JP6619460B2 - ヒト化抗タウ（ｐＳ４２２）抗体及び使用法 - Google Patents

ヒト化抗タウ（ｐＳ４２２）抗体及び使用法 Download PDF

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Description

発明の分野
本発明は、配列番号０３のリン酸化タウ断片に特異的に結合するヒト化抗タウ（ｐＳ４２２）抗体及び脳疾患の処置のためのその使用に関する。
背景
ヒトタウ（微小管結合タンパク質タウ（神経原線維変化タンパク質、ペアードヘリカルフィラメント−タウ、ＰＨＦ−タウ））は、軸索に主に見られる神経微小管結合タンパク質であり、かつチューブリンの重合を促進するように及び微小管を安定化させるように機能する。８つのアイソフォーム（アイソフォームＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、胎児−タウ）がヒト脳に見られ、最も長いアイソフォームは４４１アミノ酸を含む（アイソフォームＦ、Uniprot P10636-8）。タウ及びその特性はまた、Reynolds, C.H., et al., J. Neurochem. 69 (1997) 191-198によっても記載されている。
タウは、その過剰リン酸化形態では、アルツハイマー病（ＡＤ）の脳内の神経原線維病変の構築ブロックであるペアードヘリカルフィラメント（ＰＨＦ）の主要成分である。タウは、ＧＳＫ３β、ｃｄｋ５、ＭＡＲＫ、及びＭＡＰキナーゼファミリーメンバーをはじめとするいくつかの異なるキナーゼによってそのセリン残基又はトレオニン残基においてリン酸化され得る。
タウオパチーはタウの異常な過剰リン酸化によって特徴付けられ、そしてIqbal, K., et al.（Biochim. Biophys. Acta 1739（2005）198-210）によると：
・神経原線維型の疾患をはじめとする、アルツハイマー病
・ダウン症候群、成人の症例
・グアムパーキンソニズム痴呆複合
・ボクサー認知症
・ピック病
・嗜銀顆粒性認知症
・前頭側頭型認知症
・大脳皮質基底核変性症
・淡蒼球橋黒質変性症
・進行性核上性麻痺
・神経原線維変化を伴うゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病
である。
これまでほぼ４０個のセリン（Ｓ）／トレオニン（Ｔ）リン酸化部位が、アルツハイマー病の脳に由来するタウ中に発見された（Hanger, D.P., et al., J. Biol. Chem. 282 (2007) 23645-23654）。アルツハイマー病におけるタウの病態の発生はそのリン酸化状態に関連している。しかしながら、４０個のリン酸化部位の大半は、疾患の病態には関連していない。なぜなら、それらは、健康な胎児の脳組織から抽出されたタウにも見られるからである。ほんの少数のリン酸化が疾患状態に対して特有であり、そしてアルツハイマーの脳のＰＨＦにおけるタウを規定する異常な凝集及び特徴的な不溶性におそらく関与している（Morishima-Kawashima, M., et al., J. Biol. Chem. 270 (1995) 823-829）。Pei, J.J., et al.（J. Alzheimer’s Disease 14 (2008) 385-392）によると、既存の文献は、これらの中のどの部位が、アルツハイマー病の脳に対して特異的であるかに関する少数かつ不明瞭な情報しか提供していない。Peiは、タウに対するリン酸化特異的抗体のリストを使用し、そして２２人のアルツハイマー病患者及び１０人の対照に由来する内側側頭葉のホモジネート中のそれらのレベルを測定した。
Bussiere, T., et al.（Acta Neuropathol. 97 (1999) 221-230）は、タウタンパク質上のリン酸化セリン４２２（ｐＳ４２２）が、神経原線維変性を伴ういくつかの疾患において認められる病的エピトープであることを記載した。Augustinack, J.C., et al.,（Acta Neuropathol. 103 (2002) 26-35）は、ｐＳ４２２がアルツハイマー病の神経病態の重症度に相関すると記載した。Guillozet-Bongaarts, A.,（J. Neurochem. 97 (2006) 1005-1014）は、セリン４２２におけるタウのリン酸化が、ＰＨＦの成熟過程の一部であると記載した。タウｐＳ４２２はまた、様々なアルツハイマー病のトランスジェニックマウスモデルにおける病態の発生と共に認められる。したがって、Deters, N., et al.は、Biochem. Biophys. Res. Commun. 379 (2009) 400-405において、二重トランスジェニックＤｏｍ５／ｐＲ５マウスは、病的なＳ４２２エピトープが特異的にリン酸化されたタウを含有している海馬ニューロン数の７倍の増加を示したことを述べた。Goetz, J., et al.,（Science 293 (2001) 1491-1495）は、Ａβ４２原線維の注射されたタウＰ３０１Ｌトランスジェニックマウスの脳内に、Ｓ４２２においてリン酸化されたタウの出現を報告した。
欧州特許第２００９１０４号は、アルツハイマー病のＰＨＦに由来するタウタンパク質中にリン酸化状態で存在するタウタンパク質のエピトープ、及び、アルツハイマータウタンパク質を特異的に検出する抗体の作製のための該エピトープの使用に関する。国際公開公報第２００２／０６２８５１号及び米国特許第７，４４６，１８０号は、異常に切断短縮された形態のタウタンパク質に対して特異性を有する抗体、並びに、アルツハイマー病及び関連したタウオパチーに関する診断態様及び治療態様に関する。
国際公開公報第１９９８／２２１２０号は、約２０７から約２２２のアミノ酸、約２２４から約２４０のアミノ酸、及び約３９０から約４０８のアミノ酸のリン酸化タウ断片に対する抗体を患者に投与する工程を含む、アルツハイマー病患者を処置する方法に関する。リン酸化タウ断片３７９〜４０８［Ｐ−Ｓｅｒ３９６、４０４］を使用してタウトランスジェニックマウスにワクチン接種する動物試験が、Asuni, A.A., et al., J. Neuroscience 27 (2007) 9115-9129に記載されている。米国特許第２００８／００５０３８３号は、タウタンパク質断片を投与することによって被験者におけるアルツハイマー病又は他のタウオパチーを治療及び予防する方法に関する。
Hasegawa, M., et al.（FEBS Lett. 384 (1996) 25-30）は、微小管結合タンパク質タウ中のリン酸化セリン４２２に対して特異的なモノクローナル抗体（ＡＰ４２２）を報告する。
国際公開公報第２００１／５５７２５号において、タウオパチーのインビボでの診断法に使用するための、及び／又は、タウオパチーと非タウオパチーのインビボでの鑑別診断法に使用するための、タウを特異的に認識する抗体及びリン酸化タウ（１８１）を特異的に認識する抗体が報告されている。
国際公開公報第２００２／０２７０１７号において、リン酸化セリンを有するポリペプチド免疫原から調製された抗体が報告されている。国際公開公報第２００２／０６２８５１号は、異常に切断短縮された形態のタウタンパク質に対して特異性を有する抗体、並びに、アルツハイマー病及び関連したタウオパチーに関する診断態様及び治療態様に関する。
国際公開公報第２００４／０１６６５５号において、中枢神経系（ＣＮＳ）のタウタンパク質に対して特異的である抗体（ここで、該抗体は、ＣＮＳのタウタンパク質を特異的に認識するが、末梢タウタンパク質は認識せず、該抗体は、エピトープとしての、タウタンパク質をコードしている遺伝子のエキソン４によってコードされるアミノ酸配列と、そのエキソン５によってコードされるアミノ酸配列との間の接続部分のアミノ酸配列を特異的に認識する）が報告されている。
タウｐＳ４２２に対するモノクローナル抗体が、例えば、欧州特許第１８７６１８５号に記載されている。タウｐＳ４２２に対するポリクローナル抗体は市販されている（例えば、プロサイ社及びバイオソースインターナショナル社）。
国際公開公報第２００６／０５５１７８号において、タウタンパク質を含有している試料を、アミロイドβタンパク質由来の拡散性リガンドに結合する抗体又は抗原結合断片と接触させ、これにより、Ｓｅｒ２０２／Ｔｈｒ２０５におけるタウタンパク質のリン酸化を阻害する工程を含む、Ｓｅｒ２０２／Ｔｈｒ２０５におけるタウタンパク質のリン酸化を阻害する方法が報告されている。
ｔｙｒ３９４及び／又はｔｙｒ３１０においてリン酸化されたタウに特異的に結合する抗体調製物が、国際公開公報第２００７／０１９２７３号に報告されている。リン酸化タウ断片３７９〜４０８［Ｐ−Ｓｅｒ３９６、４０４］を使用してタウトランスジェニックマウスにワクチン接種する動物試験が、Asuni, A.A. et al., J. Neuroscience 27 (2007) 9115-9129に記載されている。
欧州特許第２００９１０４号は、アルツハイマー病のＰＨＦに由来するタウタンパク質中にリン酸化状態で存在するタウタンパク質のエピトープ、及び、アルツハイマータウタンパク質を特異的に検出する抗体の作製のための該エピトープの使用に関する。
米国特許第２００８／００５０３８３号は、タウタンパク質断片を投与することによって被験者におけるアルツハイマー病又は他のタウオパチーを治療及び予防する方法に関する。
国際公開公報第２０１０／０３７１３５号において、血液脳関門（ＢＢＢ）受容体に対するリガンド又は等価物を含む又はからなる第一のドメインと、タンパク質凝集物の凝集速度を減速させるか、タンパク質凝集物の形成を阻害するか、又はタンパク質凝集物を元に戻すか、消化するか、若しくは溶解する酵素又は組成物を含む又はからなる第二のドメインとを含む、単離されているか、合成の、又は組換えのポリペプチド又はペプチドが報告されている。インビトロ及び／又はインビボでタウタンパク質を認識し結合することのできる抗体、特にモノクローナル抗体又はその機能的部分が国際公開公報第２０１０／１１５８４３号に報告されている。
国際公開公報第２０１１／０２６０３１号において、タウオパチー、例えばアルツハイマー病、進行性核上麻痺、及び大脳皮質基底核変性症の処置に有用な、タウオリゴマーに特異的に結合しかつ可溶性タウ又はタウ原線維には結合しないモノクローナル抗体又はその断片が報告されている。Ｓｅｒ（２３８）及びＴｈｒ（２４５）の１つ以上においてリン酸化されたヒトタウタンパク質に特異的に結合する単離された抗体が、国際公開公報第２０１１／０５３５６５号に報告されている。
国際公開公報第２０１２／０４５８８２号において、タウオパチーなどの神経変性障害を処置するのに、及び認知障害を処置又は軽減するのに有用である、哺乳動物タウタンパク質上のリン酸化エピトープに特異的に結合する抗体が報告されている。ヒトモノクローナル抗タウ抗体又はそのタウ結合断片が、国際公開公報第２０１２／０４９５７０号に報告されている。アルツハイマー病又は他のタウオパチーのための治療を必要とするヒトに抗体を投与する工程を含む、被験者におけるアルツハイマー病又は他のタウオパチーを予防又は治療する方法（該抗体は、異常な形態のタウタンパク質に対する特異性を有し、該抗体は、正常なタウタンパク質に対する結合及び／又は反応性を全く示さず、アルツハイマー病又は他のタウオパチーを予防又は治療するのに有効な条件下及び量で投与される）が、国際公開公報第２０１２／１０６３６３号に報告されている。
国際公開公報第２０１２／１４９３６５号において、凝集したタウに対して反応性を示すが、凝集していないタウに対しては実質的に全く反応性を示さない抗体（ここで、凝集したタウは、１つ以上のシステイン残基において直接的に又はリンカーを通して互いに架橋された少なくとも２つのタウタンパク質を含む）が報告されている。
タウに結合する抗体、特異的にリン酸化されたタウ及びその断片に特異的に結合する、特定の位置においてセリンのリン酸化により修飾された化合物、及び担体を含む、タウオパチー、例えばアルツハイマー病の処置に有用な組成物が、国際公開公報第２０１０／１４２４２３号に報告されている。
欧州特許第１８７６１８５Ａにおいて、リン酸化ポリペプチドを認識する抗体が報告されている。国際公開公報第２０１３／１５１７６２号において、ヒト化タウ抗体が報告されている。国際公開公報第２０１４／０１６７３７号において、ヒトリン酸化タウに対する新規なニワトリモノクローナル抗体及びその使用が報告されている。国際公開公報第２０１４／０１６７３７号において、ヒトリン酸化タウに対する新規なニワトリモノクローナル抗体及びその使用が報告されている。病的なタウ二量体及び前原線維の病的なタウオリゴマーに対して選択的な抗体、並びにタウオパチーの治療、診断及びモニタリングにおけるそれらの使用が、国際公開公報第２０１２／１４９３６５号に報告されている。
国際公開公報第２０１５／０９１６５６号において、ヒト化抗タウ（ｐＳ４２２）抗体及び使用法が報告されている。国際公開公報第２０１５／１０１５８６号において、二重特異的抗ハプテン抗体／抗血液脳関門受容体抗体、その複合体、及び血液脳関門シャトルとしてのそれらの使用が報告されている。
発明の簡潔な要約
本発明は、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体、特にヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体、及びその使用法を提供する。
本明細書において報告されているようなヒト化抗体は、標準的なヒト化法によっては入手できなかった。配列番号０７及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する可変ドメインを含む親ウサギ抗体と同等な結合特徴及び薬物動態特性を有するヒト化抗体を得るために、アミノ酸配列内に標準的ではない突然変異を導入することが必要とされた。これは、本明細書において報告されているような抗体がヒト血液脳関門を通過し、かつヒト脳内において効果的であることを目的としているので、特に重要である。したがって、ヒト化抗体の選択のために一般的に適用されている基準は、本症例に直接適用するには十分に厳密ではない。
本明細書において報告されているような１つの態様は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する（ヒト化）抗体であり、該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに特異的に結合する。
本明細書において報告されているような抗体は、４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウに関する、リン酸化されていない野生型ヒトタウ及びタウ突然変異体Ｓ４２２Ａに関する選択性を示す。リン酸化されていない野生型ヒトタウ及びタウ突然変異体Ｓ４２２Ａには、それぞれ、全く結合しないか又はより低い親和性で結合する。
本明細書において報告されているような１つの態様は、Ｍａｂ０８６のＨＶＲをヒトフレームワーク領域及び定常領域に移植することによって作製された抗体Ｍａｂ０８６のヒト化変異体である、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）モノクローナル抗体であり、選択されたヒト可変領域フレームワーク残基は、場合により以下のように置換されている：
アミノ酸が、（１）共有結合的に抗原と直接結合している場合、（２）ＨＶＲ領域に隣接している場合、（３）さもなくばＨＶＲ領域と相互作用している場合、又は（４）ＶＬ−ＶＨ界面に関与している場合に、選択されたヒト可変領域フレームワーク残基は、ウサギＭａｂ０８６抗体に由来する等価なフレームワークアミノ酸によって置換されている；
又は
その位置においてヒト免疫グロブリンにとって普通ではないヒトフレームワークアミノ酸は、ウサギドナー抗体の等価な位置に由来するか又はより典型的なヒト免疫グロブリンの等価な位置に由来するアミノ酸を用いて置換されている。
本明細書において報告されているような１つの態様は、配列番号０２のアミノ酸配列を含むヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する（ヒト化）抗体であり、該抗体は、タウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性に対して阻害活性を有し、そして該抗体は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）タンパク質の断片に結合し、該断片は、配列番号０２のアミノ酸残基４１６から４３０を含み、該抗体はヒト定常領域を含み、該抗体は以下の（１）から（２）のいずれかから選択される；
（１）（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１として配列番号０８のアミノ酸配列、ＨＶＲ−Ｈ２として配列番号０９のアミノ酸配列、及びＨＶＲ−Ｈ３として配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖と、ＨＶＲ−Ｌ１として配列番号７０のアミノ酸配列、ＨＶＲ−Ｌ２として配列番号７２のアミノ酸配列、及びＨＶＲ−Ｌ３として配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、抗体；
又は
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ１として配列番号０８のアミノ酸配列、ＨＶＲ−Ｈ２として配列番号０９のアミノ酸配列、及びＨＶＲ−Ｈ３として配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖と、ＨＶＲ−Ｌ１として配列番号１２のアミノ酸配列、ＨＶＲ−Ｌ２として配列番号１４のアミノ酸配列、及びＨＶＲ−Ｌ３として配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、抗体；
又は
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ１として配列番号０８のアミノ酸配列、ＨＶＲ−Ｈ２として配列番号０９のアミノ酸配列、及びＨＶＲ−Ｈ３として配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖と、ＨＶＲ−Ｌ１として配列番号７１のアミノ酸配列、ＨＶＲ−Ｌ２として配列番号７３のアミノ酸配列、及びＨＶＲ−Ｌ３として配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、抗体；
又は
（ｄ）ＨＶＲ−Ｈ１として配列番号０８のアミノ酸配列、ＨＶＲ−Ｈ２として配列番号７７のアミノ酸配列、及びＨＶＲ−Ｈ３として配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖と、ＨＶＲ−Ｌ１として配列番号１２のアミノ酸配列、ＨＶＲ−Ｌ２として配列番号１４のアミノ酸配列、及びＨＶＲ−Ｌ３として配列番号７５のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、抗体；
（２）（１）の抗体と等価な活性を有する、（１）の抗体に１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する抗体。
本明細書において報告されているような１つの態様は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するヒト化抗体であり、該抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、１８、及び１０のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、又は
ｃ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、７７、及び１０のＨＶＲを含む。
１つの好ましい実施態様では、本明細書において報告されているようなヒト化抗体は、３２位の軽鎖可変ドメインに、リジン（Ｋ）アミノ酸残基（Ｋａｂａｔによる番号付け）を有する。
１つの実施態様では、ヒト化抗体は、
ａ）軽鎖可変ドメインに、配列番号７１、７３、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号７０、７２、及び１５のＨＶＲ、又は
ｃ）軽鎖可変ドメインに、配列番号１２、１４、及び７９のＨＶＲ、又は
ｄ）軽鎖可変ドメインに、配列番号７１、８１、及び１５のＨＶＲを含む。
１つの実施態様では、本明細書において報告されているようなヒト化抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、１８、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１２、０５、及び１５のＨＶＲ、又は
ｃ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１３、１４、及び１５のＨＶＲ、又は
ｄ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号７１、７３、及び１５のＨＶＲ、又は
ｅ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号７０、７２、及び１５のＨＶＲ、又は
ｆ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、７７、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１２、１４、及び７９のＨＶＲ、又は
ｇ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号１２、１４、及び７９のＨＶＲ、又は
ｈ）重鎖可変ドメインに、配列番号０８、７７、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号７１、８１、及び１５のＨＶＲを含む。
１つの好ましい態様は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するヒト化抗体であり、該抗体は、ＶＨ３５Ｈ５及びＶＬ３１Ａ１に由来するＨＶＲを含む。
１つの実施態様では、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するこのヒト化抗体は、重鎖可変ドメインに、配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに、配列番号７０、７２、及び１５のＨＶＲを含む。配列番号７０はＨＶＲ−Ｌ１の配列に相当し、そしてＫａｂａｔにより３２位にアミノ酸残基リジンを有する。
１つの実施態様では、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するこのヒト化抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。
１つの好ましい態様は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するヒト化抗体であり、該抗体は、ＶＨ３５Ｈ５及びＶＬ４９Ｇ１に由来するＨＶＲを含む。
１つの好ましい実施態様では、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するこのヒト化抗体は、重鎖可変ドメインに配列番号０８、０９及び１０のＨＶＲ、並びに軽鎖可変ドメインに配列番号７１、７３及び１５のＨＶＲを含む。配列番号７１はＨＶＲ−Ｌ１の配列に相当し、そしてＫａｂａｔによる３２位にアミノ酸残基リジンを有する。
１つの実施態様では、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するこのヒト化抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。
１つの好ましい態様は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するヒト化抗体であり、該抗体は、ＶＨ３５Ｈ５及びＶＬ３５Ｆ２に由来するＨＶＲを含む。
１つの実施態様では、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するこのヒト化抗体は、重鎖可変ドメインに配列番号０８、０９及び１０のＨＶＲ、並びに軽鎖可変ドメインに配列番号１２、１４及び７４のＨＶＲを含む。配列番号１２はＨＶＲ−Ｌ１の配列に相当し、そしてＫａｂａｔによる３２位にアミノ酸残基リジンを有する。
１つの実施態様では、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するこのヒト化抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。
１つの好ましい態様は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するヒト化抗体であり、該抗体は、ＶＨ７６Ａ６及びＶＬ３５Ｇ４に由来するＨＶＲを含む。
１つの実施態様では、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するこのヒト化抗体は、重鎖可変ドメインに配列番号０８、７７及び１０のＨＶＲ、並びに軽鎖可変ドメインに配列番号１２、１４及び７５のＨＶＲを含む。配列番号１２はＨＶＲ−Ｌ１の配列に相当し、そしてＫａｂａｔによる３２位にアミノ酸残基リジンを有する。
１つの実施態様では、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するこのヒト化抗体は、配列番号７６のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号６９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含む。
１つの実施態様では、本明細書において報告されているようなヒト化抗体は、
ａ）配列番号２０の重鎖可変ドメインと、配列番号１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｂ）配列番号１９の重鎖可変ドメインと、配列番号１６の軽鎖可変ドメイン、又は
ｃ）配列番号１９の重鎖可変ドメインと、配列番号１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｄ）配列番号２１の重鎖可変ドメインと、配列番号１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｅ）配列番号６５の重鎖可変ドメインと、配列番号６７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｆ）配列番号６５の重鎖可変ドメインと、配列番号６６の軽鎖可変ドメイン、又は
ｇ）配列番号７６の重鎖可変ドメインと、配列番号７８の軽鎖可変ドメイン、又は
ｈ）配列番号１９の重鎖可変ドメインと、配列番号７８の軽鎖可変ドメイン、又は
ｉ）配列番号７６の重鎖可変ドメインと、配列番号８０の軽鎖可変ドメインを含む。
１つの好ましい実施態様では、ヒト化抗体は、配列番号６５の重鎖可変ドメインと、配列番号６６又は６７又は６８の軽鎖可変ドメインを含む。
１つの好ましい実施態様では、ヒト化抗体は、配列番号７６の重鎖可変ドメインと、配列番号６９の軽鎖可変ドメインを含む。
１つの実施態様では、ヒト化抗体は、配列番号７６又は１９の重鎖可変ドメインと、配列番号７８の軽鎖可変ドメインを含む。
１つの実施態様では、前記抗体は、アルツハイマー病の処置に使用するためのものである。
１つの実施態様では、前記抗体はエフェクター機能がサイレントである。１つの実施態様では、該抗体は、エフェクター機能を全く有さない。１つの実施態様では、該抗体はヒトＩｇＧ１サブクラスであり、そしてＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇの突然変異を両方の重鎖に有する（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）。
１つの実施態様では、前記抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長のヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合する。
１つの実施態様では、前記抗体は、
ａ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下、及び／又は
ｂ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下、及び／又は
ｃ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下、及び／又は
ｄ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
１つの実施態様では、前記抗体は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）（配列番号０２）に特異的に結合し、そしてヒトタウ（配列番号０１）には結合しない。
１つの実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
１つの実施態様では、前記抗体は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に結合する抗体断片であり、そして
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する。
１つの実施態様では、前記抗体は、
ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、又は
ｃ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｄ）Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｅ）両方の重鎖にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇの突然変異、並びに、一方の重鎖にＴ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃの突然変異、及びそれぞれの他方の重鎖にＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｆ）両方の重鎖にＳ２２８Ｐ及びＰ３２９Ｇの突然変異、並びに、一方の重鎖にＴ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃの突然変異、及びそれぞれの他方の重鎖にＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体
である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号１８及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１３、配列番号１４及び配列番号１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号０９及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１２、配列番号０５及び配列番号１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号０９及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１３、配列番号１４及び配列番号１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの好ましい態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号０９及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号７１、配列番号７３及び配列番号１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの好ましい態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号０９及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号７０、配列番号７２及び配列番号１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号０９及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１２、配列番号１４及び配列番号７９のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの好ましい態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号０９及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１２、配列番号１４及び配列番号７４のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの好ましい態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号７７及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１２、配列番号１４及び配列番号７５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号２０のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１６のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号２１のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの好ましい態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６５のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの好ましい態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６５のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６６のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの好ましい態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６５のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６８のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号７８のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの好ましい態様は、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であり、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号７６のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基又はグリシン−リジンジペプチドは存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する
ことを特徴とする。
全ての態様の１つの好ましい実施態様では、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、該抗体が軽鎖可変ドメインの３２位にリジン（Ｋ）アミノ酸残基を有することを特徴とする（番号付けはＫａｂａｔによる）。
全ての態様の１つの好ましい実施態様では、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、該抗体が重鎖可変ドメイン内の４位、２４位、及び７８位にバリン残基を有することを特徴とする。
全ての態様の１つの好ましい実施態様では、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、該抗体が重鎖可変ドメインの７１位にアルギニン残基を有することを特徴とする。
本明細書において報告されているような１つの態様は、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体をコードしている単離された核酸である。この核酸は、抗体の重鎖をコードしている１つの核酸と、抗体の軽鎖をコードしている１つの核酸とを含む。この核酸は、少なくとも１つの発現カセットを含む。好ましくは該核酸は、２つの発現カセットを含む。
本明細書において報告されているような１つの態様は、本明細書において報告されているような核酸を含む宿主細胞である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、本明細書において報告されているような宿主細胞を培養し、よって抗体が産生される工程を含む、（ヒト化）抗体の産生法である。
１つの実施態様では、前記方法はさらに、細胞又は培養培地から抗体を回収する工程を含む。
本明細書において報告されているような１つの態様は、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体と薬学的に許容される担体とを含む、医薬製剤である。
１つの実施態様では、医薬製剤はさらに、追加の治療剤を含む。
１つの実施態様では、追加の治療剤は、抗アミロイド治療剤である。１つの実施態様では、抗アミロイド治療剤は、抗ヒトα−シヌクレイン抗体又は抗Ａβ抗体である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、医薬品としての使用のための本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、アルツハイマー病の処置に使用するための本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、前駆期アルツハイマー病の処置に使用するための本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、軽度アルツハイマー病の処置に使用するための本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、タウ（ｐＳ４２２）により誘発される神経変性症を低減するのに使用するための本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、認知及び機能の維持に使用するための本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、認知及び機能の低下速度を減速させるために使用するための本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、神経原線維変化蓄積速度を減速させるために使用するための本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体である。
以前の態様の１つの実施態様では、使用は、タウ（ｐＳ４２２）を排除することによって神経原線維変化の負荷を低減させることによる。
以前の態様の１つの実施態様では、使用は、神経原線維変化の構築を予防することによる。
以前の態様の１つの実施態様では、使用は、神経原線維変化を除去／排除することによる。
１つの実施態様では、予防及び／又は除去は、細胞内におけるタウ凝集物の排除の促進による。
以前の態様の１つの実施態様では、使用は、神経原線維変化の拡大を阻害することによる。１つの実施態様では、阻害は、病的なタウ型／シードの神経間移動を予防することによる。
本発明の態様はまた、アルツハイマー病を処置するために、前駆期アルツハイマー病を処置するために、軽度アルツハイマー病を処置するために、タウ（ｐＳ４２２）により誘発される神経変性症を低減するために、認知及び機能を維持するために、認知及び機能の低下速度を減速させるために、及び／又は神経原線維変化の蓄積速度を減速するために、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体を投与する工程を含む、処置法である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、医薬品の製造における本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体の使用である。
１つの実施態様では、医薬品はアルツハイマー病を処置するためのものである。
１つの実施態様では、医薬品は前駆期アルツハイマー病を処置するためのものである。
１つの実施態様では、医薬品は軽度アルツハイマー病を処置するためのものである。
１つの実施態様では、医薬品はタウ（ｐＳ４２２）により誘発される神経変性症を低減させるためのものである。
１つの実施態様では、医薬品は認知及び機能を維持するためのものである。
１つの実施態様では、医薬品は認知及び機能の低下速度を減速させるためのものである。
本明細書において報告されているような１つの態様は、本明細書において報告されているような有効量の（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、アルツハイマー病を有する個体を処置する方法である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、タウ（ｐＳ４２２）により誘発される神経変性症を低減させるために、本明細書において報告されているような有効量の（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、個体におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発された神経変性症を低減させる方法である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、認知及び機能を維持するために、本明細書において報告されているような有効量の（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、個体における認知及び機能を維持する方法である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、認知及び機能の低下速度を減速させるために、本明細書において報告されているような有効量の（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、個体における認知及び機能の低下速度を減速させる方法である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、タウ（ｐＳ４２２）により誘発された神経変性症の低減のための、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の使用である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、認知及び機能の維持のための、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の使用である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、認知及び機能の低下速度を減速させるための、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の使用である。
本明細書において報告されているような抗体は、アルツハイマー病の処置に使用することができる。
本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体を用いてアルツハイマー病及び神経病態の進行の阻害／低減を奏功することができる。
本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体を使用して、アルツハイマー病の発症から動物を保護することができるか、又はさらにはこれを使用して、動物におけるアルツハイマー病の進行を停止させることができる。１つの実施態様では、動物はヒトである。
１つの実施態様では、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体は、タウ（ｐＳ４２２）トランスジェニックマウス及びアルツハイマー病患者の脳切片上のタウ（ｐＳ４２２）に結合し；並びに／又は、タウ（ｐＳ４２２）トランスジェニック細胞中のタウ（ｐＳ４２２）を標識する。
本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体は、アルツハイマー病の処置に使用することができる。
本明細書において報告されているような１つの態様は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）内の配列番号０３のアミノ酸配列に特異的に結合する（ヒト化）抗体である。
本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体は、初期及び後期段階の疾患関連型のヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合／認識する。
本明細書において報告されているような１つの態様は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に関連したアルツハイマー病の伝播の予防のための、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体の使用である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、リソソーム膜の崩壊を低減させるための、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体の使用である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）により誘発される不安定化及び／又は崩壊に対してリソソーム膜を安定化させるための、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体の使用である。
本明細書において報告されているような１つの態様は、アルツハイマー病の進行の予防のための本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体の使用である。
本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体は、抗体により媒介される、細胞間のヒトタウ（ｐＳ４２２）の播種及び伝播の阻害によって機能する。
本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に結合することによって原線維の損傷からリソソームを保護する。
カニクイザルにおける薬物動態試験の結果；黒い菱形：ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１；白抜き四角：ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３５Ｆ２；黒い四角：ＶＨ７６Ａ６／ＶＬ３５Ｇ４；黒い三角：ＶＨ３２／ＶＬ２２；黒い丸：ＶＨ００／ＶＬ００；Ｘ軸：投与後の時間［ｈ］；ｙ軸：用量の正規化された血清中濃度［（μg/mL）／（mg/kg）］。 図１の０〜２００時間までの時間範囲の拡大図。 （Ａ）リン酸化タウペプチド、（Ｂ）リン酸化完全長ヒトタウ、（Ｃ）リン酸化されていないタウペプチド、（Ｄ）リン酸化されていない完全長ヒトタウに対するヒト化ＶＨとＶＬの様々な組合せの生化学的結合；（１）＝ＶＨ００／ＶＬ００、（２）＝ＶＨ３２／ＶＬ２１、（３）＝ＶＨ２０／ＶＬ２２、（４）＝ＶＨ３２／ＶＬ２２、（５）＝ＶＨ３３／ＶＬ２２；コーティング濃度：リン酸化タウペプチド：５０ng/ml、全ての他の標的：１μg/ml；（リン酸化タウペプチドが１μg/mlでコーティングされるならば、同等な結果が得られる（データは示されていない））。 （Ａ）＝完全長ヒトタウＳ４２２Ａ突然変異体、（Ｂ）＝凝集したヒトタウ（ｐＳ４２２）に対するヒト化ＶＨとＶＬの様々な組合せの生化学的結合；（１）＝ＶＨ００／ＶＬ００、（２）＝ＶＨ３２／ＶＬ２１、（３）ＶＨ２０／ＶＬ２２、（４）＝ＶＨ３２／ＶＬ２２、（５）＝ＶＨ３３／ＶＬ２２；コーティング濃度：リン酸化タウペプチド：５０ng/ml、全ての他の標的：１μg/ml；（リン酸化タウペプチドが１μg/mlでコーティングされるならば、同等な結果が得られる（データは示されていない））。 選択されたヒト化ＶＨ／ＶＬの組合せの選択性を示したウェスタンブロット；（１）＝ＶＨ００／ＶＬ００、（２）＝ＶＨ３２／ＶＬ２１、（３）＝ＶＨ２０／ＶＬ２２、（４）＝ＶＨ３２／ＶＬ２２、（５）＝ＶＨ３３／ＶＬ２２。 アルツハイマー病患者の脳抽出物中の過剰リン酸化タウへの結合；（１）＝ＶＨ００／ＶＬ００、（２）＝ＶＨ３２／ＶＬ２１、（３）＝ＶＨ３２／ＶＬ２２。 マウス脳抽出物中のタウ（ｐＳ４２２）レベルの定量；最大値−最小値、中央値、及び平均値（＋）；有意性は、スチューデントｔ検定を使用して計算された、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。Ａ：ｘ軸：タウ（ｐＳ４２２）［ng/mg 脳］；ｙ軸：１：基線、２：ビヒクル、３：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠１．７mg/kg、４：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠５mg/kg、５：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠１５mg/kg。Ｂ：ｘ軸：タウ（ｐＳ４２２）［ng/mg 脳］；ｙ軸：１：基線、２：ビヒクル、３：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ４９Ｇ１）＠１．７mg/kg、４：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ４９Ｇ１）＠５mg/kg、５：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ４９Ｇ１）＠１５mg/kg。 マウス脳抽出物中の総タウの定量；最大値−最小値、中央値、及び平均値（＋）。Ａ：ｘ軸：総タウ［ng/mg 脳］；ｙ軸：１：基線、２：ビヒクル、３：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ４９Ｇ１）＠１．７mg/kg、４：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ４９Ｇ１）＠５mg/kg、５：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ４９Ｇ１）＠１５mg/kg。Ｂ：ｘ軸：総タウ［ng/mg 脳］；ｙ軸：１：基線、２：ビヒクル、３：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠１．７mg/kg、４：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠５mg/kg、５：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠１５mg/kg。 抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）により処置されたタウＰＳ２ＡＰＰマウスにおけるタウ（ｐＳ４２２）病態の定量ＩＨＣ分析；最大値−最小値、中央値、及び平均値（＋）、有意性は、スチューデントｔ検定を使用して計算された、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。Ａ：皮質：ｘ軸：タウ（ｐＳ４２２）面積占有率［％］；ｙ軸：１：基線、２：ビヒクル、３：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠１．７mg/kg、４：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠５mg/kg、５：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠１５mg/kg。Ｂ：海馬；ｘ軸：面積占有率［％］；ｙ軸：１：基線、２：ビヒクル、３：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠１．７mg/kg、４：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠５mg/kg、５：抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）＠１５mg/kg。
配列の簡潔な説明
配列番号０１ ヒトタウタンパク質アイソフォームＦ（４４１残基）
配列番号０２ ４２２位のセリン残基においてリン酸化されたヒトタウタンパク質アイソフォームＦ（４４１残基）
配列番号０３ ７位（配列番号０１の４２２位に相当する）にリン酸化セリンを有するヒトタウタンパク質断片（配列番号０１の残基４１６から４３０）：Ser-Ile-Asp-Met-Val-Asp-Ser(PO3H2)-Pro-Gln-Leu-Ala-Thr-Leu-Ala-Asp
配列番号０４ ウサギ抗体０８６ ＣＤＲＬ１−QSSQSVRTNKLA
配列番号０５ ウサギ抗体０８６ ＣＤＲＬ２−SASTLDF
配列番号０６ ウサギ抗体０８６ ＣＤＲＬ３−LGYFDCSIADCVA
配列番号０７ ウサギ抗体０８６ ＶＬ００
配列番号０８ ウサギ抗体０８６ ＣＤＲＨ１−SNAIN
配列番号０９ ウサギ抗体０８６ ＣＤＲＨ２−YIAVSGNTYYASWAKG
配列番号１０ ウサギ抗体０８６ ＣＤＲＨ３−SNI
配列番号１１ ウサギ抗体０８６ ＶＨ００
配列番号１２ ヒト化ＣＤＲＬ１変異体１−RSSQSVRTNKLA
配列番号１３ ヒト化ＣＤＲＬ１変異体２−RSSQSVRTNRLA
配列番号１４ ヒト化ＣＤＲＬ２変異体１−SASTLDY
配列番号１５ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体１−LGYFDSSADIVA
配列番号１６ ヒト化ＶＬ変異体１−ＶＬ２１
配列番号１７ ヒト化ＶＬ変異体２−ＶＬ２２
配列番号１８ ヒト化ＣＤＲＨ２−YIAVSGNTYYADSVKG
配列番号１９ ヒト化ＶＨ変異体１−ＶＨ３２
配列番号２０ ヒト化ＶＨ変異体２−ＶＨ２０
配列番号２１ ヒト化ＶＨ変異体３−ＶＨ３３
配列番号２２ ヒト化ＣＤＲＬ２変異体２−SASTLQS
配列番号２３ ヒト化ＣＤＲＬ２変異体３−SASTLES
配列番号２４ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体２−LGYFDSSIADSVA
配列番号２５ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体３−LGYFDSSIADRVA
配列番号２６ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体４−LGYFDPSIADPVA
配列番号２７ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体５−LGYFDSSIADIVA
配列番号２８ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体６−LGYFDPSADPIA
配列番号２９ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体７−LGYFDPSADPVA
配列番号３０ ヒト化ＣＤＲＬ１変異体３−RASQGVRTNKLA
配列番号３１ ヒト化ＣＤＲＬ１変異体４−RASQSVRTNKLA
配列番号３２ ヒト化ＶＬ変異体４−ＶＬ０１
配列番号３３ ヒト化ＶＬ変異体５−ＶＬ０９
配列番号３４ ヒト化ＶＬ変異体６−ＶＬ１２
配列番号３５ ヒト化ＶＬ変異体７−ＶＬ１５
配列番号３６ ヒト化ＶＬ変異体８−ＶＬ１６
配列番号３７ ヒト化ＶＬ変異体９−ＶＬ１７
配列番号３８ ヒト化ＶＬ変異体１０−ＶＬ１９
配列番号３９ ヒト化ＶＬ変異体１１−ＶＬ２８
配列番号４０ ヒト化ＶＬ変異体１２−ＶＬ３３
配列番号４１ ヒト化ＶＬ変異体１３−ＶＬ３５
配列番号４２ ヒト化ＶＬ変異体１４−ＶＬ３９
配列番号４３ ヒト化ＶＬ変異体１５−ＶＬ４０
配列番号４４ ヒト化ＶＬ変異体１６−ＶＬ４１
配列番号４５ ヒト化ＶＬ変異体１７−ＶＬ４２
配列番号４６ ヒト化ＶＨ変異体４−ＶＨ０１
配列番号４７ ヒト化ＶＨ変異体５−ＶＨ０２
配列番号４８ ヒト化ＶＨ変異体６−ＶＨ０３
配列番号４９ ヒト化ＶＨ変異体７−ＶＨ０４
配列番号５０ ヒト化ＶＨ変異体８−ＶＨ１４
配列番号５１ ヒト化ＶＨ変異体９−ＶＨ１５
配列番号５２ ヒト化ＶＨ変異体１０−ＶＨ１８
配列番号５３ ヒト化ＶＨ変異体１１−ＶＨ１９
配列番号５４ ヒト化ＶＨ変異体１２−ＶＨ２２
配列番号５５ ヒト化ＶＨ変異体１３−ＶＨ２３
配列番号５６ ヒト化ＶＨ変異体１４−ＶＨ２４
配列番号５７ ヒト化ＶＨ変異体１５−ＶＨ３１
配列番号６５ ヒト化ＶＨ変異体１６−ＶＨ３５Ｈ５
配列番号６６ ヒト化ＶＬ変異体１８−ＶＬ３１Ａ１
配列番号６７ ヒト化ＶＬ変異体１９−ＶＬ４９Ｇ１
配列番号６８ ヒト化ＶＬ変異体２０−ＶＬ３５Ｆ２
配列番号６９ ヒト化ＶＬ変異体２１−ＶＬ５３Ａ２
配列番号７０ ヒト化ＣＤＲＬ１変異体５
配列番号７１ ヒト化ＣＤＲＬ１変異体６
配列番号７２ ヒト化ＣＤＲＬ２変異体４
配列番号７３ ヒト化ＣＤＲＬ２変異体５
配列番号７４ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体８
配列番号７５ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体９
配列番号７６ ヒト化ＶＨ変異体１７−ＶＨ７６Ａ６
配列番号７７ ヒト化ＣＤＲＨ１変異体１
配列番号７８ ヒト化ＶＬ変異体２２−ＶＬ３５Ｇ４
配列番号７９ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体１０
配列番号８０ ヒト化ＶＬ変異体２３−ＶＬ１４５Ｂ１２
配列番号８１ ヒト化ＣＤＲＬ２変異体６
配列番号８２ 抗トランスフェリン受容体抗体重鎖１
配列番号８３ 抗トランスフェリン受容体抗体重鎖２
配列番号８４ 抗トランスフェリン受容体抗体重鎖３
配列番号８５ 抗トランスフェリン受容体抗体軽鎖
配列番号８６ ヒト化ＶＬ変異体２４−ＶＬ４Ｇ１
配列番号８７ ヒト化ＣＤＲＬ３変異体１１
発明の詳細な説明
本発明は、結合ペプチド又はタンパク質又はその機能的部分、特に抗体、特にモノクローナル抗体又はその機能的部分、特に結合ペプチド又は抗体に関し、該結合ペプチド又は抗体は、哺乳動物上の、特にヒトタウタンパク質上又はその断片上のリン酸化エピトープ、特に病的タンパク質タウ配座異性体を認識してこれに特異的に結合するが、１つの実施態様では、対応するリン酸化されていないエピトープ及び／又は関連性のないエピトープには結合せず、該結合ペプチド又は抗体は、４２２位にリン酸化Ｓｅｒ（ｐＳ４２２）を含むタウアミノ酸残基４１６〜４３０からなる、哺乳動物上の、特に配列番号０２に示されるようなヒトタウタンパク質上のエピトープに結合する。
Ｉ．定義
本明細書における目的での「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義されているような、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒト共通フレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク若しくはヒト共通フレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それと同じアミノ酸配列を含んでいても、又は、アミノ酸配列の変化を含有していてもよい。いくつかの実施態様では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒト共通フレームワーク配列の配列と同一である。
「親和性」は、分子（例えば抗体）の１つの結合部位とその結合対（例えば抗原）との間の非共有結合的相互作用の合計の強度を指す。特記しない限り、本明細書において使用する「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば抗体と抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘのその対のＹに対する親和性は、一般的に、解離定数（ｋｄ）によって示され得る。親和性は、本明細書に記載のものをはじめとする、当技術分野において公知の一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための具体的な例証的かつ例示的な実施態様を以下に記載する。
「親和性の成熟した」抗体は、以下のような改変を有さない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）に１つ以上の改変を有する抗体を指し、このような改変により、抗原に対する抗体の親和性は改善される。
「抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体」及び「ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する抗体」という用語は、十分な親和性でヒトタウ（ｐＳ４２２）に結合することのできる抗体を指し、よって該抗体は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）への標的化における診断剤及び／又は治療剤として有用である。１つの実施態様では、関連性のない非ヒトタウ（ｐＳ４２２）タンパク質に対する抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の結合度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定したところ、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対する該抗体の結合の約１０％未満である。
本明細書における「抗体」という用語は最も広義の意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば二重特異的抗体）、及び所望の抗原結合活性を示す限りにおける抗体断片を含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ディアボディ；鎖状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異的抗体が挙げられるがこれらに限定されない。
基準抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて基準抗体のその抗原に対する結合を５０％以上遮断する抗体を指し、逆に、基準抗体は競合アッセイにおいて抗体のその抗原に対する結合を５０％以上遮断する。１つの実施態様では、基準抗体と同じエピトープに結合する抗体は、基準抗体のその抗原に対する結合を５０％以上遮断する。１つの実施態様では、基準抗体と同じエピトープに結合する抗体は、基準抗体のその抗原に対する結合を８０％以上遮断する。１つの実施態様では、基準抗体と同じエピトープに結合する抗体は、基準抗体のその抗原に対する結合を９０％以上遮断する。１つの実施態様では、基準抗体と同じエピトープに結合する抗体は、基準抗体のその抗原に対する結合を９５％以上遮断する。１つの好ましい実施態様では、基準抗体と同じエピトープに結合する抗体は、抗原上の基準抗体と同じ残基と結合相互作用を有する。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部は特定の起源又は種に由来しているが、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分は異なる起源又は種に由来している、抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域の種類を指す。５つの主なクラスの抗体が存在し（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ）、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）にさらに分類され得る（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）。クラスの異なる免疫グロブリンに相当する重鎖定常ドメインは、α、δ、ε、γ、及びμとそれぞれ呼ばれる。
「エフェクター機能」は、抗体のクラスによって異なる、抗体のＦｃ領域に起因するそうした生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑへの結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体への結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体のダウンレギュレーション（例えばＢ細胞受容体）；並びにＢ細胞活性化が挙げられる。
薬剤、例えば医薬製剤の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するのに有効な用量及び必要とされる期間を指す。
本明細書の「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有している免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。該用語は、天然配列のＦｃ領域及び変異Ｆｃ領域を含む。１つの実施態様では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシ末端まで延びている。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在していても存在していなくてもよい。本明細書において特記しない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication 91-3242に記載のように、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵ番号付け体系に従う。
「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般的に、４つのＦＲドメインからなる（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）。したがって、ＨＶＲ配列及びＦＲ配列は一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）内で以下の順序で出現する：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「完全抗体」という用語は本明細書において同義として使用され、天然の抗体の構造と実質的に類似した構造を有しているか、又は本明細書において定義されているようなＦｃ領域を含有している重鎖を有している、抗体を指す。「完全長抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって連結された２本の抗体軽鎖ポリペプチドと２本の抗体重鎖ポリペプチドからなる多量体ポリペプチドを示し、ここで２本の抗体重鎖ポリペプチドにおいてＣ末端リジン残基（Ｋ）は存在していてもしていなくてもよい。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」という用語は同義語として使用され、外来性核酸が導入された細胞（このような細胞の子孫を含む）を指す。宿主細胞は、初回に形質転換された細胞、及び継代数に関係なくそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含む。子孫は、親細胞と核酸の内容において完全に同一ではなくてもよいが、突然変異を含んでいても良い。最初に形質転換された細胞についてスクリーニング又は選択されたのと同じ機能又は生物学的活性を有する突然変異体の子孫も本明細書において含まれる。
「ヒト共通フレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も共通して存在しているアミノ酸残基を示すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ配列又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の亜群からである。一般的に、配列の亜群は、Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Bethesda MD (1991), NIH Publication 91-3242, Vols. 1-3におけるような亜群である。１つの実施態様では、ＶＬでは、亜群は、上記のKabat et al. におけるような亜群κＩである。１つの実施態様では、ＶＨでは、亜群は、上記のKabat et al. におけるような亜群ＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲに由来するアミノ酸残基とヒトＦＲに由来するアミノ酸残基とを含むキメラ抗体を指す。特定の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここでＨＶＲ（例えばＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のそれに相当し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のそれに相当する。ヒト化抗体は場合により、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
本明細書において使用する「超可変領域」すなわち「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変的で（「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」）及び構造的に定められたループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／又は抗原接触残基（「抗原接触部」）を含有している、抗体可変ドメインの各々の領域を指す。一般的には、抗体は６つのＨＶＲを含み；３つはＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に、３つはＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。
本明細書におけるＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）に存在する超可変ループ（Chothia, C. and Lesk, A.M., J. Mol. Biol. 196 (1987) 901-917）；
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）に存在するＣＤＲ（Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication 91-3242）；
（ｃ）２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）に存在する抗原接触部（MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)）；並びに
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組合せ（ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む）
を含む。
特記しない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えばＦＲ残基）は、本明細書において、上記のKabat et al.に従って番号付けされる。
「イムノコンジュゲート」は、１つ以上の異種分子（群）にコンジュゲートした抗体である。
「個体」又は「被験者」は哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜動物（例えばウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えばヒト及び非ヒト霊長類、例えばサル）、ウサギ、及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施態様では、個体又は被験者はヒトである。
「単離された」抗体は、その天然環境の成分から隔離された抗体である。いくつかの実施態様では、抗体は、例えば電気泳動（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えばイオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）によって決定されるように、９５％又は９９％を超える純度となるまで精製される。抗体純度の評価法の総説については、例えば、Flatman, S. et al., J. Chromatogr. B 848 (2007) 79-87を参照されたい。
「単離された」核酸は、その天然環境の成分から隔離された核酸分子を指す。単離された核酸は、普通に核酸分子を含有しているが、該核酸分子は染色体外に存在しているか又はその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在している、細胞に含有されている核酸分子を含む。
「抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体をコードしている単離された核酸」は、抗体重鎖と軽鎖（又はその断片）をコードしている１つ以上の核酸分子（１つのベクター又は別々のベクター内のこのような核酸分子（群）、及び宿主細胞内の１つ以上の位置に存在しているこのような核酸分子（群）を含む）を指す。
本明細書において使用する「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の個体群から得られた抗体を指し、すなわち、該個体群を含む個々の抗体は同一である及び／又は同じエピトープに結合し、ただし、例えば天然に起こる突然変異を含有しているか又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、例えばあり得る変異抗体は除外され、このような変異体は一般的に少量存在する。様々な決定基（エピトープ）に対して指向される様々な抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各々のモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体の個体群から得られた抗体の特徴を示し、いずれかの特定の方法によって抗体の産生が必要とされると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有しているトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない、様々な技術によって作製され得、このような方法及び他の例示的なモノクローナル抗体の作製法が本明細書に記載されている。
「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２本の同一な軽鎖と２つの同一な重鎖とから構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端にかけて各々の重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端にかけて各々の軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の中の１つに割り当てられ得る。
「添付文書」という用語は、適応症、用法、用量、投与、併用療法、禁忌、及び／又はこのような治療用製品の使用に関する警告に関する情報を含有している、治療用製品の市販のパッケージに通例含まれる説明書を指すために使用される。
基準ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一率（％）」は、配列をアラインさせ、必要であれば、最大の配列同一率を達成するためにギャップを導入した後、配列同一性の一部として保存的な置換を全く考慮せずに、基準ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である、候補配列内のアミノ酸残基の比率として定義される。アミノ酸配列同一率を決定する目的でのアラインメントは、当技術分野の技能範囲内である様々な方法で、例えば公共的に利用できるコンピューターソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成され得る。当業者は、比較する配列の完全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要とされるあらゆるアルゴリズムを含む、配列をアラインさせるための適切なパラメーターを決定することができる。しかしながら、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一率値％は、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して算出される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータープログラムは、Genentech, Inc.によって作成され、ソースコードがユーザー文書と共にワシントンＤ.Ｃ.２０５５９のアメリカ合衆国著作権局に提出され、そこでアメリカ合衆国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Genentech, Inc.（サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州）から公共的に入手可能であるか、又は、ソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメーターはＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更されない。
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列の比較のために使用される状況では、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂに対するアミノ酸配列同一率％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂに対して、特定のアミノ酸配列同一率％を有する又は含む、所与のアミノ酸配列Ａとして表現されてもよい）は、以下のように計算される：
Ｘ／Ｙの分率×１００
ここで、Ｘは、プログラムによるＡとＢのアラインメントにおいて、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって同一な一致としてスコアリングされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ内のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さとは等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一率％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一率％とは等しくないことが理解されるだろう。具体的に特記しない限り、本明細書において使用する全てのアミノ酸配列同一率値％は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータープログラムを使用して直前の段落で記載されているように得られる。
「医薬製剤」という用語は、そこに含有される活性成分の生物学的活性が効果的であることが可能となるような形態であり、かつ、該製剤が投与されるであろう被験者に対して受け入れられない程に毒性である追加の成分を全く含有していない、調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、被験者に対して無毒性である、活性成分以外の、医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝剤、賦形剤、安定化剤、又は保存剤が挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書において使用する「ヒトタウ（ｐＳ４２２）」という用語は、天然ヒトタウ（ｐＳ４２２）（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ３７８４０）を指す。該用語は、「完全長」のプロセシングされていないヒトタウ（ｐＳ４２２）、並びに細胞内でのプロセシングから得られたあらゆる形態のヒトタウ（ｐＳ４２２）を包含する。該用語はまた、天然に存在するヒトタウ（ｐＳ４２２）の変異体、例えば突然変異体、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体も包含する。ヒトタウ（ｐＳ４２２）のアミノ酸配列を配列番号２に示す。
本明細書において使用する「処置」（及びその文法上の変化形、例えば「処置する」又は「処置している」）は、処置される個体の自然経過を改変させる試みでの臨床的介入を指し、予防のために又は臨床上の病態の経過中のいずれかに行なわれ得る。処置の望ましい効果としては、疾患の発生又は再発の予防、症状の寛解、疾患の全ての直接的又は間接的な病的結果の消失、転移の予防、疾患進行速度の低減、疾患状態の軽減又は緩和、及び緩解又は改善された予後が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施態様では、本発明の抗体を使用して、疾患の発生を遅延させるか又は疾患の進行を緩徐化する。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは一般的に、類似した構造を有し、各々のドメインは４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Kindt, T.J. et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., N.Y. (2007)、91頁を参照されたい）。単一のＶＨドメイン又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、該抗原に結合する抗体に由来するＶＨドメイン又はＶＬドメインを使用して単離して、それぞれ相補的なＶＬドメイン又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングし得る（例えば、Portolano, S. et al., J. Immunol. 150 (1993) 880-887; Clackson, T. et al., Nature 352 (1991) 624-628を参照）。
本明細書において使用する「ベクター」という用語は、核酸分子が連結されている別の核酸を増殖させることのできる該核酸分子を指す。該用語は、自己複製性の核酸構造としてのベクター、並びに、それが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれた該ベクターを含む。特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている核酸の発現を指令することができる。このようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。
ＩＩ．組成物及び方法
Ａ．例示的なヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体
本明細書において報告されているようなヒト化抗体は、標準的なヒト化法によっては入手できなかった。親ウサギ抗体と同等な結合特徴及び薬物動態特性を有するヒト化抗体を得るために、アミノ酸配列内に標準的ではない突然変異を導入することが必要とされた。これは、本明細書において報告されているような抗体が血液脳関門を通過し、かつヒト脳内において効果的であることを目的としているので、特に重要である。したがって、ヒト化抗体の選択のために一般的に適用されている基準は、本症例に直接適用するには十分に厳密ではなかった。
適切かつ開発可能なヒト化抗体を得るために、ＣＤＲＬ３（軽鎖のＣＤＲ３）内でジスルフィド橋を形成している２つのシステインを、それぞれ、セリン及びイソロイシンによって置換しなければならなかったことが判明した。さらに同ＣＤＲＬ３の適切な配向を確実にするために、ウサギＣＤＲＬ３の中央に存在するイソロイシン残基を欠失させ、その結果、親ウサギＣＤＲＬ３よりも１アミノ酸残基だけ短いヒト化ＣＤＲＬ３が得られた。
また、インビボでの薬物動態特性を維持するために、軽鎖の３２位のアミノ酸残基はリジンであるべきであることが判明した（番号付けはＫａｂａｔによる）。軽鎖ＨＶＲ−Ｌ３内のジスルフィド橋の除去は、インビボでの動態挙動に対して影響を及ぼさない。
重鎖内の４位、２４位、及び７８位の３つのバリンアミノ酸残基を維持することが有益であることがさらに判明した（番号付けはＫａｂａｔによる）。この理論によって拘束されるものではないが、これらの残基は、重鎖可変領域の抗原結合ループの適切な提示を確実にするために必要とされることが想定される。さらに、重鎖可変ドメイン内の７１位のアルギニン残基の存在が有益である（番号付けはＫａｂａｔによる）。
ＨＶＲ−Ｌ３は、特に長期間の保存中の脱アミドホットスポットであり得る２つのアスパラギン酸残基を含む。軽鎖可変ドメイン変異体ＶＬ３５Ｇ４においては、これらの２つのアスパラギン酸残基の１つが変化している。
本明細書において使用される全ての番号付けは、Ｋａｂａｔ可変ドメイン番号付け体系に基づく。
以下の表において、ヒト化重鎖可変ドメインＶＨ１４及びＶＨ２０とそれぞれ組み合わせたウサギ軽鎖可変ドメインの様々なヒト化変異体の特徴が示されている。結合対はヒトタウ（ｐＳ４２２）であった。
以下の表において、ヒト化軽鎖可変ドメインＶＬ１７及びＶＬ１９とそれぞれ組み合わせたウサギ軽鎖可変ドメインの様々なヒト化変異体の特徴が示されている。
以下の表において、様々なＶＨ／ＶＬの組合せの速度定数が示されている（実施例８に従って決定される）。
ヒト化ＶＨとＶＬの様々な組合せの生化学的結合が図３及び４に示されている。
以下の表において様々なＶＨ／ＶＬの組合せの結合特異性が示されている（ＥＣ５０値［ng/ml］）。
ヒトタウ突然変異体Ｓ４２２Ａに対する選択されたヒト化ＶＨ／ＶＬの組合せの選択性は、図５に示されたウェスタンブロットから認められ得る。全てのヒト化変異体が、Ｓ４２２でリン酸化されたヒトタウに選択的に結合する。親ウサギ抗体のＳ４２２ではないリン酸化エピトープに対して低いレベルの交差反応性が認められるが、示されたヒト化変異体は、親ウサギ抗体よりもこの点において交差反応性は低い。
図６では、アルツハイマー病患者の脳抽出物中のＰＨＦ−タウに対する親ウサギ抗体及び選択されたヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の結合が示されている。
上記に基づいて、ＶＨ３２／ＶＬ２２の組合せがヒト化抗体として選択された。
親ＶＨ／ＶＬの組合せ及びヒト化ＶＨ／ＶＬの組合せを用いて、カニクイザルにおいて以下の平均クリアランス速度が認められた（ヒトＩｇＧにおける通常のクリアランスは０．１８〜０．３６ml/hr/kgである）。
ＶＨ３２／ＶＬ２２の組合せは、用量依存的である上昇したクリアランス速度を有することが認められ得る。
以下の表において、タウ（ｐＳ４２２）断片を用いてのＶＨ３２／ＶＬ２２の上昇した用量依存的なクリアランス速度に対処するために作製されたさらに他のＶＨ／ＶＬの組合せの速度定数が示されている（実施例１０に従って決定される）。
以下の表において、完全長タウ（ｐＳ４２２）及びタウ（ｐＳ４２２）断片を用いてのＦａｂ断片としてのＶＨ／ＶＬの組合せの速度定数が示されている（実施例１１及び実施例１２に従って決定される）。
以下の表において、ＥＬＩＳＡによって決定された様々なＶＨ／ＶＬの組合せの結合特異性が示されている（リン酸化タウに対する選択性対リン酸化されていないタウに対する選択性）。
様々なＶＨ／ＶＬの組合せを用いて、カニクイザルにおいて以下の平均クリアランス速度が認められた（ヒトＩｇＧの通常のクリアランスは０．１８〜０．３６ml/hr/kgである；n.d.＝測定不能）。
様々なＶＨ／ＶＬの組合せを用いて、マウスにおいて以下の平均クリアランス速度が認められた（ヒトＩｇＧの通常のクリアランスは０．１８〜０．３６ml/hr/kgである）。
本明細書において報告されているような全ての態様の１つの実施態様では、ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、２５mg/kg以下の用量で０．６ml/hr/kg未満の静脈内適用後に平均クリアランス速度を有する。１つの実施態様では、平均クリアランス速度は、２５mg/kg以下の用量で０．３ml/hr/kg以下である。
１つの好ましい態様では、本発明は、（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択された少なくとも１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つ、又は５つ、又は６つのＨＶＲを含む、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を提供する。
１つの好ましい態様では、本発明は、（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択された少なくとも１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つ、又は５つ、又は６つのＨＶＲを含む、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を提供する。
１つの好ましい態様では、本発明は、（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択された少なくとも１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つ、又は５つ、又は６つのＨＶＲを含む、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を提供する。
１つの好ましい態様では、本発明は、（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択された少なくとも１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つ、又は５つ、又は６つのＨＶＲを含む、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を提供する。
１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択された少なくとも１つ、又は２つ、又は３つ、又は４つ、又は５つ、又は６つのＨＶＲを含む、（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を提供する。
１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択された少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、（ヒト化）抗体を提供する。
１つの実施態様では、前記抗体は、（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の実施態様では、前記抗体はさらに、
ｉ）（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；又は
ｉｉ）（ａ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；又は
ｉｉｉ）（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
から選択された少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む。
さらなる実施態様では、前記抗体は、
ｉ）（ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；又は
ｉｉ）（ａ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；又は
ｉｉｉ）（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む。
１つの態様では、本発明は、
ｉ）（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は
ｉｉ）（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は
ｉｉｉ）（ａ）配列番号０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、（ヒト化）抗体を提供する。
別の実施態様では、ＶＨ又はＶＬは、基準配列と比べて置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含有しているが、該配列を含む抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）への結合能を保持している。
本発明のさらなる態様では、上記のいずれかの実施態様に記載の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体をはじめとする、モノクローナル抗体である。１つの実施態様では、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ディアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施態様では、該抗体は完全長抗体、例えばインタクトなＩｇＧ１抗体若しくはＩｇＧ４抗体、又は本明細書において定義されているような他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体は、トランスジェニックタウＰＳ２ＡＰＰマウスの脳中のタウ（ｐＳ４２２）レベルを低下させる。
さらなる態様では、上記のいずれかの実施態様に記載の（ヒト化）抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、以下の第１〜７章に記載のような、特色のいずれかを単独で又は組み合わせて取り込み得る。
１．抗体の親和性
特定の実施態様では、本明細書に提供された抗体は、１００nM以下、５０nM以下、又は１nM〜１００nMの解離定数（ＫＤ）を有する（例えば１０−７M以下、例えば１０−７M〜１０−９M）。
１つの実施態様では、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。１つの実施態様では、ＲＩＡは、関心対象のＦａｂ形式の抗体とその抗原を用いて行なわれる。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液中結合親和性は、標識されていない一連の抗原の滴定液の存在下、最小濃度の（１２５Ｉ）で標識された抗原を用いてＦａｂを平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートを用いて、結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Chen, Y. et al., J. Mol. Biol. 293 (1999) 865-881参照）。アッセイのための条件を確立するために、マイクロタイター（登録商標）マルチウェルプレート（サーモサイエンティフィック社）を、５０mM炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μg/mlの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Cappel Labs社）を用いて一晩かけてコーティングし、続いてＰＢＳ中２％（ｗ/ｖ）ウシ血清アルブミンを用いて室温（約２３℃）で２〜５時間かけて遮断する。非吸着プレート（ヌンク社、２６９６２０番）において、１００pM又は２６pMの１２５Ｉ−抗原を、関心対象のＦａｂの連続希釈液と混合する（例えば、Presta, L.G. et al., Cancer Res. 57 (1997) 4593-4599における抗ＶＥＧＦ抗体であるＦａｂ−１２の評価と一致する）。次いで、関心対象のＦａｂを一晩インキュベートする；しかしながら、確実に平衡に達するために、インキュベーションはより長い期間続けてもよい（例えば約６５時間）。その後、混合液を室温でのインキュベーション（例えば１時間）のために捕捉用プレートに移す。次いで、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μl/ウェルのシンチラント（MICROSCINT-20（商標）；パッカード社）を加え、そしてプレートをトップカウント（商標）ガンマカウンター（パッカード社）で１０分間計測する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおける使用のために選択する。
別の実施態様によると、Ｋｄは、ビアコア（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ビアコア（登録商標）−２０００又はビアコア（登録商標）−３０００（ビアコア社、ピスカタウェイ、ＮＪ州）を使用したアッセイを、２５℃で、約１０のレスポンスユニット（ＲＵ）で抗原の固定されたＣＭ５チップを用いて行なう。１つの実施態様では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ビアコア社）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて業者の説明書に従って活性化する。抗原を１０mMの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）を用いて５μg/ml（約０．２μM）となるまで希釈し、その後、５μl/分の流速で注入して、約１０レスポンスユニット（ＲＵ）の結合タンパク質に到達した。抗原の注入後、１Mのエタノールアミンを注入して、未反応の基を遮断する。速度論の測定のために、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中のＦａｂの２倍連続希釈液（０．７８nMから５００nM）を、２５℃で約２５μl/分の流速で注入した。結合速度（ｋon）及び解離速度（ｋoff）を、結合センサーグラムと解離センサーグラムを同時に当てはめることによって、単純一対一ラングミュア結合モデル（ビアコア（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋoff／ｋon比として計算される（例えば、Chen, Y. et al., J. Mol. Biol. 293 (1999) 865-881参照）。結合速度が上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって１０６M−１s−１を上回る場合、結合速度は、分光光度計、例えばストップフローを備えた分光光度計（Aviv Instruments）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズのＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（サーモサイエンティフィック社）で測定されるような、漸増濃度の抗原の存在下におけるｐＨ７．２のＰＢＳ中の２０nMの抗原に対する抗体（Ｆａｂ形態）の２５℃における蛍光発光強度（励起＝２９５nm；発光＝３４０nm、１６nmのバンドパス）の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を使用することによって決定され得る。
２．抗体断片
特定の実施態様では、本明細書において提供された抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、並びに下記した他の断片が挙げられるがこれらに限定されない。特定の抗体断片の総説については、Hudson, P.J. et al., Nat. Med. 9 (2003) 129-134を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Plueckthun, A., In; The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore (eds.), Springer-Verlag, New York (1994), pp. 269-315を参照されたい；また、国際公開公報第９３／１６１８５号；米国特許第５，５７１，８９４号及び米国特許第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含みかつインビボでの延長された半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ'）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
ディアボディは、二価又は二重特異的であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第０４０４０９７号；国際公開公報第１９９３／０１１６１号；Hudson, P.J. et al., Nat. Med. 9 (2003) 129-134；及びHolliger, P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディはもまた、Hudson, P.J. et al., Nat. Med.9 (2003) 129-134に記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部、又は、軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む、抗体断片である。特定の実施態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Domantis, Inc., Waltham, MA；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照）。
抗体断片は、本明細書に記載のような、インタクトな抗体のタンパク質分解性消化、並びに、組換え宿主細胞（例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はファージ）による産生を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製され得る。
３．ヒト化抗体
典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減させるためにヒト化されているが、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持している。一般的には、ヒト化抗体は１つ以上の可変ドメインを含み、この中のＨＶＲ、例えばＣＤＲ（又はその一部）は非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）はヒト抗体配列に由来している。ヒト化抗体は場合によりまた、ヒト定常領域の少なくとも一部又は完全長のヒト定常領域も含むだろう。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基を、非ヒト抗体（例えばＨＶＲ残基の由来する抗体）に由来する対応する残基で置換することにより、例えば、抗体の特異性又は親和性は回復又は改善される。
ヒト化抗体及びそれらの作製法は、例えば、Almagro, J.C. and Fransson, J., Front. Biosci. 13 (2008) 1619-1633に総説され、さらに、例えば、Riechmann, I. et al., Nature 332 (1988) 323-329; Queen, C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 10029-10033；米国特許第５，８２１，３３７号、米国特許第７，５２７，７９１号、米国特許第６，９８２，３２１号、及び米国特許第７，０８７，４０９号; Kashmiri, S.V. et al., Methods 36 (2005) 25-34 (特異性決定領域（ＳＤＲ）移植を記載); Padlan, E.A., Mol. Immunol. 28 (1991) 489-498 (「リサーフェシング」を記載); Dall’Acqua, W.F. et al., Methods36 (2005) 43-60 (「ＦＲシャッフリング」を記載)；並びにOsbourn, J. et al., Methods36 (2005) 61-68、及びKlimka, A. et al., Br. J. Cancer 83 (2000) 252-260（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」アプローチを記載）に記載されている。
ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Sims, M.J. et al., J. Immunol. 151 (1993) 2296-2308を参照）；軽鎖又は重鎖の可変領域の特定の亜群のヒト抗体の共通配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Carter, P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992) 4285-4289；及びPresta, L.G. et al., J. Immunol. 151 (1993) 2623-2632を参照）；ヒト成熟（体細胞の突然変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Almagro, J.C. and Fransson, J., Front. Biosci. 13 (2008) 1619-1633を参照）；及び、ＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Baca, M. et al., J. Biol. Chem. 272 (1997) 10678-10684 and Rosok, M.J. et al., J. Biol. Chem. 271 (19969 22611-22618)を参照）が挙げられるがこれらに限定されない。
４．多重特異的抗体
特定の実施態様では、本明細書において提供された抗体は、多重特異的抗体、例えば二重特異的抗体である。多重特異的抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施態様では、結合特異性の一方はヒトタウ（ｐＳ４２２）に対するものであり、他方はいずれかの他の抗原に対するものである。特定の実施態様では、二重特異的抗体は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異的抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製され得る。
多重特異的抗体の作製技術としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリンの重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Milstein, C. and Cuello, A.C., Nature 305 (1983)537-540、国際公開公報第９３／０８８２９号、及びTraunecker, A. et al., EMBO J. 10 (1991) 3655-3659参照）、及び「ノブ・イン・ホール」工学操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照）が挙げられるがこれらに限定されない。多重特異的抗体はまた、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子の作製のための静電的ステアリング効果の工学操作（国際公開公報第２００９／０８９００４号）；２つ以上の抗体又は断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びBrennan, M. et al., Science229 (1985) 81-83を参照）；二重特異的抗体を生成するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Kostelny, S.A. et al., J. Immunol. 148 (1992) 1547-1553参照）；二重特異的抗体断片の作製のための「ディアボディ」技術の使用（例えば、Holliger, P. et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448参照）；及び、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Gruber, M et al., J. Immunol. 152 (1994) 5368-5374参照）；及び例えばTutt, A. et al., J. Immunol. 147 (1991)60-69に記載のような三重特異的抗体の調製によって作製され得る。
「オクトパス抗体」をはじめとする、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する工学操作された抗体も本明細書に含まれる（例えば米国特許第２００６／００２５５７６号参照）。
本明細書における抗体又は断片はまた、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に結合する抗原結合部位を含む「二重作用性Ｆａｂ（Dual Acting Fab）」すなわち「ＤＡＦ」、並びに、別の異なる抗原（例えば、米国特許第２００８／００６９８２０号参照）も含む。
本明細書における抗体又は断片はまた、国際公開公報第２００９／０８０２５１号、国際公開公報第２００９／０８０２５２号、国際公開公報第２００９／０８０２５３号、国際公開公報第２００９／０８０２５４号、国際公開公報第２０１０／１１２１９３号、国際公開公報第２０１０／１１５５８９号、国際公開公報第２０１０／１３６１７２号、国際公開公報第２０１０／１４５７９２号、及び国際公開公報第２０１０／１４５７９３号に記載の多重特異的抗体も含む。
５．抗体変異体
特定の実施態様では、本明細書において提供された抗体のアミノ酸配列変異体も考えられる。例えば、該抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましくあり得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、該抗体をコードしているヌクレオチド配列に適切な改変を導入することによって、又はペプチド合成によって調製され得る。このような改変としては、例えば、該抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は該残基への挿入、及び／又は該残基の置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換のあらゆる組合せを行なって最終構築物に到達することができる。ただし、最終構築物は、所望の特徴、例えば抗原への結合を有する。
ａ）置換変異体、挿入変異体、及び欠失変異体
特定の実施態様では、１つ以上のアミノ酸の置換を有する抗体変異体が提供される。置換による突然変異誘発のための関心対象の部位としては、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。保存的置換は、表中に「好ましい置換」という表題の下で示されている。「例示的な置換」という表題の下で以下の表に、より実質的な変化が提供され、アミノ酸の側鎖のクラスに関して以下にさらに記載されている。アミノ酸の置換を関心対象の抗体に導入し得、産物を所望の活性、例えば保持された／改善された抗原への結合、低減された免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングし得る。
アミノ酸は、側鎖の共通の特性に従って分類され得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性で親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）側鎖の方向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスの中の１つのメンバーを別のクラスのものと交換することを含む。
１種類の置換変異体は、親抗体（例えばヒト化抗体）の１つ以上の超可変領域の残基を置換することを含む。一般的に、さらなる研究のために選択された得られた変異体（群）は、親抗体と比較して特定の生物学的活性の改変（例えば改善）（例えば高まった親和性、低減された免疫原性）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているだろう。例示的な置換変異体は、例えば本明細書に記載の技術のようなファージディスプレイに基づいた親和性成熟技術を使用して慣用的に作製され得る、親和性の成熟した抗体である。端的に言えば、１つ以上のＨＶＲ残基を突然変異させ、変異抗体をファージ上にディスプレイし、特定の生物学的活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングする。
例えば、抗体の親和性を改善させるために、ＨＶＲに改変（例えば置換）を行ない得る。このような改変は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち体細胞成熟過程の最中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えばChowdhury, P.S., Methods Mol. Biol. 207 (2008) 179-196参照）、及び／又は抗原と接触する残基において行なわれ得、結果として得られた変異体ＶＨ又はＶＬを結合親和性について試験する。第二ライブラリーを構築しこれから再度選択することによる親和性成熟は、例えば、Hoogenboom, H.R. et al. in Methods in Molecular Biology 178 (2002) 1-37に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施態様では、多様性を、様々な方法（例えばエラーしがちなＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）のいずれかによって、成熟について選択された可変的な遺伝子に導入する。次いで、第二のライブラリーを作成する。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定する。多様性を導入するための別の方法は、ＨＶＲに向けられたアプローチを含み、ここではいくつかのＨＶＲ残基（例えば一度に４〜６個の残基）をランダム化する。抗原との結合に関与するＨＶＲ残基を、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデリングを使用して具体的に同定し得る。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が特に標的化されることが多い。
特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は１つ以上のＨＶＲ内で、このような改変が実質的に、抗原に対する抗体の結合能を低減させない限り、起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的改変（例えば本明細書において提供されているような保存的置換）がＨＶＲ内で行なわれ得る。このような改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外であり得る。上記に提供されたＶＨ及びＶＬの変異配列の特定の実施態様では、各々のＨＶＲは改変されていないか、又は１つ以下、２つ以下、若しくは３つ以下のアミノ酸置換を含有している。
突然変異誘発のために標的化され得る抗体の残基又は領域の同定のために有用な方法は、Cunningham, B.C. and Wells, J.A., Science 244 (1989) 1081-1085によって記載されているような「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の中の１つの残基又は基（例えば、荷電した残基、例えばａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ）を同定し、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えばアラニン又はポリアラニン）によって置換し、抗原と抗体の相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換を、最初の置換に対して機能的感受性を示したアミノ酸の位置に導入してもよい。代わりに又は追加して、抗体と抗原との間の接触点を同定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。このような接触残基及び隣接残基を、置換のための候補として標的化又は排除し得る。変異体をスクリーニングして、それらが所望の特性を含有しているかどうかを決定し得る。
アミノ酸配列の挿入は、１残基から１００以上の残基を含有しているポリペプチドまでの長さにおよぶアミノ末端及び／又はカルボキシル末端への融合、並びに、１つ又は複数のアミノ酸残基の配列間への挿入を含む。末端への挿入例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体としては、抗体のＮ末端又はＣ末端への酵素（例えばＡＤＥＰＴ）又は抗体の血清中半減期を延長させるポリペプチドの融合が挙げられる。
ｂ）グリコシル化変異体
特定の実施態様では、本明細書において提供される抗体を改変させて、該抗体がグリコシル化される程度を増加又は低減させる。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作成されるか又は除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって慣用的に成し遂げられ得る。
前記抗体がＦｃ領域を含む場合、それに付着した糖鎖を改変させ得る。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって一般的に付着している分岐した、二分岐のオリゴ糖を含む（例えば、Wright, A. and Morrison, S.L., TIBTECH 15 (1997) 26-32参照）。オリゴ糖としては、様々な糖鎖、例えばマンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに、二分岐オリゴ糖構造の「基部」にあるＧｌｃＮＡｃに付着したフコースが挙げられる。いくつかの実施態様では、本発明の抗体内のオリゴ糖の改変は、特定の改善された特性を有する抗体変異体を作成するために行なわれ得る。
ｃ）Ｆｃ領域変異体
特定の実施態様では、１つ以上のアミノ酸の改変を、本明細書において提供された抗体のＦｃ領域に導入し得、これによりＦｃ領域変異体を作製し得る。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸の位置にアミノ酸の改変（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含み得る。
特定の実施態様では、本発明は、いくつかのエフェクター機能を有しているか全てのエフェクター機能を有しているわけではない抗体変異体を考え、これにより、該抗体変異体は、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣ）は不必要であるか又は有害であるような適用のための望ましい候補となる。インビトロ及び／又はインビボでの細胞傷害アッセイを行なって、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／欠乏を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行なって、該抗体がＦｃγＲ結合を欠失しているが（したがってＡＤＣＣ活性を欠失しているようである）、ＦｃＲｎ結合能は保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ravetch, J.V. and Kinet, J.P., Annu. Rev. Immunol. 9 (1991) 457-492の４６４頁の表３に要約されている。関心対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非制限的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83 (1986) 7059-7063；及びHellstrom, I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 (1985) 1499-1502参照）；米国特許第５，８２１，３３７号（Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166 (1987) 1351-1361参照）に記載されている。あるいは、非放射能アッセイ法を使用し得る（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（CellTechnology, Inc.、マウンテンビュー、ＣＡ州）；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Promega、マディソン、ＷＩ州）を参照）。このようなアッセイのために有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代わりに又は追加して、関心対象の分子のＡＤＣＣ活性をインビボで、例えばClynes, R. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 652-656に開示されているような動物モデルにおいて評価し得る。Ｃ１ｑ結合アッセイもまた行なって、該抗体がＣ１ｑに結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠失していることを確認し得る（例えば国際公開公報第２００６／０２９８７９号並びに国際公開公報第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡ参照）。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ない得る（例えば、Gazzano-Santoro, H. et al., J. Immunol. Methods 202 (1996) 163-171; Cragg, M.S. et al., Blood 101 (2003) 1045-1052；及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103 (2004) 2738-2743参照）。ＦｃＲｎへの結合及びインビボでのクリアランス／半減期の決定もまた、当技術分野において公知の方法を使用して行なうことができる（例えば、Petkova, S.B. et al., Int. Immunol. 18（2006: 1759-1769）を参照）。
エフェクター機能の低減された抗体としては、Ｆｃ領域の２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９残基の１つ以上の置換を有するものが挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ領域突然変異体としては、２６５及び２９７残基のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ領域突然変異体をはじめとする、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７の２つ以上において置換を有するＦｃ領域突然変異体が挙げられる。
ＦｃＲに対する改善された結合又は消失した結合を有する特定の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開公報第２００４／０５６３１２号、及びShields, R.L. et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604参照）。
いくつかの実施態様では、例えば米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開公報第９９／５１６４２号、及びIdusogie, E.E. et al., J. Immunol. 164 (2000) 4178-4184に記載されているような、改変された（すなわち消失した）Ｃ１ｑへの結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす、Ｆｃ領域内の改変を行なう。
半減期が延長され、母体ＩｇＧの胎児への移行に関与する（Guyer, R.L. et al., J. Immunol. 117 (1976) 587-593、及びKim, J.K. et al., J. Immunol. 24 (1994) 2429-2434）新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体が、米国特許第２００５／００１４９３４号に記載されている。そうした抗体は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合を改善させる１つ以上の置換をそこに有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ領域変異体としては、Ｆｃ領域残基（２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４）の１つ以上における置換を有する変異体、例えばＦｃ領域残基４３４の置換を有する変異体（米国特許第７，３７１，８２６号）が挙げられる。
また、Ｆｃ領域変異体の他の例に関する、Duncan, A.R.及びWinter, G., Nature 322 (1988) 738-740；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；並びに国際公開公報第９４／２９３５１号を参照されたい。
ｄ）システインの工学操作された抗体変異体
特定の実施態様では、システインの工学操作された抗体、例えば「チオモノクローナル抗体」を作製することが望ましくあり得、ここでは抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている。特定の実施態様では、置換された残基は、抗体の近づきやすい部位に存在する。こうした残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基はこれにより抗体の近づきやすい部位に位置し、これを使用して抗体を他の部分に、例えば薬物部分又はリンカー−薬物部分にコンジュゲートさせて、本明細書においてさらに記載されているようなイムノコンジュゲートを作製し得る。特定の実施態様では、以下の残基のいずれか１つ以上をシステインで置換し得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔの番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵによる番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵによる番号付け）。システインの工学操作された抗体は、例えば米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように作製され得る。
ｅ）抗体誘導体
特定の実施態様では、本明細書において提供される抗体を、当技術分野において公知であり容易に入手可能である追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変させ得る。抗体の誘導体化に適した部分としては水溶性ポリマーが挙げられるがこれらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマー）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、及びその混合物が挙げられるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中におけるその安定性に因り製造において利点を有し得る。ポリマーは任意の分子量であり得、分岐していても分岐していなくてもよい。抗体に付着するポリマーの数は変化し得、１つを超えるポリマーが付着している場合には、それらは同じ分子であっても異なる分子であってもよい。一般的に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善しようとする抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体を規定の条件下で療法に使用するであろうかどうかなどを含むがこれらに限定されない考慮に基づいて決定され得る。
別の実施態様では、放射線への曝露によって選択的に加熱される可能性がある抗体と非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。１つの実施態様では、非タンパク質性部分はカーボンナノチューブである（Kam, N.W. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102 (2005) 11600-11605）。放射線は任意の波長であり得、これには、普通の細胞は害さないが、抗体−非タンパク質性部分の近くにある細胞が死滅する温度まで非タンパク質性部分を加熱させる波長が挙げられるがこれらに限定されない。
Ｂ．組換え法及び組成物
抗体は、例えば米国特許第４，８１６，５６７号に記載のような、組換え法及び組成物を使用して産生され得る。１つの実施態様では、本明細書に記載の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体をコードしている単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列をコードし得る（例えば抗体の軽鎖及び／又は重鎖）。さらなる実施態様では、このような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば発現ベクター）が提供される。さらなる実施態様では、このような核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのこのような実施態様では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第二ベクターを含む（例えばこれで形質転換されている）。１つの実施態様では、宿主細胞は、真核細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球系細胞（例えばＹ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。１つの実施態様では、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の作製法が提供され、ここで該方法は、上記に提供されたような抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養し、場合により宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から該抗体を回収する工程を含む。
抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の組換え産生のために、例えば上記のような抗体をコードしている核酸を単離し、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／又は発現のために１つ以上のベクターに挿入する。このような核酸は、慣用的な手順を使用して容易に単離及びシークエンスすることができる（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合することのできるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）。
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適した宿主細胞としては、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞が挙げられる。例えば、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合には、抗体を細菌において産生し得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば米国特許第５，６４８，２３７号、米国特許第５，７８９，１９９号及び米国特許第５，８４０，５２３号を参照されたい（Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現を記載した、Charlton, K.A., In: Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C. (ed.), Humana Press, Totowa, NJ (2003), pp. 245-254も参照されたい）。発現後、抗体を、細菌細胞ペーストから可溶性画分中へと単離し得、さらに精製することができる。
原核細胞に加えて、真核微生物、例えば線維状真菌又は酵母が、抗体をコードするベクターのために適したクローニング用又は発現用の宿主であり、これには、そのグリコシル化経路が「ヒト化」され、その結果、部分的な又は完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体が産生される真菌株及び酵母株が挙げられる。Gerngross, T.U., Nat. Biotech. 22 (2004) 1409-1414; and Li, H. et al., Nat. Biotech. 24 (2006) 210-215を参照されたい。
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。特にヨウトガ（Spodoptera frugiperda）細胞のトランスフェクション用の、昆虫細胞と共に使用し得る、数多くのバキュロウイルス株が同定されている。
植物細胞培養はまた、宿主として使用することもできる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、米国特許第６，０４０，４９８号、米国特許第６，４２０，５４８号、米国特許第７，１２５，９７８号、及び米国特許第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載）を参照されたい。
脊椎動物細胞もまた宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中での増殖に適合した哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（例えばGraham, F.L. et al., J. Gen Virol. 36 (1977) 59-74に記載のような２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えばMather, J.P., Biol. Reprod. 23 (1980) 243-252に記載のようなＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えばMather, J.P. et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383 (1982) 44-68に記載のようなＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、例えばＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaub, G. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220）；並びに骨髄腫細胞株、例えばＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０が挙げられる。抗体の産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Yazaki, P. and Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C. (ed.), Humana Press, Totowa, NJ (2004), pp. 255-268を参照されたい。
Ｃ．アッセイ
本明細書において提供される抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、当技術分野において公知である様々なアッセイによってその物理的／化学的特性及び／又は生物学的活性について同定、スクリーニング、又は特徴付けられ得る。
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
１つの態様では、本発明の抗体を、その抗原結合活性について、例えばＥＬＩＳＡ、ａｌｐｈａＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、抗体又は逆相アレイなどの公知の方法によって試験する。
例示的なＥＬＩＳＡ又はａｌｐｈａＬＩＳＡアッセイでは、溶液（例えば細胞上清、細胞又は組織溶解液、体液など）中のタウ（ｐＳ４２２）を、タウ（ｐＳ４２２）上の第一エピトープ又は特定のコンフォメーションのタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合する捕捉抗体、及び、タウ（ｐＳ４２２）の第二エピトープ又はコンフォメーションに特異的に結合する検出実体に連結させた検出抗体と結合させる。読み取りは、検出実体（化学発光、蛍光、エネルギー移動により誘発される発光など）に基づく。場合によっては、同じ抗体を、同じアッセイにおいて凝集形のタウ（ｐＳ４２２）を検出するために捕捉抗体及び検出抗体として使用してもよい（例えば、Tokuda, T. et al., Neurology 75 (2010) 1766-1772参照）。
抗体アレイの場合、抗体をガラス又はニトロセルロースチップ上にスポットする。スライドをブロッキングし、そしてタウ（ｐＳ４２２）含有溶液を用いてインキュベートし、洗浄して結合していない抗体を除去し、そして結合した抗体を、蛍光標識された対応する二次抗体を用いて検出する。蛍光シグナルを蛍光スライドスキャナーによって測定する。逆相アレイでも同様に、組換えタウ（ｐＳ４２２）、細胞上清、細胞又は組織溶解液、体液などをガラス又はニトロセルロースチップ上にスポットする。スライドをブロッキングし、そして個々のアレイを、タウ（ｐＳ４２２）上の特異的エピトープに対する抗体と共にインキュベートする。結合していない抗体を洗浄除去し、そして結合した抗体を、蛍光標識された対応する二次抗体を用いて検出する。蛍光シグナルを蛍光スライドスキャナーによって測定する（Dernick, G., et al., J. Lipid Res. 52 (2011) 2323-2331）。
ウェスタンブロットの例では、凝集した組換えタウ（ｐＳ４２２）、又は例えば細胞上清、細胞若しくは組織溶解液、体液などから得られたタウ（ｐＳ４２２）を、ＳＤＳ ＰＡＧＥ又は天然ゲル条件で分子量によって分離し、そしてニトロセルロース膜又はＰＶＤＦ膜上にブロットする。ブロッキング後、膜を、タウ（ｐＳ４２２）のアミノ酸配列又はコンフォメーションに対して特異的である抗体と共にインキュベートする。その後、膜を洗浄して結合していない抗体を除去する。結合した抗体を、化学発光又は蛍光又は他の検出手段のための検出実体に連結させた対応する二次抗体によって検出する。タウ（ｐＳ４２２）のアミノ酸配列に対して特異的な抗体は、様々な凝集形のタウ（ｐＳ４２２）に結合し、したがって、分子量並びにエピトープは、凝集によって遮蔽されない。他方で、コンフォメーションに特異的な抗体は、特定の凝集形のタウ（ｐＳ４２２）しか検出せず、特定の分子量のバンドのみしか明らかにしない（例えば、Towbin, H., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76 (1979) 4350-4353; Burnette, W.N., Anal. Biochem. 112 (1981) 195-203参照）。
別の態様では、競合アッセイを使用して、ヒトタウ（ｐＳ４２２）への結合について本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体と競合する抗体を同定し得る。特定の実施態様では、このような競合抗体は、本明細書において報告されているような（ヒト化）抗体に結合しているのと同じエピトープ（例えばリニアエピトープ又はコンフォメーションエピトープ）に結合する。抗体が結合しているエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Morris, G.E. (ed.), Epitope Mapping Protocols, In: Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Humana Press, Totowa, NJ (1996)に提供されている。
例示的な競合アッセイでは、固定されたヒトタウ（ｐＳ４２２）を、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に結合する標識された第一抗体と、ヒトタウ（ｐＳ４２２）への結合について第一抗体と競合するその能力について試験される標識されていない第二抗体とを含む溶液中でインキュベートする。対照として、固定されたヒトタウ（ｐＳ４２２）を、標識された第一抗体を含んでいるが標識されていない第二抗体は含んでいない溶液中でインキュベートする。ヒトタウ（ｐＳ４２２）への第一抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な結合していない抗体を除去し、そして固定されたヒトタウ（ｐＳ４２２）と会合した標識の量を測定する。固定されたヒトタウ（ｐＳ４２２）と会合した標識の量が、対照試料と比較して試験試料中において実質的に減少していれば、第二抗体が、ヒトタウ（ｐＳ４２２）への結合について第一抗体と競合していることを示す（例えば、Harlow, E. and Lane, D., Antibodies: A Laboratory Manual, Chapter 14, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1988)参照）。
２．活性アッセイ
１つの態様では、生物学的活性を有するその抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を同定するためのアッセイが提供される。生物学的活性は、例えば、タウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性からの保護／の低減／の阻害、及び／又はオリゴマーヒトタウ（ｐＳ４２２）の細胞間移動からの保護／の低減／の阻害、及び／又はＬＵＨＭＥＳ細胞内のタウ（ｐＳ４２２）により誘発されるカスパーゼ活性の低減を含み得る。このような生物学的活性をインビボ及び／又はインビトロで有する抗体も提供される。
特定の実施態様では、本発明の抗体を、このような生物学的活性について試験する。
保護的な生物学的活性は、レシピエント神経細胞上での細胞死を引き起こす、分泌されたタウ（ｐＳ４２２）を含有している馴化培地を添加することによって評価され得る。この毒性は、本明細書に記載のような保護抗体を添加することによって元に戻り得る。分泌されたタウ（ｐＳ４２２）の毒性は以前に確立されている（Emmanouilidou, E., et al., J. Neurosci., 30 (2010) 6838-6851）。
Ｄ．診断及び検出のための方法及び組成物
特定の実施態様では、本明細書において提供される抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体のいずれかが、生物学的試料中のヒトタウ（ｐＳ４２２）の存在を検出するのに有用である。本明細書において使用する「検出する」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。特定の実施態様では、生物学的試料は、細胞又は組織、例えば脳組織を含む。
１つの実施態様では、診断法又は検出法に使用するための抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体が提供される。さらなる態様では、生物学的試料中のヒトタウ（ｐＳ４２２）の存在を検出する方法が提供される。特定の実施態様では、該方法は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対する抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の結合を許容する条件下で、生物学的試料を、本明細書に記載のような抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体と接触させ、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体とヒトタウ（ｐＳ４２２）との間に複合体が形成されるかどうかを検出する工程を含む。このような方法は、インビトロ又はインビボでの方法であり得る。１つの実施態様では、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体は、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を用いての治療に適格な被験者を選択するために使用され、例えばここではヒトタウ（ｐＳ４２２）は患者の選択のためのバイオマーカーである。
本発明の抗体を使用して診断され得る例示的な障害としては、脳鉄蓄積１型（ＮＢＩＡ１）を伴う神経変性症、純粋自律神経失調症、ダウン症候群、グアム複合、及びいくつかのレビー小体の障害、例えばびまん性レビー小体病（ＤＬＢＤ）、アルツハイマー病のレビー小体バリアント（ＬＢＶＡＤ）、特定の病型のゴーシェ病、及び認知症を伴うパーキンソン病（ＰＤＤ）が挙げられる。
特定の実施態様では、標識された抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体が提供される。標識としては、直接的に検出される標識又は部分（例えば蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識）並びに、例えば酵素反応又は分子相互作用を通して間接的に検出される部分、例えば酵素又はリガンドが挙げられるがこれらに限定されない。例示的な標識としては、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレート剤又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼ、及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカリドオキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はミクロペルオキシダーゼなどの過酸化水素を使用する酵素と結合して色素前駆体を酸化、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどのヘテロ環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定なフリーラジカルなどが挙げられるがこれらに限定されない。
Ｅ．医薬製剤
本明細書に記載のような抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の医薬製剤は、所望の純度を有するこのような抗体を１つ以上の任意選択の薬学的に許容される担体（Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980)）と混合することによって、凍結乾燥製剤又は液剤の剤形で調製される。薬学的に許容される担体は一般的に、使用される用量及び濃度ではレシピエントに対して無毒性であり、これには、緩衝液、例えばリン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニン；保存剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンズアルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチル、又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリ（ビニルピロリドン）；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン；単糖、二糖、及び他の炭水化物、例えばグルコース、マンノース、又はデキストリン；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース、又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体としてはさらに、間質薬物分散剤、例えば可溶性で中性で活性のヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えばヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばｒｈｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Baxter International, Inc.）が挙げられる。ｒｈｕＰＨ２０をはじめとする、特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、米国特許第２００５／０２６０１８６号及び米国特許第２００６／０１０４９６８号に記載されている。１つの態様では、ｓＨＡＳＥＧＰを、１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼ、例えばコンドロイチナーゼと配合する。
例示的な凍結乾燥抗体製剤が米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤としては、米国特許第６，１７１，５８６号及び国際公開公報第２００６／０４４９０８号に記載されたものが挙げられ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
本明細書の製剤はまた、処置される特定の適応症にとって必要とされるような１つを超える活性成分、好ましくは互いに有害な影響を及ぼさない補完的な活性を有するものを含有する。このような活性成分は、意図する目的にとって有効な量で組み合わせられて適切に存在する。
活性成分は、例えばコアセルベーション技術によって又は界面重合によって調製されたマイクロカプセルに、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに、コロイド状薬物送達システムに（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）、又はマクロエマルションに封入され得る。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A.（編）(1980)に記載されている。
持続放出調製物を調製してもよい。持続放出調製物の適切な例としては、抗体を含有している固体で疎水性のポリマーの半透過性マトリックスが挙げられ、該マトリックスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形状である。
インビボでの投与のために使用される製剤は一般的に無菌である。無菌性は、例えば滅菌ろ過膜を通したろ過によって容易に成し遂げられ得る。
例えば、処置される適応症がアルツハイマー病又は前駆期アルツハイマー病である場合、医薬製剤はまた、１つ以上の追加の活性成分、例えばドネペジル、メマンチン、リバスチグミン、ガランタミン、リバスチグミン、メシル酸エルゴロイド、抗Ａβ抗体、及び抗αシヌクレイン抗体を含有していてもよい。
Ｆ．治療法及び組成物
本明細書において提供される抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体のいずれかを治療法に使用し得る。
１つの態様では、医薬品としての使用のための抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体が提供される。さらなる態様では、アルツハイマー病の処置に使用するための抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体が提供される。特定の実施態様では、処置法に使用するための抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体が提供される。特定の実施態様では、本発明は、有効量の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、アルツハイマー病を有する個体を処置する方法において使用するための抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を提供する。１つのこのような実施態様では、該方法はさらに、例えば下記したような少なくとも１つの追加の治療剤の有効量を個体に投与する工程を含む。さらなる実施態様では、本発明は、ヒト神経細胞及びグリア細胞内におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性を阻害するために、又は神経細胞とグリア細胞の間のオリゴマーヒトタウ（ｐＳ４２２）の細胞間移動を阻害するために、又はタウ（ｐＳ４２２）により誘発されるカスパーゼ活性を減少させるために使用するための抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を提供する。特定の実施態様では、本発明は、ヒト神経細胞及びグリア細胞内におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性を阻害するために、又は神経細胞とグリア細胞の間のオリゴマーヒトタウ（ｐＳ４２２）の細胞間移動を阻害するために、又はタウ（ｐＳ４２２）により誘発されるカスパーゼ活性を減少させるために、有効量の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、個体における、ヒト神経細胞及びグリア細胞内におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性を阻害する、又は神経細胞とグリア細胞の間のオリゴマーヒトタウ（ｐＳ４２２）の細胞間移動を阻害する、又はタウ（ｐＳ４２２）により誘発されるカスパーゼ活性を減少させる方法において使用するための抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を提供する。上記のいずれかの実施態様に記載の「個体」は好ましくはヒトである。
さらなる態様では、本発明は、医薬品の製造又は調製における抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の使用を提供する。１つの実施態様では、医薬品は、アルツハイマー病の処置用である。さらなる実施態様では、医薬品は、アルツハイマー病を有する個体に有効量の医薬品を投与する工程を含む、アルツハイマー病を処置する方法に使用するためである。１つのこのような実施態様では、該方法はさらに、例えば下記したような少なくとも１つの追加の治療剤の有効量を個体に投与する工程を含む。さらなる実施態様では、医薬品はヒト神経細胞及びグリア細胞内におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性を阻害するため、又は神経細胞とグリア細胞の間のオリゴマーヒトタウ（ｐＳ４２２）の細胞間移動を阻害するため、又はタウ（ｐＳ４２２）により誘発されるカスパーゼ活性を減少させるためである。さらなる実施態様では、医薬品は、ヒト神経細胞及びグリア細胞内におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性を阻害するために、又は神経細胞とグリア細胞の間のオリゴマーヒトタウ（ｐＳ４２２）の細胞間移動を阻害するために、又はタウ（ｐＳ４２２）により誘発されるカスパーゼ活性を減少させるために有効量の医薬品を個体に投与する工程を含む、個体における、ヒト神経細胞及びグリア細胞内におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性を阻害する、又は神経細胞とグリア細胞の間のオリゴマーヒトタウ（ｐＳ４２２）の細胞間移動を阻害する、又はタウ（ｐＳ４２２）により誘発されるカスパーゼ活性を減少させる方法において使用するためである。上記のいずれかの実施態様に記載の「個体」はヒトであり得る。
さらなる態様では、本発明は、アルツハイマー病の処置法を提供する。１つの実施態様では、該方法は、このようなアルツハイマー病を有する個体に、有効量の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を投与する工程を含む。１つのこのような実施態様では、該方法はさらに、以下に記載したような少なくとも１つの追加の治療剤の有効量を個体に投与する工程を含む。上記のいずれかの実施態様に記載の「個体」はヒトであり得る。
さらなる態様では、本発明は、個体における、ヒト神経細胞及びグリア細胞内におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性を阻害するための、又は神経細胞とグリア細胞の間のオリゴマーヒトタウ（ｐＳ４２２）の細胞間移動を阻害するための、又はタウ（ｐＳ４２２）により誘発されるカスパーゼを減少させるための方法を提供する。１つの実施態様では、該方法は、ヒト神経細胞及びグリア細胞内におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発される細胞毒性を阻害するために、又は神経細胞とグリア細胞の間のオリゴマーヒトタウ（ｐＳ４２２）の細胞間移動を阻害するために、又はタウ（ｐＳ４２２）により誘発されるカスパーゼ活性を減少させるために有効量の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む。１つの実施態様では、「個体」はヒトである。
さらなる態様では、本発明は、例えば上記のいずれかの治療法に使用するための、本明細書において提供される抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体のいずれかを含む医薬製剤を提供する。１つの実施態様では、医薬製剤は、本明細書において提供される抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体のいずれか及び薬学的に許容される担体を含む。別の実施態様では、医薬製剤は、本明細書において提供される抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体のいずれか及び例えば以下に記載されているような少なくとも１つの追加の治療剤を含む。
本発明の抗体は、療法において単独で又は他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と共投与され得る。
上記のこのような併用療法は、併用投与（ここでは２つ以上の治療剤が同じ製剤又は別々の製剤に含まれる）及び別々の投与（この場合には、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤又は治療剤群の投与前、同時に、及び／又は投与後に行なわれ得る）を包含する。１つの実施態様では、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いに約１か月間以内、又は約１、２、若しくは３週間以内、又は約１、２、３、４、５、若しくは６日間以内に行なう。
本発明の抗体（及び追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、局所的処置を所望する場合には病巣内投与をはじめとする、任意の適切な手段によって投与され得る。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が挙げられる。投与は、一部には投与が瞬時であるか慢性であるかに依存して、任意の適切な経路によって、例えば静脈内又は皮下注射などの注射によってであり得る。様々な時点におよぶ１回又は複数回の投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない様々な投与計画が本明細書において考えられる。
本発明の抗体は、良質な医療に沿った様式で製剤化、用量化、及び投与されるだろう。この脈絡で考慮される因子としては、処置される具体的な障害、処置される具体的な哺乳動物、個体の患者の臨床容態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与法、投与計画、及び医療従事者には公知である他の因子が挙げられる。抗体は、問題の障害を予防又は治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤と共に製剤化される必要はないが、場合によりそれと共に製剤化されてもよい。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害又は処置の種類、及び上記に考察される他の因子に依存する。これらは一般的に本明細書に記載のものと同じ用量及び投与経路で、又は本明細書に記載の用量の１〜９９％で、又は適切であると経験的に／臨床的に決定された任意の用量及び経路によって使用される。
疾患の予防又は治療のために、本発明の抗体の適切な用量（単独で又は１つ以上の他の追加の治療剤と併用して使用する場合）は、処置しようとする疾患の種類、抗体の種類、疾患の重度及び経緯、抗体が予防目的で投与されるのか治療目的で投与されるのか、以前の療法、患者の病歴及び抗体に対する応答、並びに担当医師の裁量に依存するだろう。該抗体は患者に一度に又は一連の処置において適切に投与される。疾患の種類及び重度に依存して、約１μg/kgから１５mg/kg（例えば０．５mg/kgから１０mg/kg）の抗体が、例えば１回以上の別々の投与によるものであれ、又は連続注入によるものであれ、患者への投与のための初回候補用量であり得る。１回の典型的な１日量は、上記の因子に依存して、約１μg/kgから１００mg/kg又はそれ以上の範囲であり得る。数日間又はそれ以上におよぶ反復投与では、容態に依存して、処置は一般的に、疾患症状の望ましい抑制が起こるまで持続されるであろう。抗体の例示的な１回量は、約０．０５mg/kgから約１０mg/kgの範囲内であろう。したがって、約０．５mg/kg、２．０mg/kg、４．０mg/kg、又は１０mg/kgの１つ以上の用量（又はその任意の組合せ）を患者に投与し得る。このような用量は、断続的に、例えば１週間に１回又は３週間に１回投与されてもよい（例えば患者が約２から約２０、又は例えば約６用量の抗体を受けるように）。初回のより高い添加用量に続いて、１回以上のより低用量を投与してもよい。しかしながら、他の投与処置計画も有用であり得る。この療法の進行は、慣用的な技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
例えば、処置される適応症がアルツハイマー病又は前駆期アルツハイマー病である場合、追加の治療剤はまた、ドネペジル、メマンチン、リバスチグミン、ガランタミン、リバスチグミン、メシル酸エルゴロイド、抗Ａβ抗体、及び抗αシヌクレイン抗体から選択され得る。
上記のいずれかの製剤又は治療法は、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の代わりに又はそれに加えて本発明のイムノコンジュゲートを使用して行なわれ得ることが理解される。
ＩＩＩ．製品
本発明の別の態様では、上記の障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な材料を含有している製品が提供される。製品は、容器と、容器上の又は容器と付随したラベル若しくは添付文書を含む。適切な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、静注用バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、単独で存在するか又は容態を治療、予防及び／又は診断するのに有効な別の組成物と配合されている組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る（例えば容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静注用バッグ又はバイアルであり得る）。該組成物中の少なくとも１つの活性成分が本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、該組成物が、選択された容態を処置するために使用されることを表示する。さらに、製品は、（ａ）組成物が含有されている第一の容器（ここで該組成物は、本発明の抗体を含む）；及び（ｂ）組成物が含有されている第二の容器（ここで、該組成物はさらに他の細胞傷害性剤又は別様の治療剤を含む）を含み得る。本発明のこの実施態様における製品はさらに、該組成物を使用して特定の容態を処置することができることを表示する添付文書を含み得る。代わりに又は追加して、製品はさらに、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー液、及びデキストロース溶液を含む、第二（又は第三）の容器を含み得る。それはさらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジをはじめとする、商業的見地及びユーザーの見地から望ましい他の材料も含んでいてもよい。
上記のいずれかの製品は、抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の代わりに又はそれに追加して本発明のイムノコンジュゲートを含み得ることが理解される。
ＩＶ．具体的な実施態様
１．ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するヒト化抗体であって、ここでの該抗体は、
ａ）重鎖可変ドメインに配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに配列番号０８、７７、及び１０のＨＶＲ
を含む。
２．ａ）軽鎖可変ドメインに、配列番号７１、７３、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）軽鎖可変ドメインに、配列番号７０、７２、及び１５のＨＶＲ、又は
ｃ）軽鎖可変ドメインに、配列番号１２、１４、及び７９のＨＶＲ、又は
ｄ）軽鎖可変ドメインに、配列番号７１、８１、及び１５のＨＶＲ、又は
ｅ）軽鎖可変ドメインに、配列番号１２、１４、及び７４のＨＶＲ、又は
ｆ）軽鎖可変ドメインに、配列番号１２、１４、及び７５のＨＶＲ
をさらに含む、項目１記載のヒト化抗体。
３．ａ）重鎖可変ドメインに配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに配列番号７１、７３、及び１５のＨＶＲ、又は
ｂ）重鎖可変ドメインに配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに配列番号７０、７２、及び１５のＨＶＲ、又は
ｃ）重鎖可変ドメインに配列番号０８、７７、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに配列番号１２、１４、及び７９のＨＶＲ、又は
ｄ）重鎖可変ドメインに配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに配列番号１２、１４、及び７９のＨＶＲ、又は
ｅ）重鎖可変ドメインに配列番号０８、７７、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに配列番号７１、８１、及び１５のＨＶＲ、又は
ｆ）重鎖可変ドメインに配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに配列番号１２、１４、及び７４のＨＶＲ、又は
ｇ）重鎖可変ドメインに配列番号０８、７７、及び１０のＨＶＲ、並びに、軽鎖可変ドメインに配列番号１２、１４、及び７５のＨＶＲ
を含む、項目１〜２のいずれか一項記載のヒト化抗体。
４．ａ）配列番号１９の重鎖可変ドメインと配列番号６７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｂ）配列番号６５の重鎖可変ドメインと配列番号６６の軽鎖可変ドメイン、又は
ｃ）配列番号７６の重鎖可変ドメインと配列番号７８の軽鎖可変ドメイン、又は
ｄ）配列番号１９の重鎖可変ドメインと配列番号７８の軽鎖可変ドメイン、又は
ｅ）配列番号７６の重鎖可変ドメインと配列番号８０の軽鎖可変ドメイン、又は
ｆ）配列番号６５の重鎖可変ドメインと配列番号６７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｇ）配列番号６５の重鎖可変ドメインと配列番号６８の軽鎖可変ドメイン、又は
ｈ）配列番号７６の重鎖可変ドメインと配列番号６９の軽鎖可変ドメイン
を含む、項目１〜３のいずれか一項記載のヒト化抗体。
５．ｉ）ａ）配列番号２０の重鎖可変ドメインと配列番号１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｂ）配列番号１９の重鎖可変ドメインと配列番号１６の軽鎖可変ドメイン、又は
ｃ）配列番号１９の重鎖可変ドメインと配列番号１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｄ）配列番号２１の重鎖可変ドメインと配列番号１７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｅ）配列番号６５の重鎖可変ドメインと配列番号６７の軽鎖可変ドメイン、又は
ｆ）配列番号１９の重鎖可変ドメインと配列番号６６の軽鎖可変ドメイン、又は
ｇ）配列番号７６の重鎖可変ドメインと配列番号７８の軽鎖可変ドメイン、又は
ｈ）配列番号６５の重鎖可変ドメインと配列番号７８の軽鎖可変ドメイン、又は
ｉ）配列番号６５の重鎖可変ドメインと配列番号６６の軽鎖可変ドメイン、又は
ｊ）配列番号６５の重鎖可変ドメインと配列番号６８の軽鎖可変ドメイン、又は
ｋ）配列番号７６の重鎖可変ドメインと配列番号６９の軽鎖可変ドメイン、又は
ｌ）配列番号７６の重鎖可変ドメインと配列番号８０の軽鎖可変ドメイン
から選択された第一の結合部位と、
ｉｉ）ａ）配列番号８２の重鎖可変ドメインと配列番号８５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｂ）配列番号８３の重鎖可変ドメインと配列番号８５の軽鎖可変ドメイン、又は
ｃ）配列番号８４の重鎖可変ドメインと配列番号８５の軽鎖可変ドメイン
から選択された第二の結合部位
とを含む、ヒト化二重特異的抗体。
６．前記抗体はアルツハイマー病の処置に使用するためのものである、項目１〜５のいずれか一項記載のヒト化抗体。
７．前記抗体はエフェクター機能がサイレントである、項目１〜６のいずれか一項記載のヒト化抗体。
８．前記抗体はエフェクター機能を全く有さない、項目１〜７のいずれか一項記載のヒト化抗体。
９．前記抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合する、項目１〜８のいずれか一項記載のヒト化抗体。
１０．前記抗体は、
ａ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下、及び／又は
ｂ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下、及び／又は
ｃ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下、及び／又は
ｄ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、項目２〜９のいずれか一項記載のヒト化抗体。
１１．前記抗体はヒトタウ（ｐＳ４２２）（配列番号０２）に特異的に結合し、かつヒトタウ（配列番号０１）には結合しない、項目１〜１０のいずれか一項記載のヒト化抗体。
１２．前記抗体は、重鎖可変ドメイン内の４位、２４位、及び７８位にバリン残基を有する、項目１〜１１のいずれか一項記載のヒト化抗体。
１３．前記抗体は、重鎖可変ドメイン内の７１位にアルギニン残基を有する、項目１〜１２のいずれか一項記載のヒト化抗体。
１４．前記抗体はモノクローナル抗体である、項目１〜１３のいずれか一項記載のヒト化抗体。
１５．前記抗体は、ヒトタウ（ｐＳ４２２）に結合する抗体断片であり、そして
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、項目１〜１４のいずれか一項記載のヒト化抗体。
１６．前記抗体は、
ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、又は
ｃ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
ｄ）Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
ｅ）両方の重鎖にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇの突然変異、並びに、一方の重鎖にＴ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃの突然変異、及びそれぞれの他方の重鎖にＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
ｆ）両方の重鎖にＳ２２８Ｐ及びＰ３２９Ｇの突然変異、並びに、一方の重鎖にＴ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃの突然変異、及びそれぞれの他方の重鎖にＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体である、項目１〜１４いずれか一項記載のヒト化抗体。
１７．ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であって、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号０９及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基は存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号７１、配列番号７３及び配列番号１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、
ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体。
１８．ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であって、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号０９及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基は存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号７０、配列番号７２及び配列番号１５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、
ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体。
１９．ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であって、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号０９及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基は存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１２、配列番号１４及び配列番号７４のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、
ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体。
２０．ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であって、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは、配列番号０８、配列番号７７及び配列番号１０のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基は存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号１２、配列番号１４及び配列番号７５のＨＶＲを含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、
ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体。
２１．ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であって、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６５のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基は存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６７のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、
ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体。
２２．ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であって、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６５のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基は存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６６のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、
ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体。
２３．ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であって、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６５のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基は存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６８のアミノ酸配列を含み、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、
ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体。
２４．ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体であって、
ａ）該抗体は２本の抗体重鎖を含み、各々が重鎖可変ドメインと重鎖定常領域を含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号７６のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトＩｇＧ１定常領域であり、ここでのＣ末端リジン残基は存在していても存在していなくてもよく、
ｉｉｉ）定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇのアミノ酸変化を含み、
ｂ）該抗体は２本の抗体軽鎖を含み、各々が軽鎖可変ドメインと軽鎖定常ドメインを含み、ここで
ｉ）可変ドメインは配列番号６９のアミノ酸配列を有し、
ｉｉ）定常領域はヒトκ軽鎖定常領域又はヒトλ軽鎖定常領域であり、並びに
ｃ）該抗体は、
ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合し、及び／又は
ｖ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有する完全長ヒトタウに特異的に結合し、及び／又は
ｖｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｖｉｉｉ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下のＥＣ５０値を有し、及び／又は
ｉｘ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、
ヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体。
２５．前記抗体は、軽鎖可変ドメイン内の３２位にリジン（Ｋ）アミノ酸残基を有する（番号付けはＫａｂａｔによる）、項目１〜２４のいずれか一項記載のヒト化抗体。
２６．項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体をコードしている単離された核酸。
２７．項目２６記載の核酸を含む宿主細胞。
２８．本明細書において報告されているような宿主細胞を培養し、よってヒト化抗体が産生される工程を含む、項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体の産生法。
２９．ヒト化抗体を細胞又は培養培地から回収する工程をさらに含む、項目２８記載の方法。
３０．項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
３１．追加の治療剤をさらに含む、項目３０記載の医薬製剤。
３２．追加の治療剤は抗アミロイド治療剤である、項目３１記載の医薬製剤。
３３．抗アミロイド治療剤は、抗ヒトαシヌクレイン抗体又は抗Ａβ抗体である、項目３２記載の医薬製剤。
３４．医薬品として使用するための項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体。
３５．アルツハイマー病の処置に使用するための項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体。
３６．前駆期アルツハイマー病の処置に使用するための項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体。
３７．軽度アルツハイマー病の処置に使用するための項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体。
３８．タウ（ｐＳ４２２）により誘発される神経変性症を低減させるために使用するための項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体。
３９．認知及び機能を維持するために使用するための項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体。
４０．認知及び機能の低下速度を減速させるために使用するための項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体。
４１．医薬品の製造における項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体の使用。
４２．前記医薬品はアルツハイマー病の処置のためのものである、項目３４及び４１のいずれか一項記載の使用。
４３．前記医薬品は前駆期アルツハイマー病の処置のためのものである、項目３４及び４１〜４２のいずれか一項記載の使用。
４４．前記医薬品は軽度アルツハイマー病の処置のためのものである、項目３４及び４１〜４３のいずれか一項記載の使用。
４５．前記医薬品はタウ（ｐＳ４２２）により誘発される神経変性症を低減させるためのものである、項目３４及び４１〜４４のいずれか一項記載の使用。
４６．前記医薬品は認知及び機能を維持するためのものである、項目３４及び４１〜４５のいずれか一項記載の使用。
４７．前記医薬品は認知及び機能の低下速度を減速させるためのものである、項目３４及び４１〜４６のいずれか一項記載の使用。
４８．有効量の項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、アルツハイマー病を有する個体の処置法。
４９．タウ（ｐＳ４２２）により誘発される神経変性症を低減させるために有効量の項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、個体におけるタウ（ｐＳ４２２）により誘発される神経変性症を低減させる方法。
５０．認知及び機能を維持するために有効量の項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、個体における認知及び機能を維持する方法。
５１．認知及び機能の低下速度を減速させるために有効量の項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体を個体に投与する工程を含む、個体における認知及び機能の低下速度を減速させる方法。
５２．タウ（ｐＳ４２２）により誘発される神経変性症を低減させるための、項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の使用。
５３．認知及び機能を維持するための、項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の使用。
５４．認知及び機能の低下速度を減速させるための項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の使用。
５５．項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体であって、該抗体はｉ）タウ（ｐＳ４２２）トランスジェニックマウス及びアルツハイマー病患者の脳切片上のタウ（ｐＳ４２２）に結合し；並びに／又は、タウ（ｐＳ４２２）トランスジェニック細胞中のタウ（ｐＳ４２２）を標識する、ヒト化抗体。
５６．項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体であって、該抗体は、初期及び後期段階の疾患関連型のヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合／認識する、ヒト化抗体。
５７．ヒトタウ（ｐＳ４２２）に関連したアルツハイマー病の蔓延の予防のための、項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体の使用。
５８．リソソーム膜の崩壊を低減させるための、項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体の使用。
５９．ヒトタウ（ｐＳ４２２）により誘発される不安定化及び／又は崩壊に対してリソソーム膜を安定化させるための、項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体の使用。
６０．アルツハイマー病の進行予防のための、項目１〜２５のいずれか一項記載のヒト化抗体の使用。
Ｖ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。上記に提供された一般的な記述があれば、様々な他の実施態様が実践され得ることが理解される。
材料及び方法
組換えＤＮＡ技術
標準的な方法を使用して、Sambrook, J. et al., Molecular cloning: A laboratory manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989に記載のようにＤＮＡを操作した。分子生物学的試薬は、製造業者の説明書に従って使用された。
遺伝子及びオリゴヌクレオチドの合成
所望の遺伝子セグメントは、Geneart GmbH（レーゲンスブルク、独国）での化学合成によって調製された。合成された遺伝子断片を増殖／増幅のためにＥ．ｃｏｌｉプラスミドにクローニングした。サブクローニングされた遺伝子断片のＤＮＡ配列はＤＮＡシークエンスによって確認された。あるいは、短い合成ＤＮＡ断片を、化学合成されたオリゴヌクレオチドをアニーリングすることによって又はＰＣＲを介して会合させた。それぞれのオリゴヌクレオチドは、メタビオンＧｍｂＨ社（プラネック・マーティンスリート、独国）によって調製された。
試薬
全ての市販の化学物質、抗体、及びキットは、特記されない限り製造業者のプロトコールに従って提供された通りに使用された。
実施例１
ウサギ抗体の調製及び精製
免疫化
チャールズリバーラボラトリーズインターナショナル社のニュージーランドホワイト（ＮＺＷ）ウサギを免疫化に使用した。キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合させたリン酸化ペプチドタウ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］を、１mg/mlの濃度でｐＨ７．０のＫ３ＰＯ４緩衝液に溶解し、安定なエマルションが生成されるまで完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）と混合（１：１）した。３匹のウサギがエマルション２mlの皮内（i.d.）注射を受け、その後、それぞれ１mlずつ１週間間隔で２回目の筋肉内（i.m.）注射及び３回目の皮下（s.c.）注射を受けた。４回目の１mlの筋肉内注射を２週間後に行ない、その後、１mlの２回のさらに他の皮下注射を４週間間隔で行なった。各動物の１０mlの末梢血試料を、３回目、４回目、５回目及び６回目の注射の４〜６日後に回収し、ＦＡＣＳでの単一細胞の選別のために使用した。各動物の追加の０．５mlの血清を同時に回収し、そしてタウ（４１６〜４６３）［ｐＳ４２２］特異的抗体応答の決定のために使用した。
抗体応答
免疫化に対する抗体応答は、血清の連続希釈によってＥＬＩＳＡを使用して決定され、ストレプトアビジンで予めコーティングされた９６ウェルのマイクロタイタープレート（ＭＣ１３４７、Micro Coat Biotechnologie GmbH、ベルンリート、独国）上で１ウェルあたり３０ngのビオチニル化タウ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］を、１×ＰＢＳ中で４℃で一晩インキュベートした。検出のために、１：１６０００希釈率のセイヨウワサビペルオキシダーゼに連結させたヤギ抗ウサギＩｇＧ（ジャクソン研究所）を使用した。ロシュ・ダイアノグスティックスＧｍｂＨ製のテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を沈殿させるＢＭブルーＰＯＤ基質のすぐ使用可能な溶液を可視化のために使用した。反応は１Ｎ ＨＣｌを介して停止させ、そして４５０／６９０nmによってTecan社のインフィニットで測定した。
Ｂ細胞のクローニング
プレートのコーティング
ストレプトアビジンでコーティングされた無菌６ウェルプレート（細胞培養等級）を、各々ＰＢＳ中０．５〜１μg/mlの濃度の、３つのビオチニル化対照ペプチドの混合物（リン酸化されていないタウ（４１６〜４３０）、ＭＣＡＫ＿ヒト（８８〜１０２）［９５−ｐＳｅｒ］及びＭＡＰ２＿ヒト（１８０２〜１８１６）［ｐＳｅｒ−１８０２］）又はビオチニル化リン酸化ペプチドタウ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］のいずれかと共に室温で１時間インキュベートした。プレートを使用前に無菌ＰＢＳで３回洗浄した。６ウェル細胞培養プレートを、炭酸緩衝液（０．１Ｍ重炭酸ナトリウム、３４mMの炭酸水素二ナトリウム、ｐＨ９．５５）中２μg/mlのＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）を用いて４℃で一晩コーティングした。プレートを使用前に無菌ＰＢＳで３回洗浄した。
ウサギ末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の単離
ＥＤＴＡを含有している全血を１×ＰＢＳを用いて２倍に希釈し、その後、哺乳動物用のlympholyte（セダーラン・ラボラトリーズ社）での密度遠心分離を行ない、これはウサギＰＢＭＣを単離するために実施された。抗体を染色する前にＰＭＢＣを２回洗浄した。
ＥＬ−４ Ｂ５培地
１０％ＦＣＳ（ハイクローン社、ローガン、ＵＴ州、米国）、２mMグルタミン、１％ペニシリン／ストレプトマイシン溶液（ＰＡＡ社、パシング、オーストリア）、２mMピルビン酸ナトリウム、１０mM ＨＥＰＥＳ（パンバイオテック社、アイデンバッハ、独国）及び０．０５mM βメルカプトエタノール（ギブコ社、ペイズリー、スコットランド）で補充された、ＲＰＭＩ １６４０（パンバイオテック社、アイデンバッハ、独国）を使用した。
マクロファージ／単球の枯渇
無菌６ウェルプレート（細胞培養等級）を使用して、非特異的接着を通してマクロファージ及び単球を枯渇させた。ウェルはＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）又はストレプトアビジンのいずれか及び対照ペプチドを用いてコーティングされた。各ウェルに、最大４mlの培地及び免疫化ウサギ由来の６×１０６個以下の末梢血単核細胞を充填し、そして３７℃のインキュベーター中で１時間結合させた。上清中の５０％の細胞をパニング工程に使用し；残りの５０％の細胞を免疫蛍光染色及び単一細胞の選別に直接かけた。
ペプチド上でのＢ細胞のパニング
ストレプトアビジン及びビオチニル化ペプチドタウ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］を用いてコーティングされた６ウェル組織培養プレートに、培地４mlあたり６×１０６個以下の細胞を播種し、そして３７℃のインキュベーター中で１時間結合させた。ウェルを１×ＰＢＳで１〜２回注意深く洗浄することによって接着していない細胞を除去した。残りの粘着性の細胞は、３７℃のインキュベーター中でトリプシンによって１０分間かけて剥がし、その後、培地で２回洗浄した。免疫蛍光染色まで細胞を氷上に保持した。
免疫蛍光染色及び単一細胞の選別
単一細胞の選別のために使用された抗ウサギＩｇＧ ＦＩＴＣは、ＡｂＤセロテック社（ＳＴＡＲ１２１Ｆ、デュッセルドルフ、独国）製であった。表面染色のために、枯渇工程及びパニング工程からの細胞を、ＰＢＳ中の抗ウサギＩｇＧ ＦＩＴＣ抗体と共に４℃の冷暗所で回転させながら３０分間インキュベートした。遠心分離後、上清を吸引によって除去した。ＰＢＭＣを２サイクルの遠心分離にかけ、そして氷冷ＰＢＳで洗浄した。最後に、ＰＢＭＣを氷冷ＰＢＳ中に再懸濁し、そして直ちにＦＡＣＳ分析にかけた。５μg/mlの濃度のヨウ化プロピジウム（ＢＤファーミンゲン社、サンディエゴ、ＣＡ州、米国）をＦＡＣＳ分析の前に加えて、死滅細胞と生細胞を区別した。ＦＡＣＳを、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤバイオサイエンシーズ社、米国）を備えたベクトンディッキンソン社のＦＡＣＳＡｒｉａを使用して実施し、そして単一のＦＩＴＣで標識された生細胞を９６ウェルプレートに沈着させた。
Ｂ細胞培養
Ｂ細胞培養液は、Zubler, R.H. et al., J. Immunol. 134 (1985) 3662-3668によって記載されたものと類似した方法によって調製された。簡潔に言えば、単一細胞選別されたＢ細胞を、３７℃のインキュベーター中５％ＣＯ２雰囲気中、パンソルビン細胞（１：２００００）（カルビオケム（メルク社）、ダルムシュタット、独国）、５％ウサギ胸腺細胞上清、及びγ放射線照射されたＥＬ−４−Ｂ５マウス胸腺腫細胞（２×１０４個／ウェル）を含む２１０μl/ウェルのＥＬ−４ Ｂ５培地を含む９６ウェルプレート中で７日間培養した。Ｂ細胞培養上清をスクリーニングのために除去し、細胞を可変領域遺伝子のクローニングのために直ちに収集したか、又は１００μlのＲＬＴ緩衝液（キアゲン社、ヒルデン、独国）中で−８０℃で凍結させた。
Ｂ細胞クローンのスクリーニング
Ｂ細胞培養上清を、ＥＬＩＳＡによってビオチニル化タウ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］への結合についてスクリーニングした。リン酸化されていないタウ（４１６〜４３０）、ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）及び関連性のないリン酸化ペプチドＭＣＡＫ＿ヒト（８８〜１０２）［９５−ｐＳｅｒ］を、対照抗原として使用した。ＥＬＩＳＡプレートの調製のために、ストレプトアビジンで予めコーティングされたマイクロタイタープレートを、５０ng/mlのビオチニル化タウ（４１５〜４３０）［ｐＳ４２２］と共に室温で１時間インキュベートした。ＫＬＨ又は対照ペプチドを用いてのコーティングは、１μg/mlで実施された。Ｂ細胞上清を１：５から１：１０まで希釈し、そして抗原でコーティングされたマイクロタイタープレート中で６０分間インキュベートした。十分に洗浄した後、ウサギ抗体の結合を、ヒツジ抗ウサギＩｇＧジゴキシゲニンコンジュゲート検出抗体（ケミコン社、ＡＱ３０１Ｄ）を使用して検出した。ＴＭＢと共に室温でインキュベートした後、３７０nmから４９２nmにおける吸光度を測定した。ビオチニル化タウ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］を用いてバックグラウンドを上回るシグナルを生じるがＫＬＨ及びＭＣＡＫ＿ヒト（８８〜１０２）［９５−ｐＳｅｒ］を用いては生じないＢ細胞クローンをさらに考察し、そして可変領域遺伝子クローニングにかけた。
ＶドメインのＰＣＲによる増幅及びシークエンス
全ＲＮＡを、ヌクレオスピン（登録商標）８/９６ＲＮＡキット（マッハライナーゲル社;７４０７０９．４、７４０６９８）を使用して製造業者のプロトコールに従って調製した。全ての工程は、epMotion 5075リキッドハンドリングシステム（エッペンドルフ社）で行なわれた。ＲＮＡを６０μlのＲＮアーゼ非含有の水を用いて溶出した。ＲＮＡ ６μlを使用して、製造業者の説明書に従ってSuperscript IIIファーストストランド合成スーパーミックス（インビトロジェン社１８０８０−４００）及びオリゴｄＴプライマーを使用して逆転写酵素反応によってｃＤＮＡを生成した。ｃＤＮＡ ４μlを使用して、重鎖についてはrbHCfinal.up及びrbHCfinal.doプライマー、並びに軽鎖についてはrbLCfinal.up及びrbLCfinal.doプライマーを使用して最終容量５０μl中でAccuPrimeスーパーミックス（インビトロジェン社１２３４４−０４０）を用いて免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を増幅した（以下の表を参照されたい）。ＰＣＲ条件は以下の通りであった：９４℃で５分間のホットスタート；９４℃で２０秒間、７０℃で２０秒間、６８℃で４５秒間の３５サイクル；及び６８℃で７分間の最終伸張。
５０μL中８μlのＰＣＲ溶液を、４８Ｅ−Ｇｅｌ２％（インビトロジェン社、Ｇ８００８−０２）にローディングした。陽性ＰＣＲ反応を、製造業者のプロトコールに従ってNucleoSpin（登録商標）Extract IIキット（マッハライナーゲル社；７４０６０９２５０）を使用して洗浄し、溶出緩衝液 ５０μlで溶出した。精製されたＰＣＲ産物 １２μlを、重鎖についてはrbHCfinal.up及びrbHCfinal.do、並びに軽鎖についてはrbLCfinal.up及びrbLCfinal.doを使用して両方向に直接シークエンスした（上記の表を参照されたい）。
ウサギモノクローナル抗体及びウサギ／マウスキメラ抗体の組換え発現
ウサギモノクローナル抗体の組換え発現のために、ＶＨ又はＶＬをコードしているＰＣＲ産物を、オーバーハングクローニング法によってｃＤＮＡとして発現ベクターにクローニングした（Haun, R.S. et al., BioTechniques 13 (1992) 515-518; Li, M.Z., et al., Nature Methods 4 (2007) 251-256）。ウサギκ又はγ定常領域及びＶＬ又はＶＨ挿入断片をコードしている鎖状発現プラスミドを、オーバーラッピングプライマーを使用してＰＣＲによって増幅した。精製されたＰＣＲ産物を、一本鎖オーバーハングを生成するＴ４ＤＮＡポリメラーゼと共にインキュベートした。反応をｄＣＴＰの添加によって停止した。次の工程では、プラスミド及び挿入断片を合わせ、部位特異的組換えを導入するＲｅｃＡと共にインキュベートした。組換えプラスミドをＥ．ｃｏｌｉに形質転換した。翌日、成長したコロニーを拾い上げ、プラスミド調製、制限酵素分析、及びＤＮＡシークエンスによって正しい組換えプラスミドについて試験した。抗体の発現のために、単離されたＨＣ及びＬＣプラスミドをＨＥＫ２９３細胞に一過性に共トランスフェクトし、そして上清を１週間後に収集した。ウサギマウスキメラ抗体のクローニング及び発現のために、ＶＨ領域及びＶＬ領域をＰＣＲによって増幅し、そしてマウス定常κ又はマウス定常γ１領域を含有している発現ベクターにサブクローニングした。ウサギ／マウスキメラＨＣ及びＬＣプラスミドを単離し、正しい挿入について制限酵素分析及びＤＮＡシークエンスによって試験し、そしてＨＥＫ２９３細胞に一過性に共トランスフェクトした。上清をトランスフェクションから１週間後に収集した。
抗体の精製
組換え発現したウサギ抗体を細胞培養上清からMabSelectSuRe（商標）カラム（ＧＥヘルスケア社）で精製した。試料をローディングする前に、カラムを２５mmol/Lのトリス−ＨＣｌ、２５mmol/LのＮａＣｌ、ｐＨ７．４を用いて平衡化した。抗体の溶出は、５０mmol/Lの酢酸塩ｐＨ３．１４を用いて達成された。溶出した試料を直ちに脱塩カラム（セファデックスＧ２５、ＧＥヘルスケア社）にローディングし、２０mmol/LのＨｉｓ−ＨＣｌ、１４０mmol/LのＮａＣｌ（ｐＨ６．０）で溶出した。この緩衝液は、精製された抗体の保存にも使用された。一般的な保存温度は４℃であり、精製プロセス中には室温であり、分注後には−８０℃であった。細胞培養上清からの組換え発現されたウサギ／マウスキメラ抗体を、MabSelectSuRe（商標）カラム（ＧＥヘルスケア社）で精製した。試料をローディングする前に、カラムを１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４を用いて平衡化した。抗体の溶出は、１００mmol/Lのクエン酸塩（ｐＨ３．０）を用いて達成された。溶出された試料を２mol/Lのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ９．０）を用いて直ちに中和した。その後、抗体をサイズ排除カラム（スーパーデックス２００、ＧＥヘルスケア社）にローディングし、そして２０mmol/LのＨｉｓ−ＨＣｌ、１４０mmol/LのＮａＣｌ（ｐＨ６．０）で溶出した。この緩衝液は、精製された抗体の保存にも使用された。一般的な保存温度は４℃であり、精製プロセス中には室温であり、分注後には−８０℃であった。
実施例２
抗タウｐＳ４２２モノクローナルウサギ抗体は、ｐＳ４２２においてリン酸化されたタウに対して高度に選択的であり、そしてタウｐＳ４２２の線維状凝集物に結合する。
ＥＬＩＳＡ
ウサギモノクローナル抗体をＨＥＫ２９３細胞において組換え発現した。細胞培養上清又は精製されたウサギ抗体を、ビオチニル化タウ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］、リン酸化されていないタウ（４１６〜４３０）、ＫＬＨ及び関連性のないリン酸化ペプチドＭＣＡＫ＿ヒト（８８〜１０２）［９５−ｐＳｅｒ］への結合についてＥＬＩＳＡによって試験した。ＥＬＩＳＡプレートの調製のために、ストレプトアビジンで予めコーティングされたマイクロタイタープレートを、５０ng/mlのビオチニル化タウ（４１５〜４３０）［ｐＳ４２２］と共に室温で１時間インキュベートした。ＫＬＨ又は対照ペプチドを用いてのコーティングは、１μg/mlで実施された。ウサギ抗タウｐＳ４２２抗体（アブカム社ＡＢ５１０７１）又はウサギ抗体含有上清を、抗原で標識されたマイクロタイタープレート中で様々な濃度で６０分間インキュベートした。十分に洗浄した後、ウサギ抗体の結合を、ヒツジ抗ウサギＩｇＧジゴキシゲニンコンジュゲート検出抗体（ケミコン社、ＡＱ３０１Ｄ）を使用して検出した。ＴＭＢと共に室温でインキュベートした後、３７０nmから４９２nmでの吸光度を測定した。抗体の結合はそのＥＣ５０値によって特徴付けられた。ビオチニル化タウ（４１６〜４３０）［ｐＳ４２２］及びリン酸化されていないタウ（４１６〜４３０）ペプチドへの抗体の結合は、そのＥＣ５０値によって特徴付けられた。ＫＬＨ又はＭＣＡＫリン酸化ペプチドとの交差反応性は、高濃度の、すなわち１：５の希釈度の細胞培養上清の単一点での測定によって推定された。結果を以下の表に示す。タウリン酸化ペプチドに対する結合のＥＣ５０値は、タウペプチドに対する結合のＥＣ５０値よりも１００倍以上低いことが判明し、このことは、リン酸化されていないタウペプチドと比較してリン酸化されたタウ断片に対する少なくとも１００倍高い選択性を示す。ＫＬＨ及びＭＣＡＫ対照リン酸化ペプチドに対する結合は、全ての抗体においてバックグラウンドレベルであり、これは、タウリン酸化ペプチドによる最大測定値の約１＜３％である。
可溶性の完全長のタウｐＳ４２２及び凝集した完全長のタウｐＳ４２２に対する特異性も試験した。タウｐＳ４２２の線維状凝集物（３００μg/ml）を、ポリスチレンを基材としたマキシソーブマイクロタイタープレート（ヌンク社）上に室温（ＲＴ）で一晩かけてコーティングした。同じように、可溶性の完全長のタウ及びタウｐＳ４２２をマキシソーブマイクロタイタープレート上にコーティングした。ウサギ抗タウｐＳ４２２抗体対照（アブカム社ＡＢ５１０７１）又は精製されたウサギ抗体を加え、そして１０００ng/ml以下の濃度で６０分間インキュベートした。十分に洗浄した後、ウサギ抗体の結合を、ヒツジ抗ウサギＩｇＧジゴキシゲニンコンジュゲート検出抗体（ケミコン社、ＡＱ３０１Ｄ）を使用して検出した。ＴＭＢと共に室温でインキュベートした後、３７０nmから４９２nmでの吸光度を測定した。抗体の結合は、そのＥＣ５０値によって特徴付けられた。結果を以下の表に示す。
ウサギモノクローナル抗体は、１ng/ml未満のＥＣ５０値でタウ−ｐＳ４２２タンパク質に結合した。線維状タウｐＳ４２２は、０．４ng/mlから１４ng/mlまでのＥＣ５０値で検出された。リン酸化されていない完全長のタウタンパク質への結合についてのシグナルは、バックグラウンドレベルとは区別できなかった。それ故、各々の抗体は、タウと比較して少なくとも１００倍の選択性でタウｐＳ４２２及び線維状タウｐＳ４２２に結合すると推定された。
ビアコア（商標）
線維状タウｐＳ４２２凝集物への結合をさらに調べ、ビアコア（商標）分析によって確認した。測定は、ビアコア３０００機器を使用して３７℃で実施された。システム及び試料緩衝液はＨＢＳ−ＥＰ（１０mM ＨＥＰＥＳ、１５０mM ＮａＣｌ、３．４mM ＥＤＴＡ、０．００５％ポリソルベート２０（ｖ/ｖ））であった。ビアコア（商標）ＣＭ５センサーチップを予め調整された手順にかけた。順に０．１％ＳＤＳ、５０mM ＮａＯＨ、１０mM ＨＣｌ、及び１００mM Ｈ３ＰＯ４を３０秒間かけてフローセルＦＣ１、ＦＣ２、ＦＣ３、及びＦＣ４に注入した。アミンカップリング手順を製造業者の説明書に従ってビアコア３０００（商標）ウィザードｖ.４．１を使用して実施した。ＥＤＣ／ＮＨＳによるセンサー表面の活性化後、リン酸選択的ではない抗タウ抗体ｍＡｂ＜タウ＞Ｍ−４／５３−ＩｇＧをセンサーフローセルＦＣ２、ＦＣ３及びＦＣ４上に固定した。対照として、関連性のない抗原を認識する、ＣＫ−ＭＭ（クレアチンキナーゼアイソタイプ）に対する抗体を、ＦＣ１フローセル上に捕捉した。ＭＡｂ＜タウ＞Ｍ−４／５３−ＩｇＧ及びＣＫ−ＭＭに対する抗体を、１０mM ＮａＡｃ（ｐＨ５．０）中３０μg/mlに希釈し、そして１０μl/分で７分間の接触時間かけて注入して、１０，０００ＲＵの抗体捕捉システムを固定した。表面を、１Ｍエタノールアミンを用いての飽和によって失活させた。センサーを、溶液中の分析物としてのリン酸化線維状タウタンパク質（ＨＢＳ−ＥＰで１：１００に希釈されたストック液０．３mg/ml）を１０μl/分で用いて２分間の５サイクルによって調整した。再生は、３０μl/分の１０mMグリシン（ｐＨ２．５）を３分間用いて行なわれた。ｍＡｂ４/５３に結合している分析物はｐタウ線維を解離しないと推定された。なぜなら、ｍＡｂ４/５３からのｐタウ線維の解離は全く観察できなかったからである。全てのさらに他の測定サイクルでは、０．３mg/mlのｐタウ線維をＨＢＳ−ＥＰ緩衝液で１：１００に希釈し、そして１０μl/分で１分間かけて注入し、異種のサンドイッチ形式でそれぞれの抗体分析物にｐタウを提示した。抗体分析物をＨＢＳ−ＥＰ緩衝液で１００nMの濃度まで希釈し、そして２０μl/分で３分間かけてシステムに注入した。解離から３分後、センサー表面を、１０mMグリシン（ｐＨ２．５）を１００μ/分で１分間かけて２回注入し、その後、ＨＢＳ−洗浄液を１００μl/分で１５秒間かけて注入することによって再生した。相互作用の会合相及び解離相をモニタリングした。溶液中の抗体分析物は二価であるので、結合力の負荷された抗体−ｐタウの動態は、迅速な親和性に基づいた初期の解離段階、続いて後期の複雑な解離における結合力は安定化されているが律速である動態段階からなる、二相性解離モデルによって特徴付けられた。分析物の注入が終了してから１０秒後（初期）及び５０秒後（後期）に、ｋｄ及び半減期（解離）を定量した（可能である場合）。動態測定を、二重基準手順を使用して評価した。第一に、ＦＣ１基準からのシグナルを差し引いて、緩衝液のバルク効果及び非特異的結合を修正した。第二に、０nMの分析物の注入を差し引いて、それぞれの捕捉システムからの一次抗体の解離を修正した。反応速度を、ラングミュア１．１解離フィットモデルを使用してビアコア（商標）評価ソフトウェアｖ．４．１に従って評価した。抗原／抗体複合体の安定性半減期（分）を、式Ｉｎ（２）/６０×ｋｄに従って計算した。
結果を以下の表に要約する。
実施例３
アルツハイマー病患者の脳切片中の細胞内ｐタウに対する抗タウｐＳ４２２モノクローナルウサギ抗体の結合
モノクローナルウサギ抗タウｐＳ４２２抗体によるアルツハイマー病脳組織におけるｐタウ病態の特異的かつ高感度な免疫組織化学的検出を、アルツハイマー病患者のヒト脳組織の凍結切片を使用して免疫蛍光染色実験によって調べた。ウサギＩｇＧを、ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８（登録商標）コンジュゲート二次抗体（インビトロジェン社／モレキュラープローブ社 Ａ１１０３４）によって検出した。ｐタウ沈着物及び線維の特異的かつ高感度な染色は、クローンＭａｂ００５、Ｍａｂ０１９、Ｍａｂ０２０、Ｍａｂ０８５、Ｍａｂ０８６、及びＭａｂ０９７について明白であった。大きな神経原線維変化及び細長い糸屑状構造物のような細胞内ｐタウ沈着物を認めることができた。調べた全てのクローンについて０．０８〜０．０１６μg/mlの最小有効濃度が決定され、これは、本物のヒトｐタウ沈着物への非常に高感度な結合を示す。
実施例４
ウサギ抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体のヒト化
本明細書において使用される「可変ドメイン」（軽鎖（ＶＬ）の可変ドメイン、重鎖（ＶＨ）の可変ドメイン）は、タウ（ｐＳ４２２）抗原に対する抗体の結合に直接関与している軽鎖ドメインと重鎖ドメインの各対を示す。可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメインは同じ一般的な構造を有し、そして各々のドメインは４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含み、その領域の配列は広く保存され、３つの「超可変領域」によって接続されている。
ウサギ抗体Ｍａｂ０８６のＶＨドメイン及びＶＬドメインの構造をコンピューターで分析し、そしてヒトＶＨドメイン及びＶＬドメインの構造データベース（ＩＭＧＴ）と比較した。一連の構造的に最も類似したＶドメインを、選択されたヒトＶＨドメイン及びＶＬドメインへのウサギ抗体のＣＤＲの移植のために選択した。さらに、一次配列の類似性を考慮して、ヒトＶドメインレパートリーに対してウサギ抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインの一次配列をアラインさせることによってヒトＶドメインの選択を狭めた。ウサギ親残基へのヒトフレームワーク領域内の復帰突然変異を、いくつかのヒト化変異体に導入した。同様に、ＣＤＲ内の突然変異をいくつかの変異体に導入し（適切な場合）、抗原に対する親和性を潜在的に向上させ、ＣＤＲの三次構造を維持し、そしてシステイン残基又は抗体の精製後に修飾を受ける可能性のある残基のような望ましくない特色を除去した。
各々のヒト化変異体を含有している重鎖及び軽鎖のベクターを、行列状にマイクロタイター培養プレート中のＨＥＫ２９３懸濁細胞に共トランスフェクトして、可能な全ての軽鎖／重鎖の組合せを有する完全なサイズのＩｇＧを発現している細胞培養液を得た。３７℃で５日間培養した後、上清を収集し、そしてマイクロタイター規模でプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーによって精製した。
実施例５
組換え発現ベクターの作製
ａ）ヒトＩｇＧ１定常領域を使用した免疫グロブリン重鎖の発現のためのベクターの作製
ヒトＩｇＧ１定常領域（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３）とウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来のヒト化抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体ＶＨドメインとを含む融合遺伝子をコードしているヒト化重鎖を、それぞれの抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）特異的抗体ＶＨドメインをコードしているＤＮＡ断片を、ヒトＩｇＧ１定常領域をコードしている配列エレメントに融合させることによって構築した。
ヒトＩｇＧ１定常領域は、以下のアミノ酸配列を有する：
発現ベクターはまた、ベクターｐＵＣ１８に由来する複製起点（これはＥ．ｃｏｌｉにおけるこのプラスミドの複製を可能とする）と、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるアンピシリン耐性を付与するβ−ラクタマーゼ遺伝子とを含んでいた。
抗体重鎖の転写単位は、５’から３’の方向に以下の機能的エレメントを含む：
−イントロンＡを含むヒトサイトメガロウイルス（Ｐ−ＣＭＶ）由来の最初期エンハンサー及びプロモーター、
−ヒト重鎖免疫グロブリン５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−重鎖可変（ＶＨ）ドメインをコードしている核酸、
−ヒトＩｇＧ１定常領域をコードしている核酸、及び
−ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ ｐＡ）。
ｂ）ヒトＩｇ−κ定常領域を使用した免疫グロブリン軽鎖の発現のためのベクターの作製
ヒトＩｇ−κ定常領域（ＣＬ−κ）とウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（κ）ドメインとを含む、ヒト化κ軽鎖をコードしている融合遺伝子を、それぞれの抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（κ）ドメインをコードしているＤＮＡ断片を、ヒトＩｇ−κ定常領域をコードしている配列エレメントに融合することによって構築した。
ヒトＩｇ−κ定常領域は、以下のアミノ酸配列を有する：
発現ベクターはまた、ベクターｐＵＣ１８由来の複製起点（これはＥ．ｃｏｌｉにおけるこのプラスミドの複製を可能とする）と、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるアンピシリン耐性を付与するβ−ラクタマーゼ遺伝子とを含んでいた。
抗体κ軽鎖の転写単位は、５’から３’の方向に以下の機能的エレメントを含む：
−イントロンＡを含むヒトサイトメガロウイルス（Ｐ−ＣＭＶ）由来の最初期エンハンサー及びプロモーター、
−ヒト重鎖免疫グロブリン５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−軽鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードしている核酸、
−ヒトＩｇ−κ定常領域をコードしている核酸、及び
−ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ ｐＡ）。
ｃ）ヒトＩｇ−λ定常領域を使用した免疫グロブリン軽鎖の発現のためのベクターの作製
ヒトＩｇ−λ定常領域（ＣＬ−λ）とウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（λ）ドメインとを含む、ヒト化λ軽鎖をコードしている融合遺伝子を、それぞれの抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（λ）ドメインをコードしているＤＮＡ断片を、ヒトＩｇ−λ定常領域をコードしている配列エレメントに融合することによって構築した。
ヒトＩｇ−λ定常領域は以下のアミノ酸配列を有する：
発現ベクターはまた、ベクターｐＵＣ１８由来の複製起点（これはＥ．ｃｏｌｉにおけるこのプラスミドの複製を可能とする）と、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるアンピシリン耐性を付与するβ−ラクタマーゼ遺伝子とを含んでいた。
抗体λ軽鎖の転写単位は、５’から３’の方向に以下の機能的エレメントを含む：
−イントロンＡを含むヒトサイトメガロウイルス（Ｐ−ＣＭＶ）由来の最初期エンハンサー及びプロモーター、
−ヒト重鎖免疫グロブリン５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−軽鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードしている核酸、
−ヒトＩｇ−λ定常領域をコードしている核酸、及び
−ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ ｐＡ）。
ｄ）ヒトＩｇ−κ定常領域を使用した免疫グロブリンκ軽鎖の発現のためのベクターの作製
ヒトＩｇ−κ定常領域（ＣＬ−κ）とウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（κ）ドメインとを含む、ヒトκ軽鎖をコードしている融合遺伝子を、それぞれの抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（κ）ドメインをコードしているＤＮＡ断片を、ヒトＩｇ−κ定常領域をコードしている配列エレメントに融合することによって構築した。構築物はゲノム構成であり、すなわち、イントロンがシグナルペプチド内及びＶＬ（κ）ドメインとＣＬ−κドメインとの間に存在していた。
発現ベクターはまた、ベクターｐＵＣ１８由来の複製起点（これはＥ．ｃｏｌｉにおけるこのプラスミドの複製を可能とする）と、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるアンピシリン耐性を付与するβ−ラクタマーゼ遺伝子とを含んでいた。
抗体κ軽鎖の転写単位は、５’から３’の方向に以下の機能的エレメントを含む：
−ヒトサイトメガロウイルス（Ｐ−ＣＭＶ）由来の最初期エンハンサー及びプロモーター、
−ヒト重鎖免疫グロブリン５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−軽鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードしている核酸、
−ヒトＩｇＧκ定常領域、及び
−ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ ｐＡ）。
ｅ）ヒトＩｇ−λ定常領域を使用した免疫グロブリンλ軽鎖の発現のためのベクターの作製
ヒトＩｇ−λ定常領域（ＣＬ−λ）とウサギ抗体Ｍａｂ０８６由来の抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（λ）ドメインとを含む、ヒトＩｇ−λ軽鎖をコードしている融合遺伝子を、それぞれの抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体ＶＬ（λ）ドメインをコードしているＤＮＡ断片を、ヒトＩｇ−λ定常領域をコードしている配列エレメントに融合することによって構築した。構築物はゲノム構成であり、すなわち、イントロンがシグナルペプチド内及びＶＬ（λ）ドメインとＣＬ−λドメインとの間に存在していた。
発現ベクターはまた、ベクターｐＵＣ１８由来の複製起点（これはＥ．ｃｏｌｉにおけるこのプラスミドの複製を可能とする）と、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるアンピシリン耐性を付与するβ−ラクタマーゼ遺伝子とを含んでいた。
抗体λ軽鎖の転写単位は、５’から３’の方向に以下の機能的エレメントを含む：
−ヒトサイトメガロウイルス（Ｐ−ＣＭＶ）由来の最初期エンハンサー及びプロモーター、
−ヒト重鎖免疫グロブリン５’−非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
−マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
−軽鎖可変（ＶＬ）ドメインをコードしている核酸、
−ヒトＩｇＧλ定常領域、及び
−ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ ｐＡ）。
実施例６
抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の組換え産生
抗体を、Ｆ１７培地（インビトロジェン社）中で培養した一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞（ヒト胚性腎細胞株２９３由来）において産生した。実施例５に記載のようなそれぞれのベクターのトランスフェクションのために「２９３−Ｆｒｅｅ」トランスフェクション試薬（ノバジェン社）を使用した。抗体を個々の発現プラスミドから発現させた。トランスフェクションを製造業者の説明書に明記されている通りに実施した。組換え抗体を含有している細胞培養上清を、トランスフェクションの３〜７日後に収集した。上清を精製するまで低温（例えば−８０℃）で保存した。
例えばＨＥＫ２９３細胞におけるヒト免疫グロブリンの組換え発現に関する一般的な情報は、Meissner, P. et al., Biotechnol. Bioeng. 75 (2001) 197-203に示されている。
実施例７
組換え抗ヒトタウ（ｐＳ４２２）抗体の精製
抗体を含有している培養上清をろ過し、そして２回のクロマトグラフィー工程によって精製した。
抗体を、ＰＢＳ（１mM ＫＨ２ＰＯ４、１０mM Ｎａ２ＨＰＯ４、１３７mM ＮａＣｌ、２．７mM ＫＣｌ）（ｐＨ７．４）を用いて平衡化されたHiTrap MabSelectSuRe（ＧＥヘルスケア社）を使用してアフィニティクロマトグラフィーによって捕捉した。結合していないタンパク質を、平衡緩衝液を用いて洗浄することによって除去し、そして抗体を２５mMのクエン酸緩衝液（ｐＨ３．１）を用いて回収し、これは溶出後直ちに１Ｍトリス塩基（ｐＨ９．０）を用いてｐＨ６．０に調整された。
スーパーデックス２００（商標）（ＧＥヘルスケア社）でのサイズ排除クロマトグラフィーを、２回目の精製工程として使用した。サイズ排除クロマトグラフィーを、２０mMヒスチジン緩衝液、０．１４M ＮａＣｌ（ｐＨ６．０）中で実施した。抗体含有溶液を、バイオマックス−ＳＫ膜（ミリポア社、ビレリカ、ＭＡ州、米国）を備えたウルトラフリー−ＣＬ遠心式フィルターユニットを用いて濃縮し、そして−８０℃で保存した。
実施例８
動態スクリーニング
動態スクリーニングを、Schraeml et al.（Schraeml, M. and M. Biehl, Methods Mol. Biol. 901 (2012) 171-181）に従ってビアコアＣＭ５センサーを積載したビアコア４０００機器で実施した。ビアコア４０００機器は、ソフトウェアバージョンＶ１．１の制御下にあった。ビアコアＣＭ５シリーズＳチップを機器に積載し、そして製造業者の説明書に従って水力学的に対処及び事前調整を行なった。機器の緩衝液はＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（１０mM ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０mM ＮａＣｌ、１mM ＥＤＴＡ、０．０５％（ｗ/ｖ）Ｐ２０）であった。抗体の捕捉システムをセンサー表面上で調製した。１０mMの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）中３０μg/mlでヒトＩｇＧ−Ｆｃ特異性を有するポリクローナルヤギ抗ヒト抗体（ジャクソン研究所）を、機器のフローセル１、２、３及び４内のスポット１、２、４及び５に１０，０００ＲＵでＮＨＳ／ＥＤＣ化学反応を使用して固定した。各フローセルにおいて抗体はスポット１及びスポット５に捕捉された。スポット２及びスポット４は基準スポットとして使用された。センサーを、１Ｍエタノールアミン溶液を用いて失活させた。ヒト化抗体誘導体は、１mg/mlのＣＭＤ（カルボキシメチルデキストラン）の補充された機器緩衝液中４４nMから７０nMの濃度で適用された。抗体を３０μl/分の流速で２分間かけて注入した。表面に提示された抗体の捕捉レベル（ＣＬ）を、基準レスポンスユニット（ＲＵ）で測定した。溶液中の分析物、リン酸化ヒトタウタンパク質、リン酸化されていないヒトタウタンパク質、及びリン酸化ヒトタウ突然変異タンパク質Ｔ４２２Ｓを３００nMで３分間かけて３０μl/分の流速で注入した。解離を５分間かけてモニタリングした。捕捉システムは、全てのフローセル上への１０mMのグリシン緩衝液（ｐＨ１．７）の３０μL/分での１分間の注入によって再生された。結合終点（ＢＬ）として示される分析物の注入終了直前に記録されたシグナル、及び解離時間終了直前に記録されたシグナル（安定終点（ＳＬ））という２つの報告点を使用して、動態スクリーニング成績を特徴付けた。さらに、解離速度定数ｋｄ（１/ｓ）をラングミュアモデルに従って計算し、そして抗体／抗原複合体の半減期を、式Ｉｎ（２）/（６０×ｋｄ）に従って分で計算した。モル比（ＭＲ）を、式ＭＲ＝（結合終点（ＲＵ））／（補足レベル（ＲＵ））×（ＭＷ（抗体）/（ＭＷ（抗原））に従って計算した。センサーが適切な量の抗体リガンド捕捉レベルで設定された場合、各抗体は、溶液中の少なくとも１つの分析物に機能的に結合可能であるべきであり、これは、ＭＲ＝１．０のモル比によって示される。それから、モル比はまた、分析物の結合価の様式についての指標でもある。２つの分析物に結合する抗体についての最大結合価はＭＲ＝２であり得、それぞれのＦａｂ結合価は１である。
別の実施態様では、反応速度は、同じ実験設定を使用するが、０nM（緩衝液）、１．２nM、３．７nM、１１．１nM、３３．３nM、１００nM、及び３００nMという複数の一連の濃度の溶液中の各分析物を使用して、２５℃及び３７℃で決定された。濃度依存性結合挙動から、動態データは、製造業者の説明書に従ってビアコア評価ソフトウェア及びＲＭＡＸグローバルを用いるラングミュア１：１モデルを使用して計算された。
実施例９
ＥＬＩＳＡ
ビオチニル化されていないペプチド／タンパク質／凝集物を、コーティングされていないマキシソーブプレートに加え、ＰＢＳ中のビオチニル化ペプチド／タンパク質／凝集物を、ストレプトアビジンでコーティングされたマキシソーブプレートに加え、そしてプレートを一晩インキュベートした。上清を廃棄し、そしてウェルを９０μlの洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した。残りの反応スポットを遮断緩衝液（１×ＰＢＳ／２％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン画分Ｖ、脂肪酸非含有、ロシュ、カタログ番号１０７３５０７８００１）／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）を用いて１時間インキュベートすることによって遮断した。上清を廃棄し、そしてウェルを９０μlの洗浄緩衝液で３回洗浄した。試料及び対照抗体の、ＥＬＩＳＡ緩衝液（１×ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン画分Ｖ、脂肪酸非含有、ロシュ、カタログ番号１０７３５０７８００１）／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）による１２個の希釈液（１：２）を調製し、開始濃度は５００ng/mLであった。インキュベーション時間は室温で振盪機で６０分間であった。上清を廃棄し、そしてウェルを９０μlの洗浄緩衝液で３回洗浄した。二次抗体の溶液をＥＬＩＳＡ緩衝液中で調製した。合計して２５μlの抗体混合液をアッセイプレートの全てのウェルに移し、そしてその後、プレートを室温で振盪機で６０分間インキュベートした。上清を廃棄し、そしてウェルを９０μlの洗浄緩衝液で３回洗浄した。ＡＢＴＳ溶液２５μlを全てのウェルに加えた。４０５nmから４９２nmまでの吸光度を解読した。
実施例１０
抗ｐタウ抗体に結合しているｐタウペプチドの動態測定（補足アッセイ）
抗ｐタウ抗体に対するｐタウ断片の結合を、ビアコアＴ２００機器（ＧＥヘルスケア社）を使用して表面プラズモン共鳴によって調べた。約１０，０００共鳴単位（ＲＵ）の捕捉システム（１０μg/mlのヤギ抗ヒトＦｃ抗体；Jackson Immuno Research社；注文番号：JＩＲ １０９−００５−０９８）を、ＧＥヘルスケア社によって供給されたアミンカップリングキットを使用することによってｐＨ５．０でＣＭ５チップ（ＧＥヘルスケア社ＢＲ−１００５−３０）上に結合させた。ランニング緩衝液として、ＨＢＳ−Ｎ（ｐＨ７．４）（１０mM ＨＥＰＥＳ、１５０mM ＮａＣｌ、ｐＨ７．４、ＧＥヘルスケア社）を使用した。試料の測定のために、ランニング緩衝液及び希釈緩衝液はＰＢＳ−Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１０mMリン酸緩衝化食塩水）ｐＨ７．４であった。試料ブロックを１２℃に設定した。フローセルを２５℃に設定し、そしてランニング緩衝液で２回プライミングした。
１０μg/mlの溶液を１０μl/分の流速で３００秒間注入することによって、抗ｐタウ抗体を捕捉した。１：３の希釈液で３００nMから始めて３０μl/分の流速で溶液中の様々な濃度のｐタウ断片の１８０秒間の注入によって会合を測定した。解離相を３００秒までモニタリングし、そして試料溶液からランニング緩衝液へと切り替えることによってトリガーした。０．８５％リン酸溶液で６０秒間洗浄し、その後、１０μl/分の流速で５mMの水酸化ナトリウム溶液で６０秒間洗浄することによって表面を再生した。ヤギ抗ヒトＦｃ抗体表面から得られた応答を差し引くことによってバルク屈折率の差を修正した。ブランク注入も差し引いた（＝二重基準）。ＫＤ及び他の動態パラメーターの計算のために、ラングミュア１：１モデルを使用した。
実施例１１
ｐタウ断片に結合している抗ｐタウ抗体Ｆａｂ断片の動態測定（直接的アッセイ）
ｐタウ断片に対する抗ｐタウ抗体Ｆａｂ断片試料の結合を、ビアコアＴ２００機器（ＧＥヘルスケア社）を使用して表面プラズモン共鳴によって調べた。約２０共鳴単位（ＲＵ）のビオチニル化ｐタウ断片（０．２μg/ml；ｐタウ（４１６〜４３０）［Ｂｉ−ＸＵＵＵＵ−４１６；ｐＳｅｒ−４２２］amid）を、シリーズＳ ＳＡチップ（ＧＥヘルスケア社ＢＲ−１００５−３１）上に結合させた。固定化のためのランニング緩衝液及び希釈緩衝液はＨＢＳ−Ｎ ｐＨ７．４（１０mM ＨＥＰＥＳ、１５０mM ＮａＣｌ、ｐＨ７．４、ＧＥヘルスケア社）であった。以下の動態特徴付けのために、ランニング緩衝液及び希釈緩衝液はＰＢＳ−Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１０mMリン酸緩衝化食塩水）ｐＨ７．４であった。試料ブロックを１２℃に設定した。フローセルを２５℃に設定し、そしてランニング緩衝液で２回プライミングした。
１：３の希釈液で１００nMから始めて３０μl/分の流速で溶液中の様々な濃度の抗ｐタウ抗体Ｆａｂ断片試料の１８０秒間の注入によって会合を測定した。解離相を６００秒までモニタリングし、そして試料溶液からランニング緩衝液へと切り替えることによってトリガーした。１０μl/分の流速で６０秒間の１０mMグリシン溶液（ｐＨ１．７）の１回の注入を用いての洗浄によって表面を再生した。バルク表面から得られた応答を差し引くことによってバルク屈折率の差を修正した。ブランク注入も差し引いた（＝二重基準）。ＫＤ及び他の動態パラメーターの計算のために、ラングミュア１：１モデルを使用した。
実施例１２
完全長ｐタウに結合している抗ｐタウ抗体Ｆａｂ断片の動態測定（直接的アッセイ）
完全長ｐタウタンパク質に対する抗ｐタウ抗体Ｆａｂ断片試料の結合を、ビアコアＴ２００機器（ＧＥヘルスケア社）を使用して表面プラズモン共鳴によって調べた。約２００共鳴単位（ＲＵ）のビオチニル化ｐタウタンパク質（２μg/ml）をシリーズＳ ＳＡチップ（ＧＥヘルスケア社ＢＲ−１００５−３１）上に結合させた。固定化のためのランニング緩衝液及び希釈緩衝液はＨＢＳ−Ｎ ｐＨ７．４（１０mM ＨＥＰＥＳ、１５０mM ＮａＣｌ、ｐＨ７．４、ＧＥヘルスケア社）であった。以下の動態特徴付けのために、ランニング緩衝液及び希釈緩衝液はＰＢＳ−Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１０mMリン酸緩衝化食塩水）ｐＨ７．４であった。試料ブロックを１２℃に設定した。フローセルを２５℃に設定し、そしてランニング緩衝液で２回プライミングした。
１：３の希釈液で３００nMから始めて３０μl/分の流速で溶液中の様々な濃度の抗ｐタウ抗体Ｆａｂ断片試料の１８０秒間の注入によって会合を測定した。解離相を６００秒までモニタリングし、そして試料溶液からランニング緩衝液へと切り替えることによってトリガーした。１０μl/分の流速で６０秒間の１０mMグリシン溶液（ｐＨ１．７）の１回の注入を用いての洗浄によって表面を再生した。バルク表面から得られた応答を差し引くことによってバルク屈折率の差を修正した。ブランク注入も差し引いた（＝二重基準）。ＫＤ及び他の動態パラメーターの計算のために、ラングミュア１：１モデルを使用した。
実施例１３
ヒト−タウを過剰に発現しているマウスにおけるタウ病態に対する、抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）及び抗タウ（ｐＳ４２２）抗体（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ４９Ｇ１）の効果
最も長いヒトタウアイソフォームを過剰発現しているタウＰＳ２ＡＰＰトランスジェニックマウス（Gruninger et al., Neurobiol. Dis. 37 (2010) 294）を、抗体１（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１Ａ１）、抗体２（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ４９Ｇ１）、又はビヒクルのいずれかを用いて１６週間の期間かけて処置した。処置直前に、全てのマウスは、１回量の抗ＣＤ４抗体（０．５mg/マウス）の投与によって免疫抑制された。マウスは続いて、９カ月齢から始めてそれぞれの抗体又はビヒクルの週１回の腹腔内注射を受けた。２つの各々の抗体について、３つの別々の用量を試験した、すなわち１．７mg/kg、５mg/kg、及び１５mg/kg。マウスを最後の注射の４〜６日後に屠殺し、経心腔的灌流を行ない、そして分析のために脳を取り出した。非処置群のマウス（９カ月齢）を実験開始時に屠殺し、そして基線の比較対象として使用した。
各脳を矢状に切開し、そして個々の半球をドライアイス上で瞬間凍結させた。左半球を、イムノアッセイによるタウ、タウ（ｐＳ４２２）及びタウ凝集物の生化学的定量のために使用した。右脳半球は、タウ（ｐＳ４２２）を含有している神経原線維タウの定量的免疫組織化学的分析のために使用された。
方法
脳ホモジネートの調製
各マウスに由来する一方の脳半球を秤量し、そして１０容量の氷冷抽出緩衝液（１％プロテアーゼ阻害剤混液（カルビオケム社、５３９１３４番）及び１％ホスファターゼ阻害剤混液（シグマ社、Ｐ００４４番）の補充された２５mMトリス−ＨＣｌ、８００mM ＮａＣｌ、１０％スクロース、１mM ＥＧＴＡ、ｐＨ７．５）に加えた。次いで、組織を２mlのガラス製ダウンス型ホモジナイザーでホモジナイズした。ホモジネートを２０，０００×ｇで４℃で２０分間遠心分離にかけた。ペレット化した材料を廃棄し、ホモジネートを分注し、そしてさらなる使用まで−２０℃で保存した。
脳ホモジネート中のタウ及びタウ（ｐＳ４２２）のＡｌｐｈａＬＩＳＡによる定量
ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ストレプトアビジンでコーティングされたドナー及びコンジュゲートしていないアクセプタービーズはパーキンエルマー社から購入した。アクセプタービーズを抗タウ抗体又は抗タウ（ｐＳ４２２）抗体のいずれかと結合させた。
抗タウ抗体５Ａ６（ＤＳＨＢ）を一級アミン基上で、ビオチン−Ｎ−ヒドロキシスクシンアミド（サーモフィッシャー社）を使用してビオチニル化した。
タウ測定は、１×ＨｉＢｌｏｃｋアッセイ緩衝液（パーキンエルマー社）中で、ビオチニル化５Ａ６抗体、ストレプトアビジンドナービーズ、及び抗タウ抗体アクセプタービーズを使用して実施された。
タウ（ｐＳ４２２）の測定は、アッセイ緩衝液Ｂ（２５mM Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、０．５％トリトンＸ−１００、０．１％ＴｏｐＢｌｏｃｋ（LuBioscience社）、１mg/mlのデキストラン５００、１/１０遮断試薬（ロシュ社））中で、ビオチニル化５Ａ６抗体、ストレプトアビジンドナービーズ、及び抗タウ（ｐＳ４２２）抗体アクセプタービーズを使用して実施された。
５μlの標準物質又は試料を１０μlのビオチニル化５Ａ６抗体及び１０μlの抗体に結合させたアクセプタービーズと混合することによって、１/２AreaPlate−９６（パーキンエルマー社）中でのアッセイのための試料を調製し、次いで、振盪しながら室温で１時間インキュベートした。次いで、混合物に２５μlのストレプトアビジンドナービーズを補充し、そして室温で暗所で振盪しながらさらに３０分間インキュベートした。次いでプレートを６８０nm及び６１５nmの発光フィルターでレーザー励起を使用してEnvisionマイクロタイタープレートリーダー（パーキンエルマー社）で測定した。標準曲線を、組換えヒトタウ（最長のアイソフォーム）及びＥＲＫ−リン酸化タウを使用して作成した。
ｐタウ病態の定量的免疫組織化学的分析
矢状凍結切片（厚さ１０μm）をクリオスタットで調製し、そして１匹の動物につき４つの切片を１０μg/mlの濃度のヤギ抗マウス/AlexaFluor555にコンジュゲートさせたタウ（Ｓ４２２）に対する抗体を用いて免疫蛍光染色した。
全脳切片の画像取得は、Metafer4スライドスキャニングシステム（メタシステムズ社、アルトルスハイム、独国）を用いて実施された。海馬及び新皮質領域内のタウ（ｐＳ４２２）免疫陽性面積を測定し、そしてｐタウ陽性免疫蛍光シグナルの面積を、コンピューター支援画像解析を用いて偏りのない形態計測学的方法によって決定した。ｐタウ陽性面積の定量は、デフィニエンス社の画像解析ソフトウェア（デフィニエンスＡＧ社、ミュンヘン、独国）を用いて実施された。
結果
抗体１又は抗体２のいずれかを用いてのタウＰＳ２ＡＰＰマウスの処置により、脳ホモジネート中のタウ（ｐＳ４２２）の蓄積は用量依存的に減少した（図７）。抗体１（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ３１ＡＳ１）を使用して、１５mg/kgにおいて減少は統計学的に有意であった。抗体２（ＶＨ３５Ｈ５／ＶＬ４９Ｇ１）では、全ての用量群において有意に少ないタウ（ｐＳ４２２）が蓄積した。タウの全体のレベルは、両方の抗体について全ての用量群において不変であった（図８）。タウ（ｐＳ４２２）を含有している神経原線維凝集物を検出するための定量的免疫組織化学的分析を、抗体１のマウスの脳に対して実施した（図９）。どの用量群においてもタウ病態の統計学的に有意な低減は認められなかったが、用量の増加と共に病態がより少なくなる傾向が観察された。これは、脳の皮質領域においてより明らかであった。
本発明の例示的な実施態様が本明細書に記載されているが、本発明は、記載されているそのようなものに限定されず、そして様々な他の変更又は改変が、本発明の範囲又は精神から逸脱することなく当業者によってなされ得ることが理解されるべきである。

Claims (13)

  1. ヒトタウ（ｐＳ４２２）に特異的に結合するヒト化抗体であって、該抗体は、
    重鎖可変ドメインに配列番号０８、０９、及び１０のＨＶＲ、並びに
    軽鎖可変ドメインに、配列番号７１、７３、及び１５のＨＶＲ、又は
    配列番号７０、７２及び１５のＨＶＲ、又は
    配列番号１２、１４、及び７４のＨＶＲを含み、
    該抗体は、重鎖可変ドメイン内の位置４，２４及び７８（カバットによる番号付け）にバリン残基を有し、
    該抗体は、重鎖可変ドメイン内の位置７１（カバットによる番号付け）にアルギニン残基を有する、ヒト化抗体。
  2. ａ）配列番号６５の重鎖可変ドメイン及び配列番号６７の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｂ）配列番号６５の重鎖可変ドメイン及び配列番号６６の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｃ）配列番号６５の重鎖可変ドメイン及び配列番号６８の軽鎖可変ドメインを含む、請求項１記載のヒト化抗体。
  3. 前記抗体はエフェクター機能がサイレントである、請求項１〜２のいずれか一項記載のヒト化抗体。
  4. ｉ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は
    ｉｉ）１μg/mLで完全長ヒトタウ（配列番号０１）に結合せず、及び／又は
    ｉｉｉ）４２２位のセリンでリン酸化された完全長ヒトタウ（配列番号０２）に特異的に結合し、及び／又は
    ｉｖ）４２２位のセリンでリン酸化されたヒトタウ（配列番号０２）の凝集物に特異的に結合する、請求項１〜３のいずれか一項記載のヒト化抗体。
  5. 前記抗体が
    ａ）配列番号０３のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）断片に対して６ng/mL以下、及び／又は
    ｂ）配列番号０２のアミノ酸配列を有する完全長ヒトタウ（ｐＳ４２２）に対して４．５ng/mL以下、及び／又は
    ｃ）配列番号０２のアミノ酸配列を有するヒトタウ（ｐＳ４２２）の凝集物に対して３０ng/mL以下、及び／又は
    ｄ）配列番号０１のアミノ酸配列を有しかつＳ４２２Ａのアミノ酸突然変異を有するヒトタウに対して１２５ng/mL以下のＥＣ５０値を有する、請求項１〜４のいずれか一項記載のヒト化抗体。
  6. 前記抗体がヒトタウ（ｐＳ４２２）（配列番号０２）に特異的に結合し、かつヒトタウ（配列番号０１）には結合しない、請求項１〜５のいずれか一項記載のヒト化抗体。
  7. 前記抗体が、
    ａ）ヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
    ｂ）ヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、又は
    ｃ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、
    ｄ）Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体、
    ｅ）両方の重鎖にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇの突然変異、並びに、一方の重鎖にＴ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃの突然変異、及びそれぞれの他方の重鎖にＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ１の完全長抗体、又は
    ｆ）両方の重鎖にＳ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇの突然変異、並びに、一方の重鎖にＴ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃの突然変異、及びそれぞれの他方の重鎖にＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＹ３４９Ｃの突然変異を有するヒトサブクラスＩｇＧ４の完全長抗体である、請求項１〜６のいずれか一項記載のヒト化抗体。
  8. ｉ）ａ）配列番号６５の重鎖可変ドメイン及び配列番号６６の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｂ）配列番号６５の重鎖可変ドメイン及び配列番号６７の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｃ）配列番号６５の重鎖可変ドメイン及び配列番号６８の軽鎖可変ドメイン
    から選択された第一の結合部位と
    ｉｉ）ａ）配列番号８２の重鎖可変ドメイン及び配列番号８５の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｂ）配列番号８３の重鎖可変ドメイン及び配列番号８５の軽鎖可変ドメイン、又は
    ｃ）配列番号８４の重鎖可変ドメイン及び配列番号８５の軽鎖可変ドメイン
    から選択された第二の結合部位
    とを含む、二重特異的抗体。
  9. 請求項１〜８のいずれか一項記載の抗体と薬学的に許容される担体とを含む、医薬製剤。
  10. 医薬として使用するための請求項１〜８のいずれか一項記載の抗体。
  11. アルツハイマー病の処置に使用するための請求項１〜８のいずれか一項記載の抗体。
  12. 前駆期アルツハイマー病の処置に使用するための請求項１〜８のいずれか一項記載の抗体。
  13. 医薬品の製造における請求項１〜８のいずれか一項記載の抗体の使用。
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