ES2584534B1 - Formulación tópica oftálmica de bosentan - Google Patents

Abstract

Formulación tópica oftálmica de bosentan.#La presente invención se refiere a una formulación tópica oftálmica de bosentan, preferiblemente en forma de solución acuosa. También se refiere al uso de una formulación tópica oftálmica que comprende bosentan como principio activo para la prevención y/o tratamiento de la neurodegeneración de la retina inducida por la diabetes y/o el envejecimiento.

Description

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DESCRIPCION

FORMULACION TOPICA OFTALMICA DE BOSENTAN Campo de la tecnica

La presente invencion pertenece al campo de la medicina y se refiere a formulaciones topicas oftalmicas que comprenden bosentan como principio activo para el tratamiento de los trastornos oculares inducidos por enfermedades metabolicas, como la diabetes, y/o el envejecimiento.

Estado de la tecnica anterior

La diabetes es una enfermedad cronica caracterizada por la presencia de hiperglucemia que se desencadena cuando el organismo pierde su capacidad de producir suficiente insulina o de utilizarla con eficacia. Hay dos tipos principales de diabetes: el tipo 1 y el tipo 2. La diabetes tipo 2 es el tipo mas comun de diabetes y suele aparecer en adultos, pero cada vez mas hay mas casos de ninos y adolescentes.

El numero de personas con diabetes tipo 2 esta en rapido aumento en todo el mundo. Este aumento va asociado al desarrollo economico, que comporta un mayor envejecimiento de la poblacion y cambios en el estilo de vida (dietas poco saludables y disminucion de la actividad flsica).

La diabetes puede causar complicaciones tardlas graves que se clasifican en microangiopaticas (retinopatla, neuropatla y nefropatla diabetica) y macroangiopaticas (enfermedad cardiovascular).

La retinopatla diabetica (RD) es la complication mas frecuente de la diabetes y la principal causa de disminucion de agudeza visual y de ceguera en poblacion en edad laboral en los palses desarrollados. La incidencia de la RD aumenta con el tiempo de evolution de la diabetes. Asl, el 90% de los pacientes con diabetes tipo 1 y el 60% de los pacientes con diabetes tipo 2 presentan algun grado de RD a los 20 anos de evolucion de la diabetes. La prevalencia de RD en los palses occidentales es bastante similar y se situa alrededor del 30% y en un 10% de los casos la RD se encuentra en fases avanzadas que amenazan seriamente

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la vision, tal como se describe en Yau et al., Meta-Analysis for Eye Disease (META-EYE) Study Group. Global prevalence and major risk factors of diabetic retinopathy, Diabetes Care, 2012, 35,556-64.

Segun el International Diabetes Federation. Diabetes Atlas (6th Edition, 2014) (
http://www.idf.org/diabetesatlas), la cifra de pacientes diabeticos en el mundo crecera de forma exponencial en los proximos anos: se estima que se pasara de los 387 millones de pacientes diabeticos en el ano 2014 a 592 millones en el ano 2035. En consecuencia, el numero de pacientes con RD tambien aumentara de forma paralela.

El control estricto de la glucosa en sangre y de la presion arterial son esenciales para prevenir o enlentecer la progresion de la RD. Sin embargo, los objetivos terapeuticos son diflciles de alcanzar y, en consecuencia, la RD acaba desarrollandose en una elevada proportion de pacientes.

Los tratamientos actuales para la RD como la fotocoagulacion con laser, las inyecciones intravltreas de corticosteroides o agentes bloqueantes de los factores de crecimiento endotelial vascular (anti-VEGF: ranibizumab, bevacizumab, pegaptanib, y aflibercept) o la cirugla vltreo-retiniana estan indicados en etapas muy avanzadas de la enfermedad, tienen una efectividad limitada y estan asociados con efectos adversos significativos. Asl, el tratamiento con laser esta asociado a la perdida moderada de vision, a la disminucion del campo de vision, a la reduccion de la vision del color, y a una reduccion de la sensibilidad de contraste. Las inyecciones intravltreas conllevan efectos adversos como infecciones, glaucoma y formation de cataratas y, dado que deben ser administradas de forma repetida, el riesgo de producirse efectos secundarios se multiplica. Ademas de los efectos locales adversos, los agentes anti-VEGF tambien pueden producir complicaciones sistemicas debido a su capacidad de pasar a la circulation sistemica. En definitiva, los tratamientos actuales de la RD son aplicables solamente en los estadios avanzados de la enfermedad y estan asociados con efectos adversos significativos.

La RD ha sido considerada clasicamente como una enfermedad de la microcirculation de la retina. Sin embargo, tal como se describe en Lieth et al., Retinal neurodegeneration: early pathology in diabetes, Clin. Exper. Ophthalmol., 2000, 28, 3-8, cada vez hay mas pruebas, basadas en observaciones neurofisiologicas, psicometricas, histopatologicas, y bioqulmicas, que sugieren que la neurodegeneracion de retina es un evento temprano en la patogenesis

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de la RD que participa en las anomalias que se producen en la microcirculacion. Asl, las principales caracterlsticas de la neurodegeneracion retiniana (apoptosis y activacion glial) se han detectado en las retinas de donantes diabeticos que no presentaban alteraciones microvasculares. Cllnicamente, la neurodegeneracion de la retina produce anomalias funcionales, tales como la perdida de la discrimination cromatica y de la sensibilidad al contraste. Estas alteraciones pueden ser detectadas en pacientes diabeticos antes de observarse lesiones en el examen del fondo de ojo.

En el artlculo de revision Simo et al., Neurodegeneration in the diabetic eye: new insights and therapeutic perspectives, Trends Endocrin. Metab., 2014, 25, 23-33, se describe que los tratamientos basados en la neuroproteccion abren una nueva aproximacion para prevenir o detener el desarrollo de la RD. En dicho artlculo se describen algunas estrategias que se encuentran en fase experimental, pero todavla faltan ensayos cllnicos que avalen la eficacia y seguridad de estos abordajes terapeuticos.

En el artlculo de Chou et al., Endothelin Receptor-A Antagonist Attenuates Retinal Vascular and Neuroretinal Pathology in Diabetic Mice, Invest. Ophthalmol. Vis., 2014, 55, 2516-2525, se describe la administration oral de atrasentan, un farmaco bloqueante selectivo del receptor ETa de la endotelina 1, y se observo una reduction significativa de las complicaciones vasculares y neuroretinales en ratones diabeticos. Dicha administracion oral tiene el inconveniente de que puede tener efectos sistemicos asociados. Ademas, dada la existencia de la barrera hemato-retiniana se requieren altas concentraciones sericas para que puedan alcanzarse concentraciones farmacologicas en la retina.

A pesar de las soluciones descritas en el estado de la tecnica, persiste la necesidad de disponer de nuevos tratamientos farmacologicos para la prevention y/o tratamiento de la RD, que eviten el tratamiento sistemico o las inyecciones intravltreas, con la finalidad de minimizar los posibles efectos secundarios, y para que puedan administrarse de forma sencilla y durante periodos prolongados.

Objeto de la invencion

El objeto de la presente invencion es el uso de una formulation topica oftalmica que comprende bosentan como principio activo para la manufactura de un medicamento para la prevencion y/o el tratamiento de la neurodegeneracion de la retina inducida por la diabetes

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y/o el envejecimiento.

Tambien forma parte del objeto de la invention una formulation topica oftalmica de bosentan. Descripcion detallada de la invencion

El objeto de la presente invencion es el uso de una formulacion topica oftalmica que comprende bosentan como principio activo para la manufactura de un medicamento para la prevention y/o el tratamiento de la neurodegeneracion de la retina inducida por la diabetes y/o el envejecimiento.

Tambien forma parte de la invencion una formulacion topica oftalmica que comprende bosentan para uso en la prevencion y/o el tratamiento de la neurodegeneracion de la retina inducida por la diabetes y/o el envejecimiento.

Los autores de la presente invencion han observado que una formulacion topica oftalmica que comprende bosentan como principio activo, sorprendentemente, previene la neurodegeneracion de la retina inducida por la diabetes y es apropiada para el tratamiento de los estadios iniciales de dicha neurodegeneracion. Dicha formulacion permite la penetration del principio activo a traves de la mucosa oftalmica hasta la retina, que es donde realiza su accion terapeutica.

A pesar de que la via topica ocular no se plantea como una ruta de administration adecuada para tratar la RD, porque se considera que los farmacos administrados por esta via no alcanzan la retina, los ensayos efectuados ponen de manifiesto que la formulacion de la presente invencion alcanza la retina y previene la neurodegeneracion de la misma.

En la presente descripcion, asl como en las reivindicaciones, las formas singular "un”, "una” y "el” o "la” incluyen la referencia en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

En la presente descripcion los porcentajes son expresados en tanto por ciento peso/volumen (p/v), a no ser que se indique claramente lo contrario.

La neurodegeneracion de la retina

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Desde el punto de vista histologico, la neurodegeneracion de la retina se caracteriza por la activacion de las celulas de la glia (gliosis reactiva) y la muerte por apoptosis de las neuronas, principalmente las neuronas de la capa de celulas ganglionares.

Las principales manifestaciones cllnicas de la neurodegeneracion de la retina son defectos en la sensibilidad al contraste y en los campos visuales, asl como la dificultad de adaptation a la oscuridad, tal como se describe en Di Leo et al., Presence and further development of retinal dysfunction after 3-year follow up in IDDM patients without angiographically documented vasculopathy, Diabetologia, 1994, 37, 911-916, y en Frost-Larsen et al., Value of electroretinography and dark adaptation as prognostic tools in diabetic retinopathy, Dev. Ophthalmol., 1981,2, 222-234. Desde el punto de vista cllnico, es importante la identification temprana de la neurodegeneracion para poder iniciar el tratamiento basado en farmacos con un efecto neuroprotector.

Los estadios iniciales de la neurodegeneracion de la retina se pueden detectar mediante un examen oftalmologico empleando la tomografla de coherencia optica de dominio de la frecuencia (FD-OCT) o el electroretinograma multifocal (mfERG), tal como se describe en Simo et al., op. cit. Estas exploraciones no estan incluidas entre los examenes oftalmologicos rutinarios que se realizan de forma periodica a los pacientes diabeticos para diagnosticar la RD, ya que en la actualidad no existen tratamientos para la RD basados en la neuroproteccion.

Preferiblemente el uso de la formulation topica oftalmica de bosentan es para la prevention y/o el tratamiento de la neurodegeneracion de la retina inducida por la diabetes.

Preferiblemente dicho uso es para la prevencion y/o el tratamiento de los estadios iniciales de la neurodegeneracion de la retina inducida por la diabetes y/o el envejecimiento.

Preferiblemente dicho uso es para la prevencion y/o el tratamiento de los estadios iniciales de la neurodegeneracion de la retina inducida por la diabetes.

La formulacion topica oftalmica

La formulacion topica oftalmica de la invention puede ser en forma farmaceutica llquida, semisolida o solida. La forma farmaceutica llquida puede ser, por ejemplo, solution,

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suspension, emulsion fluida, gel fluido, microemulsion, nanoemulsion, o sistema coloidal. La forma farmaceutica semisolida puede ser, por ejemplo, pomada, crema, unguento, gel, o pasta). La forma farmaceutica solida puede ser, por ejemplo, implante oftalmico, cataplasma, o aposito.

En una realization preferida, la formulation topica oftalmica es una forma farmaceutica llquida, mas preferiblemente una solution acuosa.

En una realizacion todavla mas preferida, la formulacion topica oftalmica es una solucion acuosa que comprende:

1) bosentan como principio activo,

2) un disolvente humectante farmaceuticamente aceptable seleccionado de entre el grupo formado por polietilenglicol (PEG), propilenglicol, glicerina, y mezclas de los mismos, y

3) un sistema regulador del pH farmaceuticamente aceptable para ajustar la solucion acuosa a un pH comprendido entre 3,5 y 10,5.

Dicha solucion acuosa comprende agua como disolvente.

El principio activo

En la formulacion de la invention el principio activo es la 4-(1,1-dimetiletil)-N-[6-(2- hidroxietoxi)-5-(2-metoxifenoxi)[2,2’-bipirimidin]bencenosul-fonamida, que corresponde a la denomination comun internacional de bosentan.

La preparation de bosentan se encuentra descrita en la solicitud de patente canadiense CA- A-2071193 de Hoffmann-La Roche, y es un antagonista del receptor de endotelina, que se emplea en medicina como agente antihipertensivo, especialmente en el tratamiento de la hipertension arterial pulmonar.

En el contexto de la invencion el termino "bosentan” se refiere a bosentan, a sus hidratos y a sus sales, como por ejemplo el monohidrato de bosentan, o la sal sodica de bosentan. En la formulacion de la invencion, preferiblemente se emplea monohidrato de bosentan.

En la formulacion de la invencion, el bosentan, expresado como bosentan, se encuentra

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generalmente comprendido entre el 0,1% y el 5% en (p/v) con respecto al volumen total de la formulacion, preferiblemente entre 0,2% y 2% y aun mas preferiblemente entre el 0,5% y el 1%. En el caso de emplear bosentan en forma de monohidrato u otro hidrato, o en forma de sal sodica u otra sal, el experto en la materia puede calcular facilmente las cantidades correspondientes.

En la formulacion de la invention, el principio activo se puede encontrar incorporado en forma de micropartlculas, nanopartlculas, liposomas o niosomas.

En una realization preferida, la formulacion de la invencion comprende bosentan en combination con otro principio activo como, por ejemplo, corticoides, prostaglandinas, factores de crecimiento, factores anti-VEGF, o peptidos. Preferiblemente el bosentan se emplea en combinacion con factores de crecimiento.

El disolvente humectante

La formulacion de la invencion comprende un disolvente humectante farmaceuticamente aceptable seleccionado de entre el grupo formado por polietilenglicol, propilenglicol, glicerina, y mezclas de los mismos.

Un disolvente humectante, en el contexto de la invencion, es un compuesto que tiene propiedades solventes y humectantes.

Entre ellos se encuentra el polietilenglicol (PEG), nombre que designa a una amplia familia de pollmeros con pesos moleculares diversos, obtenidos por condensation de oxido de etileno y agua en presencia de un catalizador. La formula de dichos pollmeros se puede representar como H(OCH2CH2)nOH, en donde n representa el numero promedio de grupos oxietileno.

El PEG se utiliza ampliamente en composiciones farmaceuticas, incluyendo formulaciones parenterales, topicas, oftalmicas, orales, y rectales, puesto que es un compuesto estable que es esencialmente no irritante para la piel. Ademas es un compuesto hidrofllico, facilmente soluble en agua.

El PEG apropiado para ser empleado en la formulacion de la invencion puede tener un peso molecular comprendido entre 300 y 35000, preferiblemente entre 600 y 20000, mas

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preferiblemente entre 1000 y 8000, aun mas preferiblemente entre 3000 y 6000, y todavla mas preferiblemente aproximadamente 4000. Los diferentes PEG se designan mediante un numero que acompana al termino PEG. Asl PEG 200, significa un PEG que tiene un peso molecular medio aproximado de 200. En funcion del peso molecular, el PEG es llquido o solido. Asl, los PEG con un peso molecular medio de hasta 800 son llquidos a temperatura ambiente, el PEG 1000 funde a una temperatura comprendida entre 37° C y 40° C, y el PEG 4000 funde entre 50° C y 58° C. Cuanto mayor contenido de oxido de etileno, mayor es el punto de fusion del PEG.

El PEG se puede obtener comercialmente, por ejemplo, bajo la denomination Carbowax® suministrado por la companla Dow Chemical.

El propilenglicol es un llquido incoloro, transparente, viscoso, y practicamente inodoro, que se obtiene por hidrolisis del oxido de propileno.

La glicerina tambien es un llquido incoloro, transparente, viscoso y practicamente inodoro, con un ligero sabor dulce.

En la formulation de la invention, como disolvente humectante se emplea PEG y/o propilenglicol, mas preferiblemente PEG 4000 y/o propilenglicol, y aun mas preferiblemente es PEG 4000.

En la formulacion de la invencion el contenido de disolvente humectante se encuentra comprendido habitualmente entre el 1% y el 49% en (p/v) con respecto al volumen total de la formulacion, preferiblemente entre el 5% y el 40%, mas preferiblemente entre el 10% y el 30%, y aun mas preferiblemente entre el 15% y el 25%.

El sistema regulador del pH

La formulacion de la invencion comprende un sistema regulador farmaceuticamente aceptable para ajustar el pH de la solution acuosa a un valor comprendido entre 3,5 y 10,5, preferiblemente entre 4,0 y 8,5, mas preferiblemente entre 6,0 y 8,2, mas preferiblemente entre 7,0 y 8,1, y aun mas preferiblemente entre 7,5 y 8,0.

El sistema regulador apropiado para obtener dicho pH puede ser seleccionado por el experto

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en la materia de entre los sistemas reguladores que se emplean en formulaciones farmaceuticas como, por ejemplo, soluciones reguladoras dtrico/citrato, soluciones reguladoras fosfato, soluciones reguladoras borico-borato, y mezclas de las mismas. Dicho sistema regulador puede incluir aminoacidos y/o sustancias aminadas.

En la formulacion de la invencion, el sistema regulador del pH preferiblemente se selecciona de entre el sistema regulador formado por acido borico, glicina y una amina seleccionada de entre el grupo formado por trometamol, arginina, lisina, metilglucamina, y mezclas de las mismas; el sistema acido dtrico/citrato, y el sistema fosfato. Preferiblemente el sistema regulador del pH esta formado por acido borico, glicina y una amina seleccionada de entre el grupo formado por trometamol, arginina, lisina, metilglucamina, y mezclas de las mismas; o el sistema acido dtrico/citrato. Mas preferiblemente el sistema regulador del pH esta formado por acido borico, glicina y una amina seleccionada de entre el grupo formado por trometamol, arginina, lisina, metilglucamina, y mezclas de las mismas, y aun mas preferiblemente el sistema regulador del pH esta formado por acido borico, glicina y trometamol.

La cantidad de sistema regulador del pH necesaria para ajustar el pH al valor deseado es una tarea habitual que no representa ninguna dificultad para el experto en la materia. En el caso concreto de un sistema regulador del pH formado por acido borico, glicina y una amina, habitualmente el contenido de acido borico se encuentra comprendido entre el 0,1% y el 10% en (p/v) con respecto al volumen total de la formulacion, mas preferiblemente entre el 0,5% y el 5%, y aun mas preferiblemente entre el 0,75% y el 1,5%; el contenido de glicina se encuentra comprendido entre el 0,5% y el 20% en (p/v) con respecto al volumen total de la formulacion, mas preferiblemente entre el 0,75% y el 10%, y aun mas preferiblemente entre el 1,5% y el 2,5%; y el contenido de amina se encuentra comprendido entre el 0,1% y el 25% en (p/v) con respecto al volumen total de la formulacion, preferiblemente entre el 0,5% y el 10%, mas preferiblemente entre el 0,75% y el 5%, y aun mas preferiblemente entre el 1% y el 2,5%.

Otros componentes

La formulacion topica oftalmica de la invencion puede incluir otros componentes como, por ejemplo, tensioactivos, cosolventes, viscosizantes, conservantes, agentes isotonizantes, agentes isoosmotizantes, potenciadores de la absorcion del principio activo, polimeros mucoadhesivos, polimeros no mucoadhesivos, quelantes, estabilizantes, antioxidantes, y

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mezclas de los mismos.

Entre los tensioactivos se pueden mencionar, por ejemplo, gliceridos polietoxilados, polisorbatos, poloxameros, lauril sulfato sodico, fosfollpidos, como fosfatidilcolina o fosfatidilglicerol y sus derivados, aceite de ricino hidrogenado polioxietilenado, acidos grasos polioxietilenados, mezclas de mono-, di, y trigliceridos de acidos grasos opcionalmente polioxietilenados, y mezclas de los mismos.

Entre los cosolventes o solubilizantes se pueden mencionar, por ejemplo, los derivados polioxietilenados del aceite de ricino, estearatos polioxietilenados, polietilenglicol, polisorbatos, poloxameros, glicerina, trigliceridos de cadena media C6-C10, y mezclas de los mismos.

Entre los agentes viscosizantes se pueden mencionar, por ejemplo, el alcohol polivinllico, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carbomeros, polietilenglicol, y mezclas de los mismos.

Entre los conservantes se pueden mencionar, por ejemplo, cloruro de benzalconio, acido borico, acido benzoico, esteres de cadena alqullica C1-C4 del acido p-hidroxibenzoico, clorobutanol, alcohol bencllico, derivados organometalicos de mercurio, polyquartenium como polyquaternium 1, y mezclas de los mismos.

Entre los agentes isotonizantes e isoosmotizantes se pueden citar, por ejemplo, sales inorganicas como cloruro sodico, dextrosa, trehalosa, manitol, aminoacidos, y mezclas de los mismos.

Entre los potenciadores de la absorcion del principio activo se pueden mencionar, por ejemplo, saponina, acido graso, ester de cadena alqullica C1-C4 de un acido graso, pirrolidona, polivinilpirrolidona, acido piruvico, acido piroglutamico, y mezclas de los mismos.

Entre los pollmeros mucoadhesivos se pueden citar, por ejemplo, acido hialuronico, acido poligalacturonico, acido poliacrllico, carboximetilamilosa, carboximetilquitina, sulfato de condroitina, metilcelulosa, gelatina, hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sodica, goma xantana, quitosano, carbopol, policarbofil, goma gellan, carragenatos, alginatos, pectina, poloxamero, y mezclas de los

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mismos.

Entre los pollmeros no mucoadhesivos se puede citar, por ejemplo, alcohol polivinllico.

Entre los quelantes se pueden mencionar, por ejemplo, edetato disodico, y cromoglicolato disodico.

Entre los estabilizantes del principio activo se pueden citar, por ejemplo, acido cltrico, acido ascorbico, glicina, arginina, lisina, y mezclas de los mismos.

Entre los antioxidantes se pueden mencionar, por ejemplo, metabisulfito sodico, bisulfito sodico, acetilcistelna, acido ascorbico, y mezclas de los mismos.

Entre los agentes gelificantes se pueden mencionar, por ejemplo, carbomeros, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, poloxameros, acido poliacrllico, alginato, quitosano, goma xantana, goma gellan, xiloglucanos, y mezclas de los mismos.

Entre las bases de emulsiones y microemulsiones se pueden mencionar, por ejemplo, esteres de acidos grasos y glicerina, alcoholes polioxietilenados, acidos grasos polioxietilenados, derivados polioxietilenados del aceite de ricino, trigliceridos de cadena media C6-C10, y mezclas de los mismos.

Entre las bases de pomadas y unguentos se pueden mencionar, por ejemplo, vaselinas, parafinas, polietilenglicoles de alto peso molecular, siliconas, y mezclas de los mismos.

Entre los compuestos utilizados para preparar las micropartlculas, nanopartlculas, liposomas, o niosomas se encuentran, por ejemplo, el acido polilactico, acido poli(lactico-co-glicolico), poliestirenos, quitosano, albumina, gelatina, lectinas, cianoacrilatos, policaprolactonas, metacrilatos, poliacrilamidas, alginatos, dextranos, agarosa, derivados de sorbitano polioxietilenado, colesterol, alcohol graso polietoxilado, fosfato de dicetilo, fosfatidilcolina y mezclas de los mismos.

La formulacion oftalmica de la invencion puede ser esteril, prescindiendo entonces de los conservantes anteriormente referidos. En este caso la formulacion se puede preparar segun la tecnica farmaceutica que el experto en la materia considere mas adecuada, ya sea

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mediante preparation aseptica, filtration esterilizante, o esterilizacion de la formulation final.

En una realization preferida, la formulation topica oftalmica de la invention es una solution acuosa que comprende:

1) entre el 0,1% y el 0,5% (p/v), preferiblemente entre el 0,2% y el 2%, y mas preferiblemente entre el 0,5% y el 1% de bosentan;

2) entre el 1% y el 49% (p/v), preferiblemente entre el 5% y el 40%, mas preferiblemente entre el 10% y el 30% y aun mas preferiblemente entre el 15% y el 25% de disolvente humectante seleccionado de entre PEG y/o propilenglicol, preferiblemente de entre PEG 4000 y/o propilenglicol;

3) entre el 0,1% y el 10% (p/v), preferiblemente entre el 0,5% y el 5%, y mas preferiblemente entre el 0,75% y el 1,5% de acido borico;

4) entre el 0,5% y el 20% (p/v), preferiblemente entre el 0,75% y el 10%, y mas preferiblemente entre el 1,5% y el 2,5% de glicina; y

5) entre el 0,1% y el 25% (p/v), preferiblemente entre el 0,5% y el 10%, mas preferiblemente entre el 0,75% y el 5%, y aun mas preferiblemente entre el 1% y el 2,5% de una amina seleccionada de entre el grupo formado por trometamol, arginina, lisina, metilglucamina, y mezclas de las mismas, preferiblemente trometamol;

en donde el pH de la solution acuosa esta comprendido entre 3,5 y 10,5, preferiblemente entre 4,0 y 8,5, mas preferiblemente entre 6,0 y 8,2, mas preferiblemente entre 7,0 y 8,1, y aun mas preferiblemente entre 7,5 y 8,0; y en donde los porcentajes (p/v) estan expresados con respecto al volumen total de la formulation. En otra realization mas preferida, la formulation de la invention consiste esencialmente de los componentes anteriores con las cantidades reflejadas, y en forma de solution acuosa.

En otra realization preferida, la formulation topica oftalmica de la invention comprende:

1) entre el 0,1% y el 0,5% (p/v), preferiblemente entre el 0,2% y el 2%, y mas preferiblemente entre el 0,5% y el 1% de bosentan;

2) entre el 1% y el 49% (p/v), preferiblemente entre el 5% y el 40%, mas preferiblemente entre el 10% y el 30% y aun mas preferiblemente entre el 15% y el 25% de disolvente humectante seleccionado de entre PEG y/o propilenglicol, preferiblemente de entre PEG 4000 y/o propilenglicol;

3) el sistema acido cltrico/citrato como sistema regulador del pH;

en donde el pH de la solution acuosa esta comprendido entre 3,5 y 10,5, preferiblemente entre 4,0 y 8,5, mas preferiblemente entre 6,0 y 8,2, mas preferiblemente entre 7,0 y 8,1, y

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aun mas preferiblemente entre 7,5 y 8,0; y en donde los porcentajes (p/v) estan expresados con respecto al volumen total de la formulacion. En otra realization mas preferida, la formulation de la invention consiste esencialmente de los componentes anteriores y en las cantidades reflejadas y en forma de solution acuosa.

El procedimiento de preparation

El procedimiento para preparar la formulacion de la invencion es un procedimiento estandar dentro de la tecnologla farmaceutica.

En el caso de preparar una solucion acuosa, en general, se inicia el proceso introduciendo una parte del agua en el reactor, y a continuation se anade consecutivamente y bajo agitation a temperatura ambiente el o los disolvente(s) humectante(s), los componentes del sistema regulador del pH, y el principio activo. Tambien se puede anadir el principio activo intercalado entre los componentes del sistema regulador del pH, para facilitar su disolucion. Es recomendable que tras cada adicion se agite el contenido del reactor hasta observar la disolucion completa del componente anadido.

Para la preparacion de suspensiones, unguentos, pomadas y emulsiones, y la selection de los excipientes apropiados, se puede recurrir al conocimiento general comun o a manuales de tecnologla farmaceutica bien conocidos por el experto en la materia, como, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edition, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, 2000, o en el artlculo de revision Souza et al., Topical delivery of ocular therapeutics: carrier systems and physical methods, J. Pharm. Pharmacol., 2013, 66, 507-530.

Ensayos de aplicacion

Tal como se describe con detalle en el apartado de Ejemplos, la formulacion topica oftalmica de la invencion se administro directamente a los ojos de ratones diabeticos (db/db). Estos animales tienen una mutation en el gen que codifica para el receptor de leptina y representan un modelo de diabetes tipo 2 inducida por la obesidad, tal como se describe en, por ejemplo, Duval et al., Characterization of db/db mice for efficacy/safety pharmacology assessment of antidiabetic drugs, Safety Pharmacology Society Annual Meeting, Phoenix, 2012.

La formulacion de la invencion se administro durante un perlodo de 14 dlas, dos veces por

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dla, y tras el perlodo de ensayo se observo una menor activacion glial y una reduction de la apoptosis en todas las capas de la retina de los animales tratados con bosentan.

La activacion glial (o gliosis reactiva) es la respuesta inflamatoria de las celulas de la glia (celulas de soporte de las neuronas) que se produce cuando existe una noxa (por ejemplo, diabetes) que dana la retina. La muerte neuronal por apoptosis representa la fase final del proceso neurodegenerativo de la retina.

Esto significa que la administration topica de bosentan evita la neuroinflamacion de la retina y la muerte neuronal inducida por la diabetes.

Sorprendentemente, la formulation topica oftalmologica de la invention permite que el bosentan penetre hasta la retina a traves de la mucosa oftalmica y ejerza su action terapeutica de prevenir y/o tratar la neurodegeneracion de la retina.

A continuation se incluyen algunos ejemplos para ilustrar la presente invencion, si bien no deben ser considerados como limitantes de la misma.

Ejemplos

Los datos correspondientes a los ensayos con animales se presentan como media ± desviacion estandar. Se realizaron comparaciones de variables continuas utilizando la prueba t de Student pareada y no pareada. Las comparaciones de las variables categoricas fueron realizadas mediante la prueba de Fisher. Los niveles de signification estadlstica se fijaron en p <0,05.

Ejemplo 1: Formulacion topica oftalmica

En 75 mL de agua desionizada se disolvieron, mediante agitation magnetica, 20 g de polietilenglicol 4000, se dejo en agitacion hasta su total disolucion. A continuacion se adicionaron 1,5 g de trometamol y se agito durante 15 minutos, comprobando su disolucion total. Seguidamente se adiciono una cantidad de bosentan monohidrato, equivalente a 0,5 g de bosentan, y se dejo en agitacion durante 15 minutos, comprobando su disolucion total. A continuacion se anadieron 2 g de glicina y 1 g de acido borico y se dejo en agitacion hasta su disolucion total.

Se enraso la solucion a 100 mL adicionando agua desionizada en cantidad suficiente. Se filtro la solucion con papel de filtro, y se obtuvo una solucion incolora y transparente, con un pH de 8,06. Se envaso la solucion en frascos goteros de colirio con un volumen de 5 mL.

5

Ejemplos 2 a 7: Composiciones topicas oftalmicas

10

Siguiendo un procedimiento analogo al del Ejemplo 1, se prepararon las composiciones topicas oftalmicas que se describen en la Tabla 1:

TABLA 1

Componente

Ejemplos

2

3 4 5 6 7

Bosentan

0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

PEG 4000

20 - 20 20 20 15

Propilenglicol

- 20 - - - 7,5

Trometamol

- 1,5 - - - 1,5

Arginina

1,5 - - - - -

Lisina

- - - 1,5 - -

Metilglucamina

- - - - 1,5 -

A. borico

1 1 - 1 1 1

Glicina

2 2 - 2 2 2

A. cltrico/citrato sodico

c.s.p. pH 4-8,5

Agua c.s.p.

100 100 100 100 100 100

Las cantidades de los componentes se expresan en gramos, y la cantidad de agua se refiere

a 100 mL.

En todos los casos se obtuvieron composiciones transparentes e incoloras con un pH comprendido entre 5 y 8,5.

5

Ejemplos 8 a 19: Combination de excipientes

10

Siguiendo un procedimiento analogo al del Ejemplo 1, se prepararon las composiciones topicas oftalmicas que se describen en las Tablas 2 y 3:

TABLA 2

Componente

Ejemplos

8

9 10 11 12 13

Bosentan

0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

PEG 400

20 - - - 14 12

PEG 800

- 20 - - - -

PEG 1000

- - 20 - - -

PEG 4000

- - - 20 - -

Propilenglicol

- - - - 7 8

Trometamol

0,2 0,5 1 5 0,2 0,5

Arginina

5 0,2 0,5 1 5 0,2

Lisina

1 5 0,2 0,5 1 5

Metilglucamina

0,5 1 0,5 0,2 0,5 1

Agua c.s.p.

100 100 100 100 100 100

TABLA 3

Ejemplos

Componente

14 15 16 17 18 19

Bosentan

0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

PEG 400

10 8 - - - -

Glicerina

- 6 8 10 12

Propilenglicol

10 12 14 12 10 8

Trometamol

1 5 0,2 0,5 1 5

Arginina

0,5 1 5 0,2 0,5 1

Lisina

0,2 0,5 1 5 0,2 0,5

Metilglucamina

0,5 0,2 0,5 1 0,5 0,2

Agua c.s.p.

100 100 100 100 100 100

Ejemplos 20 a 24: Pomadas lipofilas

5 Siguiendo un procedimiento estandar se prepararon las composiciones topicas oftalmicas en forma de pomadas lipofilas que se describen en la Tabla 4:

TABLA 4

Componente

Ejemplos

20

21 22 23 24

Bosentan

0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

Vaselina llquida

80 70 75 80 60

Vaselina filante

16 26 20 15 34,5

Arginina

1,5 1,5 1,5 1,5 1,5

Glicina

2 2 3 3 5

Ejemplos 25 a 29: Pomadas hidrofilas

Siguiendo un procedimiento estandar se prepararon las composiciones topicas oftalmicas en 5 forma de pomadas hidrofilas que se describen en la Tabla 5:

TABLA 5

Componente

Ejemplos

25

26 27 28 29

Bosentan

0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

PEG 4000

50 60 46 36 50

PEG 400

46 36 50 60 49,5

Arginina

1,5 1,5 3,5 - -

Glicina

2 2 - 3,5 -

Ejemplos 30 a 34: Hidrogeles

10

Siguiendo un procedimiento estandar se prepararon las composiciones topicas oftalmicas en forma de hidrogel que se describen en la Tabla 6:

TABLA6

Componente

Ejemplos

30

31 32 33 34

Bosentan

0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

HPMC5 KM

1 2 3 2 1

Arginina

1,5 1,5 - 1,5 1,5

Trometamol

1,5 - 1,5 - -

5

10

15

20

25

Glicina

2 2 - 2 2

A. cltrico/citrato sodico

c.s.p. pH = 8,5 c.s.p. pH = 7 c.s.p. pH = 7,5 c.s.p. pH = 8 c.s.p. pH = 8,5

Agua

c.s.p. 100 g c.s.p. 100 g c.s.p. 100 g c.s.p. 100 g c.s.p. 100 g

Ejemplo 35: Solution topica oftalmica con nanoparticulas de bosentan

Las nanoparticulas se prepararon mediante la tecnica de evaporation de disolvente.

Se preparo una disolucion de 120 mg de PLGA 50:50 en 60 mL de acetato de etilo. A esta disolucion se le incorporo bajo turboagitacion una disolucion acuosa de 50 mL de agua con 12 mg de bosentan monohidrato y 0,5 mg de alcohol polivinllico. La mezcla resultante se dejo bajo agitation continua y bajo vaclo durante 2 horas. A continuation, la preparation resultante se ultracentrifugo y lavo con agua tres veces, para separar las nanoparticulas del medio.

Las nanoparticulas se secaron en estufa de vaclo y tras su valoracion, se disperso en una disolucion acuosa isotonica la cantidad suficiente para una concentration de 0,5 mg/100 mL de bosentan monohidrato.

Ejemplo 36: Solution topica oftalmica con niosomas de bosentan

Los niosomas se prepararon mediante la tecnica de hidratacion de pellcula delgada.

Se mezclaron el monoestearato de sorbitano polioxietilenado con 20 moles de oxido de etileno, colesterol y el fosfato de dicetilo en una proportion molar 1:0,5:0,1 en un matraz esferico con 10 mL de cloroformo.

Se dejo a 60° C y bajo presion reducida en un rotavapor a 120 rpm hasta evaporation total.

La fina pellcula que se formo en el matraz se hidrato con 12 mL de solution reguladora de fosfatos pH 7,4 que contenla 5 mg de bosentan monohidrato.

5

10

15

20

25

30

35

La suspension de niosomas se dejo enfriar 12h a 4° C y despues se filtro por filtro de nylon de 0,22 pm.

Ejemplo 37: Tratamiento con la formulation topica oftalmica

En los ensayos se emplearon 12 ratas macho db/db de 10 semanas de edad (Harlan Laboratories, Inc.), que fueron divididas en dos grupos: 6 de estas ratas fueron tratadas con una formulacion de la invention, y 6 ratas con una solution de cloruro sodico, tal como se describe mas abajo. Tambien se emplearon 6 ratas no diabeticas (db/+) de la misma edad como grupo control.

Una gota (5 pl) de la formulacion del Ejemplo 1 o una gota de vehlculo (5 pl de una solucion de cloruro sodico del 0,9% en peso/volumen) se administro mediante una jeringa directamente en la superficie corneal superior de cada ojo de las 12 ratas db/db, dos veces al dla, durante 14 dlas.

El dla 15, aproximadamente 1 hora antes de la necropsia, se instilo una gota de formulacion de la invencion o vehlculo en los ojos de los animales. Tras la eutanasia, se extrajeron los ojos de los mismos. A cada animal se le extrajo la neuroretina de uno de los ojos, se congelo en nitrogeno llquido y se mantuvo a una temperatura de -80° C. El otro ojo se fijo con una solucion del 4% de paraformaldehldo, se proceso de forma habitual, y se incluyo en bloques de parafina.

Ejemplo 38: Determination de la activation glial

La activacion glial se evaluo mediante microscopla laser confocal de barrido usando anticuerpos especlficos contra GFAP (protelna acldica fibrilar glial). Las secciones de retina fueron fijadas en metanol acido a una temperatura de -20° C durante 2 min, seguido de tres lavados con solucion reguladora de fosfato (PBS) de 5 min cada uno. Las secciones de retina se permeabilizaron con una solucion reguladora tris (TBS) con Triton® X-100 del 0,025% y se incubaron durante 2 horas, a temperatura ambiente, en una solucion de bloqueo formada por un 1% de BSA (albumina de suero bovino) y un 10% de suero de cabra en PBS del 10%. Las secciones de retina se incubaron con anticuerpo anti-GFAP de conejo (Abcam Ltd, Cambridge, Reino Unido; dilution 1: 500 preparada en solucion de bloqueo) durante la noche,

21

5

10

15

20

25

30

a una temperatura de 4° C en atmosfera humeda. Despues de tres lavados con solucion PBS, de 5 minutos cada uno, las secciones de la retina se incubaron con el anticuerpo secundario Alexa 488 cabra anti-conejo (Invitrogen, San Diego CA, EE.UU.) a una dilucion 1: 200 preparada en solucion de bloqueo. Las secciones de retina se lavaron tres veces con PBS, se contratineron con Hoechst, se montaron con medio de montaje de fluorescencia (Prolong, Invitrogen) y fueron cubiertas con un cubreobjetos. Se registraron imagenes digitales comparativas de las muestras mediante un microscopio confocal laser de barrido (FluoView FV 1000, Olympus) empleando ajustes identicos de brillo y contraste.

Para evaluar el grado de activacion glial se utilizo un sistema de puntuacion basado en la extension de la tincion GFAP descrita en Anderson et al., Glial and endothelial blood-retinal barrier responses to amyloid-fi in the neural retina of the rat, Clin. Ophthalmol., 2008, 2, 801816. Este sistema de puntuacion fue el siguiente:

- Puntuacion 1: solamente region de los pies terminales de las celulas de Muller/capa ganglionar de la retina (GCL);

- Puntuacion 2: region final de los pies terminales de las celulas de Muller/GCL mas algunos procesos proximales;

- Puntuacion 3: region de los pies terminales de las celulas de Muller, pero no se extiende a la capa nuclear externa de la retina (ONL);

- Puntuacion 4: procesos de las celulas de Muller alcanzando la ONL;

- Puntuacion 5: pies terminales y procesos de las celulas de Muller desde la GCL al extremo exterior de ONL.

La puntuacion se evaluo en la retina de cada uno de los animales y en un mlnimo de 10 secciones por retina.

En la Tabla 7 se muestra el grado de activacion glial (porcentaje para cada puntuacion de expresion GFAP) para los tres tipos de animales (control, db/db tratados con vehlculo, y db/db tratados con bosentan):

TABLA 7

Puntuacion

Control (db/+) Vehlculo (db/db) Bosentan (db/db)

1

95 0 85

5

10

15

20

25

2

5 0 15

3

0 59 0

4

0 40 0

5

0 1 0

Se puede observar que, como era de esperar, en los animales no diabeticos, la expresion GFAP se limito mayoritariamente a la capa ganglionar de la retina (GCL) y, por lo tanto, la puntuacion GFAP fue < 2.

Los animales diabeticos tratados con vehlculo presentaron significativamente mayor expresion de GFAP que los ratones no diabeticos de la misma edad. Asl, el 100% de los animales diabeticos presentaron una puntuacion GFAP >3, llegando una parte considerable de los mismos (40%) a una puntuacion de 4. La administration de bosentan durante dos semanas resulto en una disminucion significativa de gliosis reactiva, y la puntuacion de la GFAP de los animales tratados con bosentan fue < 3 en todos los casos, siendo una gran mayorla (85%) inferior a 2.

Por tanto, se puede comprobar la eficacia de la formulation de la invention para reducir la activacion glial.

Ejemplo 39: Analisis inmunohistoquimico para la evaluation de la apoptosis

El analisis inmunohistoquimico para la evaluacion de la apoptosis se efectuo mediante la tincion TUNEL (Terminal transferasa dUTP Nick-End Labeling) empleando el Kit DeadEnd Fluorometric TUNEL System (Promega, Madison, WI, EE.UU.).

Las criosecciones de retina se permeabilizaron mediante incubation durante 2 min en hielo con una solution del 0,1% de Triton® X-100 y 0,1% de citrato de sodio, recien preparada. El anticuerpo secundario fue Alexa 488 cabra anti-conejo (Invitrogen, San Diego CA, EE.UU.). Para la evaluacion por microscopla laser confocal de barrido, la longitud de onda de excitation fue de 488 nm y el rango de detection utilizado de 515 a 565 nm, que corresponde al color verde.

La valoracion se efectuo en la retina de cada uno de los animales y en un mlnimo de 10 secciones por retina.

En la Tabla 8 se presentan los resultados correspondientes al porcentaje de celulas positivas 5 a la tincion TUNEL en las distintas capas de la retina. Se exponen los valores medios y la desviacion estandar, entre parentesis, de los porcentajes para cada capa de retina (capa nuclear externa, ONL; capa nuclear interna, INL; capa ganglionar, GCL):

TABLA 8

Capa retina

Control (db/+) Vehlculo (db/db) Bosentan (db/db)

ONL

0,01 (0,00) 30,85 (2,16) 0 (0,07)

INL

0,01 (0,00) 8,15 (2,10) 0,36 (0,31)

GCL

0,01 (0,00) 36,49 (5,46) 1,42 (0,38)

10

En dicha tabla se puede observar que la tasa de apoptosis en todas las capas de la retina de los animales tratados con la formulacion de la invencion fue analoga a la tasa de los animales control (no diabeticos), y significativamente inferior a la de los animales diabeticos tratados con vehlculo. La signification estadlstica fue p<0,001.

15

Por tanto, se ha comprobado que la administration de la formulacion de la invencion a los animales diabeticos durante dos semanas, condujo a una prevention significativa de la apoptosis en todas las capas de la retina.

Claims (18)

1. REIVINDICACIONES

   1. - Formulacion topica oftalmica, caracterizada porque es una solucion acuosa que comprende:

   1) bosentan como principio activo,

   2) un disolvente humectante farmaceuticamente aceptable seleccionado de entre el grupo formado por polietilenglicol (PEG), propilenglicol, glicerina, y mezclas de los mismos, y

   3) un sistema regulador del pH farmaceuticamente aceptable para ajustar la solucion acuosa a un pH comprendido entre 3,5 y 10,5.
2. 2. - Formulacion segun la reivindicacion 1, caracterizada porque el contenido de bosentan esta comprendido entre el 0,1% y el 5% en (p/v) con respecto al volumen total de la formulacion.
3. 3. - Formulacion segun las reivindicaciones 1 o 2, caracterizada porque comprende un principio activo adicional seleccionado de entre el grupo formado por corticoides, prostaglandinas, factores de crecimiento, factores anti-VEGF, y peptidos.
4. 4. - Formulacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque el disolvente humectante es PEG y/o propilenglicol.
5. 5. - Formulacion segun la reivindicacion 4, caracterizada porque el disolvente

   humectante es PEG 4000 y/o propilenglicol.
6. 6. - Formulacion segun la reivindicacion 5, caracterizada porque el disolvente

   humectante es PEG 4000.
7. 7. - Formulacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque el contenido de disolvente humectante se encuentra comprendido entre el 1% y el 49% en (p/v) con respecto al volumen total de la formulacion.
8. 8. - Formulacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque el sistema regulador del pH se selecciona de entre el sistema formado por acido borico, glicina y una amina seleccionada de entre el grupo formado por trometamol, arginina, lisina, metilglucamina, y mezclas de las mismas; el sistema acido cltrico/citrato, y el sistema fosfato.
9. 9. - Formulacion segun la reivindicacion 8, caracterizada porque el sistema regulador del pH esta formado por acido borico, glicina y trometamol.
10. 10. - Formulacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque incluye otros componentes seleccionados de entre el grupo formado por tensioactivos, cosolventes, viscosizantes, conservantes, agentes isotonizantes, agentes isoosmotizantes, potenciadores de la absorcion del principio activo, pollmeros mucoadhesivos, pollmeros no mucoadhesivos, quelantes, estabilizantes, antioxidantes, y mezclas de los mismos.
11. 11. - Formulacion segun la reivindicacion 1, caracterizada porque comprende:

    1) entre el 0,1% y el 0,5% (p/v) de bosentan;

    2) entre el 1% y el 49% (p/v) de disolvente humectante seleccionado de entre PEG y/o propilenglicol;

    3) entre el 0,1% y el 10% (p/v) de acido borico;

    4) entre el 0,5% y el 20% (p/v) de glicina; y

    5) entre el 0,1% y el 25% (p/v) de una amina seleccionada de entre el grupo formado por trometamol, arginina, lisina, metilglucamina, y mezclas de las mismas,

    en donde el pH de la solucion acuosa esta comprendido entre 3,5 y 10,5; y

    en donde los porcentajes (p/v) estan expresados con respecto al volumen total de la

    formulacion.
12. 12. - Formulacion segun la reivindicacion 1, caracterizada porque comprende:

    1) entre el 0,1% y el 0,5% (p/v) de bosentan;

    2) entre el 1% y el 49% (p/v) de disolvente humectante seleccionado de entre PEG y/o propilenglicol;

    3) el sistema acido cltrico/citrato como sistema regulador del pH;

    en donde el pH de la solucion acuosa esta comprendido entre 3,5 y 10,5; y

    26

    en donde los porcentajes (p/v) estan expresados con respecto al volumen total de la formulacion.
13. 13. - Formulacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el bosentan se incorpora en forma de micropartlculas, nanopartlculas, liposomas o niosomas.
14. 14. - Uso de una formulacion topica oftalmica segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 para la preparation de un medicamento para la prevention y/o tratamiento de la neurodegeneracion de la retina inducida por diabetes y/o el envejecimiento.
15. 15. - Uso segun la reivindicacion 14, para la prevencion y/o el tratamiento de los estadios iniciales de la neurodegeneracion de la retina inducida por diabetes y/o el envejecimiento.
16. 16. - Uso segun la reivindicacion 14, para la prevencion y/o el tratamiento de la neurodegeneracion de la retina inducida por diabetes.
17. 17. - Uso segun la reivindicacion 15, para la prevencion y/o el tratamiento de los estadios iniciales de la neurodegeneracion de la retina inducida por diabetes.
18. 18. - Uso segun cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17, caracterizada porque es una solucion acuosa.