TW201708254A - 人類化抗τ（ｐＳ４２２）抗體及使用方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供人類化抗人類τ(pS422)抗體及其使用方法。

Description

人類化抗 τ (pS422)抗體及使用方法

本發明係關於特異性結合SEQ ID NO：03之磷酸化τ片段之人類化抗τ(pS422)抗體及其用於治療腦病之用途。

人類τ(微管相關蛋白質τ(神經原纖維纏結蛋白質，成對螺旋絲-τ，PHF-τ))係主要發現於軸突中之神經元微管相關蛋白質且用於促進微管蛋白聚合並穩定微管。在人腦中發現8種同種型(同種型A、B、C、D、E、F、G、胚胎-τ)，最長同種型包括441個胺基酸(同種型F，Uniprot P10636-8)。τ及其性質亦由Reynolds,C.H.等人，J.Neurochem.69(1997)191-198加以闡述。

Tau(呈其高度磷酸化形式)係成對螺旋絲(PHF)之主要組份，PHF係阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease，AD)腦中之神經原纖維病灶之結構單元。Tau可在其絲胺酸或蘇胺酸殘基處由若干不同激酶(包含GSK3beta、cdk5、MARK及MAP激酶家族之成員)磷酸化。

τ蛋白病變之特徵在於τ之異常高度磷酸化且根據Iqbal,K.等人(Biochim.Biophys.Acta 1739(2005)198-210)其係如下疾病：

˙阿茲海默氏病，包含該疾病之僅有纏結之形式

˙唐氏症候群(Down syndrome)，成人病例

˙關島帕金森症失智症候群(Guam Parkinsonism dementia complex)

˙拳擊手型失智症(Dementia pugilistica)

˙皮克氏病(Pick disease)

˙具有嗜銀性顆粒之失智症

˙額顳葉失智症

˙皮質基底核退化

˙核-橋腦-黑質退化

˙進行性核上性麻痺

˙具有纏結之傑茨曼-斯脫司勒-史茵克病(Gerstmann-Sträussler-Scheinker disease)。

迄今為止，近40個絲胺酸(S)/蘇胺酸(T)磷酸化位點已發現於來自阿茲海默氏病腦之τ中(Hanger,D.P.等人，J.Biol.Chem.282(2007)23645-23654)。阿茲海默氏病中之τ病況之發生係與其磷酸化狀態相關。然而，40個磷酸化位點中之大部分並不與疾病病理學有關，此乃因其亦發現於自健康胚胎腦組織提取之τ中。僅少數磷酸化為疾病狀態所獨有且很可能負責定義阿茲海默氏腦之PHF中之τ之異常聚集及特徵性不溶性(Morishima-Kawashima,M.等人，J.Biol.Chem.270(1995)823-829)。根據Pei,J.J.等人(J.Alzheimer’s Disease 14(2008)385-392)，現有文獻提供關於該等位點中之哪些位點為AD腦特異性之有限及不明了資訊。Pei使用一系列τ磷酸特異性抗體且量測其在來自22名AD患者及10名對照之內側顳葉皮質之均質物中之含量。

Bussiere,T.等人(Acta Neuropathol.97(1999)221-230)闡述，τ蛋白上之磷酸化絲胺酸422係發現於具有神經原纖維退化之若干疾病中之病理學表位。Augustinack,J.C.等人(Acta Neuropathol.103(2002)26-35)闡述，pS422與阿茲海默氏病中之神經元病況之嚴重程度相關。Guillozet-Bongaarts,A.(J.Neurochem.97(2006)1005-1014)闡述，絲胺酸422處之τ磷酸化係PHF之成熟過程之一部分。亦發現τ pS422與阿茲海默氏病之各種轉基因小鼠模型中之發生病況有關。因此，Deters,N.等人在Biochem.Biophys.Res.Commun.379(2009)400-405中提及，雙轉基因Dom5/pR5小鼠展示含有τ特異性磷酸化病理學S422表位之海馬體神經元之數量增加7倍。Goetz,J.等人(Science 293(2001)1491-1495)報導，在注射Abeta42原纖維之τ P301L轉基因小鼠之腦中之S422處出現τ磷酸化。

EP 2 009 104係關於出現於來自阿茲海默氏病PHF之τ蛋白中之磷酸化狀態中之τ蛋白表位，且係關於該等表位用於生成特異性檢測阿茲海默氏τ蛋白之抗體之用途。WO 2002/062851及US 7,446,180係關於對τ蛋白之異常截短形式具有特異性之抗體及與阿茲海默氏病及相關τ蛋白病變有關之診斷及治療態樣。

WO 98/22120係關於治療阿茲海默氏病患者之方法，其包括向患者投與針對胺基酸約207至約222、胺基酸約224至約240及胺基酸約390至約408之磷酸化τ片段之抗體之步驟。在Asuni,A.A.等人，J.Neuroscience 27(2007)9115-9129中提及使用磷酸化τ片段379-408[P-Ser396,404]對τ轉基因小鼠接種疫苗之動物研究。US 2008/0050383係關於藉由投與τ蛋白片段來治療及預防個體之阿茲海默氏病或其他τ蛋白病變之方法。

Hasegawa M.等人(FEBS Lett.384(1996)25-30)報導對微管相關蛋白質τ中之磷絲胺酸422具有特異性之單株抗體(AP422)。

在WO 01/55725中，報導用於活體內診斷τ蛋白病變及/或活體內鑑別診斷τ蛋白病變與非τ蛋白病變之方法中之特異性識別τ之抗體及特異性識別磷酸-τ(181)之抗體。

在WO 02/027017中，報導自具有磷酸化絲胺酸之多肽免疫原製得之抗體。WO 02/062851係關於對τ蛋白之異常截短形式具有特異性之抗體及與阿茲海默氏病及相關τ蛋白病變有關之診斷及治療態樣。

在WO 2004/016655中，報導對中樞神經系統(CNS)τ蛋白具有特異性之抗體，其中該抗體特異性識別CNSτ蛋白，但並不識別周邊τ蛋白，且其中該抗體將由編碼τ蛋白之基因中外顯子4編碼之胺基酸序列與由其外顯子5編碼之胺基酸序列間之連接部分的胺基酸序列特異性識別為表位。

在(例如)EP 1 876 185中闡述針對τ pS422之單株抗體。針對τ pS422之多株抗體市面有售(例如ProSci Inc.及Biosource International)。

在WO 2006/055178中，報導抑制Ser202/Thr205處之τ蛋白磷酸化之方法，其包括使含有τ蛋白之試樣與結合類澱粉β-源二硫化物配體之抗體或抗原結合片段接觸，由此抑制Ser202/Thr205處之τ蛋白磷酸化。。

在WO 2007/019273中報導特異性結合在tyr394及/或tyr310處磷酸化之τ之抗體製劑。在Asuni,A.A.等人，J.Neuroscience 27(2007)9115-9129中提及使用磷酸化τ片段379-408[P-Ser396,404]對τ轉基因小鼠接種疫苗之動物研究。

EP 2 009 104係關於出現於來自阿茲海默氏病PHF之τ蛋白中之磷酸化狀態中之τ蛋白表位，且係關於該等表位用於生成特異性檢測阿茲海默氏τ蛋白之抗體之用途。

US 2008/0050383係關於藉由投與τ蛋白片段來治療及預防個體之阿茲海默氏病或其他τ蛋白病變之方法。

在WO 2010/037135中，報導包括第一域及第二域之分離、合成或重組多肽或肽，第一域包括用於血液腦障壁(BBB)受體或等效物之配體或由其組成，第二域包括減緩蛋白質聚集物之聚集速率、抑制蛋白質聚集物之形成或逆轉、消化或溶解蛋白質聚集物之酶或組合物或由其組成。在WO 2010/115843中報導能夠在活體外及/或活體內識別 且結合τ蛋白之抗體、尤其單株抗體或其功能部分。

在WO 2011/026031中報導特異性結合τ寡聚物且並不結合可溶性τ或τ原纖維之單株抗體或其片段，其可用於治療τ蛋白病變(例如阿茲海默氏病、進行性核上性麻痺及皮質基底核退化)。在WO 2011/053565中報導特異性結合在Ser(238)及Thr(245)中之一或多者處磷酸化之人類τ蛋白之分離抗體。

在WO 2012/045882中，報導特異性結合哺乳動物τ蛋白上之磷酸-表位之抗體，其可用於治療神經退化病症(例如τ蛋白病變)且用於治療或緩和認知缺陷。在WO 2012/049570中報導人類單株抗τ抗體或其τ結合片段。在WO 2012/106363中報導預防或治療個體之阿茲海默氏病或其他τ蛋白病變之方法，其包括向需要治療阿茲海默氏病或其他τ蛋白病變之人類投與抗體，該等抗體對τ蛋白之異常形式具有特異性，該抗體對正常τ蛋白並不展示結合及/或反應性且係在有效預防或治療阿茲海默氏病或其他τ蛋白病變之條件及量下投與。

在WO 2012/149365中，報導與聚集τ展示反應性且與非聚集τ實質上並無反應性之抗體，其中聚集τ包括至少兩種直接或經由連接體在一或多個半胱胺酸殘基處彼此交聯之τ蛋白。

在WO 2010/142423中報導可用於治療τ蛋白病變(例如阿茲海默氏病)之組合物，其包括結合τ之抗體、在特定位置處特異性結合特異性磷酸化τ之磷酸化絲胺酸修飾化合物及其片段及載劑。

在EP 1 876 185 A中，報導識別磷酸化多肽之抗體。在WO 2013/151762中，報導人類化τ抗體。在WO 2014/016737中，報導針對人類磷酸化τ之新穎雞單株抗體及其用途。在WO 2014/016737中報導針對人類磷酸化τ之新穎雞單株抗體及其用途。在WO 2012/149365中報導對病理學τ二聚體及前纖維病理學τ寡聚物具有選擇性之抗體及其在治療、診斷及監測τ蛋白病變中之用途。

在WO 2015/091656中，報導人類化抗τ(pS422)抗體及使用方法。在WO 2015/101586中，報導雙特異性抗半抗原/抗血液腦障壁受體抗體、其複合物及其作為血液腦障壁穿梭體之用途。

本發明提供抗人類τ(pS422)抗體、尤其人類化抗人類τ(pS422)抗體及其使用方法。

如本文所報告之人類化抗體不能由標準人類化方法使用。需要將非標準突變引入胺基酸序列中以獲得與包括具有SEQ ID NO：07及SEQ ID NO：11之胺基酸序列之可變域之親代兔抗體具有相當結合特性及藥物動力學性質的人類化抗體。此尤其重要，此乃因如本文所報告之抗體意欲穿過人類血液-腦-障壁且有效用於人腦內。因此，用於選擇人類化抗體之通用準則並不足夠嚴格以直接應用於當前情形中。

如本文所報告之一態樣係特異性結合人類τ(pS422)之(人類化)抗體，其中該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ。

如本文所報告之抗體針對在422位絲胺酸處磷酸化之人類τ、未磷酸化野生型人類τ及τ突變體S422A展示選擇性。未磷酸化野生型人類τ及τ突變體S422A分別為絲毫不結合或以較低親和力結合。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)單株抗體，其係藉由將抗體Mab 086之HVR接枝於人類框架及恆定區上而產生之Mab 086之人類化變體，其中所選人類可變區框架殘基視情況如下所述經取代：在胺基酸(1)以非共價方式直接結合抗原、(2)毗鄰HVR區、(3)另外與HVR區相互作用或(4)參與VL-VH界面時，所選人類可變區框架殘基經來自兔Mab 086抗體之等效框架胺基酸取代；或在該位置處不常用於人類免疫球蛋白之人類框架胺基酸經來自兔供體抗體之等效位置或來自較典型人類免疫球蛋白之等效位置的胺基酸取代。

如本文所報告之一態樣係特異性結合包括SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之(人類化)抗體，其中該抗體針對τ(pS422)誘導之細胞毒性具有抑制活性，且其中該抗體結合人類τ(pS422)蛋白之片段，且其中該片段包括SEQ ID NO：02之胺基酸殘基416至430，且其中該抗體包括人類恆定區，其中該抗體選自下文(1)至(2)中之任一者：(1)(a)包括重鏈及輕鏈之抗體，該重鏈包括作為HVR-H1之胺基酸序列SEQ ID NO：08、作為HVR-H2之胺基酸序列SEQ ID NO：09及作為HVR-H3之胺基酸序列SEQ ID NO：10，該輕鏈包括作為HVR-L1之胺基酸序列SEQ ID NO：70、作為HVR-L2之胺基酸序列SEQ ID NO：72及作為HVR-L3之胺基酸序列SEQ ID NO：15；或(b)包括重鏈及輕鏈之抗體，該重鏈包括作為HVR-H1之胺基酸序列SEO ID NO：08、作為HVR-H2之胺基酸序列SEQ ID NO：09及作為 HVR-H3之胺基酸序列SEQ ID NO：10，該輕鏈包括作為HVR-L1之胺基酸序列SEQ ID NO：12、作為HVR-L2之胺基酸序列SEQ ID NO：14及作為HVR-L3之胺基酸序列SEQ ID NO：74；或(c)包括重鏈及輕鏈之抗體，該重鏈包括作為HVR-H1之胺基酸序列SEQ ID NO：08、作為HVR-H2之胺基酸序列SEQ ID NO：09及作為HVR-H3之胺基酸序列SEQ ID NO：10，該輕鏈包括作為HVR-L1之胺基酸序列SEQ ID NO：71、作為HVR-L2之胺基酸序列SEQ ID NO：73及作為HVR-L3之胺基酸序列SEQ ID NO：15；或(d)包括重鏈及輕鏈之抗體，該重鏈包括作為HVR-H1之胺基酸序列SEQ ID NO：08、作為HVR-H2之胺基酸序列SEQ ID NO：77及作為HVR-H3之胺基酸序列SEQ ID NO：10，該輕鏈包括作為HVR-L1之胺基酸序列SEQ ID NO：12、作為HVR-L2之胺基酸序列SEQ ID NO：14及作為HVR-L3之胺基酸序列SEQ ID NO：75；(2)在(1)之抗體中具有一或多種保守胺基酸取代之抗體，其與(1)之抗體具有等效活性。

如本文所報告之一態樣係特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體，其中該抗體包括a)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、18及10之HVR，或b)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，或c)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、77及10之HVR。

在一較佳實施例中，如本文所報告之人類化抗體在輕鏈可變域中之32位處具有離胺酸(K)胺基酸殘基(根據Kabat進行編號)。

在一實施例中，人類化抗體包括a)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：71、73及15之HVR，或 b)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：70、72及15之HVR，或c)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及79之HVR，或d)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：71、81及15之HVR。

在一實施例中，如本文所報告之人類化抗體包括a)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、18及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：13、14及15之HVR，或b)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、05及15之HVR，或c)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：13、14及15之HVR，或d)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：71、73及15之HVR，或e)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：70、72及15之HVR，或f)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、77及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及79之HVR，或g)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及79之HVR，或h)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、77及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：71、81及15之HVR。

一較佳態樣係特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體，其中該抗體包括來自VH35H5及VL31A1之HVR。

在一實施例中，此特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體在重鏈可變域中包括SEQ ID NO：08、09及10之HVR且在輕鏈可變域中包括SEQ ID NO：70、72及15之HVR。SEQ ID NO：70對應於HVR-L1之序列且在32位處(根據Kabat)具有胺基酸殘基離胺酸。

在一實施例中，此特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體包括具有SEQ ID NO：65之胺基酸序列之重鏈可變域及具有SEQ ID NO：66之胺基酸序列之輕鏈可變域。

一較佳態樣係特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體，其中該抗體包括來自VH35H5及VL49G1之HVR。

在一較佳實施例中，此特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體在重鏈可變域中包括SEQ ID NO：08、09及10之HVR且在輕鏈可變域中包括SEQ ID NO：71、73及15之HVR。SEQ ID NO：71對應於HVR-L1之序列且在32位處(根據Kabat)具有胺基酸殘基離胺酸。

在一實施例中，此特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體包括具有SEQ ID NO：65之胺基酸序列之重鏈可變域及具有SEQ ID NO：67之胺基酸序列之輕鏈可變域。

一較佳態樣係特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體，其中該抗體包括來自VH35H5及VL35F2之HVR。

在一實施例中，此特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體在重鏈可變域中包括SEQ ID NO：08、09及10之HVR且在輕鏈可變域中包括SEQ ID NO：12、14及74之HVR。SEQ ID NO：12對應於HVR-L1之序列且在32位處(根據Kabat)具有胺基酸殘基離胺酸。

在一實施例中，此特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體包括具有SEQ ID NO：65之胺基酸序列之重鏈可變域及具有SEQ ID NO：68之胺基酸序列之輕鏈可變域。

一較佳態樣係特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體，其中該抗體包括來自VH76A6及VL35G4之HVR。

在一實施例中，此特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體在重鏈可變域中包括SEQ ID NO：08、77及10之HVR且在輕鏈可變域中包括SEQ ID NO：12、14及75之HVR。SEQ ID NO：12對應於HVR-L1之序 列且在32位處(根據Kabat)具有胺基酸殘基離胺酸。

在一實施例中，此特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體包括具有SEQ ID NO：76之胺基酸序列之重鏈可變域及具有SEQ ID NO：69之胺基酸序列之輕鏈可變域。

在一實施例中，如本文所報告之人類化抗體包括a)SEQ ID NO：20之重鏈可變域及SEQ ID NO：17之輕鏈可變域，或b)SEQ ID NO：19之重鏈可變域及SEQ ID NO：16之輕鏈可變域，或c)SEQ ID NO：19之重鏈可變域及SEQ ID NO：17之輕鏈可變域，或d)SEQ ID NO：21之重鏈可變域及SEQ ID NO：17之輕鏈可變域，或e)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：67之輕鏈可變域，或f)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：66之輕鏈可變域，或g)SEQ ID NO：76之重鏈可變域及SEQ ID NO：78之輕鏈可變域，或h)SEQ ID NO：19之重鏈可變域及SEQ ID NO：78之輕鏈可變域，或i)SEQ ID NO：76之重鏈可變域及SEQ ID NO：80之輕鏈可變域。

在一較佳實施例中，人類化抗體包括SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：66或67或68之輕鏈可變域。

在一較佳實施例中，人類化抗體包括SEQ ID NO：76之重鏈可變 域及SEQ ID NO：69之輕鏈可變域。

在一實施例中，人類化抗體包括SEQ ID NO：76或19之重鏈可變域及SEQ ID NO：78之輕鏈可變域。

在一實施例中，該抗體用於治療阿茲海默氏病。

在一實施例中，抗體係效應物功能沉默。在一實施例中，抗體並無效應物功能。在一實施例中，抗體係人類IgG1子類且在兩條重鏈中具有突變L234A、L235A及P329G(根據Kabat之EU指數進行編號)。

在一實施例中，抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物。

在一實施例中，抗體具有以下EC₅₀值：a)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段，6ng/mL或更小，及/或b)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)，4.5ng/mL或更小，及/或c)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物，30ng/mL或更小，及/或d)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ，125ng/mL或更小。

在一實施例中，抗體特異性結合至人類τ(pS422)(SEQ ID NO：02)且並不結合至人類τ(SEQ ID NO：01)。

在一實施例中，抗體係單株抗體。

在一實施例中，抗體係結合人類τ(pS422)之抗體片段且i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

在一實施例中，抗體係a)人類子類IgG1之全長抗體，或b)人類子類IgG4之全長抗體，或c)具有突變L234A、L235A及P329G之人類子類IgG1之全長抗體，d)具有突變S228P、L235E及P329G之人類子類IgG4之全長抗體， e)在兩條重鏈中具有突變L234A、L235A及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C並在另一各別重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG1之全長抗體，或f)在兩條重鏈中具有突變S228P及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C並在另一各別重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG4之全長抗體。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：18及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：15之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：05及SEQ ID NO：15之HVR， ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：10之HVR， ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：15之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變 S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一較佳態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73及SEQ ID NO：15之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或 vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一較佳態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72及SEQ ID NO：15之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或 ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中 i)可變域包括SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：79之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一較佳態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中 i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：74之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚 集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一較佳態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：77及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：75之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或 v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：20之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：17之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或 ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：19之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：16之胺基酸序列， ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：19之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離 胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：17之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵 在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：21之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：17之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或 viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一較佳態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：65之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：67之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基 酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一較佳態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：65之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：66之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或 iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一較佳態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：65之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：68之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區， 且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：19之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且 iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：78之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

如本文所報告之一較佳態樣係(人類化)抗人類τ(pS422)抗體，其特徵在於 a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：76之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基或甘胺酸-離胺酸二肽，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：69之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚 集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

在所有態樣之一較佳實施例中，抗人類τ(pS422)抗體之特徵在於，該抗體在輕鏈可變域中之32位處具有離胺酸(K)胺基酸殘基(根據Kabat進行編號)。

在所有態樣之一較佳實施例中，抗人類τ(pS422)抗體之特徵在於，該抗體在重鏈可變域中之位置4、24及78處纈胺酸殘基。

在所有態樣之一較佳實施例中，抗人類τ(pS422)抗體之特徵在於，抗體在重鏈可變域中之71位處具有精胺酸殘基。

如本文所報告之一態樣係編碼如本文所報告之(人類化)抗體之分離核酸。此核酸包括編碼抗體重鏈之核酸及編碼抗體輕鏈之一種核酸。此核酸包括至少一種表現盒。較佳地，該核酸包括兩種表現盒。

如本文所報告之一態樣係包括如本文所報告之核酸之宿主細胞。

如本文所報告之一態樣係產生(人類化)抗體之方法，其包括以下步驟：培養如本文所報告之宿主細胞，從而產生抗體。

在一實施例中，該方法進一步包括自細胞或培養基回收抗體之步驟。

如本文所報告之一態樣係包括如本文所報告之(人類化)抗體及醫藥上可接受之載劑的醫藥調配物。

在一實施例中，醫藥調配物進一步包括額外治療劑。

在一實施例中，額外治療劑係抗類澱粉治療劑。在一實施例中，抗類澱粉治療劑係抗人類α-突觸核蛋白抗體或抗Abeta抗體。

如本文所報告之一態樣係用作藥劑之如本文所報告之(人類化)抗體。

如本文所報告之一態樣係用於治療阿茲海默氏病之如本文所報告之(人類化)抗體。

如本文所報告之一態樣係用於治療前驅阿茲海默氏病之如本文所報告之(人類化)抗體。

如本文所報告之一態樣係用於治療輕度阿茲海默氏病之如本文所報告之(人類化)抗體。

如本文所報告之一態樣係用於減少τ(pS422)誘導之神經退化之如本文所報告之(人類化)抗體。

如本文所報告之一態樣係用於維持認知及功能之如本文所報告之(人類化)抗體。

如本文所報告之一態樣係用於減緩認知及功能衰退速率之如本文所報告之(人類化)抗體。

如本文所報告之一態樣係用於減緩神經原纖維纏結累積速率之如本文所報告之(人類化)抗體。

在先前態樣之一實施例中，該用途係藉由清除τ(pS422)以減小神經原纖維纏結負擔來達成。

在先前態樣之一實施例中，該用途係藉由預防神經原纖維纏結積累來達成。

在先前態樣之一實施例中，該用途係藉由去除/清除神經原纖維纏結來達成。

在一實施例中，預防及/或去除係藉由促進τ聚集物之細胞內清除來達成。

在先前態樣之一實施例中，該用途係藉由抑制神經原纖維纏結擴展來達成。在一實施例中，該抑制藉由預防病理學τ形式/晶種之中間神經元轉移來達成。

本發明態樣亦係治療阿茲海默氏病、治療前驅阿茲海默氏病、 治療輕度阿茲海默氏病、減少τ(pS422)誘導之神經退化、維持認知及功能、減緩認知及功能衰退速率及/或減緩神經原纖維纏結累積速率之治療方法，其包括投與如本文所報告之(人類化)抗體。

如本文所報告之一態樣係如本文所報告之(人類化)抗體用於製造藥劑之用途。

在一實施例中，該藥劑係用於治療阿茲海默氏病。

在一實施例中，該藥劑係用於治療前驅阿茲海默氏病。

在一實施例中，該藥劑係用於治療輕度阿茲海默氏病。

在一實施例中，該藥劑係用於減少τ(pS422)誘導之神經退化。

在一實施例中，該藥劑係用於維持認知及功能。

在一實施例中，該藥劑係用於減緩認知及功能衰退速率。

如本文所報告之一態樣係治療患有阿茲海默氏病病之個體之方法，其包括向該個體投與有效量之如本文所報告之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體。

如本文所報告之一態樣係減少個體中之τ(pS422)誘導之神經退化之方法，其包括向該個體投與有效量之如本文所報告之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體以減少τ(pS422)誘導之神經退化。

如本文所報告之一態樣係維持個體中之認知及功能之方法，包括向該個體投與有效量之如本文所報告之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體以維持認知及功能。

如本文所報告之一態樣係減緩個體中之認知及功能衰退速率之方法，其包括向該個體投與有效量之如本文所報告之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體以減緩認知及功能衰退速率。

如本文所報告之一態樣係如本文所報告之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體在減少τ(pS422)誘導之神經退化中之用途。

如本文所報告之一態樣係如本文所報告之(人類化)抗人類τ (pS422)抗體在維持認知及功能中之用途。

本文所報告之一態樣係如本文所報告之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體在減緩認知及功能衰退速率中之用途。

如本文所報告之抗體可用於治療阿茲海默氏病。

使用如本文所報告之(人類化)抗體，可抑制/減小阿茲海默氏病及神經病變之進展。

如本文所報告之(人類化)抗體可用於保護動物免於發生阿茲海默氏病或甚至用於停止動物之阿茲海默氏病進展。在一個實施例中，動物係人類。

在一個實施例中，如本文所報告之(人類化)抗體i)結合至τ(pS422)轉基因小鼠及阿茲海默氏病患者之腦切片上之τ(pS422)；及/或標記τ(pS422)轉基因細胞中之τ(pS422)。

如本文所報告之(人類化)抗體可用於治療阿茲海默氏病。

如本文所報告之一態樣係特異性結合人類τ(pS422)中之SEQ ID NO：03之胺基酸序列之(人類化)抗體。

如本文所報告之(人類化)抗體特異性結合/識別人類τ(pS422)之早期及晚期疾病相關形式。

本文所報告之一態樣係如本文所報告之(人類化)抗體用於防止人類τ(pS422)相關阿茲海默氏病擴展之用途。

本文所報告之一態樣係如本文所報告之(人類化)抗體用於減少溶酶體膜崩解之用途。

本文所報告之一態樣係如本文所報告之(人類化)抗體用於對抗人類τ(pS422)誘導之去穩定及/或崩解而穩定溶酶體膜之用途。

本文所報告之一態樣係如本文所報告之(人類化)抗體用於防止阿茲海默氏病進展之用途。

如本文所報告之(人類化)抗體係藉由抗體介導抑制人類τ(pS422) 接種及擴展於細胞間來發揮作用。

如本文所報告之(人類化)抗體係藉由結合至人類τ(pS422)來保護溶酶體免受原纖維損害。

序列表簡單說明

SEQ ID NO：01人類τ蛋白同種型F(441個殘基)

SEQ ID NO：02在絲胺酸殘基422位磷酸化之人類τ蛋白同種型F(441個殘基)

SEQ ID NO：03在7位(對應於SEQ ID NO：01之422位)處具有磷酸化絲胺酸之人類τ蛋白片段(SEQ ID NO：01之殘基416至430)：Ser-Ile-Asp-Met-Val-Asp-Ser(PO₃H₂)-Pro-Gln-Leu-Ala-Thr-Leu-Ala-Asp

SEQ ID NO：04兔抗體086 CDRL1-QSSQSVRTNKLA

SEQ ID NO：05兔抗體086 CDRL2-SASTLDF

SEQ ID NO：06兔抗體086 CDRL3-LGYFDCSIADCVA

SEQ ID NO：07兔抗體086 VL00

SEQ ID NO：08兔抗體086 CDRH1-SNAIN

SEQ ID NO：09兔抗體086 CDRH2-YIAVSGNTYYASWAKG

SEQ ID NO：10兔抗體086 CDRH3-SNI

SEQ ID NO：11兔抗體086 VH00

SEQ ID NO：12人類化CDRL1變體1-RSSQSVRTNKLA

SEQ ID NO：13人類化CDRL1變體2-RSSQSVRTNRLA

SEQ ID NO：14人類化CDRL2變體1-SASTLDY

SEQ ID NO：15人類化CDRL3變體1-LGYFDSSADIVA

SEQ ID NO：16人類化VL變體1-VL21

SEQ ID NO：17人類化VL變體2-VL22

SEQ ID NO：18人類化CDRH2-YIAVSGNTYYADSVKG

SEQ ID NO：19人類化VH變體1-VH32

SEQ ID NO：20人類化VH變體2-VH20

SEQ ID NO：21人類化VH變體3-VH33

SEQ ID NO：22人類化CDRL2變體2-SASTLQS

SEQ ID NO：23人類化CDRL2變體3-SASTLES

SEQ ID NO：24人類化CDRL3變體2-LGYFDSSIADSVA

SEQ ID NO：25人類化CDRL3變體3-LGYFDSSIADRVA

SEQ ID NO：26人類化CDRL3變體4-LGYFDPSIADPVA

SEQ ID NO：27人類化CDRL3變體5-LGYFDSSIADIVA

SEQ ID NO：28人類化CDRL3變體6-LGYFDPSADPIA

SEQ ID NO：29人類化CDRL3變體7-LGYFDPSADPVA

SEQ ID NO：30人類化CDRL1變體3-RASQGVRTNKLA

SEQ ID NO：31人類化CDRL1變體4-RASQSVRTNKLA

SEQ ID NO：32人類化VL變體4-VL01

SEQ ID NO：33人類化VL變體5-VL09

SEQ ID NO：34人類化VL變體6-VL12

SEQ ID NO：35人類化VL變體7-VL15

SEQ ID NO：36人類化VL變體8-VL16

SEQ ID NO：37人類化VL變體9-VL17

SEQ ID NO：38人類化VL變體10-VL19

SEQ ID NO：39人類化VL變體11-VL28

SEQ ID NO：40人類化VL變體12-VL33

SEQ ID NO：41人類化VL變體13-VL35

SEQ ID NO：42人類化VL變體14-VL39

SEQ ID NO：43人類化VL變體15-VL40

SEQ ID NO：44人類化VL變體16-VL41

SEQ ID NO：45人類化VL變體17-VL42

SEQ ID NO：46人類化VH變體4-VH01

SEQ ID NO：47人類化VH變體5-VH02

SEQ ID NO：48人類化VH變體6-VH03

SEQ ID NO：49人類化VH變體7-VH04

SEQ ID NO：50人類化VH變體8-VH14

SEQ ID NO：51人類化VH變體9-VH15

SEQ ID NO：52人類化VH變體10-VH18

SEQ ID NO：53人類化VH變體11-VH19

SEQ ID NO：54人類化VH變體12-VH22

SEQ ID NO：55人類化VH變體13-VH23

SEQ ID NO：56人類化VH變體14-VH24

SEQ ID NO：57人類化VH變體15-VH31

SEQ ID NO：65人類化VH變體16-VH35H5

SEQ ID NO：66人類化VL變體18-VL31A1

SEQ ID NO：67人類化VL變體19-VL49G1

SEQ ID NO：68人類化VL變體20-VL35F2

SEQ ID NO：69人類化VL變體21-VL53A2

SEQ ID NO：70人類化CDRL1變體5

SEQ ID NO：71人類化CDRL1變體6

SEQ ID NO：72人類化CDRL2變體4

SEQ ID NO：73人類化CDRL2變體5

SEQ ID NO：74人類化CDRL3變體8

SEQ ID NO：75人類化CDRL3變體9

SEQ ID NO：76人類化VH變體17-VH76A6

SEQ ID NO：77人類化CDRH1變體1

SEQ ID NO：78人類化VL變體22-VL35G4

SEQ ID NO：79人類化CDRL3變體10

SEQ ID NO：80人類化VL變體23-VL145B12

SEQ ID NO：81人類化CDRL2變體6

SEQ ID NO：82抗轉鐵蛋白受體抗體重鏈1

SEQ ID NO：83抗轉鐵蛋白受體抗體重鏈2

SEQ ID NO：84抗轉鐵蛋白受體抗體重鏈3

SEQ ID NO：85抗轉鐵蛋白受體抗體輕鏈

SEQ ID NO：86人類化VL變體24-VL4G1

SEQ ID NO：87人類化CDRL3變體11

序列對應表：

圖1：食蟹猴中之藥物動力學研究結果；實心菱形：VH35H5/VL31A1；空心正方形：VH35H5/VL35F2；實心正方形：VH76A6/VL35G4；實心三角形：VH32/VL22；實心圓：VH00/VL00；X軸：投藥後時間[h]；y軸：血清濃度，劑量標準化。[(μg/mL)/(mg/kg)]。

圖2：圖1縮放至時間範圍0-200h。

圖3：人類化VH及VL之不同組合至以下部分之生物化學結合：(A)磷酸化τ肽，(B)磷酸化全長人類τ，(C)非磷酸化τ肽，(D)非磷酸化全長人類τ；(1)=VH00/VL00，(2)=VH32/VL21，(3)=VH20/VL22，(4)=VH32/VL22，(5)=VH33/VL22；塗覆濃度：磷酸化τ肽：50ng/ml，所有其他靶：1μg/ml；(若使用1μg/ml塗覆磷酸化τ肽，則獲得相當結果(數據未展示))。

圖4：人類化VH及VL之不同組合至以下部分之生物化學結合：(A)=全長人類τ S422A突變體，(B)=聚集人類τ(pS422)；(1)=VH00/VL00，(2)=VH32/VL21，(3)=VH20/VL22，(4)=VH32/VL22，(5)=VH33/VL22；塗覆濃度：磷酸化τ肽：50ng/ml，所有其他靶：1μg/ml；(若使用1μg/ml塗覆磷酸化τ肽，則獲得相當結果(數據未展示))。

圖5：展示以下所選人類化VH/VL組合之選擇性之西方印跡(Western Blot)：(1)=VH00/VL00，(2)=VH32/VL21，(3)=VH20/VL22，(4)=VH32/VL22，(5)=VH33/VL22。

圖6：至阿茲海默氏病患者之腦提取物中之高度磷酸化τ之結 合；(1)=VH00/VL00，(2)=VH32/VL21，(3)=VH32/VL22。

圖7：小鼠腦提取物中之τ/pS442含量之量化；最大值-最小值、中值及平均值(+)；使用司徒登氏t測試(Student’s t-test)計算顯著性，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

A：x軸：τ(pS422)[ng/mg腦]；y軸：1：基線，2：媒劑，3：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在1.7mg/kg下，4：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在5mg/kg下，5：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在15mg/kg下。

B：x軸：τ(pS422)[ng/mg腦]；y軸：1：基線，2：媒劑，3：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL49G1)，在1.7mg/kg下，4：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL49G1)，在5mg/kg下，5：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL49G1)，在15mg/kg下。

圖8：小鼠腦提取物中之總τ之量化；最大值-最小值、中值及平均值(+)。

A：x軸：總τ[ng/mg腦]；y軸：1：基線，2：媒劑，3：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL49G1)，在1.7mg/kg下，4：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL49G1)，在5mg/kg下，5：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL49G1)，在15mg/kg下。

B：x軸：總τ[ng/mg腦]；y軸：1：基線，2：媒劑，3：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在1.7mg/kg下，4：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在5mg/kg下，5：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在15mg/kg下。

圖9：經抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)治療之τPS2APP小鼠之τ/pS422病理學之定量IHC分析；最大值-最小值、中值及平均值(+)，使用司徒登氏t測試計算顯著性，**p<0.01，***p<0.001。

A：皮質；x軸：τ(pS422)佔據區域[%]；y軸：1：基線，2：媒 劑，3：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在1.7mg/kg下，4：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在5mg/kg下，5：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在15mg/kg下。

B：海馬體；x軸：佔據區域[%]；y軸：1：基線，2：媒劑，3：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在1.7mg/kg下，4：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在5mg/kg下，5：抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)，在15mg/kg下。

本發明係關於結合肽或蛋白質或其功能部分、尤其抗體、尤其單株抗體或其功能部分、尤其結合肽或抗體，該結合肽或抗體識別且特異性結合至哺乳動物、尤其人類τ蛋白或其片段上之磷酸-表位，尤其結合至病理學蛋白質τ構象異構體，但在一實施例中，並不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合肽或抗體結合至哺乳動物、尤其如SEQ ID NO：02中所展示之人類τ蛋白上由在422位處包括磷酸化Ser(pS422)之τ胺基酸殘基416-430組成之表位。

I.定義

出於本文目的，「受體人類框架」係包括源自人類免疫球蛋白框架或人類共有框架之輕鏈可變域(VL)框架或重鏈可變域(VH)框架之胺基酸序列的框架，如下文所定義。「源自」人類免疫球蛋白框架或人類共有框架之受體人類框架可包括其相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化之數目為10或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小或2或更小。在一些實施例中，VL受體人類框架之序列與VL人類免疫球蛋白框架序列或人類共有框架序列一致。

「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合配偶體(例如抗原)間之非共價相互作用之強度總和。除非另外指示，否則如本文中所使用，「結合親和力」係指固有結合親和力，其反映結合對之成員(例如抗體及抗原)之間之1：1相互作用。分子X對於其配偶體Y之親和力通常可表示為解離常數(kd)。可藉由業內已知之常用方法(包含本文所闡述之彼等)來量測親和力。用於量測結合親和力之具體闡釋性及實例性實施例闡述於下文中。

「親和力成熟」抗體係指相較於不具有改變之親代抗體在一或多個超變區(HVR)中具有一或多個改變的抗體，此等改變使得可改良 抗體對抗原之親和力。

術語「抗人類τ(pS422)抗體」及「特異性結合人類τ(pS422)之抗體」係指能夠以足夠親和力結合人類τ(pS422)以便抗體可用作靶向人類τ(pS422)之診斷及/或治療劑之抗體。在一實施例中，抗人類τ(pS422)抗體與不相關非人類τ(pS422)蛋白之結合程度小於該抗體與人類τ(pS422)之結合的約10%，如(例如)藉由放射免疫分析(RIA)所量測。

術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包含(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展示期望抗原結合活性。

「抗體片段」係指除完整抗體外之分子，其包括完整抗體中結合完整抗體所結合之抗原的一部分。抗體片段之實例包含但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')₂、雙特異性抗體、直鏈抗體、單鏈抗體分子(例如scFv)及自抗體片段形成之多特異性抗體。

「結合相同表位之抗體」(作為參考抗體)係指在競爭分析中將參考抗體與其抗原之結合阻斷50%或更高的抗體，且反之，參考抗體在競爭分析中將該抗體與其抗原之結合阻斷50%或更高。在一實施例中，與參考抗體結合相同表位之抗體將參考抗體與其抗原之結合阻斷50%或更高。在一實施例中，與參考抗體結合相同表位之抗體將參考抗體與其抗原之結合阻斷80%或更高。在一實施例中，與參考抗體結合相同表位之抗體將參考抗體與其抗原之結合阻斷90%或更高。在一實施例中，與參考抗體結合相同表位之抗體將參考抗體與其抗原之結合阻斷95%或更高。在一較佳實施例中，與參考抗體結合相同表位之抗體同參考抗體具有結合抗原上之相同殘基之相互作用。

術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分源自特定源或物種、而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源自不同源或物種的抗體。

抗體「種類」係指重鏈所擁有之恆定域或恆定區之類型。存在5大類抗體：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且該等種類中之若干種可進一步分成子類(同種型)，例如IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁及IgA₂。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。

「效應物功能」係指彼等歸因於抗體Fc區之生物活性，其隨抗體種類而變。抗體效應物功能之實例包含：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。

藥劑(例如醫藥調配物)之「有效量」係指在所需時間段內以所需劑量有效達成期望治療或預防結果之量。

術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈中含有恆定區之至少一部分的C-末端區域。該術語包含原始序列Fc區及變體Fc區。在一實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基末端。然而，Fc區之C-末端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非在本文中另外指定，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據亦稱為EU指數之EU編號系統，如Kabat,E.A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，國立衛生研究院(National Institutes of Health),Bethesda,MD(1991),NIH Publication 91-3242中所闡述。

「框架」或「FR」係指除超變區(HVR)殘基外之可變域殘基。可變域之FR通常由4個FR域：FR1、FR2、FR3及FR4組成。因此，HVR及FR序列通常出現於VH(或VL)中之下列序列中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。

術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互 換使用，其係指具有實質上與原始抗體結構類似之結構或具有含有如本文所定義Fc區之重鏈的抗體。術語「全長抗體」表示由藉由二硫鍵連接之兩個抗體輕鏈多肽及兩個抗體重鏈多肽組成之多聚多肽，其中在兩個抗體重鏈多肽中，C-末端離胺酸殘基(K)可存在或不存在。

術語「宿主細胞」、「宿主細胞系」及「宿主細胞培養液」可互換使用且係指其中已引入外源核酸之細胞，包含該等細胞之子代。宿主細胞包含「轉化體」及「經轉化細胞」，其包含原代經轉化細胞及源自其之子代(與傳代次數無關)。子代之核酸含量可與親代細胞並不完全相同，但可含有突變。本文包含經篩選或選擇用於原始經轉化細胞中之具有相同功能或生物活性的突變體子代。

「人類共有框架」係表示在選擇人類免疫球蛋白VL或VH框架序列中最普遍存在之胺基酸殘基之框架。通常，人類免疫球蛋白VL或VH序列係選自可變域序列之亞組。通常，序列亞組係如Kabat,E.A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Bethesda MD(1991)，NIH出版物91-3242，第1-3卷中之亞組。在一實施例中，對於VL，亞組係如Kabat等人(前述文獻)中之亞組κI。在一實施例中，對於VH而言，該亞組係如Kabat等人所述之III亞組(見上文)。

「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包括實質上全部之至少一個且通常兩個可變域，其中全部或實質上全部之HVR(例如CDR)對應於非人類之彼等HVR，且全部或實質上全部之FR對應於人類抗體之彼等FR。人類化抗體視情況可包括源自人類抗體之抗體恆定區的至少一部分。「人類化形式」之抗體(例如非人類抗體)係指已經受人類化之抗體。

本文所用之術語「超變區」或「HVR」係指抗體可變域中序列 (「互補決定區」或「CDR」)超變且形成結構明確之環(「超變環」)及/或含有抗原接觸殘基(「抗原觸點」)之區域中的每一者。通常，抗體包括6個HVR；3個位於VH中(H1、H2、H3)，且3個位於VL中(L1、L2、L3)。

本文之HVR包含(a)超變環，其存在於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)處(Chothia,C.及Lesk,A.M.,J.Mol.Biol.196(1987)901-917)；(b)CDR，其存在於胺基酸殘基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)處(Kabat,E.A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，國立衛生研究院，Bethesda,MD(1991),NIH Publication 91-3242)；(c)胺基酸殘基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)及93-101(H3)處出現之抗原觸點(MacCallum等人，J.Mol.Biol.262：732-745(1996))；及(d)(a)、(b)及/或(c)之組合，包含HVR胺基酸殘基46-56(L2)、47-56(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65(H2)、93-102(H3)及94-102(H3)。

除非另外指示，否則可變域中之HVR殘基及其他殘基(例如FR殘基)在本文中係根據Kabat等人所述編號(見上文)。

「免疫偶聯物」係偶聯至一或多個異源分子之抗體。

「個體(individual或subject)」係哺乳動物。哺乳動物包含(但不限於)馴養動物(例如牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，例如猴子)、兔及齧齒類動物(例如小鼠及大鼠)。在某些實施例中，個體(individual或subject)係人類。

「經分離」抗體係已與其天然環境中之組份分離者。在一些實施例中，將抗體純化至具有大於95%或99%之純度，如藉由(例如)電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或反相HPLC)所測定。對於評價抗體純度之方法之綜述，例如參見Flatman,S.等人，J.Chromatogr.B 848(2007)79-87。

「經分離」核酸係指已與其天然環境中之組份分離之核酸分子。經分離核酸包含通常含有核酸分子之細胞中所含的核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於與其天然染色體位置不同之染色體位置。

「編碼抗人類τ(pS422)抗體之分離核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多個核酸分子，包含單一載體或單獨載體中之該核酸分子及存在於宿主細胞中一或多個位置處之該核酸分子。

本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上同源抗體群獲得之抗體，亦即，包括該群之個別抗體相同及/或結合相同表位，可能之變體抗體除外，例如，含有天然突變或在產生單株抗體製劑期間產生，此等變體通常以較小量存在。與通常包含針對不同決定簇(表位)之不同抗體之多株抗體製劑相比，單株抗體製劑之每一單株抗體針對抗原上之單一決定簇。因此，修飾語「單株」表示自抗體之實質上同源群獲得之抗體性質，且不應解釋為需要藉由任一特定方法產生抗體。舉例而言，根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製得，包含(但不限於)雜交瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法及利用含有所有或一部分人類免疫球蛋白基因座之轉基因動物之方法，該等方法及用於製備單株抗體之其他實例性方法闡述於本文中。

「原始抗體」係指具有不同結構之天然免疫球蛋白分子。舉例而言，原始IgG抗體係約150,000道爾頓(dalton)之異四聚體糖蛋白，其由二硫鍵鍵結之兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈組成。自N-至C端，每 一重鏈具有可變區(VH)，亦稱為可變重鏈域或重鏈可變域，隨後為三個恆定域(CH1、CH2及CH3)。類似地，自N-至C端，每一輕鏈依次具有可變區(VL)(亦稱為可變輕鏈域或輕鏈可變域)及恆定輕鏈(CL)域。基於抗體恆定域之胺基酸序列，可將該抗體之輕鏈分配為兩種類型中之一者，稱為卡帕型(κ)及拉姆達(λ)。

術語「包裝插頁」用於係指通常包含於治療產品之商業包裝內之說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌及/或關於治療產品之使用之警告的資訊。

就參考肽序列而言，「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對序列並引入空位(若需要)以達到最大序列一致性百分比後候選序列中與參考肽序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸殘基的百分比，且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的，比對可以熟習此項技術者所熟知之各種方式來達成，例如使用可公開獲得之電腦軟體，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定用於比對序列之合適參數，包含在所比較序列之全長範圍內達成最大比對所需要之任何算法。然而，出於本文目的，使用序列對比電腦程式ALIGN-2來產生胺基酸序列一致性%之值。ALIGN-2序列對比電腦程式係由Genentech,Inc.設計，且原始碼與使用者文件已一起編入美國版權局，Washington D.C.,20559中，其中其以美國版權註冊號TXU510087註冊。ALIGN-2程式可自Genentech,Inc.，South San Francisco,California公開獲得，或可自源代碼進行編譯。ALIGN-2程式應經編譯用於UNIX操作系統(包含數位UNIX V4.0D)中。所有序列比較參數均由ALIGN-2程式設定且不改變。

在採用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情形下，給定胺基酸序列A相對於(to)、與(with)或對(against)給定胺基酸序列B之胺基酸序列一 致性%(或者可表達為相對於、與或對給定胺基酸序列B具有或包括一定胺基酸序列一致性%之給定胺基酸序列A)計算如下：100×分數X/Y

其中X係在A與B之程式比對中由序列比對程式ALIGN-2評定為一致性匹配之胺基酸殘基數，且其中Y係B中胺基酸殘基之總數。應瞭解，倘若胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度，則A相對於B之胺基酸序列一致性%將不等於B相對於A之胺基酸序列一致性%。除非另外明確陳述，否則本文所用之所有胺基酸序列一致性%的值皆係根據前面緊接段落中所述使用ALIGN-2電腦程式獲得。

術語「醫藥調配物」係指如下製劑：其所呈現形式允許其中所含活性成份之生物活性有效，且不含對將投與該調配物之受試者具有不可接受毒性的額外組份。

「醫藥上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成份外對個體無毒之成份。醫藥上可接受之載劑包含(但不限於)緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。

本文所用之術語「人類τ(pS422)」係指原始人類τ(pS422)(UniProt P37840)。該術語涵蓋「全長」未處理人類τ(pS422)以及自處理細胞產生之任一形式的人類τ(pS422)。該術語亦涵蓋人類τ(pS422)之天然變體，例如突變體、剪接變體或對偶基因變體。人類τ(pS422)之胺基酸序列展示於SEQ ID NO：02中。

如本文中所使用，「治療(treatment)」(及其語法變體，例如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指試圖改變所治療個體之自然病程之臨床介入，且可實施用於預防或在臨床病程期間實施。治療之期望效應包含(但不限於)預防疾病發生或復發、減輕症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理結果、預防轉移、降低疾病進展速率、改善或緩和疾病狀態及緩解或改良預後。在一些實施例中，使用本發明抗體 來延遲疾病發生或減緩疾病進展。

術語「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與使抗體與抗原結合之域。原始抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中各域包括4個保守框架區(FR)及三個超變區(HVR)。(例如參見Kindt,T.J.等人，Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman及Co.,N.Y.(2007)，第91頁)單一VH或VL域可足以賦予抗原-結合特異性。此外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之抗體之VH或VL域分離以分別篩選互補VL或VH域文庫。例如參見Portolano,S.等人，J.Immunol.150(1993)880-887；Clackson,T.等人，Nature 352(1991)624-628)。

本文所用之術語「載體」係指能夠轉運與其連接之另一核酸的核酸分子。該術語包含呈自複製核酸結構之載體以及納入引入其之宿主細胞基因組中的載體。某些載體能夠引導與其可操作連接之核酸的表現。該等載體在本文中稱為「表現載體」。

II.組合物及方法 A.實例性人類化抗人類τ(pS422)抗體

如本文所報告之人類化抗體不能由標準人類化方法使用。需要將非標準突變引入胺基酸序列中以獲得與親代兔抗體具有相當結合特性及藥物動力學性質的人類化抗體。此尤其重要，此乃因如本文所報告之抗體意欲穿過人類血液-腦-障壁且有效用於人腦內。因此，用於選擇人類化抗體之通用準則並不足夠嚴格以直接應用於當前情形中。

已發現，為獲得適宜且可研發之人類化抗體，形成CDRL3(輕鏈CDR3)中之二硫化物-橋之兩個半胱胺酸必須分別由絲胺酸及異白胺酸代替。除確保相同CDRL3之合理定向，使存在於兔CDRL3之中部之異白胺酸殘基缺失，從而產生一個胺基酸殘基小於親代兔CDRL3之人類化CDRL3。

已發現，為維持活體內藥物動力學性質，輕鏈中之32位處之胺基酸殘基應為離胺酸(根據Kabat進行編號)。去除輕鏈HVR-L3中之二硫橋並不影響活體內動力學行為。

已進一步發現，在重鏈位置4、24及78(根據Kabat進行編號)處維持三個纈胺酸胺基酸殘基較為有利。不受限於此理論，假設需要該等殘基來確保重鏈可變區之抗原結合環之合理呈遞。另外，在重鏈可變域中之71位處存在精胺酸殘基較為有利(根據Kabat進行編號)。

HVR-L3包括兩個天冬胺酸殘基，其尤其在延長儲存期間可為去醯胺熱點。在輕鏈可變域變體VL35G4中，該兩個天冬胺酸殘基中之一者已發生改變。

本文所用之所有編號皆係基於Kabat可變域編號方案。

在下表中，展示兔輕鏈可變域之不同人類化變體分別與人類化重鏈可變域VH14及VH20之組合之特性。結合配偶體為係人類τ(pS422)

VH00與VL00(兔抗體)之參考值：25℃：kd=2.6E-04；t/2=44min。

37℃：ka=3.7E+04,kd=5.25E-03,KD=1.4E-08,t/2=22min。

在下表中，展示兔輕鏈可變域之不同人類化變體分別與人類化輕鏈可變域VL17及VL19之組合之特性。

VH00與VL00(兔抗體)之參考值：25℃：kd=2.6E-04；t/2=44min。

37℃：ka=3.7E+04,kd=5.25E-03,KD=1.4E-08,t/2=22min。

在下表中，展示不同VH/VL組合之動力學常數(根據實例8測得)。

人類化VH及VL之不同組合之生物化學結合展示於圖3及4中。

在下表中，展示不同VH/VL組合之結合特異性(EC50值，[ng/ml])。

所選人類化VH/VL組合對人類τ突變體S422A之敏感性可自圖5中所展示之西方印跡看到。所有人類化變體選擇性結合至在S422處磷酸化之人類τ。親代兔抗體對非S422磷酸表位具有較低程度之交叉反應性，但所展示人類化變體在此方面之交叉反應性小於親代兔抗體。

在圖6中，展示親代兔抗體及所選人類化抗人類τ(pS422)抗體至阿茲海默氏病患者之腦提取物中之PHF-τ之結合。

基於上文，選擇VH32/VL22之組合作為人類化抗體。

使用親代VH/VL組合及人類化VH/VL組合來發現食蟹猴中之下列平均清除速率(人類IgG之正常清除為0.18-0.36ml/hr/kg)。

n.d.=未測定

可看到，VH32/VL22組合具有增加之劑量依賴性清除速率。

在下表中，展示經生成以解決VH32/VL22關於τ(pS422)片段之增加之劑量依賴性清除速率之其他VH/VL組合的動力學常數(根據實例10測得)。

在下表中，展示VH/VL組合(以Fab片段形式)關於全長τ(pS422)及τ(pS422)片段之動力學常數(根據實例11及實例12測得)。

在下表中，展示藉由ELISA測得之不同VH/VL組合之結合特異性 (對磷酸化τ與非磷酸化τ之選擇性)。

使用不同VH/VL組合發現食蟹猴中之下列平均清除速率(人類IgG之正常清除為0.18-0.36ml/hr/kg；n.d.=未測定)。

使用不同VH/VL組合發現小鼠中之下列平均清除速率(人類IgG之正常清除為0.18-0.36ml/hr/kg)。

在如本文所報告之所有態樣之一實施例中，人類化抗人類τ(pS422)抗體在以最高25mg/kg之劑量靜脈內施加之後具有小於0.6ml/hr/kg之平均清除速率。在一實施例中，在最高25mg/kg之劑量下，平均清除速率為0.3ml/hr/kg或更小。

在一較佳態樣中，本發明提供包括至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：09之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：71之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：73之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包括SEQ ID NO：15之胺基酸序列。

在一較佳態樣中，本發明提供包括至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：09之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：70之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：72之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包括SEQ ID NO：15之胺基酸序列。

在一較佳態樣中，本發明提供包括至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：09之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：14之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：74之胺基酸序列。

在一較佳態樣中，本發明提供包括至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：77之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：14之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：75之胺基酸序列。

在一態樣中，本發明提供包括至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：09之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：14之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：79之胺基酸序列。

在一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列之(人類化)抗體：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其暴露SEQ ID NO：09之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列。

在一實施例中，該抗體包括：(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO： 08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：09之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列。

在另一實施例中，該抗體進一步包括至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：i)(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：71之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：73之該胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：15之胺基酸序列；或ii)(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：70之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：72之該胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：15之胺基酸序列；或iii)(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：14之該胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：79之胺基酸序列。

在另一實施例中，該抗體包括i)(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：71之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：73之該胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：15之胺基酸序列；或ii)(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：70之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：72之該胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：15之胺基酸序列；或iii)(a)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：14之該胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：79之胺基酸序列。

在一態樣中，本發明提供(人類化)抗體，其包括i)(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：09之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括 SEQ ID NO：10之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：71之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：73之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：15之胺基酸序列，或ii)(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：09之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：70之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：72之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：15之胺基酸序列，或iii)(a)HVR-H1，其包括SEQ ID NO：08之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包括SEQ ID NO：09之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包括SEQ ID NO：10之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包括SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包括SEQ ID NO：14之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包括SEQ ID NO：79之胺基酸序列。

在另一實施例中，VH或VL相對於參照序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包括該序列之抗人類τ(pS422)抗體保留結合人類τ(pS422)之能力。

在本發明之另一態樣中，上文任一實施例之抗人類τ(pS422)抗體係單株抗體，包含嵌合、人類化或人類抗體。在一實施例中，抗人類τ(pS422)抗體係抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙鏈抗體或F(ab’)₂片段。在另一實施例中，抗體係全長抗體，例如完整IgG1或IgG 4抗體或如本文所定義之其他抗體種類或同種型。

如本文所報告之(人類化)抗體減小轉基因τPS2APP小鼠之腦中之τ(pS422)含量。

在另一態樣中，上文任一實施例之(人類化)抗人類τ(pS422)抗體可單獨或組合納入如下文在部分1-7中所闡述特徵中之任一者中：

1.抗體親和力

在某些實施例中，本文所提供之抗體之解離常數(KD)100nM、50nM或介於1nM與100nM之間(例如10^-7M或更小，例如10^-7M至10^-9M)。

在一實施例中，藉由放射標記抗原結合分析(RIA)量測Kd。在一實施例中，使用所關注抗體之Fab形式及其抗原實施RIA。舉例而言，藉由以下方式來量測FAB對抗原之溶液結合親和力：在滴定系列之未經標記抗原存在下使用最小濃度之經(¹²⁵I)標記之抗原平衡Fab，然後使用塗覆有抗Fab抗體之板捕獲經結合之抗原(例如參見Chen,Y.等人，J.Mol.Biol.293(1999)865-881)。為建立該分析之條件，將MICROTITER^®多孔板(Thermo Scientific)利用5μg/ml於50mM碳酸鈉(pH 9.6)中之捕獲用抗Fab抗體(Cappel Labs)塗覆過夜，且隨後在室溫下(大約23℃)利用於PBS中之2%(w/v)牛血清白蛋白阻斷2小時至5小時。在非吸附性板(Nunc編號269620)中，將100pM或26pM[¹²⁵I]-抗原與所關注Fab之連續稀釋液混合(例如與抗VEGF抗體Fab-12之評價一致，參見Presta,L.G.等人，Cancer Res.57(1997)4593-4599)。然後將所關注Fab培育過夜；然而，可繼續培育較長時間(例如約65小時)以確保達到平衡。然後，將混合物轉移至捕獲板中以在室溫下進行培育(例如1小時)。然後去除溶液且使用於PBS中之0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20^®)將板洗滌8次。當板已乾燥時，添加150μl/孔之閃爍體(MICROSCINT-20^TM；Packard)，且在TOPCOUNT^TM γ計數器(Packard)上將板計數10分鐘。選擇得到小於或等於20%之最大結合之每一Fab的濃度用於競爭性結合分析。

根據另一實施例，使用BIACORE^®表面電漿共振分析量測Kd。舉例而言，使用BIACORE^®-2000或BIACORE^®-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)之分析係在25℃下使用固定抗原CM5晶片以約10個反應單位(RU)實施。在一實施例中，根據供應商說明書，使用N-乙基- N’-(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)來活化羧甲基化之葡聚糖生物感測器晶片(CM5,BIACORE,Inc.)。使用10mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μM)，然後以5μl/分鐘之流速注射以達成約10反應單位(RU)之偶合蛋白。在注射抗原後，注射1M乙醇胺以阻斷未反應之基團。對於動力學量測，在25℃下以約25μl/min之流速注射Fab於含有0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20^TM)表面活性劑之PBS(PBST)中之兩倍連續稀釋液(0.78nM至500nM)。締合速率(k_on)及解離速率(k_off)係使用簡單一對一蘭格繆爾(Langmuir)結合模型(BIACORE^®評估軟體3.2版)藉由同時擬合結合及解離感測圖來計算。將平衡解離常數(Kd)計算為比率k_off/k_on(例如參見Chen,Y.等人，J.Mol.Biol.293(1999)865-881)。若經上述表面電漿子共振分析締合速率(on-rate)超過10⁶M^-1 s^-1，則締合速率可藉由使用螢光淬滅技術來測定，該技術係在25℃下在遞增濃度之抗原存在下量測於PBS(pH 7.2)中之20nM抗抗原抗體(Fab形式)之螢光發射強度(激發=295nm；發射=340nm，16nm帶通)之增強或降低，如在光譜儀中所量測，例如配備有停流技術之分光光度計(Aviv儀器)或帶有經攪拌比色管之8000系列SLM-AMINCO^TM分光光度計(ThermoSpectronic)。

2.抗體片段

在某些實施例中，本文所提供抗體係抗體片段。抗體片段包含(但不限於)Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)₂、Fv及scFv片段及下文所闡述之其他片段。關於某些抗體片段之綜述，參見Hudson,P.J.等人，Nat.Med.9(2003)129-134。關於scFv片段之綜述，例如參見Pluckthun,A.,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編輯，Springer-Verlag,New York(1994)，第269-315頁；亦參見WO 93/16185；及US 5,571,894及US 5,587,458。 關於包括補救受體結合表位殘基且具有增加之活體內半衰期之Fab及F(ab')₂片段之論述，參見US 5,869,046。

雙特異性抗體係具有兩個抗原結合位點之可為二價或雙特異性之抗體片段。例如參見EP 0 404 097；WO 1993/01161；Hudson,P.J.等人，Nat.Med.9(2003)129-134；及Hollinger,P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993)6444-6448。三鏈抗體及四鏈抗體亦闡述於Hudson,P.J.等人，Nat.Med.9(20039)129-134中。

單一域抗體係包括抗體中重鏈可變域之全部或一部分或輕鏈可變域之全部或一部分的抗體片段。在某些實施例中，單一域抗體係人類單一域抗體(Domantis,Inc.，Waltham,MA；例如參見US 6,248,516)。

可藉由各種技術來製備抗體片段，包含(但不限於)蛋白水解消化完整抗體以及藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E.coli)或噬菌體)來產生，如本文所闡述。

3.人類化抗體

通常，將非人類抗體人類化以降低對人類之免疫原性，而保持親代非人類抗體之特異性及親和力。通常，人類化抗體包括一或多個可變域，其中HVR(例如CDR)(或其部分)係源自非人類抗體，且FR(或其部分)係源自人類抗體序列。人類化抗體視情況亦包括人類恆定區之至少一部分或全長。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如產生HVR殘基之抗體)之相應殘基取代以(例如)恢復或改良抗體特異性或親和力。

人類化抗體及其製備方法綜述於(例如)Almagro,J.C.及Fransson,J.,Front.Biosci.13(2008)1619-1633中，且進一步闡述於(例如)以下文獻中：Riechmann,I.等人，Nature 332(1988)323-329；Queen,C.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(1989)10029-10033；US 5,821,337、US 7,527,791、US 6,982,321及US 7,087,409；Kashmiri,S.V.等人，Methods 36(2005)25-34(闡述特異性決定區(SDR)移植)；Padlan,E.A.,Mol.Immunol.28(1991)489-498(闡述「表面重修」)；Dall’Acqua,W.F.等人，Methods 36(2005)43-60(闡述「FR改組」)；Osbourn,J.等人，Methods 36(2005)61-68；及Klimka,A.等人，Br.J.Cancer 83(2000)252-260(闡述FR改組之「導向選擇」方法)。

可用於人類化之人類框架區包含(但不限於)：使用「最佳欲合」方法選擇之框架區(例如參見Sims,M.J.等人，J.Immunol.151(1993)2296-2308)；源自輕鏈或重鏈可變區之特定亞組之人類抗體之共有序列的框架區(例如參見Carter,P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89(1992)4285-4289；及Presta,L.G.等人，J.Immunol.,151(1993)2623-2632)；人類成熟(經體細胞突變)框架區或人類種系框架區(例如參見Almagro,J.C.及Fransson,J.,Front.Biosci.13(2008)1619-1633)；及自篩選FR文庫獲得之框架區(例如參見Baca,M.等人，J.Biol.Chem.272(1997)10678-10684及Rosok,M.J.等人，J.Biol.Chem.271(19969)22611-22618)。

4.多特異性抗體

在某些實施例中，本文所提供之抗體係多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體係對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，結合特異性中之一者係關於人類τ(pS422)且另一者係關於任一其他抗原。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合人類τ(pS422)之兩個不同表位。雙特異性抗體可以全長抗體或抗體片段形式製得。

製備多特異性抗體之技術包含(但不限於)重組共表現兩個具有不同特異性之免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(參見Milstein,C.及Cuello,A.C.,Nature 305(1983)537-540、WO 93/08829及Traunecker,A.等人， EMBO J.10(1991)3655-3659)及「隆凸與孔洞(knob-in-hole)」改造(例如參見US 5,731,168)。亦可藉由以下方式來製備多特異性抗體：改造用於製備抗體Fc-異源二聚體分子之靜電牽引效應(WO 2009/089004)；使兩個或兩個以上抗體或片段交聯(例如參見US 4,676,980及Brennan,M.等人，Science 229(1985)81-83)；使用白胺酸拉鍊產生雙特異性抗體(例如參見Kostelny,S.A.等人，J.Immunol.,148(5)(1992)1547-1553)；使用用於製備雙特異性抗體片段之「雙鏈抗體」技術(例如參見Hollinger,P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993)6444-6448)；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(例如參見Gruber,M等人，J.Immunol.152(1994)5368-5374)；及製備三特異性抗體，如(例如)Tutt,A.等人，J.Immunol.147(1991)60-69中所闡述。

本文亦包含具有三個或更多個功能性抗原結合位點之經改造抗體，包含「章魚抗體(Octopus antibodies)」(例如參見US 2006/0025576)。

本文之抗體或片段亦包含含有結合人類τ(pS422)以及另一不同抗原之抗原結合位點的「雙重作用之Fab」或「DAF」(例如參見US 2008/0069820)。

本文中之抗體或片段亦包含以下文獻中闡述之多特異性抗體：WO 2009/080251、WO 2009/080252、WO 2009/080253、WO 2009/080254、WO 2010/112193、WO 2010/115589、WO 2010/136172、WO 2010/145792及WO 2010/145793。

5.抗體變體

在某些實施例中，本發明涵蓋本文所提供抗體之胺基酸序列變體。舉例而言，可能期望改良抗體之結合親和力及/或其他生物學性質。抗體之胺基酸序列變體可藉由向編碼抗體之核苷酸序列中引入適 宜修飾或藉由肽合成來製備。此等修飾包含(例如)抗體胺基酸序列內殘基之缺失及/或插入及/或取代。可實施缺失、插入及取代之任一組合以達成最終構築體，限制條件係最終構築體擁有期望特性，例如抗原結合性。

a)取代、插入及缺失變體

在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變體。用於取代誘變之所關注位點包含HVR及FR。保守取代展示於下表之「較佳取代」標題下。其他實質性變化提供於下表之「實例性取代」標題下，且參照胺基酸側鏈種類進一步闡述於下文中。可將胺基酸取代引入所關注抗體及經篩選具有期望活性之產物中，該期望活性係(例如)經保持/改良抗原結合、經降低免疫原性或經改良ADCC或CDC。

可根據常見側鏈性質將胺基酸分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈取向之殘基：Gly、Pro；(6)芳香族殘基：Trp、Tyr、Phe。

非保守性取代使得需要將該等種類之一種之成員與另一種類交換。

一種取代變體類型涉及取代親代抗體(例如人類化抗體)之一或多個超變區殘基。通常，選擇用於進一步研究之所得變體相對於親代抗體在某些生物學性質(例如增加之親和力、降低之免疫原性)中具有修飾(例如改良)及/或實質上保留親代抗體之某些生物學性質。實例性取代變體係親和力成熟抗體，其可便利地(例如)使用基於噬菌體展示之親和力成熟技術(例如本文所闡述之彼等)產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且將變體抗體展示於噬菌體上並篩選特定生物學活性(例如結合親和力)。

可對HVR作出變化(例如取代)以(例如)改良抗體親和力。此等改變可在HVR「熱點」(亦即由在體細胞成熟過程期間發生高頻突變之密碼子編碼的殘基(例如參見Chowdhury,P.S.,Methods Mol.Biol. 207(2008)179-196)及/或接觸抗原之殘基)中進行，其中測試所得變體VH或VL之結合親和力。藉由自二級文庫構築且重新選擇進行之親和力成熟闡述於(例如)Hoogenboom,H.R.等人，Methods in Molecular Biology 178(2002)1-37中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由各種方法中之任一者(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸引導之誘變)將多樣性引入選擇用於成熟之可變基因中。然後建立二級文庫。然後篩選文庫以鑑別具有期望親和力之任一抗體變體。引入多樣性之另一方法涉及HVR引導方法，其中將若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。可特定鑑別(例如使用丙胺酸掃描誘變或建模)參與抗原結合之HVR殘基。特定而言，通常靶向CDR-H3及CDR-L3。

在某些實施例中，取代、插入或缺失可發生於一或多個HVR內，只要此等改變不會實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可對HVR作出不實質上降低結合親和力之保守改變(例如本文所提供之保守取代)。該等改變可(例如)位於HVR中之抗原接觸殘基外側。在上文所提供變體VH及VL序列之某些實施例中，每一HVR未經改變，或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。

將用於鑑別抗體上可靶向用於誘變之殘基或區域的有用方法稱為「丙胺酸掃描誘變」，如由Cunningham,B.C.及Wells,J.A.，Science,244(1989)1081-1085所闡述。在此方法中，已鑑別殘基或目標殘基組(例如帶電殘基，例如arg、asp、his、lys及glu)，並由中性或帶負電之胺基酸(例如丙胺酸或多丙胺酸)代替以確定是否影響抗體與抗原之相互作用。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置處引入其他取代。或者或另外，抗原-抗體複合物之晶體結構以鑑別抗體與抗原間之接觸點。可靶向此等接觸殘基及相鄰殘基作為取代候選物或將其排除。可篩選變體以確定其是否含有期望性質。

胺基酸序列插入包含胺基-及/或羧基-末端融合物(長度在一個殘 基至含有上百或更多殘基之多肽範圍內)以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包含具有N-末端甲二磺醯殘基之抗體。抗體分子之其他插入變體包含酶(例如用於ADEPT)或延長抗體血清半衰期之多肽與抗體N-或C-末端之融合物。

b)糖基化變體

在某些實施例中，改變本文所提供之抗體以增加或降低抗體經糖基化之程度。抗體糖基化位點之添加或缺失可藉由改變胺基酸序列以產生或去除一或多個糖基化位點來便捷地完成。

若抗體包括Fc區，則可改變其所附接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生之原始抗體通常包括具支鏈、二分枝寡糖，其通常由N-鏈接附接至Fc區之CH2域之Asn297(例如參見Wright,A.及Morrison，S.L.,TIBTECH 15(1997)26-32)。該寡糖可包含各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸以及附接至雙觸角寡糖結構之「主幹」中之GlcNAc之岩藻糖。在一些實施例中，可修飾本發明抗體中之寡糖以產生具有某些改良性質之抗體變體。

c)Fc區變體

在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文所提供抗體之Fc區中，由此產生Fc區變體。Fc區變體可包括人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)，該序列在一或多個胺基酸位置包括胺基酸修飾(例如取代)。

在某些實施例中，本發明涵蓋具有一些(但非全部)效應物功能之抗體變體，此情況使其成為許多應用之期望候選物，在該等應用中抗體之活體內半衰期較為重要，但某些效應物功能(例如補體及ADCC)係不必要或有害的。可實施活體外及/或活體內細胞毒性分析來確認CDC及/或ADCC活性之降低/消耗。舉例而言，可實施Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合能力(因此可能缺乏ADCC活性)，但 保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。造血細胞上之FcR表現匯總於Ravetch,J.V.及Kinet,J.P.,Annu.Rev.Immunol.9(1991)457-492之第464頁之表3中。用以評價所關注分子之ADCC活性之活體外分析的非限制性實例闡述於US 5,500,362(例如參見Hellstrom,I.等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA 83(1986)7059-7063)及Hellstrom,I.等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA 82(1985)1499-1502；US 5,821,337(參見Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166(1987)1351-1361)。或者，可使用非放射性分析方法(例如參見用於流式細胞術之ACTI^TM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology,Inc.，Mountain View,CA)及CytoTox 96^®非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI))。可用於該等分析之效應細胞包含末梢血單核細胞(PBMC)及自然殺傷(NK)細胞。或者或另外，可在活體內評價所關注分子之ADCC活性，例如在動物動物模型(例如Clynes,R.等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA 95(1998)652-656中所揭示者)中。亦可實施C1q結合分析以證實抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。例如參見WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評價補體活化，可實施CDC分析(例如參見Gazzano-Santoro,H.等人，J.Immunol.Methods 202(1996)163-171；Cragg,M.S.等人，Blood 101(2003)1045-1052；及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103(2004)2738-2743)。亦可使用業內已知方法來實施FcRn結合及活體內清除/半衰期測定(例如參見Petkova,S.B.等人，Int.Immunol.18(2006：1759-1769)。

具有降低之效應物功能之抗體包含在Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者處具有取代之彼等(US 6,737,056)。該等Fc區突變體包含在265、269、270、297及327中之兩 個或更多個胺基酸位置處經取代之Fc區突變體，包含殘基265及297經丙胺酸取代之所謂的「DANA」Fc區突變體(US 7,332,581)。

闡述某些與FcR之結合改良或減少之抗體變體(例如參見US 6,737,056；WO 2004/056312及Shields,R.L.等人，J.Biol.Chem.276(2001)6591-6604)。

在一些實施例中，Fc區中有所改變，從而改變(亦即減弱)C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，如(例如)US 6,194,551、WO 99/51642及Idusogie,E.E.等人，J.Immunol.164(2000)4178-4184中所闡述。

具有延長之半衰期及與新生Fc受體(FcRn)(其負責將母體IgG轉移至胚胎中)(Guyer,R.L.等人，J.Immunol.117(1976)587-593及Kim,J.K.等人，J.Immunol.24(1994)2429-2434)之改良結合的抗體系闡述於US 2005/0014934中。彼等抗體包括具有一或多種改良Fc區至FcRn之結合之取代之Fc區。該等Fc區變體包含在以下Fc區殘基之一或多者處具有取代之彼等：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如，Fc區殘基434之取代(US 7,371,826)。

關於Fc區變體之其他實例，亦參見Duncan,A.R.及Winter,G.,Nature 322(1988)738-740；US 5,648,260；US 5,624,821；及WO 94/29351。

d)半胱胺酸改造之抗體變體

在某些實施例中，可能期望產生半胱胺酸改造之抗體，例如「硫代Mab」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代殘基於抗體之可及位點處出現。藉由使用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基團由此位於抗體之可及位點處且可用於使抗體偶聯至其他部分(例如藥物部分或連接體-藥物部分)以產生免 疫偶聯物，如本文進一步所闡述。在某些實施例中，下列殘基中之任一個或多個可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號)、重鏈之A118(EU編號)及重鏈Fc區之S400(EU編號)。半胱胺酸改造之抗體可如(例如)US 7,521,541中所闡述來生成。

e)抗體衍生物

在某些實施例中，可進一步修飾本文所提供之抗體以含有業內已知且易於獲得之額外非蛋白質性部分。適於衍生抗體之部分包含(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包含(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化之多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛可因其在水中具有穩定性而在製造方面具有優勢。聚合物可具有任何分子量，且可為具支鏈或不具支鏈。附接至抗體之聚合物的數目可有所變化，且若附接一個以上之聚合物，則其可為相同或不同分子。一般而言，衍生化所用聚合物之數量及/或類型可根據包含(但不限於)以下在內之考慮因素來確定：擬改良抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將用於界定條件下之療法等。

在另一實施例中，提供抗體及非蛋白性部分之偶聯物，其可藉由曝光於輻射來選擇性加熱。在一實施例中，非蛋白性部分係碳奈米管(Kam,N.W.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102(2005)11600-11605)。輻射可具有任一波長，且包含(但不限於)如下波長之輻射：其並不危害正常細胞，但將非蛋白質性部分加熱至可將毗鄰抗體-非蛋白質性部分之細胞殺滅的溫度。

B.重組方法及組合物

可使用重組方法及組合物來產生抗體，例如如US 4,816,567中所闡述。在一實施例中，提供本文所闡述之編碼抗人類τ(pS422)抗體之經分離核酸。此核酸可編碼抗體中包括VL之胺基酸序列及/或包括VH之胺基酸序列(例如抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施例中，提供一或多個包括此核酸之載體(例如表現載體)。在另一實施例中，提供包括此核酸之宿主細胞。在一此類實施例中，宿主細胞包括以下物質(例如已經該等物質轉化)：(1)包括如下核酸之載體：其編碼包括抗體之VL之胺基酸序列及包括抗體之VH之胺基酸序列，或(2)包括編碼包括抗體之VL之胺基酸序列之核酸的第一載體，及包括編碼包括抗體之VH之胺基酸序列之核酸的第二載體。在一實施例中，宿主細胞係真核細胞，如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一實施例中，提供製備抗人類τ(pS422)抗體之方法，其中該方法包括在適於表現抗體之條件下培養包括編碼如上文所提供抗體之核酸的宿主細胞，及視情況自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。

對於抗人類τ(pS422)抗體之重組產生，將一或多個編碼抗體之核酸(例如如上文所闡述)分離並插入一或多個載體中用於在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。此核酸可使用習用程序容易地分離出來並測序(例如藉由使用能與編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針)。

用於選殖或表現編碼抗體之載體之適宜宿主細胞包含本文所闡述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可在細菌中產生，尤其在無需糖基化及Fc效應物功能時。關於抗體片段及多肽在細菌中之表現，例如參見US 5,648,237、US 5,789,199及US 5,840,523(亦參見Charlton,K.A.,Methods in Molecular Biology，第248卷，Lo,B.K.C.(編輯)，Humana Press,Totowa,NJ,(2003)，第245-254頁，其闡述抗體片段在 大腸桿菌中之表現)。在表現之後，可自細菌細胞漿液以可溶部分形式分離出抗體且可進一步純化。

除原核生物外，真核微生物(例如絲狀真菌或酵母菌)亦係用於抗體編碼載體之適宜選殖或表現宿主，包含糖基化途徑已「人類化」從而產生具有部分或完全人類糖基化模式之抗體的真菌及酵母菌菌株。參見Gerngross,T.U.,Nat.Biotech.22(2004)1409-1414；及Li,H.等人，Nat.Biotech.24(2006)210-215。

用於表現糖基化抗體之適宜宿主細胞亦源自多細胞有機體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包含植物及昆蟲細胞。已確定多種桿狀病毒株可與昆蟲細胞聯合使用，尤其用於轉染草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞。

亦可利用植物細胞培養液作為宿主。例如參見US 5,959,177、US 6,040,498、US 6,420,548、US 7,125,978及US 6,417,429(闡述產生轉基因植物中之抗體之PLAN IBODIES^TM技術)。

亦可使用脊椎動物細胞作為宿主。舉例而言，可使用適於懸浮液生長之哺乳動物細胞系。有用之哺乳動物宿主細胞系之其他實例係藉由SV40轉變之猴腎臟CV1細胞系(COS-7)；人類胚胎腎臟細胞系(293或293細胞，如(例如)Graham,F.L.等人，J.Gen Virol.36(1977)59-74)；幼小倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠支持細胞(TM4細胞，如(例如)Mather,J.P.,Biol.Reprod.23(1980)243-252中所闡述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK)；布法羅大鼠肝細胞(buffalo rat liver cell)(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，如(例如)Mather,J.P.等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383(1982)44-68中所闡述；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他可用哺乳動物宿主細胞系包含中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包含DHFR^- CHO 細胞(Urlaub,G.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77(1980)4216-4220)；及骨髓瘤細胞系，例如Y0、NS0及Sp2/0。關於某些適於抗體產生之哺乳動物宿主細胞系之綜述參見(例如)Yazaki,P.及Wu,A.M.,Methods in Molecular Biology，第248卷，Lo,B.K.C.(編輯)，Humana Press,Totowa,NJ(2004)，第255-268頁。

C.分析

可藉由業內已知之各種分析來鑑別本文所提供之抗人類τ(pS422)抗體、篩選或表徵其物理/化學性質及/或生物活性。

1.結合分析及其他分析

在一態樣中，舉例而言，藉由已知方法(例如ELISA、a1phaLISA、西方印跡、抗體或反向陣列等)測試本發明抗體之抗原結合活性。

在實例性ELISA或alphaLISA分析中，藉由捕獲抗體(其特異性結合至τ(pS422)上之第一表位或呈某一構象之τ(pS422))及偶合至檢測實體之檢測抗體(其特異性結合至τ(pS422)之第二表位或構象)結合溶液(細胞上清液、細胞或組織裂解物、體液等)中之τ(pS422)。讀出係基於檢測實體(化學發光、螢光、能量轉移誘導之發光等)。在一些情況下，可在同一分析中使用同一抗體作為捕獲及檢測抗體以檢測τ(pS422)之聚集形式(例如參見Tokuda,T.等人，Neurology 75(2010)1766-1772)。

在抗體陣列之情形下，將抗體點樣於玻璃或硝基纖維素晶片上。阻斷載玻片且與含有τ(pS422)之溶液一起培育，洗滌以去除未結合抗體且使用螢光標記之相應二級抗體檢測結合抗體。藉由螢光載玻片掃描儀量測螢光信號。類似於反相陣列，將重組τ(pS422)、細胞上清液、細胞或組織裂解物、體液等點樣於玻璃或硝基纖維素晶片上。阻斷載玻片且將個體陣列與針對τ(pS422)上之特異性表位之抗體一起 培育。洗滌掉未結合抗體且使用螢光標記之相應二級抗體檢測結合抗體。藉由螢光載玻片掃描儀量測螢光信號(Dernick,G.等人，J.Lipid Res.52(2011)2323-2331)。

在西方印跡之實例中，根據SDS PAGE或原始凝膠條件中之分子量來分離聚集重組τ(pS422)或源自細胞上清液、細胞或組織裂解物、體液等之τ(pS422)且印跡於硝基纖維素或PVDF膜上。在阻斷之後，將膜與τ(pS422)之胺基酸序列或構象之特異性抗體一起培育。然後，洗滌膜以去除未結合抗體。藉由偶合至關於化學發光或螢光或其他檢測方式之檢測實體之相應二級抗體檢測結合抗體。τ(pS422)之胺基酸序列之特異性抗體將結合至呈各種聚集形式及由此各種分子量之τ(pS422)，只要表位未因聚集而遮蔽。另一方面，構象特異性抗體將僅檢測某些聚集形式之僅展示特定分子量處之帶之τ(pS422)(例如參見Towbin,H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76(1979)4350-4353；Burnette,W.N.,Anal.Biochem.112(1981)195-203)。

在另一態樣中，可使用競爭分析來鑑別與如本文所報告之(人類化)抗體競爭結合人類τ(pS422)之抗體。在某些實施例中，此一競爭性抗體結合如本文所報告之(人類化)抗體結合之相同表位(例如線性或構象表位)。定位抗體所結合之表位之詳細實例性方法提供於Morris,G.E.(編輯)，Epitope Mapping Protocols,Methods in Molecular Biology，第66卷，Humana Press,Totowa,NJ(1996)中。

在實例性競爭分析中，在溶液中培育固定化人類τ(pS422)，該溶液包括結合人類τ(pS422)之第一經標記抗體及正在測試與第一抗體競爭結合人類τ(pS422)之能力之第二未標記抗體。作為對照，在包括第一標記抗體但不包括第二未經標記抗體之溶液中培育固定人類τ(pS422)。在允許第一抗體結合人類τ(pS422)之條件下培育之後，去除過量之未結合抗體，且量測與固定人類τ(pS422)締合之標記的量。 若與固定人類τ(pS422)締合之標記之量在測試試樣中相對於對照試樣實質上減小，則此指示第二抗體與第一抗體競爭結合該人類τ(pS422)(例如參見Harlow,E.及Lane,D.,Antibodies：A Laboratory Manual，第14章，Cold Spring Harbor實驗室，Cold Spring Harbor,NY(1988))。

2.活性分析

在一態樣中，提供分析以鑑別其具有生物活性之抗人類τ(pS422)抗體。生物活性可包含(例如)防止/減小/抑制τ(pS422)誘導之細胞毒性及/或防止/減小/抑制寡聚人類τ(pS422)之細胞至細胞傳遞及/或減小LUHMES細胞中之τ(pS422)誘導之半胱天冬酶活性。亦提供在活體內及/或活體外具有此生物活性之抗體。

在某些實施例中，測試本發明抗體之此生物活性。

可藉由添加含有分泌τ(pS422)之條件化培養基(其引起接受神經元細胞上之細胞死亡)來評價保護性生物活性。此毒性可藉由添加如本文所闡述之保護性抗體來逆轉。先前已確定分泌τ(pS422)之毒性性質(Emmanouilidou,E.等人，J.Neurosci.,30(2010)6838-6851)。

D.用於診斷及檢測之方法及組合物

在某些實施例中，本文所提供之任一抗人類τ(pS422)抗體皆可用於檢測生物試樣中τ(pS422)之存在。本文所用之術語「檢測」涵蓋定量或定性檢測。在某些實施例中，生物試樣包括細胞或組織，例如腦組織。

在一實施例中，提供用於診斷或檢測方法中之抗人類τ(pS422)抗體。在另一態樣中，提供檢測生物試樣中之人類τ(pS422)之存在之方法。在某些實施例中，該方法包括：在允許抗人類τ(pS422)抗體結合人類τ(pS422)之條件下使生物試樣與如本文所闡述之抗人類τ(pS422)抗體接觸，及檢測在抗人類τ(pS422)抗體與人類τ(pS422)之間是否形成複合物。此方法可為活體外或活體內方法。在一實施例中，使用抗 人類τ(pS422)抗體來選擇適於使用抗人類τ(pS422)抗體之療法的個體，舉例而言，其中人類τ(pS422)係用於選擇患者之生物標記物。

可使用本發明抗體診斷之實例性病症包含具有類型1腦鐵累積之神經退化(NBIA1)、單純性自主神經衰竭、唐氏症候群、關島症候群及若干路易氏體(Lewy body)病症(例如彌散性路易氏體病(DLBD)、阿茲海默氏病之路易氏體變體(LBVAD))、某些形式之高雪氏病(Gaucher’s disease)及帕金森氏病失智症(Parkinson’s disease dementia，PDD)。

在某些實施例中，提供經標記之抗人類τ(pS422)抗體。標記包含(但不限於)直接檢測之標記或部分(例如螢光標記、發色標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射性標記)以及經由(例如)酶反應或分子相互作用間接檢測之部分(例如酶或配體)。實例性標記包含但不限於放射性同位素³²P、¹⁴C、¹²⁵I、³H及¹³¹I、螢光團(例如稀土螯合物或螢光黃及其衍生物)、玫瑰紅及其衍生物、丹醯、傘形酮、螢光素酶(例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶)(US 4,737,456)、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、辣根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)、雜環氧化酶(例如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，其與諸如HRP、乳過氧化物酶或微過氧化物酶等採用過氧化氫來氧化染料前體之酶結合)、生物素/抗生物素蛋白、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基及諸如此類。

E.醫藥調配物

如本文所闡述之抗人類τ(pS422)抗體之醫藥調配物係藉由混合具有期望純度之該抗體與一或多種醫藥上可接受之可選載劑(Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.(編輯)(1980))以凍乾之調配物或水溶液形式製得。醫藥上可接受之載劑通常 在所用劑量及濃度下對受體無毒，且包含(但不限於)：緩衝劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包含抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(例如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲氯銨；氯化苄烷銨；氯化苄甲乙氧銨；酚類、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚(乙烯基吡咯啶酮)；胺基酸，例如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；鹽形成抗衡離子，例如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型表面活性劑，例如聚乙二醇(PEG)。本文之實例性醫藥上可接受之載劑進一步包含間質性藥物分散劑，例如可溶性中性活性透明質酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20透明質酸酶糖蛋白，例如rhuPH20(HYLENEX^®,Baxter International,Inc.)。某些實例性sHASEGP及使用方法(包含rhuPH20)闡述於US 2005/0260186及US 2006/0104968中。在一態樣中，將sHASEGP與一或多種額外醣胺多醣酶(例如軟骨素酶)組合。

實例性凍乾抗體調配物闡述於US 6,267,958中。水性抗體調配物包含闡述於US 6,171,586及WO 2006/044908中之彼等，後一些調配物包含組胺酸-乙酸鹽緩衝液。

本文之調配物亦可視需要含有一種以上用於所治療特定適應症之活性成份，較佳為具有相互間不會產生不利影響之補充活性之彼等。舉例而言，可期望另外提供[[可與抗人類τ(pS422)抗體組合之藥物列表]]。此等活性成份適於以對欲達成目的有效之量以組合形式存在。

活性成份亦可分別裝入藉由(例如)凝聚技術或藉由界面聚合製備之微膠囊(例如羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)中、膠質藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)或粗滴乳液中。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.(編輯)(1980)中。

亦可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適宜實例包含含有抗體之固體疏水聚合物之半透性基質，該等基質呈成形物件之形式，例如膜或微膠囊。

擬用於活體內投與之調配物通常為無菌的。無菌性可藉由(例如)使用無菌過濾膜進行過濾來容易地達成。

F.治療方法及組合物

本文所提供之任一抗人類τ(pS422)抗體皆可用於治療方法中。

在一態樣中，提供用作藥劑之抗人類τ(pS422)抗體。在另一態樣中，提供用於治療阿茲海默氏病之抗人類τ(pS422)抗體。在某些實施例中，提供用於治療方法中之抗人類τ(pS422)抗體。在某些實施例中，本發明提供用於治療患有阿茲海默氏病個體之方法的抗人類τ(pS422)抗體，該方法包括向該個體投與有效量之抗人類τ(pS422)抗體。在一個該實施例中，該方法進一步包括向個體投與有效量之至少一種另外治療劑，例如下文所闡述。在其他實施例中，本發明提供用於以下之抗人類τ(pS422)抗體：抑制人類神經元及神經膠質細胞中τ(pS422)誘導之細胞毒性，或抑制寡聚人類τ(pS422)在神經元與神經膠質細胞間之細胞至細胞傳遞，或減小τ(pS422)誘導之半胱天冬酶(caspase)活性。在某些實施例中，本發明提供用於以下之方法中之抗人類τ(pS422)抗體：抑制人類神經元及神經膠質細胞中τ(pS422)誘導之細胞毒性，或抑制寡聚人類τ(pS422)在神經元與神經膠質細胞間之細胞至細胞傳遞，或減小個體中之τ(pS422)誘導之半胱天冬酶活性， 該方法包括向該個體投與有效抗人類τ(pS422)抗體以抑制人類神經元及神經膠質細胞中τ(pS422)誘導之細胞毒性，或抑制寡聚人類τ(pS422)在神經元與神經膠質細胞間之細胞至細胞傳遞，或減小τ(pS422)誘導之半胱天冬酶活性。上文任一實施例之「個體」較佳係人類。

在另一態樣中，本發明提供抗人類τ(pS422)抗體在製造或製備藥劑中之用途。在一個實施例中，該藥劑係用於治療阿茲海默氏病。在另一實施例中，該藥劑係用於治療阿茲海默氏病之方法，該方法包括向患有阿茲海默氏病之個體投與有效量之該藥劑。在一個該實施例中，該方法進一步包括向個體投與有效量之至少一種另外治療劑，例如下文所闡述。在另一實施例中，該藥劑係用於抑制人類神經元及神經膠質細胞中τ(pS422)誘導之細胞毒性，或用於抑制寡聚人類τ(pS422)在神經元與神經膠質細胞間之細胞至細胞傳遞，或用於減小τ(pS422)誘導之半胱天冬酶活性。在另一實施例中，該藥劑係用於抑制人類神經元及神經膠質細胞中τ(pS422)誘導之細胞毒性，或抑制寡聚人類τ(pS422)在神經元與神經膠質細胞間之細胞至細胞傳遞，或減小個體中τ(pS422)誘導之半胱天冬酶活性之方法中，其包括向該個體投與有效量之藥劑以抑制人類神經元及神經膠質細胞中τ(pS422)誘導之細胞毒性，或抑制寡聚人類τ(pS422)在神經元與神經膠質細胞間之細胞至細胞傳遞，或減小τ(pS422)誘導之半胱天冬酶活性。上文任一實施例之「個體」可為人類。

在另一態樣中，本發明提供治療阿茲海默氏病之方法。在一實施例中，該方法包括向患有該阿茲海默氏病之個體投與有效量之抗人類τ(pS422)抗體。在一該實施例中，該方法進一步包括向個體投與有效量之至少一種額外治療劑，如下文所闡述。上文任一實施例之「個體」可為人類。

在另一態樣中，本發明提供抑制人類神經元及神經膠質細胞中之τ(pS422)誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類τ(pS422)在神經元與神經膠質細胞之間之細胞至細胞傳遞或減小個體中τ(pS422)誘導之半胱天冬酶之方法。在一實施例中，該方法包括向個體投與有效量之抗人類τ(pS422)抗體以抑制人類神經元及神經膠質細胞中之τ(pS422)誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類τ(pS422)在神經元與神經膠質細胞之間之細胞至細胞傳遞或減小τ(pS422)誘導之半胱天冬酶活性。在一實施例中，「個體」係人類。

在另一態樣中，本發明提供醫藥調配物，其包括本文所提供抗人類τ(pS422)抗體中之任一者以(例如)用於上述治療方法中之任一者中。在一實施例中，醫藥調配物包括本文所提供抗人類τ(pS422)抗體中之任一者及醫藥上可接受之載劑。在另一實施例中，醫藥調配物包括本文所提供抗人類τ(pS422)抗體中之任一者及至少一種額外治療劑，例如如下文所闡述。

本發明抗體可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。舉例而言，可共投與本發明抗體與至少一種額外治療劑。

上述該等組合療法涵蓋組合投與(其中兩種或更多種治療劑包含在同一或分開調配物中)及分開投與(在此情形中，可在投與一或多種額外治療劑之前、同時及/或之後投與本發明抗體)。在一實施例中，抗人類τ(pS422)抗體之投與及額外治療劑之投與各自發生於約一個月內或約一週、兩週或三週內或約一天、兩天、三天、四天、五天或六天內。

本發明抗體(及任一額外治療劑)可藉由任何適宜方式投與，包含非經腸、肺內及鼻內以及(若期望用於局部治療)病灶內投與。非經腸輸注包含肌內、靜脈內、動脈內、腹膜腔內或皮下投與。可藉由任一適宜途徑(例如藉由注射，例如靜脈內或皮下注射)來進行投藥，此部 分取決於投與係短期投與或長期投與。本文涵蓋各種投藥方案，包含(但不限於)在不同時間點單次或多次投與、濃注投與及脈衝輸注。

本發明抗體應以符合良好醫療實踐之方式調配、投用及投與。在此上下文中需考慮之因素包含所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個體患者之臨床病狀、病因、藥劑之遞送位點、投與方法、投與時間安排及從業醫師所知之其他因素。抗體不需要(但視情況)與一或多種當前用於預防或治療所討論病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量端視調配物中所存在抗體之量、病症或治療之類型以及上文所討論之其他因素而定。該等藥劑通常以相同劑量及如本文所闡述之投與途徑來使用，或以本文所闡述劑量之約1%至99%來使用，或以憑經驗/臨床確定適宜之任一劑量及任一途徑來使用。

對疾病之預防或治療而言，本發明抗體之合適劑量(在單獨使用或與一或多種其他額外治療劑組合使用時)應端視擬治療疾病之類型、抗體類型、疾病之嚴重程度及病程、投與抗體係用於預防目的抑或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應以及主治醫師之判斷而定。抗體係以適宜方式一次性或經一系列治療投與患者。端視疾病之類型及嚴重度，不論(例如)藉由一或多次分開投與或藉由連續輸注來投與，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.5mg/kg至10mg/kg)抗體可為投與患者之初始候選劑量。端視上述因素而定，一種典型日劑量可介於約1μg/kg至100mg/kg之間或更高。在經若干天或更長時間重複投與時，端視病狀而定，治療通常持續至對疾病症狀之期望阻抑出現為止。抗體之一種實例性劑量可在約0.05mg/kg至約10mg/kg範圍內。因此，可投與患者約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其組合)之一或多個劑量。此等劑量可間歇性投與，例如每週一次或每三週一次(例如以使患者接受約兩個至約20個或例如約6個劑量之抗體)。可在開始時投與較高載量劑量，隨後投與一或多個較 低劑量。然而，可使用其他劑量方案。此療法之進展可容易地藉由習用技術及分析來監測。

應理解，代替抗人類τ(pS422)抗體或除抗人類τ(pS422)抗體以外，可使用本發明免疫偶聯物來實施上文任一調配或治療方法。

III.製造物件

在本發明另一態樣中，提供含有用於治療、預防及/或診斷上述病症之材料的製造物件。該製造物件包括容器及位於該容器上或與該容器相連之標記或包裝插頁。適宜容器包含(例如)瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。該等容器可由諸如玻璃或塑膠等多種材料形成。容器裝有自身或與另一組合物組合時可有效治療、預防及/或診斷病狀之組合物，且可具有無菌存取通道(舉例而言，該容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。該組合物中之至少一種活性劑係本發明抗體。標記或包裝插頁指示該組合物用於治療選定病狀。此外，該製造物件可包括：(a)含有組合物之第一容器，其中該組合物包括本發明抗體；及(b)含有組合物之第二容器，其中該組合物包括另一細胞毒性劑或治療劑。本發明此實施例中之製造物件可進一步包括指示組合物可用於治療特定病狀之包裝插頁。或者或另外，該製造物件可進一步包括第二(或第三)容器，該容器包括醫藥上可接受之緩衝液，例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。其可另外包含自商業及使用者角度來看期望之其他材料，包含其他緩衝劑、稀釋劑、濾膜、針及注射器。

應理解，代替抗人類τ(pS422)抗體或除抗人類τ(pS422)抗體以外，上文任一製造物件可包含本發明免疫偶聯物。

Ⅳ.具體實施例

1.一種特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體，其中該抗體 包括a)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，或b)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、77及10之HVR。

2.如項目1之人類化抗體，其進一步包括a)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：71、73及15之HVR，或b)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：70、72及15之HVR，或c)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及79之HVR，或d)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：71、81及15之HVR，或e)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及74之HVR，或f)在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及75之HVR。

3.如項目1至2中任一項之人類化抗體，其包括a)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：71、73及15之HVR，或b)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：70、72及15之HVR，或c)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、77及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及79之HVR，或d)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及79之HVR，或e)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、77及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：71、81及15之HVR，或f)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及74之HVR，或g)在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、77及10之HVR，及在輕鏈可變域中，SEQ ID NO：12、14及75之HVR。

4.如項目1至3中任一項之人類化抗體，其包括 a)SEQ ID NO：19之重鏈可變域及SEQ ID NO：67之輕鏈可變域，或b)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：66之輕鏈可變域，或c)SEQ ID NO：76之重鏈可變域及SEQ ID NO：78之輕鏈可變域，或d)SEQ ID NO：19之重鏈可變域及SEQ ID NO：78之輕鏈可變域，或e)SEQ ID NO：76之重鏈可變域及SEQ ID NO：80之輕鏈可變域，或f)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：67之輕鏈可變域，或g)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：68之輕鏈可變域，或h)SEQ ID NO：76之重鏈可變域及SEQ ID NO：69之輕鏈可變域。

5.一種人類化雙特異性抗體，其包括i)選自以下之第一結合位點：a)SEQ ID NO：20之重鏈可變域及SEQ ID NO：17之輕鏈可變域，或b)SEQ ID NO：19之重鏈可變域及SEQ ID NO：16之輕鏈可變域，或c)SEQ ID NO：19之重鏈可變域及SEQ ID NO：17之輕鏈可變域，或d)SEQ ID NO：21之重鏈可變域及SEQ ID NO：17之輕鏈可變域，或 e)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：67之輕鏈可變域，或f)SEQ ID NO：19之重鏈可變域及SEQ ID NO：66之輕鏈可變域，或g)SEQ ID NO：76之重鏈可變域及SEQ ID NO：78之輕鏈可變域，或h)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：78之輕鏈可變域，或i)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：66之輕鏈可變域，或j)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：68之輕鏈可變域，或k)SEQ ID NO：76之重鏈可變域及SEQ ID NO：69之輕鏈可變域，或l)SEQ ID NO：76之重鏈可變域及SEQ ID NO：80之輕鏈可變域，及ii)選自以下之第二結合位點：a)SEQ ID NO：82之重鏈可變域及SEQ ID NO：85之輕鏈可變域，或b)SEQ ID NO：83之重鏈可變域及SEQ ID NO：85之輕鏈可變域，或c)SEQ ID NO：84之重鏈可變域及SEQ ID NO：85之輕鏈可變域。

6.如項目1至5中任一項之人類化抗體，其中該抗體係用於治療阿茲海默氏病。

7.如項目1至6中任一項之人類化抗體，其中該抗體係效應物功能沉默。

8.如項目1至7中任一項之人類化抗體，其中該抗體並無效應物功能。

9.如項目1至8中任一項之人類化抗體，其中該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物。

10.如項目2至9中任一項之人類化抗體，其中該抗體具有以下EC₅₀值：a)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段，6ng/mL或更小，及/或b)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)，4.5ng/mL或更小，及/或c)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物，30ng/mL或更小，及/或d)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ，125ng/mL或更小。

11.如項目1至10中任一項之人類化抗體，其中該抗體特異性結合至人類τ(pS422)(SEQ ID NO：02)且並不結合至人類τ(SEQ ID NO：01)。

12.如項目1至11中任一項之人類化抗體，其中該抗體在重鏈可 變域中之位置4、24及78處具有纈胺酸殘基。

13.如項目1至12中任一項之人類化抗體，其中該抗體在重鏈可變域中之71位處具有精胺酸殘基。

14.如項目1至13中任一項之人類化抗體，其中該抗體係單株抗體。

15.如項目1至14中任一項之人類化抗體，其中該抗體係結合人類τ(pS422)之抗體片段且i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

16.如項目1至14中任一項之人類化抗體，其中該抗體係a)人類子類IgG1之全長抗體，或 b)人類子類IgG4之全長抗體，或c)具有突變L234A、L235A及P329G之人類子類IgG1之全長抗體，d)具有突變S228P、L235E及P329G之人類子類IgG4之全長抗體，e)在兩條重鏈中具有突變L234A、L235A及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C並在另一各別重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG1之全長抗體，或f)在兩條重鏈中具有突變S228P及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C並在另一各別重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG4之全長抗體。

17.一種人類化抗人類τ(pS422)抗體，其中a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73及SEQ ID NO：15之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)該抗體 i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

18.一種人類化抗人類τ(pS422)抗體，其中a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體 輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72及SEQ ID NO：15之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

19.一種人類化抗人類τ(pS422)抗體，其中a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中 i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：74之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚 集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

20.一種人類化抗人類τ(pS422)抗體，其中a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：77及SEQ ID NO：10之HVR，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域包括SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14及SEQ ID NO：75之HVR，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基 酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

21.一種人類化抗人類τ(pS422)抗體，其中a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：65之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：67之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

22.一種人類化抗人類τ(pS422)抗體，其中a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：65之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：66之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體 i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

23.一種人類化抗人類τ(pS422)抗體，其中a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：65之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離胺酸殘基，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中 i)可變域具有SEQ ID NO：68之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

24.一種人類化抗人類τ(pS422)抗體，其中a)該抗體包括兩條各自包括重鏈可變域及重鏈恆定區之抗體重鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：76之胺基酸序列，ii)恆定區係人類IgG1恆定區，其中可存在或不存在C-末端離 胺酸殘基，且iii)恆定區包括胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包括兩條各自包括輕鏈可變域及輕鏈恆定域之抗體輕鏈，其中i)可變域具有SEQ ID NO：69之胺基酸序列，ii)恆定區係人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，且c)該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物，及/或v)特異性結合至具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之全長人類τ，及/或vi)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片段具有6ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或vii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)具有4.5ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或viii)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物具有30ng/mL或更小之EC₅₀值，及/或ix)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ具有125ng/mL或更小之EC₅₀值。

25.如項目1至24中任一項之人類化抗體，其中該抗體在輕鏈可 變域中之32位處具有離胺酸(K)胺基酸殘基(根據Kabat進行編號)。

26.一種經分離核酸，其編碼如項目1至25中任一項之人類化抗體。

27.一種宿主細胞，其包括如項目26之核酸。

28.一種產生如項目1至25中任一項之人類化抗體之方法，其包括以下步驟：培養如本文所報告之宿主細胞，從而產生人類化抗體。

29.如項目28之方法，其進一步包括自細胞或培養基回收人類化抗體之步驟。

30.一種醫藥調配物，其包括如項目1至25中任一項之人類化抗體及醫藥上可接受之載劑。

31.如項目30之醫藥調配物，其進一步包括額外治療劑。

32.如項目31之醫藥調配物，其中該其他治療劑係抗類澱粉治療劑。

33.如項目32之醫藥調配物，其中該抗類澱粉治療劑係抗人類α-突觸核蛋白抗體或抗Abeta抗體。

34.如項目1至25中任一項之人類化抗體，其用作藥劑。

35.如項目1至25中任一項之人類化抗體，其用於治療阿茲海默氏病。

36.如項目1至25中任一項之人類化抗體，其用於治療前驅阿茲海默氏病。

37.如項目1至25中任一項之人類化抗體，其用於治療輕度阿茲海默氏病。

38.如項目1至25中任一項之人類化抗體，其用於減少τ(pS422)誘導之神經退化。

39.如項目1至25中任一項之人類化抗體，其用於維持認知及功能。

40.如項目1至25中任一項之人類化抗體，其用於減緩認知及功能衰退速率。

41.一種如項目1至25中任一項之人類化抗體之用途，其用於製造藥劑。

42.如項目34及41中任一項之用途，其中該藥劑係用於治療阿茲海默氏病。

43.如項目34及41至42中任一項之用途，其中該藥劑係用於治療前驅阿茲海默氏病。

44.如項目34及41至43中任一項之用途，其中該藥劑係用於治療輕度阿茲海默氏病。

45.如項目34及41至44中任一項之用途，其中該藥劑係用於減少τ(pS422)誘導之神經退化。

46.如項目34及41至45中任一項之用途，其中該藥劑係用於維持認知及功能。

47.如項目34及41至46中任一項之用途，其中該藥劑係用於減緩認知及功能衰退速率。

48.一種治療患有阿茲海默氏病之個體之方法，其包括向該個體投與有效量之如項目1至25中任一項之人類化抗人類τ(pS422)抗體。

49.一種減少個體之τ(pS422)誘導之神經退化之方法，其包括向該個體投與有效量之如項目1至25中任一項之人類化抗人類τ(pS422)抗體以減少τ(pS422)誘導之神經退化。

50.一種維持個體中之認知及功能之方法，其包括向該個體投與有效量之如項目1至25中任一項之人類化抗人類τ(pS422)抗體以維持認知及功能。

51.一種減緩個體中之認知及功能衰退速率之方法，其包括向 該個體投與有效量之如項目1至25中任一項之人類化抗人類τ(pS422)抗體以減緩認知及功能衰退速率。

52.一種如項目1至25中任一項之人類化抗人類τ(pS422)抗體之用途，其用於減少τ(pS422)誘導之神經退化。

53.一種如項目1至25中任一項之人類化抗人類τ(pS422)抗體之用途，其用於維持認知及功能。

54.一種如項目1至25中任一項之人類化抗人類τ(pS422)抗體之用途，其用於減緩認知及功能衰退速率。

55.如項目1至25中任一項之人類化抗體，其中該抗體i)結合至τ(pS422)轉基因小鼠及阿茲海默氏病患者之腦切片上之τ(pS422)；及/或標記τ(pS422)轉基因細胞中之τ(pS422)。

56.如項目1至25中任一項之人類化抗體，其中該抗體特異性結合至/識別人類τ(pS422)之早期及晚期疾病相關形式。

57.一種如項目1至25中任一項之人類化抗體之用途，其用於預防人類τ(pS422)相關之阿茲海默氏病擴展。

58.一種如項目1至25中任一項之人類化抗體之用途，其用於減小溶酶體膜崩解。

59.一種如項目1至25中任一項之人類化抗體之用途，其用於針對人類τ(pS422)誘導之去穩定及/或崩解穩定溶酶體膜。

60.一種如項目1至25中任一項之人類化抗體之用途，其用於預防阿茲海默氏病進展。

V.實例

以下係本發明方法及組合物之實例。應理解，鑒於上文所提供之一般說明可實踐各種其他實施例。

材料及方法 重組DNA技術

如以下文獻中所闡述使用標準方法來操縱DNA：Sambrook,J.等人，Molecular cloning：A laboratory manual；Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,1989。根據製造商說明書使用分子生物學試劑。

基因及寡核苷酸合成

藉由化學合成在Geneart GmbH(Regensburg,Germany)處製備期望基因區段。將所合成基因片段選殖至大腸桿菌質體中以用於繁殖/擴增。藉由DNA測序驗證亞選殖基因片段之DNA序列。或者，藉由複性以化學方式合成之寡核苷酸或經由PCR來組裝短合成DNA片段。藉由metabion GmbH(Planegg-Martinsried,Germany)製備各別寡核苷酸

試劑

若並未另外陳述，則所有商業化學試劑、抗體及套組皆係如根據製造商方案所提供之狀態來使用。

實例1 兔抗體之製備及純化 免疫化

使用來自查理士河實驗室(Charles River Laboratories)International,Inc.之NZW兔進行免疫化。將偶合至KLH之磷酸肽τ(416-430)[pS422]以1mg/ml之濃度溶於pH 7.0 K₃PO₄緩衝液中且與完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant，CFA)混合(1：1)直至生成穩定乳液為止。使三隻兔接受2ml乳液之皮內(i.d.)注射，隨後接受第二肌內(i.m.)及第三皮下(s.c.)注射(各自1ml，一週間隔)。在兩週後實施1ml之第四肌內注射，隨後以4週間隔再實施兩個1ml皮下注射。在第三、第四、第五及第六注射之後4-6天收集每一動物之10ml周邊全血試樣且用於FACS中之單一細胞分選。同時收集每一動物之額外0.5ml 血清且用於測定τ(416-463)[pS422]特異性抗體反應。

抗體反應

藉由使用ELISA連續稀釋血清來測定免疫化抗體反應，其中將30ng/孔之生物素化τ(416-430)[pS422]在4℃下於鏈黴抗生物素蛋白預塗覆之96孔微量滴定板(MC1347,Micro Coat Biotechnologie GmbH,Bernried,Germany)中之1×PBS中培育過夜。為進行檢測，以1：16000稀釋度使用連接至辣根過氧化物酶之山羊抗兔IgG(The Jackson實驗室)。使用沈澱四甲基聯苯胺(TMB)之BM Blue POD受質(來自Roche Diagnostics GmbH之即用溶液)以用於可視化。經由1N HCl來停止反應且使用Tecan Infinite根據450/690nm進行量測。

B細胞選殖 板塗覆

將無菌鏈黴抗生物素蛋白塗覆之6孔板(細胞培養等級)與種3生物素化對照肽(非磷酸化τ(416-430)、MCAK_Human(88-102)[95-pSer]及MAP2_Human(1802-1816)[pSer-1802])之混合物或與生物素化磷酸-肽τ(416-430)[pS422](各自以0.5-1μg/ml之濃度)在室溫下於PBS中培育1h。將板在使用之前使用無菌PBS洗滌三次。使用於碳酸鹽緩衝液(0.1M碳酸氫鈉，34mM碳酸氫二鈉，pH 9.55)中之2μg/ml KLH(鑰孔戚血藍蛋白)在4℃下過夜塗覆細胞培養6孔板。將板在使用之前於無菌PBS中洗滌三次。

兔末梢血單核細胞(PBMC)之分離

使用1×PBS將含有EDTA之全血稀釋兩倍，然後對哺乳動物淋巴球分離液(Cedarlane實驗室)實施密度離心以分離兔PBMC。在染色之前使用抗體將PBMC洗滌兩次。

EL-4 B5培養基

RPMI 1640(Pan Biotech,Aidenbach,Germany)，其補充有10% FCS(Hyclone,Logan,UT,USA)、2mM麩醯胺酸、1%青黴素(penicillin)/鏈黴素(streptomycin)溶液(PAA,Pasching,Austria)、2mM丙酮酸鈉、10mM HEPES(PAN Biotech,Aidenbach,Germany)及0.05mM β-巰基乙醇(Gibco,Paisley,Scotland)

巨噬球/單核球之消耗

使用無菌6孔板(細胞培養等級)經由非特異性黏附消耗巨噬球及單核球。使用KLH(鑰孔戚血藍蛋白)或使用鏈黴抗生物素蛋白及對照肽塗覆各孔。所最高4ml培養基及至多6×10⁶個來自經免疫兔之末梢血單核細胞填充每一孔且使其在37℃下於培育器中結合1h。將上清液中50%之細胞用於淘選步驟；對剩餘50%之細胞直接實施免疫螢光染色及單一細胞分選。

淘選肽上之B細胞

使用至多6×10⁶個細胞/4ml培養基接種塗覆有鏈黴抗生物素蛋白及生物素化肽τ(416-430)[pS422]之6孔組織培養板且使其在37℃下於培育器中結合1h。藉由使用1×PBS小心洗滌孔1-2次來去除非黏附細胞。藉由胰蛋白酶在37℃下於培育器中將剩餘黏性細胞剝離10min且然後在培養基中洗滌兩次。將細胞保持於冰上直至免疫螢光染色。

免疫螢光染色及單一細胞分選

用於單一細胞分選之抗兔IgG FITC係來自AbD Serotec(STAR121F,Düsseldorf,Germany)。對於表面染色，將來自消耗及淘選步驟之細胞與抗兔IgG FITC抗體在PBS中一起培育30min，且在4℃下於暗處在冷室中搖動。在離心後，藉由抽吸取出上清液。對PBMC實施2個循環之離心且使用冰冷PBS洗滌。最後，將PBMC再懸浮於冰冷PBS中且立即實施FACS分析。添加濃度為5μg/ml之碘化丙啶(BD Pharmingen,San Diego,CA,USA)，然後進行FACS分析以區分死細胞及活細胞。使用配備有FACSDiva軟體之Becton Dickinson FACSAria (BD Biosciences,USA)實施FACS且將經FITC-標記之單一活細胞沈積於96孔板中。

B細胞培養

藉由類似於由Zubler,R.H.等人，J.Immunol.134(1985)3662-3668所闡述方法之方法來製備B細胞培養液。簡言之，將單一分選B細胞在具有210μl/孔EL-4 B5培養基(含有Pansorbin細胞(1：20000)(Calbiochem(Merck),Darmstadt,Deutschland)、5%兔胸腺細胞上清液及γ-輻照EL-4-B5鼠類胸腺瘤細胞(2×10⁴/孔))之96孔板中在37℃下於培育器中之5% CO₂氣氛中培養7天。取出B細胞培養上清液以用於篩選且立即收穫細胞以用於可變區基因選殖或在-80℃下於100μl RLT緩衝液(Qiagen,Hilden,Germany)中冷凍。

B細胞純系篩選

藉由ELISA篩選B細胞培養上清液以結合至生物素化τ(416-430)[pS422]。使用非磷酸化τ(416-430)、KLH(鑰孔戚血藍蛋白)及非相關磷酸-肽MCAK_Human(88-102)[95-pSer]作為對照抗原。為製備ELISA板，將鏈黴抗生物素蛋白預塗覆之微量滴定板與50ng/ml生物素化τ(415-430)[pS422]在室溫下一起培育1小時。以1μg/ml使用KLH或對照肽實施塗覆。以1：5至1：10稀釋B細胞上清液且在抗原塗覆之微量滴定板中培育60min。在深度洗滌之後，使用綿羊抗兔IgG地高辛(digoxigenin)偶聯之檢測抗體(Chemicon AQ301D)檢測兔抗體之結合。在室溫下使用TMB培育之後，量測370nm-492nm下之吸光度。另外考慮使用生物素化τ(416-430)[pS422]得到高於背景之信號之B細胞純系(但使用KLH及MCAK_Human(88-102)[95-pSer]不能)且實施可變區基因選殖。

V-域之PCR擴增及測序

使用NucleoSpin^® 8/96 RNA套組(Macherey&Nagel；740709.4, 740698)根據製造商方案來製備總RNA。所有步驟皆係在epMotion 5075液體處理系統(Eppendorf)上實施。使用60μl無RNAse水洗脫RNA。使用6μl RNA藉由反轉錄酶反應使用Superscript III First-Strand Synthesis SuperMix(Invitrogen 18080-400)及寡dT-引子根據製造商說明書來生成cDNA。使用4μl cDNA利用AccuPrime SuperMix(Invitrogen 12344-040)以50μl之最終體積使用引子rbHCfinal.up及rbHCfinal.do(用於重鏈)及rbLCfinal.up及rbLCfinal.do(用於輕鏈)來擴增免疫球蛋白重及輕鏈可變區(VH及VL)(參見下表)。PCR條件如下：在94℃下經5min熱啟動；在94℃下35個20s循環，在70℃下20s，在68℃下45s，且最終延伸於68℃下保持7min。

將8μl 50μl PCR溶液裝載於48 E-Gel 2%(Invitrogen G8008-02)上。使用NucleoSpin^® Extract II套組(Macherey&Nagel；740609250)根據製造商方案來清洗陽性PCR反應液且在50μl洗脫緩衝液中洗脫。直接以兩個方向使用rbHCfinal.up及rbHCfinal.do(用於重鏈)及rbLCfinal.up及rbLCfinal.do(用於輕鏈)對12μl經純化PCR產物實施測序(參見上表)。

兔單株抗體及兔/小鼠嵌合抗體之重組表現

為重組表現兔單株抗體，藉由懸垂選殖方法將編碼VH或VL之 PCR產物以cDNA形式選殖至表現載體中(Haun,R.S.等人，BioTechniques 13(1992)515-518；Li,M.Z.等人，Nature Methods 4(2007)251-256)。藉由PCR使用重疊引子來擴增編碼VH插入體之兔κ或γ恆定區及VL之線性化表現質體。將經純化PCR產物與生成單鏈懸垂之T4 DNA-聚合酶一起培育。藉由添加dCTP來停止反應。在下一步驟中，組合質體及插入體且與誘導位點特異性重組之RecA一起培育。將經重組質體轉變至大腸桿菌中。第二天，挑選生長菌落且藉由質體製備、限制分析及DNA測序來測試正確重組之質體。對於抗體表現，將所分離HC及LC質體短暫共轉染至HEK293細胞中且在1週之後收穫上清液。對於兔小鼠嵌合抗體之選殖及表現，藉由PCR擴增VH及VL區域且亞選殖至含有小鼠恆定κ或小鼠恆定γ 1區域之表現載體中。分離兔/小鼠嵌合HC及LC質體，藉由限制分析及DNA測序測試正確插入且短暫共轉染至HEK293細胞中。在轉染之後一週收穫上清液。

抗體純化

在MabSelectSuRe^TM管柱(GE Healthcare)上自細胞培養上清液純化重組表現之兔抗體。在試樣裝載之前，使用25mmol/L Tris-HCl、25mmol/L pH 7.4 NaCl平衡管柱。使用50mmol/L pH 3.14乙酸鹽洗脫抗體。將所洗脫試樣立即裝載於去鹽管柱(Sephadex G25,GE Healthcare)上且在20mmol/L His-HCl、140mmol/L pH 6.0 NaCl中洗脫。亦使用此緩衝液來儲存純化抗體。一般儲存溫度為4℃，在純化製程期間為室溫且在等分之後為-80℃。在MabSelectSuRe^TM管柱(GE Healthcare)上純化來自細胞培養上清液之重組表現之兔/小鼠嵌合體抗體。在試樣裝載之前，使用1×PBS(pH 7.4)平衡管柱。使用100mmol/L pH 3.0檸檬酸鹽洗脫抗體。立即使用2mol/L pH 9.0 Tris/HCl中和所洗脫試樣。然後，將抗體裝載於粒徑篩析管柱(Superdex 200, GE Healthcare)上且在20mmol/L His-HCl、140mmol/L pH 6.0 NaCl中洗脫。亦使用此緩衝液來儲存純化抗體。一般儲存溫度為4℃，在純化製程期間為室溫且在等分之後為-80℃。

實例2 抗τ pS422單株兔抗體對在pS422處磷酸化之τ具有高度選擇性且結合至τ pS422之原纖維聚集物 ELISA

在HEK 293細胞中重組表現兔單株抗體。藉由ELISA測試細胞培養上清液或經純化兔抗體至生物素化τ(416-430)[pS422]、非磷酸化τ(416-430)、KLH(鑰孔戚血藍蛋白)及非相關磷酸-肽MCAK_Human(88-102)[95-pSer]之結合。為製備ELISA板，將鏈黴抗生物素蛋白預塗覆之微量滴定板與50ng/ml生物素化τ(415-430)[pS422]在室溫下一起培育1小時。以1μg/ml使用KLH或對照肽實施塗覆。將兔抗τ pS422抗體(Abcam AB51071)或含有兔抗體之上清液以各種濃度在抗原標記之微量滴定板中培育60min。在深度洗滌之後，使用綿羊抗兔IgG地高辛偶聯檢測抗體(Chemicon AQ301D)檢測兔抗體之結合。在室溫下使用TMB培育之後，量測370nm-492nm下之吸光度。藉由EC50值來描述抗體結合。藉由EC50值來描述抗體至生物素化τ(416-430)[pS422]及非磷酸化τ(416-430)肽之結合。藉由單點量測在高濃度下(亦即在細胞培養上清液之1：5稀釋度下)估計與KLH或MCAK磷酸肽之交叉反應性。結果展示於下表中。發現至τ磷酸肽之結合之EC50值低於至τ肽之結合之EC50值100倍以上，從而指示對磷酸化τ片段之選擇性至少為非磷酸化τ肽之100倍。所有抗體至KLH及MCAK對照磷酸肽之結合係處於背景程度下，其為與τ磷酸肽之最大量測值之約1<3%。

表：

亦測試對可溶性及聚集全長τ pS422之特異性。將τ pS422(300μg/ml)之原纖維聚集物在室溫下塗覆至基於聚苯乙烯之Maxisorb微量滴定板(Nunc)上過夜。以類似方式，將可溶性全長τ及τ pS422塗覆至Maxisorb微量滴定板上。添加兔抗τ pS422抗體對照(Abcam AB51071)或經純化兔抗體且以至多1000ng/ml之濃度培育60min。在深度洗滌之後，使用綿羊抗兔IgG地高辛偶聯檢測抗體(Chemicon AQ301D)檢測兔抗體之結合。在室溫下使用TMB培育之後，量測370nm-492nm下之吸光度。藉由EC50值來描述抗體結合。結果展示於下表中。

兔單株抗體以低於1ng/ml之EC50值結合至τ-pS422蛋白。使用介於0.4ng/ml至14ng/ml之間之EC50值檢測原纖維τ pS422。結合至非磷酸化全長τ蛋白之信號與背景值不可區分。因此，據估計，每一抗體較τ以至少100倍之選擇性結合至τ pS422及原纖維τ pS422。

BIAcore ^TM

進一步探究至原纖維τ pS422聚集物之結合且藉由BIAcore^TM分析予以證實。使用BIAcore 3000儀器在37℃下實施量測。系統及試樣緩衝液係HBS-EP(10mM HEPES、150mM NaCl、3.4mM EDTA、0.005%聚山梨醇酯20(v/v))。對BIAcore^TM CM5感測器晶片實施預處理程序。經30sec依序將0.1% SDS、50mM NaOH、10mM HCl及100mM H₃PO₄注入流動槽FC1、FC2、FC3及FC4中。根據製造商說明書使用BIAcore 3000^TM嚮導v.4.1進行胺偶合程序。在感測器表面之EDC/NHS活化之後，將非磷酸選擇性抗τ抗體mAb<TAU>M-4/53-IgG固定於感測器流動槽FC2、FC3及FC4上。作為對照，將針對CK-MM(肌酸激酶同型)且識別非相關抗原之抗體捕獲於FC1上。將mAb<TAU>M-4/53-IgG及針對CK-MM之抗體以30μg/ml稀釋於10mM pH 5.0 NaAc中且以10μl/min經7min接觸時間注入以固定10.000RU之抗體捕獲系統。藉由使用1M乙醇胺實施飽和來鈍化表面。藉由5個循環使用磷酸化絲狀τ蛋白(0.3mg/ml儲備液，以1：100稀釋於HBS-EP中)作為分析物(以溶液形式，10μl/min)來將感測器條件化2min。使用10mM pH 2.5甘胺酸以30μl/min經3min實施再生。假設結合mAb 4/53之分析物並不解離pτ絲，此乃因並未觀察到pτ絲自mAb 4/53解離。對於所有其他量測循環而言，將0.3mg/ml pτ絲以1：100稀釋於HBS-EP緩衝液中且以10μl/min經1min.注入以使pτ以異質夾心模式存在於各別抗體分析物中。將抗體分析物在HBS-EP緩衝液中稀釋至濃度為100nM 且以20μl/min經3min注入系統中。在解離3min之後，藉由以100μl/min經1min注入10mM pH 2.5甘胺酸2次、隨後以100μl/minHBS洗滌15sec來再生感測器表面。監測相互作用之締合期及解離期。因溶液中之抗體分析物為二價，故藉由雙相解離模型來表徵親合力負荷之抗體-pτ動力學，該模型係由基於親和力之早期快速解離步驟及隨後之稍後複合物解離中之親合力穩定化但速率限制性動力學步驟組成。在可能之情形下，在分析物注入之後10sec(早期)及50sec(後期)，量化kd及t/2(diss)。使用雙重參照程序評估動力學量測。首先，扣除來自FC1參考之信號以校正緩衝液體效應及非特異性結合。其次，扣除0nM分析物注入以校正一級抗體自各別捕獲系統之解離。使用蘭格繆爾1.1解離擬合模型根據BIAcore^TM評估軟體v.4.1來評估動力學速率。根據式ln(2)/60*kd來計算抗原/抗體複合物穩定性半衰期(min)。

結果匯總於下表中。

實例3 阿茲海默氏病患者之腦切片中之抗τ pS422單株兔抗體至細胞內pτ之結合

藉由免疫螢光染色實驗使用來自AD患者之人腦組織冰凍切片來探究藉由單株兔抗τ pS422抗體對阿茲海默氏病腦組織中之pτ病況之 特異性及敏感性免疫組織化學檢測。程序與如實例X(鼠類抗體)中所闡述基本相同。藉由山羊抗兔Alexa Fluor488^®偶聯之二級抗體(Invitrogen/Molecular Probes A11034)檢測兔IgG。pτ沈積物及絲之特異性及敏感性染色對於純系Mab 005、Mab 019、Mab 020、Mab 085、Mab 086及Mab 097顯而易見。可看到細胞內pτ沈積物，例如大神經原纖維纏結及狹長嗜中性球線串。經測定，所探究所有純系之最小有效濃度介於0.08μg/ml與0.016μg/ml之間，此指示對真實人類pτ沈積物之高度敏感性結合。

實例4 兔抗人類τ(pS422)抗體之人類化

本文所用之「可變區」(輕鏈可變區(VL)、重鏈可變區(VH))表示直接參與抗體與τ(pS422)抗原結合之每一輕鏈與重鏈對。輕鏈及重鏈可變域具有相同的一般結構，且每一域包括四個框架區(FR)，其序列高度保守且其藉由三個「超變區」連結。

以電腦分析兔抗體mAb 086之VH及VL域之結構且與人類VH及VL域之結構資料庫(IMGT)進行比較。選擇一組在結構上極為類似之V域來將兔抗體之CDR接枝於所選人類VH及VL域上。另外，考慮一級序列之類似性以藉由比對兔抗體之VH及VL域之一級序列與人類V域譜來縮小人類V域之選擇。將人類框架區內至兔親代殘基之回復突變引入一些人類化變體中。類似地，若適當，則將CDR中之突變引入一些變體中以潛在增加對抗原之親和力，維持CDR三級結構，且去除不期望特徵(例如半胱胺酸殘基或可在抗體純化之後發生修飾之殘基)。

將重鏈及輕鏈載體(各自含有人類化變體)以基質方式共轉染至微量滴定培養板中之HEK293懸浮液細胞中以獲得表現所有可能輕鏈/重鏈組合之實際尺寸IgG之細胞培養液。中37℃下栽培5天之後，收穫上 清液且藉由蛋白質A親和層析以微量滴定等級純化。

實例5 重組表現載體之生成 a)使用人類IgG1恆定區生成用於表現免疫球蛋白重鏈之載體

藉由將編碼各別抗人類τ(pS422)特異性抗體VH域之DNA片段融合至編碼人類IgG1恆定區之序列元件來組裝編碼包括人類IgG1恆定區(CH1、鉸鏈、CH2、CH3)及源自兔抗體Mab 086之人類化抗人類τ(pS422)抗體VH域之融合基因的人類化重鏈。

人類IgG1恆定區具有下列胺基酸序列： (SEQ ID No：58)。

表現載體亦包括來自載體pUC18之複製起點(其容許在大腸桿菌中複製此質體)及β-內醯胺酶基因(其賦予大腸桿菌中之胺苄青黴素(ampicillin)抗性)。

抗體重鏈之轉錄單元在5’至3’方向上包括下列功能元件：- 來自人類巨細胞病毒(P-CMV)之立即早期增強子及啟動子，包含內含子A，- 人類重鏈免疫球蛋白5’-未轉譯區(5’UTR)， - 鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列，- 編碼核酸之重鏈可變(VH)域，- 編碼核酸之人類IgG1恆定區，及- 牛生長激素多聚腺苷酸化序列(BGH pA)。

b)使用人類Ig-κ恆定區生成用於表現免疫球蛋白輕鏈之載體

藉由將編碼各別抗人類τ(pS422)抗體VL(κ)域之DNA片段融合至編碼人類Ig-κ恆定區之序列元件來組裝編碼包括人類Ig-κ恆定區(CL-κ)及源自兔抗體Mab 086之抗人類τ(pS422)抗體VL(κ)域之融合基因的人類化κ輕鏈。

人類Ig-κ恆定區具有下列胺基酸序列： (SEQ ID No：59)。

表現載體亦包括來自載體pUC18之複製起點(其容許在大腸桿菌中複製此質體)及β-內醯胺酶基因(其賦予大腸桿菌中之胺苄青黴素抗性)。

抗體κ輕鏈之轉錄單元在5’至3’方向上包括下列功能元件：- 來自人類巨細胞病毒(P-CMV)之立即早期增強子及啟動子，包含內含子A，- 人類重鏈免疫球蛋白5’-未轉譯區(5’UTR)，- 鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列，- 編碼核酸之輕鏈可變(VL)域，- 編碼核酸之人類Ig-κ恆定區，及- 牛生長激素多聚腺苷酸化序列(BGH pA)。

c)使用人類Ig-λ恆定區生成用於表現免疫球蛋白輕鏈之載體

藉由將編碼各別抗人類τ(pS422)抗體VL(λ)域之DNA片段融合至編碼人類Ig-λ恆定區之序列元件來組裝編碼包括人類Ig-λ恆定區(CL-λ)及源自兔抗體Mab 086之抗人類τ(pS422)抗體VL(λ)域之融合基因的人類化λ輕鏈。

人類Ig-λ恆定區具有下列胺基酸序列： (SEQ ID No：60)。

表現載體亦包括來自載體pUC18之複製起點(其容許在大腸桿菌中複製此質體)及β-內醯胺酶基因(其賦予大腸桿菌中之胺苄青黴素抗性)。

抗體λ輕鏈之轉錄單元在5’至3’方向上包括下列功能元件：- 來自人類巨細胞病毒(P-CMV)之立即早期增強子及啟動子，包含內含子A，- 人類重鏈免疫球蛋白5’-未轉譯區(5’UTR)，- 鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列，- 編碼核酸之可變輕鏈(VL)域，- 編碼核酸之人類Ig-λ恆定區，及- 牛生長激素多聚腺苷酸化序列(BGH pA)。

d)使用人類Ig-κ恆定區生成用於表現免疫球蛋白κ輕鏈之載體

藉由將編碼各別抗人類τ(pS422)-抗體VL(κ)域之DNA片段融合至編碼人類Ig-κ恆定區之序列元件來組裝編碼包括人類Ig-κ恆定區(CL-κ)及源自兔抗體Mab 086之抗人類τ(S422)抗體VL(κ)域之融合基因的人類Ig-κ輕鏈。構築體係呈基因體構造，亦即內含子存在於信號肽中及VL(κ)與CL-κ域之間。

表現載體亦包括來自載體pUC18之複製起點(其容許在大腸桿菌中複製此質體)及β-內醯胺酶基因(其賦予大腸桿菌中之胺苄青黴素抗性)。

抗體κ輕鏈之轉錄單元在5’至3’方向上包括下列功能元件：- 來自人類巨細胞病毒(P-CMV)之立即早期增強子及啟動子- 人類重鏈免疫球蛋白5’-未轉譯區(5’UTR)，- 鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列，- 編碼核酸之輕鏈可變(VL)域，- 人類IgG κ恆定區，及- 牛生長激素多聚腺苷酸化序列(BGH pA)。

e)使用人類Ig-λ恆定區生成用於表現免疫球蛋白λ輕鏈之載體

藉由將編碼各別抗人類τ(pS422)-抗體VL(λ)域之DNA片段融合至編碼人類Ig-λ恆定區之序列元件來組裝編碼包括人類Ig-λ恆定區(CL-λ)及源自兔抗體Mab 086之抗人類τ(S422)抗體VL(λ)域之融合基因的人類Ig-λ輕鏈。構築體係呈基因體構造，亦即內含子存在於信號肽中及VL(λ)與CL-λ域之間。

表現載體亦包括來自載體pUC18之複製起點(其容許在大腸桿菌中複製此質體)及β-內醯胺酶基因(其賦予大腸桿菌中之胺苄青黴素抗性)。

抗體λ輕鏈之轉錄單元在5’至3’方向上包括下列功能元件：- 來自人類巨細胞病毒(P-CMV)之立即早期增強子及啟動子- 人類重鏈免疫球蛋白5’-未轉譯區(5’UTR)，- 鼠類免疫球蛋白重鏈信號序列，- 編碼核酸之輕鏈可變(VL)域，- 人類IgG λ恆定區，及- 牛生長激素多聚腺苷酸化序列(BGH pA)。

實例6 抗人類τ(pS422)抗體之重組產生

在栽培於F17培養基(Invitrogen Corp.)中之短暫轉染之HEK293細胞(人類胚胎腎臟細胞系293源)中產生抗體。為如實例5中所闡述來轉染各別載體，使用「無293」轉染試劑(Novagen)。自個體表現質體來表現抗體。如製造商說明書中所指定來實施轉染。在轉染之後三至七天收穫含有重組抗體之細胞培養上清液。將上清液儲存於減小之溫度(例如-80℃)下直至純化。

關於在(例如)HEK293細胞中重組表現人類免疫球蛋白之一般資訊，參見：Meissner,P.等人，Biotechnol.Bioeng.75(2001)197-203。

實例7 重組抗人類τ(pS422)抗體之純化

過濾含有抗體之培養上清液且藉由兩個層析步驟純化。

藉由親和層析使用經pH 7.4 PBS(1mM KH₂PO₄、10mM Na₂HPO₄、137mM NaCl、2.7mM KCl)平衡之HiTrap MabSelectSuRe(GE Healthcare)來捕獲抗體。藉由使用平衡緩衝液洗滌來去除未結合蛋白質，且使用25mM pH 3.1檸檬酸鹽緩衝液回收抗體，在洗脫之後立即使用1M pH 9.0 Tris-base調節至pH 6.0。

使用Superdex 200^TM(GE Healthcare)上之粒徑篩析層析作為第二純化步驟。在20mM組胺酸緩衝液、0.14M pH 6.0 NaCl實施粒徑篩析層析。使用配備有Biomax-SK膜之Ultrafree-CL離心過濾單元(Millipore,Billerica,MA,USA)濃縮含有抗體之溶液且儲存於-80℃下。

實例8 動力學篩選

根據Schraeml等人(Schraeml,M.及M.Biehl,Methods Mol.Biol.901(2012)171-181)在安裝有BIAcore CM5感測器之BIAcore 4000儀器上實施動力學篩選。BIAcore 4000儀器係在V1.1版軟體之控制下。將BIAcore CM5系列S晶片安裝至儀器中且根據製造商說明書以流體動力學方式定址並預條件化。儀器緩衝液係HBS-EP緩衝液(10mM HEPES(pH 7.4)、150mM NaCl、1mM EDTA、0.05%(w/v)P20)。在感測器表面上製備抗體捕獲系統。將具有人類IgG-Fc特異性之多株山羊抗人類抗體(Jackson Lab.)以10,000RU使用NHS/EDC化學固定(30μg/ml，於10mM乙酸鈉緩衝液(pH 5)中)至儀器流動槽1、2、3及4中之斑點1、2、4及5處。在每一流動槽中，將抗體捕獲於斑點1及斑點5上。使用斑點2及斑點4作為參考斑點。使用1M乙醇胺溶液將感測器鈍化。將人類化抗體衍生物以介於44nM與70nM之間之濃度施加於補充有1mg/ml CMD(羧基甲基聚葡萄糖)之儀器緩衝液中。以30μl/min之流速經2min來注入抗體。以相對反應單元(RU)來量測表面呈遞抗體之捕獲量(CL)。以300nM經3min以30μl/min之流速注入分析物溶液(磷酸化人類τ蛋白、非磷酸化人類τ蛋白及磷酸化人類τ突變體蛋白質T422S)。監測解離5min。藉由經1min.將10mM pH 1.7甘胺酸緩衝液以30μL/min.注入所有流動槽中來再生捕獲系統。使用兩個報告點(在分析物注入即將結束之前之記錄信號(表示為後期結合(BL))及在解離時間即將結束之前之記錄信號(後期穩定性(SL)))來描述動力學篩選性能。此外，根據蘭格繆爾模型來計算解離速率常數kd(1/s)且根據式ln(2)/(60*kd)以分鐘形式來計算抗體/抗原複合物半衰期。根據式MR=(後期結合(RU))/(捕獲量(RU))*(MW(抗體)/(MW(抗原))來計算莫耳比(MR)。若感測器係經適宜量之抗體配體捕獲量構形，則每一抗體應能夠至少在功能上結合至溶液中之一種分析物，此由莫耳比MR=1.0來表示。然後，莫耳比亦指示分析物結合之化合價模式。 對於結合兩種分析物(各自具有一種Fab化合價)之抗體，最大化合價可為MR=2。

在另一實施例中，在25℃及37℃下使用相同實驗設置但使用溶液中每一分析物之多個濃度系列(0nM(緩衝液)、1.2nM、3.7nM、11.1nM、33.3nM、100nM及300nM)來測定動力學速率。自濃度依賴性結合行為，使用BIAcore評估軟體根據製造商說明書及蘭格繆爾1.1模型(具有RMAX global)來計算動力學數據。

實例9 ELISA

向未經塗覆之Maxisorb板上添加於PBS中之非生物素化肽/蛋白質/聚集物且向經鏈黴抗生物素蛋白塗覆之Maxisorb板上添加於PBS中之生物素化肽/蛋白質/聚集物並培育過夜。棄除上清液且使用90μl洗滌緩衝液(1×PBS/0.1% Tween 20)將各孔洗滌三次。使用阻斷緩衝液(1×PBS/2% BSA(牛血清白蛋白部分V，無脂肪酸，Roche，目錄編號：10735078001)/0.05% Tween 20)藉由培育1h來阻斷剩餘反應性斑點。棄除上清液且使用90μl洗滌緩衝液將各孔洗滌三次。在ELISA緩衝液(1×PBS/0.5% BSA(牛血清白蛋白部分V，無脂肪酸，Roche，目錄編號：10735078001)/0.05% Tween 20)以500ng/mL之起始濃度製備試樣及對照抗體之12份稀釋液(1：2)。在室溫下於振盪器上之培育時間為60分鐘。棄除上清液且使用90μl洗滌緩衝液將各孔洗滌三次。在ELISA緩衝液中製備二級抗體之溶液。將總共25μl抗體混合物轉移至分析板之所有孔中且然後將板在室溫下於振盪器上培育60分鐘。棄除上清液且使用90μl洗滌緩衝液將各孔洗滌三次。向所有孔中添加25μl ABTS溶液。在405nm-492nm下讀取吸光度。

實例10 pτ肽結合抗pτ抗體之動力學量測(捕獲分析)

藉由表面電漿共振使用BIACORE T200儀器(GE Healthcare)來探究pτ片段至抗pτ抗體之結合。在pH 5.0下，藉由使用由GE Healthcare供應之胺偶合套組將捕獲系統(10μg/ml山羊抗人類Fc抗體；Jackson Immuno Research；命令碼：JIR 109-005-098)之約10,000個共振單位(RU)偶合於CM5晶片(GE Healthcare BR-1005-30)上。對於運行緩衝液而言，使用pH 7.4 HBS-N(10mM HEPES、150mM pH 7.4 NaCl，GE Healthcare)。為量測試樣，運行及稀釋緩衝液係pH 7.4 PBS-T(包含0.05% Tween20之10mM磷酸鹽緩衝鹽水)。將試樣區塊設定於12℃。將流動槽設定於25℃且使用運行緩衝液引發兩次。

藉由經300sec以10μl/min之流速注入10μg/ml溶液來捕獲抗pτ-抗體。藉由以不同濃度之溶液經180sec以30μl/min之流速自300nM開始以1：3稀釋液注入pτ片段來量測締合。將解離期監測至多300sec且藉由自試樣溶液轉換為運行緩衝液來觸發。藉由以下方式來再生表面：使用0.85%磷酸溶液洗滌60sec，隨後使用5mM氫氧化鈉溶液以10μl/min之流速洗滌60sec。藉由扣除自山羊抗人類Fc抗體表面獲得之反應來校正本體折射率差。亦扣除空白注入(=雙重參照)。為計算KD及其他動力學參數，使用蘭格繆爾1：1模型。

實例11 抗pτ抗體Fab片段結合pτ片段之動力學量測(直接分析)

藉由表面電漿共振使用BIACORE T200儀器(GE Healthcare)來探究抗pτ抗體Fab片段試樣至pτ片段之結合。將生物素化pτ片段(0.2μg/ml；pτ(416-430)[Bi-XUUUU-416；pSer-422]amid)之約20個共振單位(RU)偶合於Series S SA晶片(GE Healthcare BR-1005-31)上。用於固定之運行及稀釋緩衝液係pH 7.4 HBS-N(10mM HEPES、150mM pH 7.4 NaCl，GE Healthcare)。對於下列動力學表徵，運行及稀釋緩衝液係pH 7.4 PBS-T(包含0.05% Tween20之10mM磷酸鹽緩衝鹽水)。將 試樣區塊設定於12℃。將流動槽設定於25℃且使用運行緩衝液引發兩次。

藉由以不同濃度之溶液經180sec以30μl/min之流速自100nM開始以1：3稀釋液注入抗pτ抗體Fab片段試樣來量測締合。將解離期監測至多600sec且藉由自試樣溶液轉換為運行緩衝液來觸發。藉由以10μl/min之流速使用10mM pH 1.7甘胺酸溶液之一個注入洗滌60sec來使表面再生。藉由扣除自空白表面獲得之反應來校正本體折射率差。亦扣除空白注入(=雙重參照)。為計算KD及其他動力學參數，使用蘭格繆爾1：1模型。

實例12 抗pτ抗體Fab片段結合全長pτ之動力學量測(直接分析)

藉由表面電漿共振使用BIACORE T200儀器(GE Healthcare)來探究抗pτ抗體Fab片段試樣至全長pτ蛋白之結合。將生物素化pτ蛋白(2μg/ml)之約200個共振單位(RU)偶合於Series S SA晶片(GE Healthcare BR-1005-31)上。用於固定之運行及稀釋緩衝液係pH 7.4 HBS-N(10mM HEPES、150mM pH 7.4 NaCl，GE Healthcare)。對於下列動力學表徵，運行及稀釋緩衝液係pH 7.4 PBS-T(包含0.05% Tween20之10mM磷酸鹽緩衝鹽水)。將試樣區塊設定於12℃。將流動槽設定於25℃且使用運行緩衝液引發兩次。

藉由以不同濃度之溶液經180sec以30μl/min之流速自300nM開始以1：3稀釋液注入抗pτ抗體Fab片段試樣來量測締合。將解離期監測至多600sec且藉由自試樣溶液轉換為運行緩衝液來觸發。藉由以10μl/min之流速使用10mM pH 1.7甘胺酸溶液之一個注入洗滌60sec來使表面再生。藉由扣除自空白表面獲得之反應來校正本體折射率差。亦扣除空白注入(=雙重參照)。為計算KD及其他動力學參數，使用蘭格繆爾1：1模型。

實例13 抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL31A1)及抗τ(pS422)抗體(VH35H5/VL49G1)對人類-τ過表現小鼠中之τ病況之效應

使用抗體1(VH35H5/VL31A1)、抗體2(VH35H5/VL49G1)或媒劑治療過表現最長人類τ同種型之τPS2APP轉基因小鼠(Grüninger等人，Neurobiol.Dis.37(2010)294)16週時段。在即將治療之前，藉由投與單一劑量之抗CD4抗體(0.5mg/小鼠)來對所有小鼠實施免疫阻抑。隨後使小鼠每週接受腹膜腔內注射之各別抗體或媒劑(自9個月齡開始)。對於兩種抗體中之每一者而言，測試三個分開劑量，亦即1.7mg/kg、5mg/kg及15mg/kg。在最後注射4-6天之後將小鼠處死，穿心灌注且取出腦用於分析。在實驗開始時將小鼠未治療組(9個月齡)處死且用作基線對比。

將每一腦沿徑向切片且將個別半球速凍於乾冰上。將左半球用於τ、τ(pS422)及τ聚集物之生物化學量化(藉由免疫分析)。將右腦半球用於含有τ(pS422)之神經原纖維τ之定量免疫組織化學分析。

方法 腦均質物之製備

將來自每一小鼠之一個腦半球稱重且添加至10體積冰冷提取緩衝液(25mM Tris-HCl、800mM NaCl、10%蔗糖、1mM pH 7.5 EGTA，補充有1%蛋白酶抑制劑混合劑(Calbiochem 539134號)及1%磷酸酶抑制劑混合劑(Sigma P0044號))中。然後將組織在2ml玻璃杜恩斯均質器(Dounce homogenizer)中均質化。將均質物以20.000×g在4℃下離心20min。棄除丸化材料，等分均質物且儲存於-20℃下直至進一步使用。

腦均質物中之τ及τ(pS422)之AlphaLISA量化

自Perkin Elmer購買AlphaLISA®鏈黴抗生物素蛋白塗覆之供體及 未偶合受體珠粒。將受體珠粒偶合至抗τ抗體或抗τ(pS422)抗體。

在一級胺基團上使用生物素-N-羥基琥珀醯胺(ThermoFischer)對抗τ抗體5A6(DSHB)實施生物素化。

在1×HiBlock分析緩衝液(Perkin Elmer)中使用生物素化-5A6抗體、鏈黴抗生物素蛋白供體珠粒及抗τ抗體受體珠粒實施τ量測。

在分析緩衝液B(25mM pH 7.4 Hepes、0.5% Triton X-100、0.1% TopBlock(LuBioscience)、1mg/ml聚葡萄糖500、1/10阻斷試劑(Roche))中使用生物素化-5A6抗體、鏈黴抗生物素蛋白供體珠粒及抗τ(pS422)抗體受體珠粒實施τ(pS422)量測。

藉由以下方式來製備試樣以用於在½ AreaPlate-96(Perkin Elmer)中進行分析：混合5μl標準或試樣與10μl生物素化-5A6抗體及10μl抗體偶合之受體珠粒，然後在室溫及振盪下培育1h。然後使用25μl鏈黴抗生物素蛋白供體珠粒補充混合物且在室溫及振盪下於暗處進一步培育30min。然後在Envision微量滴定板讀數儀(Perkin Elmer)使用680nm雷射激發及615nm發射濾光片量測板。使用重組人類τ(最長同種型)及ERK-磷酸化τ生成標準曲線。

Pτ病況之定量免疫組織化學分析

在低溫恒溫器上製備徑向冰凍切片(厚10μm)且使用針對τ(S422)且偶聯至山羊抗小鼠/AlexaFluor555之抗體以10μg/ml之濃度對每一動物之4個切片實施免疫螢光染色。

使用Metafer 4載玻片掃描系統(MetaSystems GmbH,Altlussheim,Germany)獲取整個腦切片之影像。在海馬體及新皮質區域內量測τ(pS422)免疫陽性區域且藉由無偏形態測定方法藉助電腦輔助性影像分析測定pτ-陽性免疫螢光信號區域。使用Definiens影像分析軟體(Definiens AG,Munich,Germany)量化pτ陽性區域。

結果

使用抗體1或抗體2治療τPS2APP小鼠使得腦均質物中之τ(pS422)累積發生劑量依賴性減小(圖7)。使用抗體1(VH35H5/VL31AS1)，該減小在15mg/kg下具有統計學顯著性。對於抗體2(VH35H5/VL49G1)而言，顯著較少之τ(pS422)累積於所有劑量組中。對於兩種抗體而言，所有劑量組中之τ總含量不變(圖8)。對抗體1小鼠之腦實施定量免疫組織化學分析以檢測含有τ(pS422)之神經原纖維聚集物(圖9)。儘管任一劑量組中之τ病況並不在統計學上顯著減少，但在增加之劑量下往往觀察到病況有所減弱。此在腦之皮質區域中較為明顯。

<110> 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司

<120> 人類化抗τ(pS422)抗體及使用方法

<130> P32939

<150> EP15173511.5

<151> 2015-06-24

<160> 87

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 441

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

<210> 2

<211> 441

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (422)..(422)

<223> X=磷絲胺酸

<400> 2

<210> 3

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> X=磷絲胺酸

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<211> 12

<212> PRT

<213> 家兔

<400> 4

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<212> PRT

<213> 家兔

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<212> PRT

<213> 家兔

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<212> PRT

<213> 家兔

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<211> 5

<212> PRT

<213> 家兔

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<212> PRT

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<211> 3

<212> PRT

<213> 家兔

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<210> 11

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<212> PRT

<213> 家兔

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<211> 12

<212> PRT

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<223> 人類化序列

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<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<212> PRT

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<212> PRT

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<212> PRT

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<212> PRT

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<212> PRT

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<212> PRT

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

<400> 33

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

<400> 48

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<210> 52

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 智人

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<212> PRT

<213> 智人

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<212> PRT

<213> 智人

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> rbHCfinal.up

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> rbHCfinal.do

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> rbLCfinal.up

<400> 63

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> rbLCfinal.do

<400> 64

<210> 65

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

<400> 65

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<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

<400> 66

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人類化序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L1

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<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L1

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<210> 72

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L2

<400> 72

<210> 73

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L2

<400> 73

<210> 74

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L3

<400> 74

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<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L3

<400> 75

<210> 76

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重鏈可變域

<400> 76

<210> 77

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-H1

<400> 77

<210> 78

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL35G4

<400> 78

<210> 79

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L3

<400> 79

<210> 80

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL145B12

<400> 80

<210> 81

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L2

<400> 81

<210> 82

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 299-009 VH人類化變體_DANG

<400> 82

<210> 83

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 299-009 VH人類化變體_DASG

<400> 83

<210> 84

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 299-009 VH人類化變體_DAQG

<400> 84

<210> 85

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 299-009 VL人類化變體_NYA

<400> 85

<210> 86

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL4G1

<400> 86

<210> 87

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL4G1-HVR-L3

<400> 87

Claims (15)

1. 一種特異性結合人類τ(pS422)之人類化抗體，其中該抗體包括在重鏈可變域中，SEQ ID NO：08、09及10之HVR，及在輕鏈可變域中SEQ ID NO：71、73及15之HVR，或SEQ ID NO：70、72及15之HVR，或SEQ ID NO：12、14及74之HVR。
2. 如請求項1之人類化抗體，其包括a)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：67之輕鏈可變域，或b)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：66之輕鏈可變域，或c)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：68之輕鏈可變域。
3. 如請求項1或2之人類化抗體，其中該抗體係效應物功能沉默。
4. 如請求項1或2之人類化抗體，其中該抗體i)特異性結合至具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之多肽，及/或ii)在1μg/mL不結合至全長人類τ(SEQ ID NO：01)，及/或iii)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之全長人類τ(SEQ ID NO：02)，及/或iv)特異性結合至在422位絲胺酸磷酸化之人類τ(SEQ ID NO：02)之聚集物。
5. 如請求項1或2之人類化抗體，其中該抗體具有以下EC₅₀值：a)對於具有SEQ ID NO：03之胺基酸序列之人類τ(pS422)片 段，6ng/mL或更小，及/或b)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之全長人類τ(pS422)，4.5ng/mL或更小，及/或c)對於具有SEQ ID NO：02之胺基酸序列之人類τ(pS422)之聚集物，30ng/mL或更小，及/或d)對於具有SEQ ID NO：01之胺基酸序列且具有胺基酸突變S422A之人類τ，125ng/mL或更小。
6. 如請求項1或2之人類化抗體，其中該抗體特異性結合至人類τ(pS422)(SEQ ID NO：02)且不結合至人類τ(SEQ ID NO：01)。
7. 如請求項1或2之人類化抗體，其中該抗體係a)人類子類IgG1之全長抗體，或b)人類子類IgG4之全長抗體，或c)具有突變L234A、L235A及P329G之人類子類IgG1之全長抗體，d)具有突變S228P、L235E及P329G之人類子類IgG4之全長抗體，e)在兩條重鏈中具有突變L234A、L235A及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C並在另一各別重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG1之全長抗體，或f)在兩條重鏈中具有突變S228P、L235E及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C並在另一各別重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG4之全長抗體。
8. 一種雙特異性抗體，其包括i)選自以下之第一結合位點：a)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：66之輕鏈可變 域，或b)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：67之輕鏈可變域，或c)SEQ ID NO：65之重鏈可變域及SEQ ID NO：68之輕鏈可變域，及ii)選自以下之第二結合位點：a)SEQ ID NO：82之重鏈可變域及SEQ ID NO：85之輕鏈可變域，或b)SEQ ID NO：83之重鏈可變域及SEQ ID NO：85之輕鏈可變域，或c)SEQ ID NO：84之重鏈可變域及SEQ ID NO：85之輕鏈可變域。
9. 一種醫藥調配物，其包括如請求項1至8中任一項之抗體及視情況醫藥上可接受之載劑。
10. 如請求項1、2及8中任一項之抗體，其用作藥劑。
11. 如請求項1、2及8中任一項之抗體，其用於治療阿茲海默氏病(Alzheimer’s Disease)。
12. 如請求項1、2及8中任一項之抗體，其用於治療前驅(prodromal)阿茲海默氏病。
13. 一種如請求項1至8中任一項之抗體之用途，其用於製造藥劑。
14. 一種如請求項1至8中任一項之抗體之用途，其用於製造用於減少τ(pS422)誘導之神經退化之藥劑。
15. 一種如請求項1至8中任一項之抗體之用途，其用於製造用於以下之藥劑：治療阿茲海默氏病、治療前驅阿茲海默氏病、治療輕度阿茲海默氏病、減少τ(pS422)誘導之神經退化、維持認知及 功能、減緩認知及功能衰退速率，及/或減緩神經原纖維纏結累積速率。