WO2023219482A1 - Cepa aislada bacillus thuringiensis var israelensis, mezcla y método, para el control biológico de bacterias fitopatógenas - Google Patents
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Definitions
- VKPM B-9790 strain isolated in Russia would not have the same effects for the control of Erwinia spp. If it will be used in our country or similar regions, since environmental conditions greatly influence the behavior of bacteria. Therefore, for optimal use of the potential of the strains of microorganisms, these must be isolated from the environmental conditions of bacterial strains where they will be applied.
- a first object of the present invention is an isolated strain of Bacillus thuringiensis var israelensis identified as RVP BTI-20, deposited with the accession number CM-CNRG TB193; which showed to have bactericidal activity; for example, against a phytopathogenic bacteria.
- one application of the mixture of the present invention is for the biological control of phytopathogenic bacteria;
- a preferred application being to biologically control a phytopathogenic bacteria that causes soft rot in the roots and stems of vegetables; such as the bacteria Erwinia spp.
- Another embodiment of said method is when the effective amount of the mixture is 0.1 mL with a concentration of IxlO 8 of ufe per 1 kg of seeds.
- RVP BTI-20 strain (Bacillus thuringiensis var israelensis) isolated and studied in the examples described above, it was decided to deposit it on February 4, 2022, in the Microorganisms Collection of the National Center for Genetic Resources that belongs to the National Institute of Forestry, Agricultural and Livestock Research, with registration number before the World Federation of Culture Collection 1006 (CM-CNRG) and International Depositary Authority with notification 308 for the purposes of patent proceedings in accordance with the Budapest Treaty; and has its address at Boulevard de la Biodiversidad 400, C. P. 47600. Tepatitlán de Morelos, Jalisco, Mexico. Where said RVP BTI-20 strain (Bacillus thuringiensis var israelensis) corresponded to the accession number: CM-CNRG TB193.
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Abstract
Cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20), depositada con el número de acceso CM-CNRG TB193, la cual exhibe actividad bactericida. Mezcla que comprende, una cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20), depositada con el número de acceso CM-CNRG TB193. Método para el control de bacterias fitopatógenas, que comprende, poner en contacto una cantidad efectiva de la mezcla de conformidad con la presente invención, con tejidos vegetales.
Description
CEPA AISLADA Bacillus thuríngíensís var israelensis, MEZCLA
Y MÉTODO, PARA EL CONTROL BIOLÓGICO DE BACTERIAS FITOPATÓGENAS
CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se relaciona con los campos técnicos de la Biotecnología, Agricultura y Agroalimentario, debido a que proporciona una cepa aislada de la bacteria Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20) , la cual mostró actividad bactericida; una mezcla y un método para el control biológico de bacterias f itopatógenas , tales como la bacteria Erwinia spp. causante de la pudrición blanda en raiz y tallo de vegetales.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Entre otros factores causante de las pérdidas durante la germinación o establecimiento de cultivos vegetales, están los agentes bióticos como son las bacterias, virus, hongos, roedores e incluso aves, entre otros; lo cual ha desenfrenado la generación de muchas tecnologías para el control de tales agentes bióticos.
En el caso especifico, para el control de las bacterias patógenas, se ha desarrollado y utilizado un sin número de productos, principalmente químicos, que han causado la resistencia a los bactericidas, contaminación ambiental, y toxicidad; por lo que, ha motivado a la búsqueda de otros métodos efectivos y no perjudiciales para combatir esta problemática, poniendo énfasis en la obtención de agentes bióticos naturales para el control biológico de tales agentes bióticos .
La importancia de los productos para el control biológico radica en que son una opción amigable para el medio ambiente, ya que no generan resistencia a ellos. En los siguientes documentos se describen algunas de dichos productos o técnicas .
El documento de patente EP1930440 (Al ) divulga un método para aumentar la resistencia en una planta o animal a una enfermedad en la que la virulencia está regulada por IA [tales como las enfermedades causadas por Pseudomonas aeruginosa, Erwinia stewartii , Erwinia chrysanthemi , Pseudomonas soianacerum, y Xanthomonas campestris (Passador, et al., 1993; Pirhonen, et al., 1993; Pearson, et al., 1994; Beck von Bodman y Farrand, 1995; Barber, et al., 1997; Clough, et al., 1997; Costa y Loper, 1997; Nasser, et al., 1998) , y especialmente la enfermedad de pudrición blanda de las plantas causada por E. carotovora que comprende administrar a la planta o animal una cantidad eficaz de una bacteria que es capaz de producir un inhibidor autoinductor; donde la bacteria administrada es un Bacillus sp . , más preferiblemente una variedad de Bacillus thuringiensis, más preferiblemente una variedad de B. thuringiensis seleccionada del grupo de cepas que consiste en Bl, B2, B17, B18, B20, B21, B22 y B25. En otra realización preferida de este aspecto de la invención, el animal a tratar es un ser humano. También se divulgan moléculas de ácido nucleico aisladas que codifiquen proteínas de inactivación de auto- inductores. Estas moléculas de ácido nucleico codifican proteínas de inactivación de auto-inductores que comparten el motivo de aminoácidos conservado <104> HXHXDH <109> ~ 60aa-H <169> ~ 21aa ~ D <191>, o el motivo similar <103> HXHXDH <108> ~ 72aa - H <180> ~ 21aa - D <202>. Las realizaciones preferidas de estas moléculas de ácido
nucleico codi fican las proteínas de SEQ ID Nos . 11-20 , y las reali zaciones más preferidas de estas moléculas de ácido nucleico tienen las secuencias de SEQ ID Nos 1- 10 .
El documento EP1930440 (Al ) divulga también un vector de expresión que comprende al menos una secuencia de ácido nucleico que codi fica una proteina de inactivación auto- inductora, en la que la proteina codificada comprende el motivo de aminoácido conservado <104> HXHXDH <109> ~ 60aa ~ H <169> 21aa ~ D <191>, o el motivo similar <103> HXHXDH <108> ~ 72aa ~ H <180> ~ 21aa ~ D <202 , > en el que el vector de expresión se propaga en una célula procariota o eucariota . Las reali zaciones preferidas de este vector de expresión son cuando comprende al menos una secuencia de ácido nucleico que codi fica una proteina que tiene una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOS 11-20 , y las reali zaciones más preferidas tienen las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID Nos 1- 10 . Dicho documento EP1930440 (Al ) también divulga una célula de un procariota o eucariota trans formada con un vector de expresión de la presente invención . También se divulga una proteina aislada que tiene actividad de inactivación auto-inductora, donde la proteina comprende la secuencia de aminoácidos conservada <104> HXHXDH <109> ~ 60aa-H <169> ~ 21aa - D <191>, o el motivo similar <103> HXHXDH <108> ~ 72aa ~ H <180> 21aa D <202> . Las reali zaciones preferidas de la invención comprenden proteínas que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOS 11-20 .
El documento EP1930440 (Al ) también hace referencia a un método para aumentar la resistencia a enfermedades en una planta o animal , cuyo método comprende introducir en una célula de dicha planta o animal , al menos , una molécula de
ácido nucleico que codi fica una proteina de inactivación auto-inductora de una manera que permite que dicha célula exprese dicha secuencia de ácido nucleico , donde dicha proteina de inactivación auto-inductora comprende la secuencia de aminoácidos conservada <104> HXHXDH <109> ~ 60aa - H <169> 21aa - D <191>, o similar <103> HXHXDH <108> ~ 72aa - H <180> ~ 21aa D <202> .
Las cepas de B . thuríngí ensí s que propone el documento EP1930440 (Al ) son para controlar enfermedades causadas por Erwinia spp . en humanos . También cabe añadir que dichas cepas son ya conocidas y que fueron aisladas muy probablemente en regiones geográficas di ferentes a las de nuestro pais . Además , la tecnología propuesta en dicho documento se puede considerar como una alternativa, pero es económicamente muy costosa ; por lo que es muy poco probable que los agricultores mexicanos puedan tener acceso a esa tecnología .
El documento de patente RU2347809 ( C1 ) divulga una cepa aislada de Bacill us thuringi ensi s que muestra actividad fungicida, actividad insecticida y suprime las propiedades virulentos de bacterias f itopatogenas de Erwinia carotovora . La cepa de Bacill us thuringi ensi s Morrisoni GosNI Igenetika 16-T281 fue aislada de muestras naturales y se depositó en la All-Russian Collection of Industrial Microorganisms con el número de acceso VKPM B- 9790 . Como se puede ver, se propone el aislamiento de cepas de B . thuringi ensi s, pero de otra variante di ferente a la " I sraelensis" ; además dicha cepa VKPM B- 9790 aislada en Rusia, no tendría las mismos efectos para el control de Erwinia spp . si se utili zará en nuestro pais o regiones similares , ya que las condiciones ambientales influyen mucho en el comportamiento de las bacterias . Por lo que , para aprovechamiento óptimo del
potencial de las cepas de microorganismos , éstos deben ser aislados de las condiciones ambientales de cepas bacterianas en donde serán aplicadas .
Por lo tanto , con la finalidad de contribuir a la solución de los inconvenientes antes mencionados , se aisló una cepa de Bacill us thuringi ensi s var israelensis identi ficada como RVP BTI-20 , la cual mostró actividad bactericida ; con la cual se desarrolló una mezcla y un método para el control biológico de bacterias f itopatógenas , tales como la bacteria Erwinia spp . causante de la pudrición blanda en rai z y tallo de vegetales .
Los detalles característicos de la presente invención se muestran claramente en la siguiente descripción ej emplos y figuras que se acompañan con la única finalidad de ilustrar la concepción y algunas reali zaciones preferentes de dicha invención .
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La figura 1 es una gráfica que ilustra la inhibición del halo de Erwinia spp . causado por la cepa aislada RVP BTI-20 de Bacill us thuringi ensi s var israelensis .
La figura 2 es una fotografía que ilustra visualmente el efecto de control biológico que tuvo la cepa aislada RVP BTI-20 de Bacill us thuringi ensi s var israelensis sobre la bacteria fitopatógena Erwinia spp . , en plantas de Agave tequilana Weber .
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Un primer objeto de la presente invención es una cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis identificada como RVP BTI-20, depositada con el número de acceso CM-CNRG TB193; la cual mostró tener actividad bactericida; por ejemplo, en contra de una bacteria f itopatógena .
Donde la bacteria fitopatógena es una bacteria que causa la pudrición blanda en raiz y tallo de vegetales; por ejemplo, la bacteria fitopatógena es Erwinia spp .
Un segundo objeto de la presente invención es una mezcla, que comprende, una cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20) , depositada con el número de acceso CM-CNRG TB193; la cual exhibe actividad bactericida.
Por lo tanto, una aplicación de la mezcla de la presente invención, es para el control biológico de bacterias f itopatógenas ; siendo una aplicación preferente, la de controlar biológicamente a una bacteria fitopatógena que causa la pudrición blanda en raiz y tallo de vegetales; como por ejemplo la bacteria Erwinia spp.
Un tercer objeto de la invención en cuestión es un método para el control de bacterias f itopatógenas , el cual comprende en poner en contacto una cantidad efectiva de la mezcla que comprende, una cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20) , depositada con el número de acceso CM-CNRG TB193, con tejidos vegetales.
Donde una realización del método de la presente invención es cuando la bacteria fitopatógena a controlar, es una bacteria
-1- que causa la pudrición blanda en raíz y tallo de vegetales; por ejemplo, la bacteria Erwinia spp .
Una realización más del método en cuestión, es cuando los tejidos vegetales a proteger son raíz y tallo.
Otra realización más de dicho método es cuando la cantidad efectiva de la mezcla es de 0.1 mL con una concentración de IxlO8 de ufe por 1 Kg de semillas.
EJEMPLOS DE LA INVENCIÓN
Los siguientes ejemplos se incluyen a manera de ilustrar la concepción y algunas realizaciones preferentes de la presente invención. Por lo tanto, tales ejemplos no deben ser considerados como una limitante a los alcance de dicha invención .
Ejemplo 1. Prueba de antagonismo de la cepa RVP BTI-20 (Bacillus thuringiensis var israelensis) con la bacteria Erwinia spp.
Ob j etivo
Se evaluó in vitro el efecto antagónico entre la cepa aislada RVP BTI-20 (Bacillus thuringiensis var israelensis) con la bacteria Erwinia spp.
Metodología
La prueba de antagonismo se realizó en cajas Petri con agar LB, poniendo en crecimiento la bacteria fitopatógena (Erwinia spp.) y la bacteria antagonista (RVP BTI-20) . Se realizó un estriado por agotamiento cubriendo toda la caja Petri con la bacteria Erwinia spp. En el centro de la caja
Petri se colocó un sensidisco de papel filtro que contenía la bacteria antagonista cepa RVP BTI-20 (Bacillus thuringiensis var israelensis) .
A las 24, 48 y 72 h, de establecida la prueba, se revisó el crecimiento de las bacterias, así como el halo de inhibición causado por la bacteria antagónica.
Resultados
La figura 1 ilustra el comportamiento de la medición del halo de la cepa de Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20) que inhibe el crecimiento de Erwinia spp . Evidenciándose que a mayor tiempo, el halo de inhibición era cada vez mayor. Esto dejó ver el potencial que tiene la cepa aislada RVP BTI-20 para controlar el crecimiento de Erwinia spp .
Ejemplo 2. Efecto de control la cepa aislada RVP BTI-20 (Bacillus thuringiensis var israelensis) sobre la bacteria fitopatógena Erwinia spp. en plantas de Agave tequilana Weber.
Ob j etivo
Se evaluó el efecto de la cepa aislada RVP BTI-20 (Bacillus thuringiensis var israelensis) sobre el control de la bacteria fitopatógena Erwinia spp. causante de pudrición del tallo bacteriana en el efecto "DAMPING OFF" en plantas de Agave tequilana Weber.
Metodología
Se utilizaron dos plantas de Agave tequilana Weber (Pl y P2) , sembradas en macetas, ambas plantas se inocularon con la bacteria Erwinia spp., pero solamente la planta (P2) se
le aplicó la mezcla que contenía a la cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20) . Conforme fue transcurriendo el tiempo se fue observando el crecimiento de las plantas y al cabo de 6 meses, se decidió terminar con la observación y se tomaron fotografías para dejar evidencia de los resultados.
Resultados
Con la figura 2 se puede concluir que la cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20) controló de manera siginif icativa a la bacteria fitopatógena Erwinia spp. en la planta (P2) ; mientas que en la planta (Pl) no hubo ningún control dando como resultado la pudrición y muerte de dicha planta.
DEPÓSITO DE LA CEPA RVP BTI-20 (Bacillus thuringiensis var israelensis )
Al ver los resultados prometedores de la cepa RVP BTI-20 (Bacillus thuringiensis var israelensis) aislada y estudiada en los ejemplos antes descritos, se decidió depositarla el 4 de febrero de 2022, en la Colección de Microorganismos del Centro Nacional de recursos Genéticos que pertenece al Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, con número de registro ante la World Federation of Culture Collection 1006 (CM-CNRG) y Autoridad Depositaría Internacional con notificación 308 con fines de procedimiento de patente conforme al Tratado de Budapest; y que tiene su domicilio en Boulevard de la Biodiversidad 400, C. P. 47600. Tepatitlán de Morelos, Jalisco, México. Donde dicha cepa RVP BTI-20 (Bacillus thuringiensis var israelensis) le correspodió el número de acceso: CM-CNRG TB193.
Claims
1. Una cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20) , depositada con el número de acceso CM-CNRG TB193.
2. La cepa de la reivindicación anterior, caracterizada porque exhibe actividad bactericida.
3. La cepa según la reivindicación anterior, donde la actividad bactericida es contra una bacteria f itopatógena .
4. La cepa de acuerdo con la reivindicación precedente, donde la bacteria fitopatógena es una bacteria que causa la pudrición blanda en raiz y tallo de vegetales.
5. La cepa de conformidad con la reivindicación anterior, donde la bacteria fitopatógena es Erwinia spp .
6. Una mezcla, caracterizada porque comprende, una cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis (RVP BTI-20) , depositada con el número de acceso CM-CNRG TB193.
7. La mezcla de la reivindicación anterior, donde la cepa aislada de Bacillus thuringiensis var israelensis exhibe actividad bactericida.
8. La mezcla según la reivindicación anterior, donde la actividad bactericida es contra una bacteria fitopatógena .
9. La mezcla de acuerdo con la reivindicación precedente, donde la bacteria fitopatógena es una bacteria que causa la pudrición blanda en raiz y tallo de vegetales.
10. La mezcla de conformidad con la reivindicación anterior, donde la bacteria fitopatógena es Erwinia spp .
11. Un método para el control de bacterias f itopatógenas , caracterizado porque comprende, poner en contacto una cantidad efectiva de la mezcla de conformidad con las reivindicaciones 6 a la 10, con tejidos vegetales.
12. El método de la reivindicación precedente, donde la bacteria fitopatógena es una bacteria que causa la pudrición blanda en raiz y tallo de vegetales.
13. El método según la reivindicación anterior, donde la bacteria fitopatógena es Erwinia spp.
14. El método de la reivindicación 11, donde los tejidos vegetales son: raiz y tallo.
15. El método de acuerdo con la reivindicación 11, donde la cantidad efectiva de la mezcla es de 0.1 mL con una concentración de IxlO8 de ufe por 1 Kg de semillas.
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| PCT/MX2023/050015 WO2023219482A1 (es) | 2022-05-09 | 2023-03-01 | Cepa aislada bacillus thuringiensis var israelensis, mezcla y método, para el control biológico de bacterias fitopatógenas |
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| Country | Link |
|---|---|
| WO (1) | WO2023219482A1 (es) |
Citations (4)
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| US5919447A (en) * | 1996-11-18 | 1999-07-06 | Agraquest, Inc. | Strain of bacillus for controlling plant disease |
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-
2023
- 2023-03-01 WO PCT/MX2023/050015 patent/WO2023219482A1/es unknown
Patent Citations (4)
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