JP6189218B2 - タンパク質吸着材を製造する方法 - Google Patents
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Description
[1]
基体と前記基体の表面に固定された分子鎖とを有するタンパク質吸着材を製造する方法であって、
前記基体と前記基体の表面に固定された前記分子鎖とを有し、前記分子鎖が弱電解性イオン交換基を含んでいる処理前吸着材を加熱する乾熱処理工程と、
前記処理前吸着材を、液体又は蒸気により湿潤化された状態で加熱して前記タンパク質吸着材を得る湿熱処理工程と、
をこの順に備える、方法。
[2]
前記乾熱処理工程の前に、前記基体の表面に前記分子鎖を固定する分子鎖形成工程を更に備える、[1]に記載の方法。
[3]
前記タンパク質吸着材の牛血清アルブミン又はリゾチームの動的吸着容量が5mg/mL以上である、[1]又は[2]に記載の方法。
[4]
前記乾熱処理工程が、前記処理前吸着材を40℃〜130℃で1時間以上加熱することを含む、[1]〜[3]のいずれか一項に記載の方法。
[5]
前記湿熱処理工程が、前記処理前吸着材を、液体又は蒸気により湿潤化された状態で、40〜120℃で30分以上加熱することを含む、[1]〜[4]のいずれか一項に記載の方法。
[6]
前記湿熱処理工程の後、前記タンパク質吸着材の湿潤化された状態が維持される、[1]〜[5]のいずれか一項に記載の方法。
[7]
基体と前記基体の表面に固定された分子鎖とを有し、前記分子鎖が弱電解性イオン交換基を含んでいるタンパク質吸着材であって、
1mol/Lの塩化ナトリウムを含む20mMトリス塩酸緩衝液によって湿潤化された当該タンパク質吸着材を50℃で8時間加熱する検定処理を行ったときに、当該検定処理前後における当該タンパク質吸着材の動的吸着容量の変化率が±5%以内である、タンパク質吸着材。
[8]
前記分子鎖が、前記基体を形成する化合物に共有結合している、[7]に記載のタンパク質吸着材。
[9]
前記基体が多孔質体である、[7]又は[8]に記載のタンパク質吸着材。
[10]
前記基体が中空糸状である、[7]〜[9]のいずれか一項に記載のタンパク質吸着材。
[11]
前記弱電解性イオン交換基が3級アミノ基である、[7]〜[10]のいずれか一項に記載のタンパク質吸着材。
[12]
前記分子鎖が、グラフト重合によって形成された直鎖状の高分子鎖である、[7]〜[11]のいずれか一項に記載のタンパク質吸着材。
[13]
[7]〜[12]のいずれか一項に記載のタンパク質吸着材を備える、モジュール。
[14]
[7]〜[12]のいずれか一項に記載のタンパク質吸着材を備える、カラム。
W0’:グラフト鎖導入前の基体質量(g)
W1:グラフト鎖導入後の全体質量(g)
式(1)において、基体が高分子成形体自体で構成される場合には、W0’=W0となる。
W1:グラフト鎖導入後の全体質量(g)
W2:弱電解性イオン交換基導入後の全体質量(g)
M1:グラフト鎖を形成するモノマー単位の分子量(g/mol)
M2:弱電解性イオン交換基の分子量(g/mol)
1.カラム又はモジュール中の吸着材の場合、それらを解体して一定量の吸着材を取り出す。
2.吸着材に付着した余分な充填保存液を垂れ切った後、吸着材の含液時質量WWを測定する。
3.充填保存液が付着した吸着材をエタノール、水で十分洗浄した後、65℃のオーブンで16時間乾燥させて、吸着材の乾燥質量WDを測定する。
4.湿潤度を吸着材の含液時重量WW、乾燥重量WDより以下の式から計算する。
湿潤度=(WW−WD)/WD
動的吸着容量を測定するための指標タンパク質溶液として、弱電解性陰イオン交換基(ジエチルアミノ基)を含む吸着材用にはBSA(牛血清アルブミン、シグマアルドリッチ製)を、弱電解性陽イオン交換基(カルボン酸基)を含む吸着材用にはリゾチーム(シグマアルドリッチ製)を、共に次の手順で作製する。pH8に調整した20mMトリス塩酸緩衝液(以下、「緩衝液」という。)に、BSA又はリゾチームを1g/Lの濃度で溶解する。得られた指標タンパク質溶液(BSA溶液又はリゾチーム溶液)を0.45μmのフィルターに通過させる。
上記方法で予め動的吸着容量が測定され、塩緩衝液(1mol/Lの塩化ナトリウムを含む20mMトリス塩酸緩衝液、pH8)が充填されたモジュールを準備する。吸着材に指標タンパク質が吸着している場合は、モジュールに塩緩衝液を通液して、指標タンパク質を溶出させる。塩緩衝液が充填されていない場合は、塩緩衝液を十分に通液し、通液後の当該塩緩衝液の伝導度が65mS/cm以上であることを確認する(HORIBA社製CONDUCTIVITY METER B−173)。液流路を密閉したモジュールを、予め50℃に設定したウォーターバス中に投入し、50℃で8時間加熱を続ける(検定処理)。検定処理後のモジュールの動的吸着容量を上記方法により測定する。下記式により、検定処理前の動的吸着容量に対する検定処理後の動的吸着容量の変化の程度を、検定処理前後の変化率(%)として求める。
検定処理前後の変化率=(検定処理後の動的吸着容量/検定処理前の動的吸着容量)×100−100
吸着材(グラフト鎖を有する中空糸多孔膜)の製造
微粉ケイ酸(アエロジルR972グレード)27.2質量部、ジブチルフタレート(DBP)54.3質量部、及びポリエチレン樹脂粉末(旭化成サンファインSH−800グレード)18.5質量部を予備混合し、2軸押出し機で中空糸状に押出して、中空糸状の膜を得た。次に、この膜を塩化メチレン及び水酸化ナトリウム水溶液に順次浸漬することにより、ジブチルフタレート(DBP)及びケイ酸を抽出し、その後、水洗、乾燥処理を施し、ポリエチレンの成形体である中空糸多孔膜を得た。
表1に示すグラフト率、リガンド転化率のグラフト中空糸多孔膜を、実施例1と同様の方法で吸着材として作製した。洗浄用の水で濡れた状態からの乾燥の後、実施例1と同様のモジュールを組み立て、その状態で、強制循環型乾燥機を用いて大気圧下、50℃で48時間加熱することにより吸着材の乾熱処理を行った。乾熱処理後の吸着材に対して、表1に示す条件の湿熱処理を施した。湿熱処理は、吸着材に熱水を循環させる方法により行った。湿熱処理後の吸着材の動的吸着容量A00、A0及びA1を実施例1と同様に測定した。
表1に示すグラフト率、リガンド転化率のグラフト中空糸多孔膜を、実施例1と同様の方法で吸着材として作製した。水による洗浄に続く4時間の加熱により吸着材を乾燥し、乾燥した吸着材を、そのまま強制循環型乾燥機を用いて大気圧下、70℃で12時間加熱することにより吸着材の乾熱処理を行った。乾熱処理の後、実施例1と同様のモジュールを組み立ててから、吸着材に対して表1に示す条件の湿熱処理を施した。湿熱処理後の吸着材の動的吸着容量A00、A0及びA1を実施例1と同様に測定した。
グリシジルメタクリレートに代えてアクリル酸を用い、これをグラフト重合させて、リガンドとしてカルボン酸基(弱電解性陽イオン交換基)を含有するグラフト鎖を有するグラフト中空糸多孔膜を吸着材として作製した。グラフト率は35%であった。洗浄用の水で濡れた状態から40℃に加熱して吸着材を乾燥し、乾燥した吸着材をそのまま強制循環型乾燥機を用いて大気圧下、70℃で4時間加熱することにより、吸着材の乾熱処理を行った。乾熱処理の後、実施例1と同様のモジュールを組み立ててから、吸着材に対して表1に示す条件の湿熱処理を施した。湿熱処理後の吸着材の動的吸着容量A00、A0及びA1を、指標タンパク質溶液としてリゾチーム溶液を用いたこと以外は実施例1と同様に測定した。
ナイロン6(0.2g)、塩化メチレン(10g)、蟻酸0.1gを室温で撹拌し、そこにt−ブチル次亜塩素酸ナトリウム2gを添加し、ナイロン6が溶解するのを待った。得られた溶液にさらに塩化メチレンを、全体質量が100gとなるように加えて、被膜形成のためのN−クロロ−ナイロン6溶液を得た。
湿熱処理を行わなかったことの他は実施例1と同様にしてモジュールを作製し、その動的吸着容量A00、A0及びA1を測定した。
乾熱処理を行わなかったことの他は実施例1と同様にしてモジュールを作製し、その動的吸着容量A00、A0及びA1を測定した。
表2に示すグラフト率、リガンド転化率のグラフト中空糸多孔膜を、実施例1と同様の方法で吸着材として作製した。それぞれの吸着材を用いて実施例1と同様のモジュールを組み立てた。得られたモジュールに対して、表2に示す条件の乾熱処理、湿熱処理を施した他は実施例1と同様にして、吸着材の吸着容量A0及びA1を測定した。実施例8の湿熱処理は、ウォーターバスによる加熱に代えて、吸着材に熱水を循環させる方法により行った。実施例10の湿熱処理は、ウォーターバスによる加熱に代えて、90℃の湯浴に漬けた状態のモジュールを90℃の乾燥機中で6時間加熱する方法により行った。実施例13の湿熱処理は、121℃に設定したオートクレーブ中で、モジュール内を湿熱処理液としての塩緩衝液で濡れた状態から余剰液を垂れ切り、ハウジングの全てのノズルを開放した状態にて、モジュールを加圧しながらモジュールを加熱する方法により行った。
Claims (6)
- 基体と前記基体の表面に固定された分子鎖とを有するタンパク質吸着材を製造する方法であって、
前記基体と前記基体の表面に固定された前記分子鎖とを有し、前記分子鎖が弱電解性イオン交換基を含んでいる処理前吸着材を加熱する乾熱処理工程と、
前記処理前吸着材を、液体又は蒸気により湿潤化された状態で加熱して前記タンパク質吸着材を得る湿熱処理工程と、をこの順に備え、
前記分子鎖が、グラフト重合によって形成された直鎖状の高分子鎖であり、前記基体に
対する前記分子鎖の結合率であるグラフト率が5〜200%であり、
1mol/Lの塩化ナトリウムを含む20mMトリス塩酸緩衝液によって湿潤化された当該タンパク質吸着材を50℃で8時間加熱する検定処理を行ったときに、当該検定処理前後における当該タンパク質吸着材の動的吸着容量の変化率が±5%以内である、
方法。 - 前記乾熱処理工程の前に、前記基体の表面に前記分子鎖を固定する分子鎖形成工程を更に備える、請求項1に記載の方法。
- 前記タンパク質吸着材の牛血清アルブミン又はリゾチームの動的吸着容量が5mg/mL以上である、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記乾熱処理工程が、前記処理前吸着材を40℃〜130℃で1時間以上加熱することを含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記湿熱処理工程が、前記処理前吸着材を、液体又は蒸気により湿潤化された状態で、40〜120℃で30分以上加熱することを含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記湿熱処理工程の後、前記タンパク質吸着材の湿潤化された状態が維持される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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