BR112019006915B1 - Composição compreendendo uma cepa rti545, métodos para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal, semente de vegetal revestida e uso da composição compreendendo uma cepa rti545 - Google Patents

Abstract

A presente invenção se refere às composições que incluem uma nova cepa de Bacillus thuringiensis designada RTI545 para a utilização em benefício de crescimento dos vegetais e controle de pragas dos vegetais. Em especial, a cepa de RTI545 é útil para o controle de nematoide dos vegetais, insetos e fungos. As composições incluem as sementes dos vegetais revestidas com a cepa de RTI545. As composições podem ser aplicadas isoladamente ou em combinação com outros inseticidas microbianos, biológicos ou químicos, fungicidas, nematicidas, bactericidas, herbicidas, extratos dos vegetais, reguladores de crescimento dos vegetais ou fertilizantes. Em um exemplo, o crescimento intensificado e o controle de insetos são fornecidos, no momento do plantio, de uma combinação de um inseticida químico, tal como a bifentrina e um fertilizante líquido, para os vegetais ou sementes tratados com a RTI545.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AO PEDIDO DE PATENTE RELACIONADO

[001] O presente pedido reivindica o benefício do pedido provisório de patente US 1962/404.275, depositado em 05 de outubro de 2016, cuja descrição está incorporada no presente como referência na sua totalidade

CAMPO DA INVENÇÃO

[002]A presente invenção descrita se refere às composições que compreendem uma cepa bacteriana de Bacillus thuringiensis isolada através da aplicação para a plantação das sementes e raízes, e ao solo que rodeia os vegetais para beneficiar o crescimento dos vegetais e para controlar as pragas dos vegetais

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[003] Um número determinado de microrganismos que possui os efeitos benéficos em relação ao crescimento e à saúde dos vegetais é conhecido por estar presentes no solo, para viver, em associação com os vegetais especificamente na zona da raiz (bactérias associadas ao rizosfera), ou residir como endófitos dentro do vegetal. Essas propriedades promotoras de crescimento benéfico do vegetal incluem a fixação do nitrogênio, quelação de ferro, solubilização de fosfato, inibição de microrganismos não benéficos, resistência às, ou exclusão de pragas, Resistência Sistêmica Induzida (ISR), Resistência Sistêmica Adquirida (SAR), decomposição de material vegetal no solo útil para aumentar a matéria orgânica do solo, e síntese de fito-hormonas, tais como o ácido indol acético (IAA), acetoína e 2,3-butanodiol que estimulam o crescimento dos vegetais, desenvolvimento e respostas à tensão ambiental, tais como a aridez. Além disso, estes microrganismos podem interferir com a resposta ao etileno de tensão de um vegetal através da decomposição da molécula precursora, 1-aminociclopropano-1-carboxilato (ACC), por conseguinte, estimulando o crescimento do vegetal e retardando o amadurecimento de frutos. Estes microrganismos benéficos podem aprimorar a qualidade do solo, crescimento do vegetal, rendimento, e a qualidade das culturas. Diversos microrganismos apresentam uma atividade biológica, tal como a ser úteis para o controle de doenças dos vegetais. Tais biopesticidas (organismos vivos e os compostos produzidos naturalmente por estes organismos) em geral, são considerados mais seguros e mais biodegradáveis do que os fertilizantes e pesticidas sintéticos.

[004] Por exemplo, as bactérias benéficas associadas ao vegetal, rizosféricas e endofíticas, são conhecidas para fornecer uma variedade de benefícios para os vegetais hospedeiros que variam de resistência a doenças e pragas de insetos e tolerância às tensões ambientais, incluindo a tensão ao frio, salinidade e aridez. À medida que os vegetais com as bactérias inoculadas que promovem o crescimento do vegetal adquirem mais água e nutrientes do solo, por exemplo, devido a um sistema de raiz mais desenvolvido, os vegetais crescem mais saudável e são menos suscetíveis às tensões bióticas e abióticas. Dessa maneira, as composições microbianas da presente invenção podem ser aplicadas isoladamente ou em combinação com as entradas de manejo de culturas atuais, tais como os adubos químicos, herbicidas e pesticidas para maximizar a produtividade das culturas. Os efeitos promotores de crescimento dos vegetais se traduzem em vegetais que crescem mais rápido e aumentam acima da biomassa do solo, uma propriedade que pode ser aplicada para aprimorar o vigor precoce. Um dos benefícios do vigor precoce aprimorado é que os vegetais são mais competitivos e eliminadores de ervas daninhas, o que reduz diretamente o custo para o manejo das ervas daninhas através da minimização de trabalho e aplicação do herbicida. Os efeitos promotores de crescimento dos vegetais também se traduzem em desenvolvimento aprimorado de raiz, incluindo as raízes mais profundas e mais largas com as raízes mais finas que estão envolvidas na absorção de água e nutrientes. Esta propriedade possibilita uma melhor utilização dos recursos agrícolas, e uma redução na água utilizada nas necessidades de irrigação e/ou aplicação de fertilizantes. As alterações no desenvolvimento da raiz e arquitetura raiz afeta as interações do vegetal com outros microrganismos com origem no solo, incluindo os fungos e as bactérias benéficas que auxiliam o vegetal com a absorção de nutrientes, incluindo a fixação de nitrogênio e solubilização de fosfato. Estes micróbios benéficos também competem contra os agentes patogênicos dos vegetais para aumentar a saúde geral do vegetal e diminuir a necessidade de pesticidas e fungicidas químicos. Um sistema de raiz mais desenvolvido, também possibilita obter os rendimentos aprimorados quando as pragas estão presentes.

[005] Os agentes fitopatogênicos fúngicos, incluindo mas não limitados ao Botrytis spp. (por exemplo, Botrytis cinerea), Fusarium spp. (por exemplo, F. oxysporum e F. graminearum), Rhizoctonia spp. (por exemplo, R. solani), Magnaporthe spp., Mycosphaerella spp., Puccinia spp. (por exemplo, P. recondita), Phytopthora spp. e Phakopsora spp. (por exemplo, P. pachyrhizi), são um tipo de praga dos vegetais que podem provocar perdas econômicas graves nas indústrias agrícolas e hortícolas. Os agentes químicos podem ser utilizados para o controle dos agentes fitopatogênicos fúngicos, mas a utilização de agentes químicos apresenta desvantagens, incluindo o custo elevado, o aparecimento de cepas resistentes às pragas, e os impactos ambientais potencialmente indesejados. Além disso, tais tratamentos químicos podem afetar adversamente as bactérias benéficas, fungos e artrópodes em adição à praga dos vegetais em que os tratamentos são dirigidos. Um segundo tipo de praga dos vegetais são os agentes patogênicos bacterianos, incluindo mas não limitado ao Erwinia spp. (tal como Erwinia chrysanthemi), Pantoea spp. (tal como P. citrea), Xanthomonas (por exemplo, Xanthomonas campestris), Pseudomonas spp. (tal como, P. syringae) e Ralstonia spp. (tal como, R. soleacearum) que provocam perdas econômicas graves nas indústrias agrícolas e hortícolas. Similar aos fungos patogênicos, a utilização de agentes químicos para o tratamento destes agentes patogênicos bacterianos apresenta desvantagens. Os vírus e os organismos do tipo vírus compreendem um terceiro tipo de agente causador de doença do vegetal que é difícil de controlar, mas que os microrganismos bacterianos podem fornecer a resistência em vegetais por meio de resistência sistêmica induzida (ISR). Por conseguinte, os microrganismos que podem ser aplicados como biofertilizante e/ou biopesticida para o controle de fungos patogênicos, vírus e bactérias são desejados em grande demanda para aprimorar a sustentabilidade da agricultura. Um último tipo de agente patogênico do vegetal inclui os nematoides e insetos patogênicos, que podem provocar graves danos e perdas dos vegetais e reduções no rendimento.

[006]Alguns membros da espécie Bacillus foram descritos como cepas de biocontrol, e alguns têm sido aplicados em produtos comerciais (Kloepper Joseph W., et al., 2004, Phytopathology, Volume 94, No. 11, 1.2591.266). Por exemplo, as cepas que são utilizadas atualmente em produtos de biocontrole comerciais incluem: a cepa de Bacillus pumilus QST2808, utilizada como o ingrediente ativo em Sonata e BALLAD-PLUS, produzida por Bayer Crop Science; cepa de Bacillus pumilus GB34, utilizada como o ingrediente ativo em YIELDSHIELD, produzida por Bayer Crop Science; cepa Bacillus subtilis QST713, utilizada como ingrediente ativo de SERENADE, produzida por Bayer Crop Science; cepa Bacillus subtilis, utilizada como o ingrediente ativo em KODIAK e System3, produzida por Helena Chemical Company. Diversas cepas de Bacillus thuringiensis e Bacillus firmus foram aplicadas como agentes de biocontrole contra os nematoides e insetos e estas cepas servem como a base de numerosos produtos de biocontrole comercialmente disponíveis, incluindo a DIPEL que compreendem uma cepa Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, produzida por Valent Biosciences Corporation, e NORTICA e um PONCHO- VOTIVO que compreendem uma cepa de B. firmus, produzida por Bayer Crop Science. Além disso, as cepas de Bacillus que são utilizadas atualmente em produtos comerciais bioestimulantes incluem a: cepa Bacillus subtilis var. amyloliquefaciens FZB42 utilizada como o ingrediente ativo em RHIZOVITAL 42, produzida por ABiTEP GmbH, bem como diversas espécies de Bacillus subtilis que estão incluídas como células inteiras, incluindo o seu extrato de fermentação em produtos bioestimulantes, tal como FULZYME produzido por JHBiotech Inc.

[007] No entanto, é desejado desenvolver novas composições e métodos para beneficiar o crescimento dos vegetais e para controlar as pragas dos vegetais.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

[008]A presente invenção descrita se refere às composições e aos métodos microbianos para a sua utilização para beneficiar o crescimento dos vegetais e para controlar as pragas dos vegetais.

[009] Em uma realização, é fornecida uma composição que compreende uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação, para a aplicação a um vegetal para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal ou conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível.

[010] Em uma realização, é fornecido um método para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal ou conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível, o método compreende a entrega de uma composição que compreende uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação a um vegetal, parte do vegetal, semente do vegetal, raízes do vegetal, o solo ou o meio de crescimento em torno do vegetal ou da semente do vegetal, ou o solo e ou o meio de crescimento do vegetal antes do plantio ou semeadura das sementes do vegetal, em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção contra a praga dos vegetais no vegetal suscetível.

[011] Em uma realização, é fornecido um método para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal ou conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível, o método compreende: o fornecimento ao vegetal, parte do vegetal, semente do vegetal, raízes do vegetal, meio de crescimento ou solo em torno do vegetal ou da semente do vegetal, ou o meio de crescimento ou solo, antes do plantio dos vegetais ou semeadura das sementes do vegetal, de uma combinação de: uma composição que compreende uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC ou um de seus mutantes que possui todas as características de identificação das mesmas em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento do vegetal PTA-122161, ou e/ou para conferir proteção contra a praga dos vegetais no vegetal suscetível; e uma ou a combinação de um inseticida, um fungicida, nematicida, bactericida, bioestimulante, herbicida, extrato vegetal, extrato microbiano, reguladores de crescimento dos vegetais, ou fertilizantes, em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção contra o praga dos vegetais no vegetal suscetível. Cada um destes agentes adicionais podem ser um agente biológico, ou um agente químico.

[012] Em uma realização, é fornecida uma semente de vegetal revestida com uma composição que compreende os esporos de uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação, presente em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível.

[013] Em uma realização, é fornecido um método para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal ou conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível, o método compreende o plantio de uma semente do vegetal, em que a semente foi revestida com uma composição que compreende uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação, em que o crescimento do vegetal a partir da semente é beneficiado e/ou a proteção contra a praga dos vegetais é conferida.

[014] Em uma realização, é fornecida uma composição para beneficiar o crescimento dos vegetais, a composição compreende: uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; e um inseticida de bifentrina.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[015] Por conseguinte, tendo descrito a presente invenção em termos gerais, será feita referência no presente às Figuras anexas descritas a seguir.

[016]A Figura 1A é um diagrama esquemático que mostra, na extremidade esquerda, em uma semente de vegetal (círculo interno) revestida com um inseticida químico (faixa escura ao redor do círculo interno) com as pragas de insetos dos vegetais na rizosfera do vegetal representadas por uma marca horizontal. A parte central do diagrama mostra as sementes germinadas do vegetal com o inseticida difundido protegendo as raízes das sementes do vegetal das pragas de insetos (a proteção representada pelas marcas “X”). A extremidade direita do diagrama mostra a proteção reduzida das raízes da semente do vegetal a partir das pragas de insetos, tais como as raízes que crescem além da zona de difusão do inseticida químico.

[017]A Figura 1B mostra o diagrama esquemático da Figura 1A, com a adição de Bacillus thuringiensis RTI545 para o revestimento sobre a semente do vegetal ou sobre o solo que envolve as sementes dos vegetais, de acordo com uma ou mais realizações da presente invenção. A extremidade direita do diagrama mostra a proteção permanente das raízes das sementes do vegetal das pragas de insetos até mesmo quando as raízes crescem além da zona de difusão do inseticida químico como um resultado do estabelecimento de Bacillus thuringiensis RTI545 na rizosfera do vegetal.

[018]A Figura2 é um desenho esquemático que mostra a filogenia da cepa de RTI545 utilizando o gene rpoB de limpeza, de acordo com uma ou mais realizações da presente invenção. Os valores de bootstrap (reamostragem) indicam as repetições de sequências de 1,000. As sequências do grupo externo são do archaea hiperteromifílico Pyrococcus furiosus DSM3638.

[019]A Figura 3A é uma imagem de plântulas de milho tiradas a partir de 12 dias após o plantio da semente tratada com as células vegetativas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 por encharcamento em plantação de irrigação, de acordo com uma ou mais realizações da presente invenção.

[020]A Figura 3B é uma imagem de plântulas de milho tiradas a partir de 12 dias após o plantio da semente tratada de maneira similar àquela na Figura 3A, mas sem a adição de células de Bacillus thuringiensis RTI545.

[021]A Figura 4 é uma imagem que mostra a capacidade de células de Bacillus thuringiensis RTI545 para repelir as brocas da raiz do milho do sul (SCRW) em uma análise de alimentação de seleção de plântulas de milho, de acordo com uma ou mais realizações da presente invenção. Na imagem, o filtro de papel no lado esquerdo foi tratado com as células da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 e o papel de filtro da direita foi tratado com a água como um controle.

[022]A Figura 5 é um gráfico que mostra o número de cistos por grama de biomassa da raiz dos vegetais de batata em vasos em solo naturalmente infectado com o nematoides Globodera sp. e reforçado com 109 cfu de esporos por litro de células do solo Bacillus thuringiensis RTI545 (RTI545 ) conforme comparado com o controle e tratamentos do solo: Vydate (DuPont; A.I. = [N’N’-dimetil-N-[(carbamoil de metil)oxil)oxi de metoil]-1-tiooxamimidato de oxamil ), Bioact (BAYER CropSciences LP; cepa Paecilomyces lilacinus 251), Carex (Nufarm, piridabeno), e HD-1 (Bacillus thuringiensis subsp kurstaki HD-1), de acordo com uma ou mais realizações da presente invenção.

[023] Figura 6A mostra um desenho em planta esquemática de uma arena de teste de quimiotaxia para a análise de atração / repelência das amostras de teste para os nematoides. A Figura 6B é uma fotografia de uma análise de canosamina testada a 100 μg/ml, em que os pontos indicam os locais que representam uma distribuição de nematoides neutro. A Figura 6C é uma fotografia de uma análise de sobrenadante de RTI545 testado a resistência de 100%, em que os pontos indicam os locais de nematoides que representam uma distribuição de repelente.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[024]Ao longo desta especificação e das reivindicações, os termos “compreende”, “que compreende” e “que compreendem” são utilizados em um sentido não exclusivo, exceto em que o contexto requer de outra maneira. De maneira similar, o termo “incluir” e suas variantes gramaticais são destinadas a serem não limitante, de tal maneira que a recitação de itens em uma lista não é para a exclusão de outros itens similares, que podem ser substituídos ou adicionados para os itens listados.

[025] Para os propósitos desta especificação e reivindicações anexas, o termo “cerca de”, quando utilizado em conexão com um ou mais números ou intervalos numéricos, deve ser entendido para se referir a todos os tais números, incluindo todos os números em um intervalo e modifica esse intervalo estendendo os limites acima e abaixo dos valores numéricos estabelecidos. A recitação de intervalos numéricos por pontos finais inclui todos os números, por exemplo, os números inteiros, incluindo as suas frações, subsumidas dentro desse intervalo (por exemplo, a recitação de 1 a 5 inclui 1, 2, 3, 4 e 5, bem como as suas frações, por exemplo, 1,5, 2,25, 3,75, 4,1, e similares) e qualquer intervalo dentro desse intervalo. Quando um intervalo é recitado como sendo a partir de uma lista de limites inferiores para uma lista de limites superiores, os intervalos são definidos como sendo a partir de qualquer um dos limites inferiores indicados em qualquer um dos limites superiores recitados.

[026] Os nomes comerciais são indicados no presente em maiúsculas.

[027] Conforme utilizado no presente para os propósitos desta especificação e reivindicações, em uma realização, o termo “uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 “ se refere a uma ou à combinação : dos esporos de uma cultura de fermentação biologicamente pura da cepa bacteriana, células vegetativas de uma cultura de fermentação biologicamente pura das cepas bacterianas, um ou mais produtos de uma cultura de fermentação biologicamente pura da cepa bacteriana, um sólido de uma cultura de fermentação biologicamente pura da cepa bacteriana, um sobrenadante de cultura de uma cultura de fermentação biologicamente pura de cultura da cepa bacteriana, e um extrato livre de células de uma fermentação de cultura biologicamente pura da cepa bacteriana.

[028] Em outra realização, o termo “uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 “ se refere a uma ou à combinação : dos esporos de uma cultura de fermentação biologicamente pura da cepa bacteriana, células vegetativas de uma cultura de fermentação biologicamente pura das cepas bacterianas, uma ou mais produtos de uma fermentação de cultura biologicamente pura da cepa bacteriana, e uma cultura sólida de uma fermentação de cultura biologicamente pura da cepa bacteriana. Em uma variante desta realização, o termo pode se referir aos esporos de uma cultura biologicamente pura de fermentação da cepa bacteriana.

[029] Em ainda outra realização, o termo “uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 “ se refere a uma ou à combinação de: um sobrenadante de cultura de uma cultura de fermentação biologicamente pura das cepas bacterianas, e um extrato livre de células de uma fermentação biologicamente pura cultura da cepa bacteriana.

[030] De maneira notável, o termo “uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 “ pode estar na forma de esporos, células vegetativas ou extratos livres de células da cultura biologicamente pura.

[031] Conforme utilizado no presente para os propósitos desta especificação e reivindicações, o termo “praga dos vegetais” se refere a qualquer praga que é nociva e/ou patogênica para um vegetal, incluindo, sem limitação, uma praga de vegetal, tal como um inseto, um parasita, uma nematoide, um fungo, uma bactéria ou um vírus.

[032] Uma nova bactéria associada ao vegetal isolado a partir do solo de grama festuca é fornecida no presente e referida como “RTI545 “. A cepa foi identificada como sendo uma cepa Bacillus thuringiensis com base na análise da sequência, embora a cepa não possua os genes para as proteínas de cristal frequentemente encontradas em cepas de B. thuringiensis. De maneira inesperada, a cepa de RTI545 demonstra uma atividade repelente de insetos forte, mas não consegue matar as larvas de insetos nas análises de contato direto e de alimentação de seleção. As composições e métodos que são fornecidos no presente incluem uma cultura biologicamente pura da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 para entrega a um vegetal, parte do vegetal, semente de vegetal, raízes dos vegetais ou solo para beneficiar o crescimento dos vegetais e conferir proteção contra as pragas dos vegetais. Os benefícios de crescimento e proteção conferida incluem o vigor de plântula aprimorado, o desenvolvimento das raízes aprimorado, o crescimento do vegetal aprimorado, a saúde do vegetal aprimorada, rendimento aumentado, aparência aprimorada, resistência aprimorada às pragas dos vegetais, a infecção patogênica reduzida, ou uma de suas combinações.

[033]A entrega da composição ao vegetal ou parte do vegetal inclui a entrega para qualquer parte do vegetal, incluindo as partes acima do solo, tais como as partes foliares, e partes dos vegetais de propagação do vegetal, tais como as plântulas, transplantes, estacas (por exemplo, os caules, raízes, folhas, e similares), rizomas, esporos, rebolos (por exemplo, de cana de açúcar), bolbos, tubérculos, ou suas partes, ou outros tecidos do vegetal a partir da qual pode ser obtido um vegetal completo. A entrega para o meio de crescimento ou solo em torno do vegetal ou da semente do vegetal, ou o meio de crescimento ou solo, antes do plantio dos vegetais ou semeadura das sementes do vegetal inclui as aplicações no sulco da composição no momento do plantio, inclui a incorporação ou mistura a composição com o meio de crescimento ou no solo, a aplicação da composição à superfície do meio de crescimento ou no solo, tais como por encharcamento do solo, e similares.

[034] Em uma realização, a cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 é entregue a um vegetal, parte do vegetal, semente de vegetal, raízes dos vegetais ou solo em combinação com um inseticida químico para expandir o controle do inseticida químico através do estabelecimento da cepa de RTI545 na rizosfera do vegetal. Um mecanismo proposto para este controle de insetos pela cepa de RTI545 está ilustrado na Figura 1. A Figura 1A mostra o controle de insetos revestindo uma semente com um inseticida químico isoladamente (isto é, sem a RTI545). Uma semente do vegetal (círculo interno) revestida com um inseticida (faixa escura ao redor do círculo interno) é mostrada na extremidade esquerda do diagrama da Figura 1A, o qual está rodeado por pragas de insetos dos vegetais na rizosfera do vegetal representado por uma marca horizontal. A parte central do diagrama mostra as sementes germinadas do vegetal com o inseticida difundido protegendo as raízes das sementes do vegetal das pragas de insetos (a proteção representada pelas marcas “X”). A extremidade direita do diagrama mostra a proteção reduzida das raízes da semente do vegetal a partir das pragas de insetos, tais como as raízes que crescem além da zona de difusão do inseticida químico. O diagrama na Figura 1B ilustra um mecanismo proposto para a maneira como a adição de esporos de Bacillus thuringiensis RTI545 para o revestimento sobre a semente de vegetal ou como uma aplicação no sulco aprimora o controle de insetos através da utilização do revestimento do inseticida isoladamente. Especificamente, o lado mais à direita do diagrama da Figura 1B mostra uma proteção permanente das raízes das sementes do vegetal das pragas de insetos até mesmo quando as raízes crescem além da zona de difusão do inseticida químico como um resultado do estabelecimento de Bacillus thuringiensis RTI545 na rizosfera do vegetal. Em um exemplo, as sementes revestidas com as células de RTI545 ou de outra maneira tratadas com a RTI545 são plantadas em combinação com o inseticida químico, bifentrina, e a aplicação de um fertilizante líquido para beneficiar o crescimento dos vegetais e controlar as pragas de insetos.

[035] O isolamento e caracterização da cepa de RTI545 é mais especificamente descrito nos Exemplos fornecidos no presente. O Exemplo 1 descreve a comparação das sequências de rDNA 16S (SEQ ID NO: 1.) e rpoB (SEQ ID NO: 2) genes da cepa de RTI545 com aquelas de outras cepas bacterianas conhecidas nas bases de dados NCBI e RDP utilizando o BLAST. Esta análise coloca a cepa de RTI545 dentro do clade de Bacillus cereus / thuringiensis / anthracis. Além disso, a análise filogenética da cepa de RTI545 e as espécies relevantes de Bacillus foi realizada utilizando as árvores de consenso Bootstrap (reamostragem) (1.000 replicas) no gene rpoB. A árvore de consenso para o gene rpoB é mostrada na Figura 2. Conforme pode ser observado na Figura 2, a cepa de RTI545 forma um ramo separado no clade de Bacillus cereus / thuringiensis / anthracis indicando que a RTI545 é uma nova cepa que cai dentro do clade de Bacillus cereus / thuringiensis / anthracis. A análise da sequência adicional revelou que a cepa de RTI545 não possui os genes para as proteínas de cristal frequentemente encontradas em cepas de B. thuringiensis.

[036]Além disso, a análise da sequência do genoma inteiro foi realizada para comparar a cepa de RTI545 com as cepas estreitamente relacionadas de espécies de Bacillus, utilizando o MUMmer- e Identidade com base no Nucleotídeo BLASTn médio (ANI) e análise de UNIPEPT para confirmar a sua classificação filogenética. Os resultados de MUMmer e cálculos com base em BLASTn ANI são mostrados na Tabela I abaixo. As análises de ANI e UNIPEPT (dados não mostrados) revelaram um grau significativo de similaridade de sequência entre a RTI545 e as sequências publicadas de ambas as cepas indicadas como B. cereus e B. thuringiensis. A maior similaridade de sequência com uma cepa do tipo reconhecido é reconhecida com a cepa de tipo B. thuringiensis Berliner ATCC10792. Novamente, as diferenças na sequência do genoma inteiro daqueles publicados anteriormente indicam que a RTI545 é uma nova cepa de Bacillus thuringiensis que cai dentro do clade de Bacillus cereus / thuringiensis / anthracis.

[037] Com base em análises da sequência precedente, a cepa de RTI545 foi identificada como uma nova cepa, e é referida no presente como uma cepa de Bacillus thuringiensis.

[038]A cepa de RTI545 foi depositada em 12 de maio de 2015 sob os termos do Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Microrganismos para os Propósitos de Procedimento de Patente na Coleção de Cultura do Tipo Americano (ATCC) em Manassas, Virginia, EUA e possui o número de Adesão de Patente PTA-122161.

[039] Os resultados experimentais que demonstram as atividades de promoção de crescimento antimicrobiano e de controle de insetos e fungos e de nematoides da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 em diversos vegetais e sob diferentes condições, incluindo os estudos de ensaio in vitro, com efeito de estufa e de teste de campo são fornecidos nas Figuras de 3 a 5 e nos Exemplos de 2 a 17, no presente. Especificamente, a cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 é mostrada para beneficiar o crescimento dos vegetais e conferir o controle contra as pragas dos vegetais, incluindo as brocas da raiz, tais como as brocas da raiz do milho do sul (SCRW), vermes filiformes, tais como os vermes filiformes de trigo e vermes filiformes de milho, pragas complexas de lagartas brancas, vermes que vivem no solo, tais como as larvas de sementes de milho, de sementes de larvas, percevejos dos vegetais tais como os percevejos dos vegetais ocidentais (WPB), nematoides e fungos patogênicos, tais como Rhizoctonia spp. Em alguns casos, o tratamento de sementes com a cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 fornecida equivalentes ou superiores, resulta em comparação com os produtos comercialmente disponíveis com base em uma combinação de agentes ativos químicos e biológicos ou agentes químicos ativos isoladamente.

[040]As propriedades antagonistas de Bacillus thuringiensis RTI545 contra alguns dos principais agentes patogênicos dos vegetais nas análises em placa estão descritas no Exemplo 2 e traços fenotípicos, tais como a produção de fito-hormona, acetoína e ácido indol acético (IAA), e o ciclo dos nutrientes da cepa estão descritos no Exemplo 3.

[041] O Exemplo 4 descreve os efeitos positivos da incubação de sementes de milho com as células de RTI545 sobre a germinação da semente, o desenvolvimento das raízes e crescimento precoce. Os resultados são mostrados na Figura 3A e Figura 3B, que são imagens das plântulas de milho cultivadas após 12 dias na presença (Figura 3A) e na ausência (Figura 3B) da cepa de RTI545. Conforme pode ser observado nas Figuras, a presença da cepa de RTI545 resultou em uma vantagem significativa de crescimento.

[042] O Exemplo 5 descreve os efeitos positivos de inoculação de sementes de milho com as células de RTI545 no crescimento precoce dos vegetais e vigor. As sementes de milho germinadas esterilizadas à superfície foram inoculadas durante 2 dias, em uma suspensão de 108 CFU/mL de RTI545 à temperatura ambiente e, posteriormente, as sementes inoculadas foram plantadas em vasos e incubadas em uma estufa. O peso úmido e seco da biomassa do rebento de milho foi medido após 42 dias de crescimento. O peso úmido e peso seco da biomassa milho aumentou para os vegetais inoculados com a cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 em comparação com o controle não inoculado. Conforme pode ser discernido a partir do aumento significativo em ambos a biomassa molhada e seca, a presença da cepa de RTI545 resultou em uma vantagem significativa de crescimento.

[043] O Exemplo 6 descreve a atividade inesperada de repelente de insetos da cepa de RTI545. Para o antagonismo contra o percevejo de vegetal ocidental (WPB), a Bacillus thuringiensis RTI545 foi avaliada em pulverização direta, alimentação de seleção, e não existe análise de alimentação de seleção, em conjunto com os controles incluindo um meio branco, agente químico ativo (acetilfosforamidotioato de O,S-dimetila), e Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-1 (HD-1). Conforme esperado, não foi observada nenhuma mortalidade significativa (análises de pulverização direta e de alimentação de não seleção) ou repelência (análise de alimentação de seleção) para o tratamento do meio branco ou HD-1, enquanto que o controle químico matou (análises de pulverização direta e de alimentação de não seleção) e (análise de alimentação de seleção) repeliu a WPB. A Bacillus thuringiensis RTI545 não forneceu nenhuma mortalidade significativa para WPB quando aplicada em ambas as análises de pulverização direta e de alimentação de não seleção; no entanto, de maneira inesperada, a RTI545 mostrou um comportamento repelente em 124 horas após a WPB ser colocada nas arenas da análise de seleção. Especificamente, quando a WPB foi colocada em um recipiente contendo uma fonte de alimento tratado e não tratado, A WPB foi observada alimentando apenas na fonte de alimentos não tratados (dados não mostrados).

[044] Para o antagonismo contra a broca da raiz do milho do sul (SCRW), as células de Bacillus thuringiensis RTI545 foram avaliadas em uma análise de alimentação de seleção de plântulas de milho e em comparação com um controle de água. Os tratamentos adicionais, em comparação com o controle de água foram (i) uma cepa de Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-1 (HD- 1), (ii) o controle químico CAPTURE LFR (T.I. = 17,15% bifentrina), e (iii) o meio 869. O papel de filtro foi cortado ao meio e cada seção colocada em uma placa de Petri, a qual o tratamento ou água deionizada foi aplicado a cada metade do papel. Uma semente de milho germinada foi situada em papel de filtro úmido cada metade. Dez larvas de segunda instância foram colocadas na linha média entre o papel de filtro tratado e não tratado. As placas foram seladas e mantidas durante 6 dias. Uma imagem da placa de teste com as células de RTI545 após 6 dias é mostrada na Figura 4, e os dados de todas as análises em placa estão resumidos na Tabela IV. Conforme foi observado na análise acima para a WPB, a RTI545, de maneira inesperada repeliu, mas não matou as larvas de CRW. Conforme pode ser observado na Figura 4 e na Tabela IV, as culturas de RTI545 foram excelentes em repelir as larvas de CRW; 100% das larvas estavam presentes na metade tratada com a água do papel de filtro e nenhuma das larvas no papel tratado de RTI545. Em contraste, as larvas foram estatisticamente uniformemente repartidas entre o tratamento e controle de água para a cepa HD- 1. O controle químico resultou em cerca de 19% das larvas presentes no papel de filtro tratado. A Tabela V mostra resultados similares. Os resultados mostram que a cepa de RTI545, de maneira inesperada, foi superior ao inseticida químico em repelir os insetos da semente do milho, mas não matam os insetos.

[045]A Tabela VI compara o efeito repelente em KCRW de canosamina e cepas de B. thuringiensis RTI545 e FD30, que mostra que o comportamento de RTI545 repelente contra os insetos pode ser devido à produção de canosamina.

[046] O Exemplo 7 mostra a inibição de incubação de ovo e repelente de nematoides das galhas da raiz expostos ao sobrenadante de RTI545, em comparação com a canosamina. Os resultados resumidos nas Tabelas VII e VIII sugerem que o efeito de RTI545 contra os nematoides não parece ser provocado pela produção de canosamina.

[047] O Exemplo 8 descreve o efeito positivo sobre o crescimento e rendimento nos ensaios de campo e de estufa sob pressão de inseto através do tratamento das sementes de milho e soja com os esporos de B. thuringiensis RTI545. Os efeitos sobre o crescimento, rendimento, e controle de pragas de milho, vermes filiformes, larvas de semente, foram medidos nos ensaios de campo em Wisconsin. Foram realizados experimentos adicionais na estufa para medir o efeito sobre o crescimento precoce dos vegetais da presença de vermes filiformes.

[048] Em um experimento de ensaio de campo, as sementes de milho foram tratadas com as suspensões contendo: o tratamento químico de controle de fungos (1) que o compreende MAXIM XL + APRON XL (referido como “FC”); (2) O FC + o inseticida de bifentrina de 0,125 mg / semente; (3) o FC + PONCHO 1250 (clotianidina 1,25 mg / semente) e Votivo (Bacillus firmus I-1582); (4) o FC 250 + PONCHO (clotianidina 0,25 mg / semente); (5) o FC 500 + PONCHO (clotianidina 0,5 mg / semente) e Votivo (Bacillus firmus I-1582) e; (6) o FC + bifentrina (0,125 mg / semente) + esporos de B. thuringiensis RTI545. As sementes de milho tratadas foram plantadas nos ensaios de campo separadas em Wisconsin em larva de sementes no solo infestado e vermes filiformes. Os resultados são mostrados abaixo na Tabela IX. A inclusão de B. thuringiensis RTI545 em combinação com o inseticida de bifentrina resultou em aprimoramentos significativos na porcentagem de emergência, suporte do vegetal, vigor e controle de ambos os vermes filiformes e a larva da semente e sobre as sementes tratadas somente com a bifentrina. Além disso, os resultados da combinação de B. thuringiensis RTI545 e bifentrina foram estatisticamente equivalentes ao produto PONCHO 1250 Votivo para o controle dos vermes filiformes e mostrou um aprimoramento em relação a este produto em larva de sementes de controle. Estes dados indicam que o tratamento de sementes de milho com uma combinação de B. thuringiensis RTI545 e um inseticida químico tal como a bifentrina significativamente aprimora o controle de insetos através da inclusão de inseticida químico isoladamente e é superior aos produtos comercialmente disponíveis para alguns tipos de controle de insetos.

[049] Em um segundo ensaio de campo, as sementes de milho foram tratadas com as mesmas suspensões como o primeiro ensaio contendo: (1) o MAXIM XL + APRON XL (referido como “FC”); (2) O FC + a bifentrina 0,125 mg / semente; (3) o FC + PONCHO 1250 (4) o FC 250 + PONCHO 250; e ((5) o FC + Bifentrina +esporos de RTI545. As sementes de milho tratadas foram plantadas nos ensaios de campo separadas em Wisconsin com os vermes filiformes presentes mas sem a larva da semente. Os danos de raízes de milho de alimentação de vermes filiformes foram classificados 41 dias após o plantio. Os resultados são mostrados abaixo na Tabela X e mostram os resultados similares para o ensaio anterior. Especificamente, a inclusão de B. thuringiensis RTI545 em combinação com o inseticida de bifentrina resultou em aprimoramentos significativos na porcentagem de emergência, suporte do vegetal, vigor e controle de vermes filiformes sobre as sementes tratadas com a bifentrina. Além disso, os resultados da combinação de B. thuringiensis RTI545 e bifentrina foram estatisticamente equivalentes ou superiores àquele do produto PONCHO 1250 Votivo para o controle dos vermes filiformes.

[050]Também foi determinado o rendimento médio nos ensaios de campo de milho após o tratamento das sementes com uma combinação de inseticidas químicos e esporos de RTI545 em comparação com PONCHO Votivo. Os resultados são mostrados abaixo na Tabela XI. A inclusão de B. thuringiensis RTI545 em combinação com o inseticida de bifentrina resultou em aprimoramentos significativos no rendimento em comparação com as sementes tratadas somente com a bifentrina. Além disso, a combinação de RTI545 e bifentrina superou o PONCHO 500 Votivo e o PONCHO 1250 Votivo, aumentando o rendimento de 13 sacas / acre (de 180,5 a 193,7 e de 185,5 a 193,7 sacas / acre, respectivamente), o que representa um aumento de 6,8% e 4,2% em rendimento de grãos, respectivamente. Estes dados indicam que o tratamento de sementes de milho com uma combinação de RTI545 e um inseticida químico tal como a bifentrina significativamente aprimora os rendimentos através da inclusão de inseticida químico isoladamente, e reduz a necessidade de aplicação no sulco de maiores quantidades de inseticidas químicos para o controle dos danos por insetos.

[051] O efeito no crescimento de insetos, sob pressão através do tratamento de sementes de milho com os esporos de RTI545 ainda foi avaliado. Em um conjunto de estudos de estufa, as sementes de milho foram tratadas em primeiro lugar com as suspensões de tratamento de sementes, conforme descrito como se segue e, em seguida, plantadas em solo infestado com as pragas de vermes filiformes (10 vermes filiformes por vaso com uma semente), em conjunto com um conjunto de controle, em que o solo não contém os vermes filiformes. As suspensões de tratamento de sementes foram como se segue: (1) o controle químico + MAXIM XL APRON XL (referido como “FC”); ( 2) o FC; (3) o FC + Bifentrina (0125 tratamentos mg / semente para todos os tratamentos tratados); (4) o FC + + Bifentrina RTI545 5,0 x 106; (5) o FC + Bifentrina RTI545 5,0 x 106 tratado termicamente; (6) o FC + Bifentrina RTI545 1,0 x 106; (7) o FC + RTI545 5,0 x 106; e (8) o FC + PONCHO 1250. As sementes tratadas foram avaliadas para a porcentagem de emergência.

[052] Os resultados são mostrados abaixo na Tabela XII. A inclusão de B. thuringiensis RTI545 em combinação com o inseticida de bifentrina resultou em 100% de emergência, que foi um aprimoramento em relação à inclusão de bifentrina isoladamente e forneceram resultados equivalentes para o controle sem o tratamento químico dos vermes filiformes e sem o FC + PONCHO 1.250. As raízes de ameixas de alimentação dos vermes filiformes dos vegetais de milho que causam o atrofiamento e a RTI545 isoladamente ou a Bifentrina com a RTI545 reduzida o atrofiamento do vegetal em vegetais sobreviventes. A RTI545 isoladamente exibiu a atividade na prevenção de perda dos vegetais, mas foi inferior ao inseticida de bifentrina na proteção precoce contra o atrofiamento. No entanto, a RTI545 foi mais eficaz na prevenção do atrofiamento do vegetal na medida em os vegetais crescem (dados não mostrados). Estes dados indicam que a inclusão de esporos de RTI545 no tratamento de sementes de milho, isoladamente ou em combinação com um inseticida químico tal como a bifentrina, significativamente aprimora a saúde do vegetal na presença dos vermes filiformes de pragas de insetos.

[053] Foram efetuados experimentos para determinar o efeito no rendimento através do tratamento de sementes de soja com uma combinação de química de fungicida padrão de ingredientes ativos em adição aos esporos de B. thuringiensis RTI545, em combinação com um inseticida químico. Os experimentos foram realizados conforme descrito abaixo. No experimento, as sementes de soja foram misturadas com uma solução que contém: (1) o controle químico de fludioxonil / TPM / mefenoxam (“FC”); (2) o FC + tiametoxam inseticida; e (3) o FC + tiametoxam + esporos de B. thuringiensis RTI545. As sementes de soja tratadas foram plantadas em três locais (N = 3) que estavam com infestação de vermes filiformes, e o rendimento foi analisado. Os resultados são apresentados abaixo na Tabela XIII. A inclusão dos esporos RTI545 em combinação com o tiametoxam resultou em aprimoramentos significativos no rendimento em comparação com as sementes tratadas com o tiametoxam isoladamente. Estes dados indicam que o tratamento de sementes de soja com uma combinação de um inseticida químico e RTI545 significativamente aprimora os rendimentos através da inclusão de um inseticida isoladamente, e reduz a necessidade de aplicação no sulco de maiores quantidades de inseticidas químicos para o controle dos danos por insetos.

[054] O Exemplo 9 descreve a capacidade da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 para reduzir a infestação de nematoides em vegetais de soja e de batata. Um estudo de estufa foi realizado com os vegetais de soja em vasos em solo infectados com os nematoides das galhas da raiz do sul (Meloidogyne incognita) a partir de sementes tratadas com e sem as células de RTI545. O tratamento de sementes inclui os produtos PONCHO Votivo (Bayer CropScience LP; AI = 40,3% de clotianidina, 8,1% de Bacillus firmus I-1582) e AVICTA COMPLETE (SYNGENTA; AI = 11,7% de tiametoxam, 10,3% de abamectina, 2,34% de tiabendazol, 0,3% de fludioxonil, 0,23% de mefenoxam, 0,12% de azoxistrobina). Os resultados são apresentados na Tabela XIV, abaixo. Aos 63 dias após o início, não existia nenhuma diferença estatística no número de ovos / vaso de nematoides, para a semente tratada com as células de RTI545 e sementes tratadas com a combinação química AVICTA COMPLETE. No entanto, o número de ovos / vaso de nematoides, para a semente tratada com as células de RTI545 foi menor do que para a semente tratada com o PONCHO Votivo. Isto demonstra o efeito positivo sobre o controle de nematoides em soja fornecida por Bacillus thuringiensis RTI545, equivalente para fornecer um controle superior em comparação com os produtos químicos comercialmente disponíveis e produtos à base de químicos biológicos mais ativos.

[055] Um estudo de estufa foi realizado com os vegetais de batata em vasos em solo naturalmente infectado com os nematoides Globodera sp. para determinar o efeito do tratamento do solo com as células de Bacillus thuringiensis RTI545. As batatas (variedade de nematoides sensível “Mintje”) foram plantadas em solo infectado com Globodera sp. (Controle) e reforçadas com 109 cfu de esporos por litro de solo de RTI545. Os resultados são mostrados no gráfico na Figura 5. Os tratamentos adicionais de solo foram incluídos no estudo: o produto VYDATE (DuPont; AI = [N’N’-dimetil-N-[(carbamoil de metil)oxil)oxi de metoil]-1-tiooxamimidato de oxamil ), produto Bioact (BAYER CropSciences LP: AI = cepa Paecilomyces lilacinus 251), o produto Carex (Nufarm, piridaben), e Bacillus thuringiensis spp. kurstaki HD-1). Os produtos foram aplicados às taxas designados nos rótulos dos produtos. Conforme pode ser observado na Figura 5, o número de quistos, por grama de biomassa de raiz para o solo tratado com as células de RTI545 foi significativamente reduzido em comparação com todos os tratamentos, incluindo os produtos químicos que contêm os ingredientes ativos. Isto demonstra que o efeito positivo sobre o controle de nematoides para a batata é fornecido por Bacillus thuringiensis RTI545, fornecendo um controle superior em comparação com com os produtos químicos comercialmente disponíveis e produtos à base de químicos biológicos mais ativos.

[056] O Exemplo 10 descreve os experimentos realizados para investigar o efeito sobre a emergência, doença de raiz, e o rendimento em algodão na presença de pressão da doença de Rhizoctonia quando as sementes foram tratadas com a cepa de RTI545 em adição aos agentes químicos ativos para o controle de agentes patogênicos.

[057] Especificamente, um experimento em algodão foi estabelecido como se segue: (1) a semente era não tratada (UTC); (2) a semente foi tratada com uma combinação de base de mefenoxam + fludioxonil + + imidacloprid, de acordo com o rótulo de fabricante (referida como “B”); (3) a semente foi tratada com base de mais 5 x 105 cfu / semente de RTI545 (B + RTI545 ); e (4) a semente foi tratada com uma base mais Vibrance (ingrediente ativo de sedaxano; SYNGENTA CROP PROTECTION, INC), de acordo com as instruções do rótulo (B + Vibrance). Os ensaios de campo foram realizados na Geórgia. Os ensaios foram inoculados com a Rhizoctonia misturando o inoculo seco com a semente no momento do plantio para uma taxa determinada para fornecer a infecção quando as sementes começam a crescer. A emergência média por cento de algodão é apresentada abaixo na Tabela XV.

[058] Os resultados na Tabela XV mostram que o tratamento com os esporos de RTI545 em adição à base resultou em um aprimoramento significativo na porcentagem emergência sobre a base química isoladamente. Além disso, o tratamento com a RTI545 foi realizado, bem como a base mais o produto Vibrance comercial com o composto químico ativo. Por conseguinte, o tratamento de sementes com a RTI545 pode fornecer um aprimoramento significativo na emergência, até mesmo sob condições de pressão do agente patogênico grave.

[059] O Exemplo 11 descreve os experimentos para investigar o efeito no crescimento e no rendimento sob pressão por insetos das sementes de trigo tratadas com os esporos de B. thuringiensis RTI545 e as sementes tratadas com a RTI545 mais os agentes químicos ativos para o controle de agentes patogênicos. Mais especificamente, os efeitos sobre o crescimento, rendimento, e controle de pragas de trigo, vermes filiformes e lagartas brancas, foram medidos nos ensaios de campo em Wisconsin. As sementes de trigo foram tratadas com as suspensões contendo: (1) o fungicida base químico de difenoconazol / tebuconazol / TPM / mefenoxan (referido como “FC”); (2) o FC + esporos de B. thuringiensis RTI545 (RTI545 1 x 106 cfu / g de semente); (3) o FC + bifentrina (20 g / semente); (4) o FC + bifentrina (20 g / semente) + RTI545 1 x 106 cfu / g de semente; (5) o FC + bifentrina (50 g / semente); e (6) o FC + bifentrina (50 g / semente) + RTI545 1 x 106 cfu / g de semente. Os resultados são mostrados abaixo na Tabela XVI. O tratamento de sementes com cada um dos esporos de B. thuringiensis RTI545, e o tratamento com os esporos de RTI545 com o fungicida base isoladamente ou em combinação com o inseticida, bifentrina, resultou em aprimoramentos significativos na porcentagem de emergência, vigor, controle de vermes filiformes e lagarta branca, e rendimento. Em todos os casos testados, a inclusão de esporos de RTI545 no tratamento de sementes de trigo resultou em aprimoramentos significativos no crescimento, vigor, o controle de pragas, e rendimento.

[060] O Exemplo 12 mostra o impacto de tratamento de sementes de soja RTI545 no crescimento e no rendimento contra o fungo patogênico Rhizoctonia. A Tabela XVII mostra uma comparação de RTI545 adicionado a um tratamento de sementes de base química em comparação com o tratamento com base, isoladamente e para a base do tratamento químico mais um outro ingrediente ativo. A adição de RTI545 ao tratamento químico de base resultou em aumentos significativos no suporte, vigor e rendimento em comparação com a base química.

[061] O Exemplo 13 mostra o impacto do tratamento de sementes de milho de RTI545 sobre o crescimento e rendimento contra os vermes filiformes e larvas de sementes. A Tabela XVIII mostra que a RTI545 fornece alguma proteção e intensifica a proteção inseticida contra essas pragas quando adicionada aos inseticidas químicos, tais como a clothinidina, bifentrina e clorantraniliprol.

[062] O Exemplo 14 mostra que a RTI545 é eficaz em aplicações em sulco contra a broca da raiz do milho e vermes filiformes de milho, resultando no aumento do rendimento e danos reduzidos nas raízes, isoladamente e especialmente em combinação com a bifentrina inseticida químico, conforme mostrado nas Tabelas XIX e XX.

[063] O Exemplo 15 mostra o impacto de tratamento de sementes de amendoim RTI545 sobre o crescimento e rendimento contra o fungo patogênico Rhizoctonia. A Tabela XXI mostra uma comparação de RTI545 adicionado a um tratamento de sementes de base química em comparação com o tratamento com base isoladamente. A adição de RTI545 ao tratamento químico de base resultou em aumentos significativos no suporte, vigor e rendimento em comparação com a base química.

[064] O Exemplo 16 apresenta as análises de estufa de tratamento de sementes de milho RTI545 contra os nematoides das lesões. A Tabela XXII mostra uma comparação de RTI545 adicionado a um tratamento de sementes com os fungicidas químicos de base em comparação com o tratamento de base isoladamente e o tratamento de base mais o PONCHO / Votivo. A RTI545 mais o tratamento de base forneceu comprimento da raiz superior ao tratamento não tratado em comparação com aquele fornecido pelo tratamento com uma base mais PONCHO / Votivo. A Tabela XXIII mostra que o tratamento de base + RTI545 forneceu uma redução superior na penetração e peso superior fresco em comparação com o tratamento com uma base e o tratamento de base + PONCHO / Votivo. Esta Tabela também mostra os resultados quando a RT545 é combinada com outros agentes de controle biológico.

[065] O Exemplo 17 apresenta as análises de encharcamento do tratamento de sementes de soja de RTI545 contra os nematoides de quisto da soja. A Tabela XXIV mostra uma redução de cistos em comparação com o controle não tratado.

[066] Os Exemplos 18 e 19 mostram as formulações de concentrado para a suspensão da RTI545 (Tabela XXV) e RTI545 mais bifentrina (Tabelas XXVI e XXVII). A Tabela XXVIII mostra que os esporos em uma formulação SC permaneceram estáveis durante as duas semanas de armazenamento a temperatura elevada

[067] Em uma realização da presente invenção, é fornecida uma composição que inclui uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação, para a aplicação a um vegetal para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal ou conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível.

[068] Em outra realização, é fornecido um método para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal ou conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível, o método incluindo o fornecimento de uma composição que compreende uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação a um vegetal, parte do vegetal, semente do vegetal, raízes do vegetal médio, o solo ou o meio de crescimento em torno do vegetal ou da semente do vegetal, ou no solo ou meio de crescimento antes do plantio ou semeadura das sementes dos vegetais do vegetal, em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção contra a praga dos vegetais no vegetal suscetível.

[069] Nas composições e métodos da presente invenção, os benefícios de crescimento do vegetal e/ou a proteção conferida pode ser exibida pelo vigor aprimorado das plântulas, o desenvolvimento das raízes aprimorado, o crescimento do vegetal aprimorado, a saúde do vegetal aprimorada, rendimento aumentado, aparência aprimorada, resistência aprimorada a pragas dos vegetais, infecção patogênica reduzida, ou uma de suas combinações.

[070]As composições e métodos da presente invenção são benéficos para uma grande variedade dos vegetais, incluindo, mas não limitado às monocotiledôneas, dicotiledôneas, cereais, tais como o milho, milho doce, milho para pipoca, semente de milho, silagem de milho, milho de campo, arroz, trigo, cevada, sorgo, aspargos, frutas como o arando, amora silvestre, framboesa, mirtilo, huckleberry, amora, groselha, sabugueiro, groselha, caneberry, bushberry, vegetais brássicos, tal como o brócolis, couve, couve-flor, couve de bruxelas, colarde, repolho crespo, mostarda, couve-rábano, vegetais cucurbitáceas, tais como o pepino, melão, melão almíscar, abóbora, melancia, abóbora, berinjela, bolbos tais como a cebola, alho, cebolas, frutas cítricas, tal como a laranja, toranja, limão, tangerina, tangelo, pumelo, frutos de hortícolas tal como a pimenta, tomate, cereja de chão, tomatillo, quiabo, uva, ervas, especiarias, vegetais folhosos, tai como o alface, aipo, espinafre, salsa, radicchio, verduras ou legumes tais como os feijões, incluindo o feijão verde, feijão-vagem, feijão shell, soja, feijão seco, feijão-de-bico, feijão lima, ervilhas, grão de bico, ervilhas, lentilhas, culturas de sementes oleaginosas, tais como a canola, rícino, coco, algodão, linho, óleo de palma, óleo de oliva, amendoim, colza, cártamo, sésamo, girassol, soja, pomóideas, tal como a maçã, crabapple, pêra, marmelo, mayhaw, raiz, tubérculo e vegetais de milho, tal como a cenoura, batata, batata doce, mandioca, beterraba, gengibre, rábano, rabanete, ginseng, nabos, fruta de pedra tais como o damasco, cereja, nectarina, pêssego, ameixa, ameixa seca, morango, nozes, tais como as amêndoas, pistache, pecan, nozes, avelãs, castanhas, caju, frutos da faia, noz de manteiga, macadâmia, kiwi, banana, (azul), agave, grama, relva, vegetais ornamentais, as poinsetias, estacas de madeira, tais como o castanheiro, carvalho, bordo, cana e beterraba. Em uma ou mais realizações, o vegetal pode incluir o milho, soja, batata, algodão, tomate, pimenta, cucurbitáceas, cana de açúcar, amendoim ou trigo; ou soja, algodão, trigo, milho ou batata.

[071] Nas composições e métodos da presente invenção, o dano de vegetal pode ser causado por uma ampla variedade de pragas dos vegetais, incluindo, por exemplo, mas não limitado a uma praga de insetos dos vegetais, tal como um percevejo de vegetal ocidental (WPB) Lygus hesperus, Coleoptera sp., Diabrotica sp., incluindo a broca da raiz do milho do oeste (D. virgifera), do sul (D. undecimpunctata) e do norte (D. barberi)), D. balteata, e D. longicornis, melanotus spp. (incluindo os vermes filiformes de milho, Melanotus communis e Melanotus cribulosus), Phyllophaga spp. (incluindo as lagartas brancas, vermes filiformes, os falsos pirilampos e Phyllophaga rugosa), Limonius spp. (vermes filiformes de beterraba de açúcar e Limonius agronus), Agriotes spp. (vermes filiformes incluindo Agriotes mancus, vermes filiformes de milho, lagartas brancas e larvas de sementes), Lepidoptera sp., Peridroma spp. (incluindo caterpilar variegada), Euxoa spp. (incluindo a caterpilar de exército), Agrotis spp. (incluindo caterpilar preta Agrotis ipsilon), Diptera sp., Hylemya spp. (incluindo a larva de semente do milho Delia Latura Teigen e Hylemya cilicrura), Tetanops spp. (incluindo a larva da raiz de beterraba), Homoptera sp., Penphicus sp. (incluindo o afídeo da raiz de beterraba, caterpilar, lagarta branca), Aphis spp. (incluindo o afídeo da raiz do milho), besouro de semente de milho Agonoderus lecontei, Feltia subgothica, ou suas combinações. Os insetos notáveis incluem o percevejo do vegetal ocidental, broca da raiz do milho do sul, vermes filiformes de milho, larva da semente do milho, larva da semente, vermes filiformes de trigo e lagarta branca.

[072] Nas composições e métodos da presente invenção, a praga de vegetal, por exemplo, pode ser mas não está limitada a um nematoide patogênico do vegetal, um nematoide reniforme, Rotlyenchulus spp., nematoide de punhal, Xiphinema spp., nematoide de lance, Hoplolaimus spp., nematoides de pinos (lesão), Pratylenchus spp., nematoides de anel, Criconemoides spp., nematoides de galhas, Meloidogyne spp., nematoides de bainha, Hemicycliophora spp., nematoides de espiral, Helicotylenchus spp., stubbyroot nematoide, Trichodorus spp., nematoide cístico, Heterodera spp. e Globodera spp., nematoides de picada, Belonolaimus spp., nematoides atrofiados, e Tylenchorhynchus spp., nematoides de escavação, Radopholus spp. ou suas combinações. Os nematoides notáveis incluem nematoides das galhas (Meloidogyne spp.), nematoides das lesões (Pratylenchus spp.) e nematoides de cisto (Heterodera spp., e Globodera spp.).

[073] Nas composições e métodos da presente invenção, a praga dos vegetais pode ser caracterizado, por exemplo, mas não limitado a um do agente patogênico de vegetal fúngico ou um agente patogênico do vegetal, tal como um fungo de ferrugem, um Botrytis spp., um Erwinia spp., um Dickeya spp., um Agrobacterium spp., um Xanthomonas spp., um Xylella spp., um Candidatus spp., um Fusarium spp., um Sclerotinia spp., um Cercospora/Cercosporidium spp., um Uncinula spp., um Podosphaera spp. (oídio), um Phomopsis spp., um Alternaria spp., um Pseudomonas spp., um Phytophthora spp., um Phakopsora spp., um Aspergillus spp., um Uromyces spp., tais como o Uromyces appendiculatus, um Cladosporium spp., um Rhizopus spp., um Penicillium spp., um Rhizoctonia spp., Macrophomina phaseolina, um Mycosphaerella spp., um Magnaporthe spp., tais como o Magnaporthe oryzae ou Magnaporthe grisea, um Monilinia spp., um Colletotrichum spp., um Diaporthe spp., um Corynespora spp., um Gymnosporangium spp., um Schizothyrium spp., um Gloeodes spp., um Botryosphaeria spp., um Neofabraea spp., um Wilsonomyces spp., um Sphaerotheca spp., um Erysiphe spp., um Stagonospora spp., um Pythium spp., um Venturia spp., um Ustilago spp., um Claviceps spp., um Tilletia spp., um Phoma spp., Cocliobolus sativus, Gaeumanomyces gaminis, um Rhynchosporium spp., um Biopolaris spp., e um Helminthosporium spp. ou suas combinações.

[074] Os fungos patogênicos notáveis incluem o Aspergillus flavus, Botrytis spp. tais como o Botrytis cinerea, Fusarium spp., tais como o Fusarium colmorum, Fusarium oxysporum ou Fusarium virguliforme, Phytophthora spp. tais como o Phytophthora capsici, Rhizoctonia spp. tal como o Rhizoctonia solani, Magnaporthe spp., tais como o Magnaporthe grisea e Magnaporthe oryzae, e Pythium spp. tais como o Pythium aphanidermatum e Pythium sylvatium, Monilinia spp. tais como o Monilinia fructicola, Colletotrichum spp., tais como o Colletotrichum gloeosporioides (estádio sexual Glomerella cingulata), isto é, a antracnose, Sclerotinia spp, tal como o Sclerotinia spp., tais como o Sclerotinia sclerotiorum e Sclerotinia homeocarpa; mais notadamente, Rhizoctonia spp. Os agentes patogênicos de maneira notável incluem os agentes patogênicos bacterianos Erwinia spp., tal como o Erwinia amylovora.

[075] Nas composições e métodos da presente invenção, as composições incluindo a cepa de RTI545 pode estar na forma de um líquido, um concentrado de suspensão, uma dispersão de óleo, um pó, um pó molhável seco, um granulado espalhável, ou um grânulo molhável seco, Em realizações, a Bacillus thuringiensis RTI545 pode estar presente na composição a uma concentração a partir de cerca de 1,0 x 108 CFU / mL a cerca de 1,0 x 1012 CFU / mL. Em realizações, a Bacillus thuringiensis RTI545 pode estar presente em uma quantidade a partir de cerca de 1,0 x 108 CFU / g a cerca de 1,0 x 1012 CFU / g. A Bacillus thuringiensis RTI545 pode estar na forma de esporos ou células vegetativas.

[076] Nas composições e métodos da presente invenção, a composição que inclui a cepa de RTI545 pode incluir uma ou à combinação de adjuvantes, incluindo, por exemplo, um veículo, um aglutinante, um tensoativo, um dispersante, ou um extrato de levedura. O veículo, aglutinantes, tensoativos, dispersantes, e/ou extrato de levedura são incluídos para aprimorar as propriedades da composição para a utilização para beneficiar o crescimento dos vegetais e ou conferir proteção contra as pragas dos vegetais, as propriedades, incluindo uma ou mais das propriedades aprimoradas de manuseio, a molhabilidade aprimorada, fluidez aprimoradas, aderência aprimoradas às sementes, estabilidade aprimoradas das cepas RTI545, e atividade aprimoradas da cepa de RTI545 após a entrega ou aplicação para a sementes dos vegetais, raízes, ou no solo. O extrato de levedura pode ser entregue a uma taxa para beneficiar de crescimento dos vegetais que varia a partir de cerca de 0,01% de a 0,2% em p/p.

[077]As composições incluindo a cepa de RTI545 pode estar na forma de uma matriz de plantio. A matriz de plantio pode estar na forma de uma mistura de envasamento de solo.

[078] Nas composições e métodos da presente invenção, a composição ainda pode incluir uma ou à combinação de um agente agrícola adicional, tal como um inseticida, fungicida, nematicida, bactericida, bioestimulante, herbicida, extrato de vegetal, extrato microbiano, regulador de crescimento dos vegetais, fertilizante ou do produto nutriente de cultura presente em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção contra a praga dos vegetais no vegetal suscetível. Em uma realização, a composição inclui a cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 e a uma ou a combinação do inseticida, fungicida, nematicida, bactericida, bioestimulante, herbicida, extrato vegetal, extrato microbiano, reguladores de crescimento dos vegetais, fertilizante ou produto nutriente de cultura, são formuladas em conjunto. Qualquer um dos agentes agrícolas adicionais podem ser um agente biológico, ou um agente químico. Em outras realizações a composição que compreende a cepa de RTI545 é formulado separadamente do agente agrícola adicional, que também pode ser formulado, e em seguida misturado com o agente agrícola adicional, tal como em uma mistura em tanque.

[079] O fertilizante pode ser um fertilizante líquido. O termo “fertilizante líquido” se refere a um fertilizante em uma forma de fluido ou líquido contendo diversas proporções de nitrogênio, fósforo e potássio (por exemplo, mas não limitado a de 5 a 15%, tal como 10% de nitrogênio, de 20 a 50%, tal como de 34% de fósforo e de 0 a 15%, tal como 0% de potássio) e nutrientes opcionalmente secundários e/ou micronutrientes, normalmente conhecidos como fertilizantes iniciantes que são ricos em fósforo e promovem o crescimento rápido e vigoroso da raiz.

[080] Conforme utilizado no presente, o termo “bioestimulante” se refere a uma substância ou microrganismo aplicado ao vegetais com o objetivo de intensificar a absorção de nutrientes, eficiência da nutrição, e/ou a tolerância à tensão abiótica, para aprimorar o vigor da cultura, rendimento e/ou os traços de qualidade das culturas, tais como o teor nutricional, aparência e vida útil, independentemente do seu teor de nutrientes. Os bioestimulantes operam através de diferentes mecanismos do que os fertilizantes e não possuem ação direta contra as pragas ou doenças.

[081] Em uma realização, a composição que inclui a cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 ainda compreende o inseticida químico de bifentrina.

[082] Digno de nota são as misturas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 com outras cepas de biocontrole, incluindo outras cepas de Bacillus thuringiensis, tais como Bacillus thuringiensis subsp. aizawai, ou Bacillus thuringiensis subesp. kurstaki, Bacillus subtilis, tais como o CH201 ou QST713 ou MBI600 ou RTI477, as cepas de Bacillus licheniformis tais como o CH200 ou RTI184, cepas de Bacillus velezensis, tais como RTI301, Bacillus subtilis var. amyloliquefaciens FZB24, Bacillus amyloliquefaciens D747, ou suas combinações.

[083]As misturas de cepas microbianas, incluindo a RTI545, podem ser utilizadas para intensificar a atividade contra as pragas-alvo específicas, mas também podem ser utilizadas para intensificar o espectro de utilidade. Como um exemplo, a combinação de uma cepa com uma forte atividade contra os insetos do solo com outras cepas que possuem uma forte atividade contra os nematoides, fungos ou benefícios de crescimento dos vegetais fortes podem ser combinadas. Além disso, essas misturas de cepas, também podem ser combinadas com os pesticidas (químicos) sintéticos para benefícios adicionais.

[084] uma realização, a composição que inclui a cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 ainda compreende uma cepa anteriormente identificada como Bacillus amyloliquefaciens RTI301 depositada como ATCC No. PTA-121165 (vide patente US 2016/0.186.273). Esta cepa foi recentemente reclassificada como uma cepa de Bacillus velezensis. No restante desta especificação, a cepa depositada como ATCC No. PTA-121165 será referida como “RTI301” ou “Bacillus velezensis RTI301”. Em uma realização, a combinação da RTI545 e das cepas RTI301 estende o benefício para o crescimento dos vegetais e proteção contra as pragas dos vegetais por alargamento e aumento do intervalo de temperatura em que uma ou ambas as cepas fornecem uma proteção máxima contra as pragas dos vegetais, incluindo os fungos patogênicos dos vegetais,

[085] Em outras realizações, a composição que inclui a cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 ainda compreende uma cultura biologicamente pura de um Bacillus licheniformis CH200 depositada como DSM 17236, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; uma cultura biologicamente pura de um Bacillus subtilis CH201 depositada como DSM 17231, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; uma cultura biologicamente pura de um Bacillus subtilis RTI477 depositada como ATCC No. PTA-121167, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; uma cultura biologicamente pura de uma cepa de Bacillus amyloliquefaciens D747 depositada como FERM BP-8234; uma Bacillus licheniformis RTI184 depositada como ATCC PTA-121722, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação, ou quaisquer de suas combinações, incluindo as combinações que também compreendem a RTI301.

[086] Em uma realização, a composição que inclui a cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 ainda compreende o inseticida químico, bifentrina, e a composição é entregue em combinação com um fertilizante líquido de um vegetal, parte do vegetal, semente do vegetal, raízes do vegetal, meio de crescimento ou solo em torno do vegetal ou da semente do vegetal, ou no meio de crescimento ou solo do vegetal antes do plantio ou semeadura das sementes do vegetal. Os Exemplos de utilização do inseticida, bifentrina, em combinação com um fertilizante líquido para beneficiar o crescimento dos vegetais estão descritos, por exemplo, na publicação WO 2016/108972 A1, a qual está incorporado no presente como referência na sua totalidade.

[087] Em outra realização, é fornecido um método para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal ou conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível, o método compreende: o fornecimento de um vegetal, parte do vegetal, semente do vegetal, raízes do vegetal, meio de crescimento ou solo em torno do vegetal ou da semente do vegetal, ou o meio de crescimento ou solo, antes do plantio dos vegetais ou semeadura das sementes do vegetal, de uma combinação de: uma composição que compreende uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC PTA-122161 ou um de seus mutantes que possui todas as características de identificação das mesmas em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento do vegetal, ou e/ou para conferir proteção contra a praga dos vegetais no vegetal suscetível; e uma ou a combinação de agentes agrícolas adicionais, tais como um inseticida, fungicida, nematicida, bactericida, herbicida, extrato dos vegetais, reguladores de crescimento dos vegetais, ou fertilizantes, conforme descrito no presente, em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção contra a praga dos vegetais no vegetal suscetível. Qualquer um dos agentes agrícolas adicionais podem ser um agente biológico, ou um agente químico. Nesta realização, a composição que inclui a cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 e uma ou a combinação de agente(s) agrícola(s) adicional(is), conforme descrito no presente, são entregues separadamente para o vegetal suscetível, em vez de a partir de uma única formulação.

[088] Em uma realização, a composição que inclui a cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 é entregue em combinação com um fertilizante líquido de vegetal, parte do vegetal, semente do vegetal, raízes do vegetal, o solo ou o meio de crescimento em torno do vegetal, ou a semente do vegetal, ou no meio de crescimento ou solo do vegetal antes do plantio ou semeadura das sementes do vegetal.

[089] Em uma realização, a composição que inclui a cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 é entregue em combinação com o inseticida químico, bifentrina, e com o fertilizante líquido de vegetal, parte do vegetal, semente do vegetal, raízes do vegetal, meio de crescimento ou solo em torno do vegetal ou da semente do vegetal, ou no meio de crescimento ou solo do vegetal antes do plantio ou semeadura das sementes do vegetal.

[090] Em uma realização, uma semente de vegetal é fornecida que é revestida com uma composição que compreende um agente biológico agrícola adicional, tais como: os esporos de uma cultura biologicamente pura de Bacillus velezensis RTI301 depositada como ATCC No PTA-121165, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação, presente em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível. A composição pode incluir uma quantidade de esporos de Bacillus velezensis a partir de cerca de 1,0 x 102 CFU / semente a cerca de 1,0 x 109 CFU / semente.

[091]As composições de sementes revestidas da presente invenção são benéficos para uma grande variedade de sementes dos vegetais, incluindo, mas não limitada às sementes de monocotiledôneas, dicotiledôneas, cereais, tais como o milho, milho doce, milho para pipoca, semente de milho, silagem de milho, milho de campo, arroz, trigo, cevada, sorgo, aspargos, frutas como o arando, amora silvestre, framboesa, mirtilo, huckleberry, amora, groselha, sabugueiro, groselha, caneberry, bushberry, vegetais brássicos, tal como o brócolis, couve, couve-flor, couve de bruxelas, colarde, repolho crespo, mostarda, couve-rábano, vegetais cucurbitáceas, tais como o pepino, melão, melão almíscar, abóbora, melancia, abóbora, berinjela, bolbos tais como a cebola, alho, cebolas, frutas cítricas, tal como a laranja, toranja, limão, tangerina, tangelo, pumelo, frutos de hortícolas tal como a pimenta, tomate, cereja de chão, tomatillo, quiabo, uva, ervas, especiarias, vegetais folhosos, tai como o alface, aipo, espinafre, salsa, radicchio, verduras ou legumes tais como os feijões, incluindo o feijão verde, feijão-vagem, feijão shell, soja, feijão seco, feijão-de- bico, feijão lima, ervilhas, grão de bico, ervilhas, lentilhas, culturas de sementes oleaginosas, tais como a canola, rícino, coco, algodão, linho, óleo de palma, óleo de oliva, amendoim, colza, cártamo, sésamo, girassol, soja, pomóideas, tal como a maçã, crabapple, pêra, marmelo, mayhaw, raiz, tubérculo e vegetais de milho, tal como a cenoura, batata, batata doce, mandioca, beterraba, gengibre, rábano, rabanete, ginseng, nabos, fruta de pedra tais como o damasco, cereja, nectarina, pêssego, ameixa, ameixa seca, morango, nozes, tais como as amêndoas, pistache, pecan, nozes, avelãs, castanhas, caju, frutos da faia, noz de manteiga, macadâmia, kiwi, banana, (azul), agave, grama, relva, vegetais ornamentais, as poinsetias, estacas de madeira, tais como o castanheiro, carvalho, bordo, cana e beterraba. Em uma ou mais realizações, o vegetal pode incluir o milho, soja, batata, algodão, tomate, pimenta, cucurbitáceas, cana de açúcar, amendoim ou trigo; ou soja, algodão, trigo, milho ou batata.

[092] Em uma realização da semente do vegetal revestida com a composição, a composição ainda compreende uma ou a combinação de agente(s) agrícola(s) adicional(is) conforme descrito no presente em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção contra a praga dos vegetais em o vegetal suscetível.

[093] Em uma realização, é fornecido um método para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal ou conferir proteção contra uma praga dos vegetais em um vegetal suscetível, o método compreende: o plantio de uma semente do vegetal, em que a semente tenha sido revestida com uma composição que compreende uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação, em que o crescimento do vegetal a partir da semente é beneficiado e/ou a proteção contra a praga dos vegetais é conferida.

[094] Em uma realização, o método ainda inclui o fornecimento de um fertilizante líquido para a semente revestida do meio de vegetal, solo ou crescimento em torno da semente revestida do vegetal, ou no meio de crescimento ou solo antes do plantio da semente revestida do vegetal.

[095] Em uma realização do método, a semente de vegetal é revestida com a composição, que ainda compreende um agente biológico agrícola adicional, tais como Bacillus velezensis RTI301 depositada como ATCC PTA-121165. Em uma realização, a combinação da RTI545 e das cepas RTI301 estende o benefício para o crescimento dos vegetais e proteção contra as pragas dos vegetais por alargamento e aumento do intervalo a parti de temperatura em que uma ou ambas as cepas fornece uma proteção máxima contra as pragas dos vegetais, incluindo os fungos patogênicos dos vegetais,

[096] Em uma realização, a semente do vegetal revestida com a composição, ainda compreende um inseticida químico, e o método ainda inclui o fornecimento de um fertilizante líquido para a semente revestida do meio de vegetal, solo ou crescimento em torno da semente revestida do vegetal, ou no meio de crescimento ou solo antes do plantio da semente revestida do vegetal. Em uma realização, o inseticida químico é a bifentrina.

[097] Em realizações no presente que compreendem as sementes revestidas, o termo “semente” se refere não apenas às sementes verdadeiras, mas também a outras partes do vegetal de propagação do vegetal tais como as plântulas, transplantes, estacas (por exemplo, caules, raízes, folhas, e similares), esporos, rebolos (por exemplo, de cana de açúcar), bolbos, rizomas, tubérculos, ou suas partes, ou outros tecidos do vegetal a partir da qual pode ser obtido um vegetal completo.

[098] Nas composições e métodos da presente invenção, a composição pode incluir um fungicida. O fungicida pode incluir um extrato de Lupinus albus. Em uma ou mais realizações, o fungicida pode incluir um polipeptídeo BLAD. O polipeptídeo BLAD pode ser um fragmento da proteína que ocorre naturalmente de armazenamento de sementes de tremoço doce (Lupinus albus), que atua sobre os agentes patogênicos fúngicos suscetíveis de provocar danos à parede da célula fúngica e romper a membrana celular interna. As composições podem incluir cerca de 20% ddo polipeptídeo BLAD.

[099]Além disso, em um ou mais realizações, os inseticidas, herbicidas, fungicidas, e nematicidas adequados das composições e métodos da presente invenção podem incluir o seguinte:

[0100] Inseticidas: (A0) diversos inseticidas, incluindo a agrigata, al- fosfida, ambliseius, afelina, afídio, afidoletes, artimisinina, autografa californica NPV, azociclotina, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis subsp. aizawai, Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, Bacillus thuringiensis, Beauveria, Beauveria bassiana, betaciflutrina, biológicas, bisultap, broflutrinato, bromofos-e, bromopropilato, Bt-Milho-GM, Bt-Soja-GM, capsaicina, cartap, extrato de celastrus, clorantraniliprol, clorbenzurona, cloretoxifos, clorfluazurona, clorpirifos-e, cnidiadina, criolita, cianofos, ciantraniliprol, ciclaniliprol, cialotrina, ciexatina, cipermetrina, dacnusa, DCIP, dicloropropeno, dicofol, diglifus, diglifus+dacnusa, dimetacarb, ditioéter, dodecil-acetato, emamectina, encarsia, EPN, eretmocerus, etileno-dibromida, eucaliptol, ácidos graxos, ácidos graxos / sais, fenazaquina, fenobucarb (BPMC), fenpiroximato, flubrocitrinato, flufenzina, flupiradifurona, formetanato, formotiona, furatiocarb, gamma-cialotrina, suco de alho, vírus granulosis, harmonia, NPV armigera heliotis, bactéria inativa, ácido indol-3-ilbutírico, iodometano, ferri, isocarbofos, isofenfos, isofenfos-m, isoprocarb, isotioato, kaolina, lindano, liuiangmicina, matrina, mefosfolana, metaldeida, metarhizium-anisopliae, metamidofos, metolcarb (MTMC), óleo mineral, mirex, m-isotiocianato, monosultap, verrucaria mirotecium, naled, formosa neocrisocaris, nicotina, nicotinoídes, óleo, ácido oléico, ometoato, orius, oximatrina, paecilomyces, óleo de parafina, paration-e, pasteuria, óleo de petróleo, feromônios, ácido fosforoso, fotorhabdus, foxim, fitoseiulus, pirimifos-e, óleo de vegetal, GV xylostella plutella, vírus poliedrose, extratos de polifenol, oleato de potássio, profenofos, prosuler, protiofos, piraclofos, piretrinas, piridafentiona, pirimidifeno, piriproxifeno, extrato de quillay, quinometionato, óleo de colza, rotenona, rotenona, saponina, saponozit, compostos de sódio, fluossilicato de sódio, amido, esteinernema, streptomyces, sulfluramida, enxofre, tebupirimfos, temefos, tetradifona, tetraniliprol, tiofanox, tiometona, transgênicos (por exemplo, Cry3Bb1), triazamato, tricoderma, tricogramma, triflumurona, verticillium, vertrina, insecticidas isoméricos (por exemplo, o cappa-bifentrina, cappa-teflutrina), dicloromezotiaz, broflanilid, piraziflumid; (A1) a classe dos carbamatos, incluindo o aldicarb, alanilcarb, benfuracarb, carbarila, carbofurano, carbosulfano, metiocarb, metomil, oxamil, pirimicarb, propoxur e tiodicarb; (A2) a classe dos organofosfatos, incluindo o acefato, azinfos-etila, azinfos-metila, clorfenvinfos, clorpirifos, clorpirifos-metila, demeton-S-metila, diazinona, diclorvós / DDVP, dicrotofos, dimetoato, dissulfotona, etiona, fenitrotiona, ftiona, isoxationa, malationa, metamidafós, metidationa, mevinfós, monocrotofós, oximetoato, oxidemeton-metila, parationa, paration-metila, fentoato, forato, fosalona, fosmido, fosfamidona, pirimifos-metila, quinalfos, terbufos, tetraclorvinfos, triazofos e triclorfona; (A3) a classe de compostos organoclorados de ciclodieno, tais como o endosulfano; (A4) a classe de fiproles, incluindo o etiprol, fipronil, pirafluprol e piriprol; (A5) a classe dos neonicotinóides, incluindo o acetamiprid, clotianidina, dinotefurano, imidacloprid, nitenpiram, tiacloprid e tiametoxam; (A6) a classe de spinosyns, tais como o spinosad e spinetoram; (A7) os ativadores dos canais de cloreto da classe das mectinas, incluindo a abamectina, benzoato de emamectina, ivermectina, lepimectina e milbemectina; (A8) os imitadores de hormônios juvenis, tais como o hidropreno, cinopreno, metopreno, fenoxicarb e piriproxifeno; (A9) os bloqueadores da alimentação por homopterana seletiva, tais como a pimetrozina, flonicamid e pirifluquinazona; (A10) os inibidores do crescimento de ácaros, tais como a clofentezina, hexitiazox e etoxazol; (A11) os inibidores da sintase ATP mitocondrial, tais como a diafentiurona, óxido de fenbutatina e propargito; os desacopladores de fosforilação oxidativa, tais como o clorfenapir; (A12) os bloqueadores do canal do receptor de acetilcolina nicotínico, tais como o bensultap, cloridrato de cartap, tiociclam e tiosultap de sódio; (A13) os inibidores da biossíntese de quitina tipo 0 da classe da benzoilureia, incluindo a bistriflurona, diflubenzurona, flufenoxurona, hexaflumurona, lufenurona, novalurona e teflubenzurona; (A14) os inibidores da biossíntese de quitina tipo 1, tal como a buprofezina; (A15) os disruptores de muda, tal como a ciromazina; (A16) os agonistas do receptor de ecdison, tais como o metoxifenozid, tebufenozid, halofenozid e cromofenozid; (A17) os agonistas do receptor da octopamina, tal como o amitraz; (A18) os inibidores do transporte de elétrons do complexo mitocondrial piridabeno, tebufenpirad, tolfenpirad, flufenerim, cienopirafeno, ciflumetofeno, hidrametilnon, acequinocil ou fluacripirim; (A19) os bloqueadores de canal de sódio dependentes de voltagem, tais como o indoxacarb e metaflumizona; (A20) os inibidores da síntese lipídica, tais como o espirodiclofeno, espiromesifeno e espirotetrama; (A21) os moduladores do receptor de rianodina da classe das diamidas, incluindo a flubendiamida, os compostos de ftalamida (R)-3-clor-N1-{2-metil-4-[1,2,2,2-tetrafluor-1- (trifluormetil))etil]fenil}-N2-(1-metil-2-metilsulfoniletil)ftalamida e (S)-3-clor-N1-{2- metil-4-[1,2,2,2-tetrafluor-1-(trifluormetil)etil]fenil}-N2-(1-metil-2- metilsulfoniletil)ftalamida, clorantraniliprol, ciclaniliprol e ciantraniliprol; (A22) os compostos de modo de desconhecido ou incerto de ação, tais como a azadiractina, amidoflumet, bifenazato, fluensulfurona, butóxido de piperonila, piridalil, sulfoxaflor; ou (A23) os moduladores do canal de sódio da classe dos piretróides, incluindo a acrinatrina, aletrina, bifentrina, ciflutrina, lambda- cialotrina, cipermetrina, alfa-cipermetrina, beta-cipermetrina, zeta-cipermetrina, deltametrina, esfenvalerato, etofemprox, fenpropatrina, fenvalerato, flucitrinato, tau-fluvalinato, permetrina, silafluofeno, teflutrina e tralometrina.

[0101] Digno de nota são as misturas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 com outras cepas de biocontrole, incluindo as cepas de Bacillus subtilis, tais como o CH201, as cepas de Bacillus licheniformis tais como o CH200, outras cepas de Bacillus thuringiensis, tais como o Bacillus thuringiensis subsp. aizawai, Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, ou suas combinações para o controle de insetos.

[0102] Nas composições e métodos da presente invenção, a composição pode incluir um inseticida químico. O inseticida químico pode incluir os piretróides tais como a bifentrina, teflutrina, zeta-cipermetrina, ciflutrina; um organofosfato, tais como o cloretoxifos, clorpirifos, tebupirimfos, fiproles, tais como o fipronil; os neonicotinóides, tais como o imidacloprid, tiametoxam, clotianidina; as diamidas, tais como o clorantraniliprol, ciantraniliprol, ciclaniliprol; ou suas misturas.

[0103] De preferência são as misturas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 com os agentes de controle químico de insetos que compreendem o clorantraniliprol, cloretoxifos, clorpirifos-e, ciantraniliprol, ciclaniliprol, cipermetrina, dicloropropeno, flupiradifurona, gama-cialotrina, profenofos, tebupirimfos, teflutrina, kapa-bifentrina, kapa-teflutrina, carbofuran, carbosulfan, oxamil, tiodicarb, clorpirifos, clorpirifos-e, clorpirifos-metila, diazinona, forato, terbufos, fipronil, acetamiprid, clotianidina, imidacloprid, tiacloprid, tiametoxam, abamectina, flonicamida, flubendiamida, bifentrina, lambda-cialotrina, cipermetrina, zeta-cipermetrina, deltametrina, ou suas misturas.

[0104] De maior preferência são as misturas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 com a clotianidina, tiametoxam, imidacloprid, teflutrina, fipronil, clorpirifos-e, tebupirimfos, bifentrina, cipermetrina, zeta-cipermetrina, gama-cialotrina, oxamil, clorantraniliprol, ciantraniliprol, ciclaniliprol, ou suas misturas,

[0105] Em uma ou mais realizações, o inseticida pode compreender a bifentrina e a composição pode ser formulada como um líquido. Em uma ou mais realizações, o inseticida pode compreender a bifentrina e clotianidina. Em uma ou mais realizações, o inseticida pode compreender a bifentrina e clotianidina e a composição pode ser formulada como um líquido. Em uma ou mais realizações, o inseticida pode compreender a bifentrina ou zeta- cipermetrina. Em uma ou mais realizações, a composição pode ser formulada como um líquido e o inseticida pode compreender a bifentrina ou zeta- cipermetrina.

[0106] Em uma realização, o inseticida químico inclui a bifentrina. Em uma realização, o inseticida químico inclui a bifentrina e a composição ainda inclui um silicato de alumínio-magnésio hidratado, e, pelo menos, um dispersante selecionado a partir do grupo que consiste em um éster de sacarose, um lignosulfuronato, um alquilpoliglicosídeo, um condensado de formaldeído de ácido naftalenossulfónico e um fosfato éster. O inseticida de bifentrina pode estar presente em uma concentração que varia a partir de 0,1 g/mL a 0,2 g/mL. O inseticida de bifentrina pode estar presente a uma concentração de 0,17 g/mL. A taxa de aplicação do inseticida de bifentrina pode estar no intervalo a partir de cerca de 0,1 gramas de bifentrina por hectare (g ia/ha) e cerca de 1.000 g de ia/ha, de maior preferência, em um intervalo a partir de cerca de 1 g de ia/ha para cerca de 100 g de ia/ha.

[0107]A bifentrina, de preferência, pode estar presente em uma concentração de 1,0% em peso a 35% em peso, mais especialmente, a partir de 15% em peso a 25% em peso com base no peso total de todos os componentes na composição. A composição inseticida de bifentrina pode ser formulada de uma maneira adequada para a mistura de um líquido com um fertilizante.

[0108] Fungicidas: (B0) benzovindiflupir, anitiperonosporicos (tais como a ametoctradina, amisulbrom, bentiavalicarb, ciazofamid, cimoxanil, dimetomorf, etaboxam, famoxadona, fenamidona, flumetover, flumorf, fluopicolida, iprovalicarb, mandipropamid, valifenalato, benalaxil, benalaxil-M, furalaxil, metalaxil, e metalaxil-M), ametoctradina, amisulbrom, sais de cobre (por exemplo, o hidróxido cobre, oxicloreto de cobre, sulfato de cobre, persulfato de cobre), boscalid, tiflumazida, flutianil, furalaxil, tiabendazol, benodanil, mepronil, isofetamid, fenfuram, bixafeno, fluxapiroxad, penflufeno, sedaxano, coumoxistrobina, enoxastrobina, flufenoxistrobina, piraoxistrobina, pirametostrobina, triclopiricarb, fenaminstrobina, metominostrobina, piribencarb, meptildinocap, acetato de fentina, cloreto de fentina, hidróxido de fentina, oxitetraciclina, clozolinato, cloronab, tecnazeno, etridiazol, iodocarb, protiocarb, várias cepas de Bacillus (por exemplo, as cepas identificadas como o CH200, CH201, RTI184, RT1301, QST713, FZB24, MBI600, D747), extraído de Melaleuca alternifolia, extraído de Lupinus albus doce, BLAD polipeptida, pirisoxazol, oxpoconazol, etaconazol, fenpirazamina, fenpicoxamida, mefentrifluconazol, naftifina, terbinafina, validamicina, pirimorf, valifenalato, ftalida, probenazol, isotianil, laminarina, extraído de Reynoutria sachalinensis, ácido fosforoso e sais, tecloftalam, triazoxida, piriofenona, óleos orgânicos, bicarbonato de potássio, clorotalonil, fluoroimida; (B1) azóis, incluindo o bitertanol, bromuconazol, ciproconazol, difenoconazol, diniconazol, enilconazol, epoxiconazol, fluquinconazol, fenbuconazol, flusilazol, flutriafol, hexaconazol, imibenconazol, ipconazol, metconazol, miclobutanil, penconazol, propiconazol, protioconazol, simeconazol, triadimefon, triadimenol, tebuconazol, tetraconazol, triticonazol, procloraz, pefurazoato, imazalil, triflumizol, ciazofamid, benomil, carbendazim, tiabendazol, fuberidazol, etaboxam, etridiazol e himexazol, azaconazol, diniconazol-M, oxpoconazol, paclobutrazol, uniconazol, 1-(4-cloro- fenil)-2-([1,2,4]triazol-1-il)-cicloeptanol e imazalilsulffato; (B2) estrobilurinas, incluindo a azoxistrobina, dimoxistrobina, enestroburina, fluoxastrobina, kresoxim-metila, metominostrobina, orisastrobina, picoxistrobina, piraclostrobina, trifloxistrobina, enestroburina, (2-cloro-5-[1-(3- metilbenziloxiimino)etil]benzil)carbamato de metila, (2-cloro-5-[1-(6-metilpiridin- 2-ilmetoxiimino)etil]benzil)carbamato de metila e 2-(orto-(2,5- dimetilfeniloximetileno)-fenil)-3-metoxiacrilato de metila, 2-(2-(6-(3-cloro-2-metil- fenoxi)-5-fluoro-pirimidin-4-iloxi)-fenil)-2-metoxiimino-N-metil-acetamida e éster de metila de ácido 3-metoxi-2-(2-(N-(4-metoxi-fenil)- ciclopropanecarboximidoilsulfanilmetil)-fenil)-acrílico; (B3) carboxamidas, incluindo a carboxina, benalaxil, benalaxil-M, fenhexamid, flutolanil, furametpir, mepronil, metalaxil, mefenoxam, ofuraco, oxadixil, oxicarboxina, pentiopirad, isopirazam, tifluzamida, tiadinil, 3,4-dicloro-N-(2-cianofenil)isotiazol-5- carboxamida, dimetomorf, flumorf, flumetover, fluopicolid (picobenzamid), zoxamida, carpropamid, diclocimet, mandipropamid, N-(2-(4-[3-(4- clorofenil)prop-2-iniloxi]-3-metoxifenil)etil)-2-metanosulfonil-amino-3- metilbutiramida, N-(2-(4-[3-(4-cloro-fenil)prop-2-iniloxi]-3-metoxi-fenil)etil)-2- etanosulfonilamino-3-metilbutiramida, 3-(4-clorofenil)-3-(2-isopropoxicarbonil- amino-3-metil-butirilamino)propionato de metila, N-(4'-bromobifenil-2-il)-4- difluorometil-2-metiltiazol-5-carboxamida, N-(4'-trifluorometil-bifenil-2-il)-4- difluorometil-2-metiltiazol-5-carboxamida, N-(4'-cloro-3'-fluorobifenil-2-il)-4- difluorometil-2-metil-tiazol-5-carboxamida, N-(3',4'-dicloro-4-fluorobifenil-2-il)-3- difluoro-metil-1-metil-pirazol-4-carboxamida, N-(3',4'-dicloro-5-fluorobifenil-2-il)- 3-difluorometil-1-metilpirazol-4-carboxamida, N-(2-ciano-fenil)-3,4- dicloroisotiazol-5-carboxamida, 2-amino-4-metil-tiazol-5-carboxanilida, 2-cloro- N-(1,1,3-trimetil-indan-4-il)-nicotinamida, N-(2-(1,3-dimetilbutil)-fenil)-1,3-dimetil- 5-fluoro-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(4'-cloro-3',5-difluoro-bifenil-2-il)-3- difluorometil-1-metil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(4'-cloro-3',5-difluoro-bifenil-2- il)-3-trifluorometil-1-metil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3',4'-dicloro-5-fluoro- bifenil-2-il)-3-trifluorometil-1-metil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3',5-difluoro-4'- metil-bifenil-2-il)-3-difluorometil-1-metil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3',5- difluoro-4'-metil-bifenil-2-il)-3-trifluorometil-1-metil-1H-pirazol-4-carboxamida, N- (cis-2-biciclopropil-2-il-fenil)-3-difluorometil-1-metil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(trans-2-biciclopropil-2-il-fenil)-3-difluoro-metil-1-metil-1H-pirazol-4- carboxamida, fluopiram, N-(3-etil-3,5-5-trimetil-cicloexil)-3-formilamino-2-hidroxi- benzamida, oxitetraciclina, siltiofam, N-(6-metoxi-piridin-3-il) ciclopropanecarboxamida, 2-iodo-N-fenil-benzamida, N-(2-biciclo-propil-2-il- fenil)-3-difluormetil-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2-il)- 1,3-dimetilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-1,3-dimetil-5- fluoropirazol-4-il-carboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-5-cloro-1,3-dimetil- pirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-3-fluorometil-1- metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'- trifluorobifenil-2-il)-3-(clorofluorometil)- 1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-3-difluorometil-1- metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-3-difluorometil-5- fluoro-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2- il)-5-cloro-3- difluorometil-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-3- (clorodifluorometil)-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2-il)- 1-metil-3-trifluorometilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-5- fluoro-1-metil-3-trifluorometilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4',5'-trifluorobifenil-2- il)-5-cloro-1-metil-3-trifluorometilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(2',4',5'- trifluorobifenil-2-il)-1,3-dimetilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(2',4',5'-trifluorobifenil-2- il)-1,3-dimetil-5-fluoropirazol-4-ilcarboxamida, N-(2',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-5- cloro-1,3-dimetilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(2',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-3- fluorometil-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(2',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-3- (clorofluorometil)-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida,N-(2',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-3- difluorometil-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(2',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-3- difluorometil-5-fluoro-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(2',4',5'-trifluorobifenil-2- il)-5-cloro-3-difluorometil-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(2',4',5'- trifluorobifenil-2-il)-3-(clorodifluorometil)-1-metilpirazol-4-ilcarboxamida, N- (2',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-1-metil-3-trifluorometilpirazol-4-ilcarboxamida, N- (2',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-5-fluoro-1-metil-3-trifluorometilpirazol-4- ilcarboxamida, N-(2',4',5'-trifluorobifenil-2-il)-5-cloro-1-metil-3- trifluorometilpirazol-4-ilcarboxamida, N-(3',4'-dicloro-3-fluorobifenil-2-il)-1-metil- 3-trifluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3',4'-dicloro-3-fluorobifenil-2-il)-1- metil-3-difluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3',4'-difluoro-3-fluorobifenil-2- il)-1-metil-3-trifluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3',4'-difluoro-3- fluorobifenil-2-il)-1-metil-5-difluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3'-cloro-4'- fluoro-3-fluorobifenil-2-il)-1-metil-3-difluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N- (3',4'-dicloro-4-fluorobifenil-2-il)-1-metil-3-trifluorometil-1H-pirazol-4- carboxamida, N-(3',4'-difluoro-4-fluorobifenil-2-il)-1-metil-S-trifluorometil-1H- pirazol-4-carboxamida, N-(3',4'-dicloro-4-fluorobifenil-2-il)-1-metil-3- difluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3',4'-difluoro-4-fluorobifenil-2-il)-1- metil-3-difluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3'-cloro-4'-fluoro-4- fluorobifenil-2-il)-1-metil-5-difluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3',4'- dicloro-5- fluorobifenil-2-il)-1-metil-3-trifluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N- (3',4'-difluoro-5-fluorobifenil-2-il)-1-metil-3-trifluorometil-1H-pirazol-4- carboxamida, N-(3',4'-dicloro-5-fluorobifenil-2-il)-1-metil-S-difluorometil-1H- pirazol-carboxamida, N-(3',4'-difluoro-5- fluorobifenil-2-il)-1-metil-3-difluorometil- 1H-pirazol-4-carboxamida, N-(3',4'-dicloro-5-fluorobifenil-2-il)-1,3-dimetil-1H- pirazol-4-carboxamida, N-(3'-cloro-4'-fluoro-5-fluorobifenil-2-il)-1-metil-3- difluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(4'-fluoro-4-fluorobifenil-2-il)-1 -metil- 3-trifluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(4'-fluoro-5-fluorobifenil-2-il)-1- metil-3-trifluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida,N-(4'-cloro-5-fluorobifenil-2-il)-1- metil-3-trifluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(4'-metil-5-fluorobifenil-2-il)-1- metil-3-trifluorometil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(4'-fluoro-5-fluorobifenil-2-il)- 1,3-dimetil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-(4'-cloro-5-fluorobifenil-2-il)-1,3-dimetil- 1H-pirazol-4-carboxamida, N-(4'-metil-5-fluorobifenil-2-il)-1,3-dimetil-1H-pirazol- 4-carboxamida, N-(4'-fluoro-6-fluorobifenil-2-il)-1-metil-3-trifluorometil-1H- pirazol-4-carboxamida, N-(4'-cloro-6-fluorobifenil-2-il)-1-metil-3-trifluorometil-1H- pirazol-4-carboxamida, N-[2-(1,1,2,3,3,3-hexafluoropropoxi)-fenil]-3- difluorometil-1-metil-1H-pirazol-4-carboxamida, N-[4'-(trifluorometiltio)-bifenil-2- il]-3-difluorometil-1-metil-1H-pirazol-4-carboxamide e N-[4'-(trifluorometiltio)- bifenil-2-il]-1-metil-3-trifluorometil-1-metil-1H-pirazol-4-carboxamida, 3- difluorometil-N-(7-fluoro-1,1,3-trimetil-4-indanil)-1-metil-4-pirazolecarboxamide (fluindapir), 4-difluorometil-N-(7-fluoro-1,1,3-trimetil-4-indanil)-2-metil-5- tiazolcarboxamida, 3-difluorometil-1-metil-N-(1,1,3,7-tetrametil-4-indanil)- pirazolecarboxamida, 4-difluorometil-2-metil-N-(1,1,3,7-tetrametil-4-indanil)-5- tiazolcarboxamida, 3-difluorometil-1-metil-N-(7-metoxi-1,1,3-trimetil-4-indanil)-4- pirazolecarboxamida, 4-difluorometil-2-metil-N-(7-metoxi-1,1,3-trimetil-4- indanil)-5-tiazolcarboxamida, 3-difluorometil-1-metil-N-(7-metiltio-1,1,3-trimetil- 4-indanil)-4-pirazolecarboxamida, 4-difluorometil-2-metil-N-(7-metiltio-1,1,3- trimetil-4-indanil)-5-tiazolcarboxamida, 3-difluorometil-1-metil-N-(7- trifluorometoxi-1,1,3-trimetil-4-indanil)-4-pirazolecarboxamida, 4-difluorometil-2- metil-N-(7-trifluorometoxi-1,1,3-trimetil-4-indanil)-5-tiazolcarboxamida, 3- difluorometil-N-(7-fluoro-1,1,3-trimetil-4-indanil)-4-furazancarboxamida, 4- difluorometil-N-(7-fluoro-1,1,3-trimetil-4-indanil)-2-metiltio-5- pirimidinacarboxamida, 3-difluorometil-N-(7-cloro-1,1,3-trimetil-4-indanil)-1- metil-4-pirazolecarboxamida, 3-difluorometil-N-(7-cloro-1,1-dietil-3-metil-4- indanil)-1-metil-4-pirazolecarboxamida, ou 4-difluorometil-N-(7-fluoro-1,1,3- trimetil-4-indanil)-5-tiadiazolecarboxamide; (B4) compostos heterociclícos, incluindo o fluazinam, pirifenox, bupirimato, ciprodinil, fenarimol, ferimzona, mepanipirim, nuarimol, pirimetanil, triforina, fenpiclonil, fludioxonil, aldimorf, dodemorf, fenpropimorf, tridemorf, fenpropidina, iprodiona, procimidona, vinclozolina, famoxadona, fenamidona, octilinona, probenazol, 5-cloro-7-(4- metil-piperidin-1-il)-6-(2,4,6-trifluorofenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina, anilazina, diclomezina, piroquilon, proquinazid, triciclazol, 2-butoxi-6-iodo-3- propilcromen-4-ona, acibenzolar-S-metila, captafol, captan, dazomet, folpet, fenoxanil, quinoxifeno, N,N-dimetil-3-(3-bromo-6-fluoro-2-metilindol-1-sulfonil)- [1,2,4]triazol-1-sulfuronamida, 5-etil-6-octil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-2,7- diamine, 2,3,5,6-tetracloro-4-metanosulfonil-piridina, 3,4,5-tricloro-piridina-2,6- di-carbonitrile, N-(1-(5-bromo-3-cloro-piridin-2-il)-etil)-2,4-dicloro-nicotinamida, N-((5-bromo-3-cloro-piridin-2-il)-metil)-2,4-dicloro-nicotinamida, diflumetorim, nitrapirina, dodemorfacetato, fluoroimid, blasticidin-S, cinometionat, debacarb, difenzoquat, difenzoquat-metilsulfat, ácido oxolínico e piperalina; (B5) os carbamatos, incluindo o mancozeb, maneb, metam, metasulfocarb, metiram, ferbam, propineb, tiram, zineb, ziram, dietofencarb, iprovalicarb, bentiavalicarb, propamocarb, propamocarb hidroclorid, N-(1-(1-(4-cianofenil)-etanosulfonil)but- 2-il)carbamato de 4-fluorofenila, 3-(4-cloro-fenil)-3-(2- isopropoxicarbonilamino- 3-metil-butirilamino)propanoato de metila; ou (B6) outros fungicidas, incluindo a guanidina, dodina, base livre de dodina, iminoctadina, guazatina, antibióticos: a casugamicina, oxitetraciclin e seus sais, estreptomicina, polioxina, validamicin A, derivativos de nitrofenila: binapacrila, dinocap, dinobutona, compostos heterocíclicos que contém o enxofre: ditianona, isoprotiolano, compostos organometálicos: sais de fentina, compostos organofosforados: os edifenfos, iprobenfos, fosetila, fosetil-aluminio, ácido fosforoso e seus sais, pirazofos, tolclofos-metila, compostos organoclorados: o diclofluanid, flusulfamida, hexacloro-benzeno, ftalida, pencicurona, quintozena, tiofanato, tiofanat-metila, tolilfluanid, óteres: ciflufenamid, cimoxanil, dimetirimol, etirimol, furalaxil, metrafenona e espiroxamina, guazatina-acetato, iminoctadina-triacetato, iminoctadina-tris(albesilato), hidrato de cloridrato de casugamicina, diclorofeno, pentaclorofenol e seus sais, N-(4-cloro-2-nitro-fenil)-N-etil-4-metil- benzenesulfuronamida, dicloran, nitrotal-isopropila, tecnazen, bifenila, bronopol, difenilamina, mildiomicina, oxincobre, cálcio de proexadiona, acetamida de N- (ciclopropilmetoxiimino-(6-difluorometoxi-2,3-difluoro-fenil)-metil)-2-fenila, formamidina de N'-(4-(4-cloro-3-trifluorometil-fenoxi)-2,5-dimetil-fenil)-N-etil-N- metila, formamidina de N'-(4-(4-fluoro-3-trifluorometil-fenoxi)-2,5-dimetil-fenil)-N- etil-N-metila, metilformamidina de N'-(2-metil-5-trifluormetil-4-(3-trimetilsilanil- propoxi)-fenil)-N-etil-N-metila e formamidina de N'-(5-difluormetil-2-metil-4-(3- trimetilsilanil-propoxi)-fenil)-N-etil-N-metila.

[0109] Digno de nota são as misturas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 com outras cepas de biocontrol, incluindo as cepas de Bacillus subtilis, tais como o CH201 ou QST713 ou MBI600 ou RTI477, o Bacillus licheniformis, tais como as cepas CH200 ou RTI184, as cepas de Bacillus velezensis, tais como o RTI301, o Bacillus subtilis var. amyloliquefaciens FZB24, ou o Bacillus amyloliquefaciens D747, ou suas combinações, para o controle da doença de fungos.

[0110] Nas composições e métodos da presente invenção, a composição pode incluir um fungicida químico.

[0111] De preferência são as misturas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 com os agentes de controle químico de fungos que compreendem o tiabendazol, fluxapiroxad, penflufeno, sedaxano, bitertanol, ciproconazol, difenoconazol, fluquinconazol, flutriafol, ipconazol, miclobutanil, protioconazol, triadimef, triadimenol, tebuconazol, triticonazol, procloraz, imazalil, benomil, carbendazim, himexazol, azoxistrobina, fluoxastrobina, piraclostrobina, trifloxistrobina, carboxina, flutolanil, metalaxil, mefenoxam, pentiopirad, fluopiram, siltiofam, fluazinam, pirimetanil, fludioxonil, iprodiona, triciclazol, captana, dazometo, mancozeb, metam, tiram, guazatina, tolclofos- metila, pencicurona, tiofanato, fenpicoxamid, mefentrifluconazol, fluindapir, ou suas misturas.

[0112] De maior preferência são as misturas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 com o fludioxonil, protioconazol, mefenoxam, metalaxil, tebuconazol, difenoconazol, tiram, carboxina, carbendazim, triticonazol, pencicurona, imazalil, piraclostrobina, sedaxano, trifloxistrobina, fluquinconazol, fluoxastrobina, azoxistrobina, flutriafol, fluxapiroxad, pentiopirad, fenpicoxamid, mefentrifluconazol, fluindapir ou suas misturas.

[0113] Herbicidas: (C1), inibidores de carboxilase de acetil-CoA (ACC), por exemplo, os éteres de oxima de cicloexenona, tais como o aloxidim, cletodim, cloproxidim, cicloxidim, setoxidim, tralcoxidim, butroxidim, clefoxidim ou tepraloxidim; os ésteres fenoxifenoxipropiônico, tais como o clodinafop- propargila, cialofop-butila, diclofop-metila, fenoxaprop-etila, fenoxaprop-P-etila, fenthiapropetila, fluazifop-butila, fluazifop-P-butila, haloxifop-etoxietila, haloxifop- metila, haloxifop-P-metila, isoxapirifop, propaquizafop, quizalofop-etila, quizalofop-P-etila ou quizalofop-tefurila; ou os ácidos arilaminopropiônico, tais como a flamprop-metila ou flamprop-isopropila; inibidores de sintase da acetolactato C2 (ALS), por exemplo, as imidazolinonas, tais como o imazapir, imazaquin, imazamtabenzo-metila (imazam), imazamox, imazapic ou imazetapir; os éteres de pirimidila, tal como o ácido piritiobac, piritiobac-sódio, bispiribac- sódio, KIH-6127 ou piribenzoxim; as sulfuronamidas, tais como o florasulam, metosulam; ou as sulfoniluréias, tais como a amidossulfurona, azimsulfurona, bensulfurona-metila, clorimurona-etila, clorsulfurona, cinossulfurona, ciclossulfamurona, etametsulfurona-metila, etoxissulfurona, flazasulfurona, halosulfurona-metila, imazosulfurona, metsulfurona-metila, nicossulfurona, primissulfurona-metila, prossulfurona, pirazossulfurona-etila, rimsulfurona, sulfometurona-metila, tifensulfurona-metila, triassulfurona, tribenurona-metila, triflusulfurona-metila, tritossulfurona, foramsulfurona ou iodossulfurona; (C3) as amidas, por exemplo, o allidoclor (CDAA), benzoilprop-etila, bromobutida, ciorthiamid, difenamida, etobenzanidibenzclomet), flutiamida, fosamin ou monalid; (C4) as herbicidas de auxina, por exemplo, os ácidos piridinocarboxílico, tais como o clopiralid ou picloram; ou 2,4-D ou benazolina; (C5) os inibidores do transporte da auxina, por exemplo, o naptalam ou diflufenzopir; (C6) os inibidores da biossíntese de carotenóides, por exemplo, o benzofenap, clomazona (dimetazona), diflufenican, fluorochloridona, fluridona, pirazolinato, pirazoxifeno, isoxaflutol, isoxaclortol, mesotriona, sulcotriona (clormesulona), cetospiradox, flurtamona, norflurazona ou amitrol; (C7) os inibidores de sintase da enolpiruvilchiquimato-3-fosfato (EPSPS), por exemplo, o glifosato ou sulfosato; (C8) os inibidores de sintetase de glutamina, por exemplo, o bilanafos (bialafos) ou glufosinato-amônio; (C9) os inibidores da biossíntese de lipídeos, por exemplo, as anilidas, tais como o anilofos ou mefenacet; as cloroacetanilidas, tais como a dimetenamida, S- dimetenamida, acetocloro, alacloro, butacloro, butenacloro, dietatil-etila, dimetacloro, metazacloro, metolacloro, S-metolacloro, pretilacloro, propacloro, prinacloro, terbucloro, tenilcloro ou xilacloro; as tioureias, tais como o butilato, cicloato, di-allato, dimepiperato, esprocarbe EPTC., molinato, pebulato, prossulfocarb, tiobencarb (bentiocarb), tri-allato ou vemolato; ou benfuresato ou perfluidona; (C10) os inibidores mitóticos, por exemplo, os carbamatos, tais como o bordado, carbetamid, clorprofam, orbencarb, pronamid (propizamid), profam ou tiocarbazil; as dinitroanilinas, tais como a benefina, butralina, dinitramina, etalfluralina, flucloralina, orizalina, pendimetalina, trifluralina, prodiamina ou; as piridinas, tais como o ditiopir ou tiazopir; ou butamifos, clortal-dimetila (DCPA) ou hidrazida maleica; (C11) os inibidores da oxidase de protoporfirinogênio IX, por exemplo, os éteres de difenila, tais como o acifluorfeno, acifluorfen-sódio, aclonifeno, bifenox, chlomitrofen (CNP), etoxif, fluorodifeno, fluoroglicofen-etila, fomesafeno, furiloxifeno, lactofeno, nitrofeno, nitrofluorfeno ou oxifluorfeno; os oxadiazóis, tais como a oxadiargila ou oxadiazona; as imidas cíclicas, tais como a azafenidina, butafenacil, carfentrazon-etila, cinidon-etila, flumiclorac-pentila, flumioxazina, flumipropina, flupropacil, flutiacet-metila, sulfentrazona ou tidiazimina; ou os pirazóis, tais como o ET-751.JV 485 ou nipiraclofena; (C12) os inibidores de fotossíntese, por exemplo, o propanil, piridato ou piridafol; as benzotiadiazinonas, tais como a bentazona; dinitrofenóis, por exemplo, o bromofenoxim, dinoseb, dinoseb-acetato, dinoterb ou DNOC; dipiridilenos, tais como o ciperquat-cloreto, difenzoquat-metilsulfato, diquat ou paraquat-dicloreto; as ureias, tal como a clorbromurona, clorotolurona, difenoxurona, dimefurona, diurona, etidimurona, fenurona, fluometurona, isoproturona, isourona, linurona, metabenztiazurona, metazol, metobenzurona, metoxurona, monolinurona, neburona, sidurona ou tebutiurona; os fenóis, tais como o bromoxinil ou ioxinil; cloretozona; as triazinas, tais como a ametrina, atrazina, cianazina, desmeina, dimetamtrina, hexazinona, prometona, prometrina, propazina, simazina, simetrina, terbumetona, terbutrina, terbutilazina ou trietazina; as triazinonas, tais como a metamitrona ou metribuzina; as uracilas, tais como o bromacil, lenacil ou terbacil; ou os biscarbamatos, tais como o desmedifam ou fenemedifam; (C13) os sinérgicos, por exemplo, os oxiranos, tal como o tridifano; (C14) os inibidores da síntese da parede celular CIS, por exemplo, o isoxabeno ou diclobenil; (C15) outros herbicidas, por exemplo, os ácidos dicloropropiônico, tais como o dalapon; os diidrobenzofuranos, tais como o etofumesato; os ácidos fenilacéticos, tais como o clorfenac (fenac); ou a aziprotrina, barban, bensulida, benztiazurona, benzofluor, buminafos, butidazol, buturona, cafenstrol, clorbufam, clorfenprop- metila, cloroxurona, cinmetilina, cumilurona, ciclurona, ciprazine, ciprazol, dibenzilurona, dipropetrina, dimrona, eglinazin-etila, endotal, etiozina, flucabazona, fluorbentranil, flupoxam, isocarbamid, isopropalina, karbutilato, mefluidida, monurona, napropamida, napropamida-H, napropanilida, nitralina, oxaciclomefona, fenisofam, piperofos, prociazina, profluralina, piributicarb, secbumeton, sulfalato (CDEC), terbucarb, triaziflam, triazofenamid ou trimeturona; ou seus sais ambientalmente compatíveis.

[0114] Os nematicidas ou bionematicides: o benomil, cloetocarb, aldoxicarb, tirpato, diamidafos, fenamifos, cadusafos, diclofentiona, etoprofos, fensulfotiona, fostiazato, heterofos, isamidofof, isazofos, fosfocarb, tionazina, imiciafos, mecarfon, acetoprol, benclotiaz, oxamil, cloropicrina, dazometo, fluensulfona, 1,3-dicloropropeno (telona), dissulfureto de dimetila, sódio de metam, metam de potássio, sal de metam (todos os geradores MITC), brometo de metila, alterações biológicas do solo (por exemplo, as sementes de mostarda, extratos de sementes de mostarda), fumigação à vapor de solo, isotiocianato de alila (AITC), sulfato de dimetila, furfural (aldeído), fluazaindolizina (DPX-Q8U80), fluopiram, ou tioxazafeno.

[0115] De preferência são as misturas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 com os agentes de controle de nematoides químicos que compreendem o benomil, fenamifos, cadusafos, etoprofos, fostiazato, cloropicrina, dazometo, fluensulfone, oxamil, 1,3-dicloropropeno (telona), sódio de metam, potássio de metam, sal de metam (todos os geradores MITC), brometo de metila, isotiocianato de alila (AITC), fluazaindolizina (DPX-Q8U80), tioxazafeno, fluopiram, ou suas misturas.

[0116] De maior preferência são as misturas da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 com o cadusafos, etoprofos, fostiazato, fluensulfona, oxamil, fluazaindolizina (DPX-Q8U80), tioxazafeno, ou suas misturas. Nas composições e métodos da presente invenção, a composição pode incluir o cadusafos de nematicida.

[0117] Os reguladores de crescimento dos vegetais adequados da presente invenção incluem os seguintes: os reguladores de crescimento: (D1) as antiauxinas, tais como o ácido clofíbrico, ácido 2,3,5-tri-iodobenzóico; (D2) as auxinas, tais como o 4-CPA, 2,4-D, 2,4-DB, 2,4-DEP, diclorprop, fenoprop, IAA, IBA, naftalenoacetamida, ácidos a-naftalenoacético, 1-naftol, ácidos naftoxiacético, naftenato de potássio, naftenato de sódio, 2,4,5-T; (D3) as citocininas, tais como o 2iP, benziladenina, álcool 4-hidroxifenetílico, cinetina, zeatina; (D4) os desfolhantes, tais como a cianamida de cálcio, dimetipina, endotal, etefona, merfos, metoxurona, pentaclorofenol, tidiazurona, tribufos; (D5) os inibidores de etileno, tais como a aviglicina, 1-metilciclopropeno; (D6) os libertadores de etileno, tais como o ACC, etacelasil, etefona, glioxim; (D7) as gametocidas, tais como a fenridazona, hidrazida maleica; (D8) as giberelinas, tais como as giberelinas, o ácido giberélico; (D9) os inibidores de crescimento, tais como o ácido abscísico, ancimidol, butralina, carbaril, clorfonío, clorprofam, dikegulac, flumetralina, fluoridamid, fosamina, glifosina, isopirimol, ácido jasmónico, hidrazida maleica, mepiquat, piproctanil, proidrojasmon, profam, tiaojiean, ácido 2,3,5-tri-iodobenzóico; (D10) os morfactins, tais como o clorflureno, clorflurenol, diclorflurenol, flurenol; (D11) os retardadores de crescimento, tais como o clormequato, daminozida, flurprimidol, mefluidida, paclobutrazol, tetciclacis, uniconazol; (D12) os estimuladores de crescimento, tais como a brassinolid, brassinolid-etila, DCPTA, forclorfenurona, himexazol, prosuler, triacontanol; (D13) reguladores de crescimento dos vegetais não classificados, tais como o bachmedesh, benzofluor, buminafos, carvona, cloreto de colina, ciobutid, clofencet, cianamida, ciclanilida, cicloeximida, ciprosulfamida, epocholeona, eticlozato, etileno, fufenthiourea, furalano, heptopargil, holosulf, inabenfid, karetazan, arseniato de chumbo, metasulfocarb, hexadiona, pidanona, sintofeno, triapentenol, trinexapac.

[0118]As formulações químicas da presente invenção podem estar em qualquer forma convencional adequada, por exemplo, um concentrado de emulsão (EC), um concentrado de suspensão (SC), uma emulsão suspensão (SE), uma suspensão de cápsulas (CS), um grânulo dispersível em água (WG), um grânulo emulsionável (EG), uma emulsão de água em óleo (EO), uma emulsão de óleo em água (EW), uma micro-emulsão (ME), uma dispersão de óleo (OD), um fluído miscível em óleo (OF), um líquido miscível em óleo (OL), um concentrado solúvel (SL), uma suspensão de espuma expansível (EF), uma suspensão de volume ultra inferior (SU), um líquido de volume ultra inferior (UL), um concentrado dispersível (DC), um pó molhável (WP), grânulos (G) de diversos tamanhos que, em realizações, podem ser depositadas no momento do plantio, ou qualquer formulação tecnicamente viável em combinação com os adjuvantes agricolamente aceitáveis.

[0119] Em realizações, a composição pode compreender: de 0,5 a 99% em peso de uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação, de pelo não inferior a cerca de 1 x 1011 CFU / g, e um adjuvante agricolamente aceitável. Em pelo menos, uma realização, o ingrediente ativo, que compreende as espécies de Bacillus está presente em concentrações totais variando entre 0,5% e cerca de 95% em peso da composição agrícola, tal como em que as espécies de Bacillus estão presentes em uma quantidade independentemente selecionada a partir de um limite inferior de 1, 2, 3, 4 ou 5, 7, 8, ou 10% em peso até um limite superior de 10, 15, 20, 25, 40, 50, 60, 70, 80 ou 90% em peso da composição total. Em outra realização, os adjuvantes agricolamente aceitáveis constituem cerca de 1% a cerca de 99,5%, tal como a partir de um limite inferior de 1, 2, 3, 4 ou 5% em peso, para um limite superior de 10, 15, 20, 25, 40, 50, 60, 70, 80, 90, ou 95% em peso da composição total.

[0120] Em realizações, o adjuvante pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em veículos líquidos, veículos sólidos, na qualidade de agentes ativos de superfície (tensoativos), modificadores de viscosidade, espessantes, aditivos de reologia, agentes estruturantes, conservantes, biocidas ou agentes bioestáticos, anticongelantes, inibidores de cristalização, agentes de suspensão, corantes, anti-oxidantes, agentes formadores de espuma, absorventes de luz, auxiliares de mistura, agentes antiespumantes, agentes complexos, substâncias modificadoras ou neutralizantes de pH e tampões, inibidores de corrosão, perfumes, agentes de molhagem, intensificadores de absorção, micronutrientes, plastificantes, deslizantes, lubrificantes, e dispersantes.

[0121] Os veículos podem ser líquidos ou sólidos. Os adjuvantes que podem ser utilizados em tais formulações incluem os agentes ativos de superfície, modificadores de viscosidade, tais como os espessantes, conservantes, biocidas ou agentes bioestáticos, anticongelantes, inibidores de cristalização, agentes de suspensão, corantes, anti-oxidantes, agentes formadores de espuma, absorventes de luz, auxiliares de mistura, antiespumantes, agentes complexos, substâncias modificadoras ou neutralizantes de pH e tampões, inibidores de corrosão, perfumes, agentes molhantes, intensificadores de absorção, micronutrientes, plastificantes, deslizantes, lubrificantes, dispersantes, e também os modificadores de pH.

[0122] Em realizações, as composições da presente invenção podem ser formuladas como um concentrado de suspensão (SC), pó molhável (WP) ou grânulo molhável (WG). Outras tipos de formulações incluem os pós de água dispersíveis para o tratamento de suspensões (WS), dispersões de óleo (OD), grânulos para aplicações de dispersão (GR), suspensões de cápsula (CS), concentrados emulsionáveis (EC), emulsões em água (EW), concentrados solúveis (SL), formulações mistas de CS e um SC (ZC), formulações mistas de um SC e um EW de suspo-emulsões (SE), uma suspensão de espuma expansível (EF), ou formulações mistas de CS e um EW (ZW). Em algumas realizações, as composições podem ser formuladas como pós, ou poeiras, ou grânulos que podem ser aplicados ao vegetal, parte do vegetal, semente ou solo como uma formulação seca (por exemplo, um revestimento de sementes a seco em amendoins ou um pó, poeira ou grânulos de diferentes tamanhos para a incorporação no solo).

[0123] Os veículos líquidos incluem os solventes e co-solventes, incluindo a água, éter de petróleo, óleos vegetais, anidridos de ácido, acetato de amilo, carbonato de butileno, ciclo-hexano, ciclo-hexanol, álcool de diacetona, 1,2-dicloropropano, dietanolamina, dietileno glicol, abietato de dietileno glicol, éter de butila de dietileno glicol, éter de etila de dietileno glicol, éter de metila de dietileno glicol, 1,4-dioxano, dipropileno glicol, éter de metila de dipropileno glicol, dibenzoato de dipropileno glicol, diproxitol, alquilpirrolidona, 2-etil-hexanol, carbonato de etileno, 1,1,1-tricloroetano, alfa-pineno, d-limoneno, lactato de etila, etileno glicol, éter de butila de etileno glicol, éter de metila de etileno glicol, gama- butirolactona, glicerol, acetato de glicerol, diacetato de glicerol, triacetato de glicerol, hexadecano, hexilenoglicol, acetato de isobornil, isooctano, isoforona, miristato de isopropila, ácido lático, laurilamina, ácido de mesitil, metoxipropanol, de metila láurico, octanoato de metila, oleato de metila, cloreto de metileno, n- hexano, n-octilamina, ácido octadecanóico, acetato de octilamina, ácido oleico, oleilamina, polietileno glicol (PEG), ácido propiônico, lactato de propila, carbonato de propileno, propileno glicol, éter de metila de propileno glicol, fosfato de trietila, trietileno glicol, ácido xilenssulfônico, parafina, óleo mineral, tricloroetileno, percloroetileno, álcoois de peso molecular mais elevado, tais como o álcool amílico, álcool tetraidrofurfuril, hexanol, octanol, amidas líquidas, tais como a N,N-dimetiloctanamida, N,N-dimetildecanamida, N-metil-N-(2- propilheptil)-acetamida, N-metil-N-(2-propilheptil)-formamida, N-metil-2- pirrolidona e similares. De preferência, os veículos líquidos são tais que os agentes ativos biológicos permanecem essencialmente inalterados na composição até após ser aplicado ao locus de controle. A água, em geral, é o veículo de seleção para a diluição de formulações concentradas.

[0124] Os veículos sólidos adequados, por exemplo, incluem os carboidratos incluindo os mono ou carboidratos tais como a sacarose, oligo ou poli-sacarídeos tais como a maltodextrina ou pectina, talco, dióxido de titânio, argila pirofilita, atapulgita, terra de diatomáceas, sílica (dióxido de silicone), calcário, bentonita, sais hidrossolúveis de cálcio montmorilonita, tais como o sódio, potássio, magnésio, cálcio ou sais de amônio de etila, carbonato, cloreto, citrato, fosfato ou sulfato, tais como o carbonato de cálcio, cascas de semente de algodão, farinha de trigo, farinha de soja, pedra-pomes, farinha de madeira, cascas de noz moída, lignina e substâncias similares, extratos de levedura, farinha de peixe, ou suas misturas. Os veículos sólidos notáveis incluem a maltodextrina, sílica, carbonato de cálcio, ou suas misturas.

[0125] Os agentes ativos de superfície, incluindo os tensoativos, emulsionantes e dispersantes, agentes de aumento da viscosidade, solventes e outros adjuvantes podem constituir, independentemente, entre cerca de 0,1% a cerca de 25% de da formulação final em peso.

[0126]As composições podem conter uma substância de superfície ativa (tensoativos, dispersantes e emulsionantes) a partir de uma grande variedade de substâncias conhecidas no estado da técnica, que também estão comercialmente disponíveis. As substâncias ativas de superfície (em geral, no presente, descritas como tensoativos) podem ser aniônicas, catiônicas, não iônicas ou poliméricas e podem ser utilizadas como tensoativos, dispersantes, emulsionantes, agentes molhantes ou agentes de suspensão ou para outros propósitos.

[0127] Os tensoativos pertencem a diferentes classes, tais como os tensoativos catiônicos, tensoativos aniônicos, tensoativos não iônicos, tensoativos iônicos e anfotéricos., de acordo com a presente invenção, o tensoativo pode ser qualquer tensoativo ou a combinação de dois ou mais tensoativos úteis para dispersar os ingredientes biológicos ativos na formulação ou mistura em tanque para a aplicação. As quantidades de tensoativo nas composições da presente invenção pode variar a partir de cerca de 1 a cerca de 15%, ou cerca de 1 a cerca de 10%, de preferência, de cerca de 3 a cerca de 8%, e de maior preferência, de cerca de 5 a cerca de 7% em p/p.

[0128] Os Exemplos de alguns tensoativos de preferência incluem os tensoativos catiônicos, não iônicos, aniônicos e/ou anfotéricos.

[0129] Os tensoativos não iônicos adequados para a presente invenção incluem os álcoois etoxilados lineares, alquilfenóis etoxilados, copolímero de alquila OE / PO, ácidos graxos e/ou óleos de ácidos graxos de éter de monobutila de polialquileno glicol etoxilados, sorbitano láurico, polissorbato, oleato de sorbitano etoxilado, álcoois graxos, ou alquilfenóis, alcanolamidas ou alkyloamides (tais como a dietanolamida, monoisopropanolamida de ácido láurico, e miristamida etoxilada), ésteres de ácidos graxos de xietileno, éteres de álcoois graxos de polioxietileno (tais como os éteres de poliglicol de alquilarila), / produtos de adição de óxido de alquileno/ alquilfenol, tais como o etoxilato de nonilfenol; produtos de adição de óxido álcool / alquileno, tais como o etoxilato de álcool tridecílico.

[0130] Os tensoativos aniônicos incluem os alquil-, alquilaril- e arilsulfuronatos ou os seus sais (tais como os sais de sódio, de potássio ou de cálcio de lauril sarcosinato, alquilbenzenosulfuronato, dodecilbenzenossulfuronato, alquilnaftalenossulfuronatos, tal como o dibutilnaftalenossulfuronato, ou sulfuronatos de olefinas C14-C16), alquil-, alquilaril- e arilsulfatos ou os seus sais (tais como os sais de sódio, de potássio ou de cálcio de tridedet sulfato, sulfato de lauril, sulfato de decila, e lauril sulfato de dietanolamônio), hidrolisados de proteínas, derivados de ácido policarboxílico (tais como o carboxilato de amônio lauril-éter), sulfuronatos de olefinas (tais como o sulfuronato de olefina alfa de sódio), sarcosinatos (tais como o palmitoil amônio taurinato de ciclo-hexila), succinatos (tais como o sulfosuccinamato dissódico N-octadecil), derivados de fósforo (tais como os ésteres de ácido fosfórico e seus sais equivalentes).

[0131] Os tensoativos catiônicos incluem o cloreto de alqulbenziltrimetilamônio, lauril sulfato de amônio e óxido de lauramina.

[0132] Em algumas realizações, os tensoativos podem ser utilizados como agentes de espuma que possibilitam a formulação de formação de espuma para a aplicação para a semente ou em sulcos no momento do plantio. A composição de formação de espuma opcionalmente pode ser diluída com a água e misturada com um gás sob pressão tal como o ar em uma câmara de formação de espuma que compreende um meio de formação de espuma, tais como uma pluralidade de esferas de vidro.

[0133] Os agentes de formação de espuma adequados podem ser os tensoativos não iônicos incluindo as alcanolamidas ou alquloamidas (tais como a dietanolamida de cocamida, monoisopropanolamida de ácido láurico, e miristamida etoxilado), ésteres de ácidos graxos de xietileno, éteres de álcool graxo de polioxietileno (tal como os alquilaril poliglicol éteres) e os fluorocarbonetos (tal como o álcool polifluorado etoxilado); tensoativos aniônicos incluindo os alquil-, alquilaril- e arilsulfuronatos (tais como o lauril sarcosinato de sódio e tal como o alquilbenzenosulfuronato de sódio), alquil-, alquilaril- e arilsulfatos, hidrolisados de proteínas, derivados de ácido policarboxílico (tais como o carboxilato de amônio lauril-éter), sulfuronatos de olefinas (tais como o sulfuronato de alfa olefina de sódio), sarcosinatos (tais como a ciclo-hexila taurinato de amônio palinitoil), succinatos (tais como o sulfosuccinamato dissódico N-octadecil), derivados de fósforo (tais como os ésteres de ácido fosfórico e seus sais equivalentes); Os tensoativos catiônicos, incluindo o cloreto de alqulbenziltrimetilamônio; e tensoativos anfotéricos incluindo betaína. agentes de formação de espuma especialmente de preferência incluem os sais de sódio de dodecilbenzeno sulfuronato de sódio de olefina C14-C16 (ex. Bio-SOFT®D-40), de sulfuronato (ex. Bioterge® AS-40), óxido de lauramina (ex. AMMONYX® DO, AMMONYX® LO), amônio sulfato de lauril (ex. Steol®), sódio (Cedepal® TD-407) e sulfatos de alquila (ex Polystep® B-25). A concentração total de agentes de formação de espuma na formulação ser[a dependente dos agentes de formação de espuma utilizados e podem compreender entre cerca de 0,1% e cerca de 50% da formulação concentrada de espuma, de preferência, entre cerca de 0,3% de e cerca de 30%, de maior preferência, entre cerca de 5% e 25 % e ainda de maior preferência, entre cerca de 17% e cerca de 23%.

[0134]As realizações notáveis incluem aquelas em que o volume da espuma gerada pela formulação é reduzido em 25% (ou inferior) após cerca de 45 minutos ou superior. Outras substâncias ativas de superfície incluem os sabões, tais como o esteara o de sódio; ésteres de dialquila de sais de sulfossuccinato, tal o di(2-etil-hexil)sulfosuccinato de sódio; ésteres de sorbitol, tais como o oleato de sorbitol; aminas quaternias, tais como o cloreto de lauriltrimetilamônio, ésteres de polietileno glicol de ácidos graxos, tais como o estearato de polietileno glicol; copolímeros em bloco de óxido de etileno e óxido de propileno; e sais de ésteres de mono- e di-alquilfosfato.

[0135]Também adequados são os tensoativos de silicone, especialmente as heptametiltriloxanas de polialquila modificadas por óxido, que estão comercialmente disponíveis, por exemplo, como Silwet L-77®, e também os tensoativos perfluorados.

[0136] Destes, alguns tipos até mesmo mais específicos de tensoativos de preferência incluem os tensoativos lineares não iônico ou tensoativos etoxilatos de álcool ramificados, éster aniônico de ácido fosfórico (algumas vezes referido como “ tensoativos de éster de fosfato”), e tensoativos catiônicos etoxilados de amina de sebo.

[0137] Os tensoativos notáveis (dispersantes) compreendem, pelo menos, um alquilpoliglicosídeo de alquila que, de preferência, compreende os grupos alquila C8-C14. Os produtos Agnique® de BASF Corporation (Cognis) são representativos. Em uma realização, o tensoativo glicopiranósido de d-alquila inclui uma mistura de alquila C8-C10 d-glucopiranósidos, tais como Agnique® PG8105-G. Em outra realização, o tensoativo de alquila D-glucopiranósido inclui uma mistura de alquila C9-C11 d-glucopiranósidos. Um produto de preferência é o Agnique® PG9116 que é uma mistura de alquila C9-C11d-glucopiranósidos, que possui um grau de polimerização de cerca de 1,6 e um equilíbrio hidrofíçico- lipofílico (HLB) de cerca de 13,1.

[0138] Os tensoativos de éster de fosfato (dispersantes) podem compreender os ésteres de fosfato de álcoois etoxilados, álcoois ou fenol etoxilado. Eles podem estar na forma de ácido livre ou neutralizados como os sais de sódio, de potássio ou de amônio. Os produtos Dextrol® de Ashland Corporation são representativos, tal como OC-180 Dextrol®. O éster de fosfato, de preferência, é selecionado a partir de um éster de fosfato de nonil fenol e um sal de potássio de fosfato etoxilado de álcool tridecílico.

[0139] Em outro aspecto, a composição pode conter um agente espessante, modificadores de viscosidade, aditivos de reologia, ou agente estruturante que estabilizam as formulações, tais como os concentrados de suspensões ou dispersões contra o óleo de decantação ou de sedimentação. Os espessantes adequados são o arroz, amido, goma arábica, goma de tragacanto, farinha de guar, goma britânica, éteres de amido e ésteres de amido, resinas de goma, galactomananos, silicato de alumínio e magnésio, goma de xantano, carragenano, derivados de celulose, celulose de metila, carboximetilcelulose, alginatos e suas combinações. Outros produtos comerciais conhecidos podem incluir o NTC 50 da estrutura, Lattice NTC 60, Methocel, argila, sílica e Veegum.

[0140] Em outra realização, as composições da presente invenção podem conter um agente anticongelante tal como a glicerina, etileno glicol, propileno glicol, ureia, cloreto de cálcio, nitrato de sódio, cloreto de magnésio e sulfato de amônio.

[0141] Os conservantes adequados incluem, mas não estão limitados aos benzoatos alquila C12-C15, p-hidroxibenzoatos, extrato de aloe vera, ácido ascórbico, cloreto de benzalcónio, ácido benzóico, ésteres de ácido benzóico de álcoois C9-C15, hidroxitolueno butilado, hidroxianisol butilado, terc- butil-hidroquinona, óleo de rícino, álcoois cetílico, clorocresol, ácido cítrico, manteiga de cacau, óleo de coco, diazolidinil ureia, diisopropil adipato, dimetil polisiloxano, hidantoína de DMDM, etanol, ácido etilenodiaminotetracético, ácidos graxos, álcoois graxos, álcool hexadecílico, ésteres de hidroxibenzoato, butilcarbamato de iodopropinil, iso-nonanoato de isononil, óleo de jojoba, óleo de lanolina, óleo mineral, ácido oleico, óleo de oliva, parabenos, poliéteres, éter pde olioxipropileno butila, éter de polioxipropileno cetílico, sorbato de potássio, galato de propila, óleos de silicone, propionato de sódio, benzoato de sódio, bissulfito de sódio, ácido sórbico, ácido graxo esteárico, dióxido de enxofre, vitamina E, acetato de vitamina E e derivados, ésteres, sais e suas misturas. Os conservantes de preferência incluem o-fenilfenato de sódio, 5-cloro-2-metil-4- isotiazolin-3-ona, 2-metil-4-isotiazolin-3-ona, e 1,2-benisothiazolin-3-ona.

[0142] Os agentes antiespumantes tais como o XIAMETER AFE- 100, Dow Corning AFS, Dow Corning 1520, 1530, ou 1540 também podem ser utilizados nas formulações presentemente reivindicadas.

[0143] Em realizações, a composição pode ser um concentrado de suspensão líquida que compreende a água e, pelo menos, um agente ativo de superfície, e um ou mais adjuvantes adicionais. Em realizações, os um ou mais adjuvantes podem ser selecionados a partir de espessantes, modificadores de viscosidade, agentes de estruturação ou aditivos de reologia, solventes, conservantes, agentes anticongelantes e agentes antiespumantes. Normalmente, o concentrado de suspensão é ainda diluído com a água antes da entrega da composição. Em realizações, a composição líquida pode ser um concentrado de suspensão que compreende de 0,5 a 20% em peso de uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; de 1 a 5% em peso de um ou mais agente ativo de superfície; e, pelo menos, um espessante, solvente, conservante, agente anticongelante, agente antiespumante ou que compreende cada um, independentemente, até cerca de 1% em peso da composição.

[0144] Em outras realizações, a composição pode ser uma dispersão de óleo líquido que compreende os ingredientes ativos sólidos dispersos em óleo tal como um óleo vegetal e, pelo menos, um agente ativo superfície, e um ou mais adjuvantes adicionais. Em realizações, os um ou mais adjuvantes podem ser selecionados a partir de espessantes, modificadores de viscosidade, agentes de estruturação ou aditivos de reologia, solventes, conservantes, agentes anticongelantes, agentes antiespumantes e similares. Normalmente, a dispersão em óleo é mais diluída com a água antes da entrega da composição. Em realizações, a composição líquida pode ser uma dispersão em óleo que compreende de 0,5 a 20% em peso de uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; de 1 a 10% em peso de um ou mais agente ativo de superfície; e, pelo menos, um espessante, um modificador de viscosidade, agente estruturante, aditivos de reologia, solvente, conservante, agente anticongelante, agente antiespumante ou que compreende cada um, independentemente, até cerca de 5% em peso da composição.

[0145] Em realizações, a composição pode estar na forma de uma poeira, pó, grânulo, um pó seco molhável, um granulado espalhável, ou um grânulo molhável seco e a cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação podem estar presentes em uma quantidade a partir de cerca de 1,0 x 108 CFU / g a cerca de 5x 1013 CFU / g. Em realizações, a composição pode compreender um veículo sólido selecionado a partir do grupo que consiste em mono- ou di-sacarídeos, oligo- ou poli-sacarídeos, talco, dióxido de titânio, argila pirofilita, atapulgita, terra de diatomáceas, sílica, calcário, argila, cálcio sais de montmorilonita, sódio, potássio, magnésio, cálcio ou amônio de etila, carbonato, cloreto, citrato, fosfato ou sulfato, cascas de algodão, farinha de trigo, farinha de soja, pedra-pomes, farinha de madeira, nozes moídas (tais como de amendoim ou noz) conchas, lignina, extratos de levedura, farinha de peixe, ou suas misturas.

[0146] Em uma realização, a composição compreende: de 5 a 40% de uma cultura biologicamente pura não inferior a cerca de 1 x 1011 CFU / g; e maltodextrina, sílica, carbonato de cálcio, ou suas misturas. Em realizações, a composição compreende de 5 a 15% de maltodextrina.

[0147] Em realizações, a composição pode compreender a porcentagem (%) em peso: de 5 a 40% de uma cultura biologicamente pura de não inferior a cerca de 1 x 1011 CFU / g Bacillus thuringiensis RTI545, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; de 5 a 15% de maltodextrina; carbonato de cálcio de 35 a 45%; e de 5 a 15% de sílica. Em realizações, a composição pode ser uma formulação de pó molhável.

[0148] Em uma realização, a composição pode ser uma formulação de pó molhável que compreende, em porcentagem (%) em peso: cerca de 40% de uma cultura biologicamente pura não inferior a cerca de 1 x 1011 CFU / g de Bacillus thuringiensis RTI545, ou um de seus mutantes que possui todas as características de identificação das mesmas; 10% de maltodextrina; carbonato de cálcio 40%; e 10% de sílica.

[0149] Em realizações, a composição é útil em qualquer tratamento de semente de vegetal ou as aplicações no sulco para conferir proteção do vegetal ou controle da infecção fúngica patogênica. Para o tratamento de sementes, uma solução ou suspensão da composição pode ser aplicada às sementes utilizando os procedimentos padrão de tratamento de sementes. A composição pode ser aplicada às sementes não tratadas ou às sementes que foram tratados com pelo menos, um agente adicional de proteção das culturas, conforme descrito no presente. De maneira alternativa, a composição também pode ser misturada com um agente de proteção de culturas adicionais para o tratamento de sementes ou em aplicações em sulcos. Em algumas realizações, a composição pode ser aplicada à folhagem do vegetal a ser protegida, opcionalmente misturada com um agente adicional de proteção de culturas.

[0150] Em algumas realizações de composições e métodos, a composição ainda inclui uma ou a combinação de agente(s) agrícola(s) adicional(is), tais como um inseticida, fungicida, nematicida, bactericida, herbicida, extrato dos vegetais, reguladores de crescimento dos vegetais, ou fertilizantes, conforme descrito no presente em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção do vegetal contra uma praga dos vegetais. O agente agrícola adicional pode ser um agente microbiano, um agente biológico, ou um agente químico.

[0151] Em algumas realizações de composições e métodos, a composição pode ser formulada para a compatibilidade com um fertilizante líquido.

[0152]A formulação compatível com um fertilizante líquido pode incluir um silicato de alumínio-magnésio hidratado e, pelo menos, um dispersante. O termo “em uma formulação compatível com um fertilizante líquido”, conforme utilizado ao longo da especificação e reivindicações pretende significar que a formulação é capaz de dissolução ou dispersão ou emulsão de uma solução aquosa para possibilitar a mistura com um fertilizante para entrega aos vegetais em uma formulação líquida.

[0153] Em realizações notáveis, a formulação compatível com um fertilizante líquido pode incluir a bifentrina, tal como uma composição que compreende a bifentrina; um silicato de alumínio-magnésio hidratado; e, pelo menos, um dispersante selecionado a partir de um éster de sacarose, um lignosulfuronato, um alquilpoliglicosídeo, um condensado de formaldeído de ácido naftalenossulfónico e um éster de fosfato. A bifentrina, de preferência, pode estar presente em uma concentração de 1,0% em peso a 35% em peso, mais especialmente, a partir de 15% em peso a 25% em peso com base no peso total de todos os componentes na composição. A composição inseticida de bifentrina pode estar presente na formulação líquida a uma concentração variando a partir de 0,1 g/mL a 0,2 g/mL. O inseticida de bifentrina pode estar presente na formulação líquida a uma concentração de 0,17 g/mL. O dispersante ou agentes dispersantes, de preferência, podem estar presentes em uma concentração total entre cerca de 0,02% em peso a cerca de 20% em peso com base no peso total de todos os componentes na composição. Em algumas realizações, o silicato de alumínio-magnésio hidratado pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em montmorilonita e atapulgita. Em algumas realizações, o éster de fosfato pode ser selecionado a partir de um éster de fosfato de nonil fenol e um podem de álcool tridecílico etoxilado sal de potássio de fosfato.

[0154]O dispersante ou agentes dispersantes, de preferência, podem estar presentes em uma concentração total entre cerca de 0,02% em peso a cerca de 20% em peso com base no peso total de todos os componentes na composição.

[0155] Em algumas realizações, o silicato de alumínio-magnésio hidratado pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em montmorilonita e atapulgita.

[0156] Em algumas realizações, o éster de fosfato pode ser selecionado a partir de um éster de fosfato de nonil fenol e um sal de potássio de fosfato de álcool tridecílico etoxilado.

[0157]Outras realizações ainda podem incluir, pelo menos, um de um agente anticongelante, um agente antiespumante e um biocida.

[0158] Em um outro aspecto, as composições podem ser preparadas através de um processo, de acordo com as etapas de combinar os ingredientes biológicos ativos em quantidades eficazes, com os adjuvantes e veículos, conforme descrito no presente. As composições formuladas podem ser preparadas, por exemplo, através da mistura dos agentes biológicos ativos com os componentes da formulação de maneira a obter as composições na forma de sólidos finamente divididos, grânulos ou dispersões. Os ingredientes ativos também podem ser formulados com outros componentes, tais como os sólidos finamente divididos, e os minerais, óleos de origem vegetal ou animal, e os óleos modificados de origem vegetal ou animal, solventes orgânicos, água, substâncias de superfície ativa ou suas combinações.

[0159] Em algumas realizações, os componentes da formulação podem ser componentes misturados, ou sólidos e líquidos secos podem ser misturados em conjunto um homogeneizador ou outro recipiente de mistura adequado. A mistura simples dos ingredientes através da homogeneização, de preferência, pode ser de qualquer forma de moagem. Em outras realizações, a mistura ainda pode sofrer um processo de moagem, tais como a moagem a seco ou moagem úmida, até que se obtenham os tamanhos de partículas adequadas que variam de cerca de 1 a cerca de 250 micra. A composição pode possuir tamanhos de partículas inferior a 250, inferior a 100 ou, de preferência, inferior a 50 micra. Em uma realização de preferência, a mistura é homogeneizada ou moída até 90% do tamanho de partícula (D90) ser inferior a cerca de 50 micra.

[0160] Uma realização se refere a uma composição que compreende: (i) a Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No.PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; e (ii) pelo menos, um componente de formulação selecionada a partir do grupo que consiste em adjuvantes para uma formulação SC; adjuvantes para uma formulação WP; e adjuvantes para uma formulação WG.

[0161] Em outra realização, a composição está na forma de um SC, tal como uma que compreende a água e, pelo menos, um tensoativo, e um ou mais adjuvantes adicionais selecionados a partir de espessantes, solventes, conservantes, agentes anticongelantes, modificadores do pH, e agentes antiespumantes.

[0162] Em uma realização, o SC compreende de 1 a 20% em peso de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; de 1 a 5% em peso de um ou mais tensoativos; e, opcionalmente, pelo menos, um espessante, solvente, conservante, agente anticongelante, ou agente antiespumante; e água. O espessante opcional, solvente, conservante, agente anticongelante, agente antiespumante ou podem compreender cada, independentemente, até cerca de 1% em peso da formulação SC. A SC compreende a água em uma quantidade complementar de todos os outros componentes para trazer o peso total da composição para 100% de (qs).

[0163]A composição pode estar na forma sólida, por exemplo, um pó, poeira, grânulo, formulação WP ou WG. Estas formulações compreendem, pelo menos, um veículo sólido conforme descrito acima. Em realizações, as formulações WP ou WG podem compreender a partir de cerca de 1 a cerca de 50% em peso, tal como de 1 a 10, 5 a 10, ou 5 a 50 ou 7 a 50, ou 10 a 50% em peso, de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; e, pelo menos, um veículo sólido selecionado a partir do grupo que consiste em maltodextrina, carbonato de cálcio e sílica. As formulações de grânulos molháveis são similares às formulações de pó molhável, exceto que o pó é formado em grânulos maiores, por exemplo, através da diluição do pó em água, opcionalmente, com o dispersante adicional, e a formação de grânulos através da aglomeração, secagem por pulverização ou extrusão.

[0164] Em uma realização, a composição pode compreender de 2 a 20% em peso de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA- 122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; a partir de cerca de 80 a cerca de 90% em peso de maltodextrina, e de cerca de 0,5 a cerca de 2% em peso de sílica.

[0165] Em outra realização, a composição pode compreender de 5 a 60 (tal como 40%) de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; a partir de cerca de 30 a cerca de 50 (tal como 40%) em porcentagem (%) em peso de maltodextrina, cerca de 10 a 20 (tal como 16%) em porcentagem (%)em peso de carbonato de cálcio e cerca de 0,5 a cerca de 5 (tal como 4%) em porcentagem (%) em peso de sílica.

[0166] Em outra realização, a composição compreende uma formulação de pó molhável ou de granulado molhável que compreende em porcentagem (%) em peso: - de 5 a 50% de (tal como 40%) de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, ou um de seus mutantes que possui todas as suas características de identificação; - de 5 a 15% de (tal como 10%) de maltodextrina; - de 35 a 45% de (tal como 40%) de carbonato de cálcio; e - de 5 a 15% de (tal como 10%) de sílica.

[0167]A composição pode ser útil em qualquer tratamento de semente de vegetal ou as aplicações em sulco. Para o tratamento de sementes, uma solução, uma suspensão, pasta, gel ou sólido humedecido da composição pode ser aplicada às sementes utilizando o procedimentos padrão de tratamento de sementes. A composição pode ser aplicada às sementes não tratadas ou às sementes que foram tratadas com pelo menos, um agente adicional de proteção das culturas, conforme descrito no presente. De maneira alternativa, a composição também pode ser misturada com um agente de proteção de culturas adicionais para o tratamento de sementes ou em aplicações em sulcos.

[0168] Em aplicações em sulcos, pode incluir o tratamento do solo no sulco, de preferência, em proximidade com as sementes da cultura no momento do plantio, e a incorporação da formulação no solo. As aplicações em sulco podem incluir as formulações líquidas ou sólidas. Em algumas realizações, as aplicações em sulco compreendem a aplicação da composição na forma de uma espuma.

[0169] Em realizações, as composições formuladas podem estar sob a forma de concentrados que são diluídos antes da utilização, embora as formulações prontas-a-usar, também podem ser realizadas. Considerando que os produtos comerciais, de preferência, serão formulados como concentrados, o usuário final normalmente irá empregar as formulações diluídas para a aplicação ao solo ou ao vegetal. As diluições podem ser realizadas, por exemplo, com água, fertilizantes líquidos, micronutrientes, organismos biológicos, óleo ou solventes.

[0170] Em realizações, as composições formuladas, de maneira adicional, podem incluir um aditivo que compreende um óleo de origem vegetal ou animal, um óleo mineral, ésteres de alquila destes óleos ou misturas destes óleos e derivados de óleo. A quantidade de aditivo de óleo na composição, de acordo com a presente invenção, em geral, é a partir de 0,01 a 10%, com base na mistura de pulverização. Por exemplo, o aditivo de óleo pode ser adicionado ao tanque de pulverização na concentração desejada após a mistura de pulverização ter sido preparada. Em realizações, os aditivos de óleo podem compreender os óleos minerais ou um óleo de origem vegetal, por exemplo, o óleo de soja, óleo de colza, óleo de oliva ou óleo de girassol de oliva, óleo vegetal emulsionado, ésteres de alquila de óleos de origem vegetal, por exemplo, os derivados de metila, ou um óleo de origem animal, tal como o óleo de peixe ou sebo de vaca.

EXEMPLOS

[0171]Os seguintes Exemplos foram incluídos para fornecer a orientação para um técnico no assunto comum para a prática de realizações representativas da presente invenção descrita. À luz da presente invenção e o nível geral de perícia no estado da técnica, os técnicos no assunto podem considerar que os seguintes Exemplos se destinam a ser apenas exemplificativos e que numerosas mudanças, modificações e alterações podem ser empregues sem se afastar do âmbito da presente invenção descrita.

EXEMPLO 1 IDENTIFICAÇÃO DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 BACTERIANA ISOLADA ATRAVÉS DE ANÁLISE DE SEQUÊNCIA

[0172] Uma cepa bacteriana de vegetal associada, designada no presente como RTI545, foi isolada a partir da grama alta festuca do rizosfera de solo circundante na Carolina do Norte. O genoma da cepa de RTI545 foi sequenciado, e as sequências de rRNA 16S (SEQ ID NO: 1) e rpoB (SEQ ID NO: 2) os genes das cepas RTI545 foram comparados com aquelas de outras cepas bacterianas conhecidas nas bases de dados NCBI e RDP utilizando o BLAST; isto colocou a cepa RTI545 dentro do clade de Bacillus cereus / thuringiensis / anthracis. Além disso, a análise filogenética da cepa de RTI545 e as espécies relevantes de Bacillus foi realizada utilizando as árvores de consenso Bootstrap (reamostragem) (1.000 replicas) no gene rpoB. A árvore de consenso para o gene rpoB é mostrada na Figura 2. Conforme pode ser observado na Figura 2, a cepa de RTI545 forma um ramo separado no clade de Bacillus cereus / thuringiensis / anthracis. As diferenças de sequência para o gene rpoB, ao nível de DNA indicam que a RTI545 é uma nova cepa que cai dentro do clade de Bacillus cereus / thuringiensis / anthracis. A análise da sequência adicional revelou que a cepa de RTI545 não possui os genes para as proteínas de cristal (genes Cry) frequentemente encontrados em cepas de B. thuringiensis.

[0173]Além disso, a análise da sequência do genoma inteiro foi realizada para comparar a cepa de RTI545 com as cepas estreitamente relacionadas de espécies de Bacillus, utilizando o MUMmer e os cálculos de identidade com base em Nucleotídeo BLASTn médio (ANI) - e (Richter M, e Rossello-Mora (2009) Shifting the genomic gold standard for the prokaryotic species definition. Proc Natl Acad Sci EUA 106 (45): 19.126-31) e análise de UNIPEPT (Mesuere, B., Debyser, G., Aerts, M., Devreese, B., Vandamme, P. e Dawyndt, P. (2015), The Unipept metaproteomics analysis pipeline. Proteomics., 15: 1.437-1.442 doi: 10.1002 / pmic.201400361) para confirmar a sua classificação filogenética. Os resultados de MUMmer e cálculos com base em ANI BLASTn são mostrados na Tabela I abaixo. As análises de ANI e UNIPEPT (dados não mostrados) revelaram um grau significativo de similaridade de sequência entre a RTI545 e as sequências publicadas das cepas indicadas como B. thuringiensis e B. cereus. A maior similaridade de sequência com uma cepa do tipo reconhecido foi reconhecida para o tipo de cepa de B. thuringiensis Berliner ATCC10792. Novamente, as diferenças na sequência do genoma inteiro daqueles publicados anteriormente indicam que a RTI545 é uma nova cepa de Bacillus thuringiensis que cai dentro do clade de Bacillus cereus / thuringiensis / anthracis.

[0174]A análise da Tabela I. Sequência (MUMmer e cálculos com base em ANI BLASTn ANI) comparando as cepas RTI545 com as cepas relevantes de espécies de Bacillus. TABELA I

- Nota: * indica cepas do tipo reconhecido por ambas Bacillus thuringiensis e Bacillus cereus.

[0175]A cepa de RTI545 foi depositada em 12 de maio de 2015 sob os termos do Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Microrganismos para os Propósitos de Procedimento de Patente na Coleção de Cultura do Tipo Americano (ATCC) em Manassas, Virginia, EUA e possui o número de Adesão de Patente PTA-122161. - RTI545 genômico 16S rDNA 1 (SEQ ID NO: (1) o - AGAAAGGAGGTGATCCAGCCGCACCTTCCGATACGGCTACCTTGTTACGA CTTCACCCCAATCATCTGTCCCACCTTAGGCGGCTGGCTCCAAAAAGGTTA CCCCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTG TACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTA GCGATTCCAGCTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAGA ACGGTTTTATGAGATTAGCTCCACCTCGCGGTCTTGCAGCTCTTTGTACCG TCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGA CGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGC CCAACTTAATGATGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACT TAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTC ACTCTGCTCCCGAAGGAGAAGCCCTATCTCTAGGGTTTTCAGAGGATGTC AAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCAC CGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGT ACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAACTTCAGCACTAAAGGGCGGA AACCCTCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTAT CTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCGCCTCAGTGTCAGTTACAGACC AGAAAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCATATCTCTACGCATTTCACC GCTACACATGGAATTCCACTTTCCTCTTCTGCACTCAAGTCTCCCAGTTTC CAATGACCCTCCACGGTTGAGCCGTGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAA CCACCTGCGCGCGCTTTACGCCCAATAATTCCGGATAACGCTTGCCACCT ACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAG GTACCGTCAAGGTGCCAGCTTATTCAACTAGCACTTGTTCTTCCCTAACAA CAGAGTTTTACGACCCGAAAGCCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGT CAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAG TCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGC TACGCATCGTTGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGAC GCGGGTCCATCCATAAGTGACAGCCGAAGCCGCCTTTCAATTTCGAACCA TGCAGTTCAAAATGTTATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCC AGTCTTATGGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTAACTT CTTGAGAGCAAGCTCTCAATCCATTCGCTCGACTTGCATGTATTAGGCACG CCGCCAGCGTTCATCCTGAGCCAGGATCAAAC. - RTI545 gene rpoB (SEQ ID NO: 2) - TTGACAGGTCAACTAGTTCAATACGGACGCCACCGCCAACGAAGAAGTT ATGCCCGTATTAGTGAAGTATTAGAGTTACCAAATCTTATCGAAATTCAA ACCTCTTCTTATCAGTGGTTTCTTGATGAGGGTTTGCGAGAAATGTTCCA AGACATTTCTCCGATTGAAGACTTTACGGGAAATCTATCGCTTGAATTTA TCGACTACAGCTTAGGTGAACCTAAATACTCTGTAGACGAATGCAAAGA GCGTGATGTGACGTATGCAGCACCACTTCGTGTAAAAGTGCGTCTAATC AACAAGGAAACTGGTGAAGTAAAAGAACAAGATGTGTTCATGGGAGATT TCCCACTCATGACAGAGACTGGAACATTCGTAATTAACGGTGCAGAACG TGTTATCGTTTCCCAGTTAGTTCGCTCTCCAAGCGTATACTATAGTGGCA AAGTGGATAAAAACGGAAAACGTGGTTTTACTGCTACTGTAATTCCAAAC CGCGGAGCTTGGTTAGAGTATGAGACAGATGCTAAGGATGTTGTATATG TGCGTATTGACCGTACGCGTAAACTTCCTGTAACTGTTTTGTTACGCGC ATTAGGGTTTGGCTCTGATCAAGAAATCACCGAGCTTTTAGGTGATAAC GAATACTTAAGCAACACATTAGAAAAAGACAACACAGATAGTACAGAAAA AGCATTGCTTGAAATTTATGAGCGTCTACGTCCTGGTGAACCACCAACA GTAGAAAATGCTAAGAGCTTACTTGTGTCTCGTTTCTTCGATCCAAAGC GCTACGATTTAGCAAATGTAGGTCGCTATAAGATCAACAAGAAGTTACA CATTAAAAACAGATTGTTTAATCAACGTTTAGCTGAAACATTAGTGGATC CAGAAACTGGTGAAATTTTAGCGGCAGAAGGAACAATCTTAGATCGTCG TACACTTGATCGCATTTTACCTTACTTAGAGAAAAACATTGGATTCAAAA CAGCGAAACCAATGGGTGGAGTGGTAGAAGGCGATGTTGAGCTGCAAT CTATTAAGATTTATGCTCCTGAGTCGGAAGGCGAACGTGTAATTAATGTA ATTGGTAATGCAAATATTACTCGTGATGTGAAACACATCACACCAGGTG ATATCCTTGCTTCTATCAGTTACTTCTTCAACCTACTATACAAAGTAGGG GATACAGATGATATTGACCATTTAGGAAACCGTCGTCTGCGTTCTGTTG GAGAACTATTACAAAATCAATTCCGTATCGGTCTTTCTCGTATGGAACGT GTTGTTCGTGAGAGAATGTCGATCCAAGATACAAATGCAATTACACCAC AGGCGCTAATTAATATTCGTCCTGTTATTGCATCTATTAAAGAGTTCTTC GGAAGTTCTCAGTTATCTCAGTTCATGGACCAAACAAATCCATTAGCAG AGTTAACTCACAAACGAAGACTATCTGCATTAGGACCTGGTGGTTTAAC GCGTGAGCGCGCAGGCTTTGAAGTACGTGACGTTCATTACTCCCACTA CGGTCGTATGTGTCCGATTGAAACACCAGAGGGACCAAACATCGGTTT GATTAACTCATTATCTTCGTTCGCGAAAGTAAATGAGTTTGGTTTCATTG AAACACCATATCGTCGTGTTGACCCAGAAACTGGTCTTGTAACAGGGCA TGTTGATTATTTAACAGCAGATGAAGAAGATAACTATGTTGTAGCCCAAG CGAATATGAAATTATCTGATGAAGGTGAATTCCTAAGTGAAGATATCGTA GCTCGTTTCCGTGGTGAAAACATTGTCACAAATAGAGAACGCATCGACT ACATGGATGTATCTCCAAAACAAGTAGTGTCGGCAGCGACAGCTTGTAT TCCGTTCTTAGAAAACGATGACTCTAACCGCGCACTTATGGGAGCGAAC ATGCAACGTCAGGCGGTTCCGTTAATGAATCCGGAATCTCCGATTGTAG GTACAGGTATGGAGTACGTATCAGCAAAAGACTCAGGTGCTGCAGTAAT CTGTAAACATCCTGGTGTTGTTGAGCGCGTAGAAGCACGTGAAGTTTGG GTACGTCGCTATGTAGAAGTTGACGGTCAAACAGTAAAAGGCGACTTAG ATCGCTACAAAATGCAAAAATTCATTCGTTCTAACCAAGGAACTTGTTAC AACCAACGTCCAATCGTAAGTGTTGGAAATGAAGTTGTAAAAGGTGAAA TCCTTGCGGATGGTCCTTCTATGGAATTAGGTGAACTAGCACTTGGACG TAACGTGCTTGTTGGCTTCATGACTTGGGACGGTTATAACTACGAGGAT GCGATCATCATGAGTGAGCGCCTTGTAAAAGATGATGTGTACACTTCTA TTCATATTGAAGAATATGAATCAGAAGCTCGTGATACGAAGCTTGGACC AGAAGAAATTACACGTGACATTCCAAATGTTGGGGAAGACGCATTACGT AACCTTGACGAGCGCGGTATCATTCGCGTTGGTGCTGAAGTAAAAGATG GAGATTTACTTGTTGGTAAAGTAACACCTAAAGGTGTAACAGAATTAACA GCTGAAGAACGTCTATTACATGCTATCTTTGGAGAAAAAGCGCGTGAAG TACGTGATACATCACTACGTGTACCACACGGTGGTGGCGGTATTATCTT AGACGTAAAAGTATTCAACCGTGAAGATGGCGATGAATTGCCACCAGGC GTGAATCAACTTGTACGTGCATATATCGTTCAAAAACGTAAAATTTCTGA AGGTGACAAGATGGCCGGACGTCACGGTAACAAAGGTGTTATTTCTCGT ATTTTACCAGAAGAAGATATGCCTTACTTACCAGACGGTACGCCAATCG ATATCATGTTAAACCCATTAGGGGTACCATCTCGTATGAATATCGGTCAG GTATTAGAGCTTCATCTTGGTATGGCAGCAAGATACCTGGGCATTCACA TTGCAACACCAGTATTCGATGGTGCTCGTGAGGAAGATGTTTGGGGCA CAATTGAAGAAGCTGGTATGGCAAATGACGCGAAAACAATCCTGTATGA CGGACGTACTGGTGAACCATTCGATAACCGCGTATCTGTTGGTGTCATG TATATGATCAAACTTGCGCACATGGTTGACGATAAACTTCATGCTCGTTC TACTGGACCATACTCACTTGTAACGCAGCAACCTCTTGGAGGTAAAGCT CAGTTCGGTGGACAGCGTTTCGGTGAGATGGAGGTTTGGGCACTTGAA GCTTACGGTGCTGCTTATACTCTTCAAGAAATCTTAACAGTGAAGTCTGA TGATGTTGTTGGACGTGTTAAGACTTATGAAGCAATTGTTAAAGGCGAA AATGTTCCAGAACCAGGCGTTCCTGAATCATTCAAAGTATTGATTAAAGA GCTGCAAAGTTTAGGTATGGACGTTAAAATGATGTCTAGCGACGATACA GAAATTGAAATGCGTGATACAGAAGATGACGATGATCATCAATCAGCAG ATAAATTGAATGTCGAAGTTGAGACAACTAAGGAATAA.

EXEMPLO 2 PROPRIEDADES ANTI-MICROBIANAS DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 ISODADA

[0176]A capacidade de antagonismo da cepa de RTI545 contra os principais agentes patogênicos dos vegetais foi medida nas análises de placa. Uma análise em placa para a avaliação do antagonismo contra os agentes patogênicos fúngicos dos vegetais foi realizada através de crescimento do isolado de fungos patogênicos bacterianos e lado a lado 869 placas de ágar, a uma distância de 3 a 4 cm. As placas foram incubadas à temperatura ambiente e verificadas regularmente durante até duas semanas para os comportamentos de crescimento, tais como a inibição de crescimento, ocupação de nicho, ou nenhum efeito. No caso da varredura para as propriedades antagonistas contra os agentes patogênicos bacterianos, o agente patogênico foi espalhado pela primeira vez no solo como um 869 placas de ágar. Posteriormente, as alíquotas de 20 mL de uma cultura de RTI545 foram observadas na placa. As placas foram incubadas à temperatura ambiente e verificadas regularmente durante até duas semanas para uma zona de inibição no relvado em torno das posições foram em que a RTI545 tinha sido aplicada. Um resumo da atividade de antagonismo é mostrado na Tabela II abaixo. TABELA II - As propriedades Antagonistas de Bacillus thuringiensis RTI545 Isolada contra os Principais Agentes Patogênicos dos Vegetais

- +++ muito forte, ++ forte, + alguns, + - fraco, - nenhum observado

EXEMPLO 3 TRAÇOS FENOTÍPICOS DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 ISOLADA

[0177]Além das propriedades antagonistas, diversos traços fenotípicos também foram medidos para a cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 e os dados estão apresentados abaixo na Tabela III. As análises foram realizadas de acordo com os procedimentos descritos no texto abaixo de Tabela III. TABELA III - Análises Fenotípicas: Produção de Fitohormona, Acetoína e Ácido Indol acético (IAA), e o Ciclo de Nutrientes de RTI545 Isolada

- +++ muito forte, ++ forte, + alguns, + - fraco, - nenhum observado.

[0178]Teste de ácido e Acetoína. 20 μL de uma cultura iniciante em meio rico 869 foi transferido para 1 mL de Vermelho de metila - meio Voges Proskauer (Sigma AldriCH39.484). As culturas foram incubadas durante 2 dias a 30° C, 200 rpm. 0,5 mL da cultura foi transferido e foi adicionado 0,2 g de 50 μL de vermelho de metila. A cor vermelha indicou a produção de ácido. A cultura restante de 0,5 mL foi misturada com 0,3 mL de 5% de alfa-naftol (Sigma Aldrich N1000) seguido por 0,1 mL de KOH a 40%. As amostras foram interpretadas após 30 minutos de incubação. O desenvolvimento de uma cor vermelha indicou a produção de acetoína. Para ambos os testes de ácido e acetoína, o meio não inoculado foi utilizado como um controle negativo (Sokol et al., 1979, Journal of Clinical Microbiology, 9: 538-540).

[0179]Ácido indol-3-acético. 20 μL de uma cultura iniciante em meio rico 869 foi transferido para 1 mL 869 1/10 de meio suplementado com 0,5 g/L de triptofano (Sigma Aldrich 0254). As culturas foram incubadas durante 4 a 5 dias no escuro a 30° C, 200 RPM. As amostras foram centrifugadas e o sobrenadante foi misturado com 0,1 mL de reagente de 0,2 mL Salkowski (35% de ácido perclórico, de FeCl 3 10 mM). Após a incubação durante 30 minutos no escuro, as amostras resultantes em cor-de-rosa foram registradas positivo para a síntese de IAA. As diluições de IAA (Sigma Aldrich 5148) foram utilizadas como uma comparação positiva; o meio não inoculado foi utilizado como um controle negativo (Taghavi, et al., 2009, Applied and Environmental Microbiology 75: 748-757).

[0180]Teste de solubilização de fosfato. As bactérias foram plaqueadas em Pikovskaya (PVK) para o meio constituído por 10 g de glicose, 5 g de trifosfato de cálcio, 0,2 g de cloreto de potássio, 0,5 g de sulfato de amônio, 0,2 g de cloreto de sódio, 0,1 g de sulfato de magnésio hepta-hidrato, 0,5 g de extrato de levedura, 2 mg de sulfato de manganês, 2 mg de sulfato de ferro e 15 g por litro de ágar, pH 7, esterilizado. As zonas de compensação eram indicativas de bactérias de solubilização de fósforo (Sharma et al., 2011, Journal of Microbiology and Biotechnology Research 1: 90-95).

[0181]Atividade de quitinase. 10% em peso de quitina coloidal molhado foi adicionado ao meio de PVK modificado (10 g de glicose, 0,2 g de cloreto de potássio, 0,5 g de sulfato de amônio, 0,2 g de cloreto de sódio, 0,1 g de sulfato de magnésio hepta-hidrato, 0,5 g de extrato de levedura, 2 mg de sulfato de manganês, 2 mg de sulfato de ferro e 15 g por litro de ágar, pH 7, autoclavado). As bactérias foram plaqueadas em placas de quitina; as zonas de compensação indicavam a atividade quitinase (K. N. S. Murthy e Bleakley., 2012. “Simplified Method of Preparing Colloidal Chitin Used for Screening of Chitinase Producing Microorganisms ”. The Internet Journal of Microbiology. 10 (2)).

[0182]Atividade de Protease. As bactérias foram plaqueadas em meio 869 suplementado com 10% de leite. As zonas de compensação indicaram a capacidade de quebrar as proteínas que sugerem uma atividade de protease (Sokol et al., 1979, Journal of Clinical Microbiology, 9: 538-540).

EXEMPLO 4 EFEITOS DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 ISOLADA SOBRE A GERMINAÇÃO DE SEMENTES DE MILHO

[0183]O efeito de células vegetativas da RTI545 isolada bacteriana na germinação de sementes de milho foi determinado conforme descrito abaixo.

[0184]As análises com as células vegetativas de RTI545 foram realizadas utilizando as sementes de milho. As RTI545 foi plaqueada em meio 869 a partir de um lote congelado e crescida durante a noite a 30° C. Uma colônia isolada foi realizada a partir da placa e inoculada em um tubo de 50 mL cônico contendo 20 mL de caldo de 869. A cultura foi incubada durante a noite com agitação a 30° C e 200 RPM. A cultura durante a noite foi centrifugada a 10.000 rpm durante 10 minutos. O sobrenadante foi rejeitado e o sedimento foi ressuspenso em MgSO4 para lavagem. A mistura foi novamente centrifugada durante 10 minutos a 10.000 rpm. O sobrenadante foi rejeitado e o sedimento foi ressuspenso em solução modificada de Hoagland. A mistura, em seguida, foi diluída para fornecer uma concentração inicial. A partir disto, as diluições RTI545 da cultura foram realizadas para possuir uma concentração final de 2x 107 cfu / mL. Para as os experimentos sobre a germinação de sementes de milho, os recipientes de crescimento dos vegetais foram marcados com a RTI545 ou controle. Dez (10) sementes foram colocadas em um único recipiente. Dez mL da suspensão de RTI545 com uma concentração de 2x 107 cfu / mL foram adicionados aos recipientes e as sementes foram incubadas a 21° C no escuro. Os recipientes de controle continham sementes e a solução de modificação de Hoagland sem as bactérias adicionadas. As imagens dos recipientes foram tomadas após 10 a 12 dias. As Figuras 3a e 3B são imagens das plântulas de milho cultivadas após 12 dias na presença (Figura 3A) e na ausência (Figura 3B) da cepa de RTI545. Conforme pode ser observado nas Figuras, a presença da cepa de RTI545 resultou em uma vantagem significativa de crescimento.

EXEMPLO 5 EFEITOS DE CRESCIMENTO DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 ISOLADA EM MILHO

[0185]O efeito da aplicação do isolado bacteriano sobre o crescimento precoce dos vegetais e vigor em milho foi determinado. O experimento foi realizado através da inoculação das sementes esterilizadas na superfície de milho germinadas durante 2 dias em uma suspensão de 108 CFU / mL da bactéria à temperatura ambiente sob agitação (um controle também foi realizado sem bactérias). Posteriormente, as sementes inoculadas foram plantadas em potes de 1 galão cheios com o PROMIX BX que foi calado a um pH de 6,5. Para cada tratamento, 9 vasos foram semeados com uma única semente de milho. Os vasos foram incubados na estufa a 22° C com ciclo de luz e escuro de 14/10 horas e regados duas vezes por semana, conforme necessário.

[0186]Quarenta e dois dias após o plantio, os vegetais foram colhidos e o seu peso fresco e seco foram medidos e comparados com os dados obtidos para os vegetais de controle não inoculados. O peso úmido e seco da biomassa do rebento de milho foi medida após 42 dias de crescimento. peso úmido de biomassa do rebento de milho era igual a 173.7g para os vegetais inoculados com a cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 contra um peso úmido igual a 147.6g para o controle não inoculado, que é um aumento de 17,7% em peso molhado sobre o controle não inoculado. O peso seco da biomassa do rebento de milho era igual a 16,0 g para os vegetais inoculados com a cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 versus uma massa seca igual a 12,4 g para o controle não inoculado, que é um aumento de 29% em peso seco sobre o controle não inoculado. Conforme pode ser discernido a partir do aumento significativo em ambos biomassa molhada e seca, a presença da cepa de RTI545 resultou em uma vantagem significativa de crescimento.

EXEMPLO 6 ATIVIDADE- DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 ISOLADA CONTRA OS INSETOS

[0187]A capacidade da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 para antagonizar o percevejo de vegetal ocidental (WPB), Lygus hesperus, e as brocas da raiz do milho do sul (SCRW), Diabrotica undecimpunctata Howard, foi avaliado nas análises in vitro.

[0188] Para as análises, a Bacillus thuringiensis RTI545 foi cultivada durante 7 horas em 5 mL de meio 869, a 200 rpm, e a 30° C. Posteriormente, uma pequena porção da pré-cultura foi diluída 100 vezes em meio 869 e crescida durante 17 horas a 150 rpm a 30° C. A cultura bacteriana completa foi utilizada em todas as bioanálises. Como um controle biológico, a Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-1 foi utilizada de acordo com o mesmo protocolo.

[0189] Para o antagonismo contra WPB, a Bacillus thuringiensis RTI545 foi avaliada em pulverização direta, alimentação de seleção, e análises de alimentação de não seleção, em conjunto com os controles: meio 869 em branco, química de controle de acefato 97UP (A.I. = 97% de acetilfosforamidotioato de O,S-dimetila), controle biológico de HD-1, e um controle não tratado. Conforme esperado, não foi observada nenhuma mortalidade significativa (análises de pulverização direta e de alimentação de não seleção) ou repelência (análise de alimentação de seleção) para os meio 869 em branco ou tratamentos HD 1-, enquanto que o controle químico matou (pulverização direta e as análises de alimentação de não seleção) e (análise de alimentação de seleção repelida) a WPB. Bacillus thuringiensis RTI545 não forneceu nenhuma mortalidade significativa para a WPB quando aplicada em ambas as análises de pulverização direta e de alimentação de não seleção; no entanto, de maneira inesperada, a RTI545 mostrou um comportamento repelente em 124 horas após a WPB ser colocada nas arenas da análise de seleção. Especificamente, quando a WPB foi colocada em um recipiente contendo uma fonte de alimento tratado e não tratado, a WPB foi observada alimentando apenas na fonte de alimento não tratadas (dados não mostrados).

[0190] Para o antagonismo contra as larvas de CRW, as células de Bacillus thuringiensis RTI545 foram avaliadas em uma análise de alimentação de seleção de plântulas de milho e em comparação com um controle de água. Os tratamentos adicionais, em comparação com o controle de água foram (i) Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-1 (HD-1), (ii) o controle químico CAPTURA LFR (T.I. = 17,15% de bifentrina), e (iii) meio 869. O papel de filtro foi cortado ao meio e gravado para baixo para cada seção dentro de uma placa de Petri de 100 mm, se certificando que cada uma das duas metades do papel de filtro não se tocou. Um volume total de 0,65 mL de tratamento foi aplicado a cada metade de papel de filtro tratado. A água deionizada foi aplicada ao lado não tratado. Para o controle não tratado, as duas metades do papel de filtro foram tratadas apenas com a água. Uma semente de milho germinada foi situada em cada metade de papel de filtro úmido. Dez larvas de segunda instância foram colocadas na linha média entre o papel de filtro tratado e não tratado. Exixtiram 3 repetições do tratamento. As placas foram seladas com o parafilme e mantidas em um ambiente escuro a temperatura ambiente durante 6 dias antes da avaliação. A localização e o número de larvas mortas foram registrados. A proporção de larvas em cada seção de papel de filtro foi transformada em raiz quadrada para normalizar a distribuição e estatisticamente analisada com ANOVA. A utilização de teste post-hoc de Tukey HSD foi utilizada para determinar se as diferenças entre o papel de filtro tratado e não tratado foram significativas (α = 0,10).

[0191] Uma imagem da análise em placa com as células de RTI545 após 6 dias é mostrada na Figura 4, e os dados de todas as análises em placa estão resumidos na Tabela IV abaixo. Conforme foi observado na análise acima para a WPB, a RTI545 de maneira inesperada repeliu, mas não matou as larvas de CRW. Conforme pode ser observado na Figura 4 e na Tabela IV, as culturas de RTI545 foram excelentes em repelir as larvas de CRW; 100% das larvas estavam presentes na metade tratada com a água do papel de filtro e nenhuma das larvas no papel tratado de RTI545. Em contraste, as larvas foram estatisticamente uniformemente repartidas entre o tratamento e controle de água para a cepa HD-1. O controle químico de bifentrina resultou em cerca de 19% das larvas presentes no papel de filtro tratado CAPTURE LFR. Os resultados mostram que a cepa de RTI545, de maneira inesperada, foi superior a um inseticida químico em repelir os insetos da semente do milho, mas não matam os insetos. TABELA IV - A porcentagem de larvas vivas de CRW localizadas sobre o tratamento e as metades tratadas com a água do papel de filtro, após 6 dias, em uma análise de alimentação de seleção de milho

- Nota: As análises estatísticas foram realizadas na proporção transformada da raiz quadrada de larvas sobre as metades tratadas e não tratadas do papel de filtro.

[0192]A análise de alimentação de seleção por larvas de CRW utilizando as plântulas de milho foi repetida utilizando HD-1 cepa e RTI545, ao contrário de HD-1, RTI545 não contém os genes para a produção de proteínas de cristal (representadas como “Cry”). A repelência foi medida utilizando uma análises de alimentação de seleção em placa in vitro de plântulas de milho por larvas de CRW e marcou após 72 minutos, como a porcentagem de larvas de CRW sobre o lado não tratado da placa. No caso de não repelência, uma distribuição igual de 50% de em ambos as metades tratadas e não tratadas da placa seria esperada, indicando 0% de repelência. Os resultados desta análise são mostrados na Tabela V abaixo. Neste experimento, a Bacillus thuringiensis RTI545 e Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-1 (HD-1), foram avaliadas em comparação com um controle de água após 3 dias na análise. Novamente, as culturas de RTI545 foram excelentes em repelir as larvas de CRW; 96% das larvas estavam presentes na metade tratada com a água do papel de filtro e apenas 4% na metade contendo as células de RTI545. Em contraste, as larvas foram novamente estatisticamente uniformemente repartidas entre o tratamento e controle de água para a cepa HD-1 (53% sobre um lado não tratado da placa). TABELA V - A porcentagem de larvas vivas de CRW localizadas na metade não tratada do papel de filtro, após 3 dias em uma análise de alimentação de seleção em milho.

[0193]A análise de alimentação de seleção para as larvas de CRW utilizando as plântulas de milho também foi repetida para comparar a RTI545 e a outra cepa de Bacillus thuringiensis FD30 e a canosamina. Com base nos dados da sequência do genoma, a via de biossíntese canosamina putativa é encontrada em RTI545 mas não em FD30. A repelência foi medida utilizando uma análise de alimentação de seleção em placa in vitro de plântulas de milho por larvas de CRW e marcou após 72 minutos, como a porcentagem de larvas de CRW sobre o lado não tratado da placa. No caso de não repelência, uma distribuição igual de 50% de em ambas as metades tratadas e não tratadas da placa seria esperada, indicando 0% de repelência. Os resultados desta análise são mostrados na Tabela VI abaixo. TABELA VI - porcentagem média de larvas de CRW localizadas sobre as porções tratadas e não tratadas do papel de filtro a 3 dias após a introdução da arena experimental.

[0194] Conforme resumido na Tabela VI, a RTI545 fornece um efeito repelente para as larvas de CRW, quando colocadas sobre a linha média entre os papéis de filtro tratados e não tratados. A FD30 (Bacillus thuringiensis) não apresenta o mesmo efeito global. A evasão de CRW foi observada quando a canosamina foi combinada com a cepa FD30. Em duas bioanálises separadas, os efeitos repelentes por canosamina, em todas as taxas de diluição entre 0,1 pg/mL e 100,0 pg / ml, foram observados às 24 h. Em um teste, a canosamina tratada com o papel de filtro a 10 e 100 μg/mL forneu > 80% de resposta de evasão de CRW. Aos 3 dias, danos mínimos de alimentação foram observados em canosamina de milho localizado sobre o lado tratado. Por outro lado, a FD30 apresentou uma diferença não estatística de 20% no número de larvas localizadas no papel de filtro tratado e não em 3 dias; os danos de alimentação perceptível para milho foram observados em ambos os lados da análise de seleção de FD30. Em um segundo teste, o papel de filtro tratado com 30,0 μg/mL de canosamina forneceu a repelência completa após 5 dias (dados não mostrados). Com base nestes resultados, a capacidade de RTI545 para repelir as espécies de insetos, tais como a CRW e WPB pode ser devido à sua produção de canosamina.

EXEMPLO 7 ATIVIDADE DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 ISOLADA CONTRA OS NEMATOIDES

[0195] Os resultados do Exemplo 6, sugerem que a atividade de TRI545 repelente contra as espécies de insetos pode ser devida à produção de compostos, tais como a canosamina. De maneira similar, a atividade de RTI545 contra os nematoides também pode ser devido ao(s) composto(s) produzido(s) pela cepa. Uma análise de quimiotaxia de nematoide em placas foi realizada, conforme descrito abaixo, para avaliar a resposta dos juvenis nematoides do nó da raiz (RKN) (J2) para as diferentes concentrações de canosamina e sobrenadante RTI545 in vitro.

[0196]A arena de teste é mostrada esquematicamente na Figura 6. As placas de Petri de nove centímetros de diâmetro foram cheias com 15 mL de fitagel 0,75% de (incluindo 0,1% de MgSO4.7H2O). O sulfato de magnésio hepta- hidrato de MgSO4.7H2O foi utilizado, em vez de água de ágar, de maneira que as faixas de nematoides podem ser observadas sob um microscópio. As cavidades de 0,5 cm de diâmetro que podem acomodar cerca de 50 mL de solução foram realizadas em lados opostos das placas a 2 cm a partir do centro. As amostras de teste foram aplicadas nas cavidades e deixadas difundir durante 1 hora com tampas sobre os pratos, de maneira que um gradiente em torno das cavidades pode ser estabelecido. Em seguida, de 75 a 100 de nematoides das galhas da raiz J2 de estágio suspenso em 5 mL de água destilada estéril foram colocados por pipeta no centro do círculo de diâmetro de 1,5 cm da placa. Quando a tensão superficial da suspensão de água foi perdida, as placas foram cobertas com tampas e incubadas no escuro, em uma plataforma nivelada a 25° C durante 1 a 4 horas. Após a incubação, as placas foram transferidas para 4° C, para interromper o movimento do nematoide por alcançar a 2 h, 3 h e 5 h após a configuração. Três réplicas foram realizadas para cada material de teste.

[0197] Para a pontuação, a arena de teste foi dividida em dezesseis zonas, designadas por 1 a 8 para as zonas atraentes e por a a h para as zonas repelentes, conforme mostrado na Figura 6A. Os nematoides atraídos para a substância de teste tendem a se mover para as zonas numeradas (atraentes), resultando em agrupamento ao longo do eixo paralelo à orientação das cavidades. Os nematoides repelidos tenderiam a se mover para as zonas (repelente) com letras, resultando em agrupamento ao longo do eixo perpendicular à orientação das cavidades. O fator de quimiotaxia (CF) foi calculado dividindo o número total de nematoides nas zonas atraentes pelo número total de nematoides nas zonas repelentes. Um Cf maior do que 2 significou a atração para os nematoides, enquanto inferior a 0,5 indicou a repelência, e 0,5 a 2 foi considerado neutro. Os resultados estão apresentados na Tabela VII. Nesta bioanãlise de quimiotaxia, foi descoberto que a água destilada foi neutra em todos os pontos de tempo (Cf entre 0,5 e 2,0). O ácido acético a 1% mostrou a repelência de RKN J2 (Cf <0,5) em 3 h e 5 h a partir do início do teste. O Cf para o ácido acético no ponto de tempo de avaliação inicial de 2 h era neutro (dados não mostrados), provavelmente como resultado da difusão lenta do produto químico para o meio de Phytagel e/ou resposta nematoide retardada para o químico. A Figura 6B é uma fotografia de uma análise de canosamina testada a 100 μg/mL, em que os pontos indicam os locais que representam uma distribuição de nematoides neutro. A Figura 6C é uma fotografia de uma análise de sobrenadante de RTI545 testado a resistência de 100%, em que os pontos indicam os locais que representam uma distribuição de nematoides repelente. TABELA VII - A quimiotaxia de nematoide do nó de raiz (Meloidogyne spp.) na presença de sobrenadante de RTI545.

[0198]Todas as três concentrações testadas de canosamina (1, 10 e 100 μg/mL) não apresentaram propriedades repelentes na análise. O fator Cf era consistentemente mais elevado do que 0,5 para todas as taxas de canosamina testadas e todos os pontos temporais testados. Todas as doses testadas, de sobrenadante de RTI545 (1%, 10%, 25%, 50% e 100%) e de todas as taxas de meio 869 (10%, 25%, 50% de e 100%) atua como um repelente (Cf <0,5) a partir de 2 h do início da análise. Tal resposta rápida de nematoides J2 sugere que o fator responsável pelo comportamento de nematoides se difunde facilmente e estabelece um gradiente. No caso do meio 869 não existia resposta clara para as taxas testadas. No entanto, no caso de sobrenadante de RTI545, foi observada uma resposta para as taxas testadas: as taxas mais elevadas de sobrenadante resultou com forte repulsão de nematoides (Cf inferior). No entanto, os resultados para a repelência de RTI545 são inconclusivos devido a uma forte atividade de meio 869 da análise.

[0199]A ausência de repelência de canosamina para os nematoides está em contraste com o observado para as análises de insetos. A repelência nematoide observada para RTI545 parece ser devido a um fator diferente de canosamina.

[0200] Os compostos produzidos durante a cultura durante a noite de cepas de RTI545 (Bacillus thuringiensis) e do composto puro de canosamina foram avaliados in vitro para caracterizar o seu efeito potencial sobre a incubação de nematoide de nó de raiz (RKN) ovos (Meloidogyne incognita / Hapla).

SOBRENADANTES BACTERIANOS

[0201] Para se obter um sobrenadante para a análise, um circuito (cerca de 10 mL) da cepa de RTI545 foi cultivado durante 16 h em 5 mL de meio 869 a 200 rpm a 30° C. No dia seguinte, a densidade ótica (DO) de diluições de 1:100 foi medida a 600 nm para estimar o volume necessário para a inoculação de frascos de fermentação. A cultura bacteriana foi iniciada em 250 mL de frascos de fermentação em 25 mL de meio 869 a uma DO inicial de 0,01. As bactérias foram cultivadas durante a noite (durante 16 h) a 200 rpm a 30° C. Dois mL de cultura bacteriana foram guardados para medir as unidades de DO e formando as colônias (CFU). A cultura remanescente foi centrifugada (2.500 rpm, 15 min) e o sobrenadante foi filtrado e esterilizado através de um filtro de 0,22 μm. A análise de incubação foi iniciada dentro de 4 h a partir da recolha de sobrenadante. O sobrenadante foi mantido a 4° C, até o início da bioanálise.

[0202]A canosamina (10 mg) foi dissolvida em 1 mL de água deionizada para se obter 10 mg/mL de solução de estoque. Para a obtenção de 200 mg/mL de concentração, 20 mL de estoque concentrado (10 mg / ml) foram adicionados a 990 mL de água. As diluições em série, em seguida, foram realizadas para criar as concentrações de 20 μg/mL e 2 μg/mL de canosamina respectivamente.

[0203] Foi utilizada uma cultura mista de nematoides do nó raiz (Meloidogyne incognita e M. hapla). Os ovos de nematoides foram extraídos a partir de raízes de tomateiro por branqueamento e limpos utilizando uma etapa de Opti-prep de centrifugação seguido por duas lavagens em água. Antes de definir a análise de incubação, a porcentagem de ovos precoces (ovos com um embrião visível) e ovos tardios (ovos com juvenis diferenciados dentro; estágios J1 ou J2) foram estabelecidas por contagem dos ovos sob um microscópio. Apenas os ovos frescos (coletados no dia do início da análise) foram utilizados para a bioanálise.

[0204]A análise foi realizada em placas de 24 cavidades de cultura de tecidos. Em cada cavidade, 75 mL de solução de ovo em celulose de metila a 2% (cerca de100 ovos por cavidade) foram misturados com 75 mL de solução de antibiótico (300 mg/L de estreptomicina + 300 mg/L de penicilina) e 150 mL de cada tratamento. Os antibióticos foram suspensos em água destilada estéril. A concentração final de antibióticos em placas de teste foi de 75 mg/L de penicilina e 75 mg/L de estreptomicina. Todos os tratamentos continham 2% de celulose de metila (os ovos de RKN foram suspensos em celulose de metila antes da exposição ao tratamento). A adição de celulose de metila aumenta a precisão de adicionar a mesma quantidade de inoculo para cada tratamento. Os tratamentos foram criados em 6 repetições. Cada placa foi coberta, envolvida em folha de alumínio e colocada em um conjunto incubador a 25° C. Os números de juvenis incubados em cada cavidade foram contados sob um microscópio estereoscópico em 7 dias e 14 dias a partir da iniciação da incubação. Para cada ponto de tempo e tratamento, a porcentagem de incubação foi calculada de acordo com a Fórmula: - % de Incubação = (número de J2 na cavidade) / (número de ovos presentes na cavidade, no início da análise) * 100%

[0205]A porcentagem média de incubação de ovos de nematoides das galhas da raiz após 7 e 14 dias é mostrada na Tabela VIII. Todos os tratamentos foram suplementados com os antibióticos (75 mg/L de penicilina e 75 mg/L de estreptomicina) para evitar a contaminação. Os dados são as médias de 6 réplicas ± desvio padrão das médias. TABELA VIII - Impacto dos tratamentos na incubação dos ovos de nematoides

[0206]A porcentagem de ovos precoces e tardios recolhidos para a análise foi de 41% de e 59%, respectivamente. Os antibióticos, menor taxa de Agrimek® (0,1 ppm) e meios 869 brancos não apresentaram efeito significativo na incubação dos ovos. O padrão químico Agrimek® inibiu a incubação de ovos in vitro. A taxa de 1 ppm causou 72% de inibição da incubação dos ovos após 14 dias. A incubação em qualquer taxa de sobrenadante de RTI545 e na taxa elevada de Agrimek® (1 ppm) foi significativamente menor do que no controle de água. Não foi observada uma resposta de dose entre as taxas de RTI545 testadas (2,5% de -50%), assim como todas estas taxas foram comparáveis ao padrão químico Agrimek®. Em contraste, a taxa de incubação dos ovos expostos a diversas concentrações de canosamina (1, 10 e 100 μg / ml) foi maior do que no controle da água.

[0207] O sobrenadante RTI545 de cultura durante a noite em meio 869 em todas as taxas testadas inibiu significativamente a incubação dos ovos. Resultados similares foram observados quando o sobrenadante de RTI545 foi recolhido a partir de 3 dias de cultura crescida no mesmo meio (dados não mostrados). Os compostos responsáveis pela inibição da incubação dos ovos estão presentes em culturas que cresceram durante a noite e durante 3 dias.

[0208]A canosamina apresentou um efeito positivo na incubação dos ovos. A taxa de incubação dos ovos expostos à canosamina foi até 80% maior que a taxa de incubação dos ovos incubados no controle da água após sete dias. Estes resultados estão de acordo com as propriedades bioquímicas da canosamina. A canosamina foi identificada como o inibidor da síntese de quitina (Janiak e Milewski, 2001). A casca do ovo de nematoide é composta de quitina e a incubação de ovos envolve a degradação da quitina - o processo oposto à síntese de quitina.

[0209] Embora não pretendendo estar limitado por qualquer teoria, os resultados das análises sugerem que a atividade anti-nematoide de RTI545 não é devida à canosamina. O comportamento diferente dos sobrenadantes de RTI545 e dos extratos de meios 869 nas análises de repelência e de incubação dos ovos sugere que a RTI545 produz um composto ainda não identificado que fornece um desempenho anti-nematoide.

EXEMPLO 8 EFEITOS NO CRESCIMENTO E PRODUÇÃO PELO TRATAMENTO DE MILHO E SEMENTE DE SOJA COM BACILLUS THURINGIENSIS RTI545

[0210] Os experimentos foram realizados para determinar o efeito no crescimento e rendimento sob pressão de insetos, tratando as sementes de milho e soja com os esporos de B. thuringiensis RTI545, em combinação com um inseticida químico.

[0211] Os efeitos em um ou mais de crescimento, rendimento e controle das pragas de milho e larvas de sementes foram medidos em ensaios de campo em Wisconsin. Os experimentos adicionais foram realizados em estufas para medir o efeito no crescimento precoce do vegetal na presença de vermes filiformes. Os experimentos foram realizados conforme descrito abaixo.

FORMULAÇÕES

[0212] Foi aplicado um concentrado de esporos de RTI545 de B. thuringiensis (1,0 x 1010 cfu / ml) em água em uma quantidade de 1,0 x 106 cfu / semente.

[0213]A MAXIM (SYNGENTA CROP PROTECTION, INC) foi aplicado à semente a 0,0064 mg AI / grão (A.I. = fludioxonil).

[0214] O APRON XL XL (SYNGENTA CROP PROTECTION, INC) foi aplicado para semear, de acordo com o rótulo do fabricante (A.I. = mefenoxam).

[0215] O PONCHO 250, PONCHO 500 VOTIVO e PONCHO 1250 VOTIVO (BAYER CROP SCIENCE) foram aplicados às sementes, de acordo com o rótulo do fabricante (PONCHO A.I. - clotianidina e VOTIVO A.I. = Bacillus firmus I-1582).

[0216] No primeiro ensaio de campo, as sementes de milho foram tratadas com as suspensões contendo: (1) o controle químico MAXIM + APRON XL (referido como “FC”); (2) o FC + o inseticida de bifentrina 0,125 mg / semente; (3) o FC + PONCHO 1250 (clotianidina 1,25 mg / semente) e VOTIVO (Bacillus firmus I-1582); (4) o FC + PONCHO 250 (clotianidina 0,25 mg / semente); (5) o FC + PONCHO 500 (clotianidina 0,5 mg / semente) e VOTIVO (Bacillus firmus I1582) e; (6) o FC + bifentrina (0,125 mg / semente) + esporos de B. thuringiensis RTI545.

[0217]As sementes de milho tratadas foram plantadas em ensaios de campo separados em Wisconsin, em solo infestado com as pragas de insetos e larvas de sementes. Em um ensaio, o adubo foi adicionado aos lotes para atrair a colocação de ovos por adultos Delia spp. As classificações coletadas e analisadas foram a porcentagem (%) de emergência, suporte dos vegetais, porcentagem (%) de danos causados por toros, porcentagem (%) de danos por larvas de sementes, vigor e rendimento dos vegetais. A severidade dos danos na alimentação dos insetos foi avaliada por inspeção visual 34 dias após o plantio, e o vigor dos vegetais foi classificado em uma escala de 1 a 5, 1 sendo muito ruim e 5 representando uma classificação excelente de vigor do vegetal.

[0218] Os resultados são mostrados abaixo na Tabela IX. A inclusão de B. thuringiensis RTI545 em combinação com o inseticida de bifentrina resultou em aprimoramentos significativos na porcentagem de emergência, resistência, vigor e controle do verme filiforme e da larva da semente sobre as sementes tratadas apenas com a bifentrina. Além disso, os resultados da combinação de B. thuringiensis RTI545 e bifentrina foram estatisticamente equivalentes ao produto PONCHO 1250 VOTIVO no controle de vermes filiformes e mostraram um aprimoramento em relação a este produto no controle de larvas de sementes. Estes dados indicam que o tratamento de sementes de milho com uma combinação de B. thuringiensis RTI545 e um inseticida químico como a bifentrina significativamente aprimora o controle de insetos sobre a inclusão de inseticida químico isoladamente e é superior aos produtos comercialmente disponíveis para alguns tipos de controle de insetos. TABELA IX - Controle de vermes filiformes e larvas de sementes nos ensaios de campo de milho após o tratamento de sementes com uma combinação de inseticidas e esporos químicos de RTI545 em relação ao PONCHO VOTIVO.

- FC é o teste de fungicida aplicado a todos os tratamentos contendo o fludioxonil e mefenoxam para fornecer a proteção contra as doenças

[0219] Em um segundo ensaio de campo, as sementes de milho também foram tratadas com as mesmas suspensões que o primeiro ensaio contendo: (1) o controle químico MAXIM + APRON XL (referido como “FC”); (2) o FC + bifentrina; (3) o FC + PONCHO 1250 VOTIVO; (4) o FC + PONCHO 250; e (5) o FC + bifentrina + esporos de RTI545. As sementes de milho tratadas foram plantadas em ensaios de campo separados em Wisconsin com os vermes filiformes presentes e nenhum adubo é adicionado para que a semente de larva não fosse um problema. Os danos de raízes de milho de alimentação do verme filiforme foram avaliados 41 dias após o plantio.

[0220] Os resultados são mostrados abaixo na Tabela X e mostram resultados similares à Tabela IX acima. Especificamente, a inclusão do B. thuringiensis RTI545 em combinação com o inseticida de bifentrina resultou em aprimoramentos significativos na porcentagem de emergência, resistência do vegetal, vigor e controle da vermicha sobre as sementes tratadas apenas com a bifentrina. Além disso, os resultados da combinação de B. thuringiensis RTI545 e bifentrina foram estatisticamente equivalentes ou superiores ao produto PONCHO 1250 VOTIVO no controle de vermes filiformes. TABELA X - Controle de vermes filiformes nos ensaios de campo de milho após o tratamento de sementes com uma combinação de inseticida e esporos químicos de RTI545 em comparação ao PONCHO VOTIVO.

* FC é o teste de fungicida aplicado a todos os tratamentos contendo o fludioxonil e Mefenoxam para fornecer a proteção contra as doenças

[0221] O rendimento médio nos ensaios de campo de milho após o tratamento de sementes com uma combinação de inseticida e esporos químicos de RTI545, em comparação ao PONCHO VOTIVO, também foi determinado. Os resultados são mostrados abaixo na Tabela XI. A inclusão do B. thuringiensis RTI545 em combinação com o inseticida de bifentrina resultou em aprimoramentos significativos no rendimento em comparação com as sementes tratadas apenas com a bifentrina. Além disso, a combinação de RTI545 e bifentrina superou o PONCHO 500 VOTIVO e o PONCHO 1250 VOTIVO ao aumentar o rendimento em 13 alqueires / acre (de 180,5 a 193,7 e de 185,5 para 193,7 alqueires / acre, respectivamente) representando um aumento de 6,8% de e 4,2% de rendimento de grãos, respectivamente. Estes dados indicam que o tratamento de sementes de milho com uma combinação de RTI545 e um inseticida químico tal como a bifentrina significativamente aprimora o rendimento em relação à inclusão de inseticida químico isoladamente, e reduz a necessidade de aplicação de grandes quantidades de inseticidas químicos no controle de danos por insetos. TABELA XI - Rendimento médio nos ensaios de campo de milho após o tratamento de sementes com uma combinação de inseticida e esporos químicos de B. thuringiensis RTI545 em relação ao PONCHO VOTIVO

[0222] O efeito no crescimento sob pressão de insetos, tratando as sementes de milho com os esporos de RTI545, ainda foi avaliado. Em um conjunto de estudos em estufas, as sementes de milho foram primeiramente tratadas com as suspensões de tratamento de sementes, conforme descrito a seguir, e, em seguida, plantadas em solo infestado com a praga vermes filiformes (10 vermes filiformes por vaso com uma semente), em conjunto com um conjunto de controle em que o solo não contém os vermes filiformes. As suspensões de tratamento de sementes foram as seguintes: (1) o controle químico MAXIM + APRON XL (referido como “FC”); ( 2) o FC; (3) o FC + bifentrina (0125 mg / semente para todos os tratamentos tratados); (4) o FC + bifentrina + RTI545 5,0x 106; (5) o FC + bifentrina + RTI545 5,0x 106 e tratado termicamente; (6) o FC + bifentrina + RTI545 1,0 x 106; (7) o FC + RTI545 5,0x 106; e (8) o FC + PONCHO 1250. As sementes tratadas foram avaliadas quanto à porcentagem de emergência.

[0223] Os resultados são mostrados abaixo na Tabela XII. A inclusão do B. thuringiensis RTI545 em combinação com o inseticida de bifentrina resultou em 100% de emergência, que foi um aprimoramento em relação à inclusão de bifentrina isoladamente e forneceu resultados equivalentes ao controle sem os vermes filiformes e ao tratamento químico de FC + PONCHO 1250. As raízes de ameixa de alimentação dos vermes filiformes provocam o atrofiamento dos vegetais de milho e a RTI545 isoladamente ou a bifentrina com a RTI545 reduziram o atrofiamento no crescimento dos vegetais nos vegetais sobreviventes. A RTI545 isoladamente exibiu a atividade na prevenção da perda dos vegetais, mas foi inferior ao inseticida de bifentrina, fornecendo uma proteção precoce contra o atrofiamento no crescimento. No entanto, a RTI545 foi mais eficaz na prevenção do atrofiamento no crescimento dos vegetais à medida que os vegetais crescem (dados não mostrados). Estes dados indicam que a inclusão de esporos de RTI545 no tratamento de sementes de milho, isoladamente ou em combinação com um inseticida químico, tal como a bifentrina, significativamente aprimora a saúde dos vegetais na presença do inseto da praga de vermes filiformes. TABELA XII - Emergência e crescimento em estudos de estufas de milho na presença de vermes filiformes após o tratamento de sementes com o inseticida químico e RTI545.

[0224] Foram realizados os experimentos para determinar o efeito no rendimento tratando a semente de soja com uma combinação fungicida convencional de ingredientes ativos químicos em adição aos esporos de B. thuringiensis RTI545, em combinação com um inseticida químico. Os experimentos foram realizados conforme descrito abaixo.

FORMULAÇÕES

[0225] Foi aplicado um concentrado de esporos de RTI545 (1,0 x 1010 cfu / ml) em água em uma quantidade de 1,0 x 106 cfu / semente.

[0226]A FC é uma formulação contendo o fludioxonil, TPM e mefenoxam que foi aplicado à semente a 2,5 g / 100g de semente (fludioxonil), 10 g / 100g (TPM) e 7,5 g / 100g de semente (mefenoxam).

[0227] O tiametoxam foi aplicado à semente a 50 g / 100 g de semente.

[0228] No experimento, as sementes de soja foram misturadas com uma solução contendo: (1) o controle químico de fludioxonil / TPM / mefenoxam (“FC”); (2) o FC + tiametoxam inseticida; e (3) o FC + tiametoxam + esporos de B. thuringiensis RTI545. As sementes de soja tratadas foram plantadas em três locais (N = 3) que possuíam infestação por vermes filiformes, e o rendimento foi analisado.

[0229] Os resultados são mostrados abaixo na Tabela XIII. A inclusão dos esporos de RTI545 em combinação com o tiametoxam resultou em aprimoramentos significativos no rendimento em comparação com as sementes tratadas apenas com o tiametoxam aumentando o rendimento em 1,6 alqueires / acre (de 68,2 para 69,8), representando um aumento de 2,3% no rendimento. Estes dados indicam que o tratamento de semente de soja com uma combinação de RTI545 e um inseticida químico significativamente aprimora o rendimento em relação à inclusão de inseticida isoladamente, e reduz a necessidade de aplicação de grandes quantidades de inseticidas químicos no controle de danos por insetos. TABELA XIII - Rendimento médio em soja após o tratamento de sementes com o inseticida e esporos químicos de RTI545, além de um tratamento de sementes fungicida padrão (CF).

[0230] Uma explicação possível para o controle de insetos aprimorado através de semente ou no tratamento em sulcos com os esporos de RTI545 em combinação com um inseticida químico está ilustrada na Figura 1. Especificamente, a Figura 1A é um diagrama esquemático que mostra o controle de insetos somente com um inseticida químico (isto é, sem RTI545 ). A Figura 1A mostra, na extremidade esquerda, uma semente de vegetal (círculo interno) revestida com um inseticida químico (faixa escura ao redor do círculo interno), que é circundado por pragas de insetos vegetais no rizosfera do vegetal, representada por marcas horizontais. A parte central do diagrama mostra a semente do vegetal brotada com o inseticida difuso protegendo as raízes da semente do vegetal das pragas de insetos (proteção representada pelas marcas “X”). A extremidade direita do diagrama mostra a proteção reduzida das raízes das sementes das pragas de insetos à medida que as raízes crescem além da zona de difusão do inseticida químico. A Figura 1B mostra como a adição de esporos de Bacillus thuringiensis RTI545 ao revestimento na semente do vegetal (ou na aplicação em sulco de esporos de RTI545 no momento do plantio) aprimora o controle do inseto sobre a utilização do revestimento do inseticida isoladamente. Especificamente, o lado direito do diagrama da Figura 1B mostra a proteção permanente das raízes das sementes do vegetal a partir das pragas de insetos, até mesmo quando as raízes crescem além da zona de difusão do inseticida químico, como resultado do estabelecimento de Bacillus thuringiensis RTI545 na rizosfera vegetal.

EXEMPLO 9 CONTROLE DE NEMATOIDES POR BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 ISOLADA EM SOLO INFESTADO

[0231]A capacidade da cepa de Bacillus thuringiensis RTI545 para reduzir a infestação de nematoides em soja e batata foi determinada, conforme descrito abaixo.

[0232] Um estudo de efeito de estufa foi realizado com os vegetais de soja envasadas em solo infectado com os nematoides de galhas da raiz do sul para determinar o efeito do tratamento de sementes com os esporos de RTI545 aplicados em uma quantidade de 1,0 x 106 cfu / semente. Os vegetais de soja foram envasados em solo infectado com os ovos vivos de nematoides das galhas da raiz do sul (Meloidogyne incognita). As sementes tratadas com cada um dos produtos PONCHO VOTIVO (Bayer Cropscience LP; A.I. = 40,3% de clotianidina, 8,1% de Bacillus firmus I-1582) e AVICTA COMPLETE (Syngenta; A.I. = 11,7% de tiametoxam, 10,3% de abamectina, 2,34% de tiabendazol, 0,3% de fludioxonil, 0,23% de mefenoxam, 0,12% de azoxistrobina), separadamente, contendo os ingredientes ativos químicos nas proporções indicadas nos rótulos dos produtos. Os dados são mostrados na Tabela XIV abaixo. Aos 63 dias após o início, não existiu diferença estatística no número de ovos / vaso de nematoides para o tratamento de sementes com as células de RTI545 e a combinação química de AVICTA COMPLETE, no entanto, o número de nematoides de ovos / vaso para a semente tratada com a RTI545 foi menor que para a semente tratada com o PONCHO VOTIVO. Não existia diferença estatística no número de juvenis / vaso para nenhum dos tratamentos após 63 dias. Estes dados demonstram o efeito positivo no controle de nematoides em soja fornecido por Bacillus thuringiensis RTI545. TABELA XIV - Infestação de nematoides ao longo do tempo em soja após o tratamento de sementes com os esporos de RTI545.

[0233] Um estudo de efeito de estufa foi realizado com os vegetais de batata envasadas em solo naturalmente infectado com os nematoides de Globodera sp. para determinar o efeito do tratamento do solo com as células de Bacillus thuringiensis RTI545. Neste experimento, o efeito do aumento do solo com as células de RTI545 sobre o número de cistos por grama de biomassa da raiz foi determinado aos 60 dias após o início do estudo. As batatas (variedade sensível de nematoides “Bintje”) foram plantadas em solo infectado com Globodera sp. (controle) e intensificada com 10E9 cfu de esporos por litro de solo de Bacillus thuringiensis RTI545 (RTI545 ). Os resultados são mostrados no gráfico da Figura 5. Os tratamentos adicionais do solo foram incluídos no estudo: Produto VYDATE (Vydate; Dupont; A.I. = [N'N'-dimetil-N-[(metilcarbamoil)oxil)oxi de metoil]-1- tiooxamimidato) de oxamil, produto BIOACT (Bayer Cropsciences LP; A.I. = da cepa Paecilomyces lilacinus 251), produto CAREX (CAREX, Nufarm, piridabeno) e Bacillus thuringiensis spp. kurstaki HD-1). Os produtos foram aplicados nas taxas designadas nos rótulos dos produtos. Conforme pode ser observado na Figura 5, o número de quistos por grama de biomassa de raiz para o solo tratado com as células de RTI545 foi significativamente reduzido em comparação com todos os tratamentos, incluindo os produtos que contém os ingredientes ativos químicos.

EXEMPLO 10 TRATAMENTO DE SEMENTE DE ALGODÃO COM BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 INOCULADO COM RHIZOCTONIA

[0234] Foram realizados experimentos para investigar o efeito na emergência, doença de raiz e rendimento em algodão na presença de pressão de doença de Rhizoctonia quando as sementes foram tratadas com a cepa de RTI545, além de agentes químicos ativos para o controle de agentes patogênicos.

[0235] Especificamente, um experimento em algodão foi estabelecido da seguinte maneira: (1) a semente não foi tratada (UTC); (2) a semente foi tratada com uma combinação de bases de Fludioxonil + Mefenoxam + Imidacloprid de acordo com o rótulo do fabricante (referido como “B”); (3) a semente foi tratada com base mais 5 x 10+5 cfu / semente de RTI545 (B + RTI545 ); e (4) a semente foi tratada com base mais VIBRANCE (ingrediente ativo de sedaxano; Syngenta Crop Protection, INC) de acordo com as instruções do rótulo (B + VIBRANCE). Os ensaios de campo foram realizados na Geórgia. Os ensaios foram inoculados com Rhizoctonia misturando o inóculo seco com a semente no momento do plantio a uma taxa prescrita para fornecer a infecção quando a semente começou a crescer. A porcentagem média de emergência de algodão é apresentada na Tabela XV abaixo.

[0236] Os resultados na Tabela XV mostram que o tratamento com os esporos de RTI545 em adição à base resultou em um aprimoramento significativo na porcentagem de emergência em relação à base química isoladamente (67% versus 45% para a base isoladamente). Além disso, o tratamento com a RTI545 realizado, bem como a base mais o produto comercial VIBRANCE com os ativos químicos. Por conseguinte, o tratamento de sementes com a RTI545 pode fornecer um aprimoramento significativo na emergência, até mesmo sob condições de pressão severa do agente patogênico. TABELA XV - Emergência de algodão em solo inoculado com Rhizoctonia a partir de sementes tratadas com a RTI545.

EXEMPLO 11 EFEITOS NO CRESCIMENTO E RENDIMENTO TRATANDO A SEMENTE DE TRIGO COM BACILLUS THURINGIENSIS RTI545

[0237] Os experimentos foram realizados para determinar o efeito no crescimento e rendimento sob a pressão de insetos por semente de trigo tratada com os esporos de B. thuringiensis RTI545 isoladamente ou em combinação com um ou ambos os fungicidas químicos e um inseticida químico. Mais especificamente, os efeitos sobre o crescimento, rendimento e controle de pragas de trigo, verme filiforme e lagarta branca foram medidos em ensaios de campo em Wisconsin. Os experimentos foram realizados conforme descrito abaixo comparando a adição de esporos de B. thuringiensis RTI545 a uma semente e uma semente mais a fungicida base, e a adição de esporos de RTI545 em combinação com 2 concentrações de inseticida, bifentrina, em adição à base de fungicida.

[0238] No ensaio de campo, as sementes de trigo foram tratadas com as suspensões contendo: (1) o fungicida químico à base de difenoconazol / tebuconazol / TPM / mefenoxano (referido como “FC”); (2) o FC + esporos de B. thuringiensis RTI545 (RTI545 106 cfu / g de semente); (3) o FC + Bifentrina (20 g / semente); (4) o FC + Bifentrina (20 g / semente) + RTI545 106 cfu / g semente; (5) o FC + bifentrina (50 g / semente); e (6) o FC + bifentrina (50 g / semente) + RTI545 106 cfu / g semente.

[0239]As sementes de trigo tratadas foram plantadas em ensaios de campo em Wisconsin em solo infestado com as pragas de insetos e lagarta branca. As classificações coletadas e analisadas foram porcentagem (%) de emergência, porcentagem (%) de danos causados pelo verme filiforme, porcentagem (%) de danos da lagarta, vigor e rendimento dos vegetais. A severidade dos danos na alimentação dos insetos foi avaliada por inspeção visual 35 dias após o plantio, e o vigor dos vegetais foi classificado em uma escala de 1 a 5, 1 sendo baixo e 5 altamente vigoroso.

[0240] Os resultados são mostrados abaixo na Tabela XVI. O tratamento de sementes com cada um dos esporos de B. thuringiensis RTI545, e o tratamento com os esporos de RTI545 com o fungicida base isoladamente ou em combinação com o inseticida, bifentrina, resultou em aprimoramentos significativos na porcentagem de emergência, vigor, controle de vermes filiformes e lagarta, e rendimento. Em todos os casos testados, a inclusão dos esporos de RTI545 no tratamento de sementes de trigo resultou em aprimoramentos significativos no crescimento, vigor, controle de pragas e rendimento. TABELA XVI - Controle de verme filiforme e lagarta nos ensaios de campo de trigo após o tratamento de sementes com uma combinação de inseticida químico e esporos de RTI545.

* FC é o teste de fungicida aplicado a todos os tratamentos contendo o Difenoconazol + TPM + Tebuconazol + Mefenoxam para fornecer a proteção contra as doenças.

EXEMPLO 12 IMPACTO DO TRATAMENTO DE SEMENTES DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 SOBRE O CRESCIMENTO E RENDIMENTO DE SOJA INOCULADA COM RHIZOCTONIA

[0241] Um ensaio de campo foi conduzido em Quitman, GA para testar a eficácia da adição de RTI545 a um tratamento químico com fungicida base / inseticida para fornecer a proteção de Rhizoctonia em comparação com a semente não tratada ou esta base ou o controle positivo comprometendo a base sintética mais o sedaxano.

[0242]As sementes de soja da variedade de soja cv. Pioneer 93Y92 foram tratadas com as suspensões separadas sendo preparadas para os tratamentos químicos e biológicos que foram aplicados simultaneamente à semente. As sementes foram colocadas em um frasco que foi agitado em um agitador de tinta modificado até o produto estar uniformemente revestido nas sementes. O tratamento químico de base compreendeu quatro ativos que compreendem (1) 12,8 g/L de fludioxonil, (2) 38,4 g/L de mefenoxam, (3) 38,4 g/L de tiofanato-metila (TPM) e (4) 256 g/L de tiametoxam como uma formulação única e aplicada a 41,4 mL / 140.000 sementes. O Vibrance (500 g/L de sedaxano) foi aplicado separadamente como um tratamento de sementes para o tratamento de controle positivo. Foi utilizada a técnica seca da cepa de RTI545 e diluída em água para se obter uma taxa de aplicação de 5 x 105 cfu / semente. Os produtos foram suspensos com a água para, pelo menos, 65 mL / 140.000 sementes para assegurar uma aplicação uniforme. O ensaio compreendeu os testes em blocos completos aleatórios (4 repetições) sendo lotes de 1,8 metros por 9 metros. As sementes da variedade de soja cv. tratadas e sementes não tratadas foram plantadas em solo arenoso utilizando um plantador de cone a uma taxa de semeadura de 13 sementes / metro a uma profundidade de 2,5 cm e espaçamento entre fileiras de 90 cm. O inóculo de Rhizoctonia foi misturado e plantado com a semente. Os lotes e vegetais de soja foram tratados em condições agronômicas, em geral, aceitas para a soja, incluindo o plantio convencional e com a irrigação suplementar, conforme necessário. Os vegetais foram avaliados durante o período de crescimento para a emergência, vigor (em uma escala qualitativa de 1 a 5 com 5 sendo as melhores) e, em seguida, colhidos para avaliar o rendimento convertido para bu / acre e kg / ha. Os resultados estão resumidos na Tabela XVII abaixo. TABELA XVII - Impacto do tratamento de sementes com a RTI545 no crescimento e produção de soja inoculada com Rhizoctonia

[0243]O impacto da Rhizoctonia é reduzir o suporte, reduzir o vigor e diminuir os rendimentos. A inoculação foi eficaz tendo em vista o tratamento de base ser significativamente aprimorado em relação à semente não tratada para todas as contagens dos vegetais, vigor e avaliações de rendimento.

[0244]A adição de RTI545 à base química resultou em aumento significativo no suporte em todos os 3 tempos de avaliação, vigor para aumentar significativamente em 2 tempos de avaliação e rendimento numericamente superior em comparação com a base química. As classificações reduzidas de suporte e vigor podem ser devidas a que os vegetais morrem. A adição de sedaxano à base sintética, um ativo registrado para o controle de Rhizoctonia, resultou em aumento de emergência, vigor e rendimento numericamente superior que aquele de base sintética. A adição de RTI545 foi similar ao tratamento com o sedaxano para todas as classificações que demonstram essa eficácia de tensão igual na redução de danos de Rhizoctonia neste ensaio.

EXEMPLO 13 IMPACTO DO TRATAMENTO COM SEMENTES DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI 545 SOBRE O CRESCIMENTO E RENDIMENTO DE MILHO PLANTADO EM UM CAMPO INFESTADO DE VERMES FILIFORMES E LARVAS DE SEMENTES

[0245] Um ensaio de campo foi conduzido em Wisconsin para testar a eficácia da RTI545, além de um fungicida base (Maxim e Apron XL aplicados em 5,2 mL / 100 kg) ou este fungicida base e clotianidina (0,25 mg / semente) ou este fungicida base mais a bifentrina (0,125 mg / semente) ou este fungicida base mais o clorantraniliprol (2 classificações avaliadas para 0,25 e 0,5 mg / semente) ou bifentrina (0,125 mg / semente) combinadas com o clorantraniliprol (0,25 mg / semente). Como um controle positivo para demonstrar um nível de proteção elevado, a clotianidina foi aplicada em 1,25 mg / semente combinada com o fungicida base, com essa taxa elevada representando 5 vezes a carga da baixa taxa de clotianidina também avaliada.

[0246]As sementes de milho (variedade cv. Ag Venture G5891) foram tratadas com as suspensões separadas sendo preparadas para os tratamentos químicos e biológicos que foram aplicados simultaneamente à semente. As sementes foram colocadas em um frasco que foi agitado em um agitador de tinta modificado até o produto estar uniformemente revestido nas sementes. O tratamento químico básico compreendeu três formulações comerciais que compreendem (1) 40,3% de fludioxonil, (2) 33,3% de mefenoxam, (3) 18,4% de clorantraniliprol, (4) 600 g/L de clotianidina e (5) 400 g/L de bifentrina. A técnica seca da cepa de RTI545 foi utilizada e diluída em água para alcançar uma taxa de aplicação de 1 x 106 cfu / semente. Os produtos foram suspensos até, pelo menos, 600 mL / 100 kg para assegurar uma aplicação uniforme. O tratamento 13 é a Base + Clotianidina 1,25 mg / semente como um controle positivo para um nível elevado de proteção contra os vermes filiformes. O ensaio compreendeu os testes em blocos completos aleatórios (4 repetições) de lotes de 3 metros por 15 metros. As sementes de milho foram plantadas em solo arenoso de argila siltosa de Milford utilizando um plantador de cone a uma taxa de semeadura de 93.900 sementes / hectare, uma profundidade de 6,25 cm e um espaçamento entre as fileiras de 75 cm. O adubo foi espalhado em cima de lotes após a semeadura para atrair as larvas de sementes para colocar os ovos nos lotes. Os lotes e os vegetais de milho foram tratados em condições agronômicas, em geral, aceitas para o milho, incluindo a lavoura mínima com a chuva sendo a média para acima da média para a área. Os vegetais foram avaliados durante o período de crescimento para a emergência, vigor (em uma escala qualitativa de 1 a 5 com 1 = vigor baixo e 5 = vigor elevado - lotes classificados), dano de alimentação por vermes filiformes e larvas (classificado por amostragem de 50 vegetais e avaliando o dano da raiz pelo verme filiforme ou a larva da semente), e, em seguida, colhido para avaliar o rendimento. Os resultados estão resumidos na Tabela XVIII. TABELA XVIII - Impacto do tratamento de sementes com a RTI545 no crescimento e produção de milho plantado em um campo infestado de vermes filiformes e larvas de sementes.

[0247]O impacto da alimentação com verme filiforme é reduzir o suporte, reduzir o vigor e prejudicar os vegetais pela poda das raízes, danificar as raízes e reduzir os rendimentos. As larvas de sementes também podem reduzir o suporte e se alimentar de sementes, provocando o atrofiamento.

[0248]A adição de RTI545 à base de fungicida (tratamento 2 versus tratamento 3) resultou em contagens de emergência significativamente maiores aos 42 e 164 dias após o plantio, reduziu o dano à raiz causado pela alimentação de verme filiforme e aumentou significativamente o rendimento sobre a base do fungicida. Embora a RTI545 fornecesse a proteção contra os inseticidas, o nível de proteção era menor do que os produtos sintéticos avaliados, demonstrando o benefício de adicionar este produto a um inseticida para garantir um desempenho satisfatório.

[0249]A adição de RTI545 à clotianidina (tratamentos 3 e 4 respectivamente) aplicados a 0,25 mg / semente aumentou significativamente a emergência em todos os 4 tempos de avaliação, aumentou significativamente o vigor em todos os 3 tempos de avaliação, reduziu os danos de alimentação causados pela larva e vermes filiformes e aumentou significativamente o rendimento. A adição de RTI545 à baixa taxa de clotianidina resultou em um desempenho similar à classificação de clotianidina elevada aplicada em 1,25 mg / semente.

[0250]A adição de RTI545 à bifentrina (01,25 mg / semente para os tratamentos 5 e 6, respectivamente) aumentou significativamente a emergência em 1 tempo de avaliação, aumentou significativamente o vigor em 1 momento de avaliação, reduziu significativamente os danos causados por larvas de semente no último momento de avaliação e aumentou significativamente o rendimento.

[0251]A adição de RTI545 ao clorantraniliprol (0,25 mg / semente para os tratamentos 7 e 8, respectivamente) aumentou significativamente a emergência com 3 tempos de avaliação e aumentou significativamente o rendimento.

[0252]A adição de RTI545 ao clorantraniliprol (0,5 mg / semente para os tratamentos 9 e 10, respectivamente) aumentou significativamente a emergência em todos os 4 tempos de avaliação, aumentou significativamente o vigor em todos os 3 tempos de avaliação, reduziu significativamente os danos causados pela larva de semente, reduziu os danos de alimentação de vermes filiformes numericamente e aumentou significativamente o rendimento. A adição de RTI545 ao clorantraniliprol (0,5 mg / semente) resultou no desempenho deste produto de maneira similar à classificação elevada de clotianidina (1,25 mg / semente).

[0253]A adição de RTI545 a uma combinação de clorantraniliprol e bifentrina (tratamentos 9 e 10 respectivamente) aumentou significativamente a emergência em todos os 4 tempos de avaliação, aumentou significativamente o vigor em todos os três tempos de avaliação, reduziu significativamente os danos causados por larvas de semente e vermes filiformes e aumentou significativamente o rendimento. A adição de RTI545 a esta combinação resultou neste produto para executar de maneira similar ou aprimorada para a classificação elevada de clotianidina (1,25 mg / semente) com o rendimento final deste tratamento sendo mais de 8 bu / acre superior à classificação elevada de clotianidina.

[0254] Estes resultados demonstram que a proteção contra os inseticidas fornecida pela RTI545 intensifica a proteção fornecida por três classes exclusivas de inseticidas sintéticos do IRAC. Estes resultados demonstram que a RTI545 fornece a proteção isoladamente; no entanto, a combinação com um inseticida eficaz auxilia a garantir um nível muito superior de benefícios aparentes.

EXEMPLO 14 APLICAÇÕES EM SULCOS DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 EM ENSAIOS DE CAMPO DE MILHO

[0255] Os tratamentos em sulcos de milho com a RTI545 foram estudados em diversos ensaios de campo em diversos locais na América do Norte para avaliar a eficácia contra os vermes filiformes (Melanotus spp.) e broca da raiz do milho (Diabrotica spp.). Os efeitos sobre o rendimento e o dano à cultura de diversos tratamentos comparados aos controles não tratados para os ensaios individuais da América do Norte foram agregados e resumidos como uma média para o estudo nas Tabelas a seguir como porcentagem (%) de aumento de rendimento e redução de danos em comparação aos controles não tratados. Sete ensaios foram avaliados para verme filiforme. Dezoito ensaios foram avaliados para a broca da raiz do milho. Cinco ensaios com danos pesados da broca da raiz do milho foram calculados em média separadamente. TABELA XIX - Efeito no rendimento de milho dos tratamentos com a RTI545 em lotes de campo infestados por vermes filiformes.

TABELA XX - Efeito sobre a produção de milho e danos na broca da raiz dos tratamentos com a RTI545 em lotes de campo infestados por brocas da raiz do milho.

[0256] Os dados de rendimento de 7 ensaios de verme filiforme indicam que os tratamentos que contêm a RTI545 apresentam uma ligeira vantagem em relação à bifentrina isoladamente e à teflutrina padrão comercial à sua taxa mais elevada. Os dados de 18 ensaios para a broca da raiz do milho indicam que os rendimentos dos tratamentos contendo a RTI545 mostram rendimentos iguais ou ligeiramente superiores aos da bifentrina isolada e da teflutrina à sua taxa mais elevada. Os dados desses 18 ensaios também indicam que o milho tratado com a RTI545 em combinação com um inseticida resultou em menos danos na raiz do milho em solo infestado com a broca da raiz do que o padrão industrial de teflutrina em sua taxa máxima ou bifentrina em taxa máxima ou quando a RTI545 foi aplicada isoladamente como um tratamento. Quando existia uma forte pressão sobre a broca da raiz do milho, a redução na taxa de danos foi similar aos tratamentos sob pressão típica da broca da raiz, mas o aumento do rendimento percentual foi melhor. No geral, os dados desses ensaios indicam que a RTI545 combinada com a bifentrina pode aumentar a produção de milho e diminuir o dano causado por insetos às raízes do milho quando comparado às áreas não tratadas ou áreas tratadas com a teflutrina padrão da indústria.

[0257] Oe ensaios de campo também foram conduzidos com os tratamentos em sulco de milho com a RTI545 na Europa para avaliar a eficácia contra o verme filiforme (Agriotes spp.) - Dados não mostrados.

EXEMPLO 15 IMPACTO DO BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 NO CRESCIMENTO E RENDIMENTO DE AMENDOIM INOCULADO COM RHIZOCTONIA

[0258] Um ensaio de campo foi conduzido na Geórgia para testar a eficácia da combinação biológica da presente invenção como um tratamento de sementes de amendoim inoculado com Rhizoctonia solani.

[0259]As sementes de amendoim foram tratadas com uma formulação de pó seco com uma taxa de aplicação final de 200 g / 100 kg de semente contendo a RTI545, resultando em uma aplicação de RTI545 a 3,0 x 106 CFU / g de semente, e simultaneamente aplicada com DYNASTY PD, um produto de amendoim registrado nos Estados Unidos contendo o fludioxonil (2%), mefenoxam (0,4%) e azoxistrobina (3,2%) com uma aplicação de 195 g / 100 kg de sementes. As sementes foram colocadas em um frasco e agitadas até o produto estar uniformemente revestido nas sementes.

[0260] O ensaio incluiu os testes em blocos completos aleatórios utilizando os lotes de cerca de 1,8 metros por 9,1 metros (6 pés por 30 pés). As sementes de amendoim tratadas e não tratadas (Arachis hypogaea, var. GA 06) foram plantadas. Utilizando um plantador de cone, as sementes foram plantadas com 3 cm de profundidade (1,25 polegada) com espaçamento entre as fileiras de 0,9 m (36 polegadas) em solo arenoso. Os lotes foram inoculados com Rhizoctonia sp. para garantir a infestação. Os lotes e os vegetais de amendoim foram tratados em condições agronômicas em geral aceitas para o amendoim, incluindo o preparo convencional e a irrigação, conforme necessário, até que estivessem prontas para a cultura. Os vegetais foram avaliados durante o período de crescimento para emergência, vigor (em uma escala qualitativa de 1 a 5) e, em seguida, colhidos para avaliar o rendimento. Os resultados estão resumidos na Tabela XXI. TABELA XXI - Resultados do ensaio de campo de amendoins tratados com as sementes RTI545 contra Rhizoctonia

[0261]Todos os tratamentos de sementes possuíam um nível mais elevado do que o controle sem tratamento (UTC) em todos os 3 tempos de avaliação. Em todos os três tempos de avaliação, o tratamento incluindo a RTI545 forneceu a melhor emergência. A semente não tratada possuía o menor vigor em todos os 3 tempos de avaliação. O tratamento incluindo a RTI545 forneceu maior vigor do que o UTC e o tratamento químico de base. Todos os produtos forneceram um rendimento significativamente maior que o UTC. O tratamento incluindo a RTI545 superou o tratamento químico de base.

EXEMPLO 16 IMPACTO DO TRATAMENTO COM SEMENTES DE BACILLUS THURINGIENSIS RTI 545 SOBRE O NEMATOIDE DA LESÃO

[0262] Os ensaios de solo em milho com sementes tratadas para avaliar a atividade contra o nematoide da lesão (Pratylenchus penetrans) foram conduzidos em estufa. As sementes de milho (cv. Viking) foram tratadas com o tratamento básico de sementes de fludioxonil (1,1 mL / SU) e metalaxil-M (1,1 mL / SU) (todas as sementes). Algumas sementes foram também tratadas com o PONCHO / VOTIVO (clotianidina + B. firmus I-1582 a 80 mL / SU), RTI545 a 5 x 105 CFU / semente, RTI545 a 1 x 106 CFU / semente ou uma mistura de qualquer RTI545 (5 x 105 CFU / semente) + cepa Bacillus subtilis CH201 (2,5 x 106 CFU / semente) + cepa Bacillus licheniformis CH200 (2,5 x 106 CFU / semente) ou RTI545 (5 x 105 CFU / semente) + cepa Bacillus velezensis RTI301 (5 x 105 CFU / semente) + cepa Bacillus licheniformis CH200 (2,5 x 106 CFU / semente).

[0263] Em um tipo de análise, as sementes tratadas foram plantadas em recipientes cônicos em 90 mL de solo (80,4% de areia, 14,8% de silte, 4,8% de argila, 1,1% de matéria orgânica, pH 6,9). Após o plantio das sementes, o solo foi inoculado no mesmo dia com 4.000 nematoides (estágios mistos: J2-adultos) por semente em 200 μl de veículo (2% de celulose demetila). Um controle utilizou as sementes com o tratamento de sementes de base em solo não inoculado. Os plantios de teste foram regados na parte superior utilizando um aspersor de névoa. O teste foi avaliado em 2 (dados não mostrados) e 7 dias após a emergência para o comprimento total da raiz utilizando o software WinRhizoTM. Os dados de comprimento de raiz e os dados de redução de porcentagem (%) de nematoide foram transformados utilizando a transformação de raiz quadrada com arco seno antes da análise de ANOVA utilizando um teste de ANOVA Fisher em α = 0,1. TABELA XXII - Efeito do tratamento de sementes com a RTI545 em milho no comprimento total de raízes de plântulas cultivadas sob pressão de nematoides.

[0264]A inoculação de plântulas de milho com os nematoides lesionados reduziu numericamente o comprimento total das raízes. O comprimento total das raízes de plântulas tratadas com o PONCHO / VOTIVO (padrão comercial) foi superior àquele das plântulas inoculadas não tratadas e similar àquele de plântulas não inoculadas. O comprimento total de raiz das plântulas tratadas com a RTI545 foi significativamente aumentado quando comparado com as plântulas inoculadas não tratadas (30 a 34%) e foi estatisticamente similar, mas numericamente maior que o comprimento total de raiz de plântulas tratadas com o PONCHO / VOTIVO.

[0265]Testes similares utilizando 2.000 nematoides / sementes para a inoculação foram realizados em 130 mL de solo e foram medidos os números de nematoides por raiz e o peso vivo fresco dos vegetais às 8 semanas após a inoculação do nematoide. Os resultados são apresentados na Tabela XXIII. A infestação do nematoide da lesão resultou em severa redução do peso fresco (FTW) dos vegetais de milho. O FTW dos vegetais de controle inoculados foi reduzido em 50% quando comparado com os vegetais não inoculados. A taxa elevada de RTI545 estatisticamente forneceu um maior FTW comparado aos padrões PONCHO / VOTIVO e ao controle de nematoides inoculados. Estes resultados indicam que o tratamento de sementes com a RTI545 aumenta a tolerância dos vegetais à infestação de nematoides ao sustentar o crescimento dos vegetais na presença de pragas de nematoides. Além disso, foram observados efeitos positivos similares no crescimento dos vegetais / FTW em que a RTI545 foi utilizada na menor taxa em combinação com outras cepas: RTI545 (1 x 105 CFU / semente) + cepa Bacillus subtilis CH201 (2,5 x 106 CFU / semente) + cepa Bacillus licheniformis CH200 (2,5 x 106 CFU / semente), ou RTI545 (1 x 105 CFU / semente) + RTI301 (5 x 105 CFU / semente) + cepa Bacillus licheniformis CH200 (2,5 x 106 CFU / semente). Além disso, o tratamento de sementes com a RTI545 a uma taxa elevada (1,0 x 106 CFU / semente) forneceu um controle muito bom dos nematoides da lesão (redução de 50% de do número de nematoides nas raízes). PONCHO / VOTIVO não reduziu o número de nematoides nas raízes. TABELA XXIII - Efeito do tratamento de sementes com a RTI545 em milho em relação ao o peso fresco e contagem de nematoides em raízes após a inoculação com o nematoide da lesão.

[0266]Testes similares em que a RTI545 foi aplicada como um encharcamento do solo a uma taxa de 2,5 x 1011 CFU / ha forneceu uma redução de 71% de no número de nematoides da lesão por raiz em comparação com 95% para a abamectina. Em testes de encharcamento de solo aplicado aos vasos em estufa com solo infestado com os nematoides e adultos (2.000 indivíduos / vaso) RTI545 na taxa de 2,5 x 1013 CFU / ha forneceram redução de 80% no número de nematoides por raiz comparado a 86% de redução por cadusafos.

EXEMPLO 17 IMPACTO DO BACILLUS THURINGIENSIS RTI 545 NO NEMATOIDE DE CISTO DE SOJA EM ANÁLISE DE ENCHARCAMENTO DE SOLO

[0267]A atividade de RTI545 contra o nematoide de cisto de soja (Heterodera glycines) foi investigada nas análises de encharcamento de solo em uma estufa. As sementes individuais de soja (cv. AG4730) foram plantadas em 120 mL de solo (80,4% de areia, 14,8% de silte, 4,8% de argila, 1,1 de matéria orgânica, pH 6,9) em recipientes cônicos e irrigados individualmente. Os recipientes foram inoculados com os ovos de nematoides a uma taxa de 4.000 ovos em 1 mL de celulose de metila a 2% por recipiente, 21 dias após o plantio. As aplicações de encharcamento de solo (em 10 mL de volume por 100 mL de solo) de RTI545 e AGRI-MEK 0,15 CE (a.i. 2% de abamectina) e VENERATE XC (94,46% de células de cepa Burkholderia spp. A396 mortas pelo calor e meio de fermentação esgotado) foram aplicadas em 7 e 21 dias após o plantio. As taxas testadas foram os esporos lavados com a RTI545 a 2,5 x 1012 CFU / ha, 2,5 x 1013 CFU / ha e 2,5 x 1014 CFU / ha; abamectina a 1 ppm (0,01 mg a.i./vegetal) e 10 ppm (0,1 mg a.i./vegetal) correspondendo à taxa de rótulo de tratamento de sementes; e VENERATE XC a 5% de v/v (500 mg vegetal), correspondendo a 4,5 x na taxa do sulco. Os testes foram avaliados no dia 70 (7 semanas após a inoculação). As avaliações foram realizadas através da extração de cistos das raízes e do solo e contagem do número total de cistos sob estereomicroscópio. TABELA XXIV - Número de cistos de nematoides de cisto de soja extraídos de raízes e solo.

[0268] Os dados mostram que a RTI545 reduziu os números de cistos de nematoides em até 66%. Não existia resposta de dose clara entre as taxas testadas e a atividade. A atividade da RTI545 não foi estatisticamente diferente do padrão biológico VENERATE XC. A abamectina padrão química possuía a maior atividade. A taxa de 0,01 mg / vegetal forneceu redução de 79% e 0,1 mg / vegetal forneceu redução de 96%.

EXEMPLO 18 FORMULAÇÕES DE CONCENTRADO EM SUSPENSÃO QUE COMPREENDE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545

[0269] Os concentrados de suspensão representativos que compreendem Bacillus thuringiensis RTI545 estão resumidos na Tabela XXV. Foram preparados misturando os esporos de RTI545 com os outros componentes em um recipiente de mistura adequado ou homogeneizador. TABELA XXV - Formulações de concentrado em suspensão

EXEMPLO 19 FORMULAÇÕES DE CONCENTRADO EM SUSPENSÃO QUE COMPREENDE BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 E BIFENTRINA

[0270] Os concentrados de suspensão representativos que compreendem Bacillus thuringiensis RTI545 e inseticida de bifentrina estão resumidos nas Tabelas XXVI e XXVII. Foram preparados misturando os esporos de RTI545 com os outros componentes em um recipiente de mistura adequado ou homogeneizador. O Exemplo 19C é uma composição espumável que pode ser aplicada como uma espuma às sementes ou no sulco no momento do plantio. A composição espumável 19C opcionalmente pode ser diluída com a água e misturada com um gás pressurizado, tal como o ar, em uma câmara de formação de espuma, que compreende um meio espumante, tal como uma pluralidade de esferas de vidro, para a preparação de uma espuma. TABELA XXVI - Formulações SC de RTI545 e bifentina

TABELA XXVII

[0271]A estabilidade de esporos durante o armazenamento a temperaturas elevadas foi muito boa, conforme mostrado abaixo na Tabela XXVIII, em que a formulação 18D foi armazenada a 54° C durante duas semanas, com pouca alteração na concentração de esporos de RTI545. TABELA XXVIII - Estabilidade de esporos durante o armazenamento

[0272]Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências mencionadas na especificação são indicativas do nível dos técnicos no assunto ao qual a presente invenção descrita se refere. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes e outras referências estão incorporadas no presente como referência na mesma extensão como se cada publicação individual, pedido de patente, patente e outra referência fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada como referência. Será entendido que, embora uma série de pedidos de patentes, patentes e outras referências seja referida no presente, tal referência não constitui uma admissão de que qualquer destes documentos faça parte do conhecimento geral comum no estado da técnica.

[0273] Embora a presente invenção acima tenha sido descrito com algum detalhe por meio de ilustração e exemplo para os propósitos de clareza de compreensão, será entendido pelos técnicos no assunto que determinadas alterações e modificações podem ser praticadas dentro do âmbito das reivindicações anexas.

Claims (28)

1. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender: uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, e um adjuvante agricolamente aceitável.

2. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pela cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 estar na forma de esporos ou células vegetativas ou extratos livres de células.

3. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizada pelo adjuvante compreender uma matriz de plantio, um veículo, um aglutinante, um tensoativo, um dispersante, ou um extrato de levedura.

4. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada por ainda compreender uma ou a combinação de um inseticida, um fungicida, nematicida, bactericida, bioestimulante, herbicida, extrato vegetal, extrato microbiano, regulador de crescimento vegetal ou fertilizante presente em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento dos vegetais e/ou para conferir proteção contra uma infecção patogênica em um vegetal suscetível.

5. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pela composição ainda compreender um inseticida químico.

6. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo inseticida químico compreender clorantraniliprol, cloretoxifos, ciantraniliprol, ciclaniliprol, dicloropropeno, flupiradifurona, gama-cialotrina, profenofos, tebupirimfos, teflutrina, kappa-bifentrina, kappa-teflutrina, carbofurano, carbossulfano, oxamil, tiodicarbe, clorpirifos, clorpirifos-e, clorpirifos-metila, diazinona, forato, terbufos, fipronil, acetamiprid, clotianidina, imidacloprid, tiacloprid, tiametoxam, abamectina, flonicamida, flubendiamida, bifentrina, lambda-cialotrina, cipermetrina, zeta- cipermetrina, deltametrina, piridabeno ou qualquer uma de suas misturas.

7. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo inseticida químico compreender clorantraniliprol ou ciantraniliprol.

8. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação6, caracterizada pelo inseticida químico compreender bifentrina.

9. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pela composição ainda compreender um fungicida químico.

10. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fungicida químico compreender tiabendazol, fluxapiroxad, penflufeno, sedaxano, bitertanol, ciproconazol, difenoconazol, fluquinconazol, flutriafol, ipconazol, miclobutanil, protioconazol, triadimefona, triadimenol, tebuconazol, triticonazol, procloraz, imazalil, benomil, carbendazim, himexazol, azoxistrobina, fluoxastrobina, pyraclostrobina, trifloxystrobina, carboxin, flutolanil, metalaxil, mefenoxam, pentiopirrad, fluopyram, siltiofam, fluazinam, pirimetanil, fludioxonil, iprodiona, triciclazol, captan, dazomet, mancozeb, metam, tiram, guazatina, tolclofos-metila, pencicurona, tiofanato-metila, fenpicoxamida, mefentrifluconazol, fluindapir, ou qualquer uma de suas misturas.

11. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pela composição ainda compreender um nematicida químico.

12. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo nematicida químico compreender benomil, fenamifos, cadusafos, ethoprofos, fostiazato, cloropicrina, dazomet, fluensulfurona, oxamil, 1,3-dicloropropeno (telona), sódio de metam, potássio de metam, sal de metam, brometo de metila, isotiocianato de alila, fluazaindolizina, tioxazafeno, fluopiram, ou suas misturas.

13. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pela composição estar em uma formulação compatível com um fertilizante líquido ou produto de nutrição de culturas.

14. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pela composição ainda compreender um silicato hidratado de alumínio-magnésio e pelo menos um dispersante.

15. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 14, caracterizada por compreender um inseticida de bifentrina, em que o inseticida de bifentrina está presente em uma concentração variando de 0,1 g/mL a 0,2 g/mL.

16. MÉTODO PARA UM OU AMBOS DENTRE BENEFICIAR O CRESCIMENTO DE UM VEGETAL ou conferir proteção contra uma praga de vegetal em um vegetal suscetível, caracterizado por compreender a entrega de uma composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, que compreende uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161 para: o vegetal, parte do vegetal, semente do vegetal, raízes do vegetal, meio de crescimento ou solo ao redor o vegetal, ou meio de crescimento ou solo antes do plantio do vegetal ou semeadura do vegetal, em quantidade adequada para beneficiar o crescimento do vegetal e/ou conferir proteção contra a praga do vegetal no vegetal suscetível.

17. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pela semente do vegetal ser revestida com uma composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, que compreende uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC PTA-122161, em que o crescimento do vegetal a partir da semente do vegetal é beneficiado e/ou a proteção contra a praga de vegetal é conferida.

18. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 17, caracterizado pelo vegetal compreender milho, soja, batata, algodão, tomate, pimenta, cucurbitácea, cana de açúcar, amendoim ou trigo.

19. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 18, caracterizado pela praga de vegetal compreender um inseto selecionado a partir do grupo que consiste em Lygus spp., Coleoptera, Diabrotica spp., Melanotus spp., Phyllophaga spp., Limonius spp., Agriotes spp., Lepidoptera, Peridroma spp., Euxoa spp., Agrotis spp., Diptera, Hylemya spp., Tetanops sp. Hemiptera, Pemphigus sp., Aphis sp., Agonoderus sp., Feltia spp., ou suas combinações.

20. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pela praga do vegetal compreender um percevejo de vegetal, broca da raiz, verme filiforme, larva do solo, ou complexo de lagartas brancas.

21. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 18, caracterizado pela praga de vegetal compreender um nematoide patogênico de vegetais selecionado a partir do grupo que consiste em Rotlyenchulus spp., Xiphinema spp., Hoplolaimus spp., Paratylenchus spp., Criconemoides spp., Meloidogyne spp., Hemicycliophora spp., Helicotylenchus spp., Trichodorus spp., Heterodera spp., Belonolaimus spp., Tylenchorhynchus spp., Globodera spp., ou suas combinações.

22. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo nematoide compreender um nematoide de Meloidogyne spp., nematoide de Pratylenchus spp., nematoide de Globodera spp. Ou nematoide de Heterodera spp.

23. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 18, caracterizado pela praga de vegetal compreender um agente patogênico fúngico de vegetal ou um agente patogênico bacteriano de vegetal selecionado a partir do grupo que consiste em Alternaria ssp., Aspergillus spp., Botrytis spp., Cercospora spp., Fusarium spp., Phytophthora spp., Rhizoctonia spp., Magnaporthe spp., Pythium spp., Monilinia spp., Colletotrichum spp., Sclerotinia spp., e Erwinia spp.

24. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo agente patogênico fúngico de vegetal compreender Rhizoctonia spp.

25. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 24, caracterizado por ainda compreender distribuir um fertilizante líquido ou um produto nutricional da cultura à semente do vegetal.

26. SEMENTE DE VEGETAL REVESTIDA, caracterizada por ser revestida com uma composição, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, que compreende esporos de uma cultura biologicamente pura de Bacillus thuringiensis RTI545 depositada como ATCC No. PTA-122161, presentes em uma quantidade adequada para beneficiar o crescimento do vegetal e/ou conferir proteção contra uma praga de vegetal em um vegetal suscetível.

27. SEMENTE, de acordo com a reivindicação 26, caracterizada por compreender as sementes de milho, soja, batata, algodão, tomate, pimenta, cucurbitácea, cana de açúcar, amendoim ou trigo.

28. USO DA COMPOSIÇÃO, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado por ser para a aplicação em um vegetal para um ou ambos dentre beneficiar o crescimento de um vegetal ou conferir proteção contra uma praga de vegetal em um vegetal suscetível.

Images