＴＴＡＣＴＴＡＧＡＧＡＡＡＡＡＣＡＴＴＧＧＡＴＴＣＡＡＡＡＣＡＧＣＧＡＡＡＣＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＧＧＴＡＧＡＡＧＧＣＧＡＴＧＴＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＴＣＴＡＴＴＡＡＧＡＴＴＴＡＴＧＣＴＣＣＴＧＡＧＴＣＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡＣＧＴＧＴＡＡＴＴＡＡＴＧＴＡＡＴＴＧＧＴＡＡＴＧＣＡＡＡＴＡＴＴＡＣＴＣＧＴＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＣＡＴＣＡＣＡＣＣＡＧＧＴＧＡＴＡＴＣＣＴＴＧＣＴＴＣＴＡＴＣＡＧＴＴＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＣＣＴＡＣＴＡＴＡＣＡＡＡＧＴＡＧＧＧＧＡＴＡＣＡＧＡＴＧＡＴＡＴＴＧＡＣＣＡＴＴＴＡＧＧＡＡＡＣＣＧＴＣＧＴＣＴＧＣＧＴＴＣＴＧＴＴＧＧＡＧＡＡＣＴＡＴＴＡＣＡＡＡＡＴＣＡＡＴＴＣＣＧＴＡＴＣＧＧＴＣＴＴＴＣＴＣＧＴＡＴＧＧＡＡＣＧＴＧＴＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＡＧＡＡＴＧＴＣＧＡＴＣＣＡＡＧＡＴＡＣＡＡＡＴＧＣＡＡＴＴＡＣＡＣＣＡＣＡＧＧＣＧＣＴＡＡＴＴＡＡＴＡＴＴＣＧＴＣＣＴＧＴＴＡＴＴＧＣＡＴＣＴＡＴＴＡＡＡＧＡＧＴＴＣＴＴＣＧＧＡＡＧＴＴＣＴＣＡＧＴＴＡＴＣＴＣＡＧＴＴＣＡＴＧＧＡＣＣＡＡＡＣＡＡＡＴＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＡＧＴＴＡＡＣＴＣＡＣＡＡＡＣＧＡＡＧＡＣＴＡＴＣＴＧＣＡＴＴＡＧＧＡＣＣＴＧＧＴＧＧＴＴＴＡＡＣＧＣＧＴＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＧＣＴＴＴＧＡＡＧＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＴＣＡＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＴＣＧＴＡＴＧＴＧＴＣＣＧＡＴＴＧＡＡＡＣＡＣＣＡＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＡＣＡＴＣＧＧＴＴＴＧＡＴＴＡＡＣＴＣＡＴＴＡＴＣＴＴＣＧＴＴＣＧＣＧＡＡＡＧＴＡＡＡＴＧＡＧＴＴＴＧＧＴＴＴＣＡＴＴＧＡＡＡＣＡＣＣＡＴＡＴＣＧＴＣＧＴＧＴＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＡＣＴＧＧＴＣＴＴＧＴＡＡＣＡＧＧＧＣＡＴＧＴＴＧＡＴＴＡＴＴＴＡＡＣＡＧＣＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＡＡＣＴＡＴＧＴＴＧＴＡＧＣＣＣＡＡＧＣＧＡＡＴＡＴＧＡＡＡＴＴＡＴＣＴＧＡＴＧＡＡＧＧＴＧＡＡＴＴＣＣＴＡＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＧＴＡＧＣＴＣＧＴＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＡＡＡＡＣＡＴＴＧＴＣＡＣＡＡＡＴＡＧＡＧＡＡＣＧＣＡＴＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＡＡＧＴＡＧＴＧＴＣＧＧＣＡＧＣＧＡＣＡＧＣＴＴＧＴＡＴＴＣＣＧＴＴＣＴＴＡＧＡＡＡＡＣＧＡＴＧＡＣＴＣＴＡＡＣＣＧＣＧＣＡＣＴＴＡＴＧＧＧＡＧＣＧＡＡＣＡＴＧＣＡＡＣＧＴＣＡＧＧＣＧＧＴＴＣＣＧＴＴＡＡＴＧＡＡＴＣＣＧＧＡＡＴＣＴＣＣＧＡＴＴＧＴＡＧＧＴＡＣＡＧＧＴＡＴＧＧＡＧＴＡＣＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＡＣＴＣＡＧＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＡＡＴＣＴＧＴＡＡＡＣＡＴＣＣＴＧＧＴＧＴＴＧＴＴＧＡＧＣＧＣＧＴＡＧＡＡＧＣＡＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＧＧＧＴＡＣＧＴＣＧＣＴＡＴＧＴＡＧＡＡＧＴＴＧＡＣＧＧＴＣＡＡＡＣＡＧＴＡＡＡＡＧＧＣＧＡＣＴＴＡＧＡＴＣＧＣＴＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＡＡＡＡＴＴＣＡＴＴＣＧＴＴＣＴＡＡＣＣＡＡＧＧＡＡＣＴＴＧＴＴＡＣＡＡＣＣＡＡＣＧＴＣＣＡＡＴＣＧＴＡＡＧＴＧＴＴＧＧＡＡＡＴＧＡＡＧＴＴＧＴＡＡＡＡＧＧＴＧＡＡＡＴＣＣＴＴＧＣＧＧＡＴＧＧＴＣＣＴＴＣＴＡＴＧＧＡＡＴＴＡＧＧＴＧＡＡＣＴＡＧＣＡＣＴＴＧＧＡＣＧＴＡＡＣＧＴＧＣＴＴＧＴＴＧＧＣＴＴＣＡＴＧＡＣＴＴＧＧＧＡＣＧＧＴＴＡＴＡＡＣＴＡＣＧＡＧＧＡＴＧＣＧＡＴＣＡＴＣＡＴＧＡＧＴＧＡＧＣＧＣＣＴＴＧＴＡＡＡＡＧＡＴＧＡＴＧＴＧＴＡＣＡＣＴＴＣＴＡＴＴＣＡＴＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＡＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＴＣＧＴＧＡＴＡＣＧＡＡＧＣＴＴＧＧＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＡＴＴＡＣＡＣＧＴＧＡＣＡＴＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＧＧＧＧＡＡＧＡＣＧＣＡＴＴＡＣＧＴＡＡＣＣＴＴＧＡＣＧＡＧＣＧＣＧＧＴＡＴＣＡＴＴＣＧＣＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＡＴＧＧＡＧＡＴＴＴＡＣＴＴＧＴＴＧＧＴＡＡＡＧＴＡＡＣＡＣＣＴＡＡＡＧＧＴＧＴＡＡＣＡＧＡＡＴＴＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＧＡＡＣＧＴＣＴＡＴＴＡＣＡＴＧＣＴＡＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＡＡＡＡＧＣＧＣＧＴＧＡＡＧＴＡＣＧＴＧＡＴＡＣＡＴＣＡＣＴＡＣＧＴＧＴＡＣＣＡＣＡＣＧＧＴＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＴＴＡＴＣＴＴＡＧＡＣＧＴＡＡＡＡＧＴＡＴＴＣＡＡＣＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＧＣＧＡＴＧＡＡＴＴＧＣＣＡＣＣＡＧＧＣＧＴＧＡＡＴＣＡＡＣＴＴＧＴＡＣＧＴＧＣＡＴＡＴＡＴＣＧＴＴＣＡＡＡＡＡＣＧＴＡＡＡＡＴＴＴＣＴＧＡＡＧＧＴＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＣＧＧＡＣＧＴＣＡＣＧＧＴＡＡＣＡＡＡＧＧＴＧＴＴＡＴＴＴＣＴＣＧＴＡＴＴＴＴＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＴＡＴＧＣＣＴＴＡＣＴＴＡＣＣＡＧＡＣＧＧＴＡＣＧＣＣＡＡＴＣＧＡＴＡＴＣＡＴＧＴＴＡＡＡＣＣＣＡＴＴＡＧＧＧＧＴＡＣＣＡＴＣＴＣＧＴＡＴＧＡＡＴＡＴＣＧＧＴＣＡＧＧＴＡＴＴＡＧＡＧＣＴＴＣＡＴＣＴＴＧＧＴＡＴＧＧＣＡＧＣＡＡＧＡＴＡＣＣＴＧＧＧＣＡＴＴＣＡＣＡＴＴＧＣＡＡＣＡＣＣＡＧＴＡＴＴＣＧＡＴＧＧＴＧＣＴＣＧＴＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＡＣＡＡＴＴＧＡＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＡＴＧＧＣＡＡＡＴＧＡＣＧＣＧＡＡＡＡＣＡＡＴＣＣＴＧＴＡＴＧＡＣＧＧＡＣＧＴＡＣＴＧＧＴＧＡＡＣＣＡＴＴＣＧＡＴＡＡＣＣＧＣＧＴＡＴＣＴＧＴＴＧＧＴＧＴＣＡＴＧＴＡＴＡＴＧＡＴＣＡＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＣＡＴＧＧＴＴＧＡＣＧＡＴＡＡＡＣＴＴＣＡＴＧＣＴＣＧＴＴＣＴＡＣＴＧＧＡＣＣＡＴＡＣＴＣＡＣＴＴＧＴＡＡＣＧＣＡＧＣＡＡＣＣＴＣＴＴＧＧＡＧＧＴＡＡＡＧＣＴＣＡＧＴＴＣＧＧＴＧＧＡＣＡＧＣＧＴＴＴＣＧＧＴＧＡＧＡＴＧＧＡＧＧＴＴＴＧＧＧＣＡＣＴＴＧＡＡＧＣＴＴＡＣＧＧＴＧＣＴＧＣＴＴＡＴＡＣＴＣＴＴＣＡＡＧＡＡＡＴＣＴＴＡＡＣＡＧＴＧＡＡＧＴＣＴＧＡＴＧＡＴＧＴＴＧＴＴＧＧＡＣＧＴＧＴＴＡＡＧＡＣＴＴＡＴＧＡＡＧＣＡＡＴＴＧＴＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＡＡＴＧＴＴＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＧＣＧＴＴＣＣＴＧＡＡＴＣＡＴＴＣＡＡＡＧＴＡＴＴＧＡＴＴＡＡＡＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧＴＴＴＡＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＴＡＡＡＡＴＧＡＴＧＴＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＴＡＣＡＧＡＡＡＴＴＧＡＡＡＴＧＣＧＴＧＡＴＡＣＡＧＡＡＧＡＴＧＡＣＧＡＴＧＡＴＣＡＴＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＡＴＡＡＡＴＴＧＡＡＴＧＴＣＧＡＡＧＴＴＧＡＧＡＣＡＡＣＴＡＡＧＧＡＡＴＡＡ
実施例２
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５分離株の抗微生物特性
主な植物病原菌に対するＲＴＩ５４５株の拮抗能力がプレートアッセイで評価された。植物真菌性病原体に対する拮抗作用の評価のためのプレートアッセイが、８６９寒天プレート上に３～４ｃｍの距離で並べられた細菌分離株及び病原性真菌を培養することで行われた。プレートが室温でインキュベートされ、増殖阻害、生態的地位占有（ｎｉｃｈｅ ｏｃｃｕｐａｔｉｏｎ）又は影響がない等の増殖挙動が２週間に渡って定期的に確認された。細菌性病原体に対する拮抗特性のスクリーニングする場合、まず、病原体が８６９寒天プレート上に層状に広げられた。続いて、ＲＴＩ５４５の培養物の２０μｌがプレート上に滴下された。プレートが室温でインキュベートされ、２週間に渡って定期的に、層におけるＲＴＩ５４５が滴下された位置の周囲の阻害領域に関して定期的に確認された。拮抗活性のまとめが下の表ＩＩに示されている。
Figure 0007086060000002
実施例３
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５分離株の表現型形質
拮抗特性に加え、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株に関する様々な表現型形質も評価され、データが下の表ＩＩＩに示されている。アッセイは、表ＩＩＩの下のテキスト部に記載された方法に従って行われた。
Figure 0007086060000003
（酸及びアセトイン試験）８６９富栄養培地中の２０μｌの種菌が１ｍｌのメチルレッド－フォーゲス・プロスカウアー培地（シグマアルドリッチ ３９４８４）に移された。培養物が３０℃、２００ｒｐｍで２日間インキュベートされた。０．５ｍｌの培養物が移され、５０μｌの０．２ｇ／ｌメチルレッドが添加された。赤色が酸産生を示した。残りの０．５ｍｌの培養物が０．３ｍｌの５％アルファ－ナフトール（シグマアルドリッチ Ｎ１０００）に続いて０．１ｍｌの４０％ＫＯＨと混合された。インキュベーションの３０分後、試料が測定された。赤色の発色がアセトインの産生を示した。酸及びアセトイン試験に関して、非接種の培地が陰性対照として使用された（Ｓｏｋｏｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．９：５３８－５４０）。
（インドール－３－酢酸）８６９富栄養培地中の２０μｌの種菌が０．５ｇ／ｌトリプトファン（シグマアルドリッチ Ｔ０２５４）を補った１ｍｌの１／１０ ８６９培地に移された。培養物が３０℃、２００ＲＰＭで４～５日間、暗室でインキュベートされた。試料が遠心され、０．１ｍｌの上清が０．２ｍｌの０．５ｍｌのサルコフスキー試薬（３５％過塩素酸、１０ｍＭ ＦｅＣｌ３）と混合された。暗室で３０分間インキュベートした後、ピンク色になった試料がＩＡＡ合成について陽性と記録された。ＩＡＡ（シグマアルドリッチ Ｉ５１４８）の希釈液が陽性比較として使用され、非接種の培地が陰性対照として使用された（Ｔａｇｈａｖｉ，ｅｔ ａｌ．，２００９，Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ７５：７４８－７５７）。
（リン酸塩溶解試験）リットルあたり１０ｇのグルコース、５ｇの三リン酸カルシウム、０．２ｇの塩化カリウム、０．５ｇの硫酸アンモニウム、０．２ｇの塩化ナトリウム、０．１ｇの硫酸マグネシウム７水和物、０．５ｇの酵母抽出物、２ｍｇの硫酸マンガン、２ｍｇの硫酸鉄及び１５ｇの寒天を含む、ｐＨ７の加圧滅菌されたＰｉｋｏｖｓｋａｙａ（ＰＶＫ）寒天上に細菌が播かれた。透明化した領域がリン酸塩溶解細菌を示す（Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １：９０－９５）。
（キチナーゼ活性）１０％湿重量のコロイドのキチンが改変ＰＶＫ寒天培地（ｐＨ７、加圧滅菌されたリットルあたり１０ｇのグルコース、０．２ｇの塩化カリウム、０．５ｇの硫酸アンモニウム、０．２ｇの塩化ナトリウム、０．１ｇの硫酸マグネシウム７水和物、０．５ｇの酵母抽出物、２ｍｇの硫酸マンガン、２ｍｇの硫酸鉄及び１５ｇの寒天）に加えられた。細菌がこれらキチンプレートに播かれ、透明化した領域がキチナーゼ活性を示した（Ｎ．Ｋ．Ｓ．Ｍｕｒｔｈｙ＆Ｂｌｅａｋｌｅｙ．，２０１２．“Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｃｈｉｔｉｎ Ｕｓｅｄ ｆｏｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ”．Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．１０（２））．
（プロテアーゼ活性）１０％ミルクを補った８６９寒天培地上に細菌が播かれた。透明化した領域がプロテアーゼ活性を示唆するタンパク質分解能を示す（Ｓｏｋｏｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．９：５３８－５４０）。
実施例４
トウモロコシの種子の発芽に対するバチルス・チューリンゲンシス分離株ＲＴＩ５４５の影響
トウモロコシの種子の発芽に対する細菌分離株ＲＴＩ５４５の栄養細胞の影響が下記のように評価された。
ＲＴＩ５４５の栄養細胞を用いたアッセイがトウモロコシの種子を用いて行われた。凍結保存からＲＴＩ５４５が８６９培地上に播かれ、３０℃で一晩増殖された。単離されたコロニーがプレートから採取され、２０ｍＬの８６９培養液を含む５０ｍＬ円すい管に接種された。３０℃、２００ＲＰＭで振盪しながら一晩、培養物がインキュベートされた。一晩の培養物が１０分間、１０，０００ＲＰＭで遠心された。上清が除去され、沈殿物がＭｇＳＯ４に再懸濁され、洗浄された。混合物が１０分間、１０，０００ＲＰＭで再び遠心された。上清が除去され、沈殿物が改変ホーグランド溶液に再懸濁された。そして、混合物が初期濃度まで希釈された。これから、ＲＴＩ５４５培養物の希釈液が２×１０７ｃｆｕ／ｍｌの終濃度となるように調製された。トウモロコシの種子の発芽実験のために、植物栽培容器がＲＴＩ５４５又は対照で標識された。２×１０７ｃｆｕ／ｍｌの濃度のＲＴＩ５４５懸濁液１０ｍＬが容器に加えられ、種子が暗室にて２１℃でインキュベートされた。対照の容器には種子と追加の細菌を含まない改変ホーグランド溶液とが入れられた。容器の画像が１０～１２日後に撮られた。図３Ａ～３Ｂは、１２日後のＲＴＩ５４５株存在下（図３Ａ）及び非存在下（図３Ｂ）で栽培されたトウモロコシの苗の画像である。図から分かるように、ＲＴＩ５４５株の存在によって顕著な成長促進がみられた。
実施例５
トウモロコシに対するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５分離株の成長効果
トウモロコシでの初期の植物成長及び活力における細菌分離株の適用効果が評価された。室温で撹拌下、滅菌された発芽トウモロコシの種子の表面を２日間、１０８ＣＦＵ／ｍｌの細菌懸濁液で接種することで実験が行われた（また、対照は細菌なしで行われた）。続いて、６．５のｐＨに石灰処理されたＰＲＯＭＩＸ ＢＸで満たされたガロンポットに、接種された種子が植えられた。各処理で９個のポットに１個のトウモロコシの種子が播種された。ポットは、１４／１０時間の明暗周期で、２２℃の温室でインキュベートされ、必要に応じて週に２回、水が与えられた。
植えてから４２日で、植物が収穫され、それらの生の及び乾燥時の重量が測定され、非接種の対照植物に関して得られたデータと比較された。トウモロコシの芽のバイオマスの湿重量及び乾燥重量が４２日の成長後に評価された。バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株を接種したトウモロコシの芽のバイオマスの湿重量が１７３．７ｇであったのに対し、非接種の対照の湿重量は１４７．６ｇで、非接種の対照よりも湿重量で１７．７％増加であった。バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株を接種したトウモロコシの芽のバイオマスの乾燥重量が１６．０ｇであったのに対し、非接種の対照の乾燥重量は１２．４ｇで、非接種の対照よりも乾燥重量で２９％増加であった。湿潤バイオマス及び乾燥バイオマスの両方の明らかな増加から分かるように、ＲＴＩ５４５株の存在によって顕著な成長促進が得られた。
実施例６
昆虫に対するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５分離株の活性
ウエスタン・カスミカメムシ（ＷＰＢ）、すなわちライガス・ヘスペルス及びサザン・コーン・ルートワーム（ＳＣＲＷ）、すなわちディアブロティカ・ウンデキムプンクタタ・ホワルディ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ ｈｏｗａｒｄｉ）に対するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株の拮抗力がｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで評価された。
アッセイのために、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５が５ｍｌの８６９培地で７時間、３０℃、２００ｒｐｍで培養された。続いて前培養のごく一部が８６９培地で１００倍に希釈され、３０℃、１５０ｒｐｍで１７時間培養された。細菌培養物すべてがバイオアッセイに使用された。生物対照として、バチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ ＨＤ－１が同様の手順で用いられた。
ＷＰＢに対する拮抗に関して、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５が対照とともに直接噴霧、選択摂食及び非選択摂食アッセイで評価され、対照は８６９培地なし、化学対照ＡＣＥＰＨＡＴＥ ９７ＵＰ（Ａ．Ｉ．＝９７％ Ｏ，Ｓ－ジメチルアセチルホスホラミドチオエート）、生物対照ＨＤ－１、及び非処理対照である。予想されるように、８６９培地なし又はＨＤ－１処理において顕著な死亡率（直接噴霧及び非選択摂食アッセイ）又は忌避性（選択摂食アッセイ）は観察されなかったが、化学対照はＷＰＢを殺し（直接噴霧及び非選択供給アッセイ）、忌避させた（選択摂食アッセイ）。直接噴霧及び非選択摂食アッセイの両方において適用された場合、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５のＷＰＢに対する死亡率は有意ではなかったが、予期せぬことに、ＲＴＩ５４５は、ＷＰＢが選択アッセイ領域に置かれた１２４時間後に忌避作用を示した。具体的には、処理した及び非処理の食物源を含む容器にＷＰＢが入れられた際、ＷＰＢが非処理の食物源のみを摂食することが観察された（データ示さず）。
ＳＣＲＷの幼虫への拮抗に関して、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の細胞が、トウモロコシの苗の選択摂食アッセイで評価され、水対照と比較された。水対照と比較された追加の処理は、バチルス・チューリンゲンシス亜種であるｋｕｒｓｔａｋｉ ＨＤ－１（ＨＤ－１）、ｉｉ）化学対照ＣＡＰＴＵＲＥ ＬＦＲ（Ａ．Ｉ．＝１７．１５％ ビフェントリン）、及びｉｉｉ）８６９培地とした。ろ紙が半分に切断され、各部分が１００ｍｍペトリ皿の底にテープで固定され、半分のろ紙２枚それぞれが触れないことが確かめられた。総体積０．６５ｍｌの処理が半分の処理されるろ紙に適用された。脱イオン水が非処理側に供給された。非処理対照では、半分のろ紙双方が水のみで処理された。１個の発芽したトウモロコシの種子が湿らせた半分のろ紙それぞれに置かれた。１０個の２齢幼虫が処理されたろ紙と非処理のろ紙との間の正中に置かれた。処理につき３回反復した。皿はパラフィルムで密封され、室温で暗環境に６日間維持されてから評価された。幼虫の死亡位置及び死亡した数が記録された。ろ紙の各部分での幼虫の割合が分布を正規化するために平方根変換され、分散分析（ＡＮＯＶＡ）で統計的に解析された。事後テューキーＨＳＤ検定の利用が、非処理のろ紙と処理のろ紙との間における差が有意であるかの評価に適用された（＜＝０．１０）。
６日後のＲＴＩ５４５細胞でのプレートアッセイの画像が図４に示されており、すべてのプレートアッセイのデータが下の表ＩＶにまとめられている。ＷＰＢに対する上述のアッセイで観察されたように、ＲＴＩ５４５は予期せぬことに忌避されたが、ＳＣＲＷの幼虫を殺さなかった。図４及び表ＩＶに示されたように、ＲＴＩ５４５培養物は、ＳＣＲＷの幼虫を忌避させる点に優れていた。１００％の幼虫が水で処理した半分のろ紙上に存在し、ＲＴＩ５４５で処理したろ紙には幼虫はいなかった。これに対し、ＨＤ－１株では、幼虫が統計的には均等に処理と水対照に分かれた。ビフェントリンの化学対照は、約１９％の幼虫がＣＡＰＴＵＲＥ ＬＦＲで処理されたろ紙上に存在していた。この結果は、ＲＴＩ５４５株が予期せぬことに、トウモロコシの種子から昆虫を忌避させるが昆虫を殺さないという点で化学殺虫剤よりも優れていることを示す。
Figure 0007086060000004
トウモロコシの苗を用いたＳＣＲＷの幼虫に関する選択摂食アッセイがＨＤ－１株及びＲＴＩ５４５で繰り返された。ＨＤ－１と異なり、ＲＴＩ５４５は、結晶タンパク質（“Ｃｒｙ”で表される）を産生する遺伝子を有していない。ＳＣＲＷの幼虫によるトウモロコシの苗のｉｎ ｖｉｔｒｏ選択プレート供給アッセイを用いて忌避性が測定され、７２時間後の非処理側のプレートのＳＣＲＷの幼虫の割合で評価された。忌避性がない場合、プレートの処理された半分及び非処理の半分の両方で５０％の等しい分布が予想され、それは０％の忌避性を意味する。このアッセイの結果が下の表Ｖに示されている。この実験では、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５及びバチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ ＨＤ－１（ＨＤ－１）がアッセイの３日後の水対照との比較で評価された。ここでも、ＲＴＩ５４５の培養物がＳＣＲＷの幼虫を忌避させる点で優れており、幼虫の９６％が水で処理された半分のろ紙にいて、ＲＴＩ５４５細胞を含む半分ではたった４％であった。これに対し、ここでも、ＨＤ－１株では、幼虫が統計的には均等に処理と水対照に分かれた（プレートの非処理側に５３％）。
Figure 0007086060000005
また、トウモロコシの苗を用いたＳＣＲＷの幼虫に関する選択摂食アッセイが、ＲＴＩ５４５を他のバチルス・チューリンゲンシス株ＦＤ３０及びカノサミンと比較するために繰り返された。ゲノム配列データに基づいて、ＲＴＩ５４５は推測上のカノサミン生合成パスウェイを有するが、ＦＤ３０にはない。ＳＣＲＷの幼虫によるトウモロコシの苗のｉｎ ｖｉｔｒｏ選択プレート供給アッセイを用いて忌避性が測定され、７２時間後のプレートの非処理側におけるＳＣＲＷの幼虫の割合が評価された。忌避性がない場合、プレートの処理された半分及び非処理の半分の両方で５０％の等しい分布が予想され、それは０％の忌避性を意味する。このアッセイの結果が下の表ＶＩに示されている。
Figure 0007086060000006
表ＶＩにまとめられたように、ＲＴＩ５４５は、非処理のろ紙と処理のろ紙との間の正中に置かれた際、ＳＣＲＷの幼虫に対して忌避効果をもたらした。ＦＤ３０（バチルス・チューリンゲンシス）は、全体的に同様の効果を有していなかった。カノサミンがＦＤ３０株と組み合わされた場合、ＳＣＲＷの忌避が観察された。２つの独立した生物アッセイにおいて、カノサミンによる忌避効果が０．１μｇ／ｍｌから１００．０μｇ／ｍｌの間のすべての希釈度において２４時間で観察された。第１の試験では、１０及び１００μｇ／ｍｌのカノサミンで処理したろ紙は、ＳＣＲＷに対して８０％以上の忌避反応を示した。３日目に最小限の食害が、カノサミン処理側に置かれたトウモロコシに見られた。一方、ＦＤ３０では、処置されたろ紙に置かれた幼虫の個数と非処理のろ紙との間に、３日目に非統計的な２０％の差があり、注目すべきことに、トウモロコシに対する食害がＦＤ３０選択アッセイの両側で見られた。第２の試験では、３０．０μｇ／ｍｌのカノサミンで処理されたろ紙が５日まで完全な忌避性をもたらした（データ示さず）。これらの結果から、ＷＰＢ及びＳＣＲＷのような昆虫の種を忌避させるＲＴＩ５４５の能力は、そのカノサミンの産生によるものである。
実施例７
線虫に対するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５分離株の活性
実施例６の結果は、昆虫の種に対するＴＲＩ５４５の忌避活性がカノサミン等の化合物の産生によるものであることが示唆される。同様に、線虫に対するＲＴＩ５４５の活性も当該株によって産生される化合物によるものであろう。寒天プレートでの線虫の走化性アッセイが次のように行われ、ｉｎ ｖｉｔｒｏで様々な濃度のカノサミン及びＲＴＩ５４５の上清に対するネコブ（ＲＫＮ）センチュウの幼虫（Ｊ２）の応答を評価した。
試験領域が図６に図式的に示されている。直径９ｃｍのペトリ皿が１５ｍｌの０．７５％Ｐｈｙｔａｇｅｌ（０．１％ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏを含む）で満たされた。線虫の進路が顕微鏡下で観察できるように、硫酸マグネシウム・７水和物ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏが素寒天培地の代わりに用いられた。約５０μｌの溶液を収容できる直径０．５ｃｍのウェルが皿の反対側で中央から２ｃｍの位置に設けられた。試料がウェルに入れられ、皿に蓋がされて１時間、拡散させることでウェルの周りに勾配が得られた。次に、５μｌの滅菌蒸留水に懸濁された７５～１００のＪ２期のネコブセンチュウがプレートの中心の直径１．５ｃｍの円にピペットで置かれた。水懸濁液の表面張力が失われた際、皿が蓋で覆われ、２５℃で１～４時間、暗室における水平のプラットフォームでインキュベートされた。インキュベーション後、プレートが４℃に移され、設置から２時間、３時間及び５時間後の評価のために線虫の動きが止められた。各試験対象について３回反復された。
評価のために、試験領域が１６個の領域に分けられ、図６Ａに示すように、１～８の誘引領域及びａ～ｈの忌避領域として設定された。試験物質に誘引される線虫は、数字が割り当てられた（誘引）領域に動く傾向があり、結果としてウェルの方向に平行な軸に沿って群がる。忌避した線虫は文字が割り当てられた（忌避）領域に動く傾向があり、結果としててウェルの方向に直角に交わる軸に沿って群がる。誘引領域の線虫の総数を忌避領域の線虫の総数で除することで、走化性因子（Ｃｆ）が算出された。２より大きいＣｆは線虫に対する誘引を意味する一方、０．５未満は忌避を示し、０．５～２はどちらでもないとみなした。結果が表ＶＩＩに示されている。この走化性生物アッセイでは、蒸留水がすべての評価時点でどちらでもないことがわかった（Ｃｆが０．５～２．０）。試験開始から３時間及び５時間で、１％の酢酸がＲＫＮ Ｊ２に対する忌避性を示した（Ｃｆ＜０．５）。２時間という早期の評価時点での酢酸のＣｆはどちらでもなかった（データ示さず）のは、おそらくＰｈｙｔａｇｅｌ培地内の化学物質の遅い拡散及び／又は化学物質に対する線虫の応答の遅さのためである。図６は、１００μｇ／ｍｌで試験されたカノサミンのアッセイの写真であって、線虫の位置を表すドットがどちらでもない分布を示す。図６Ｃは、１００％濃度で試験されたＲＴＩ５４５の上清のアッセイの写真であって、線虫の位置を表すドットが忌避の分布を示す。
Figure 0007086060000007
試験された３つのカノサミンの濃度（１、１０及び１００μｇ／ｍｌ）すべてがアッセイにおいて忌避特性を示さなかった。すべての試験されたカノサミンの割合及びすべての試験された時点に関して、Ｃｆ因子は矛盾なく０．５より大きかった。すべての試験されたＲＴＩ５４５の上清の割合（１％、１０％、２５％、５０％及び１００％）及びすべての８６９培地の割合（１０％、２５％、５０％及び１００％）がアッセイの開始後２時間から始まる忌避剤（Ｃｆ＜０．５）として機能した。Ｊ２線虫のこのような早い反応は、線虫の挙動に寄与する因子が容易に拡散し、勾配を形成することを示唆する。８６９培地の場合、試験された割合に対して明らかな用量反応はなかった。一方、ＲＴＩ５４５の上清の場合、試験された割合への明確な反応が観察された。より高い割合の上清が線虫をより強く寄せ付けなかった（低いＣｆ）。しかし、ＲＴＩ５４５の忌避性に関する結果は、アッセイにおける８６９培地の強い活性のために結論付けられなかった。
カノサミンが線虫に対する忌避性を欠くことは、昆虫アッセイで観察されたことと対照的である。ＲＴＩ５４５で観察された線虫に対する忌避性は、カノサミン以外のいくつかの他の因子のためと考えられる。
ＲＴＩ５４５株（バチルス・チューリンゲンシス）を一晩培養する間に産生される化合物と純粋な化合物であるカノサミンがｉｎ ｖｉｔｒｏで評価され、ネコブセンチュウ（ＲＫＮ）の卵（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｉｎｃｏｇｎｉｔａ／ｈａｐｌａ）の孵化に対するそれらの潜在的な影響が特徴付けられた。
（細菌の上清）
アッセイのための上清を得るため、１ループ（～１０μｌ）のＲＴＩ５４５株が５ｍｌの８６９培地において２００ｒｐｍ、３０℃で１６時間培養された。翌日、１：１００希釈の光学濃度（ＯＤ）が６００ｎｍで測定され、発酵フラスコの接種に必要とされる量が見積もられた。細菌の培養が、０．０１の開始ＯＤで、２５０ｍｌの発酵フラスコ内の２５ｍｌの８６９培地中で開始された。細菌が２００ｒｐｍ、３０℃で一晩（１６時間）、培養された。２ｍｌの細菌培養物がＯＤ及びコロニー形成単位（ＣＦＵ）の測定のために保存された。残りの培養物が遠心され（２５００ｒｐｍ、１５分間）、上清が０．２２μｍフィルタを介してろ過滅菌された。上清の採取から４時間以内に孵化アッセイが開始された。生物アッセイの開始までは上清が４℃に維持された。
カノサミン（１０ｍｇ）が１ｍｌの脱イオン水に溶解され、１０ｍｇ／ｍｌの原液が得られた。２００μｇ／ｍｌの濃度を得るために、２０μｌの濃縮原液（１０ｍｇ／ｍｌ）が９９０ｍｌの水に加えられた。次に段階希釈が行われ、それぞれの２０μｇ／ｍｌ及び２μｇ／ｍｌの濃度のカノサミンが調製された。
ネコブセンチュウ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｉｎｃｏｇｎｉｔａ及びＭ．ｈａｐｌａ）の混合培養物が用いられた。Ｏｐｔｉ－ｐｒｅｐ遠心ステップに続く水での２回の洗浄を用いた漂白と消毒によって、線虫の卵がトマトの根から抽出された。孵化アッセイを構築する前に、初期卵（視認できる胚を有する卵）及び後期卵（内部の分化した幼虫を有する卵、Ｊ１又はＪ２段階）の割合が顕微鏡下で卵を計数することで規定された。（アッセイを開始した日に採取された）新鮮な卵のみが生物アッセイに用いられた。
アッセイは、２４ウェルの組織培養プレートで行われた。各ウェルで２％メチルセルロース中の、７５μｌの卵溶液（ウェルあたり約１００個のの卵）が７５μｌの抗生物質溶液（３００ｍｇ／Ｌのストレプトマイシン＋３００ｍｇ／Ｌのペニシリン）及び１５０μｌの各処理と混合された。抗生物質が蒸留滅菌水に懸濁された。試験のプレートにおける抗生物質の終濃度は、ペニシリンが７５ｍｇ／Ｌ及びストレプトマイシンが７５ｍｇ／Ｌであった。すべての処理は、２％メチルセルロースを含んでいた（ＲＫＮの卵が処理に曝される前にメチルセルロースに懸濁された）。メチルセルロースの添加は、各処理に同数の接種材料を添加する精度を向上させる。処理は６回繰り返し行われた。各プレートが蓋をされ、アルミ箔で包まれ、２５℃に設定された定温器に置かれた。孵化の開始から７日目と１４日目に、各ウェルで孵化した幼虫の数が実体顕微鏡下で数えられた。各時点と処理に関して、孵化の割合が次の式に従って算出された。
Figure 0007086060000008
７日後及び１４日後のネコブセンチュウの卵の平均孵化率が表ＶＩＩＩに示されている。汚染を防ぐため、すべての処理に抗生物質（７５ｍｇ／Ｌのペニシリン及び７５ｍｇ／Ｌのストレプトマイシン）が補われた。データは６回の反復の平均±平均の標準偏差である。
Figure 0007086060000009
アッセイのために集められた初期の卵及び後期の卵の割合はそれぞれ４１％及び５９％であった。抗生物質、低い割合のＡｇｒｉｍｅｋ（登録商標）（０．１ｐｐｍ）及び８６９培地なしは、卵の孵化に明らかな影響を与えなかった。化学物質の標準であるＡｇｒｉｍｅｋ（登録商標）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで卵の孵化を阻害した。１ｐｐｍの割合によって、１４日後に７２％の卵孵化阻害が起こった。すべてのＲＴＩ５４５の上清の割合における及びＡｇｒｉｍｅｋ（登録商標）の高い割合（１ｐｐｍ）における孵化は、水対照よりも顕著に低かった。用量反応は試験されたＲＴｉ５４５の割合（２．５～５０％）の間で見られなかったうえ、すべてのこれらの割合が化学物質の標準であるＡｇｒｉｍｅｋ（登録商標）に匹敵した。これに対し、様々な濃度のカノサミン（１、１０及び１００μｇ／ｍｌ）に曝された卵の孵化率は水対照よりも高かった。
すべての試験された割合において、８６９培地で一晩培養したＲＴＩ５４５の上清は、卵の孵化を顕著に阻害した。同じ培地で培養された３日間培養物から得られたＲＴＩ５４５の上清でも同様の結果が見られた（データ示さず）。卵の孵化の阻害の原因である化合物が、一晩及び３日間培養された培養物の中に含まれている。
カノサミンは卵の孵化に肯定的な影響をもたらした。７日後において、カノサミンに曝された卵の孵化率は、水対照でインキュベートされた卵の孵化率よりも最大８０％高かった。これらの結果はカノサミンの生化学的特性と一致する。カノサミンはキチン合成阻害剤として同定された（Ｊａｎｉａｋ ａｎｄ Ｍｉｌｅｗｓｋｉ，２００１）。線虫の卵殻は、キチンから構成され、卵の孵化は、キチン合成に反する変化であるキチンの分解を伴う。
いかなる理論にも縛られるつもりはないが、アッセイの結果は、ＲＴＩ５４５の抗線虫活性は、カノサミンによるものではないことが示唆される。忌避性及び卵の孵化アッセイにおけるＲＴＩ５４５の上清と８６９培地抽出物の異なる挙動は、ＲＴＩ５４５が抗線虫性能をもたらす未だに同定されていない化合物を産生することを示唆している。
実施例８
トウモロコシ及びダイズの種子のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５での処理による成長と収穫量への影響
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞でトウモロコシとダイズの種子を処理することによって、昆虫の圧力下における成長と収穫量への影響を評価するために実験が行われた。
成長、収穫量、及びトウモロコシの有害生物ハリガネムシ及び種子ウジ虫の防除の１つ以上に対する影響がウィスコンシン州での野外試験で評価された。温室で追加の実験が行われ、ハリガネムシの存在下での初期の植物成長への影響が評価された。
（製剤）
Ａ 水中のＢ．チューリンゲンシス ＲＴＩ５４５の芽胞濃度（１．０×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ）が１．０×１０１０ｃｆｕ／ｍｌの量で適用された。
ＭＡＸＩＭ（ＳＹＮＧＥＮＴＡ ＣＲＯＰ ＰＲＯＴＥＣＴＩＯＮ，ＩＮＣ）が０．００６４ｍｇ ＡＩ／穀粒で種子に適用された（Ａ．Ｉ．＝フルジオキソニル）。
ＡＰＲＯＮ ＸＬ（ＳＹＮＧＥＮＴＡ ＣＲＯＰ ＰＲＯＴＥＣＴＩＯＮ，ＩＮＣ）が製造者のラベルに従って種子に適用された（Ａ．Ｉ．＝メフェノキサム）。
ＰＯＮＣＨＯ ２５０、ＰＯＮＣＨＯ ５００ ＶＯＴＩＶＯ及びＰＯＮＣＨＯ １２５０ ＶＯＴＩＶＯ （ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰ ＳＣＩＥＮＣＥ）が製造者のラベルに従って種子にそれぞれ適用された（ＰＯＮＣＨＯ Ａ．Ｉ．＝クロチアニジン及びＶＯＴＩＶＯ Ａ．Ｉ．＝バチルス・フィルムスＩ－１５８２）。
最初の野外試験では、トウモロコシの種子が、１）化学物質対照ＭＡＸＩＭ＋ＡＰＲＯＮ ＸＬ（“ＦＣ”とする）、２）ＦＣ＋殺虫剤ビフェントリン０．１２５ｍｇ／種子）、３）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ １２５０（クロチアニジン １．２５ｍｇ／種子）及びＶＯＴＩＶＯ（バチルス・フィルムスＩ－１５８２）、４）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ ２５０（クロチアニジン ０．２５ｍｇ／種子）、５）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ ５００（クロチアニジン ０．５ｍｇ／種子）及びＶＯＴＩＶＯ （バチルス・フィルムスＩ－１５８２）、及び６）ＦＣ＋ビフェントリン（０．１２５ｍｇ／種子）＋Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞を含む懸濁液で処理された。
処理されたトウモロコシの種子がウィスコンシン州の別の野外試験で、害虫ハリガネムシ及び種子ウジ虫が蔓延している土壌に植えられた。１つの試験で、デリア属種（Ｄｅｌｉａ ｓｐｐ．）成虫による産卵を促すために肥料が区画に加えられた。集められ、解析された評価は、％出芽、植物の立ち性、％ハリガネムシによる損傷、％種子ウジ虫による損傷、植物活力及び収穫であった。昆虫による食害の重症度が植えてから３４日の目視検査で評価され、植物活力が１から５で格付けされ、１がかなり悪いことを示し、５が優れた植物活力と評価されることを意味する。
結果が下の表ＩＸに示されている。殺虫剤ビフェントリンと組み合わされたＢ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の含有物は、ビフェントリンのみで処理された種子を上回るパーセント出芽、植物の立ち性、活力並びにハリガネムシ及び種子ウジ虫の防除において顕著な改善を示した。加えて、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５及びビフェントリンの組み合わせの結果は、ハリガネムシの防除の点で製品ＰＯＮＣＨＯ １２５０ ＶＯＴＩＶＯと統計的に同等で、種子ウジ虫の防除においてはこの製品を超える改善を示した。これらのデータは、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５とビフェントリンのような化学殺虫剤との組み合わせでのトウモロコシの種子の処理は、化学殺虫剤のみの含有物を上回って昆虫の防除を顕著に改善し、何らかの種類の昆虫防除のための市販されている製品よりも優れていることを示す。
Figure 0007086060000010
また、２番目の野外試験で、トウモロコシの種子が最初の試験と同様に、１）化学対照ＭＡＸＩＭ＋ＡＰＲＯＮ ＸＬ（“ＦＣ”という）、２）ＦＣ＋ビフェントリン、３）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ １２５０ ＶＯＴＩＶＯ、４）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ ２５０及び５）ＦＣ＋ビフェントリン＋ＲＴＩ５４５の芽胞を含む懸濁液で処理された。ウィスコンシン州での別の野外試験において、処理されたトウモロコシの種子がハリガネムシ存在下で植えられ、種子ウジ虫が問題にならないように肥料が与えられなかった。トウモロコシの根におけるハリガネムシによる摂食の被害が植えてから４１日後に評価された。
結果が下の表Ｘに表されており、上記の表ＩＸと同様の結果が示されている。具体的には、殺虫剤ビフェントリンと組み合わされたＢ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の含有物は、ビフェントリンのみで処理された種子を上回るパーセント出芽、植物の立ち性、活力並びにハリガネムシの防除において顕著な改善を示した。加えて、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５及びビフェントリンの組み合わせの結果は、ハリガネムシの防除の点で製品ＰＯＮＣＨＯ １２５０ ＶＯＴＩＶＯと統計的に同等か、それより優れていた。
Figure 0007086060000011
また、ＰＯＮＣＨＯ ＶＯＴＩＶＯと比較して、化学殺虫剤及びＲＴＩ５４５の芽胞の組み合わせでの種子の処理後のトウモロコシの野外試験における平均収穫量が評価された。結果が下の表ＸＩに示されている。殺虫剤ビフェントリンと組み合わせたＢ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の含有物がビフェントリンのみで処理された種子と比較して収穫量に顕著な改善を示した。さらに、ＲＴＩ５４５とビフェントリンとの組み合わせがＰＯＮＣＨＯ ５００ ＶＯＴＩＶＯ及びＰＯＮＣＨＯ １２５０ ＶＯＴＩＶＯの両方よりも優れており、収穫量を１３ブッシェル／エーカー（それぞれ１８０．５から１９３．７及び１８５．５から１９３．７ブッシェル／エーカー）増加させ、これは穀粒収穫量でそれぞれ６．８％及び４．２％増加を意味する。これらのデータは、ＲＴＩ５４５及びビフェントリンのような化学殺虫剤の組み合わせでのトウモロコシの種子の処理が化学殺虫剤のみの含有物を上回って収穫量を顕著に改善し、昆虫による被害を防除するために必要となる畝間への大量の化学殺虫剤の適用を減らすことを示唆する。
Figure 0007086060000012
ＲＴＩ５４５の芽胞でトウモロコシの種子を処理することによる昆虫の圧力下での成長への影響がさらに評価された。一組の温室試験において、トウモロコシの種子が次に説明されるように種子処理懸濁液で最初に処理され、続いて、土壌にハリガネムシがいない対照セットと併せて、有害生物であるハリガネムシが蔓延している土壌に植えられた（１個の種子を有するポットあたり１０匹のハリガネムシ）。種子処理懸濁液は次の通りである。１）化学対照ＭＡＸＩＭ＋ＡＰＲＯＮ ＸＬ（“ＦＣ”という）、２）ＦＣ、３）ＦＣ＋ビフェントリン（すべての処理に関して０１２５ｍｇ／種子）、４）ＦＣ＋ビフェントリン＋ＲＴＩ５４５ ５．０×１０６、５）ＦＣ＋ビフェントリン＋ＲＴＩ５４５ ５．０×１０６及び熱処理、６）ＦＣ＋ビフェントリン＋ＲＴＩ５４５ １．０×１０６、７）ＦＣ＋ＲＴＩ５４５ ５．０×１０６及び８）ＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ １２５０。処理された種子が％出芽に関して評価された。
結果が下の表ＸＩＩに示されている。殺虫剤ビフェントリンと組み合わされたＢ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の含有物の結果は、１００％出芽であって、ビフェントリンのみの含有物を上回って改善し、ハリガネムシなしの対照及びＦＣ＋ＰＯＮＣＨＯ １２５０化学処理と同等の結果をもたらした。ハリガネムシによる根の削り取り摂取によってトウモロコシ植物成長阻害が起こり、ＲＴＩ５４５のみ又はビフェントリンと組み合わせたＲＴＩ５４５が生存している植物における植物成長阻害を減少させた。ＲＴＩ５４５のみは植物損失を防ぐ活性を示したが、成長阻害に対する早期の保護の付与において殺虫剤ビフェントリンよりも劣っていた。しかし、ＲＴＩ５４５は、植物の成長時の植物成長阻害を防ぐ点ではより効果的であった（データ示さず）。これらのデータは、トウモロコシの種子の処理におけるＲＴＩ５４５の芽胞含有物が単独で又はビフェントリンのような化学殺虫剤との組み合わせで、害虫ハリガネムシが存在していても植物の健康を顕著に向上させることを示唆する。
Figure 0007086060000013
Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞に加えて、化学殺虫剤と組み合わされた、化学的に活性な成分の標準的な殺菌性の組み合わせでダイズ種子を処理することによる収穫量への影響を評価するために、実験が行われた。実験は以下に記載のように行われた。
（製剤）
水中のＲＴＩ５４５芽胞の濃度（１．０×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ）が１．０×１０６ｃｆｕ／種子の量で適用された。
ＦＣは、２．５ｇ／１００ｇ種子（フルジオキソニル）、１０ｇ／１００ｇ（ＴＰＭ）及び７．５ｇ／１００ｇ種子（メフェノキサム）で種子に適用されたフルジオキソニル、ＴＰＭ及びメフェノキサムを含む処方である。
チアメトキサムが５０ｇ／１００ｇ種子で、種子に適用された。
実験では、１）化学対照であるフルジオキソニル／ＴＰＭ／メフェノキサム（“ＦＣ”）、２）ＦＣ＋殺虫剤チアメトキサム、及び３）ＦＣ＋チアメトキサム＋Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞を含む溶液とダイズ種子が混合された。ハリガネムシが蔓延している３箇所（Ｎ＝３）に処理したダイズ種子が植えられ、収穫量が解析された。
結果が下の表ＸＩＩＩに示されている。チアメトキサムと組み合わされたＲＴＩ５４５の芽胞含有物は、収穫量に顕著な改善をもたらし、チアメトキサムのみで処理された種子と比較して１．６ブッシェル／エーカーだけ収穫量が増加し（６８．２から６９．８）、これは収穫量で２．３％増加に相当する。これらのデータは、ＲＴＩ５４５と化学殺虫剤との組み合わせで処理されたダイズ種子が殺虫剤のみの含有物を上回って収穫量を有意に改善し、昆虫による被害を防除するために必要となる畝間への大量の化学殺虫剤の適用を減らすことを示唆する。
Figure 0007086060000014
化学殺虫剤と組み合わされたＲＴＩ５４５の芽胞での種子又は畝間の処理を介した昆虫防除の改善に関して考えられる説明の１つが図１に示されている。具体的には、図１Ａは、化学殺虫剤のみ（すなわち、ＲＴＩ５４５なし）での昆虫防除を示す模式図である。図１Ａは、もっとも左に化学殺虫剤（内側の円周囲の暗い帯）で被覆された植物の種子（内側の円）を示しており、それは植物根圏における水平のマークで表された植物有害生物に囲まれている。図の中央の部分は、発芽した種子を示しており、拡散した殺虫剤が害虫から植物の種子の根を保護している状態を示している（保護が“Ｘ”印で表されている）。図のもっとも右には、根が化学殺虫剤の拡散領域を超えて成長したために、害虫からの植物の種子の根の保護が低下したことが示されている。図１Ｂは、植物の種子に対する被覆へのバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞の追加（又は植え付け時ごろのＲＴＩ５４５の芽胞の畝間への適用）がどのように殺虫剤被覆のみの使用を上回って昆虫防除を改善するかを示す。具体的には、図１Ｂの図のもっとも右が、根が化学殺虫剤の拡散領域を超えて成長しても、植物の根圏にバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５がある結果として、植物の種子の根を害虫から継続的に保護することを示す。
実施例９
蔓延した土壌のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５単離株による線虫の防除
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５株のダイズ及びジャガイモにおける線虫の蔓延を抑制する能力が下記のように評価された。
サザン・ネコブセンチュウが蔓延した土壌にダイズ植物体が植えられた状態で温室試験が行われ、１．０×１０６ｃｆｕ／種子の量でＲＴＩ５４５の芽胞が適用された種子処理の効果が評価された。ダイズ植物体がサザン・ネコブセンチュウ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）の生きた卵が蔓延する土壌に植えられた。製品のラベルで示された割合で化学的活性成分を独立して含有する製品ＰＯＮＣＨＯ ＶＯＴＩＶＯ（ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰＳＣＩＥＮＣＥ ＬＰ；Ａ．Ｉ．＝４０．３％ クロチアニジン、８．１％バチルス・フィルムスＩ－１５８２）及びＡＶＩＣＴＡ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（ＳＹＮＧＥＮＴＡ；Ａ．Ｉ．＝１１．７％ チアメトキサム、１０．３％ アバメクチン、２．３４％ チアベンダゾール、０．３％ フルジオキソニル、０．２３％ メフェノキサム、０．１２％ アゾキシストロビン）それぞれで種子が処理された。データが下の表ＸＩＶに示されている。開始から６３日後、ＲＴＩ５４５細胞及び化学的組み合わせＡＶＩＣＴＡ ＣＯＭＰＬＥＴＥで処理された種子においてポットあたりの線虫の卵の個数に統計的な差はなかったが、ＲＴＩ５４５で処理した種子におけるポットあたりの線虫の卵の個数は、ＰＯＮＣＨＯ ＶＯＴＩＶＯで処理された種子のそれよりも少なかった。６３日後、すべての処理において、ポットあたりの幼虫の個数に統計的な差はなかった。これらのデータは、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５によるダイズに対する線虫防除における好ましい影響を示す。
Figure 0007086060000015
線虫グロボデラ種が自然に蔓延した土壌にジャガイモ植物体が植えられた状態で温室試験が行われ、バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５細胞での土壌の処理の効果が評価された。この実験では、根バイオマスのｇあたりの嚢胞の個数に対するＲＴＩ５４５細胞での土壌強化の影響が試験の開始後６０日で評価された。ジャガイモ（線虫に感受性のある種“Ｂｉｎｔｊｅ”）が、グロボデラ種が蔓延する土壌に植えられ（対照）、土壌１リットルあたり１０Ｅ９ｃｆｕのバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞で強化された（ＲＴＩ５４５）。結果が図５のグラフに示されている。追加の土壌処理：ＶＹＤＡＴＥ製品（Ｖｙｄａｔｅ、ＤＵＰＯＮＴ、Ａ．Ｉ．＝オキサミル［メトイルＮ’Ｎ’－ジメチル－Ｎ－［（メチルカルバモイル）オキシル）オキシ］－１－チオオキサムイミデート）、ＢＩＯＡＣＴ製品（ＢＡＹＥＲ ＣＲＯＰＳＣＩＥＮＣＥＳ ＬＰ、Ａ．Ｉ．＝ｏｆ Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｌｉｌａｃｉｎｕｓ株２５１）、ＣＡＲＥＸ製品（ＣＡＲＥＸ、ＮＵＦＡＲＭ、ピリダベン）、及びバチルス・チューリンゲンシス亜種ｋｕｒｓｔａｋｉ ＨＤ－１）が本試験に含まれている。製品は、製品のラベルで示された割合で適用された。図５に見られるように、ＲＴＩ５４５細胞で処理された土壌における根バイオマスのｇあたりの嚢胞の個数は、化学的活性成分を含有する製品を含むすべての処理と比較して有意に抑制された。
実施例１０
リゾクトニア菌を接種された綿実のバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５での処理
病原体防除に関して、種子が化学活性剤に加えてＲＴＩ５４５株で処理された場合の黒変病の圧力がある中での綿の出芽、根病害、及び収穫量に与える影響を調べるために実験が行われた。
具体的には、綿における実験が次のように構築された。１）非処理の種子（ＵＴＣ）、２）製造者のラベルに従ったフルジオキソニル＋メフェノキサム＋イミダクロプリドのベース組み合わせで処理された種子（“Ｂ”とする）、３）５×１０＋５ｃｆｕ／種子のＲＴＩ５４５を加えたベースで処理された種子（Ｂ＋ＲＴＩ５４５）、及び４）表示された指示書に従ってＶＩＢＲＡＮＣＥ（活性成分セダキサン、ＳＹＮＧＥＮＴＡ ＣＲＯＰ ＰＲＯＴＥＣＴＩＯＮ，ＩＮＣ）を加えたベースで処理された種子（Ｂ＋ＶＩＢＲＡＮＣＥ）。野外試験がジョージア州で行われた。試験では、種子が成長し始めたときに感染させるために、所定の割合で植え付けの時点で種子を乾燥接種物に混合することで、リゾクトニア菌が接種された。綿の出芽の平均パーセントが下の表ＸＶに表されている。
表ＸＶの結果は、ベースに加えられたＲＴＩ５４５の芽胞での処理は、パーセント出芽において化学的ベースのみのそれを超える有意な改善を示した（ベースのみの４５％に対して６７％）。さらに、ＲＴＩ５４５での処理は、化学的活性体を含む市販製品ＶＩＢＲＡＮＣＥを追加したベースと同様に機能した。このため、ＲＴＩ５４５での種子処理は、過酷な病原体の圧力条件下でさえも出芽に有意な改善をもたらす。
Figure 0007086060000016
実施例１１
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５でのコムギ種子の処理による成長及び収穫量への影響
実験が行われ、Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞のみ、又は化学殺真菌剤及び化学殺虫剤のいずれか又は両方との組み合わせで処理されたコムギ種子による昆虫圧力下での成長及び収穫量に対する影響を評価した。より具体的には、成長、収穫量及びコムギに対する有害生物であるハリガネムシ及び地虫の防除についての影響がウィスコンシン州の野外試験で測定された。下記のように実験が行われ、種子への、及び殺真菌剤ベースを加えた種子へのＢ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞の追加と、殺真菌剤ベースに加え、２つの濃度の殺虫剤であるビフェントリンと組み合わせへのＲＴＩ５４５の芽胞の追加とが比較された。
野外試験の実験では、コムギ種子が１）化学殺真菌剤ベースのジフェノコナゾール／テブコナゾール／ＴＰＭ／メフェノキサム（“ＦＣ”という）、２）ＦＣ＋Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５（ＲＴＩ５４５ １０６ｃｆｕ／ｇ種子）の芽胞、３）ＦＣ＋ビフェントリン（２０ｇ／種子）、４）ＦＣ＋ビフェントリン（２０ｇ／種子）＋ＲＴＩ５４５ １０６ｃｆｕ／ｇ種子、５）ＦＣ＋ビフェントリン（５０ｇ／種子）、及び６）ＦＣ＋ビフェントリン（５０ｇ／種子）＋ＲＴＩ５４５ １０６ｃｆｕ／ｇ種子を含む懸濁液で処理された。
処理されたコムギ種子がウィスコンシン州での野外試験において害虫であるハリガネムシ及び地虫が蔓延する土壌に植えられた。集められ、解析された割合は、％出芽、％ハリガネムシ被害、％地虫被害、植物活力及び収穫量であった。昆虫の摂食被害の深刻さが植えてから３５日後の目視検査で評価され、活力が低いことが１で示され、活力が高いことが５で示される１～５で植物活力が格付けされた。
結果が下の表ＸＶＩに示されている。Ｂ．チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の芽胞それぞれでの種子処理、及び殺真菌剤ベースのみ又は殺虫剤のビフェントリンとの組み合わせのいずれかを伴うＲＴＩ５４５の芽胞での処理は、パーセント出芽、活力、ハリガネムシ及び地虫の防除、並びに収穫量において有意な改善をもたらした。試験されたすべての場合において、コムギ種子処理でのＲＴＩ５４５の芽胞含有物は、成長、活力、有害生物防除及び収穫量で有意な改善をもたらした。
Figure 0007086060000017
実施例１２
リゾクトニア菌を接種されたダイズの成長と収穫量に対するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５での種子処理の効果
リゾクトニア菌保護を与えるベースの殺真菌剤／殺虫剤化学処理に加えたＲＴＩ５４５の有効性を試験するために野外試験がジョージア州クイットマンで行われ、非処理の種子、上記ベース又は合成されたベースに加えたセダキサンを含む陽性対照と比較された。
ダイズ種ｃｖ．パイオニア（Ｐｉｏｎｅｅｒ）９３Ｙ９２のダイズ種子が、化学的及び生物的処理のために調製され、種子に同時に適用された別個の懸濁液で処理された。種子が瓶に入れられ、生成物が均一に種子を被覆するまで、瓶が改造された塗料撹拌機で撹拌された。ベースの化学的処理は、単一製剤として１）フルジオキソニル１２．８ｇ／Ｌ、２）３８．４ｇ／Ｌのメフェノキサム、３）３８．４ｇ／Ｌのチオファネートメチル（ＴＰＭ）及び４）２５６ｇ／Ｌのチアメトキサムを含む４つの活性物から構成され、４１．４ｍＬ／１４０，０００種子で適用された。Ｖｉｂｒａｎｃｅ（５００ｇ／Ｌのセダキサン）が陽性対照処理のために独立して種子処理として適用された。ＲＴＩ５４５株の乾燥技術が用いられ、水で希釈され、５×１０５ｃｆｕ／種子の適用割合が得られた。生成物が少なくとも６５ｍＬ／１４０，０００種子まで水に懸濁され、均一な適用が確保された。試験は９メートル区画ごとに１．８メートルとなる無作為な完全ブロック試験（４回反復）から構成された。処理されたダイズ種ｃｖ．の種子及び非処理の種子が円錐状の播種機を用いて、種子の列の間隔９０ｃｍで２．５ｃｍの深さに１３種子／メートルの播種割合で砂地に植えられた。リゾクトニア菌の接種物が混合され、種子とともに植えられた。区画とダイズ植物体とが、慣行耕起を含み、必要に応じて灌漑が補われた一般的に受け入れられているダイズのための農学的条件下で処理された。出芽、（５を最高とする１～５の定性的尺度での）活力に関して成長時期に渡って植物が評価され、続いてブッシェル／エーカー及びｋｇ／ヘクタールに変換された収穫量を評価するために収穫された。下の表ＸＶＩＩに結果がまとめられている。
Figure 0007086060000018
リゾクトニア菌の影響は、立ち性の抑制、活力の抑制及び収穫量の低下である。すべての植物の数、活力及び収穫の評価に関して非処理の種子を超えてベースの処理が有意に改善された観点において接種が有効であった。
化学的ベースへのＲＴＩ５４５の追加において、化学的ベースと比較して、３回すべての評価時で立ち性が有意な増加となり、２回の評価時で有意に活力が増加し、数値的に高い収穫量となった。立ち性と活力評価の減少は、植物の死滅によるものであろう。リゾクトニア菌防除に関して登録された活性である、合成されたベースへのセダキサンの追加によって、ベースの合成されたものよりも増加した出芽、活力及び数値的に高い収穫量がもたらされた。ＲＴＩ５４５の追加がすべての割合に関してセダキサン処理に類似することは、この株が当該試験においてリゾクトニア菌による被害を減じる点で同等に有効であることを示している。
実施例１３
ハリガネムシ及び種子ウジ虫が蔓延する圃場に植えられたトウモロコシの成長と収穫量に対するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５での種子処理の効果
野外試験がウィスコンシン州で行われ、ベースの殺真菌剤（Ｍａｘｉｍ及びＡｐｒｏｎ ＸＬの両方が５．２ｍＬ／１００ｋｇ）又はクロチアニジンを加えた当該ベースの殺真菌剤（０．２５ｍｇ／種子）又はビフェントリンを加えた当該ベースの殺真菌剤（０．１２５ｍｇ／種子）又はクロラントラニリプロールを加えた当該ベースの殺真菌剤（０．２５及び０．５ｍｇ／種子で評価された２つの割合）又はクロラントラニリプロール（０．２５ｍｇ／種子）に組み合わされたビフェントリン（０．１２５ｍｇ／種子）のいずれかに加えてＲＴＩ５４５の有効性が試験された。高いレベルの保護を示す陽性対照として、クロチアニジンがベースの殺真菌剤と組み合わされて１．２５ｍｇ／種子で適用され、この高い割合は、評価もされたクロチアニジンの低い割合の量の５倍に相当する。
トウモロコシの種子（ｃｖ．Ａｇ Ｖｅｎｔｕｒｅ Ｇ５８９１種）が同時に種子に適用された化学的及び生物学的な処理のために調製された別個の懸濁液で処理された。種子が瓶に入れられ、生成物が均一に種子を被覆するまで、瓶が改変された塗料撹拌機で撹拌された。ベースの化学的処理は、１）４０．３％のフルジオキソニル、２）３３．３％のメフェノキサム、３）１８．４％のクロラントラニリプロール、４）６００ｇ／Ｌのクロチアニジン、及び５）４００ｇ／Ｌのビフェントリンを含む３種の市販の製剤から構成された。ＲＴＩ５４５株の乾燥技術が用いられ、水で希釈され、１×１０６ｃｆｕ／種子の適用割合が得られた。生成物が少なくとも６００ｍＬ／１００ｋｇまで懸濁され、均一な適用が確保された。処理１３は高いレベルのハリガネムシ保護のための陽性対照としてのベース＋クロチアニジン１．２５ｍｇ／種子である。試験は３メートル×１５メートルの区画の無作為な完全ブロック試験（４回反復）から構成される。トウモロコシの種子が円錐状の播種機を用いて、列の間隔７５ｃｍで６．２５ｃｍの深さに９３，９００種子／ヘクタールの播種割合でミルフォードシルト質粘土ローム土に植えられた。区画に種子ウジ虫を引き寄せ、卵を産ませるために、播種後に区画の頂部に肥料が散布された。区画とトウモロコシ植物体とが、地域の上記平均となる雨量のある無耕農業を含む一般的に受け入れられているトウモロコシのための農学的条件下で処理された。出芽、（１が低い活力及び５が高い活力である１～５の定性的尺度での－区画の豊かさが評価された）活力、ハリガネムシ及び種子ウジ虫による食害（５０個の植物を抽出し、ハリガネムシ又は種子ウジ虫による根の被害に関して評価することより決定される）に関して成長時期に渡って植物が評価され、続いて収穫量を評価するために収穫された。表ＸＶＩＩＩに結果がまとめられている。
Figure 0007086060000019
ハリガネムシによる摂食の影響によって立ち性が減少し、活力が低下し、せん根によって萎縮し、根が損傷し、収穫量が減少した。また、種子ウジ虫が立ち性を減少させ、種子を摂食し、萎縮が引き起こされた。
殺真菌剤ベースへのＲＴＩ５４５の追加（処理３に対する処理２）によって、植えた後４２日及び１６４日で出芽数が有意に増加し、ハリガネムシの摂食によって起こる根の損傷が抑制され、抗真菌剤ベースを上回って収穫量が有意に増加するという結果がもたらされた。ＲＴＩ５４５は殺虫剤保護をもたらしたが、評価された合成製品よりも保護の程度が低かったことは、十分な性能を確保するために殺虫剤にこの製品を添加することの利点を示している。
０．２５ｍｇ／種子で適用されたクロチアニジンへのＲＴＩ５４５の追加（処理３及び４それぞれ）は、４つの評価時点すべてで出芽を有意に増加させ、３つの評価時点すべてで活力を有意に増加させ、種子ウジ虫及びハリガネムシによって引き起こされた食害を減少させ、収穫量を有意に増加させた。低い割合のクロチアニジンへのＲＴＩ５４５の追加は、１．２５ｍｇ／種子で適用された高い割合のクロチアニジンと同等の性能をもたらした。
ビフェントリンへのＲＴＩ５４５の追加は（それぞれ処理５及び６での０１．２５ｍｇ／種子）、１つの評価時点での出芽を有意に増加させ、１つの評価時点での活力を有意に増加させ、最後の評価時点での種子ウジ虫によって引き起こされた食害を有意に減少させ、収穫量を有意に増加させた。
クロラントラニリプロールへのＲＴＩ５４５の追加は（それぞれ処理７及び８での０．２５ｍｇ／種子）、３つの評価時点での出芽を有意に増加させ、収穫量を有意に増加させた。
クロラントラニリプロールへのＲＴＩ５４５の追加は（それぞれ処理９及び１０での０．５ｍｇ／種子）、４つの評価時点すべてで出芽を有意に増加させ、３つの評価時点すべてで活力を有意に増加させ、種子ウジ虫によって引き起こされた食害を有意に減少させ、ハリガネムシによる食害を数値的に減少させ、収穫量を有意に増加させた。クロラントラニリプロールへのＲＴＩ５４５の追加によって（０．５ｍｇ／種子）、当該製品が高い割合のクロチアニジン（１．２５ｍｇ／種子）と同等に機能するという結果となった。
クロラントラニリプロールへのＲＴＩ５４５の追加は（処理９及び１０それぞれ）、４つの評価時点すべてで出芽を有意に増加させ、３つの評価時点すべてで活力を有意に増加させ、種子ウジ虫及びハリガネムシによって引き起こされた食害を有意に減少させ、収穫量を有意に増加させた。ＲＴＩ５４５を追加したこの組み合わせによって、この製品が高い割合のクロチアニジン（１．２５ｍｇ／種子）と同等又はそれを上回って機能し、この処理の最終収穫量が高い割合のクロチアニジンよりも高い８ブッシェル／エーカーを超えるという結果をもたらした。
これらの結果は、ＲＴＩ５４５によってもたらされる殺虫剤保護は、合成された殺虫剤の３つの特有のＩＲＡＣクラスによってもたらされる保護を増強することを示す。これらの結果は、ＲＴＩ５４５がそれ自体による保護をもたらすが、有効な殺虫剤との組み合わせによる補助は、明らかな利益をさらに高い程度にすることを確かにすることを示す。
実施例１４
トウモロコシ野外試験でのバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の畝間への適用
ＲＴＩ５４５でのトウモロコシの畝間処理が北アメリカにおける様々な場所での複数の野外試験で試験され、ハリガネムシ（メラノタス属種）及びコーン・ルートワーム（ディアブロチカ属種）に対する有効性が評価された。個々の北アメリカでの試験について非処理対照と比較された収穫量及びいくつかの処理の作物被害についての影響が集約され、試験の平均として、非処理対照と比較して％収穫増加及び％損害減少として次の表にまとめられた。７個の試験がハリガネムシに関して評価された。１８個の試験がコーン・ルートワームに関して評価された。コーン・ルートワームによる酷い被害を伴う５個の試験が分けて平均化された。
Figure 0007086060000020
Figure 0007086060000021
７個のハリガネムシ試験からの収穫量データによって、ＲＴＩ５４５を含む処理が、ビフェントリンのみ及びもっとも高い割合での市販の標準的なテフルトリンを上回る少しの利点をもたらすことが示された。コーン・ルートワームに関する１８個の試験からのデータによって、ＲＴＩ５４５を含む処理での収穫量が、ビフェントリンのみ及びもっとも高い割合でのテフルトリンと同等か又はそれよりも少し高い収穫量をもたらすことが示された。また、これら１８個の試験からのデータによって、殺虫剤と組み合わせられたＲＴＩ５４５で処理されたトウモロコシが業界標準の最大の割合でのテフルトリン又は最大の割合でのビフェントリン又はＲＴＩ５４５が処理に単独で用いられた場合よりもコーン・ルートワームが蔓延した土壌にけるトウモロコシの根の被害を減らす結果となることが示された。コーン・ルートワームによる圧力がかなりある場合、被害の評価での減少は典型的なルートワームの圧力下の処理と同等であったが、パーセント収穫量増加は良好であった。全体として、これらの試験のデータは、ビフェントリンと組み合わされたＲＴＩ５４５は、非処理の領域又は業界標準のテフルトリンで処理された領域と比較して、トウモロコシの収穫量を増加させ、トウモロコシの根への昆虫による被害を減少させることが示された。
また、欧州において、ＲＴＩ５４５で畝間処理されたトウモロコシを含む野外試験が行われ、ハリガネムシ（アグリオテス種属）に対する有効性が評価された－データは示さない。
実施例１５
リゾクトニア菌を接種されたピーナッツの成長と収穫量に対するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の影響
ジョージア州で野外試験が行われ、リゾクトニア・ソラニを接種されたピーナッツの種子処理として本発明の生物学的組み合わせの有効性が試験された。
ピーナッツの種子が、２００ｇ／１００ｋｇ種子の最終適用割合でＲＴＩ５４５を含む乾燥細粉製剤で処理され、結果として３．０×１０６ ＣＦＵ／ｇ種子でＲＴＩ５４５が適用され、１９５ｇ／１００ｋｇ種子の適用で、フルジオキソニル（２％）、メフェノキサム（０．４％）及びアゾキシストロビン（３．２％）を含有する米国で登録されたピーナッツ製品であるＤＹＮＡＳＴＹ ＰＤが同時に適用された。種子が瓶に入れられ、生成物が均一に種子を被覆するまで撹拌された。
試験は６フィート×３０フィート（約１．８メートル×９．１メートル）の区画を用いた無作為な完全ブロック試験から構成された。処理された、及び非処理のピーナッツ（Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ、ｖａｒ．ＧＡ ０６）の種子が植えられた。円錐状の播種機を用いて、砂壌土に、列の間隔３６インチ（０．９ｍ）で１．２５インチ（３ｃｍ）の深さで種子が植えられた。リゾクトニア種が区画に接種され、確実に蔓延させたれた。区画とピーナッツ植物体とが、それらが収穫の状態になるまで必要に応じた慣行耕起及び灌漑を含む、一般的に受け入れられているピーナッツのための農学的条件下で処理された。成長期間に渡って、出芽、（１～５の定性的尺度での）活力について植物が評価され、収穫量を評価するために収穫された。結果が表ＸＸＩにまとめられている。
Figure 0007086060000022
３回すべての評価時において、すべての種子処理が非処理対照（ＵＴＣ）よりも高い立ち性をもたらした。３回すべての評価時において、ＲＴＩ５４５を含む処理は、もっとも高い出芽をもたらした。非処理の種子は、３回すべての評価時においてもっとも低い活力であった。ＲＴＩ５４５を含む処理はＵＴＣ及びベースの化学的処理よりも強い活力をもたらした。すべての製品は、ＵＴＣよりも有意に高い収穫量をもたらした。ＲＴＩ５４５を含む処理は、ベースの化学的処理よりも優れていた。
実施例１６
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ ５４５種子処理のネグサレセンチュウに対する影響
ネグサレセンチュウ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）に対する活性を評価するために種子処理されたトウモロコシの土壌試験が温室内で行われた。トウモロコシ（ｃｖ．Ｖｉｋｉｎｇ）種子がフルジオキソニル（１．１ｍｌ／ＳＵ）及びメタラキシル－Ｍ（１．１ｍｌ／ＳＵ）のベース種子処理で処理された（すべての種子）。また、いくつかの種子がＰＯＮＣＨＯ／ＶＯＴＩＶＯ（８０ｍｌ／ＳＵのクロチアニジン＋Ｂ．フィルムスＩ－１５８２）、５×１０５ＣＦＵ／種子でのＲＴＩ５４５、１×１０６ＣＦＵ／種子でのＲＴＩ５４５、又はＲＴＩ５４５（５×１０５ＣＦＵ／種子）＋バチルス・サブチィリスＣＨ２０１株（２．５×１０６ＣＦＵ／種子）＋バチルス・リケニフォルミスＣＨ２００株（２．５×１０６ＣＦＵ／種子）若しくはＲＴＩ５４５（５×１０５ＣＦＵ／種子）＋バチルス・ベレゼンシスＲＴＩ３０１株（５×１０５ＣＦＵ／種子）＋バチルス・リケニフォルミスＣＨ２００株（２．５×１０６ＣＦＵ／種子）のいずれかの混合物で処理された。
１種類のアッセイでは、処理された種子が９０ｍｌの土壌（８０．４％砂、１４．８％シルト、４．８％粘土、有機物１．１％、ｐＨ６．９）を含む円すい型の容器に植えられた。種子を植えた後、２００μｌの担体（２％メチルセルロース）中に種子あたり４０００匹の線虫（Ｊ２及び成虫のステージを混合）が同日に土壌に接種された。対照には、非接種土壌でのベースの種子処理が施された種子が用いられた。試験植え付けには、噴霧スプリンクラーを用いて上から給水された。出芽から２日後（データ示さず）及び７日後にＷｉｎＲｈｉｚｏ（商標）ソフトウェアを用いて根の全長に関して試験が評価された。根長データ及び線虫％減少データが逆正弦平方根変換を用いて変換された後、α＝１での分散分析フィッシャー検定を用いて分散分析解析された。
Figure 0007086060000023
トウモロコシの苗へのネグサレセンチュウの接種は、根の全長を数値的に減少させた。ＰＯＮＣＨＯ／ＶＯＴＩＶＯ（市販の標準）で処理された苗の根の全長は、接種された非処理の苗よりも長く、非処理で非接種の苗と同等であった。ＲＴＩ５４５処理の苗の根の全長は、接種された非処理の苗（３０～３４％）と比較して有意に増加し、統計的に同等であるが数値的にはＰＯＮＣＨＯ／ＶＯＴＩＶＯで処理された苗の根の全長よりも長かった。
接種において２０００匹の線虫／種子を用いた同様の試験が１３０ｍｌの土壌で行われ、線虫の接種から８週間後の根あたりの線虫の匹数及び植物の乾燥させていない頂部の重量が測定された。結果が表ＸＸＩＩＩに表されている。ネグサレセンチュウへの感染は、トウモロコシ植物体の乾燥させていない頂部の重量（ＦＴＷ）のかなりの減少をもたらした。接種された対照植物体のＦＴＷは、非接種の植物体と比較して５０％だけ減少した。ＲＴＩ５４５の高い割合は、標準のＰＯＮＣＨＯ／ＶＯＴＩＶＯ及び接種された線虫対照と比較して統計的に高いＦＴＷをもたらした。これらの結果は、ＲＴＩ５４５種子処理が線虫という有害生物の存在下でも植物の成長を維持することによって、線虫の蔓延に対する植物の耐性を増加させることを示唆している。さらに、ＲＴＩ５４５が他の株と組み合わせ（ＲＴＩ５４５（１×１０５ＣＦＵ／種子）＋バチルス・サブチィリスＣＨ２０１株（２．５×１０６ＣＦＵ／種子）＋バチルス・リケニフォルミスＣＨ２００株（２．５×１０６ＣＦＵ／種子）若しくはＲＴＩ５４５（１×１０５ＣＦＵ／種子）＋ＲＴＩ３０１株（５×１０５ＣＦＵ／種子）＋バチルス・リケニフォルミスＣＨ２００株（２．５×１０６ＣＦＵ／種子））において低い割合で用いられた場合に、植物の成長／ＦＴＷに対する同様の有利な効果が見られた。さらに、高い割合（１．０×１０６ＣＦＵ／種子）でのＲＴＩ５４５種子処理はネグサレセンチュウのかなり良好な防除をもたらした（根における線虫の匹数の５０％減少）。ＰＯＮＣＨＯ／ＶＯＴＩＶＯは、根における線虫の匹数を減らさなかった。
Figure 0007086060000024
ＲＴＩ５４５が土壌灌注として２．５ｘ１０１１ＣＦＵ／ヘクタールの割合で適用された同様の試験では、根あたりのネグサレセンチュウの匹数がアバメクチンの９５％に対して７１％減少となった。温室でのネグサレセンチュウの卵及び成虫（２０００個体／区画）が蔓延する土壌を有する区画への土壌潅注試験において、２．５×１０１３ＣＦＵ／ヘクタールのＲＴＩ５４５は、根あたりの線虫の匹数を、カズサフォスによる８６％減少に対して８０％減少させた。
実施例１７
土壌灌注アッセイにおけるダイズシストセンチュウに対するバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の影響
ダイズシストセンチュウ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ）に対するＲＴＩ５４５の活性が温室内の土壌潅注アッセイで調べられた。個々のダイズ（ｃｖ．ＡＧ４７３０）種子が円すい型容器内の１２０ｍｌの土壌（８０．４％砂、１４．８％シルト、４．８％粘土、有機物１．１、ｐＨ６．９）に植えられ、個別の底面給水で給水された。植えてから２１日目に容器あたりに１ｍＬの２％メチルセルロース中の４０００個の卵の割合で線虫の卵で容器が接種された。ＲＴＩ５４５の土壌潅注（１００ｍｌの土壌あたり１０ｍｌの体積）適用及びＡＧＲＩ－ＭＥＫ ０．１５ ＥＣ（ａ．ｉ．２％アバメクチン）及びＶＥＮＥＲＡＴＥ ＸＣ（９４．４６％ 熱殺菌されたバークホリデリア属種（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｓｐｐ．）Ａ３９６株細胞及び使用済みの発酵培地）が植えてから７日目及び２１日目に適用された。試験された割合は、２．５×１０１２ＣＦＵ／ヘクタール、２．５×１０１３ＣＦＵ／ヘクタール及び２．５ｘ１０１４ＣＦＵ／ヘクタールでのＲＴＩ５４５の洗浄された芽胞、種子処理表示割合に従った１ｐｐｍ（０．０１ｍｇ ａ．ｉ．／植物）及び１０ｐｐｍ（０．１ｍｇ ａ．ｉ．／植物）のアバメクチン、及び４．５×畝間割合に相当する５％ｖ／ｖ（５００ｍｇ／植物）でのＶＥＮＥＲＡＴＥ ＸＣであった。試験は７０日目（接種から７週間後）で評価された。評価は根及び土壌からの嚢胞の抽出並びに実体顕微鏡下での嚢胞の総数を計数することによって行われた。
Figure 0007086060000025
データは、ＲＴＩ５４５が６６％まで線虫の嚢胞の個数を減らしたことを示す。試験された割合と活性との間に明確な用量反応はなかった。ＲＴＩ５４５の活性は生物学的な標準であるＶＥＮＥＲＡＴＥ ＸＣと統計的に違いはなかった。化学的な標準であるアバメクチンは、もっとも高い活性を有していた。０．０１ｍｇ／植物体の割合が７９％減少をもたらし、０．１ｍｇ／植物体の割合が９６％減少をもたらした。
実施例１８
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５を含む懸濁剤
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５を含む代表的な懸濁剤が表ＸＸＶにまとめられている。それらはＲＴＩ５４５の芽胞を適した混合容器又はホモジナイザーで他の成分と混合することで調製された。
Figure 0007086060000026
実施例１９
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５及びビフェントリンを含む懸濁剤
バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５及びビフェントリン殺虫剤を含む代表的な懸濁剤が表ＸＸＶＩ及び表ＸＸＶＩＩにまとめられている。それらはＲＴＩ５４５の芽胞を適した混合容器又はホモジナイザーで他の成分と混合することで調製された。実施例１９Ｃは発泡性組成物であって、植えるときに種子又は畝間に泡として適用できる。発泡性組成物１９Ｃは、任意に水で希釈されたてもよいし、泡を調製するための大量のガラス玉のような発泡担体を含む発泡チャンバーにおいて、加圧した空気等の気体と混合されてもよい。
Figure 0007086060000027
Figure 0007086060000028
下の表ＸＸＶＩＩＩに示されるように、高温での保管の間の芽胞の安定性はとても良好であった。製剤１８Ｄは５４℃で２週間保管されてもＲＴＩ５４５の芽胞の濃度にほとんど変化はなかった。
Figure 0007086060000029
本明細書で言及されたすべての刊行物、特許出願公報、特許公報、及び他の参照は、ここで開示された主題関連の当業者のレベルを示唆する。すべての刊行物、特許出願公報、特許公報、及び他の参照は、あたかも個々の刊行物、特許出願公報、特許公報、及び他の参照が具体的にかつ個別に参照によって組み入れられるように指示されたかのように、同じ範囲を参照することにより本明細書に組み入れられる。多くの特許出願公報、特許公報、及び他の参照が本明細書で参照されるが、当該参照は、これら文書のいずれもが本技術分野の共通の一般常識の一部を形成するという承認を構成するわけではないことが理解される。
上述の主題は、理解を明確にするこための説明及び例を目的としてある程度詳しく説明されたが、ある程度の変更と改変とが添付の請求項の範囲内で行われうることが当業者によって理解される。
（付記）
（付記１）
ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物と、
農学的に許容されるアジュバントと、
を含み、
植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のために植物に適用される、
組成物。
（付記２）
前記植物有害生物は、昆虫、線虫、植物真菌性病原体又は植物細菌性病原体を含む、
付記１に記載の組成物。
（付記３）
前記バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物は、芽胞又は栄養細胞又は無細胞抽出物の形態である、
付記１又は２に記載の組成物。
（付記４）
前記アジュバントは、植え付けマトリックス、担体、結合剤、界面活性剤、分散剤、又は酵母抽出物を含む、
付記１から３のいずれか一つに記載の組成物。
（付記５）
植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における病原性感染に対する保護をもたらすことに適した量で含有される殺虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺細菌剤、バイオスティミュラント、除草剤、植物抽出物、微生物抽出物、植物成長調整物質、又は肥料の１つ又は組み合わせをさらに含む、付記１から４のいずれか一つに記載の組成物。
（付記６）
化学殺虫剤をさらに含む、付記１から５のいずれか一つに記載の組成物。
（付記７）
前記化学殺虫剤は、クロラントラニリプロール、クロレトキシフォス、クロルピリフォス－ｅ、シアントラニリプロール、シクラニリプロール、シペルメトリン、ジクロロプロペン、フルピラジフロン、ガンマ－シハロトリン、プロフェノフォス、テブピリムフォス、テフルトリン、カッパー－ビフェントリン、カッパー－テフルトリン、カルボフラン、カルボスルファン、オキサミル、チオジカルブ、クロルピリフォス、クロルピリフォス－ｅ、クロルピリフォス－メチル、ジアジノン、ホレート、テルブフォス、フィプロニル、アセタミプリド、クロチアニジン、イミダクロプリド、チアクロプリド、チアメトキサム、アバメクチン、フロニカミド、フルベンジアミド、ビフェントリン、ラムダ－シハロトリン、シペルメトリン、ゼータ－シペルメトリン、デルタメトリン、ピリダベン又はそれらのあらゆる混合物を含む、付記６に記載の組成物。
（付記８）
前記化学殺虫剤はビフェントリンを含む、付記７に記載の組成物。
（付記９）
化学殺真菌剤をさらに含む、付記１から５のいずれか一つに記載の組成物。
（付記１０）
前記化学殺真菌剤は、チアベンダゾール、フルキサピロキサド、ペンフルフェン、セダキサン、ビテルタノール、シプロコナゾール、ジフェノコナゾール、フルキンコナゾール、フルトリアフォル、イプコナゾール、ミクロブタニル、プロチオコナゾール、トリアジメフォン、トリアジメノール、テブコナゾール、トリチコナゾール、プロクロラズ、イマザリル、ベノミル、カルベンダジム、ヒメキサゾール、アゾキシストロビン、フルオキサストロビン、ピラクロストロビン、トリフロキシストロビン、カルボキシン、フルトラニル、メタラキシル、メフェノキサム、ペンチオピラド、フルオピラム、シルチオファム、フルアジナム、ピリメタニル、フルジオキソニル、イプロジオン、トリシクラゾール、カプタン、ダゾメット、マンコゼブ、メタム、チラム、グアザチン、トルクロフォス－メチル、ペンシクロン、チオファネート－メチル、フェンピコキサミド、メフェントリフルコナゾール、フルインダピル、又はそれらのあらゆる混合物を含む、付記９に記載の組成物。
（付記１１）
化学殺線虫剤をさらに含む、付記１から５のいずれか一つに記載の組成物。
（付記１２）
前記化学殺線虫剤は、ベノミル、フェナミホス、カジュサフォス、エトプロホス、フォスチアゼート、クロロピクリン、ダゾメット、フルエンスルホン、オキサミル、１，３－ジクロロプロペン（テロン）、メタムナトリウム、メタムカリウム、メタム塩、臭化メチル、アリルイソチオシアネート、フルアザインドリジン、チオキサザフェン、フルオピラム、又はそれらのあらゆる混合物を含む、付記１１に記載の組成物。
（付記１３）
液体肥料又は作物栄養物と混合可能な製剤に含まれている、付記１から１２のいずれか一つに記載の組成物。
（付記１４）
水和アルミニウム－マグネシウムケイ酸塩及び少なくとも１種の分散剤をさらに含む、付記１３に記載の組成物。
（付記１５）
ビフェントリン殺虫剤を含み、前記ビフェントリン殺虫剤は、０．１ｇ／ｍｌから０．２ｇ／ｍｌの範囲の濃度で含有される、付記１３又は１４に記載の組成物。
（付記１６）
植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のための方法であって、前記方法は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を含む付記１から１５のいずれか一つに記載の組成物を、前記植物の成長に有益であること及び／又は前記影響を受けやすい植物における前記植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で、前記植物、植物の一部、前記植物の種子、前記植物の根、前記植物周辺の土壌若しくは成長培地、又は前記植物を植える前若しくは前記植物の種をまく前に土壌若しくは成長培地に送達することを含む、方法。
（付記１７）
植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のための方法であって、前記方法は、前記植物の種子を植えることを含み、前記種子は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物を含む付記１から１５のいずれか一つに記載の組成物で被覆され、前記種子からの前記植物の成長に有益である、及び／又は前記植物有害生物に対する保護がもたらされる、方法。
（付記１８）
前記植物は、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、綿、トマト、コショウ、ウリ科植物、サトウキビ、ピーナッツ又はコムギを含む、付記１６又は１７に記載の方法。
（付記１９）
前記植物有害生物は、リガス属種（Ｌｙｇｕｓ ｓｐｐ．）、コレオプテラ（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、ディアブロティカ属種（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｓｐｐ．）、メラノタス属種（Ｍｅｌａｎｏｔｕｓ ｓｐｐ．）、ヒロファガ属種（Ｐｈｙｌｌｏｐｈａｇａ ｓｐｐ．）、リモニアス属種（Ｌｉｍｏｎｉｕｓ ｓｐｐ．）、アグリオテス属種（Ａｇｒｉｏｔｅｓ ｓｐｐ．）、レピドプテラ（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、ペリドロマ属種（Ｐｅｒｉｄｒｏｍａ ｓｐｐ．）、エウクソア属種（Ｅｕｘｏａ ｓｐｐ．）、アグロチス属種（Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｐｐ．）、ディプテラ（Ｄｉｐｔｅｒａ）、ヒレムヤ属種（Ｈｙｌｅｍｙａ ｓｐｐ．）、テタノプス種ヘミプテラ（Ｔｅｔａｎｏｐｓ ｓｐ．Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、ペムヒガス種（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｓｐ．）、アフィス種（Ａｐｈｉｓ ｓｐ．）、アゴノデラス種（Ａｇｏｎｏｄｅｒｕｓ ｓｐ．）、フェルチア属種（Ｆｅｌｔｉａ ｓｐｐ．）又はそれらの組み合わせからなる群から選択される昆虫を含む、付記１６から１８のいずれか一つに記載の方法。
（付記２０）
前記植物有害生物は、カスミカメムシ、ルートワーム、ハリガネムシ、土壌中にすむウジ虫、又は地虫複合体を含む、付記１９に記載の方法。
（付記２１）
前記植物有害生物は、ロトリエンキュラス属種（Ｒｏｔｌｙｅｎｃｈｕｌｕｓ ｓｐｐ．）、キシヒネマ属種（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ ｓｐｐ．）、ホプロライマス属種（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ ｓｐｐ．）、パラチレンカス属種（Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、クリコネモイデス属種（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．）、メロイドギネ属種（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｓｐｐ．）、ヘミシクリオフォーラ属種（Ｈｅｍｉｃｙｃｌｉｏｐｈｏｒａ ｓｐｐ．）、ヘリコチレンカス属種（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、トリコドラス属種（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ ｓｐｐ．）、ヘテロデラ属種（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｓｐｐ．）、ベロノライマス属種（Ｂｅｌｏｎｏｌａｉｍｕｓ ｓｐｐ．）、チレンコリンカス属種（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、グロボデラ属種（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ ｓｐｐ．）又はそれらの組み合わせからなる群から選択される植物病原性線虫を含む、付記１６から１８のいずれか一つに記載の方法。
（付記２１）
前記線虫は、メロイドギネ属種線虫、パラチレンカス属種線虫又はグロボデラ属種線虫又はヘテロデラ属種線虫を含む、付記２１に記載の方法。
（付記２３）
前記植物有害生物は、アルテルナリア属種（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｓｐ．）、アスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ボトリチス属種（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｐｐ）、セルコスポラ属種（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｓｐｐ．）、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、フィトフトラ属種（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｐｐ．）、リゾクトニア属種（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ．）、マグナポルテ属種（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｓｐｐ．）、ピチウム属種（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｐ．）、モニリニア属種（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｓｐｐ．）、コレトトリカム属種（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｓｐｐ．）、スクレロチニア属種（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｐｐ．）、及びエルウィニア属種（Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｐｐ．）からなる群から選択される植物真菌性病原体又は植物細菌性病原体を含む、付記１６から１８のいずれか一つに記載の方法。
（付記２４）
前記植物真菌性病原体は、リゾクトニア属種を含む、付記２３に記載の方法。
（付記２５）
前記植物の前記種子に液体肥料又は作物栄養物を送達することをさらに含む、付記１６から２４のいずれか一つに記載の方法。
（付記２６）
植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で含有される、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５又はそのすべての同定特徴を有するその突然変異体の生物学的に純粋な培養物の芽胞を含む付記１から１５のいずれか一つに記載の組成物で被覆された植物種子。
（付記２７）
前記種子は、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、綿、トマト、コショウ、ウリ科植物、サトウキビ、ピーナッツ又はコムギの種子を含む、付記２６に記載の植物種子。

Claims (23)

  1. ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物と、
    農学的に許容されるアジュバントと、
    を含み、
    植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のために植物に適用され、前記植物有害生物は、昆虫、線虫及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、
    組成物。
  2. 前記バチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物は、芽胞又は栄養細胞又は無細胞抽出物の形態である、
    請求項１に記載の組成物。
  3. 前記アジュバントは、植え付けマトリックス、担体、結合剤、界面活性剤、分散剤、又は酵母抽出物を含む、
    請求項１又は２に記載の組成物。
  4. 植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における病原性感染に対する保護をもたらすことに適した量で含有される殺虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺細菌剤、バイオスティミュラント、除草剤、植物抽出物、微生物抽出物、植物成長調整物質、又は肥料の１つ又は組み合わせをさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 化学殺虫剤をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 前記化学殺虫剤は、クロラントラニリプロール、クロレトキシフォス、クロルピリフォス－ｅ、シアントラニリプロール、シクラニリプロール、シペルメトリン、ジクロロプロペン、フルピラジフロン、ガンマ－シハロトリン、プロフェノフォス、テブピリムフォス、テフルトリン、カッパー－ビフェントリン、カッパー－テフルトリン、カルボフラン、カルボスルファン、オキサミル、チオジカルブ、クロルピリフォス、クロルピリフォス－ｅ、クロルピリフォス－メチル、ジアジノン、ホレート、テルブフォス、フィプロニル、アセタミプリド、クロチアニジン、イミダクロプリド、チアクロプリド、チアメトキサム、アバメクチン、フロニカミド、フルベンジアミド、ビフェントリン、ラムダ－シハロトリン、シペルメトリン、ゼータ－シペルメトリン、デルタメトリン、ピリダベン又はそれらのあらゆる混合物を含む、請求項５に記載の組成物。
  7. 前記化学殺虫剤はビフェントリンを含む、請求項６に記載の組成物。
  8. 化学殺真菌剤をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 前記化学殺真菌剤は、チアベンダゾール、フルキサピロキサド、ペンフルフェン、セダキサン、ビテルタノール、シプロコナゾール、ジフェノコナゾール、フルキンコナゾール、フルトリアフォル、イプコナゾール、ミクロブタニル、プロチオコナゾール、トリアジメフォン、トリアジメノール、テブコナゾール、トリチコナゾール、プロクロラズ、イマザリル、ベノミル、カルベンダジム、ヒメキサゾール、アゾキシストロビン、フルオキサストロビン、ピラクロストロビン、トリフロキシストロビン、カルボキシン、フルトラニル、メタラキシル、メフェノキサム、ペンチオピラド、フルオピラム、シルチオファム、フルアジナム、ピリメタニル、フルジオキソニル、イプロジオン、トリシクラゾール、カプタン、ダゾメット、マンコゼブ、メタム、チラム、グアザチン、トルクロフォス－メチル、ペンシクロン、チオファネート－メチル、フェンピコキサミド、メフェントリフルコナゾール、フルインダピル、又はそれらのあらゆる混合物を含む、請求項８に記載の組成物。
  10. 化学殺線虫剤をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 前記化学殺線虫剤は、ベノミル、フェナミホス、カジュサフォス、エトプロホス、フォスチアゼート、クロロピクリン、ダゾメット、フルエンスルホン、オキサミル、１，３－ジクロロプロペン（テロン）、メタムナトリウム、メタムカリウム、臭化メチル、アリルイソチオシアネート、フルアザインドリジン、チオキサザフェン、フルオピラム、又はそれらのあらゆる混合物を含む、請求項１０に記載の組成物。
  12. 液体肥料又は作物栄養物と混合可能な製剤に含まれている、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
  13. 水和アルミニウム－マグネシウムケイ酸塩及び少なくとも１種の分散剤をさらに含む、請求項１２に記載の組成物。
  14. ビフェントリン殺虫剤を含み、前記ビフェントリン殺虫剤は、０．１ｇ／ｍｌから０．２ｇ／ｍｌの範囲の濃度で含有される、請求項１２又は１３に記載の組成物。
  15. 植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のための方法であって、前記方法は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物を含む請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物を、前記植物の成長に有益であること及び／又は前記影響を受けやすい植物における前記植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で、前記植物、植物の一部、前記植物の種子、前記植物の根、前記植物周辺の土壌若しくは成長培地、又は前記植物を植える前若しくは前記植物の種をまく前に土壌若しくは成長培地に送達することを含み、前記植物有害生物は、昆虫、線虫及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、方法。
  16. 植物の成長に有益であること、又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことの一方又は両方のための方法であって、前記方法は、前記植物の種子を植えることを含み、前記種子は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物を含む請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物で被覆され、前記種子からの前記植物の成長に有益である、及び／又は前記植物有害生物に対する保護がもたらされ、前記植物有害生物は、昆虫、線虫及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、方法。
  17. 前記植物は、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、綿、トマト、コショウ、ウリ科植物、サトウキビ、ピーナッツ又はコムギを含む、請求項１５又は１６に記載の方法。
  18. 前記昆虫は、リガス属種（Ｌｙｇｕｓ ｓｐｐ．）、コレオプテラ（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、ディアブロティカ属種（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｓｐｐ．）、メラノタス属種（Ｍｅｌａｎｏｔｕｓ ｓｐｐ．）、ヒロファガ属種（Ｐｈｙｌｌｏｐｈａｇａ ｓｐｐ．）、リモニアス属種（Ｌｉｍｏｎｉｕｓ ｓｐｐ．）、アグリオテス属種（Ａｇｒｉｏｔｅｓ ｓｐｐ．）、レピドプテラ（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、ペリドロマ属種（Ｐｅｒｉｄｒｏｍａ ｓｐｐ．）、エウクソア属種（Ｅｕｘｏａ ｓｐｐ．）、アグロチス属種（Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｐｐ．）、ディプテラ（Ｄｉｐｔｅｒａ）、ヒレムヤ属種（Ｈｙｌｅｍｙａ ｓｐｐ．）、テタノプス種ヘミプテラ（Ｔｅｔａｎｏｐｓ ｓｐ．Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、ペムヒガス種（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｓｐ．）、アフィス種（Ａｐｈｉｓ ｓｐ．）、アゴノデラス種（Ａｇｏｎｏｄｅｒｕｓ ｓｐ．）、フェルチア属種（Ｆｅｌｔｉａ ｓｐｐ．）又はそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記線虫は、ロトリエンキュラス属種（Ｒｏｔｌｙｅｎｃｈｕｌｕｓ ｓｐｐ．）、キシヒネマ属種（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ ｓｐｐ．）、ホプロライマス属種（Ｈｏｐｌｏｌａｉｍｕｓ ｓｐｐ．）、パラチレンカス属種（Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、クリコネモイデス属種（Ｃｒｉｃｏｎｅｍｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．）、メロイドギネ属種（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｓｐｐ．）、ヘミシクリオフォーラ属種（Ｈｅｍｉｃｙｃｌｉｏｐｈｏｒａ ｓｐｐ．）、ヘリコチレンカス属種（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、トリコドラス属種（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ ｓｐｐ．）、ヘテロデラ属種（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｓｐｐ．）、ベロノライマス属種（Ｂｅｌｏｎｏｌａｉｍｕｓ ｓｐｐ．）、チレンコリンカス属種（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、グロボデラ属種（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ ｓｐｐ．）又はそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記線虫は、メロイドギネ属種線虫、パラチレンカス属種線虫又はグロボデラ属種線虫又はヘテロデラ属種線虫を含む、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記植物の前記種子に液体肥料又は作物栄養物を送達することをさらに含む、請求項１５から２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 植物の成長に有益であること及び／又は影響を受けやすい植物における植物有害生物に対する保護をもたらすことに適した量で含有される、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ－１２２１６１として寄託されたバチルス・チューリンゲンシスＲＴＩ５４５の生物学的に純粋な培養物の芽胞を含む請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物で被覆され、前記植物有害生物は、昆虫、線虫及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、植物種子。
  23. 前記種子は、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、綿、トマト、コショウ、ウリ科植物、サトウキビ、ピーナッツ又はコムギの種子を含む、請求項２２に記載の植物種子。
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