JP6450364B2 - 眼送達のためのキメラサイトカイン製剤 - Google Patents

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Description

関連出願
本出願は、全内容が本明細書に全体として組み込まれる２０１３年３月１３日出願の米国仮特許出願第６１／７７９９７４号明細書に対する優先権を主張するものである。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出されている、これにより全体として参照により本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０１４年３月１２日に作成された上記のＡＳＣＩＩのコピーは、Ｄ２０４６−７０５０ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられており、サイズは２８，３２９バイトである。
本発明は、例えばＩＬ−１阻害剤のための治療用組成物及び製剤に関する。
インターロイキン−１アルファ（ＩＬ−１α）及びベータ（ＩＬ−１β）は、免疫調節サイトカインのＩＬ−１ファミリーのメンバーである。９種の推定若しくは証明されたアゴニスト（ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１８、ＩＬ−３６α（ＩＬ−１Ｆ６）、ＩＬ−３６β（ＩＬ−１Ｆ８）、ＩＬ−３６γ（ＩＬ−１Ｆ９）、ＩＬ−３３、ＩＬ−１Ｆ７及びＩＬ−１Ｆ１０）並びに２種の天然アンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ及びＩＬ３６Ｒａ（ＩＬ−１Ｆ５））である、インターロイキン−１サイトカインファミリーの少なくとも１１種のヒトメンバーが同定されている。
ＩＬ−１α及びＩＬ−１βは免疫系を調節する際に役割を果たし、重大な炎症性眼障害を含む炎症性眼疾患に関係付けられてきた。そこで、ＩＬ−１阻害剤を眼投与するためのより優れた方法及び物質が必要とされる。
組み換えＩＬ１−Ｒａ分子であるアナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ社、カリフォルニア州サウザンドオークス）は、関節リウマチ及び新生児期発症多臓器性炎症性疾患（ＮＯＭＩＤ）と呼ばれるクリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）を治療する際に使用するために承認されている。アナキンラは、連日皮下投与するための無菌、透明で無色から白色がかった、保存料を含まない液剤として２７ゲージ針を備える使い捨てガラス製注射器として供給されている。Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）は、注射用水中に１００ｍｇのアナキンラ、１．２９ｍｇのクエン酸ナトリウム、５．４８ｍｇの塩化ナトリウム、０．１２ｍｇの二ナトリウムＥＤＴＡ及び０．７０ｍｇのポリソルベート８０を含有するｐＨ６．５の０．６７ｍＬの液剤として調製される。２〜８℃で保管するように勧告されている。Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）は、眼投与のためには承認されていない。
本明細書で特徴付けたのは、特に、ＩＬ−１ファミリーのサイトカイン及びそれらの各受容体に応答して細胞シグナル伝達を調節するため、障害を治療するため、細胞受容体並びに他の作用物質を検出及び／又は結合するために使用できるキメラサイトカイン（例えば、国際公開第２０１２／０１６２０３号パンフレット若しくは同第２０１２／１０３２４０号パンフレットに記載されたキメラサイトカイン若しくはキメラサイトカインドメイン）を含有する安定な製剤（例えば、安定な水性製剤）である。本明細書に記載するのは、１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬのＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｒａキメラサイトカインタンパク質を含む医薬製剤である。実施形態では、医薬製剤は、１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬのＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｒａキメラサイトカインタンパク質、界面活性剤、等張化剤及び緩衝剤を含む。
一部の態様では、キメラサイトカインタンパク質は、Ｐ０５又は例えば国際公開第２０１２／０１６２０３号パンフレット若しくは同第２０１２／１０３２４０号パンフレットに記載されたような別のキメラサイトカインである。実施形態では、製剤は、局所投与するためである。実施形態では、製剤は、眼に投与するためである。実施形態では、製剤は、眼に局所投与するためである。一部の実施形態では、製剤は、５．５〜７．５のｐＨ、例えば６．０〜７．０のｐＨを有する。
実施形態では、製剤は、増粘剤を含有していない。所定の実施形態は、さらに増粘剤を含有する製剤に関する。実施形態では、増粘剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム；ヒドロキシエチルセルロース；ヒドロキシプロピルメチルセルロース；ポリビニルアルコール；及び／又はグリセリンである。実施形態では、カルボキシメチルセルロースナトリウムは、製剤中に０．１〜６％（ｗ／ｖ）の濃度で含まれる。
製剤は、典型的には、２５℃で少なくとも６０日間保管した後に少なくとも９０％、９３％、９５％若しくは９８％の純度を有する。一部の態様では、製剤は、２５℃で少なくとも４カ月間保管した後に少なくとも９０％、９３％、９５％若しくは９８％の純度を有する。他の態様では、製剤は、４０℃で少なくとも２週間の期間保管した後に少なくとも９０％の純度を有する。一部の場合には、製剤は、２℃〜８℃で保管した場合に少なくとも２年間安定である。一部の場合には、製剤は、２５℃で保管した場合に少なくとも６カ月間安定である。一部の場合には、製剤は、２５℃で保管した場合に少なくとも８カ月間安定である。
一部の実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、例えばプルロニック酸Ｆ−６８（ポロキサマー１８８）、ポリソルベート２０、若しくはポリソルベート８０である。実施形態では、界面活性剤は、プルロニック酸Ｆ−６８（ポロキサマー１８８）であり、界面活性剤は、約０．１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。一部の場合には、界面活性剤は、プルロニック酸Ｆ−６８（ポロキサマー１８８）であり、界面活性剤は、０．１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。
製剤中の等張化剤は、例えば、塩化ナトリウム、ソルビトール、マンニトール、スクロース若しくはトレハロースであってよい。実施形態では、等張化剤はソルビトールであり、ソルビトールは約５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。所定の実施形態では、等張化剤はソルビトールであり、ソルビトールは５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。
製剤中の緩衝剤は、一般に弱緩衝剤である。実施形態では、緩衝剤は、リン酸塩 クエン酸塩、酢酸塩、ホウ酸塩及び／又はコハク酸塩である。緩衝剤は、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、ホウ酸塩若しくはコハク酸塩の医薬上許容される塩であってよい。一部の実施形態では、緩衝剤は、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの量で存在する。実施形態では、緩衝剤は、２０ｍＭ以下の濃度で存在する。実施形態では、緩衝剤、例えばクエン酸ナトリウム及び／又はリン酸ナトリウムは、５〜１５ｍＭの総濃度で存在する。一部の実施形態では、緩衝剤、例えばクエン酸ナトリウムは、５〜１５ｍＭ、７〜１３ｍＭ、８〜１２ｍＭ若しくは９〜１１ｍＭの濃度で存在する。
一部の場合には、緩衝剤はクエン酸ナトリウムであり、製剤中に約１０ｍＭの濃度で存在する。一部の場合には、緩衝剤はクエン酸ナトリウムであり、製剤中に約１０ｍＭの濃度で存在する。
所定の実施形態では、製剤は、例えばＰ０５などのＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｒａキメラサイトカインタンパク質；１０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；及び０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８（ポロキサマーＦ−６８）を含み、製剤のｐＨは６．０である。
一部の実施形態では、製剤はさらにアミノ酸を含む。例えば、アミノ酸は、アルギニン、グルタミン酸、ヒスチジン若しくはメチオニンである。
１つの例では、キメラサイトカイン（例えば、キメラサイトカインポリペプチド）、例えばＩＬ−１β及びＩＬ−１Ｒａに由来する配列を含有するキメラサイトカインは、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー、例えばポロキサマー１８８（例えば、Ｌｕｔｒｏｌ（登録商標）Ｆ−６８（本明細書ではＬｕｔｒｏｌ（登録商標）とも呼ぶ）、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ １８８及びポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（エチレングリコール））とも呼ぶ）を含有する１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．０中で５ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ若しくは２０ｍｇ／ｍＬ）の濃度で調製される。実施形態では、キメラサイトカインは、Ｐ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４、Ｐ０５、Ｐ０６及びＰ０７の内の１つ以上から選択される。実施形態では、キメラサイトカインはＰ０５である。
実施形態では、本明細書に記載した製剤の成分は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％若しくは５０％までの本明細書に提供した数値の周囲で変動してよい量で存在する。実施形態では、製剤の成分は、１０％までの本明細書に提供した数値の周囲で変動する量で存在する。実施形態では、製剤は、９．５〜１０．５ｍＭ、９〜１１ｍＭ、８．５〜１１．５ｍＭ、８〜１２ｍＭ、７．５〜１２．５ｍＭ、７〜１３ｍＭ、６〜１４ｍＭ若しくは５〜１５ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態では、製剤は、４．７５〜５．２５％、４．５〜５．５％、４．２５〜５．７５％、４〜６％、３．７５〜６．２５％、３．５〜６．５％、３〜７％若しくは２．５〜７．５％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む。実施形態では、製剤は、０．０９５〜０．１０５％、０．０９〜０．１１％、０．０８５〜０．１１５％、０．０８〜０．１２％、０．０７５〜０．１２５％、０．０７〜０．１３％、０．０６〜０．１４％若しくは０．０５〜０．１５％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８を含む。実施形態では、製剤中の治療用タンパク質（例えば、キメラサイトカイン、例えばＰ０５）の濃度は、１〜５０ｍｇ／ｍＬ、１〜２５ｍｇ／ｍＬ若しくは１〜２０ｍｇ／ｍＬである。実施形態では、治療用タンパク質の濃度は、４．７５〜５．２５ｍｇ／ｍＬ、４．５〜５．５ｍｇ／ｍＬ、４．２５〜５．７５ｍｇ／ｍＬ、４〜６ｍｇ／ｍＬ、３．７５〜６．２５ｍｇ／ｍＬ、３．５〜６．５ｍｇ／ｍＬ、３〜７ｍｇ／ｍＬ若しくは２．５〜７．５ｍｇ／ｍＬである。実施形態では、製剤のｐＨは、５．５〜７．５又は５．５〜６．５である。
実施形態では、製剤は、８〜１２ｍＭのクエン酸ナトリウム、４〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０８〜０．１２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８及び４〜６ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含む。実施形態では、製剤のｐＨは、５．５〜７．５である。実施形態では、ｐＨは、５．５〜６．５である。実施形態では、ｐＨは、６〜７である。
実施形態では、製剤は、９〜１１ｍＭのクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０９〜０．１１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８及び４．５〜５．５ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含む。実施形態では、製剤のｐＨは、５．５〜７．５である。実施形態では、ｐＨは、５．５〜６．５である。実施形態では、ｐＨは、６〜７である。
実施形態では、ＩＬ−１阻害剤、例えばアナキンラは、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー、例えばポロキサマー１８８を含有する１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．０中で適切な濃度（例えば、５〜１００ｍｇ／ｍＬ、例えば５〜５０ｍｇ／ｍＬ、例えば５〜２０ｍｇ／ｍＬの濃度）で調製される。実施形態では、製剤の成分の量は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％若しくは５０％までの本明細書に提供した数値の周囲で変動してよい。実施形態では、ｐＨは、５．５〜７．５である。実施形態では、ｐＨは、５．５〜６．５である。実施形態では、ｐＨは、６〜７である。
実施形態では、本明細書に記載した製剤は、さらに増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）を含む。実施形態では、製剤はＣＭＣを、例えば０．１〜１％（ｗ／ｖ）、０．１〜０．５％（ｗ／ｖ）若しくは０．２〜０．３％（ｗ／ｖ）の濃度のＣＭＣを含む。
さらに本明細書では、ＩＬ−１関連障害を有する被験者を治療するための方法が提供される。本方法は、被験者に本明細書に記載した製剤を含む治療有効量の組成物を投与する工程を含む。実施形態では、本方法は、ＩＬ−１関連障害、例えばドライアイ障害を有する被験者を同定する工程、及び本明細書に記載した製剤を含む治療有効量の組成物を被験者に投与する工程を含む。
さらに本明細書では、被験者においてＩＬ−１活性を阻害する方法を記載する。本方法は、被験者に本明細書に記載した製剤を投与する工程を含む。実施形態では、被験者は、ＩＬ−１関連障害、例えばドライアイ障害を有する。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載した製剤を含む薬物送達デバイスに関する。
さらに本明細書では、被験者におけるＩＬ−１関連障害を治療若しくは予防するための医薬品の製造における、例えば被験者におけるＩＬ−１関連障害を治療若しくは予防するために被験者に局所投与するための医薬品の製造における本明細書に記載した組成物の使用を開示する。実施形態では、本医薬品は、眼に投与するため、例えば眼に局所投与するためである。一部の実施形態では、本医薬品はビヒクル製剤、例えば本明細書に記載したソルビトール、クエン酸ナトリウム及びポロキサマー１８８を含む、若しくはそれらからなる水性製剤である。実施形態では、ビヒクル製剤は、治療用タンパク質が実質的にない（例えば、含んでいない）。
一般に、本明細書に記載したように治療される被験者は、ヒト又は例えばイヌ若しくはネコなどの他の哺乳動物である。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載した製剤を含む容器若しくはデバイスに関する。実施形態では、容器は、ブローフィルシール容器である。
本出願人らは、さらにドライアイを治療するために有用な可能性がある、界面活性剤、等張化剤及び緩衝剤を含む医薬製剤（例えば、ビヒクル製剤）も又見いだした。一部の実施形態では、製剤はタンパク質若しくはペプチドを含有していない、例えば製剤は治療用タンパク質若しくはペプチドを含有していない。一部の実施形態では、界面活性剤はＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（ポロキサマー１８８）であり、緩衝剤はクエン酸塩であり、等張化剤はソルビトールである。一部の実施形態では、製剤は、キメラサイトカインタンパク質、例えば本明細書又は国際公開第２０１２／１０３２４０号パンフレットに記載されたキメラサイトカインタンパク質、例えばＰ０５を含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、さらに増粘剤、例えばＣＭＣを含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、例えばドライアイの徴候及び／又は症状などの眼疾患を治療するために、眼に使用するために適合する（すなわち、眼送達に適合する）。
本明細書で言及する天然型タンパク質には、特別にはそのようなタンパク質のヒト形態並びに他の哺乳動物種からの形態が含まれる。
本明細書に記載した実施形態には、下記が含まれる：
実施形態１． ８〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウム、４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含み、及びカルボキシメチルセルロースナトリウムを含んでいてもよい水性製剤であって、５．５〜７．５のｐＨを有し、眼障害を治療するために有効である水性製剤。
実施形態２． ５．５〜６．５のｐＨを有する、実施形態１に記載の水性製剤。
実施形態３． 治療用タンパク質を実質的に含まない、実施形態１又は実施形態２に記載の水性製剤。
実施形態４． ８〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８を含む、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５． ９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８からなる、実施形態４に記載の水性製剤。
実施形態６． ９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８からなる、実施形態５に記載の水性製剤。
実施形態７． ０．１〜１％（ｗ／ｖ）の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウムを含む、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態８． ９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８を含む水性製剤であって、５．７〜６．３のｐＨを有し、治療用タンパク質を実質的に含んでおらず、眼障害（例えば、本明細書に記載した眼障害）を治療するために有効である水性製剤。
実施形態９． 眼障害はドライアイ疾患である、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態１０． 眼痛若しくは眼のただれ、ＯＳＤＩスコア及び／又は角膜フルオレセイン染色（ＣＦＳ）スコアを減少させるために有効である、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態１１． 眼痛若しくは眼のただれは視覚アナログ尺度又はＯＳＤＩからの質問票を使用して評価される、実施形態１０に記載の水性製剤。
実施形態１２． １〜５０ｍｇ／ｍＬのＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｒａキメラサイトカインタンパク質（例えば、Ｐ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４、Ｐ０５、Ｐ０６若しくはＰ０７）；クエン酸ナトリウム及びリン酸ナトリウムから選択される緩衝剤；例えば３．５〜６．５％（ｗ／ｖ）の濃度のソルビトール；例えば０．０７〜０．１３％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含み、及びカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）を含んでいてもよい水性製剤であって、５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤。
実施形態１３． キメラサイトカインタンパク質はＰ０５である、実施形態１２に記載の水性製剤。
実施形態１４． １〜２０ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含む、実施形態１３に記載の水性製剤。
実施形態１５． ３〜７ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含む、実施形態１３に記載の水性製剤。
実施形態１６． ４〜６ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含む、実施形態１３に記載の水性製剤。
実施形態１７． ５ｍＭ〜１５ｍＭの総濃度のクエン酸ナトリウム及び／又はリン酸ナトリウムを含む、実施形態１３に記載の水性製剤。
実施形態１８． クエン酸ナトリウムが５ｍＭ〜１５ｍＭの濃度で存在する、実施形態１２〜１７のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態１９． クエン酸ナトリウムが８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８に記載の水性製剤。
実施形態２０． クエン酸ナトリウムが９ｍＭ〜１１ｍＭの濃度で存在する、実施形態１８に記載の水性製剤。
実施形態２１． ポロキサマー１８８が０．０５％〜０．１５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１２〜２０のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態２２． ポロキサマー１８８が０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態２０に記載の水性製剤。
実施形態２３． ポロキサマー１８８が０．０９％〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態２０に記載の水性製剤。
実施形態２４． ソルビトールが２．５％〜７．５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１２〜２３のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態２５． ソルビトールが４％〜６％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態２４に記載の水性製剤。
実施形態２６． ソルビトールが４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態２４に記載の水性製剤。
実施形態２７． １〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５、８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウム、４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含み、及びカルボキシメチルセルロースナトリウムを含んでいてもよい水性製剤であって、５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤。
実施形態２８． １ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５、８〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む、又はそれらからなる水性製剤であって、５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤。
実施形態２９． １ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５、９ｍＭ〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５％〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、及び０．０９％〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む、又はそれらからなる水性製剤であって、５．７〜６．３のｐＨを有する水性製剤。
実施形態３０． ４〜６ｍｇ／ｍＬのＰ０５、９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、及び０．０９〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む、又はそれらからなる水性製剤であって、５．７〜６．３のｐＨを有する水性製剤。
実施形態３１． ２７０〜３７０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、実施形態１２〜３０のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態３２． 眼に投与するために適合する、実施形態１〜３１のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態３３． 眼に局所投与するために適合する、実施形態３０に記載の水性製剤。
実施形態３４． 増粘剤を含まない、例えばＣＭＣを含まない、実施形態１〜４及び８〜３３のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態３５． さらにアミノ酸、例えばアルギニン、グルタミン酸、ヒスチジン若しくはメチオニンを含む、実施形態１２〜３４のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態３６． メチオニンをさらに含む、実施形態１２〜３４のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態３７． メチオニンが製剤中に１〜２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態３６に記載の水性製剤。
実施形態３８． 水性製剤が２５℃で例えば少なくとも４週間にわたり保管された場合に、メチオニンを含まない対応する水性製剤に比較して酸化が減少する、実施形態３６又は３７に記載の水性製剤。
実施形態３９． 水性製剤が多用量容器内に保管された場合に、メチオニンを含まない対応する水性製剤に比較して酸化が減少する、実施形態３８に記載の水性製剤。
実施形態４０． 水性製剤の酸化はＲＰ−ＨＰＬＣを使用して評価される、実施形態３８又は３９に記載の水性製剤。
実施形態４１． 光掩蔽粒子計数試験を使用して評価して、≧１０μｍの粒子に対して５０個／ｍＬ以下の粒子及び≧２５μｍの粒子に対して５個／ｍＬ以下の粒子を有する、実施形態１２〜４０のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態４２． 例えば２５℃の室温で４時間にわたりタンパク質溶液をボルテックスミキサーにかけた後の凝集形に比較してタンパク質の＞９０％のモノマー形の存在によって指示されるように安定である、実施形態１２〜４１のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態４３． 凝集形に比較したタンパク質のモノマー形のパーセンテージはＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して評価される、実施形態４２に記載の水性製剤。
実施形態４４． ２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも５カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜４３のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態４５． 周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも５カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜４４のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態４６． ２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも４カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜４５のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態４７． 周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも４カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜４６のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態４８． ２℃〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも３カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜４７のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態４９． 周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも３カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜４８のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５０． ２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも２カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜４９のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５１． 周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも２カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜５０のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５２． ２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも１カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜５１のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５３． 周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも１カ月間保管された後に安定である、実施形態１２〜５２のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５４． 顕微鏡粒子計数試験を使用して評価して、≧１０μｍの粒子に対して５０個／ｍＬ以下の粒子、≧２５μｍの粒子に対して５個／ｍＬ以下の粒子及び≧５０μｍの粒子に対して２個／ｍＬ以下の粒子の存在によって指示されるように安定である、実施形態１２〜５３のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５５． ＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して評価した凝集形に比較してタンパク質の＞９０％のモノマー形の存在によって指示されるように安定である、実施形態１２〜５４のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５６． 還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける参照標準物質への主要バンドの適合度によって指示されるように安定である、実施形態１２〜５５のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５７． 非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける参照標準物質への主要バンドの適合度によって指示されるように安定である、実施形態１２〜５６のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５８． 水性製剤を弱カチオン交換ＨＰＬＣ（ＷＣＥＸ−ＨＰＬＣ）を使用して評価した場合に、８５％以上の主ピークによって指示されるように安定である、実施形態１２〜５７のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態５９． Ｐ０５を含み、ＷＣＥＸ−ＨＰＬＣを使用して評価されるように１０％未満のＰ０５のｄｅｓ−Ａｌａ形の存在によって指示されるように安定である、実施形態５８に記載の水性製剤。
実施形態６０．ブローフィルシール容器内に包装される、実施形態１２〜５９のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態６１． 上記保管はブローフィルシール容器内での保管である、実施形態４４〜５３のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態６２． 治療方法であって、ＩＬ−１関連障害を有する被験者に実施形態１〜６１のいずれか１つに記載の水性製剤を投与する工程を含み、それによりＩＬ−１関連障害を治療する方法。
実施形態６３． ＩＬ−１関連障害はドライアイ障害である、実施形態６２に記載の治療方法。
実施形態６４． 眼障害、例えばドライアイ障害を治療する方法であって、眼障害、例えばドライアイ障害を有する被験者に、８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウム、４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含み、及びカルボキシメチルセルロースナトリウムを含んでいてもよい水性製剤であって、５．５〜７．５のｐＨを有し、治療用タンパク質を実質的に含んでいない水性製剤を投与する工程を含み、それによりドライアイ障害を治療する方法。
実施形態６５． 水性製剤が、８ｍＭ〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５％〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．０９％〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８を含む、実施形態６４に記載の治療方法。
実施形態６６． 水性製剤が、８〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８からなる、実施形態６４に記載の治療方法。
実施形態６７． ドライアイ障害を治療する方法であって、ドライアイ障害を有する被験者に１〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５、８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウム、４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含み、及びカルボキシメチルセルロースナトリウムを含んでいてもよい水性製剤であって、５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤を投与する工程を含み、それによりドライアイ障害を治療する方法。
実施形態６８． ドライアイ障害を治療する方法であって、ドライアイ障害を有する被験者に１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５、８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８からなる水性製剤であって、５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤を投与する工程を含み、それによりドライアイ障害を治療する方法。
実施形態６９． ドライアイ障害を治療する方法であって、ドライアイ障害を有する被験者に１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５、９ｍＭ〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５％〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、及び０．０９％〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む、又はそれらからなる水性製剤であって、５．７〜６．３のｐＨを有する水性製剤を投与する工程を含み、それによりドライアイ障害を治療する方法。
実施形態７０． 眼痛若しくは眼のただれ、ＯＳＤＩスコア及び／又は角膜フルオレセイン染色（ＣＦＳ）スコアを減少させるために有効である、実施形態６２〜６９のいずれか１つに記載の治療方法。
実施形態７１． 眼痛若しくは眼のただれは視覚アナログ尺度又はＯＳＤＩからの質問票を使用して評価される、実施形態７０に記載の治療方法。
実施形態７２． 水性製剤は１日１〜５回投与される、実施形態６２〜７０のいずれか１つに記載の治療方法。
実施形態７３． 水性製剤は局所投与される、実施形態６２〜７２のいずれか１つに記載の治療方法。
実施形態７４． 水性製剤は眼に局所投与される、実施形態７３に記載の治療方法。
実施形態７５． 水性製剤は１日３回投与される、実施形態６２〜７４のいずれか１つに記載の治療方法。
実施形態７６． 水性製剤は随意に投与される、実施形態６２〜７１若しくは７３〜７４のいずれか１つに記載の治療方法。
実施形態７７． 実施形態１〜６１のいずれか１つに記載の水性製剤を含む容器又はデバイス。
実施形態７８． ２５℃で少なくとも２週間、例えば少なくとも４週間保管されており、微粒子物質を実質的に含まない、実施形態７７に記載の容器又はデバイス。
実施形態７９． 実施形態１〜６１のいずれか１つに記載の水性製剤を含むブローフィルシール容器。
実施形態８０． 実施形態１〜６１のいずれか１つに記載の水性製剤を含む多用量容器。
実施形態８１． 実施形態３５〜４０に記載の水性製剤を含む多用量容器。
実施形態８２． 実施形態１〜６１のいずれか１つに記載の水性製剤を含む薬物送達デバイス。
実施形態８３． ブローフィルシール容器である、実施形態８２に記載の薬物送達デバイス。
実施形態８４． 不活性ガス、例えば窒素若しくはアルゴンを含有していてもよいパウチ中に密封される、実施形態７７〜８３のいずれか１つに記載の容器又はデバイス。
実施形態８５． ＩＬ−１関連障害、例えばドライアイ障害を治療する際に使用するための、実施形態１〜６１のいずれか１つに記載の水性製剤。
実施形態８６． 被験者におけるＩＬ−１関連障害を治療するための医薬品の製造における、実施形態１〜６１のいずれか１つに記載の製剤の使用。
実施形態８７． 実施形態１〜６１のいずれか１つに記載の水性製剤を含む容器又はデバイスを含むキットあって、及び取扱説明書を含んでいてもよいキット。
上記の実施形態は、必ずしも別個の実施形態ではない。一部の場合には、上記の実施形態は相互に、及び／又は本明細書に開示した他の態様及び実施形態と結合されてよい。
本明細書で言及した全ての特許、公開特許出願及び公表参考文献は、あらゆる目的のために参照により組み込まれる。
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現受容体結合剤から精製したタンパク質の代表的なサンプルを示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの複製物である。１５及び２０ｋＤａの分子量マーカーは左側に指示されている。レーンは次の通りである：分子量マーカー（レーン１及び６）、抽出物（レーン２及び７）、カチオン交換クロマトグラフィーによって精製された物質（レーン３及び８）、アニオン交換クロマトグラフィーによって追加して精製された物質（レーン４及び９）並びにそのような物質の還元サンプル（レーン５及び１０）。レーン２〜５はＰ０５精製、レーン６〜１０はＰ０４精製のレーンである。実施例２も参照されたい。 ＩＬ−１β及び陰性コントロールであるβ−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）タンパク質に比較した、Ｐ０６、Ｐ０７及びＰ０１タンパク質がシグナル伝達を作動させる能力を試験する実験の結果を示す表及び付属の棒グラフである。 Ｐ０１が様々なＩＬ−１β濃度にあるＩＬ−１β活性に拮抗する能力を試験する実験の結果を描出するグラフである。 ０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１β（ヒト）の存在下でのＰ０３（ヘキサ−ヒスチジンタグ付き（配列番号２３））、Ｐ０４（ヘキサ−ヒスチジンタグ付き（配列番号２３））、Ｐ０５（ヘキサ−ヒスチジンタグ付き（配列番号２３））及びＩＬ−１ＲａによるＩＬ−１βの拮抗作用を試験する実験の結果を描出するグラフである。 ０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１β（ヒト）の存在下及び各溶解物中でのタンパク質の濃度推定値を使用した、非タグ付き形のＰ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４及びＰ０５並びにＩＬ−１Ｒａを含有する溶解物によるＩＬ−１βの拮抗作用を試験する実験の結果を描出するグラフである。 リン酸塩製剤（２０ｍｇ／ｍＬのＰ０５、１０ｍＭのリン酸塩、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、ｐＨ６．５）中でのＰ０５についての動的光散乱法（ＤＬＳ）の結果を示すグラフである。 クエン酸塩製剤（２０ｍｇ／ｍＬのＰ０５、１０ｍＭのクエン酸塩、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、ｐＨ６．０）中でのＰ０５についてのＤＬＳの結果を示すグラフである。 実施例８において記載したようにＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−１β、Ｐ０３、Ｐ０４及びＰ０５の熱変性を描出するグラフである。 図５Ａにおけるグラフの負の一次導関数（負の一次導関数は融解温度の改良された可視化を提供する）を描出するグラフである。 ドライアイモデルにおけるマウスについての第０、３、７、９及び１１日の、２件の独立試験の１眼当たりの角膜のフルオレセイン染色によって試験された平均角膜染色スコア±ＳＥＭを描出する棒グラフである。マウスは、処置なし（ｎ＝１８）、１０ｍｇ／ｍＬのＰ０５（ｎ＝１９）又は１．２５×ＰＢＳ、ビヒクル（ｎ＝２０）の処置を受けた。星印は、以下のようにビヒクルに比較したＰ０５の統計学的有意性を示す：＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．００５）。 ドライアイモデルにおけるマウスについての第０、３、７、９及び１１日の、１眼当たりの角膜の平均角膜染色スコア±ＳＥＭを示しているデータを表す棒グラフである。マウスは、処置なし（ｎ＝８）、１．２５×ＰＢＳビヒクル（ｎ＝８）、１０ｍｇ／ｍＬのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）（ｎ＝８）又は１０ｍｇ／ｍＬのＰ０５（ｎ＝９）の処置を受けた。星印は、以下のようにマウス血清アルブミンに比較したＰ０５の統計学的有意性を示す：＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊＊（Ｐ＜０．０００５）。 図６Ｂにおけると同一実験におけるＲｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）（０．０５％のシクロスポリン乳剤）（ｎ＝８）を用いて処置されたマウスについてのデータを表す棒グラフである。星印は、以下のようにシクロスポリン（Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標））に比較したＰ０５の統計学的有意性を示す：＊＊（Ｐ＜０．００５）及び＊＊＊（Ｐ＜０．０００５）。 実施例１６に記載した臨床試験のデザインを示す図である。 ＥＢＩ−００５製剤（５ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬの処置を受けた群についての結合データ）及びビヒクル製剤を受けた被験者群についてのＯＳＤＩスコアにおけるベースラインからの平均変化を示すグラフである。 ＥＢＩ−００５製剤（５ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬの処置を受けた群についての結合データ）及びビヒクル製剤を受けた被験者群についての疼痛におけるベースラインからの平均変化を示すグラフである。 ＥＢＩ−００５製剤（５ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬの処置を受けた群についての結合データ）及びビヒクル製剤を受けた被験者群についての角膜フルオレイン染色（ＣＦＳ）スコアにおけるベースラインからの平均変化を示すグラフである。
本出願人らは、タンパク質、例えばキメラサイトカインポリペプチド、例えばＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｒａキメラを、そのような製剤による治療を必要とする被験者に提供するために有用である製剤を実現した。製剤は一般に、安定性を必要とするタンパク質組成物、例えば撹拌に感受性である、例えばメチオニン残基のために酸化に感受性である、又は例えばアスパラギン若しくはアルギニン残基のために脱アミド化に感受性であるタンパク質を調製するために有用である。さらに本明細書では、そのような製剤を調製及び投与する方法を開示する。
一部の実施形態では、製剤は、キメラサイトカインポリペプチド、例えばＩＬ−１関連障害のための効果的な局所治療を含む医薬的使用、例えば眼科使用のために適合するＩＬ−１β及びＩＬ−１Ｒａ配列に由来する選択された配列を含有するキメラポリペプチドを含む。一般に、本明細書に記載した製剤は、驚くべきことにポリペプチドが相当に高濃度である場合でさえ、例えばバルク原薬を保管するために適切な濃度並びに被験者を治療するために適切な濃度で安定である。この特徴の利点は、患者に使用するために薬物を調製する目的でバルク原薬から望ましくない物質を除去する必要がないことである。
特に、本出願人らは、例えば眼において、例えば眼の正面若しくは角膜表面に局所投与のために適合するキメラサイトカインポリペプチドの効果的な水性製剤を首尾よく実現した。本出願人らの知る限りにおいて、本出願時現在、ＦＤＡにより承認された局所的眼投与のための承認された生物学的製剤（生物製剤）は存在しない。さらに、本出願人らは、そのようなポリペプチドを眼への投与と適合するｐＨ（例えば、４．５〜７．０、５．５〜７．０、５．５〜６．５又は６．０〜７．０のｐＨ）で、そのポリペプチドで処置される被験者にとって製剤を快適なものにさせる成分を含有するポリペプチドを調製することができた。患者は、製剤が快適である場合、例えば刺激を誘発しない場合は、治療により適合する可能性が高い。実施形態では、製剤は、例えば眼の赤み、流涙、粘液排出又は主観的不快感などの内の１つ以上の刺激の症状を誘発しない。
安定性
局所眼科薬は、一般に患者により自己投与される。患者は薬物を相当に長期間にわたり保管している場合があるので、製剤は、典型的には投与前には医師若しくは薬剤師によってのみ保管される製剤より高温及び高レベルの撹拌ストレスに曝される可能性がある。当分野において公知であるように、タンパク質は低分子よりも撹拌及び温度に対してより感受性である。撹拌ストレスは沈降を引き起こすことがあり、熱ストレスは沈降及び化学的劣化をもたらすことがある。さらに、送達デバイス内への化合物の装填中、熱ストレスに曝露させられる可能性がある。本出願人らは、撹拌ストレス及び熱に曝露させられた場合に素晴らしい安定性を上首尾で提供する製剤を実現した。
一部の製造工程は、製剤の相当に高温への少なくとも短時間の曝露を必要とする。例えば、製剤をブローフィルシール（ＢＦＳ）容器内へ装填する工程は、充填工程と結び付いた撹拌に加えて、製剤の高温への曝露を生じさせることがある。本出願人らは、そのようなデバイス（ＢＦＳ容器）内へ製剤を装填し、装填の直後及び長期間にわたる製剤の安定性を証明した。一部の実施形態では、本明細書に提供した製剤はＦＢＳとともに使用するために適合する。実施形態では、ＢＦＳとともに使用するために適合する製剤は、ＢＦＳ容器内への装填の直後及び／又はＢＦＳ容器内への保管後に、例えば本明細書に記載した期間及び条件下での保管後に安定性を示す。
実施形態では、本明細書に記載した製剤は安定である。実施形態では、製剤は、本明細書に記載した条件（例えば、特定温度での保管、又は撹拌ストレス）下で安定性を示す。実施形態では、安定性は、本明細書に記載した１つ以上の方法（例えば、視覚的外観、分光測光法（Ａ２８０）、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる含量；サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）；逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）；弱カチオン交換ＨＰＬＣ（ＷＣＥＸ−ＨＰＬＣ）；効力；光掩蔽粒子計数試験（例えば、ＵＳＰ＜７８８＞に記載された光掩蔽粒子計数試験）又は顕微鏡粒子計数試験（例えば、ＵＳＰ＜７８８＞に記載された顕微鏡粒子計数試験）に基づいて）及び／又は当分野において公知の方法を使用して評価される。
安定性は、視覚的外観に基づいて評価できる。実施形態では、製剤は、目に見える微粒子物質を本質的に含まない透明からわずかに乳白がかった無色液剤であれば安定である。
実施形態では、製剤は、約２５℃〜約４０℃、例えば約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃若しくは約４０℃で少なくとも２日間、３日間、５日間、１週間、１０日間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、１６週間、２０週間、２５週間、３０週間、３５週間、４０週間、４５週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間以上の期間にわたり安定である。
実施形態では、製剤は、保管中の長期間にわたり、約２℃〜約８℃、例えば約４℃、約５℃、約６℃、２℃〜８℃、４℃、５℃又は６℃の温度で安定である。例えば、製剤は、そのような保管温度で少なくとも２週間、４週間、６週間、２カ月間、３カ月間、６カ月間、１年間、２年間、３年間若しくは４年間の期間にわたり安定である。
製剤の安定性は、例えば、２〜８℃での少なくとも２、４、６、８、１２若しくは１８カ月間の保管後、又は周囲条件下、例えば室温（ＲＴ）、例えば約２５℃での、例えば少なくとも２週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、５カ月間、６カ月間、１２カ月間若しくは１８カ月間の保管後に評価することができる。実施形態では、製剤は、少なくとも８カ月間にわたる２〜８℃での保管後に安定である。実施形態では、製剤は、少なくとも５カ月間にわたる室温への曝露後に安定である。一部のそのような実施形態では、製剤は、例えば少なくとも５カ月間にわたるＢＦＳ容器内での保管後に安定である。
安定性は、例えば本明細書に記載した、又は当分野において公知の方法及び基準に基づいて評価することができる。例えば、安定性は、物理的純度（例えば本明細書ではサイズ排除とも呼ぶサイズ排除ＨＰＬＣ、ＳＥ−ＨＰＬＣ若しくはＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して評価される、例えば凝集の欠如）、化学的純度（例えば弱カチオン交換ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ及び／又はＳＤＳ−ＰＡＧＥ（例えば還元若しくは非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を使用して評価される）及び／又は粒子状物質のレベル（例えば、視覚的に、又はＨＩＡＣ液中粒子計数器（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ社、カリフォルニア州ブレア）を使用した粒子計数によって評価される）に基づいて評価できる。
実施形態では、安定性は、例えばＵＳＰ＜７８９＞（米国薬局方、点眼剤の不溶性微粒子試験法）に規定されているように、点眼剤中の微粒子物質についての指針への準拠に基づいて証明される。
実施形態では、製剤は、例えば光掩蔽粒子計数試験（例えば、ＵＳＰ＜７８８＞に記載された光掩蔽粒子計数試験）を使用して評価される、≧１０μｍの粒子に対して５０個／ｍＬ以下の粒子及び／又は≧２５μｍの粒子に対して５個／ｍＬ以下の粒子を有する。
実施形態では、製剤は、例えば顕微鏡粒子計数試験（例えば、ＵＳＰ＜７８８＞に記載された顕微鏡粒子計数試験）を使用して評価される、≧１０μｍの粒子に対して５０個／ｍＬ以下の粒子、≧２５μｍの粒子に対して５個／ｍＬ以下の粒子及び／又は≧５０μｍの粒子に対して２個／ｍＬ以下の粒子を有する。
実施形態では、安定性は、例えばＵＳＰ＜７８８＞（米国薬局方、注射剤の不溶性微粒子試験法）に規定されているように、注射剤中の微粒子物質についての指針への準拠に基づいて証明される。
実施形態では、製剤は、例えば光掩蔽粒子計数試験（例えば、ＵＳＰ＜７８８＞に記載された光掩蔽粒子計数試験）を使用して評価される、≧１０μｍの粒子に対して６，０００個／容器（容量が１００ｍＬ以下の容器に対して）以下の粒子及び／又は≧２５ｕｍの粒子に対して６００個／容器（容量が１００ｍＬ以下の容器に対して）以下の粒子を有する。
実施形態では、製剤は、例えば顕微鏡粒子計数試験（例えば、ＵＳＰ＜７８８＞に記載された顕微鏡粒子計数試験）を使用して評価される、≧１０μｍの粒子に対して３，０００個／５ｍＬ以下の粒子及び／又は≧２５ｕｍの粒子に対して３００個／５ｍＬ以下の粒子を有する。
実施形態では、製剤中のタンパク質は、例えば室温（ＲＴ）で１〜８時間、例えばＲＴで４時間にわたりタンパク質溶液をボルテックスミキサーにかけた後に凝集の欠如（凝集の欠如は、例えば製剤が凝集形に比較してタンパク質の＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％若しくは＞９９％のモノマー形を含有する場合に証明できる）によって証明されるように、撹拌ストレスから保護される。凝集は、例えば本明細書に記載した、又は当分野において公知の方法を使用して評価できる。例えば、凝集は、超遠心分離、サイズ排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動法、動的光散乱法及び／又は濁度測定法を使用して評価できる。
一部の態様では、安定性は、当分野において公知の物理的又は化学的方法によってアッセイされる。例えば、物理的純度又は凝集の欠如は、サイズ排除ＨＰＬＣ又は製剤中のモノマーポリペプチドの相対量を決定する他の方法を使用して決定できる。典型的には、許容される安定性を備える製剤は、タンパク質の凝集形に比較して、治療用タンパク質（例えば、キメラサイトカイン、例えばＰ０５）の＞９０％のモノマー形を含有する。実施形態では、製剤は、治療用タンパク質の凝集形に比較して、治療用タンパク質（例えば、キメラサイトカイン、例えばＰ０５）の＞９０％（例えば、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％若しくは＞９９％）のモノマー形を含有する。
化学的純度は、例えば、弱カチオン交換ＨＰＬＣ若しくは逆相ＨＰＬＣを使用して決定できる。典型的には、許容される安定性を備える製剤は、例えば弱カチオン交換ＨＰＬＣを使用して評価されるように、分子の化学修飾形に比較して、＞８０％の天然分子を含有する。実施形態では、製剤は、化学修飾形（例えば、酸化形若しくはアセチル化形）の分子に比較して、＞８０％（例えば、＞８５％、＞８７％、＞９０％若しくは＞９５％）の天然分子を含有する。
粒子状物質は、視覚的に同定できる。実施形態では、製剤は、視覚的に同定できる粒子状物質を本質的に含まない製剤である。
本出願人らは、注射により送達するために調製されたＩＬ−１Ｒａであるアナキンラに関する情報は、製品が３年間の保管寿命を有する、３〜８℃で保管されなければならない、及び「歩行使用するためには、Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）は使用期限を越えずに２５℃を超えない温度で１２時間は冷蔵庫から取り出されてよい。この期間の終了時には、製品は冷蔵庫に戻してはならず、廃棄されなければならない。」と記載していることに注目している（ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ．ｏｒｇ．ｕｋ／ＥＭＣ／ｍｅｄｉｃｉｎｅ／２３１０４／ＳＰＣ／Ｋｉｎｅｒｅｔ＋１００＋ｍｇ＋ｓｏｌｕｔｉｏｎ＋ｆｏｒ＋ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ＋ｉｎ＋ａ＋ｐｒｅ−ｆｉｌｌｅｄ＋ｓｙｒｉｎｇｅ＃ＳＨＥＬＦ＿ＬＩＦＥを参照されたい）。これは、本明細書に提供した、例えばＰ０５製剤の驚くべき安定性とは明確な相違を表す。
生物学的処理は、相当に短い保管寿命を有する、又は保管、輸送のための障害物を作り出す特別な保管条件及び患者使用並びに生物製剤の十分な供給の保証を必要とする可能性があるために、投与するためには問題が多い可能性がある。本明細書に提供された所定の製剤の利点は、驚くべきことに製剤は、冷蔵の条件下だけではなく、室温（例えば、２５℃）及びそれ以上（例えば、４０℃）に一致する温度でも安定である点である。したがって、サイトカインタンパク質若しくはポリペプチド製剤（例えば異種サイトカインタンパク質若しくはポリペプチド製剤）、例えば本明細書に記載した製剤は、一部の実施形態では、ＲＴ（例えば、２５℃）で少なくとも３日間、５日間、１週間、１０日間、２週間、３週間、６週間、８週間、１６週間、２０種間、２５週間、３０週間、３５週間、４０週間、４５週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、１２カ月間以上の期間にわたり安定である液体形で提供される。実施形態では、日付ベースで、例えば第１月の第１日〜第２月の第１日で決定される。
他の態様では、製剤は、約２５℃〜約４０℃、例えば、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃若しくは約４０℃で少なくとも２日間、３日間、５日間、１週間、１０日間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、１６週間、２０週間、２５週間、３０週間、３５週間、４０週間、４５週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間以上の期間にわたり安定である。
１つの実施例では、製剤は、製剤のタンパク質成分、例えばＰ０５が２０ｍｇ／ｍＬの濃度にある場合、２５℃で１カ月間及び４０℃で１週間にわたり安定である。又別の特定実施形態では、ブローフィルシールバイアル若しくはブローフィル送達デバイス内へ装填された製剤は、タンパク質、例えばＰ０５を１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ若しくは１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む製剤については、２５℃で少なくとも３カ月間にわたり安定である。一部の実施形態では、製剤は、少なくとも８カ月間安定である。
実施形態では、４．５〜５．５ｍｇ／ｍＬのＰ０５、９〜１１ｍＭのクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．０９〜０．１１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８を含む製剤は、２℃〜８℃及び／又は室温、例えば２５℃で少なくとも５カ月間安定である。一部の実施形態では、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．０、５％のソルビトール、０．１％のポロキサマー及び５ｍｇ／ｍＬ若しくは２０ｍｇ／ｍＬのＰ０５からなる製剤は、２℃〜８℃で少なくとも５カ月間及び／又は室温、例えば２５℃で少なくとも５カ月間安定である。
濃度
生物製剤を投与する際の又別の問題は、十分な濃度の生物製剤を提供することである。これは、最少投与回数で治療効果を達成できるように相当に高濃度の生物製剤を提供することが望ましい眼科用途では特別な課題である。本出願人らは、例えば上述した、及び本明細書内のどこかに記載した条件などの条件下で保管した場合に目に見えて凝集しない、沈殿しない、又は化学的純度を消失しない高濃度又は治療的に有効な濃度のポリペプチドを含有する有効用量のキメラサイトカイン製剤を送達できる製剤を実現できている。さらに、本出願人らは、等張化剤、界面活性剤及び緩衝剤を含む製剤中に８０ｍｇ／ｍＬまでの、例えば５０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度にあるサイトカイン製剤の安定性を証明した。このため、１つの態様では、本発明において特徴付けた製剤は、０．１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、０．１〜８０ｍｇ／ｍＬ、０．１〜５０ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜８０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ〜８０ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜８０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ〜８０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜８０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜８０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ〜８０ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬ若しくは５０ｍｇ／Ｌ〜６０ｍｇ／ｍＬの濃度で安定性で存在するキメラサイトカインポリペプチドを含有する。例えば、製剤は、０．１ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬ、例えば５ｍｇ／ｍＬ若しくは２０ｍｇ／ｍＬを含有する。
増粘剤は、例えば眼科使用のために製剤中で使用されることが多い。そのような増粘剤は、一般にさもなければ瞬き及び結膜嚢を通しての排液によって急速に一掃されるであろう眼科処置の滞留時間を増加させるために含まれる。しかしそのような増粘剤は、例えばアレルギー症状などの有害な作用を有する、製剤のタンパク質成分を損傷させる、又は視界不良を誘発する可能性がある。そのような増粘剤は本明細書に記載した所定の製剤において使用できるが、一部の実施形態では、本出願人らは、有効成分、すなわちキメラサイトカインのための増粘剤を必要としない効果的治療薬として使用される製剤を実現している。
又別の態様では、本発明において特徴付けた製剤は、１つ以上の界面活性剤を含有する。界面活性剤の使用は、例えば分子の容器への接着を減少させるため、特に撹拌条件下でのタンパク質の凝集を減少させるために有用な可能性はあるが、界面活性剤の添加は、発泡、天然膜の破裂及びその他の障壁及び治療によって誘発される許容できない不快感のために治療薬を使用不能にさせる可能性がある。本発明者らは、界面活性剤を包含するが、そのような欠点を招かない製剤を提供することに成功した。典型的には、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。開示した製剤において使用するために適合する界面活性剤は、ポロキサマー、例えばポロキサマー１８８を含むことができるが、それには限定されない。一部の実施形態では、界面活性剤はポリソルベート、例えばポリソルベート−２０及びポリソルベート−８０である。有用な可能性がある他の界面活性剤には、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ、チロキサポール、オクトキシノール４０（Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ４０５及びポリオキシル４０ステアレートが含まれる。所定の実施形態では、製剤は、界面活性剤（例えば、ポロキサマー１８８）を約０．０５％、０．０６％、０．１％〜１．０％、０．１％〜０．５％、０．２％〜０．５％若しくは０．１％〜０．２％（ｗ／ｖ）、例えば０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８の濃度で含有する。適切な界面活性剤及びそのような界面活性剤の濃度は、界面活性剤が撹拌試験において凝集を防止するかどうかを試験することによって決定できる。そのような試験を実施する方法は、当分野において公知である。例えば、撹拌ストレスから沈降を防止するために界面活性剤が必要とされるかどうかを決定できる。そのような実験では、典型的には、撹拌及び分析を使用してスクリーニングが実施される。そのような試験のために使用される濃度の例は、０．０１％、０．０２％、０．０６％及び０．１％（ｗ／ｖ）の界面活性剤、例えばポロキサマー１８８である。実施形態では、凝集及び／又は沈降は、分光測光法（Ａ２８０）、視覚的検査、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、光掩蔽（例えば、ＨＩＡＣデバイスを使用する）又はＭｉｃｒｏ−Ｆｌｏｗ Ｉｍａｇｉｎｇ（商標）（ＭＦＩ、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ社、カリフォルニア州サンタクララ）による分析を使用して評価される。界面活性剤は、一般に、最小量の沈降、例えば目に見える沈降のない、又は注射における粒子状物質についての指針（例えば、ＵＳＰ＜７８８＞を参照されたい）又は点眼剤における粒子状物質についての指針（例えば、ＵＳＰ＜７８９＞を参照されたい）を満たす粒子計数が関連する製剤において使用するために選択される。
又別の態様では、本発明において特徴付けた製剤は、１つ以上の等張化剤を含有する。適切な等張化剤には、塩化ナトリウム、ソルビトール、マンニトール、スクロース、トレハロース又は他の糖が含まれるがそれらに限定されない。何らかの理論に拘束されることなく、そのような等張化剤はキメラサイトカインポリペプチドの驚くべき安定性に寄与することができる。実施形態では、等張化剤、例えば糖、例えばソルビトールは、熱安定性を提供する、又は熱安定性に寄与する。所定の実施形態では、本発明において特徴付けた製剤は、眼のために等張性である（例えば、約２７０〜３３０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する）。一部の実施形態では、製剤は、約２５０〜約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３００〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、３５０〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、２００〜３７５ｍＯｓｍ／ｋｇ又は３５０〜３７５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。実施形態では、製剤は、２７０〜３３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば約３２０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。等張化剤に依存して、本発明において特徴付けた所定の実施形態は、約１％〜約１５％（ｗ／ｖ）、２％〜１２％（ｗ／ｖ）、５％〜１２％（ｗ／ｖ）又は５％〜１０％（ｗ／ｖ）を含有する。ソルビトール若しくはマンニトールについて、濃度の１つの例は、約５％（ｗ／ｖ）であり、例えば濃度は５％（ｗ／ｖ）である。スクロース若しくはトレハロースについて、濃度の１つの例は約９％（ｗ／ｖ）である。
緩衝剤
又別の態様では、本明細書で特徴付けた製剤は、１つ以上の緩衝剤を含有する。適切な緩衝剤の例には、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、ホウ酸塩、コハク酸塩及びＴＲＩＳが含まれるがそれらに限定されない。一部の場合には、緩衝剤の塩は、ナトリウム塩若しくはカリウム塩である。本発明において特徴付けた所定の実施形態では、緩衝剤は、弱緩衝作用を提供するために約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ、例えば約２０ｍＭから約４０ｍＭの量で存在する。これは、チクチクする痛み若しくは不快感が生じる場合、製剤が投与部位、例えば眼の表面上で急速に中和されることを可能にする。一部の実施形態では、緩衝剤は、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ若しくは約５０ｍＭの量で存在する。一部の製剤では、緩衝剤はクエン酸塩、例えばクエン酸ナトリウムである。他の製剤では、緩衝剤は、１０ｍＭで存在するクエン酸塩である。一般に、緩衝剤は弱緩衝剤である。
一般に、適切なバッファーは、当該のポリペプチドが様々なｐＨ、濃度、温度及び様々な時間にわたり様々なバッファーに曝露させられる安定性試験を実施することによって選択される。バッファーは、例えば、当該のポリペプチドをバッファー内に配置する工程及びサンプルを高温（促進安定性試験）にかけて次に物理的安定性（視覚的検査による沈降）若しくは化学的安定性を試験することによって、例えば弱カチオン交換クロマトグラフィーによる脱アミド化若しくは逆相クロマトグラフィーによる酸化を監視することによって選択できる。追加のアッセイには、Ａ２８０、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ｐＨ及びオスモル濃度の監視を含むことができる。最高の物理的及び化学的安定性を提供するバッファーが選択される。
アミノ酸
又別の態様では、本発明において特徴付けた製剤は、１つ以上のアミノ酸を含有する。適切なアミノ酸には、アルギニン、グルタミン酸、ヒスチジン若しくはメチオニンが含まれるがそれらに限定されない。アミノ酸は、典型的にはタンパク質の安定性及び／又は溶解度を強化するために選択される。そのようなアミノ酸を同定する方法は、当分野において公知である。一部の実施形態では、例えばＰ０５製剤などの製剤は、ヒスチジン若しくはメチオニンを含有する。
一部の実施形態では、製剤は、酸素スカベンジャー、例えばメチオニンを含有する。一部の実施形態では、製剤はプラスチック容器内にある。実施形態では、プラスチック容器は、フリーラジカルを生成する方法を使用して滅菌される、例えば、容器はγ線又はエチレンオキサイドを使用して滅菌される。一部のそのような実施形態では、製剤は、メチオニン、例えば１〜２０ｍＭの濃度のメチオニンを含む。実施形態では、メチオニンは、１〜５ｍＭ、５〜１０ｍＭ、１０〜１５ｍＭ、１５〜２０ｍＭ若しくは５〜１５ｍＭの濃度で存在する。実施形態では、メチオニンは、約１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ若しくは２０ｍＭの濃度で存在する。実施形態では、製剤はメチオニンを約５ｍＭの濃度、例えば２．５〜７．５ｍＭ、３〜７ｍＭ若しくは４〜６ｍＭの濃度で含有する。一部の実施形態では、滅菌済みプラスチック容器内にメチオニンを含製剤、及び酸化の量はメチオニンを含有しない対応する製剤の酸化の量より少ない。
増粘剤
又別の態様では、本発明において特徴付けた製剤は、１つ以上の増粘剤を含有する。適切な増粘剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム（本明細書ではカルボキシメチルセルロース若しくはＣＭＣとも呼ぶ）を含むメチルセルロース；エチルセルロースを含むヒドロキシセルロース；ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）；カルボマー、例えば９３４Ｐ、９７１Ｐ及び９７４Ｐ；ポリビニルアルコール；キサンタンガム；グアールガム；ゲランガム；及びグリセリンが含まれるがそれらに限定されない。
本発明において特徴付けた製剤は、さらに他の医薬上許容される賦形剤も含有していてよい。例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；Ｋｉｂｂｅ（ｅｄ．），Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＭｃＮａｌｌｙ ａｎｄ Ｈａｓｔｅｄｔ（ｅｄｓ．，Ｉｎｆｏｒｍａ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ（ＩＳＢＮ：０８４９３７９４９０）（２００７）を参照されたい。添加できる賦形剤は、特に、保存料、浸透強化剤及び生体接着剤である。浸透強化剤及び生体接着剤は、例えば、キトサン、サイトカラシンＢ、アミノ化ゼラチン、ポリ−ε−カプロレクトン（カルボポール９４１Ｐ）；ポリ（ブチルシアノアクリレート）；ポリ−Ｌ−アルギニン；シクロデキストリン；ゲラン；ポリ（アクリル酸）；ヒアルロン酸；ムチン；アルギン酸塩；カルボフィル及びポロキサマー（例えば、Ｎａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，１３６：２−１３（２００９）；Ｄｉｎｇ，ＰＳＴＴ １：３２８−３５（１９９８）；及びＳａｈｏｏ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ，１３：１４４−５１（２００８）を参照されたい）を含むことができる。その他の賦形剤は、安定剤として有用な可能性があり、例えば、グリセリン、塩化カリウム、リン酸カリウム、プロピレングリコール、酢酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム十水和物、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム（一塩基性及び二塩基性リン酸ナトリウムを含む）；塩化亜鉛、フェノール、安息香酸塩、ヒマシ油及び酸化エチレンの誘導体並びにＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）（ＢＡＳＦ社、ドイツ国）を含むことができる。
本発明において特徴付けた医薬組成物は、様々な形態で調製できる。これらには、例えば、液体、半固体及び固体剤形、例えば液剤（例えば、注射液及び注入液）、ナノ粒子及びリポソームを含む分散剤若しくは懸濁剤が含まれる。形態は、一般に投与及び治療用途の意図された様式に左右されることになる。本明細書に記載した作用物質のための組成物は、典型的には注射液若しくは注入液の形態にある、又は局所送達のため、例えば局所眼送達のために調製される。
一部の実施形態では、本明細書に記載した医薬組成物は、製造及び保管条件下で無菌及び安定である。医薬組成物は、さらに又医薬組成物が投与についての規制及び工業規格にしたがっていることを保証するために試験することができる。組成物は、高い薬物（例えば、生物製剤）濃度に適合する液剤、マイクロエマルション剤、懸濁剤、リポソーム又はその他の規則的な構造として調製できる。無菌注射液は、本明細書に記載した作用物質を上記に列挙した成分の１つ又は組み合わせとともに必要量で適切な溶媒中に必要に応じて組み込み、その後にろ過滅菌を行うことにより調製できる。一般に、分散剤は、本明細書に記載した分散剤を、塩基性分散媒及び上記に列挙した成分から必要とされる他の成分を含有する無菌ビヒクル内に組み込む工程によって調製される。無菌注射液を調製するための無菌散剤の場合は、代表的な調製方法には、本明細書に記載した作用物質の粉末に事前に滅菌ろ過された溶液からの追加の所望の成分を加えたものを産生する真空乾燥法及びフリーズドライ法が含まれる。液剤の適正な流動性は、例えばレシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散剤の場合における必要な粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる物質、例えばモノステアレート塩及びゼラチンを包含することによって操作することができる。そのような物質は、低用量製剤において特に有用な可能性がある。実施形態では、製剤は≦１ｍｇ／ｍＬの治療用タンパク質（例えば、キメラサイトカイン、例えばＰ０５）を含み、製剤にはゼラチンが含まれる。
所定の実施形態では、製剤は、例えばキメラサイトカインポリペプチドの薬物動態（ＰＫ）（例えば、身体内、例えば眼内、例えば角膜上のその半減期に基づいて評価される）を延長させるために、担体を用いて調製される。そのような実施形態では、キメラサイトカインポリペプチドは、例えばインプラント若しくはマイクロカプセル封入送達系によって送達される放出制御製剤として送達できる。生分解性生体適合性ポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸などを使用できる。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい
本明細書に記載した製剤の特徴は、それらが保存料を含有しないことである。一般に、保存料は、キメラサイトカインポリペプチドに影響を及ぼす可能性がある、例えばポリペプチドの構造に変化を誘発する可能性がある。さらに、保存料は、被験者において、所望の治療作用にとって正反対である例えば炎症応答を誘発する可能性がある。製剤は、無菌条件下で無菌で保管され、それらの最終容器内に充填される。
ビヒクル製剤
本出願人らは、さらに予想外にも、本明細書に記載した治療用タンパク質を含有していない製剤（例えば、ビヒクル単独製剤）が眼疾患、例えばドライアイ疾患の内の１つ以上の徴候若しくは症状、例えば本明細書に記載したドライアイ疾患の内の１つ以上の徴候若しくは症状を治療するために有用であることも発見した。一部の実施形態では、ビヒクル製剤は、界面活性剤、等張化剤及び緩衝剤を含む。一部のそのような実施形態では、製剤は、疼痛（例えば、疼痛質問スコア若しくは視覚的アナログスケールを使用して評価される疼痛）、ＯＳＤＩ又はＯＳＤＩのサブスケールを減少させるために効果的である。一部のそのような実施形態では、製剤は、角膜フルオレセイン染色（ＣＦＳ）を減少させる。本明細書で使用する用語「ビヒクル単独製剤」は、特別には、タンパク質若しくはペプチド成分を実質的に含んでいない、例えば治療用タンパク質を含有していない製剤を意味する。本明細書に記載したビヒクル製剤は、何らかの治療用タンパク質、例えば治療用ポリペプチドを含有できることを理解すべきである。
一部の実施形態では、ビヒクル製剤、例えばビヒクル単独製剤は、実質的に界面活性剤（例えば、ポロキサマー１８８）、等張化剤（例えば、ソルビトール）及び緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウム）を含む。実施形態では、ビヒクル製剤は、タンパク質を実質的に含んでいない。実施形態では、ビヒクル製剤は、治療用タンパク質又はペプチドを実質的に含んでいない。実施形態では、ビヒクル製剤は、増粘剤を含有していない。
有用な界面活性剤、等張化剤及び緩衝剤には本明細書に開示した界面活性剤、等張化剤及び緩衝剤が含まれる。一部の実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８であり、等張化剤はソルビトールであり、緩衝剤はクエン酸ナトリウム及び／又はリン酸ナトリウムである。
実施形態では、緩衝剤は、２０ｍＭ以下の濃度で存在する。
一部の実施形態では、ビヒクル製剤は、約０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、約５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び約１０ｍＭ（ｗ／ｖ）のクエン酸ナトリウムを含む。実施形態では、本明細書に記載したビヒクル製剤の成分は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％若しくは５０％までの本明細書に提供した数値の周囲で変動してよい量で存在する。実施形態では、本明細書に記載したビヒクル製剤の成分は、１０％までの本明細書に提供した数値の周囲で変動してよい量で存在する。一部の実施形態では、ビヒクル製剤は、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．０、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．１％のポロキサマー１８８からなる水性製剤である。
実施形態では、ビヒクル製剤は、９．５〜１０．５ｍＭ、９〜１１ｍＭ、８．５〜１１．５ｍＭ、８〜１２ｍＭ、７．５〜１２．５ｍＭ、７〜１３ｍＭ、６〜１４ｍＭ若しくは５〜１５ｍＭのリン酸ナトリウム若しくはクエン酸ナトリウムを含む。実施形態では、ビヒクル製剤は、９．５〜１０．５ｍＭ、９〜１１ｍＭ、８．５〜１１．５ｍＭ、８〜１２ｍＭ、７．５〜１２．５ｍＭ、７〜１３ｍＭ、６〜１４ｍＭ若しくは５〜１５ｍＭのクエン酸ナトリウムを含む。実施形態では、ビヒクル製剤は、４．７５〜５．２５％、４．５〜５．５％、４．２５〜５．７５％、４〜６％、３．７５〜６．２５％、３．５〜６．５％、３〜７％若しくは２．５〜７．５％（ｗ／ｖ）のソルビトールを含む。実施形態では、ビヒクル製剤は、０．０９５〜０．１０５％、０．０９〜０．１１％、０．０８５〜０．１１５％、０．０８〜０．１２％、０．０７５〜０．１２５％、０．０７〜０．１３％、０．０６〜０．１４％若しくは０．０５〜０．１５％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８を含む。
実施形態では、ビヒクル製剤のｐＨは、５．５〜７．５である。実施形態では、ｐＨは、５．５〜６．５である。実施形態では、ｐＨは、６〜７である。実施形態では、製剤は、８〜１２ｍＭのクエン酸ナトリウム、４〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０８〜０．１２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８を含み、５．５〜７．５のｐＨ、例えば、５．５〜６．５のｐＨを有する。
実施形態では、ビヒクル製剤は、９〜１１ｍＭのクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０９〜０．１１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８を含み、５．５〜７．５のｐＨ、例えば、５．５〜６．５のｐＨを有する。実施形態では、ビヒクル製剤は、７〜１３ｍＭのクエン酸ナトリウム、３．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．０７〜０．１３％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８を含み、５．５〜７．５のｐＨ、例えば、５．５〜６．５のｐＨを有する。
実施形態では、ビヒクル製剤は、増粘剤を含有していない。
実施形態では、ビヒクル製剤は、さらに増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）を含む。実施形態では、ビヒクル製剤はＣＭＣを、例えば０．１〜１％（ｗ／ｖ）、０．１〜０．５％（ｗ／ｖ）若しくは０．２〜０．３％（ｗ／ｖ）の濃度でＣＭＣを含む。
一部の実施形態では、ビヒクル製剤は、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．２５％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロースナトリウム及び１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。実施形態では、ビヒクル製剤は、約６．５のｐＨを有する。実施形態では、製剤の成分は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％若しくは３０％までの提供した数値の周囲で変動してよい量で存在する。一部の実施形態では、ビヒクル製剤は、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．２５％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロースナトリウム及び１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。
実施形態では、製剤は、０．０８〜０．１２％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、４〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．２〜０．３％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロースナトリウム及び８〜１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。実施形態では、製剤は、５．５〜７．５のｐＨ、例えば５．５〜６．５のｐＨを有する。
投与
一部の実施形態では、本明細書で特徴付けた製剤、例えばキメラＩＬ−１阻害剤などの治療用タンパク質を含有する製剤若しくはビヒクル製剤は、患者、例えばヒト若しくは他の哺乳動物、例えばイヌ、ネコ、若しくはウマなどに局所投与される、及び例えば眼に投与される。一般に、本明細書に記載した製剤は、被験者に、任意の適切な方法、例えばボーラスとしての静脈内投与若しくは長期間にわたる持続注入によって、筋肉内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、滑液包内、経気管、皮下、表皮下、関節腔内、皮膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外注射、胸骨内注射及び注入によって投与することができる。その他の適切な投与様式には、局所（例えば、皮膚若しくは粘膜）又は吸入（例えば、鼻腔内若しくは肺内）経路が含まれる。所定の用途のためには、投与経路は、静脈内注射若しくは注入、皮下注射又は筋肉内注射の内の１つである。眼に投与するために、一部の実施形態では、本明細書で特徴付けた製剤（例えば、本明細書に記載したキメラサイトカイン製剤）のための投与様式は、例えば滴剤の形態での眼への局所投与である。製剤を含有することのできる、及び／又は製剤を投与するために使用できるデバイスの例には、単純なアイドロッパー、計量機能を備える、若しくは備えないスクイーズボトル及び例えばＣａｔａｌｅｎｔ社（ニュージャージー州サマセット）によって製造されるデバイスのようなブローフィルシール（ＢＦＳ）デバイス、例えばチップ・シールテクノロジー、銀／微量作用テクノロジー、無菌フィルター、圧潰型一次容器などを使用する複数回使用容器が含まれる。
製剤についての又別の検討事項は、送達デバイス若しくは容器への粘着を最小限に抑えることである。例えば、界面活性剤、例えばポロキサマー１８８の添加は、Ｐ０５の容器への粘着を最小限に抑えることができる。
容器についての追加の考察は、容器が充填されると許容される保管寿命を提供する、例えば蒸発が許容される低レベルである、及び／又は製剤が遊離アッセイ仕様、例えば本明細書に記載した仕様を満たすことである。実施形態では、容器は、例えば５℃で少なくとも２年間、例えば少なくとも３年間、少なくとも４年間又は少なくとも５年間の保管寿命を提供するために適合する。実施形態では、容器は、５℃で少なくとも３年間の保管寿命を提供するために適合する。実施形態では、容器は、ＲＴで少なくとも２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、８カ月間、１０カ月間又は１２カ月間の保管寿命を提供するために適合する。実施形態では、容器は、ＲＴで少なくとも５カ月間の保管寿命を提供するために適合する。様々な適切な容器材料は、当分野において公知であり、例えば所定のプラスチック、例えば低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）若しくはポリプロピレンである。
製剤は、容器内での単回使用用途のために調製できる、又は複数回使用容器で使用するために調製できる。
本明細書で特徴付けた製剤は、例えば眼の後区に関連する障害を治療するために、硝子体内に送達することができる。硝子体内投与の方法は当分野において公知であり、例えば、眼内注射、埋込型デバイスが含まれる。
実施形態では、製剤は、埋込型デバイスを使用して硝子体内に投与される。実施形態では、製剤は、熱安定剤、例えばソルビトールを含む。実施形態では、ソルビトールは≧５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。
埋込型デバイスは、例えば、非生分解性デバイス、例えばポリビニルアルコール−エチレンビニルアセテートポリマー及びポリスルホンキャピラリー繊維、生分解性デバイス、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸及びポリ乳酸−ｃｏ−グリコール酸、ポリカプロラクトン及びポリ無水物であってよい。デバイスは、例えばナノ粒子、リポソーム若しくはミクロスフェアなどの形態で送達することができる。
本発明において特徴付けた製剤は、固定用量、体重決定用量（例えば、ｍｇ／ｋｇ）又は年齢決定用量として投与できる。製剤、例えばビヒクル製剤若しくは治療用製剤（例えば治療用タンパク質などの治療薬を含む製剤）は、例えば、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、隔日１回、３日毎に１回、４日若しくは５日毎に１回、毎週、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、１カ月１回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、６カ月に１回又は必要に応じて（随意に）投与することができる。
実施形態では、製剤は、１日に１回、２回又は３回投与される。一部のそのような実施形態では、製剤は、例えば眼の表面に局所投与される。医薬組成物は、「治療有効量」の本明細書に記載した作用物質を含むことができる。作用物質の治療有効量は、例えば個体の疾患状態、年齢、性別及び体重などの因子、並びに化合物が個体における所望の応答、例えば少なくとも１つの障害パラメーター（例えば、徴候）の緩和、又は疾患の少なくとも１つの症状（及び投与される任意の追加の作用物質の作用であってよい）の緩和を引き出す能力によって変動する可能性がある。治療有効量は、さらに治療的に有益な作用が組成物の何らかの毒性若しくは有害作用を勝る量でもある。一部の実施形態では、「治療有効量」は、個体の集団内で決定され、その量は、サイトカイン関連障害、例えばＩＬ−１関連障害の少なくとも１つの症状若しくは徴候を罹患した集団の少なくとも５％、１０％、２５％、５０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは１００％において緩和することに効果的である。製剤は、典型的には治療有効量で投与される。一部の場合には、治療有効製剤は、ビヒクル製剤である。一部の場合には、治療有効製剤は、治療用タンパク質を含む。
一部の実施形態では、製剤は、ＩＬ−１関連障害を有する被験者に投与され、キメラサイトカインポリペプチドはＩＬ−１β及びＩＬ−１Ｒａ配列のフラグメントを含む。そのような製剤は、例えば、５ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ若しくは２０ｍｇ／ｍＬのポリペプチドを含有する。実施形態では、製剤は、眼に１日１回、２回、３回、４回、５回若しくは６回局所投与される。医薬組成物は、本明細書に記載した、及び当分野において公知の医療デバイス、例えばインプラント、注入ポンプ、皮下針及び無針皮下注射デバイスを使用して投与できる。デバイスは、例えば、医薬組成物を保管するための１つ以上のハウジングを含むことができ、キメラサイトカインポリペプチド及び任意選択的に第２作用物質の単位用量を送達するために構成することができる。用量は、固定用量、つまり治療対象の被験者のための単一用量として適する物理的に別個の単位であってよく、各単位は医薬担体に関連する、及び任意選択的に他の作用物質、例えばＲｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）又は、例えば店頭薬若しくは処方製品として入手できる人工涙と関連する所望の治療作用を生成するために計算された規定量のキメラサイトカインポリペプチドを含有することができる。
一部の実施形態では、本明細書で記載した障害、例えばＩＬ−１関連障害を治療するために、製剤はその障害を有する被験者に、その障害の少なくとも１つの徴候若しくは症状における持続性改善を誘導するために十分な量及び時間にわたり投与される。改善は、被験者が例えば１〜４週間空いた少なくとも２回の時点に長期間にわたる改善を示す場合は「持続性」と見なされる。改善度は、徴候若しくは症状に基づいて決定することができ、さらに例えばクオリティ・オブ・ライフ質問票などの被験者に与えられる質問票も使用することができる。１つの非限定的実施例では、キメラサイトカインポリペプチドは、ＩＬ−１β及びＩＬ−１Ｒａのフラグメントを含み、少なくとも週１回、例えば少なくとも１日１回、少なくとも１日２回又は少なくとも１日３回局所投与される。
改善は、被験者が選択された徴候及び／又は症状についてのベースラインに比した改善を発現するまで、１用量の製剤を繰り返し投与することによって誘導できる。慢性状態を治療する際には、改善の量は、少なくとも１カ月間以上、例えば１カ月間、２カ月間若しくは３カ月間以上、又は無期限の期間にわたる繰り返し投与によって評価することができる。急性状態を治療する際には、作用物質は、１〜６週間の期間にわたり、又は単回投与としてさえ投与することができる。
初回若しくは間欠的治療後の障害の程度は１つ以上の徴候若しくは症状によると改善したように見える可能性があるが、治療は同一レベルで、又は用量若しくは頻度を減らして無期限に継続することができる。治療は、さらに又徴候若しくは症状の改善又は消失時中止することもできる。治療がいったん減少若しくは中止されても、症状が再出現したら再開することができる。
治療
本明細書で特徴付けた一部の製剤は、治療用タンパク質を含む。実施形態では、製剤は、例えばＩＬ−１Ｒに結合することができ、及びＩＬ−１シグナル伝達に拮抗できる、このため、（ｉ）少なくとも一部にはＩＬ−１作動性によって誘発される、（ｉｉ）ＩＬ−１シグナル伝達成分（例えばＩＬ−１α、ＩＬ−１β若しくはＩＬ−１ＲＩ）の上昇したレベル若しくは活性又は上昇したＩＬ−１シグナル伝達と関連する、及び／又は（ｉｉｉ）ＩＬ−１活性を低下させることによって緩和される何らかの疾患若しくは医学的状態を含む、「ＩＬ−１関連障害」を治療するために使用できるようなキメラ受容体結合剤（例えば、キメラサイトカイン）を含む。ＩＬ−１関連障害には、自己免疫障害及び炎症性障害を含む、急性及び慢性障害が含まれる。ＩＬ−１関連障害には、全身性及び非全身性障害が含まれる。ＩＬ−１α及びＩＬ−１βは感染性応答並びに例えば関節リウマチを含む炎症性疾患に関係する強力な前炎症性サイトカインであることは明確に確定されている。増加したＩＬ−１産生は、所定の自己免疫障害、虚血症及び様々な癌を有する患者において観察されており、このため、ＩＬ−１をこれらの疾患や関連疾患に関係付けている（例えば、Ｓｉｍｓ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１０：８９−１０２（２０１０）を参照されたい）。
本明細書で使用する用語「治療する」は、本明細書に記載した作用物質の被験者、例えば患者への、統計学的に有意な程度まで、又は当業者であれば検出できる程度まで、障害、例えば本明細書に記載した障害に関連する状態、症状若しくはパラメーターを改善するために、又は疾患の発生若しくは進行を予防するために有効な量、方法及び／又は様式での投与を意味する。治療は、障害、障害の症状又は障害に向かう素因を回復させる、治癒させる、緩和する、軽減する、変化させる、救済する、改良する、和らげる、改善する、又は影響を及ぼすことであってよい。有効な量、方法又は様式は、被験者に依存して変動してよく、及び被験者に合わせて作成できる。代表的な被験者には、ヒト、霊長類及び他の非ヒト哺乳動物が含まれる。本発明において特徴付けた製剤は、障害又はその症状若しくは徴候が発生する危険性を減少させるために予防的に与えることもできる。
ＩＬ−１関連障害は、自己免疫障害であってよい。ＩＬ−１関連性自己免疫障害には、関節リウマチ、強直性脊椎炎、ベーチェット症候群、炎症性腸疾患（クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む）、喘息、乾癬、Ｉ型糖尿病、座瘡の一部の形態及び本明細書に同定した他の障害が含まれる。本明細書に記載した製剤は、そのようなＩＬ−１媒介性自己免疫障害を有する、又はその恐れがある被験者に投与することができる。ＩＬ−１媒介性障害は、例えば下記に記載するような炎症性障害であってよい。本明細書に記載した製剤は、そのようなＩＬ−１媒介性自己免疫障害を有する、又はその恐れがある被験者に投与することができる。
本発明において特徴付けた製剤は、眼障害、例えば眼にキメラサイトカイン受容体を直接的に、又は眼の領域に局所的に投与するのが所望である眼障害において使用するために特に適する。代表的なＩＬ−１関連性眼障害には、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連する乾性角結膜炎）、乾性角結膜炎（シェーグレン関連性若しくは非シェーグレン関連性）を含むドライアイ障害、乾性角膜炎、乾燥症候群、眼球乾燥症、涙液膜障害、涙液産生の減少、涙液減少症、対宿主性移植片疾患に関連するドライアイ及びマイボーム腺機能不全症が含まれる。ドライアイ障害を有する被験者は眼の炎症を示す可能性があり、チクチク感、イライラ感、痒み、ヒリヒリ感若しくは圧感、刺激、疼痛及び充血を経験する可能性がある。ドライアイ障害は、過度の流涙及び不十分な涙液産生と関連する可能性がある。本発明において特徴付けた製剤は、１つ以上のそのような症状の発生又は悪化を緩和若しくは予防するためにそのような被験者に投与することができる。本発明において特徴付けた製剤はさらに又、被験者における疼痛、例えば眼痛、例えば神経炎症に起因する疼痛を緩和するためにも使用できる。
本明細書に記載した実施形態には、ＩＬ−１関連障害、例えばドライアイ障害を有する動物を治療する方法が含まれる。ドライアイは、例えば、イヌにおいては重篤な障害の場合がある。ドライアイに関連するイヌにおける障害の非限定的例には、先天性障害、感染症（例えば、イヌジステンパーウイルス）、薬物誘導（例えば、サルファ系抗生物質による）及び第三眼瞼涙腺の切除（「チェリーアイ」）が含まれる。ドライアイ障害は、さらに所定の犬種、例えばコッカースパニエル、シーズー、ラサアプソ、ブルドッグ、シュナウツァー及びウェストハイランドホワイトテリアにおいても一般に見られる。治療できる動物の他の非限定的例には、ネコ及びウマが含まれる。
本明細書で特徴付けた製剤は、さらに又眼の表面、例えば角膜を侵す他の障害を治療するためにも使用できる。そのような障害には、角膜眼表面の炎症性状態、角膜血管新生、末梢性潰瘍性角膜炎及び細菌性角膜炎を含む角膜炎が含まれる。製剤は、角膜創治癒を経験している被験者（例えば、角膜創を有する被験者）を治療するために使用できる。製剤は、眼を含む手技、例えば角膜移植／角膜形成術、人工角膜移植手術、層状移植術、選択的内皮移植術を受けようとしている、受けている、又はそれらから回復中の被験者に投与することができる。例えば、Ｄａｎａ（２００７）Ｔｒａｎｓ Ａｍ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｓｏｃ １０５：３３０−４３；Ｄｅｋａｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｃｕｒｒ Ｅｙｅ Ｒｅｓ １９（５）：４５６−９；及びＤａｎａ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６３：１５０１−７を参照されたい。
製剤は、結膜瘢痕形成障害及び結膜炎、例えばアレルギー性結膜炎、例えば重症アレルギー性結膜炎を含む結膜を侵す障害を治療するために使用できる。製剤は、さらに他の障害、例えば類天疱瘡症候群及びスティーブンス・ジョンソン症候群などを治療するために使用できる。本発明において特徴付けた製剤は、眼中又は眼の周囲における血管新生を調節するために被験者に投与できる。例えば、Ｄａｎａ（２００７）Ｔｒａｎｓ Ａｍ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｓｏｃ １０５：３３０−４３を参照されたい。
本発明の製剤は、眼を侵すアレルギー性反応を有する被験者、例えば重症アレルギー性（アトピー性）眼疾患、例えばアレルギー性結膜炎に悩んでいる被験者に投与することができる。例えば、製剤は、局所投与することができる。例えば、さらにＫｅａｎｅ−Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，４０（１２）：３０４１−６を参照されたい。
本発明において特徴付けた製剤は、眼を侵す自己免疫障害を有する被験者に投与することができる。代表的な自己免疫眼障害には、交感性眼炎、フォークト・小柳・原田（ＶＫＨ）症候群、バードショット脈絡網膜症、眼瘢痕性類天疱瘡、フックス虹彩毛様体炎及び様々な形態のブドウ膜炎が含まれる。製剤は、被験者に上記の障害のいずれかを治療するために投与できる。
本発明において特徴付けた製剤は、糖尿病性網膜症を有する、又はその恐れがある被験者に投与することができる。例えば、Ｄｅｍｉｒｃａｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｅｙｅ ２０：１３６６−１３６９及びＤｏｇａｎａｙ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｅｙｅ，１６：１６３−１７０を参照されたい。
ブドウ膜炎。ブドウ膜炎には急性及び慢性形態が含まれ、虹彩、毛様体及び脈絡膜の内の１つ以上の炎症を含む。慢性形態は全身性自己免疫疾患、例えば、ベーチェット症候群、強直性脊椎炎、若年性関節リウマチ、ライター症候群及び炎症性腸疾患と関連する可能性がある。前部ブドウ膜炎では、炎症は主として虹彩内である（さらに虹彩炎）。前部ブドウ膜炎は、全身性自己免疫疾患を有する被験者を侵す可能性があるが、さらに全身性自己免疫疾患を有していない被験者も侵すことがある。中間部ブドウ膜炎は、前部硝子体、周辺網膜及び毛様体の炎症を含んでおり、わずかな前部若しくは脈絡網膜炎症を伴うことが多い。扁平部炎（Ｐａｎ ｐｌａｎｉｔｉｓ）は、虹彩と脈絡膜との間の毛様体扁平部の炎症の結果として生じる。後部ブドウ膜炎は、眼球血管膜及び主として脈絡膜に関係し、脈絡膜炎とも呼ばれる。後部ブドウ膜炎は、全身性感染症又は自己免疫疾患と関連する可能性がある。後部ブドウ膜炎は、数カ月間及び数年間さえ持続することがある。本発明において特徴付けた製剤は、被験者に上記の形態のブドウ膜炎のいずれかを治療するために投与できる。さらに、例えばＴｓａｉ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｍｏｌ Ｖｉｓ １５：１５４２−１５５２及びＴｒｉｔｔｉｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１５（２２）：１４７８−８８を参照されたい。
一部の実施形態では、本発明において特徴付けた製剤は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を有する、又はその恐れがある被験者を治療するために使用される。製剤は、眼に局所的に、注射して（例えば、硝子体内）又は全身性で提供することで投与できる。例えば、Ｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｏｃｕｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｎｆｌａｍｍ １７（３）：１９５−２００を参照されたい。
本明細書に記載した製剤は、眼疾患を治療するためにいずれかの様式によって投与できる。作用物質は、非経口様式で送達できる。又は、若しくは追加して、製剤は眼に直接的に、又は眼の近傍に送達することができる。例えば、製剤は、例えば本明細書に記載したように、局所的若しくは眼内に投与することができる。
眼送達のための製剤及び方法
本発明において特徴付けた眼科用製剤は、局所投与のために、例えば点眼液、軟膏剤若しくはゲル剤として投与するため、又は例えば眼の前房若しくは結膜嚢内に埋め込むために送達することができる。滴剤、例えば点眼液は、アイドロッパーを使用して送達できる。ゲル剤及び軟膏剤も又ドロッパーを使用して投与できる。眼送達のために調製された場合、活性物質（例えば、キメラサイトカインタンパク質若しくは受容体結合剤）は、０．０００１％〜０．１％、０．００１％〜５％、例えば、０．００５％〜０．５％、０．０５％〜０．５％、０．０１％〜５％、０．１％〜２％若しくは１％〜５％の濃度で存在してよい。一部の実施形態では、濃度は、例えばＰ０５の２％である。他の実施形態では、濃度は、例えばＰ０５の０．５％である。
一部の実施形態では、受容体結合剤、例えばＰ０５は、例えば上述したようにｍｇ／ｍＬベースで調製される。例えば、活性物質、例えば受容体結合剤は、ＩＬ−１阻害剤であり、１〜５０ｍｇ／ｍＬ、１〜２５ｍｇ／ｍＬ、１〜２０ｍｇ／ｍＬ、１〜１０ｍｇ／ｍＬ、２〜８ｍｇ／ｍＬ、３〜７ｍｇ／ｍＬ若しくは４〜６ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。実施形態では、活性物質は、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ若しくは５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。実施形態では、活性物質、例えばＩＬ−１阻害剤は、１００ｍｇ／ｍＬまでの濃度で存在する。
典型的には、眼科用製剤は、角膜上、眼瞼上、又は眼球と眼瞼の間の空間（盲嚢）内への滴注を含めて眼に直接的に投与される。眼科用製剤は、涙液と容易に混合し、角膜及び結膜の表面全体に塗り広げるために設計することができる。通常の投与技術を用いて、薬物の主要部分は、典型的には下円蓋部内に沈積される。毛管現象、拡散力及び瞬目反射は前角膜から角膜内に浸透して通過する前角膜内への薬物の組み込みを駆動する。
本発明において特徴付けた眼科用製剤は、さらに１つ以上の他の作用物質、例えば抗炎症性ステロイド剤、例えばリメキソロン、ロテプレドノール、メドリゾン及びヒドロコルチゾン又は非ステロイド性抗炎症薬を含むことができる。例えば、ステロイド剤は、０．００１％〜１％の濃度で存在することができる。一部の実施形態では、ステロイド剤は存在しない。例えば、受容体結合剤は、製剤中の唯一の活性物質である。
製剤は、さらに又本明細書に記載した下記の成分の界面活性剤、等張化剤、バッファー、保存料、共溶媒及び粘度形成剤の内の１つ以上をさらに含むことができる。等張化剤は、組成物の張性を例えば自然涙の張性に調整するために使用できる。等張化剤、特に糖は、さらに又熱安定剤としても機能できる。実施形態では、適切な張性、例えば生理学的張性を実現するために、塩化カリウム、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、デキストロース及び／又はマンニトールが添加されてよい。等張化剤は、本明細書に記載した適切なオスモル濃度を提供するために十分な量で加えることができる。実施形態では、等張化剤は、約１５０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ若しくは２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を提供するために加えられる。実施形態では、等張化剤は、眼内で等張性であるオスモル濃度を提供するために加えられる。実施形態では、等張化剤、例えばソルビトールは、２７０〜３３０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を提供するために加えられる。
製剤は、さらに又眼科用送達のために、及び本明細書に記載したように適合する緩衝も含むことができる。バッファーは、ｐＨにおける変化にとって、１つ以上の緩衝成分、例えばクエン酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、ホウ酸、コハク酸塩、酢酸塩又はそれらの医薬上許容される塩（例えば、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム若しくは酢酸ナトリウム）を含むことができる。緩衝成分は、特に保管条件下で、例えば製剤が長期保管される場合に使用できる。例えば、バッファーは、ｐＨ５．５〜６．５、ｐＨ５．５〜６．０、ｐＨ６．０〜７．５若しくはｐＨ６．５〜７．５の範囲内の標的ｐＨを提供するために選択できる。典型的には、緩衝剤は弱緩衝剤であるが、このとき緩衝成分の濃度は２０ｍＭ未満である。実施形態では、緩衝成分の濃度は、約５〜２０ｍＭ、例えば、５〜１５ｍＭ、例えば５〜１０ｍＭである。
治療用タンパク質を含む製剤は、水性若しくはリン脂質担体を含むことができる。特にドライアイ障害を治療するためには、製剤は、短期緩和を提供するための作用物質、例えば眼を潤滑して涙形成に役立つ化合物を含むことができる。例えば、リン脂質担体（１つ以上のリン脂質を含む）は、短期緩和を提供するために使用できる。人工涙組成物担体として有用な例若しくは人工涙組成物には、市販製品、例えばＴｅａｒｓ Ｎａｔｕｒａｌｅ（登録商標）（Ａｌｃｏｎ Ｌａｂｓ社、米国テキサス州）が含まれる。例えば、製剤は、１ｍＬ当たり１ｍｇのデキストラン、７０及び３ｍｇのヒドロキシプロピルメチルセルロースを含むことができ、さらに例えばＰＯＬＹＱＵＡＤ（登録商標）（ポリクオタニウム−１）０．００１％（ｍ／ｖ）などの保存料を含んでいてもよい。リン脂質担体製剤の例には、米国特許第４８０４５３９号明細書、同第４８８３６５８号明細書、同第５０７５１０４号明細書、同第５２７８１５１号明細書及び同第５５７８５８６号明細書に開示されたリン脂質担体製剤が含まれる。
製剤は、さらに潤滑剤若しくは湿潤剤として作用する他の化合物も含むことができる。これらには、例えばモノマーポリオール類、例えばグリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール；ポリマーポリオール類、例えばポリエチレングリコール、セルロースファミリーの様々なポリマー類；ヒドロキシプロピルメチルセルロース（「ＨＰＭＣ」）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース（「ＨＰＣ」）、デキストラン類、例えばデキストラン７０；水溶性タンパク質類、例えばゼラチン；及びビニルポリマー類、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン及びカルボマー類、例えばカルボマー９３４Ｐ、カルボマー９４１、カルボマー９４０、カルボマー９７４Ｐなどの増粘剤が含まれる。さらに追加の例には、多糖類、例えばヒアルロン酸及びその塩、硫酸コンドロイチン及びその塩並びにアクリル酸ポリマーが含まれる。所定の実施形態では、製剤は、１ｃＰ〜４００ｃＰの粘度を有する。
製剤、例えばビヒクル製剤は、単回使用又は複数回使用のために、例えば関連ドロッパーを備えるボトル内若しくは１組の単回使用ドロッパーとして包装することができる。
製剤は、例えば使用中の細菌汚染及び真菌汚染を防止するために１つ以上の保存料及び／又は例えばタンパク質を可溶化するために１つ以上の洗剤若しくは界面活性剤を含むことができる。代表的な保存料には、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、臭化ベンゾドデシニウム、メチルパラベルン、プロピルパラベン、フェニルエチルアルコール、エデト酸二ナトリウム、ソルビン酸及びポリクオタニウム−１が含まれ、０．００１％（ｗ／ｖ）〜１．０％（ｗ／ｖ）の濃度で含むことができる。典型的には、本明細書に記載した治療用タンパク質を含有する製剤は、無菌であるが、それでも保存料を含んでいない。
代表的な洗剤／界面活性剤には、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）、例えばＦ−６８；Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）界面活性剤、例えばＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、ポリソルベート類、例えばＴｗｅｅｎ−２０及びＴｗｅｅｎ−８０、Ｅｌｕｇｅｎｔ（商標）及びＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ポリエトキシ化ヒマシ油並びにチロキサポール、オクトキシノール４０及びポリオキシル４０ステアレートが含まれる。
一般に、洗剤及び／又は界面活性剤は、０．００１％（ｗ／ｖ）〜１．０％（ｗ／ｖ）の濃度で含むことができる。一部の態様では、製剤は洗剤を含んでいない。
眼科用パックは、眼科用製剤と眼との長期の接触を生じさせるために使用されてよい。綿撤糸が製剤で飽和させられ、次に上円蓋若しくは下円蓋内に挿入される。製剤は、さらに又イオントフォレーシスによって投与されてもよい。この方法は電極を担持する洗眼用カップ内で液剤と角膜との接触を保持する。薬物の拡散は、電位差によって実施される。使用されてきたイオントフォレーシスシステムには、Ｏｃｕｐｈｏｒ（登録商標）１（Ｉｏｍｅｄ社、米国）、Ｅｙｅｇａｔｅ（登録商標）ＩＩ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ１（ＥｙｅＧａｔｅ Ｐｈａｒｍａ社、米国）、及びＶｉｓｕｌｅｘ（登録商標）１（Ａｃｉｏｎｔ社、米国）が含まれる。Ａｍｏ ａｎｄ Ｕｒｔｔｉ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ，１３：１４３（２００８）を参照されたい。
持続性眼送達のための又別の戦略は、ゲル化剤の使用である。これらの材料は、液体形で、点眼剤又は眼内注射として送達できる。滴下後、ポリマーは相転移を経験し、長期間にわたり薬物を放出する半固体若しくは固体マトリックスを形成する。相転移は、温度、イオン濃度又はｐＨの変化によって誘導できる。
局所的眼使用のためには、ゲル形成溶液、例えばＧｅｌｒｉｔｅ（登録商標）（ゼラチンガムからの精製アニオン性ヘテロ多糖）を含有するＴｉｍｏｐｔｉｃ（登録商標）−ＸＥ１（Ｍｅｒｃｋ社、米国）、ポリ（アクリル酸）を含有するＰｉｌｏｇｅｌ（登録商標）１（Ａｌｃｏｎ社、スイス国）点眼液及びＡｚａｓｉｔｅ（登録商標）１（Ｉｎｓｉｔｅ Ｖｉｓｉｏｎ社、米国）が臨床試験を受けてきた。これらの材料は、従来型点眼液に比較して薬物滞留性を強化し、眼内への薬物吸収の増加及び投与頻度の減少を導く。Ａｍｏ ａｎｄ Ｕｒｔｔｉ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ，１３：１３５−１４３（２００８）を参照されたい。
本発明において特徴付けた製剤は、注射によって、例えば硝子体内、眼周囲又は結膜下注射によって送達できる。製剤は、結膜下へ注射して、単純な拡散による胸膜を通って眼内への通過を促進することができる。製剤はさらに、作用物質を毛様体、脈絡膜及び網膜へ送達するために結膜下及び眼のより後方部分における下にあるテノン嚢に注射することができる。製剤は、さらに又球後注射によって投与されてもよい。
実施形態では、本明細書に記載した製剤は硝子体内投与される。実施形態では、製剤はＣＭＣを含んでいない。
評価
ドライアイ及び他の表面疾患に関して、被験者は、当分野において公知のアプローチ、例えば前眼部障害指数（ＯＳＤＩ）、角膜及び結膜染色並びにシルマー試験の内の１つ以上を使用して評価できる。ＯＳＤＩを使用する場合、ベースラインからの負の変化は視覚関連機能及び眼炎症性障害の改善を示す。
角膜のフルオレセイン染色については、食塩水に浸したフルオレセインストリップ若しくは１％フルオレセインナトリウム溶液を使用して涙液膜を染色する。典型的には、次に角膜全体は、黄色バリアーフィルター（＃１２ Ｗｒａｔｔｅｎ）及びコバルトブルー照明を用いて細隙灯顕微鏡検査を使用して試験する。染色は、例えばＮＥＩスケール、Ｏｘｆｏｒｄスキーム又は変法Ｏｘｆｏｒｄスキームにしたがって等級付けできる。典型的には、染色は、角膜が５つの区画（中心円形区画及び下側、上側、鼻側及び側頭側四分円と呼ばれる、中心角膜区画を取り囲む４つの四分円）に分割され、その１つ１つが最大可能スコア１５を生じさせるために点状染色について０〜３でスコア付けされる１５ポイントスケールであるＮＥＩスケールにしたがって等級付けされる。
結膜染色は、同様に上皮疾患又は眼表面の上皮障壁における破損の尺度である。結膜染色は、リサミングリーンを使用して細隙灯下で実施する。食塩液に浸したストリップ若しくは１％のリサミングリーン溶液を使用して涙液膜を染色し、眼瞼間結膜染色を３０秒間より後だが２分間未満に評価する。中強度の白色灯を使用して、鼻側及び側頭側結膜染色の眼瞼間領域だけを、例えばＯｘｆｏｒｄスキームを使用して等級付けする。
シルマー（Ｓｃｈｉｒｍｅｒ）試験は、下盲嚢内に細い濾紙片（＃４１ Ｗｈａｔｍａｎ濾紙の５×３５ｍｍ片）を配置することによって麻酔の存在下又は非存在下で実施する。この試験は、薄暗い室内で実施する。患者は、５分間が経過するまで静かに目を閉じ、濾紙片を取り外す。涙液最前部は眼から取り除かれた後も数ｍｍ前進し続けるので、５分後に涙液最前部を正確にボールペンでマーキングする。涙液産生は、濾紙片が５分間に湿潤する長さ（ｍｍ）で測定する。麻酔薬を使用しないシルマー試験についての１０ｍｍ以下の結果及び麻酔薬を使用したシルマー試験についての５ｍｍ以下の結果を異常と見なす。ベースラインからの正の変化は、本明細書に記載した眼炎症性障害の内の１つ以上の症状の改善を示す。
ドライアイ疾患のモデル。本発明において特徴付けた製剤の有効性は、ドライアイ疾患についてのマウスモデルにおいて評価できる。ドライアイは、マウスにおいてはスコポラミンとの皮下注射及び次にマウスを環境制御チャンバーに配置することによって誘導できる。特定の例として、正常な健常６〜１０週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、環境制御チャンバー内での乾燥環境への持続的曝露によってドライアイを有するように誘導できる。このチャンバーは、３０％未満（一般には約１９％）の低相対湿度、高速気流（１５Ｌ／分）及び一定温度（約２２℃）を有する。チャンバー内に配置されたマウスはさらに涙分泌を抑制するためにスコポラミンで処置する。持続放出性経皮スコポラミンパッチは、Ｎｏｖａｒｔｉｓ社（ニュージャージー州サミット）から入手できる。１枚のパッチの４分の１を４８時間毎にマウスの脱毛した尾中央部に貼付する。環境制御チャンバーとスコポラミンの組み合わせは、相当に短期間（約２〜４日間）で重度のドライアイを生じさせる。環境制御チャンバーは、Ｂａｒｂｉｎｏ ｅｔ ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，４６：２７６６−２７１１（２００５））に記載されたように準備することができ、気流、湿度及び温度の制御を可能にする。
マウスは、ドライアイの徴候について、例えば、ａ）一般にドライアイの患者では低下する涙液産生を測定するための綿糸試験、ｂ）角膜表面損傷のマーカーである角膜フルオレセイン染色、及び一般眼科検査を実施することによって監視できる。
綿糸試験：涙液産生は、フェノールレッド（Ｚｏｎｅ−Ｑｕｉｃｋ、Ｌａｃｒｉｍｅｄｉｃｓ社、ワシントン州イーストサウンド）を含浸させた綿糸試験を用いて測定できる。拡大蛍光灯下で、糸を宝石鉗子を用いて保持し、右目の結膜円蓋の外眼角（ｌａｔｅｒａｌ ｃａｎｔｕｓ）内に３０若しくは６０秒間配置する。涙の距離（ｍｍ）は、顕微鏡下で血球計のスケールを使用して読み取る。
角膜フルオレセイン染色：角膜フルオレセイン染色は、１．０ｍＬの５％フルオレセインをマイクロピペットによって眼の下結膜嚢内に滴下することによって評価できる。角膜は、細隙灯生体顕微鏡を用いてフルオレセイン点眼の３分後にコバルトブルー光を使用して試験する。点状染色は、遮蔽法で、角膜表面が分割されている５つの領域各々について０〜３の標準化ＮＥＩ（国立眼科学研究所）スコアリングシステムを使用して記録する。
同等物
全ての技術的特徴は、そのような特徴のあらゆる可能な組み合わせで個別に組み合わせることができる。
本発明は、本発明の精神又はその本質的特徴から逸脱せずに他の特定形態で実施されてよい。このため上記の実施形態は本明細書に記載した本発明を限定するよりむしろあらゆる点で例示的であると見なすべきである。
本明細書に言及した全ての参考文献の全内容は、これにより全体として組み込まれる。
以下の非限定的実施例は、本明細書に記載した本発明の実施形態をさらに例示する。
［実施例］
［実施例１］
治療用タンパク質、例えばキメラタンパク質の実施例
表１（下記）に列挙したアミノ酸配列を備えるタンパク質をコードする核酸は、Ｔ７プロモーター及びアンピシリン（ｐＥＴ３１シリーズ）若しくはカナマイシン耐性遺伝子（ｐＥＴ２８シリーズ）（ＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社、米国ニュージャージー州ギブスタウン）を含有するｐＥＴベクター内で構築し、発現させた。発現のために使用できるコーディング配列の実施例は表２に提供した。
Figure 0006450364
上記のタンパク質をコードする代表的な核酸配列は表２に列挙した。一部の実施形態では、核酸配列は、下記に列挙した第１ヌクレオチドの前にＡＴＧをさらに含む。一部の実施形態では、核酸配列は、下記に列挙した最終ヌクレオチドの後に終止コドン（例えばＴＡＡ、ＴＡＧ若しくはＴＧＡなど）をさらに含む。
Figure 0006450364
Figure 0006450364
Figure 0006450364
これらのタンパク質は、下記に例示したＩＬ−１β及びＩＬ−１Ｒａからのある範囲の様々な残基を含む可能性がある。Ｐ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４及びＰ０５の実施例では共通して、サイトカインドメインは、ＩＬ−１βからの４８〜７０％の残基及びＩＬ−１Ｒａからの５５〜７８％の残基を有することができる。これら２種のタンパク質間で多数のアミノ酸残基が保存されているので、ＩＬ−１β及びＩＬ−１Ｒａとの同一性率（％）の合計は１００％を超える可能性がある。
Figure 0006450364
治療用タンパク質の他の実施例には、ＩＬ−１Ｒａ（例えば、アナキンラ）、カナキヌマブ、ゲボキズマブ、リロナセプト（ｒｉｌａｎａｃｅｐｔ）若しくは抗ＩＬ−１Ｒ抗体（例えば、Ａｍｇｅｎ社によって製造された）が含まれる。
［実施例２］
キメラタンパク質の発現及び精製
ヘキサ−ヒスチジンタグ（配列番号２３）を含有するタンパク質は、３７℃のＬＢブロス培地中での３時間にわたる１ｍＭのイソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を用いた誘導により大腸菌細胞ＢＬ２１（ＤＥＳ）菌株中で発現させた。細胞は、２０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ、０．５ＭのＮａＣｌ、２．５ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、ｐＨ８．０中に溶解させた。溶解物は、０．１％のポリソルベート８０を含有する１．２５×ＰＢＳに対して透析し、次に０．８／０．２μｍフィルターに通して滅菌ろ過し、その後にＨｉｓＴｒａｐ ＨＰ（登録商標）プレパックカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、米国ニュージャージー州ピスカタウェイ）を使用して固定化イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）にかけた。カラムを５０ｍＭのリン酸塩中で平衡化させ、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．１を装填し、同一バッファーを用いて洗浄した。カラムは、２５ｍＭのイミダゾールを用いて前溶出し、同一バッファー中の１２５ｍＭのイミダゾールを用いて溶出させた。溶出タンパク質を１．２５×ＰＢＳ、０．１％のポリソルベート８０、ｐＨ７．４に対して広範に透析した。
タンパク質は、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、０．５ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ７．４バッファー中に装填した。タンパク質は、２００ｍＭのイミダゾール、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、０．５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４バッファーを用いて溶出した。溶出タンパク質は、ＰＢＳ、０．１％のポリソルベート８０、ｐＨ７．４に対して広範に透析し、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ（登録商標）（１０Ｋ）フィルターを用いて濃縮し、４℃若しくは−８０℃で保管した。
ヘキサ−ヒスチジンタグ（配列番号２３）が欠如するタンパク質は、イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。Ｐ０５タンパク質は、イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。発現細胞からの溶解物は、塩の非存在下（およそ１ｍＳ／ｃｍの導電率）の低ｐＨ（およそｐＨ５．５）でＧｉｇａＣａｐＳ（商標）カラム（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＬＬＣ社、米国ペンシルベニア州キングオブプロシア）に適用した。カラムは次にｐＨ勾配（バッファーＡ＝１０ｍＭの酢酸、ｐＨ５．５；バッファーＢ＝２０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８）によって溶出した。溶出タンパク質を含有する５ｍＬの画分を次に５ｍＬのＨ２Ｏ及び５ｍＬの２０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８）を用いて希釈し、次にＣａｐｔｏ（商標）Ｑ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、米国ニュージャージー州ピスカタウェイ）に適用し、２０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０中で０ｍＭ〜２５０ｍＭのＮａＣｌ勾配を用いて溶出させた。溶出タンパク質は、０．１％のＴＷＥＥＮ（登録商標）８０を含む１．２５×ＰＢＳ若しくはＴＷＥＥＮ（登録商標）を含まない１．２５×ＰＢＳに対して広範に透析し、保管した。図１を参照されたい。Ｐ０３及びＰ０４タンパク質は、類似の方法を使用して精製した。
Ｐ０５を発現する細胞は、さらに１０ｇ／Ｌのグルコース、１０ｍＭのＭｇＳＯ４、微量元素（１ｍｇ／ｍＬのＴＥＫＮＯＶＡ（商標）１０００Ｘ微量元素、＃Ｔ１００１）及びＳａｒｔｏｒｉｕｓ製２Ｌ ＢＩＯＳＴＡＴ（商標）Ａ＋中の抗生物質を補給した非動物性大豆タンパク（＃Ｔ７６６０）を含むＴＥＫＮＯＶＡ（商標）テリフィックブロス中で増殖させ、約６時間にわたり１ｍＭのＩＰＴＧを用いてＯＤ３５〜４０で誘導した。細胞は３７℃で３０％溶解酸素、ｐＨ７．０で増殖させ、２００〜８００ｒｐｍで撹拌し、２Ｌ／分で酸素散布を実施した。細胞には、ｐＨ増加によって検出されるようにグルコースが枯渇した時点にグルコースを９ｇ／Ｌ／時で供給した。ｐＨが低下した時点（誘導の約２．５時間後）にグルコース供給量を６ｇ／Ｌ／時に減少させた。
細胞を収集し、溶解バッファー（２０ｍＭのＴｒｉｓ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ、ｐＨ８．０；２０ｍＭのＴｒｉｓ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ、ｐＨ７．０；５０ｍＭのＭＯＰＳ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ、ｐＨ６．５；又は５０ｍＭのＭＯＰＳ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ、ｐＨ６．０）中に溶解させた。溶解物は、ｐＨ５．３及び３ｍＳ／ｃｍ（３５ｍｇ／ｍＬ（生成物／カラム樹脂））でＰｏｒｏｓ（登録商標）ＸＳカチオンイオン交換媒質（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、米国カリフォルニア州カールスバッド）上に装填した。
代表的な方法では、Ｐ０５タンパク質は、１００ｍＭのＭＯＰＳ、２５ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．０を含有するバッファーを用いて１工程でｐＨ７．０へ溶出させる。最初の溶出ピークを廃棄して第２溶出ピークをプール内に収集すると、Ｐ０５タンパク質を含有していた。初期プールは、ｄｅｓ−Ａｌａ種に比較して無傷Ｐ０５タンパク質が富裕である。次にこの溶出物質をＣａｐｔｏ（登録商標）Ｑアニオン交換樹脂の上方を流動させる。無傷Ｐ０５タンパク質を含有する貫流を収集する。
又別の代表的方法では、１００ｍＭのＭＯＰＳ、２０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０を用いて培地を洗浄する。Ｐ０５タンパク質は、１００ｍＭのＭＯＰＳ、５０〜５８ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０を含有するバッファーを用いて１工程でｐＨ６．０へ溶出させる。第１溶出ピークをその後のピークから分離すると、無傷Ｐ０５タンパク質を含有していた。次にこの溶出物質をＣａｐｔｏ（登録商標）Ｑアニオン交換樹脂の上方を流動させる。無傷Ｐ０５タンパク質を含有する貫流を収集する。
［実施例３］
セルベースアッセイ
タンパク質若しくはタンパク質を含有する上清をＩＬ−１活性についてセルベースアッセイで評価した。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１β応答性細胞を使用してＩＬ−１β活性（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社、米国カリフォルニア州サンディエゴから入手できる）を監視した。これらの細胞は、５つのＮＦ−ｋＢ及び５つのＡＰ−１結合部位に融合したＩＦＮ−β最小プロモーターの制御下で分泌胚アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を含んでいる。細胞表面上のＩＬ−１受容体のＩＬ−１βの関与は、ＮＦ−ｋＢの活性化及びＳＥＡＰ産生をもたらした。ＳＥＡＰレポートは、例えばＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社、米国カリフォルニア州サンディエゴ）及び分光測光分析を使用して検出できる。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ ＩＬ−１β細胞懸濁液は、７０〜８０％のコンフルエンスまで培養した細胞から調製した。再懸濁させた細胞は、新鮮増殖培地（ＤＭＥＭ、４．５ｇ／Ｌのグルコース、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎児血清（５６℃で３０分間）、５０Ｕ／ｍＬのペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬのＮｏｒｍｏｃｉｎ（登録商標）Ｔ）中で約３３０，０００細胞／ｍＬへ調整した。
試薬：２０ｎｇ／ｍＬでの１０μＬのＩＬ−１β、１０μＬの対象の作用物質及び３０μＬの細胞培養培地を平底９６ウエル細胞培養プレートのウエルに最終容積５０μＬまで加えた。陽性及び陰性コントロールサンプルは、並行して調製した。次に１５０μＬのＨＥＫ−Ｂｌｕｅ ＩＬ−１β細胞懸濁液（約５０，０００細胞）を各ウエルに加え、プレートは３７℃の５％ＣＯ２組織培養インキュベーター中で一晩培養した。一般に、最終ＩＬ−１β濃度は（２００μＬの最終容積中で）０．１ｎｇ／ｍＬであった。ＩＬ−１β活性は、翌日（１２〜１５時間後）に評価した。定量前に、ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）試薬は製造業者の取扱説明書にしたがって調製した。平底９６ウエルアッセイプレートは１５０μＬのＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）溶液を各ウエルに加えて調製した。９６ウエル組織培養プレートのウエルからの５０μＬの馴化培地をアッセイプレートの各ウエルに加えた。このプレートを３７℃でおよそ１５〜２０分間インキュベートした。次に分光光度計を用いて６２０〜６５５ｎｍでＳＥＡＰレベルを測定した。
結果。図２Ａに示したように、このアッセイでは、Ｐ０６タンパク質はＩＬ−１ＲＩアゴニストとして挙動し、Ｐ０７タンパク質は部分アゴニストとして挙動したが、Ｐ０１タンパク質は作動できなかった。実際に、Ｐ０１タンパク質は、ＩＬ−１βの存在下でアッセイした場合はアンタゴニストとして挙動した。図２Ｂは、本明細書に記載したＨＥＫＢｌｕｅ（商標）細胞アッセイを使用してある範囲のＩＬ−１βタンパク質濃度でのＰ０１によるＩＬ−１β活性の拮抗作用を示している。拮抗作用は、Ｐ０１の量の増加に伴って増加した（ｘ軸はＰ０１を含有する上清のマイクロリットル（μＬ）数を反映する）。
タンパク質Ｐ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４及びＰ０５は各々ＩＬ−１β活性に拮抗した。例えば、図３Ａ及び図３Ｂを参照されたい。Ｐ０５のＩＣ５０は約５ｎｇ／ｍＬ未満であった。Ｐ０５をこのアッセイにおいてＩＬ−１ＲＩを作動させる能力について試験したが、試験した最高濃度である１ｍｇ／ｍＬでさえ検出可能な作動活性を全く有していないことが観察された。Ｐ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４及びＰ０５はさらに、ＩＬ−１βに応答性であるヒト骨肉腫細胞系であるＭＧ−６３細胞中でのＩＬ−１β誘導性ＩＬ−６発現を阻害した。ドライアイ疾患のマウスモデルでは、ヘキサ−ヒスチジンタグ付き（配列番号２３）Ｐ０５は、生物活性を有することが観察された。タグ付きではないＰ０５に関しては、下記の実施例９も参照されたい。
［実施例４］
キメラタンパク質の結合特性
可溶性組み換えヒトＩＬ−１ＲＩ（ＩＬ−１ＲＩの細胞外ドメインに対応する）に対するタンパク質の結合特性は、Ｒｅｉｃｈｅｒｔ ＳＲ７０００ＤＣデュアルチャネルＳＰＲシステムを使用する表面プラズモン共鳴法を用いて評価した。結合は、０．００５％のＴｗｅｅｎ ２０を含むリン酸緩衝食塩液中で評価した。ＩＬ−１βは、８〜９ｎＭのＫＤ及び２〜３×１０−３ｓ−１の解離定数（Ｋｄ）、又別の実験では、約２ｎＭのＫＤ、１．３〜１．５×１０６Ｍ−１ｓ−１の結合定数及び約２．９〜３．０×１０−３ｓ−１の解離定数（Ｋｄ）を有すると観察された。Ｐ０１タンパク質はＩＬ−１βと類似の結合キネティクスで結合したが、結合実験の解離期（約１８０秒間）中には解離しなかった。そこで、Ｐ０１タンパク質は類似の条件下でＩＬ−１βより大きなアフィニティーでＩＬ−１ＲＩに結合した。
ＩＬ−１Ｒａの結合は、約０．３３ｎＭのＫＤ、約２×１０５Ｍ−１ｓ−１の結合定数（Ｋａ）及び約６．６×１０−５ｓ−１の解離定数（Ｋｄ）を有すると観察された。キメラサイトカインドメインＰ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４及びＰ０５は約１２〜１，７００ｐＭの範囲のＫＤ、約３×１０４Ｍ−１ｓ−１〜３×１０６Ｍ−１ｓ−１の範囲内の結合定数（Ｋａ）及び２×１０−５〜１×１０−３ｓ−１の範囲内の解離定数（Ｋｄ）を有することが観察された。下記の表３を参照されたい。
Figure 0006450364
［実施例５］
キメラタンパク質の追加の実施例
追加の代表的なキメラＩＬ−１ファミリータンパク質には下記も含まれる：
Figure 0006450364

下記のポリペプチドは、ＩＬ−１αからの少なくとも２つのセグメント及びＩＬ−１Ｒａからの少なくとも２つのセグメントを含むキメラドメインである。
Figure 0006450364
［実施例６］
製剤の実施例
本発明による代表的な製剤を以下に記載する：
２５ｇ／Ｌの濃度で存在するＰ０５タンパク質を有する製剤；カルボキシメチルセルロースは０．２５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する；ポロキサマー１８８は０．１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する；ソルビトールは５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する；リン酸ナトリウムは１０ｍＭの濃度で存在する；アルギニン及び／又はグルタミン酸は１００ｍＭの濃度で存在する。製剤は、約６．５のｐＨを有する。製剤は、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）；弱カチオン交換ＨＰＬＣ（ＷＣＥＸ−ＨＰＬＣ）；分光測光法（Ａ２８０）；及び視覚的アッセイの内の１つ以上を使用して測定されるように、室温で２週間後に安定性について、及び２〜８℃で少なくとも１２カ月間までの保管安定性について試験する。
［実施例７］
製剤の実施例及び安定性試験
第１相臨床試験において利用されたＰ０５の製剤（ＥＢＩ−００５としても公知である）は、０．２５％（ｗ／ｖ）の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウム；０．１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８；５％（ｗ／ｖ）の濃度のソルビトール；１０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム及び５若しくは２０ｍｇ／ｍＬのいずれかの濃度にあるＰ０５を含有する水性製剤であった。製剤は、約６．５のｐＨを有する。これらの製剤を下記の外観、ｐＨ、オスモル濃度、分光測光法（Ａ２８０）、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる含量；サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）；逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）；ＷＣＥＸ−ＨＰＬＣ；効力；及び容器完全性（ＣＩＴ）の測定を用いて安定性について試験した。これらの試験は、（１）リリース時（０カ月後）；（２）５±３℃での１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間及び６カ月間の保管後；（３）２５℃及び６０％の相対湿度（室温実験）での１カ月間若しくは３カ月間の保管後に実施した。これらの尺度についての仕様及び５ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬの製剤の代表的なバッチからの結果は、下記の表１４Ａ〜Ｅに示した。これらの結果は、製剤が素晴らしい安定性を有したことを証明している。製剤は２〜８℃での６カ月間にわたる保管後及び室温での３カ月間にわたる保管後でさえ仕様を満たし続けた。
Figure 0006450364
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［実施例８］
融解プロファイル
タンパク質Ｐ０３、Ｐ０４、Ｐ０５、ｍＩＬ−１Ｒａ（メチオニルＩＬ−１Ｒａ）及びＩＬ−１βはリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４中において０．５ｍｇ／ｍＬで調製した。タンパク質をＳＹＰＲＯ（登録商標）オレンジ色染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カリフォルニア州）とストック濃度の希釈率１：５００で結合し、示差走査蛍光分析法にかけた。例えば、Ｈｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，９９ １７０７−１７２０を参照されたい。蛍光測定値は、温度が１℃／分の速度で２５℃から９５℃へ上昇するにしたがってＡｇｉｌｅｎｔ Ｍｘ３００５ ＱＰＣＲ装置を使用して監視した。融解温度（Ｔｍ）値は、蛍光遷移の一次導関数の最大値から引き出した。タンパク質Ｐ０３、Ｐ０４及びＰ０５は５０℃超〜５９℃の高さまでの変性開始温度並びに５９、６０、６２及び６４℃超のＴｍを有することが観察された。結果は下記の表４並びに図５Ａ及び図５Ｂに示した。
Figure 0006450364
Ｐ０４は、ｍＩＬ−１Ｒａ及びＩＬ−１βより約４℃高いＴｍを有し、ｍＩＬ−１Ｒａより約３℃高い、ＩＬ−１βより約１０℃高い変性開始温度を示す。Ｐ０３及びＰ０５は、ｍＩＬ−１Ｒａ及びＩＬ−１βより約９℃高いＴｍを有し、ｍＩＬ−１Ｒａより約１１℃高い、ＩＬ−１βより約１８℃高い変性開始温度を示す。これらのデータは、例えば本明細書に記載した製剤中でのＩＬ−１阻害剤の融解温度を決定する方法を証明している。
［実施例９］
動物モデルにおけるドライアイの治療
精製Ｐ０５（ヘキサ−ヒスチジンタグ（配列番号２３）が欠如する）を１．２５×ＰＢＳ中で調製し、ドライアイ疾患のマウスモデルにおいて試験した。このモデルにおいてＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製の６〜１０週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（≧３０％の相対湿度、ヒドロゲル飼料の補給及びＥｎｖｉｒｏ−ｄｒｉ（商標）環境エンリッチメントを備える動物飼育室内で１〜２週間馴化させた）を第０日にフルオレセイン染色についてプレスクリーニングした。フルオレセイン染色のために、１０ｍｇ／ｍＬでＷＦＩ Ｈ２Ｏ中で希釈した、新しく作成したフルオレセインを各眼に０．４μＬで投与した。投与のおよそ８〜１３分後、Ｏｌｙｍｐｕｓ蛍光解剖顕微鏡を使用して眼をスコア付けした。点状染色は、角膜表面が分割されている５つの領域各々について０〜３の標準化ＮＥＩ（国立眼科学研究所）スコアリングシステムを使用して記録した（スコア範囲０〜１５／眼）。ティーチングブリッジを使用して、２つの遮蔽スコアは、各眼について単一集団スコアを生じさせるためにマウスを同時に評価した。
各眼について（１５の最大スコアの中から）≦７のスコアを有するマウスを第１日にドライアイチャンバー（２０％±２％の湿度及び約２１Ｌ／分／ケージの一定空気流量）内に入れ、（検査中を除いて）実験経過中はこのチャンバー内で維持した。第３日に、再びマウスをスコア付けし、８〜１０匹／群の治療群に無作為割り付けした。マウスは、マウス４〜５匹の各ケージは同一の平均疾患スコアを有するように無作為割り付けした。第３日から開始して無作為割り付け後、マウスには各点眼液中のＰ０５若しくはビヒクル（１．２５×ＰＢＳ）を３μＬ／眼、ＢＩＤで局所投与した。マウスを第７、９及び１１日に上述したように角膜フルオレセイン染色について試験してスコア付けした。スコアは、実験経過中、治療群に関して盲験とした。
図６Ａは、１日２回の治療：治療なし、ビヒクル（１．２５×ＰＢＳ）及び１０ｍｇ／ｍＬ（１％）のＰ０５の下での２件の同一実験からのマウスについての第０、３、７、９及び１１日での平均角膜染色スコア±ＳＥＭについての棒グラフである。１０ｍｇ／ｍＬのＰ０５は、実験の第７、９及び１１日での角膜染色を有意に減少させた。角膜染色の減少によって評価された有効性は、０．１ｍｇ／ｍＬのＰ０５と低い用量でも観察された。大腸菌中で生成された組み換えＩＬ−１Ｒａも又動物モデルにおける角膜染色を中等度に減少させた。
図６Ｂに示したように、１０ｍｇ／ｍＬのＰ０５の作用は、特に同一ビヒクル中の１０ｍｇ／ｍＬのマウス血清アルブミンとの比較に基づいていた。ビヒクルに比較して１０ｍｇ／ｍＬのマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を用いた場合に作用は見られなかったが、１０ｍｇ／ｍＬのＰ０５の作用は１０ｍｇ／ｍＬのマウス血清アルブミンに比較して統計的に有意であった。図６Ｃに示したように、１０ｍｇ／ｍＬのＰ０５はさらに眼科用乳剤（Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標））中の０．０５％のシクロスポリンとも比較された。Ｐ０５は角膜染色を減少させたが、０．０５％シクロスポリン眼科用乳剤については約１週間にわたる１日２回投与後に作用は観察されなかった。これらの実験は、本明細書に記載した製剤中でのＩＬ−１阻害剤の有効性を試験する方法を証明している。
［実施例１０］
撹拌試験
使用に適合する界面活性剤を同定するために、１ｍｇ／ｍＬ及び５０ｍｇ／ｍＬでのＰ０５は、様々な界面活性剤を含有する（ｉ）ＰＢＳ、０．５％（ｗ／ｖ）のＣＭＣ、ｐＨ７．４又は（ｉｉ）１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．０のいずれかの溶液中で調製した。撹拌は、タンパク質を４時間にわたり室温でボルテックスミキサーにかけることによって実施した。サンプルは、マイクロ流体イメージング（ＭＧＩ）、ＳＥＣ、Ａ２８０及び視覚的検査によって分析した。０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８の使用は、他の界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０を含む、又は界面活性剤なし）と比較して、タンパク質を沈降（視覚的検査を使用して評価した）及び撹拌中の有意な肉眼では見えない粒子蓄積から保護した。例えば、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマーは、≧１０μの粒子及び≧２５μの粒子について粒子数を減少させた。
この結果は、ポロキサマー１８８が例えばＰ０５などのポリペプチドを調製するために適切な界面活性剤であることを証明している。さらに、０．１％（ｗ／ｖ）とわずかな界面活性剤が沈降の量を限定するため、及び減少させるためにさえ有効であることを証明している。これらの実験も又、さらに本明細書に記載した製剤の適合性を決定する方法を証明している。
［実施例１１］
製剤の調製
Ｐ０５の製剤を調製した。手短には、Ｐ０５は、１×ＰＢＳ、ｐＨ６．５中に５２．８ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含有する冷凍液として提供された。ポリペプチドは、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム及び５％（ｗ／ｖ）のソルビトールをｐＨ６．０で含有するバッファーに対して、２〜８℃で約２４時間をかけておよそ１０，０００倍の交換で３，５００分子量カットオフ透析カセットを使用して透析した。透析後、濃度はＡ２８０／Ａ３２０を測定することによって決定した。
透析後、製剤は下記のように様々な濃度のＰ０５を用いて調製し、１００×のポロキサマー１８８界面活性剤を透析したＰ０５のストック溶液に１×濃度へ加えた。タンパク質濃度は、およそ１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ及び２０ｍｇ／ｍＬへ調製用バッファー（１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、ｐＨ６．０）を加えることによって調整した。製剤成分の最終濃度は、約１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８であった。次にサンプルを混合し、無菌条件下で滅菌ろ過し、次に無菌条件下で２ｃｃのガラスバイアル（２５０μＬ）内へ充填した。調製後、サンプルは、上記の条件下で調製された製剤の安定性を確証するために安定性試験にかけた。
これは、ＩＬ−１阻害剤、例えばＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｒａキメラタンパク質製剤を調製する方法を証明している。
［実施例１２］
リン酸バッファー対クエン酸バッファー内でのＰ０５の安定性
動的光散乱法若しくはＤＬＳ（準弾性光散乱法若しくはＱＥＬＳとしても公知）は、サンプル上にレーザー光を集束させ、高速光子計数器によって測定される散乱光のゆらぎ速度を監視することによってウエルプレート内での分析物（例えば、Ｐ０５）の拡散を測定する。相関関数として公知の数学的技術を使用して、拡散係数を決定するためにゆらぎ速度が定量される。拡散係数を使用して、ストークス−アインシュタイン方程式によって水和半径（Ｒｈ）が入手される。
Ｐ０５の半径は、ＤＬＳプレートリーダー（Ｗｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏ（商標）、Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カリフォルニア州サンタバーバラ）内での温度上昇の関数として測定された。捕捉時間は５秒間であり、各測定について５回のスキャンを実施した。ランプ速度は０．１７℃／分であった。タンパク質が変性するにつれて、半径が増加した。半径が増加した温度は、Ｔｏｎ（変性開始温度）と呼ばれる。
この実験は、２種の製剤中の２０ｍｇ／ｍＬのＰ０５について実施した：（ｉ）１０ｍＭのリン酸塩、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、ｐＨ６．５及び（ｉｉ）１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、ｐＨ６．０。図４Ａ及び図４Ｂに示した結果は、Ｔｏｎがクエン酸バッファー中ではリン酸バッファー中に比較してはるかに高い温度で発生することを証明した。クエン酸バッファー中のＰ０５についてはＴｏｎは４８．２℃及びリン酸バッファー中のＰ０５については３５．２℃であった。Ｔｏｎにおける大きな差は驚くべきことであり、Ｐ０５はクエン酸バッファー中ではリン酸バッファー中に比較してはるかに安定であることを示した。したがって、一部の実施形態では、ＩＬ−１阻害剤、例えばＰ０５を含む製剤は、クエン酸バッファーを含有する。
［実施例１３］
安定性試験
実施例１１において記載した製剤の安定性を試験するために、様々な濃度のＰ０５を備える製剤を（上記の実施例１１に記載したように）調製し、ベースライン測定値について分析した。調製したポリペプチドのバイアルは、２５℃で０日間、３日間、１週間、２週間及び４週間並びに４０℃で３日間、１週間及び２週間インキュベートした。少なくとも二本のバイアルは時点毎に調製した。インキュベーション後、サンプルは、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、弱カチオン交換ＨＰＬＣ（ＷＣＸ−ＨＰＬＣ）、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、濃度（Ａ２８０−Ａ３２０）、視覚的外観、写真を用いて実施する正式な検査を用いて分析した。ｐＨは、Ｔ＝０及びＴ＝４週間に分析した。オスモル濃度は、Ｔ＝０でのみ分析した。視覚的検査及び濃度は、どちらも２５℃及び４０℃で２週間後及び４週間後に評価した。全製剤は、２週間後に透明及び無色であり、目に見える粒子はなかった。２５℃のサンプルは、４週間後に透明及び無色であった。これらの濃度試験の結果は、表５に例示した。
Figure 0006450364

２５℃サンプルのｐＨは、４週間後に決定した。全ての場合に、Ｔ＝０でのｐＨは６．００〜６．０１であり、４週間後のｐＨは６．０３〜６．０７であった。これらのデータは、２５℃で少なくとも４週間及び４０℃で少なくとも２週間にわたり製剤中のある範囲の濃度にわたる製剤の安定性を証明している。
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ
純度は、吸光度及び蛍光検出を使用するサイズ排除ＨＰＬＣ法を使用して評価した。手短には、Ｓｅｐａｘ Ｚｅｎｉｘ（登録商標）ＳＥＣ−１５０の７．８ｍｍ×２０ｃｍ（ＰＮ２１３１５０−７８２０）カラムを使用した。移動相は１×ＰＢＳであった。評価は、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣシステムを、１ｍＬ／分の流量、１８分間の総ラン時間、周囲温度を含むイソクラチックモードで使用して実施した。吸光度検出は、２８０ｎｍの励起波長での蛍光検出及び３５０ｎｍの発光検出波長で２８０ｎｍであった。１及び５ｍｇ／ｍＬのサンプルの蛍光検出を使用する実験のためには１０μｇのポリペプチド製剤を装填し、２０ｍｇ／ｍＬのサンプルの吸光度検出のためには、５０μｇのポリペプチド製剤を装填した。
２週間の保管後、１ｍｇ／ｍＬ及び５ｍｇ／ｍＬのＰ０５製剤についての参照標準物質は９９．１％のアッセイ純度を有し、Ｐ０５製剤の１ｍｇ／ｍＬ及び５ｍｇ／ｍＬサンプルの純度は、それらが２５℃又は４０℃のいずれで保管されたかとは無関係に、各々９９．１％〜９９．２％であった。２０ｍｇ／ｍＬのサンプルについては、参照物質は９９．２％の純度を有していた。２週間の保管後、２０ｍｇ／ｍＬのサンプルは、それらが２５℃又は４０℃のいずれで保管されたかとは無関係に、９９．２％の純度を有していた。２５℃での４週間の保管後、２０ｍｇ／ｍＬのＰ０５製剤は９９．２％の純度を有していた。
ｗＣＥＸ−ＨＰＬＣ
追加の試験において、弱カチオン交換ＨＰＬＣ法を使用して製剤を評価した。この方法では、Ｄｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃ（登録商標）ＷＣＸ−１０、４×２５０ｍｍ（ＰＮ０５４９９３）カラムを使用した。移動相Ａは１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５であり、移動相Ｂは移動相Ａ＋０．２５ＭのＮａＣｌであった。アッセイは、１．２ｍＬ／分の流量、３５分間の総ラン時間、周囲温度を用いてＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣシステムを使用して実施した。検出は、２１４ｎｍ及び２８０ｎｍでアッセイすることによって実施した。サンプルサイズは、２５μｇ／注入であった。２５℃での２週間の保管後の結果の要約は表６に、４０℃での２週間の保管後の結果は表７に、及び２５℃での４週間の保管後の結果は表８に示した。
弱カチオン交換アッセイは、電荷不均質性を監視することによって純度を評価する又別の方法である。Ｐ０５製剤サンプルの分析は、電荷に基づいて数種の生成物関連不純物からの主生成物ピークを分解する。Ｐ０５の典型的な製剤は、およそ＞８５％の主ピーク及びいくつかのプレピーク及びポストピークからなる。プレピーク１は不明であり、プレピーク２は脱アミド化Ｐ０５の１つの形態であり、プレピーク３はＮ末端メチオニンを備えるＰ０５の１つの形態である。ポストピーク１はＮ末端アラニンが欠如するＰ０５の１つの形態であり、ポストピーク２はＮ末端アラニン及びプロリンの両方が欠如するＰ０５の１つの形態であり、ポストピーク３は不明である。
Figure 0006450364
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２５℃での２週間の保管後、主ピーク率（％）は５ｍｇ／ｍＬの製剤（Ｃ２）についての参照物質と類似のままの約９１％純度であったが、他方この方法を使用して決定した場合にＣ３（２０ｍｇ／ｍＬ）及びＣ１（１ｍｇ／ｍＬ）については純度のわずかな減少が生じた。主ピークの減少並びにプレピーク２、ポストピーク１及びポストピーク２の増加は、４０℃での保管後に全サンプルについて観察された。４週間の保管後、主ピーク純度において減少が観察され、プレピーク２及びポストピーク１では増加が生じた。
逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）
製剤は、さらにＲＰ−ＨＰＬＣを使用して評価した。ＲＰ−ＨＰＬＣアッセイは、疎水性に基づいて生成物不均質性を監視することによって純度を評価する又別の方法である。この方法は天然分子を酸化メチオニンを含有する生成物関連不純物から分離することができる。プレピーク２及び３はＰ０５の酸化形であり、ポストピーク１及び２は分子のアセチル化形である。
この方法では、Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ（登録商標）Ｃ４（４．６×１５０ｍｍ；３．５μｍ；ＰＮ１８６０００２８３）を水中の０．０５％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の移動相Ａとともに使用したが、移動相Ｂは９５％のアセトニトリル（ＡＣＮ）中の０．０５％のＴＦＡであった。アッセイは、３５分間の総ラン時間にわたり１ｍＬ／分の流量、及び５５℃のカラム温度を用いてＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＨＰＬＣシステムを使用してランした。検出は２８０ｎｍで実施した。１ｍｇ／ｍＬ及び５ｍｇ／ｍＬサンプルについて装填したサンプル量は２５μｇであり、装填したサンプル量は５０μｇであった。１ｍｇ／ｍＬ及び５ｍｇ／ｍＬ製剤についての、２５℃での２週間の保管後の結果の要約は表９に、４０℃での２週間の保管後の結果の要約は表１０に、及び２５℃での４週間の保管後の結果の要約は表１１に示した。２５℃及び４０℃での２週間の保管後の２０ｍｇ／ｍＬの製剤についてのデータは、各々表１２及び１３に示した。
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２５℃若しくは４０℃での２週間の保管後、１ｍｇ／ｍＬ及び５ｍｇ／ｍＬの製剤については、主ピーク純度の減少が観察され、プレピーク３の増加が観察された（酸化Ｐ０５）。この作用は、高温での１ｍｇ／ｍＬサンプル（Ｃ１）について最も顕著であった。これらの製剤について２５℃での４週間の保管後、主ピーク純度の減少及びプレピーク３（酸化Ｐ０５）の増加が観察され、１ｍｇ／ｍＬサンプルについてはこの作用が最も顕著であった。興味深いことに、２５℃での２週間の保管後、２０ｍｇ／ｍＬの製剤はＴ＝０に類似する主ピーク率（％）（純度９６．１％）を有していた。主ピーク率（％）の減少及びプレピーク３（酸化Ｐ０５）の増加は、このサンプルについて４０℃での２週間の保管後に観察された。２５℃での４週間の保管後、２０ｍｇ／ｍＬの製剤は、主ピーク純度のわずかな減少及びプレピーク３（酸化Ｐ０５）の増加を示した。
これらの分析データは、キメラサイトカイン製剤の安定性を分析する方法を証明しており、特にＰ０５ポリペプチドを含むキメラサイトカイン製剤の驚くべき安定性を証明している。したがって、一部の実施形態では、本発明は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ若しくは少なくとも２０ｍｇ／ｍＬの濃度で少なくとも２週間、例えば少なくとも４週間にわたり２５℃、例えば４０℃で保管され、少なくとも９２％、例えば少なくとも９４％若しくは少なくとも９６％の純度を有する製剤に関する。
［実施例１４］
ブローフィルシール容器内での製剤の安定性
ブローフィルシール（ＢＦＳ）容器内へ製剤を包装する工程は、プラスチック押出、成型、無菌充填及び密封を順序正しく含んでいる。例えば、Ｌｉｕ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．２０１１ Ｂｉｏｐｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２４（７）：２２−２９を参照されたい。押出工程では、プラスチックグラニュールを１６０℃を超える温度で融解させる。引き続いて、プラスチックを所望の容器形に成型し、製剤溶液を充填し、気密密封する。
容器を形成するために使用するプラスチック材料はある程度は気体透過性であるため、製剤の安定性は（例えば、容器及び／又はタンパク質酸化から水分蒸発のために）長期保管中に損なわれる可能性がある。そのような容器をアルミニウムホイル製パウチ又は他の適切なパッケージ内へ密封する工程は、製剤を光誘導生分解から保護する。そのようなアルミニウムホイル製パウチ内に容器を不活性気体、例えば窒素若しくはアルゴンとともに密封する工程は、酸化から保護できる。したがって、Ｐ０５をブローフィルシール（ＢＦＳ）容器内へ不活性気体をオーバーレイしてアルミニウムホイル製パウチを用いて、又は用いずに包装及びその後に保管することの作用を調査するために実験を実施した。
試験は、活性医薬品Ｐ０５を含有する製剤について実施した。バルク薬物物質は、ブローフィル加工処理のために１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、ｐＨ６．０を含有する水溶液中で調製した。Ｐ０５についての標的濃度は５．０ｍｇ／ｍＬであった。
製剤を約２℃〜８℃に冷却し、容器に充填した。およそ１，０００個の容器に充填し、容器の標的充填量は０．３２ｍＬであった。容器の一部分は窒素オーバーレイを用いてホイル包装内に封入した。初期の特性解析は、ＢＦＳ容器内への包装後に実施し、さらに安定性評価はパウチ封入を用いて、又は用いずに２つの温度（２℃〜８℃及び２５℃）での保管後に実施した。
初期特性解析は、Ａ２８０による濃度、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ、ｗＣＥＸ−ＨＰＬＣ、ＲＰ−ＨＰＬＣ、オスモル濃度及び光掩蔽による粒子分析を含んでいた。Ｐ０５の安定性は、４カ月後及び５カ月後に実施したＡ２８０評価並びに５カ月後のｐＨ及びオスモル濃度とともに、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ、ｗＣＥＸ−ＨＰＬＣ及びＲＰ−ＨＰＬＣによって１月１回監視した。
ブローフィル加工処理後のＰ０５製剤の初期特性解析は安定性の保持を証明した
ブローフィル加工処理後のＰ０５の初期解析は、タンパク質がブローフィル加工処理にもかかわらずその化学的及び物理的安定性を保持することを証明した。ＢＦＳ工程に曝露させられていないＰ０５製剤（５０ｍｇ／ｍＬの濃度のＰ０５、０．０１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ６．５を含有する水性製剤）からの結果をブローフィル工程を受けさせたＰ０５製剤（５ｍｇ／ｍＬの濃度のＰ０５、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．０を含有する水性製剤）と比較した。これらの製剤は、同一製造バッチからのＰ０５を用いて作成した。
これらの結果は、ブローフィル包装後の０時点に、ブローフィル加工された製剤が潜在的に有害なブローフィル加工処理に曝露させられた後でさえ、サイズ排除クロマトグラフィー、ＲＰ−ＨＰＬＣ、ｗＣＥＸ及びＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用した分析によって示されたように、素晴らしい安定性を維持することを証明している（表１５を参照されたい）。
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上記のアッセイに加えて、粒子分析は、ＵＳＰ＜７８９＞法にしたがった点眼剤の不溶性微粒子試験法を使用して、ＢＦＳ容器内に包装された製剤を対象に実施した。肉眼では見えない粒子計数はＢＦＳ容器内の目に見える沈降物の欠如と一致して（データは示していない）、点眼剤についてのＵＳＰ仕様（≧１０μｍの粒子に対して５０個／ｍＬ以下の粒子、≧２５μｍの粒子に対して５個／ｍＬ以下の粒子）の範囲内に含まれた。
これらのデータは、Ｐ０５は、ブローフィル加工処理の直後に物理的に安定（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ、光掩蔽及び目視による観察からの測定値による）及び化学的に安定（ｗＣＥＸ−ＨＰＬＣ、ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥからの測定値による）の両方であったことを証明している。
初期特性解析の一部として、オスモル濃度及びＡ２８０による濃度を測定した。平均オスモル濃度測定値は３１７ｍＯｓｍであり、Ａ２８０による平均濃度は５．０ｍｇ／ｍＬであった。
ブローフィル容器内に保管されたＰ０５製剤は安定性を保持した
ＢＦＳ容器内のＰ０５製剤は、相対湿度６０％の２５℃又は２〜８℃に設定したインキュベーター内に保管した。１カ月間隔で、サンプルをＳＥＣ、ＲＰ−ＨＰＬＣ及びｗＣＥＸ−ＨＰＬＣによって分析した。４カ月後及び５カ月後に、濃度をＡ２８０により測定した。５カ月後に、Ａ２８０によるオスモル濃度（蒸発を評価するため）、ｐＨ及び濃度も又測定した。
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ＳＥＣ−ＨＰＬＣの結果（表１６を参照されたい）は、ＢＦＳ容器内に保管されたＰ０５製剤は、少なくとも５カ月間は室温又は２〜８℃で凝集体を形成しなかったことを示している。窒素フラッシング後のバイアルのパウチ封入は、いずれの温度でも生成物の物理的安定性に影響を及ぼさなかった。
Ｐ０５製剤についてのｗＣＥＸ−ＨＰＬＣ安定性試験結果は、表１７及び表１８に示した（各々、主ピーク率（％）及び脱アミド化ピーク率（％））。
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ｗＣＥＸ−ＨＰＬＣ結果は、ブローフィルシール容器内のＰ０５製剤が５カ月間まで室温で安定性のままであったことを示している。Ｐ０５はさらに、２〜８℃で少なくとも５カ月間にわたり安定性を保持した。窒素フラッシング後の容器のパウチ封入は、いずれの温度でも生成物の安定性に影響を及ぼさなかった。
Ｐ０５エンジニアリングラン製剤についてのＲＰ−ＨＰＬＣ安定性試験結果は表１９及び表２０に示した（各々、主ピーク率（％）及び酸化タンパク質ピーク率（％））。
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ＲＰ−ＨＰＬＣの結果は、ＢＦＳ容器内に保管されたＰ０５製剤は、少なくとも５カ月間は室温及び２〜８℃で安定であったことを示している。
さらに、オスモル濃度及びｐＨ測定値は、オスモル濃度若しくはｐＨにおける有意な変化が２５℃でのサンプルについて経時的に発生しなかったことを示した（表を参照されたい）。これは、蒸発がほとんどから全く発生しなかったこと、及び溶液のｐＨが安定性のままであったことを証明している。Ａ２８０を使用して評価したタンパク質濃度も又以前の測定値と一致していた（表２１を参照されたい）。まとめると、ＥＢＩ−００５は２〜８℃及び周囲温度（ＲＴ）でブローフィルシール容器内への長期間保管後に素晴らしい物理的安定性を示した。
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［実施例１５］
メチオニン含有製剤
一部の実施形態では、本発明は、メチオニンを含有する本明細書に記載した製剤に関する
１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、ｐＨ６．０中で調製したＰ０５のための酸化防止剤の使用について２種の異なるストレス条件：温度（４０℃での保管）及び過酸化水素を使用した強制酸化を使用して試験した。過酸化水素は、フリーラジカルによる酸化を誘発するストレス因子であり、そこでγ線照射されていた多用量容器内での保管後に発生する可能性がある酸化作用を模倣するために使用した（下記参照）。Ｐ０５は、高温で長期間にわたり保管した場合に酸化レベルを増加させる。製剤に加えられた１０ｍＭのメチオニン若しくは７ｍＭの重硫酸塩いずれかの使用を４０℃で３週間保管されたＰ０５製剤について試験した。さらに、同一製剤は、１０％（ｖ／ｖ）の０．０２％過酸化水素をサンプルに加えた場合に、強制酸化を使用して試験した。サンプルは、酸化レベルを評価するためにＲＰ−ＨＰＬＣによって試験した。表２２は、データの要約を提供する。
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これらのデータは、高温又は過酸化物を添加して保管したタンパク質について、メチオニンが低濃度で酸化タンパク質のレベルを低下させるが、重硫酸塩は低下させないことを証明している。
両方の容器閉鎖システム（ブローフィル及び多用量）の作用並びに多用量バイアルのための製剤中の酸化防止剤の使用がＰ０５の酸化レベルに及ぼす作用について試験した。多用量容器（バイアル）はγ線照射によって滅菌した。γ線照射は、特に分子上のメチオニン残基を酸化させることによってタンパク質の化学的安定性にとって有害な可能性がある、容器内でのフリーラジカルを生じさせる可能性がある。したがって、今回の実験では、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８、ｐＨ６．０中で調製したＰ０５へのメチオニンの添加がＰ０５の酸化を改善するかどうかについて調査した。多用量バイアル若しくはブローフィルバイアル内のＰ０５に対して１０ｍＭのメチオニンを１ｍｇ／ｍＬで使用した。タンパク質は、２〜８℃又は周囲温度のいずれかで４週間まで保管した。タンパク質は、酸化Ｐ０５のレベルを決定するためにＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。表２３は結果の要約を示している。
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製剤へのメチオニンの添加は多用量容器内の酸化を減少させた。例えば、周囲温度での多用量容器内での４週間の保管後に、メチオニンを含まない製剤における酸化ピーク率（％）は７．５％であったが、メチオニンを含む製剤における酸化ピーク率（％）は４．７％に過ぎなかった。
［実施例１６］
ＥＢＩ−００５製剤及びビヒクル製剤の治療作用
中等度から重度のドライアイ疾患を有する患者におけるＥＢＩ−００５の水性製剤の安全性及び生物学的活性を評価するために、多施設共同二重遮蔽無作為化プラセボ対照臨床試験が完了された。本試験で使用した製剤は２０ｍｇ／ｍＬ若しくは５ｍｇ／ｍＬ（下記参照）のいずれかの濃度のＥＢＩ−００５（本明細書ではＰ０５とも呼ぶ）、０．２５％（ｗ／ｖ）の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウム、０．１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８、５％（ｗ／ｖ）の濃度のソルビトール及び１０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウムを含有していた。本臨床試験は、米合衆国内の８施設で患者７４例を対象に実施された。本試験は自然環境（管理有害環境チャンバーは使用されなかった）で実施された。
患者は、初回来院時に適格性基準についてスクリーニングされた。登録資格のある患者は、１週間にわたり１日３回、各眼にビヒクルの局所投与を受けた。１週間の試走期間の終了時、患者は適格性基準に対して再評価された。これらの追加の基準下で資格を有した患者は３つの治療群の１つに無作為割り付けされた。角膜フルオレセイン染色（ＣＦＳ）スコア、前眼部障害指数（ＯＳＤＩ）スコア及び無作為割り付けで得た他の尺度を本明細書ではベースライン尺度と呼ぶ。
適格患者は、中等度から重度のドライアイ疾患を有する少なくとも１８歳であった。追加の適格性基準は、下記の：（ｉ）スクリーニング時に２３以上で９０未満のＯＳＤＩスコア、（ｉｉ）無作為割り付け時に１９以上のＯＳＤＩスコア、（ｉｉｉ）スクリーニング時にＮＥＩスケール上で６以上で１５未満のＣＦＳスコア、及び（ｉｖ）無作為割り付け時に５以上のＣＦＳスコアを含んでいた。
治療群に無作為割り付けされた患者は、無作為割り付け時に始まる６週間にわたり１日３回、両眼を治療された。本臨床試験における３つの群についての治療は、下記の通りであった：（ｉ）第１群では、患者２２例がＥＢＩ−００５を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で含有するＥＢＩ−００５製剤を１日３回、各眼への局所投与を受けた、（ｉｉ）第２群では、患者２２例がＥＢＩ−００５を５ｍｇ／ｍＬの濃度で含有するＥＢＩ−００５製剤を１日３回、各眼への局所投与を受けた、（ｉｉｉ）第３群では、患者３０例がビヒクル製剤を１日３回、各眼への局所投与を受けた（ビヒクル製剤は、ビヒクル製剤中にはＥＢＩ−００５がなかったことを除いて、ＥＢＩ−００５製剤と同一成分を含有する水性製剤であった）。
患者はスクリーニング時、無作為割り付け時、無作為割り付けの２、４及び６週間後の評価来院時、並びに治療完了１週間後のフォローアップ来院時に評価された。この臨床試験についてのスケジュール並びにＥＢＩ−００５治療群及びビヒクルコントロール群に無作為割り付けされた患者数は、図７に示した。疼痛は、患者に痛みのある眼又はただれ眼について質問するＯＳＤＩの１２問の質問から単一質問についての分析に基づいて評価された。
結果は、図８〜１０に示した。これらの結果は、ＯＳＤＩスコア（図８）、疼痛（図９）及び角膜フルオレセイン染色（ＣＦＳ）スコア（図１０）を用いて評価したドライアイ疾患の徴候及び症状は、ＥＢＩ−００５製剤を用いた治療の経過中に改善したことを示す。驚くべきことに、ビヒクル単独製剤を用いた治療は、さらにＯＳＤＩスコア、疼痛及びＣＦＳスコアにおける顕著な改善を生じさせた。
［実施例１７］
中等度から重度のドライアイ疾患（ＤＥＤ）を有する被験者におけるＥＢＩ−００５（５ｍｇ／ｍＬ）局所点眼液及びビヒクルの二重遮蔽無作為化対照臨床試験
各眼に１２週間にわたり１日３回局所点眼液として与えられるビヒクル製剤（１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．０、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８）並びに治療用製剤（５ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含有する１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ６．０、５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．１％（ｗ／ｖ）のポロキサマー１８８）の有効性を決定する試験を実施する。
被験者はＤＥＤについて評価されるが、包含基準には事前の臨床診断により支持された両眼におけるドライアイ疾患（ＤＥＤ）の病歴を有する、又はスクリーニング（第１回来院）前少なくとも６カ月間にわたり主観的病訴の自己報告歴を有する、同一眼若しくは両眼における、第１回来院時に下記の基準：≧２３及び≦７５のＯＳＤＩスコアによって規定された進行中のＤＥＤを有する、及びＯＳＤＩの疼痛性若しくはただれ目の質問並びに≧６（ＮＥＩスケール）及び＜１５の全角膜フルオレセイン染色スコアのスコア付けを受けたことが含まれる。スクリーニングを受けた被験者は、次に遮蔽ビヒクル製剤を用いた５〜８日間の治療を受け、次に彼らがこの来院時に無作為割り付け基準を満たすことを確証するために再スクリーニングされる（第２回来院）。無作為割り付け基準には、≧１９及び＜５０の全ＯＳＤＩスコアを有すること、第１回来院におけると同一適格眼における≧５（ＮＥＩスケール）の全角膜フルオレセイン染色及び少なくとも１眼におけるＣＦＳ＜１５を有すること、並びに５〜８日間の遮蔽ビヒクル製剤期間と適合することが含まれる。適合は、用量の少なくとも８０％での投与であると規定されている。
被験者は、次にビヒクル製剤若しくは治療用製剤を用いた治療に無作為割り付けされ、第４回来院まで１日３回、各眼に１滴を投与するために十分なビヒクル製剤若しくは治療用製剤が提供される（第３週／週のナンバリングは、被験者が無作為割り付けされ、ビヒクル若しくは治療用製剤を受けると指定された後に始まる）。追加の薬物は、各その後の各来院から第６回来院（第９週）まで計量分配される。被験者は、第３回来院（第１週）、第４回来院（第３週）、第５回来院（第６週）、第６回来院（第９週）、第７回来院（第１２週）及び第８回来院（第１５週）に評価される。試験薬の最終用量及び最終治療来院は、第７週（第１２週）に完了する。最終評価は３週間後の第８回来院時である（フォローアップ、第１５週）。
製剤は、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）ブローフィル単位内で２〜８℃の溶液として提供される。被験者には、最終評価に先行する２１日間にわたり、必要であれば使用できるＲｅＦｒｅｓｈ Ｐｌｕｓ（登録商標）涙液が提供される。被験者は、試験の他の部分中にはそのような人工涙液を全く使用しない。追加の試験に関する情報は、ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ，ｔｒｉａｌ ｎｏ．ＮＣＴ０１９９８８０２から入手できる。
試験中の被験者の評価には、全角膜フルオレセイン染色（１つの徴候）、ＯＳＤＩ質問票の疼痛性若しくはただれ目の質問（１つの症状）、全ＯＳＤＩ及び個別質問並びにＯＳＤＩ下及び中心領域ＣＦＳのドメイン、包括的評価（治験担当医師及び被験者）、ドライアイの個別症状の被験者関連重症度並びに麻酔薬を用いないシルマー試験が含まれる。ビヒクル製剤群に指定された被験者についての第１週の終了時（すなわち、３〜８日間の遮蔽ビヒクルの試走期間後）及び／又は彼らの初期評価に比較したその後の試験来院時のこれらの基準の少なくとも１つにおける改善は、さらにビヒクル製剤の有効性を証明する。治療製剤群に指定された被験者についての彼らの初回評価又は３〜８日間の遮蔽ビヒクル試走期間後の彼らの評価に比較したその後の試験来院中のこれらの基準の少なくとも１つの改善は、さらに治療用製剤、例えばＰ０５を含む製剤の有効性を証明する。
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内に含まれる。
[項目１]
８〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウム；
４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む水性製剤であって、
及びカルボキシメチルセルロースナトリウムも含んでいてもよく、
５．５〜７．５のｐＨを有する、及び
眼障害を治療するために有効である水性製剤。
[項目２]
５．５〜６．５のｐＨを有する、項目１に記載の水性製剤。
[項目３]
治療用タンパク質を実質的に含まない、項目１又は２に記載の水性製剤。
[項目４]
８〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；及び
０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５]
９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、及び
０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８からなる、項目４に記載の水性製剤。
[項目６]
９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール、及び
０．０９％〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８からなる、項目５に記載の水性製剤。
[項目７]
０．１〜１％の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウムを含む、項目１〜６のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目８]
９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；及び
０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８を含む水性製剤であって、
５．７〜６．３のｐＨを有する、
治療用タンパク質を実質的に含んでいない、及び
眼障害を治療するために有効である水性製剤。
[項目９]
前記眼障害はドライアイ疾患である、項目１〜８のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目１０]
眼痛若しくは眼のただれ、ＯＳＤＩスコア及び／又は角膜フルオレセイン染色（ＣＦＳ）スコアを減少させるために有効である、項目１〜９のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目１１]
眼痛若しくは眼のただれは視覚アナログ尺度又はＯＳＤＩからの質問票を使用して評価される、項目１０に記載の水性製剤。
[項目１２]
１〜５０ｍｇ／ｍＬのＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｒａキメラサイトカインタンパク質（例えば、Ｐ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４、Ｐ０５、Ｐ０６若しくはＰ０７）；
クエン酸ナトリウム及びリン酸ナトリウムから選択される緩衝剤；
例えば、３．５〜６．５％（ｗ／ｖ）の濃度のソルビトール；
例えば、０．０７〜０．１３％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む水性製剤であって、
及びカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）を含んでいてもよく、
５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤。
[項目１３]
前記キメラサイトカインタンパク質はＰ０５である、項目１２に記載の水性製剤。
[項目１４]
１〜２０ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含む、項目１３に記載の水性製剤。
[項目１５]
３〜７ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含む、項目１３に記載の水性製剤。
[項目１６]
４〜６ｍｇ／ｍＬのＰ０５を含む、項目１３に記載の水性製剤。
[項目１７]
クエン酸ナトリウム及び／又はリン酸ナトリウムを５ｍＭ〜１５ｍＭの総濃度で含む、項目１３に記載の水性製剤。
[項目１８]
前記クエン酸ナトリウムは５ｍＭ〜１５ｍＭの濃度で存在する、項目１２〜１７のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目１９]
前記クエン酸ナトリウムは８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度で存在する、項目１８に記載の水性製剤。
[項目２０]
前記クエン酸ナトリウムは９ｍＭ〜１１ｍＭの濃度で存在する、項目１８に記載の水性製剤。
[項目２１]
前記ポロキサマー１８８は０．０５％〜０．１５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、項目１２〜２０のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目２２]
前記ポロキサマー１８８は０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、項目２１に記載の水性製剤。
[項目２３]
前記ポロキサマー１８８は０．０９％〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、項目２０に記載の水性製剤。
[項目２４]
前記ソルビトールは２．５％〜７．５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、項目１２〜２３のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目２５]
前記ソルビトールは４％〜６％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、項目２４に記載の水性製剤。
[項目２６]
前記ソルビトールは４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、項目２４に記載の水性製剤。
[項目２７]
１〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウム；
４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む水性製剤であって、
及びカルボキシメチルセルロースナトリウムを含んでいてもよく、
５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤。
[項目２８]
１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
８〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール；及び
０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む、又はそれらからなる水性製剤であって、
５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤。
[項目２９]
１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
９ｍＭ〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
４．５％〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；及び
０．０９％〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む、又はそれらからなる水性製剤であって、
５．７〜６．３のｐＨを有する水性製剤。
[項目３０]
４〜６ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；及び
０．０９〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む、又はそれらからなる水性製剤であって、
５．７〜６．３のｐＨを有する水性製剤。
[項目３１]
２７０〜３７０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、項目１２〜３０のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目３２]
眼に投与するために適合する、項目１〜３１のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目３３]
眼に局所投与するために適合する、項目３０に記載の水性製剤。
[項目３４]
増粘剤を含まない、例えばＣＭＣを含まない、項目１〜４及び８〜３３のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目３５]
さらにアミノ酸、例えばアルギニン、グルタミン酸、ヒスチジン若しくはメチオニンを含む、項目１２〜３４のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目３６]
さらにメチオニンを含む、項目１２〜３４のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目３７]
前記メチオニンは１〜２０ｍＭの濃度で存在する、項目３６に記載の水性製剤。
[項目３８]
前記水性製剤が例えば２５℃で少なくとも４週間保管された場合に、メチオニンを含まない対応する水性製剤に比較して酸化が減少する、項目３６又は３７に記載の水性製剤。
[項目３９]
前記水性製剤が多用量容器内で保管された場合に、メチオニンを含まない対応する水性製剤に比較して酸化が減少する、項目３８に記載の水性製剤。
[項目４０]
前記水性製剤の酸化はＲＰ−ＨＰＬＣを使用して評価される、項目３８又は３９に記載の水性製剤。
[項目４１]
光掩蔽粒子計数試験を使用して評価して、≧１０μｍの粒子に対して５０個／ｍＬ以下の粒子及び≧２５μｍの粒子に対して５個／ｍＬ以下の粒子を有する、項目１２〜４０のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目４２]
室温、例えば２５℃で４時間にわたり前記タンパク質溶液をボルテックスミキサーにかけた後の凝集形に比較して、タンパク質の＞９０％のモノマー形の存在によって指示されるように安定である、項目１２〜４１のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目４３]
凝集形に比較した前記タンパク質の前記モノマー形のパーセンテージはＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して評価される、項目４２に記載の水性製剤。
[項目４４]
２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも５カ月間にわたり保管された後に安定である、項目１２〜４３のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目４５]
周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも５カ月間保管された後に安定である、項目１２〜４４のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目４６]
２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも４カ月間にわたり保管された後に安定である、項目１２〜４５のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目４７]
周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも４カ月間保管された後に安定である、項目１２〜４６のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目４８]
２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも３カ月間保管された後に安定である、項目１２〜４７のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目４９]
周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも３カ月間保管された後に安定である、項目１２〜４８のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５０]
２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも２カ月間にわたり保管された後に安定である、項目１２〜４９のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５１]
周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも２カ月間保管された後に安定である、項目１２〜５０のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５２]
２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも１カ月間にわたり保管された後に安定である、項目１２〜５１のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５３]
周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも１カ月間保管された後に安定である、項目１２〜５２のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５４]
顕微鏡粒子計数試験を使用して評価して、≧１０μｍの粒子に対して５０個／ｍＬ以下の粒子、≧２５μｍの粒子に対して５個／ｍＬ以下の粒子及び≧５０μｍの粒子に対して２個／ｍＬ以下の粒子の存在によって指示されるように安定である、項目１２〜５３のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５５]
ＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して評価した凝集形に比較して前記タンパク質の＞９０％のモノマー形の存在によって指示されるように安定である、項目１２〜５４のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５６]
還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける参照標準物質への主バンドの適合度によって指示されるように安定である、項目１２〜５５のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５７]
非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける参照標準物質への主バンドの適合度によって指示されるように安定である、項目１２〜５６のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５８]
前記水性製剤を弱カチオン交換ＨＰＬＣ（ＷＣＥＸ−ＨＰＬＣ）を使用して評価した場合に、８５％以上の主ピークによって指示されるように安定である、項目１２〜５７の
いずれか一項に記載の水性製剤。
[項目５９]
Ｐ０５を含み、ＷＣＥＸ−ＨＰＬＣを使用して評価されるように１０％未満のＰ０５のｄｅｓ−Ａｌａ形の存在によって指示されるように安定である、項目５８に記載の水性製剤。
[項目６０]
ブローフィルシール容器内に包装される、項目１２〜５９のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目６１]
前記保管はブローフィルシール容器内での保管である、項目４４〜５３のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目６２]
治療方法であって、ＩＬ−１関連障害を有する被験者に項目１〜６１のいずれか一項に記載の水性製剤を投与する工程を含み、それにより前記ＩＬ−１関連障害を治療する方法。
[項目６３]
前記ＩＬ−１関連障害はドライアイ障害である、項目６２に記載の治療方法。
[項目６４]
眼障害、例えばドライアイ障害を治療する方法であって、前記眼障害、例えば前記ドライアイ障害を有する被験者に、
８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウム；
４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む水性製剤であって、
及びカルボキシメチルセルロースナトリウムを含んでいてもよく、
５．５〜７．５のｐＨを有する、及び治療用タンパク質を実質的に含まない水性製剤を投与する工程を含み、それにより前記ドライアイ障害を治療する方法。
[項目６５]
前記水性製剤は、８ｍＭ〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５％〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．０９％〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８を含む、項目６４に記載の治療方法。
[項目６６]
前記水性製剤は、８〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム、４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール及び０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８からなる、項目６４に記載の治療方法。
[項目６７]
ドライアイ障害を治療する方法であって、ドライアイ障害を有する被験者に
１〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウム；
４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む水性製剤であって、
及びカルボキシメチルセルロースナトリウムを含んでいてもよく、
５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤を投与する工程を含み、
それにより前記ドライアイ障害を治療する方法。
[項目６８]
ドライアイ障害を治療する方法であって、ドライアイ障害を有する被験者に
１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール；及び
０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８からなる水性製剤であって、
５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤を投与する工程を含み、
それにより前記ドライアイ障害を治療する方法。
[項目６９]
ドライアイ障害を治療する方法であって、ドライアイ障害を有する被験者に
１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
９ｍＭ〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
４．５％〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；及び
０．０９％〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８を含む、又はそれらからなる水性製剤であって、
５．７〜６．３のｐＨを有する水性製剤を投与する工程を含み、それにより前記ドライアイ障害を治療する方法。
[項目７０]
眼痛若しくは眼のただれ、ＯＳＤＩスコア及び／又は角膜フルオレセイン染色（ＣＦＳ）スコアを減少させるために有効である、項目６２〜６９のいずれか一項に記載の治療方法。
[項目７１]
眼痛若しくは眼のただれは視覚アナログ尺度又はＯＳＤＩからの質問票を使用して評価される、項目７０に記載の治療方法。
[項目７２]
前記水性製剤は１日１〜５回投与される、項目６２〜７０のいずれか一項に記載の治療方法。
[項目７３]
前記水性製剤は局所投与される、項目６２〜７２のいずれか一項に記載の治療方法。
[項目７４]
前記水性製剤は眼に局所投与される、項目７３に記載の治療方法。
[項目７５]
前記水性製剤は１日３回投与される、項目６２〜７４のいずれか一項に記載の治療方法。
[項目７６]
前記水性製剤は随意に投与される、項目６２〜７１又は７３〜７４のいずれか一項に記載の治療方法。
[項目７７]
項目１〜６１のいずれか一項に記載の水性製剤を含む容器又はデバイス。
[項目７８]
２５℃で少なくとも２週間、例えば少なくとも４週間保管されており、微粒子物質を実質的に含まない、項目７７に記載の容器又はデバイス。
[項目７９]
項目１〜６１のいずれか一項に記載の水性製剤を含むブローフィルシール容器。
[項目８０]
項目１〜６１のいずれか一項に記載の水性製剤を含む多用量容器。
[項目８１]
項目３５〜４０の水性製剤を含む多用量容器。
[項目８２]
項目１〜６１のいずれか一項に記載の水性製剤を含む薬物送達デバイス。
[項目８３]
ブローフィルシール容器である、項目８２に記載の薬物送達デバイス。
[項目８４]
不活性ガス、例えば窒素若しくはアルゴンを含有していてもよいパウチ中に密封される、項目７７〜８３のいずれか一項に記載の容器又はデバイス。
[項目８５]
ＩＬ−１関連障害、例えばドライアイ障害を治療する際に使用するための、項目１〜６１のいずれか一項に記載の水性製剤。
[項目８６]
被験者におけるＩＬ−１関連障害を治療するための医薬品の製造における、項目１〜６１のいずれか一項に記載の水性製剤の使用。
[項目８７]
項目１〜６１のいずれか一項に記載の水性製剤を含む容器又はデバイスを含むキットであって、及び取扱説明書も含んでいてもよいキット。

Claims (37)

  1. ８〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウムの一方又は両方；
    ４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
    ０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８；及び
    ０．１〜１％の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウム
    を含む水性製剤であって、
    ５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤。
  2. ８〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
    ４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
    ０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８；及び
    ０．１〜１％の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウム
    を含む、請求項１に記載の水性製剤。
  3. ８〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
    ４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
    ０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８；及び
    ０．１〜１％の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウム
    からなる、請求項２に記載の水性製剤。
  4. ９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
    ４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
    ０．０９〜０．１１％の濃度のポロキサマー１８８；及び
    ０．１〜１％の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウム
    からなる、請求項３に記載の水性製剤。
  5. 治療用タンパク質を実質的に含まない、請求項１〜４のいずれか一項に記載の水性製剤。
  6. １〜５０ｍｇ／ｍＬのＰ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４、Ｐ０５、Ｐ０６およびＰ０７からなる群から選択されるＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｒａキメラサイトカインタンパク質；
    ５〜１５ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウムの一方又は両方；
    ３．５〜６．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
    ０．０７〜０．１３％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８；及び
    ０．１〜１％の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）を含む水性製剤であって、
    ５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤。
  7. 前記キメラサイトカインタンパク質はＰ０５である、請求項６に記載の水性製剤。
  8. 前記クエン酸ナトリウムは５ｍＭ〜１５ｍＭの濃度で存在する、請求項６又は７に記載の水性製剤。
  9. 前記ポロキサマー１８８は０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項６〜８のいずれか一項に記載の水性製剤。
  10. 前記ソルビトールは４％〜６％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項６〜９のいずれか一項に記載の水性製剤。
  11. １〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
    ９〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
    ４．５〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
    ０．０９〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８；及び
    ０．１〜１％の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウム
    からなる水性製剤であって、
    ５．７〜６．３のｐＨを有する水性製剤。
  12. Ｐ０５が４〜６ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１１に記載の製剤。
  13. ２７０〜３７０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の水性製剤。
  14. 光掩蔽粒子計数試験を使用して評価して、≧１０μｍの粒子に対して５０個／ｍＬ以下の粒子及び≧２５μｍの粒子に対して５個／ｍＬ以下の粒子を有する、請求項６〜１３の
    いずれか一項に記載の水性製剤。
  15. ２５℃で４時間にわたり前記タンパク質溶液をボルテックスミキサーにかけた後に、凝集形に比較して、＞９０％のモノマー形の前記タンパク質の存在によって特定されるよう
    に安定であり、前記タンパク質の凝集形に比較したモノマー形のパーセンテージがＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して評価される、請求項６〜１４のいずれか一項に記載の水性製剤。
  16. ２〜８℃及び６０％の相対湿度で少なくとも１カ月間にわたり保管された後に安定である、請求項６〜１５のいずれか一項に記載の水性製剤。
  17. 周囲条件下、例えば室温、例えば２５℃で少なくとも１カ月間保管された後に安定である、請求項６〜１５のいずれか一項に記載の水性製剤。
  18. 例えば顕微鏡粒子計数試験を使用して評価して、≧１０μｍの粒子に対して５０個／ｍＬ以下の粒子、≧２５μｍの粒子に対して５個／ｍＬ以下の粒子及び≧５０μｍの粒子に
    対して２個／ｍＬ以下の粒子の存在によって特定されるように安定である、請求項６〜１７のいずれか一項に記載の水性製剤。
  19. ＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して評価した凝集形に比較して＞９０％のモノマー形の前記タンパク質の存在によって特定されるように安定である、請求項６〜１８のいずれか一項に
    記載の水性製剤。
  20. 還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ又は非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける参照標準物質への主バンドの適合度によって特定されるように安定である、請求項６〜１９のいずれか一項に記載の水性製剤。
  21. 前記水性製剤を弱カチオン交換ＨＰＬＣ（ＷＣＥＸ−ＨＰＬＣ）を使用して評価した場合に、８５％以上の主ピークによって特定されるように安定である、請求項６〜２０のいずれか一項に記載の水性製剤。
  22. ブローフィルシール容器内に包装される、請求項６〜２１のいずれか一項に記載の水性製剤。
  23. ＩＬ−１関連障害の治療に使用するための、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の水性製剤。
  24. 前記ＩＬ−１関連障害は癌である、請求項２３に記載の水性製剤。
  25. ８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウムの一方または両方；
    ４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
    ０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８；及び
    ０．１〜１％の濃度のカルボキシメチルセルロースナトリウムを含む水性製剤であって、
    ５．５〜７．５のｐＨを有し、
    治療用タンパク質を実質的に含まない水性製剤。
  26. １〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
    ８ｍＭ〜１２ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム若しくはリン酸ナトリウム；
    ４％〜６％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
    ０．０８％〜０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８；及び
    １〜２０ｍＭの濃度のメチオニンを含む水性製剤であって、
    カルボキシメチルセルロースナトリウムを含んでいてもよく、
    ５．５〜７．５のｐＨを有する水性製剤。
  27. １ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＰ０５；
    ９ｍＭ〜１１ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウム；
    ４．５％〜５．５％（ｗ／ｖ）のソルビトール；
    ０．０９％〜０．１１％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８；及び
    １〜２０ｍＭの濃度のメチオニンからなる水性製剤であって、
    ５．７〜６．３のｐＨを有する、請求項２６に記載の水性製剤であって、ＩＬ−１関連障害の治療に使用するための前記製剤。
  28. 水性製剤が２５℃で少なくとも４週間にわたり保管された場合に、メチオニンを含まない対応する水性製剤に比較して酸化が減少する、請求項２７に記載の使用のための水性製剤。
  29. 皮下、静脈内または筋肉内投与するためのものである、請求項２３、２４、２７および２８のいずれか一項に記載の使用のための水性製剤。
  30. 注入するためのものである、請求項２９に記載の使用のための水性製剤。
  31. 請求項１〜２２のいずれか一項に記載の水性製剤を含む容器又は薬物送達デバイス。
  32. ブローフィルシール容器である、請求項３１に記載の容器又は薬物送達デバイス。
  33. 多用量容器である、請求項３１に記載の容器又は薬物送達デバイス。
  34. 不活性ガスを含有するパウチ内に密封される、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の容器又は薬物送達デバイス。
  35. 被験者におけるＩＬ−１関連障害を治療するための医薬品の製造における、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の水性製剤の使用。
  36. 請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の容器又は薬物送達デバイスを含むキットであって、及び取扱説明書も含んでいてもよいキット。
  37. 前記ＩＬ−１関連障害は癌である、請求項３５に記載の使用。
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