JP6480630B1

JP6480630B1 - 脂肪蓄積抑制剤および血中脂質改善剤

Info

Publication number: JP6480630B1
Application number: JP2018180696A
Authority: JP
Inventors: ゆめこ林; 智詞菅原
Original assignee: Asahi Group Holdings Ltd
Current assignee: Asahi Group Holdings Ltd
Priority date: 2018-09-26
Filing date: 2018-09-26
Publication date: 2019-03-13
Anticipated expiration: 2038-09-26
Also published as: EP3858343A1; NZ772862A; US20210369662A1; WO2020066158A1; JP2020050602A; AU2019350801B2; AU2019350801A1; EP3858343A4; TW202025998A

Abstract

【課題】脂肪蓄積抑制に係る新規な技術を提供する。
【解決手段】１０−ヒドロキシオクタデカン酸(１０−ＨＯＡ)を含有する脂肪蓄積抑制剤。
【選択図】なし

Description

本発明は脂肪蓄積抑制剤に関する。また、本発明は血中脂質改善剤に関する。

近年、日本人の食生活が大きく変化し、高脂肪食を摂取する機会が増え、また、運動不足も進行している。このような現代の生活習慣ではカロリー摂取量と消費量のバランスが摂取側に傾いて、結果的に脂肪蓄積しやすい。
このように脂肪が蓄積していくとその過剰状態である肥満を招くなどして、健康で快適な生活は著しく毀損されてしまう。また肥満は高血圧や脂質異常症、糖尿病など動脈硬化のリスクが集積するメタボリックシンドロームの基盤病態となる。

そのため、脂肪の蓄積を防ぐための研究が行われている。
例えば、脂肪分解に関与する細胞内小器官であるペルオキシソームを増加させる作用を仲介するタンパク質として同定されたペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（Peroxisome proliferators activated receptor：ＰＰＡＲ）の活性化作用を指標としての研究が知られている。そしてその結果として、１０−ヒドロキシオクタデカン酸（１０−ＨＯＡ）についてのＰＰＡＲ活性化作用が報告されている（特許文献１、２）。

特開２００９−５１７３２号公報国際公開第２０１４／０６９２２７号

本発明は、脂肪蓄積抑制に係る新規な技術を提供することを目的とする。

上述のとおり１０−ＨＯＡについてのＰＰＡＲ活性化作用が開示されているが、ＰＰＡＲ活性化作用を有するからといって脂肪の蓄積を抑制すると決定できるものではない。
本発明者は鋭意研究の結果、１０−ＨＯＡに脂肪蓄積抑制作用があることを見出した。また、本発明者は、さらに、１０−ＨＯＡに血中脂質改善作用があることも見出した。

本発明の要旨は以下のとおりである。
［１］１０−ヒドロキシオクタデカン酸を含有する脂肪蓄積抑制剤。
［２］内臓脂肪の蓄積を抑制する［１］に記載の脂肪蓄積抑制剤。
［３］腎周囲脂肪および後腹壁脂肪の蓄積を抑制する［１］または［２］に記載の脂肪蓄積抑制剤。
［４］１０−ヒドロキシオクタデカン酸を含有する血中脂質改善剤。
［５］血中における中性脂肪濃度を低減させる［４］に記載の血中脂質改善剤。
［６］血中における小型高密度リポタンパクコレステロール濃度を増加させる［４］または［５］に記載の血中脂質改善剤。
［７］腸管におけるコレステロール吸収を抑制する［４］から［６］のいずれか一つに記載の血中脂質改善剤。
［８］ヒトを除く対象に１０−ヒドロキシオクタデカン酸を摂取させることを含む、脂肪蓄積を抑制する方法。
［９］ヒトを除く対象に１０−ヒドロキシオクタデカン酸を摂取させることを含む、血中脂質を改善する方法。

本発明によれば、脂肪蓄積抑制に係る新規な技術を提供することができる。

実施例に係るマウスの内臓脂肪量を示すグラフである。実施例に係るマウスの皮下脂肪量を示すグラフである。実施例に係るマウスの総脂肪量を示すグラフである。実施例に係るマウス血中の中性脂肪濃度を示すグラフである。実施例に係るマウス血中の小型高密度リポタンパク（HDL）コレステロール濃度を示すグラフである。実施例に係るマウス血中のアポリポタンパクA-I濃度を示すグラフである。実施例に係るマウス血中のカイロミクロンコレステロール濃度を示すグラフである。実施例に係るマウスの空腸上皮組織のコレステロールトランスポーター遺伝子（NPC1L1）発現量を示すグラフである。

［第１実施形態］
以下、本発明の第１の実施形態について、詳細に説明する。
第１実施形態は脂肪蓄積抑制剤に関し、１０−ヒドロキシオクタデカン酸（１０−ＨＯＡ）またはその塩を有効成分として含有する。第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤は特に内臓脂肪の蓄積を抑制し、その中でも腎周囲脂肪および後腹壁脂肪の蓄積を抑制する。
なお、本明細書において内臓脂肪とは腹腔内に蓄積した脂肪組織のことをいう。
また、腎周囲脂肪とは腎臓および副腎を覆う脂肪組織のことをいい、後腹壁脂肪とは腹腔内の背側の腹壁周囲に蓄積した脂肪組織のことをいう。

１０−ＨＯＡは１０−ヒドロキシステアリン酸とも称され、１０位に水酸基を有する炭素数１８の水酸化飽和脂肪酸である。
含有される１０−ＨＯＡは有機化学的に合成されたものであってもよく、また天然物由来であってもよい。
１０−ＨＯＡを合成するにあたっての合成方法は特に限定されず、例えば上述の特許文献２に記載の方法で合成することができる。
また、１０−ＨＯＡが天然物に由来し、該天然物に１０−ＨＯＡを生成させるようにしてもよく、その方法も特に限定されない。例えば１０−ＨＯＡは種々の乳酸菌に含まれているため（Kishino et al., Polyunsaturated fatty acid saturation by gut lactic acid bacteria affecting host lipid composition, Proc Natl Acad Sci USA October 29, 2013 110 (44) 17808-17813）、含有される１０−ＨＯＡが乳酸菌に由来するようにしてもよい。

また、第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤は、１０−ＨＯＡに代えて、または、１０−ＨＯＡと共に、１０−ＨＯＡの塩が含まれていてもよい。そのような塩として、例えばナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などのアルカリ金属およびアルカリ土類金属塩や、酸付加塩などを例示することができる。

第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤は１０−ＨＯＡまたはその塩に加えて、本発明の目的を達することができる限り、他の成分を含んでいてもよい。
第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤の形態（剤型）については特に限定されず、例えばヒトを対象とする医薬品、医薬部外品または飲食品などとして製造することができる。
第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤を医薬品、医薬部外品または飲食品とする場合、１０−ＨＯＡまたはその塩と例えば賦型剤、結合剤、安定剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、懸濁剤、コーティング剤、その他の任意の成分とを適宜混合して製剤化することもできる。
剤形としては、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、シロップ剤等が可能であり、これらを経口的に投与することが望ましい。

または、特に限定されないが、第１の実施形態の脂肪蓄積抑制が飲食品としての態様で製造される場合、通常の飲食品のほか、特別用途食品や、保健機能食品の特定保健用食品や栄養機能食品、機能性表示食品などであってもよい。飲食品の具体例としては、例えば、栄養補助食品（サプリメント）、牛乳、加工乳、乳飲料、清涼飲料、酒類、発酵飲食品、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、アイスクリーム、キャンディ、グミ、ガム、チョコレート、調製粉乳、流動食、病者用食品、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品、フリーズドライ食品、調味料、ソース類、麺類等を挙げることができる。
また、第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤は、１０−ＨＯＡまたはその塩を含有する組成物を含む医薬品、医薬部外品または飲食品であってもよい。
また、第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤は、ヒトを対象とする医薬品、医薬部外品、飲食品に限らず、ヒト以外の動物を対象とする医薬品や飼料などの形態であってもよい。ヒト以外の動物としてはヒト以外の高等脊椎動物、特にヒト以外の哺乳類を挙げることができ、より具体的にはイヌ、ネコ等の愛玩動物、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ等の家畜を例示することができる。

第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤の一日あたりの摂取量についても特に限定されず、例えば、成人の場合、１０−ＨＯＡまたはその塩（両方含む場合はその合計量）を一日あたり０．０１〜１００mg、好ましくは０．１〜１０mg、より好ましくは１〜６mg摂取できるように配合量等を調整すればよい。第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤における１０−ＨＯＡまたはその塩の含有割合も特に限定されず、製造の容易性や好ましい一日の投与量等に合わせて適宜調節すればよい。

以上、第１の実施形態によれば、脂肪蓄積抑制に係る新規な技術を提供することができる。
すなわち、第１の実施形態に係る１０−ＨＯＡまたはその塩を、例えば上述の当該１０−ＨＯＡまたはその塩を含む医薬品、医薬部外品、飲食品などの態様で摂取することにより、個人差はあるが、摂取したヒトや非ヒト動物において、内臓脂肪等（特に腎周囲脂肪および後腹壁脂肪）の蓄積が抑制され、その結果、脂肪蓄積を抑制することができ、例えば肥満の予防または改善（脂肪蓄積が過剰な状態を解消または緩和する）などが期待できる。

［第２実施形態］
以下、本発明の第２の実施形態について、詳細に説明する。第１の実施形態と共通する部分についてはその説明を省略する。

第２実施形態は血中脂質改善剤に関し、第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤と同じく、１０−ＨＯＡまたはその塩を有効成分として含有する。
ここで、本明細書において血中脂質改善とは動脈硬化などの原因となり得る血中脂質について、該症状がより起こりにくい血中脂質の状態にすることをいう。
具体的な作用としては、血中脂質の上昇抑制や血中における余分な脂質の低減、疾患の予防因子となる脂質の維持または増加を挙げることができる。第２の実施形態の血中脂質改善剤においては、特に血中における中性脂肪濃度の低減、腸管におけるコレステロール吸収の抑制、および血中における小型高密度リポタンパク（High Density Lipoprotein、ＨＤＬ）コレステロール濃度の増加をその作用として挙げることができる。
なお、本明細書において、中性脂肪とは、脂肪酸とグリセリンとのエステルであり、具体的にはモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドが挙げられる。
コレステロールとは、国際公開第2013/061969号に記載されている、（３β）−コレスタ−５−エン−３−オールコレスタ−５−エン−３β−オール、その誘導体およびその類似体をいう。
本発明において小型ＨＤＬコレステロールとは、ＨＤＬを粒子径で７つのサブクラスにクラス分けしたときに１〜３番目に粒子径が小さいＨＤＬ中のコレステロールをいう（岡崎三代,ぶんせき別刷「ゲル濾過クロマトグラフィーを用いた血清リポタンパクの分析」(2000)，very small HDL〜small HDL）。小型ＨＤＬは、通常、ＨＤＬの中でも脂質の含有量が少ない。

第２の実施形態の血中脂質改善剤についても第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤と同様の組成とすることができる。また、第２の実施形態の血中脂質改善剤の一日あたりの摂取量についても第１の実施形態の脂肪蓄積抑制剤と同様とすることができる。

以上、第２の実施形態によれば、血中脂質改善に係る新規な技術を提供することができる
すなわち、第２の実施形態に係る１０−ＨＯＡまたはその塩を、例えば上述の医薬品、医薬部外品、飲食品などの態様で摂取することにより、個人差はあるが、摂取したヒトや非ヒト動物における、血中における中性脂肪濃度の低減、腸管におけるコレステロール吸収の抑制、および血中における小型ＨＤＬコレステロール濃度の増加などの作用により、血中脂質を改善することができる。その結果、動脈硬化などを起こりにくくすることができ、心疾患や脳血管障害などの疾患の予防、改善への寄与が期待できる。

以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。

動物実験はアサヒグループホールディングス（株）の動物実験委員会により承認され（2017年3月9日）、同社R＆Dセンターの実験動物の管理と使用に関するガイドラインに準拠し、実施した（実施期間2017年4月3日〜2018年1月10日）。4週齢のC57BL/6N雄マウス（日本エスエルシー）を購入し、実験に供した。該マウスを室温23±1.5℃、湿度55±15％、照明時間8時〜20時の環境下で飼育した。
45kcal％脂肪含有の高脂肪食（リサーチダイエット、D12451）を用い10-HOAを0.1％含有および非含有の飼料を調製した。4週齢のマウスは2週間高脂肪食で馴化した後、1群あたり10匹として (1)高脂肪食コントロール群 (2)0.1%の10-HOA含有高脂肪食群の2群に分け、15週間投与した。個別飼育にて飼料および飲料水（水道水）は自由に与えた。
解剖前日より16時間絶食した後、イソフルラン吸入麻酔下でCTスキャナー（Latheta LCT-100; 日立アロカメディカル）により腹部の内臓脂肪量、皮下脂肪量、および総脂肪量（内臓脂肪量と皮下脂肪量の和）を測定した。その後麻酔下で開腹し、腹部大静脈より採血した。内臓脂肪（腎周囲脂肪、後腹壁脂肪）および空腸上皮組織をそれぞれ採取し、脂肪組織の重量を測定した。以上の試験を3回繰り返し、2元配置分散分析（因子1: 試験群, 因子2:動物試験の試験回）による解析を行った．(n=10×3/群)。
血漿中の中性脂肪濃度はトリグリセリドEテストを用いて測定した。血漿中コレステロール量の測定はスカイライトバイオテック社にて常法（G.Toshima et al., LipoSEARCH（登録商標）; Analytical GP-HPLC method for lipoprotein profiling and its applications, J.Biol.Macromol., 13(2), 21-32(2013)）を用いて測定を実施した。血漿中アポリポタンパクA1の測定にはMouse Apolipoprotein A1 ELISAPRO kit (MABTECH)を用いた。空腸上皮組織はQIAzol Lysis Reagent（キアゲン）により回収し、RNeasy Mini Kit（キアゲン）の製品プロトコルに従いtotal RNAを抽出した。Total RNAは、M-MLV Reverse Transcriptase（Life Technologies）により逆転写し、cDNAを作成した。mRNA発現量を測定するため、Light Cycler System（Roche Diagnostics）を用いてインターカレーター法によるリアルタイムPCRを実施した。PCR酵素にはThunderbird（登録商標） SYBR qPCR Mix（Toyobo）を用い、製品のプロトコルに従い調製した。36b4（内部標準）のプライマーとして5’-TCCTTCTTCCAGGCTTTGGG-3’（配列表配列番号１）および5’-GACACCCTCCAGAAAGCGAG-3’ （配列表配列番号２）を用い、Npc1l1のプライマーとして5’-GAGAGCCAAAGATGCTACTATCTTCA-3’ （配列表配列番号３）および5’-CCCGGGAAGTTGGTCATG-3’ （配列表配列番号４）を用いた。mRNA発現量はコントロール群との相対値で表記した。

10-HOA群およびコントロール群の、内臓脂肪量、皮下脂肪量、および相脂肪量を図1、2および3に示す。
15週間投与の結果、腹部の内臓脂肪量が10-HOA群でコントロール群と比較して有意に低下し(図1)、総脂肪量が低下傾向にあった(図3)。また、内臓脂肪のうち、腎周囲脂肪および後腹壁脂肪重量が10-HOA群で低下した(表1)。

血漿中脂質では、中性脂肪濃度の低下傾向が認められたほか(図4)、HDLコレステロールのうち、組織からのコレステロール逆輸送能が高く、心疾患リスク低減に重要とされる小型HDLコレステロールが有意に増加した(図5)。またHDLの構成タンパクであるアポリポタンパクA-Iが増加傾向にあり(図6)、血中脂質代謝改善の可能性が示唆された。さらには、カイロミクロンコレステロールの有意な低下(図7)および、空腸上皮組織のコレステロールトランスポーター（NPC1L1）の遺伝子発現量の低下が認められ(図8)、小腸からのコレステロール吸収の抑制が示唆された。

以上から10-HOA投与により脂肪蓄積抑制効果が認められ、10-HOAはマウス生体内においても脂質代謝を改善する可能性が示唆された。

Claims

１０−ヒドロキシオクタデカン酸を含有し、腎周囲脂肪および後腹壁脂肪の蓄積を抑制する脂肪蓄積抑制剤。
１０−ヒドロキシオクタデカン酸を含有し、血中における小型高密度リポタンパクコレステロール濃度を増加させる血中脂質改善剤。
１０−ヒドロキシオクタデカン酸を含有し、腸管におけるコレステロール吸収を抑制する血中脂質改善剤。
ヒトを除く対象に１０−ヒドロキシオクタデカン酸を摂取させることを含む、腎周囲脂肪および後腹壁脂肪の蓄積を抑制する方法。
ヒトを除く対象に１０−ヒドロキシオクタデカン酸を摂取させることを含む、血中における小型高密度リポタンパクコレステロール濃度を増加させる方法。
ヒトを除く対象に１０−ヒドロキシオクタデカン酸を摂取させることを含む、腸管におけるコレステロール吸収を抑制する方法。