JP6018319B2

JP6018319B2 - 置換トリアゾールボロン酸化合物

Info

Publication number: JP6018319B2
Application number: JP2015545745A
Authority: JP
Inventors: リンチ，スティーヴン・エム; ナイトハルト，ヴェルナー; プランシャー，ジャン−マルク; シュルツ−ガーシュ，ターニャ
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2012-12-03
Filing date: 2013-11-29
Publication date: 2016-11-02
Anticipated expiration: 2033-11-29
Also published as: EP2925765A1; CA2893460A1; CN104822689B; CN104822689A; KR20150090248A; HK1212992A1; US9464098B2; EP2925765B1; US20150329565A1; JP2016502546A; WO2014086664A1; KR101782235B1; RU2015123499A; RU2625801C2; MX2015006715A; CA2893460C; ES2615744T3; BR112015012909A2

Description

発明の分野
本発明は、炎症性疾患又は障害の哺乳動物における治療及び／又は予防のために有用な有機化合物、特に、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患（ＩＢＤ）の処置のための置換トリアゾールボロン酸化合物、それらの製造、それらを含有する医薬組成物、並びにＬＭＰ７阻害薬としてのそれらの使用に関する。

発明の背景
ＬＭＰ７は、Ｔ／Ｂリンパ球及び単球などの免疫細胞、並びにＩＦＮ−γ及びＴＮＦαを含む炎症性サイトカインに曝露されている非免疫細胞において主に発現される、免疫プロテアソームの必須成分である。免疫プロテアソームは、抗原性ペプチドレパートリーの生成及びＭＨＣクラスＩ拘束性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の形成において重要な役割を果たしている。Moebius J. et al. European Journal of Immunology. 2010; Basler, M. et al. Journal of Immunology. 2004. 3925-34。新たなデータは、ＬＭＰ７がまた、ＭＨＣクラスＩ媒介性の抗原提示の調節以外に、炎症性サイトカインの産生及び免疫細胞機能を調節することも示唆した。

小分子ＬＭＰ７阻害薬であるＰＲ−９５７は、Ｔｈ１／１７の分化、Ｂ細胞のエフェクター機能及び炎症性サイトカイン（ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２３）の産生を強く遮断することが示されている。Muchamuel T. et al. Natural Medicine. 2009. 15, 781-787; Basler M. et al. Journal of Immunology. 2010, 634-41。

加えて、ＰＲ−９５７によるＬＭＰ７遮断は、いくつかの前臨床自己免疫疾患モデルにおいて治療的効果をもたらすことが実証されている。最初に、ＰＲ−９５７は、マウスＣＡＩＡ及びＣＩＡ関節炎モデルにおいて、有意に低下した炎症及び骨侵食の特徴と共に、疾患スコアを有意に減少させることが実証された。Muchamuel T. et al. Natural Medicine. 2009. 15, 781-787。加えて、ＰＲ−９５７は、ＭＲＬ／ｌｐｒループス傾向のマウスモデルにおいて形質細胞の数及び抗−ｄｓＤＮＡＩｇＧのレベルを減少させ、これらのマウスにおける疾患進行を抑制した。Ichikawa HT, et al. Arthritis & Rheumatism. 2012. 64, 493-503。さらに、ＰＲ−９５７は、マウスのＤＳＳ誘発大腸炎モデルにおいて炎症及び組織破壊を低下させた。Basler M. et al. Journal of Immunology. 2010, 634-41。最後に、ＬＭＰ７ノックアウトマウスはまた、ＩＢＤモデルが疾患から守られることが示された。Schmidt N. et al. Gut 2010. 896-906。

まとめると、データは、ＬＭＰ７活性がＢ／Ｔリンパ球の機能及び炎症性サイトカインの産生（その全ては、関節リウマチ、ループス及びＩＢＤの病因における臨床的に確証された標的／経路である）と密接な関係があることを強く示唆している。従って、既存のデータは、自己免疫疾患の適応のためにＬＭＰ７を標的化することについての強い論理的根拠を提供している。自己免疫のような慢性疾患における共有結合性阻害薬の長期使用に伴う潜在的な負担のために、可逆的共有結合性の又は非共有結合性の小分子ＬＭＰ７阻害薬が自己免疫疾患の適応のために大変望ましい。

発明の概要
本発明は、式（Ｉ）：

［式中、
Ｒ^１、Ｒ^１’及びＲ^１’’は、互いに独立して、水素、アルコキシ、ハロゲン又は−ＣＦ_３であり；そして
Ｒ^２は、Ｃ_１−７アルキル又はフェニルである］
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

本発明はまた、当該化合物を含む医薬組成物、当該化合物を使用する方法、及び当該化合物を調製する方法を提供する。

引用又は依拠される文献は全て、参照によって本明細書に明示的に組み入れられる。

発明の詳細な説明
特に指示のない限り、本明細書及び特許請求の範囲において使用される以下の特定の用語及び表現は、次のように定義される：

用語「部分」は、別の原子又は分子に１つ又は複数の化学結合によって連結されて、それによって分子の一部を形成する、原子又は化学的に結合された原子群を指す。例えば、式Ｉの可変部Ｒは、式Ｉの核構造に共有結合によって連結された部分を指す。

１つ又は複数の水素原子を有する特定の部分に関して、用語「置換されている」は、その部分の水素原子の少なくとも１つが別の置換基又は部分に置き換わっていることを指す。例えば、用語「ハロゲンによって置換されているＣ_１−７アルキル」は、Ｃ_１−７アルキル（以下に定義される）の１つ又は複数の水素原子が１つ又は複数のハロゲン原子に置き換わっていることを指す（例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、クロロメチルなど）。

用語「アルキル」は、１〜２０個の炭素原子を有する、脂肪族の直鎖又は分岐鎖飽和炭化水素部分を指す。特定の実施態様において、アルキルは、１〜１０個の炭素原子、より特定すると、１〜７個の炭素原子を有する。

用語「Ｃ_１−７アルキル」は、１〜７個の炭素原子を有するアルキル部分を指す。Ｃ_１−７アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec−ブチル及びtert−ブチルを含む。

用語「アルコキシ」は、式−Ｏ−Ｒ’（式中、Ｒ’は、アルキル基である）で表される基を示す。アルコキシ部分の例は、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ及びtert−ブトキシを含む。

「アリール」は、単環式、二環式又は三環式の芳香族環を有する、一価の環式芳香族炭化水素部分を意味する。アリール基は、本明細書において定義されるように場合により置換されていてよい。アリール部分の例は、特に限定されないが、フェニル、ナフチル、フェナントリル、フルオレニル、インデニル、ペンタレニル、アズレニル、オキシジフェニル、ビフェニル、メチレンジフェニル、アミノジフェニル、ジフェニルスルフィジル、ジフェニルスルホニル、ジフェニルイソプロピリデニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾフラニル、ベンゾジオキシリル、ベンゾピラニル、ベンゾオキサジニル、ベンゾオキサジノニル、ベンゾピペラジニル（benzopiperadinyl）、ベンゾピペラジニル（benzopiperazinyl）、ベンゾピロリジニル、ベンゾモルホリニル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニルなど（各々場合により置換されているその部分水素化誘導体を含む）を含む。

用語「ハロ」、「ハロゲン」及び「ハロゲン化物」は、互換的に使用され得、置換基フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを指す。

特に指示のない限り、用語「水素」又は「ヒドロ」は、Ｈ_２ではなく、水素原子（−Ｈ）の部分を指す。

特に指示のない限り、用語「式の化合物（a compound of the formula）」又は「式の化合物（a compound of formula）」又は「式の化合物（compounds of the formula）」又は「式の化合物（compounds of formula）」は、その式によって定義される化合物の属（genus）から選択される任意の化合物（特に指定のない場合は、任意のそのような化合物の任意の薬学的に許容し得る塩又はエステルを含む）を指す。

用語「薬学的に許容し得る塩」は、遊離塩基又は遊離酸の生物学的効果及び特性を保持し、生物学的にもその他の面でも望ましくないことはない塩を指す。塩は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など、好ましくは塩酸）及び有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、サリチル酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、Ｎ−アセチルシステインなど）と形成され得る。加えて、塩は、遊離酸への無機塩基又は有機塩基の付加によっても調製され得る。無機塩基から誘導される塩は、特に限定されないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム及びマグネシウム塩などを含む。有機塩基から誘導される塩は、特に限定されないが、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リシン、アルギニン、Ｎ−エチルピペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂などの、第一級、第二級及び第三級アミン、天然の置換アミンを含む置換アミン、環状アミン並びに塩基性イオン交換樹脂の塩を含む。

本発明の化合物は、薬学的に許容し得る塩の形態で存在することができる。本発明の化合物はまた、薬学的に許容し得るエステル（すなわち、プロドラッグとして使用される式Ｉの酸のメチル及びエチルエステル）の形態で存在することもできる。本発明の化合物はまた、溶媒和、例えば水和され得る。溶媒和は、製造プロセスの過程で達成され得るか、又は当初無水であった式Ｉの化合物の吸湿性の結果として起こり得る（水和）。

同じ分子式を有するがそれらの原子の結合の性質若しくは順序又はそれらの原子の空間的配列が異なる化合物は「異性体」と呼ばれ、本発明の範囲内である。それらの原子の空間的配列が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。ジアステレオマーは、１つ又は複数のキラル中心において反対の立体配置を有する立体異性体であるが、エナンチオマーではない。互いに鏡像であるが重ね合わせることができない、１つ又は複数の不斉中心を有する立体異性体は、「エナンチオマー」と呼ばれる。化合物が不斉中心を有するとき、例えば、炭素原子が４個の異なる基に結合している場合、１対のエナンチオマーが可能である。エナンチオマーは、その不斉中心（１つ又は複数）の絶対配置によって特徴付けられ得、Cahn、Ingold及びPrelogのＲ及びＳ順位則によって又はその分子が偏光面を回転させる様式によって記載され、右旋性又は左旋性として（すなわち、それぞれ、（＋）−異性体又は（−）−異性体として）表示される。キラル化合物は、個々のエナンチオマー又はそれらの混合物のいずれかとして存在することができる。エナンチオマーを同じ割合で含有する混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。

化合物の用語「治療有効量」は、疾患の症状を予防、緩和又は改善するために、あるいは処置される被検体の生存期間を延長するために効果的な化合物の量を意味する。治療有効量の決定は、当技術分野における技能の範囲内である。本発明に係る化合物の治療有効量又は投与量は、広い範囲内で変えることができ、当技術分野において公知の様式で決定され得る。そのような投与量は、投与される特定の化合物（複数）、投与経路、処置される病態及び処置される患者を含む、それぞれの特定の症例における個別の要件に対して調整されるだろう。一般に、およそ７０Kgの体重の成人への経口又は非経口投与の場合、約０．１mg〜約５，０００mg、１mg〜約１，０００mg又は１mg〜１００mgの一日投与量が適切であり得るが、必要であればその下限及び上限を超えてもよい。一日投与量は、単回用量として又は分割用量で投与され得るか、又は非経口投与の場合には点滴として与えられ得る。

用語「薬学的に許容し得る担体」は、溶媒、分散媒体、被覆剤、抗菌及び抗真菌剤、等張剤並びに吸収遅延剤を含む、薬剤の投与と適合性のある任意の及び全ての材料、並びに薬剤の投与と適合性のある他の材料及び化合物を含むことが意図される。任意の慣用の媒体又は薬剤が活性化合物と適合性でない場合を除いて、本発明の組成物におけるその使用が考慮される。また、補助活性化合物を当該組成物中に組み込むこともできる。

本発明の組成物の調製に有用な薬学的担体は、固体、液体又は気体であり得；従って、当該組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、粉剤、腸溶性コーティング製剤又は他の保護製剤（例えば、イオン交換樹脂に結合しているか又は脂質−タンパク質小胞に封入されている）、徐放性製剤、液剤、懸濁剤、エリキシル剤、エアロゾル剤などの形態をとることができる。担体は、石油、動物、植物又は合成起源の油を含む様々な油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などから選択され得る。水、生理食塩水、デキストロース水溶液及びグリコールが、特に（血液と等張である場合）注射用液剤のための好ましい液体担体である。例えば、静脈内投与用の製剤は、固体活性成分（複数）を水に溶解させて水溶液を生成し、その溶液を滅菌することにより調製される、活性成分（複数）の無菌水溶液を含む。好適な薬学的賦形剤は、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、乳糖、タルク、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどを含む。当該組成物には、例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤又は乳化剤、浸透圧調整用の塩、緩衝剤などの慣用の薬学的添加剤が付与され得る。好適な薬学的担体及びそれらの製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin に記載されている。そのような組成物は、いずれにしても、レシピエントへ適切に投与するための適切な投与剤形を調製するために、有効量の活性化合物を好適な担体と共に含有するだろう。

本発明の方法の実施において、有効量の本発明の化合物のいずれか１つ又は本発明の化合物のいずれかの組み合わせ又はその薬学的に許容し得る塩若しくはエステルは、当技術分野において公知の通常の許容し得る方法のいずれかを介して、単独又は組み合わせのいずれかで投与される。従って、当該化合物又は組成物は、経口（例えば、口腔）、舌下、非経口（例えば、筋肉内、静脈内又は皮下）、直腸（例えば、坐剤又は洗浄剤によって）、経皮（例えば、皮膚エレクトロポレーション）又は吸入（例えば、エアロゾルによって）によって、錠剤及び懸濁剤を含む、固体、液体又は気体の投与剤形で投与され得る。投与は、適宜、単回の単位投与剤形の持続的治療で、又は単回投与治療で実施され得る。当該治療組成物はまた、パモ酸などの脂溶性の塩と併せた油乳剤又は分散剤の形態であっても、皮下又は筋肉内投与用の生物分解性の徐放性組成物の形態であってもよい。

詳細には、本発明は、式（Ｉ）：

別の実施態様において、本発明は、Ｒ^１、Ｒ^１’及びＲ^１’’が、互いに独立して、水素、メトキシ、フッ素又は−ＣＦ_３である、式（Ｉ）の化合物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、Ｒ^１、Ｒ^１’又はＲ^１’’の１つが、水素であり、そして、他の２つが、互いに独立して、アルコキシ、ハロゲン又は−ＣＦ_３である、式（Ｉ）の化合物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、Ｒ^１、Ｒ^１’又はＲ^１’’の１つが、水素であり、そして、他の２つが、互いに独立して、メトキシ、フッ素又は−ＣＦ_３である、式（Ｉ）の化合物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、Ｒ^１、Ｒ^１’又はＲ^１’’の１つがオルト位のメトキシであり、１つがメタ位のメトキシであり、そして、１つがパラ位のメトキシである、式（Ｉ）の化合物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、Ｒ^１、Ｒ^１’又はＲ^１’’の１つがオルト位のフルオロであり、１つがメタ位の水素であり、そして、１つがパラ位の−ＣＦ_３である、式（Ｉ）の化合物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、Ｒ^１、Ｒ^１’又はＲ^１’’の１つがオルト位のメトキシであり、１つがメタ位の水素であり、そして、１つがパラ位の−ＣＦ_３である、式（Ｉ）の化合物を提供する。別の実施態様において、本発明は、Ｒ^２がメチルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、Ｒ^２がフェニルである、式（Ｉ）の化合物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、以下：
（Ｒ）−３−メチル−１−（１−（２−（２，３，４−トリメトキシベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）ブチルボロン酸；
（Ｒ）−２−フェニル−１−（１−（２−（２，３，４−トリメトキシベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）エチルボロン酸；
（Ｒ）−１−（１−（２−（２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）−２−フェニルエチルボロン酸；若しくは
（Ｒ）−１−（１−（２−（２−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）−２−フェニルエチルボロン酸
である、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。

別の実施態様において、本発明は、治療有効量の式（Ｉ）に係る化合物と薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、治療活性物質として使用するための、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための、式（Ｉ）に係る化合物の使用を提供する。

別の実施態様において、本発明は、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための医薬の調製のための、式（Ｉ）に係る化合物の使用を提供する。

別の実施態様において、本発明は、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための、式（Ｉ）に係る化合物を提供する。

別の実施態様において、本発明は、関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患（ＩＢＤ）から選択される炎症性疾患又は障害を処置するための方法であって、治療有効量の式（Ｉ）に係る化合物をそれを必要とする被検体に投与する工程を含む方法を提供する。

別の実施態様において、本明細書において上述される発明が提供される。

合成
これらの化合物を調製する際に使用される出発物質及び試薬は、一般に、販売業者（例えば、Aldrich Chemical Co.）から入手可能であるか、又はFieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-15; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes 1-5 and Supplementals; 及び Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40 などの参考文献に記載される手順に従って、当業者に公知の方法によって調製されるかのいずれかである。

以下の合成反応スキームは、本発明の化合物が合成され得るいくつかの方法を単に例示するものであり、これらの合成反応スキームに対して様々な変形を行うことができ、これらは当業者であれば本出願に含まれる開示を参考に示唆されるであろう。

合成反応スキームの出発物質及び中間体は、所望であれば、特に限定されないが、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどを含む慣用の技術を使用して単離及び精製され得る。そのような物質は、物理定数及びスペクトルデータを含む慣用の手段を使用して特徴付けられ得る。

特に指定のない限り、本明細書に記載の反応は、好ましくは、不活性雰囲気下、大気圧で、約−７８℃〜約１５０℃、より好ましくは、約０℃〜約１２５℃の反応温度範囲で、最も好ましくかつ好都合には、ほぼ室温（又は周囲温度）、例えば、約２０℃で実施される。

本発明の化合物は、多数の慣用の手段によって製造され得る。例えば、これらは、以下のスキームに概説されるプロセスに従って製造され得る。

スキーム１に示すように、臭化物１を、アジ化ナトリウムを使用して、アジ化物２に変換することができ、次に、硫酸銅（ＩＩ）及びアスコルビン酸ナトリウムの存在下で、プロピオル酸メチル３と反応させることで、１，２，３−トリアゾール４を位置選択的に与えることができる。Ｎ−Ｂｏｃ保護基は、ＨＣｌ又はＴＦＡなどの強酸を使用して除去され得る。得られたアミン塩５を、ＨＡＴＵなどの活性化試薬を使用して、可変的に置換された酸６とカップリングさせることで、エステル７を提供することができる。塩基性条件下での加水分解は、酸８を与える。Ｒ^１、Ｒ^１’及びＲ^１’’は、互いに独立して、例えば、水素、アルコキシ、ハロゲン又は−ＣＦ_３であり得る。Ｒ^２は、例えば、Ｃ_１−７アルキル又はフェニルであり得る。

スキーム２に従って、酸８を、ＨＡＴＵ又はＴＢＴＵなどの活性化試薬を使用して、可変的に置換されたピナンジオールボロン酸エステル９とカップリングさせることで、トリアゾール１０を与えることができる。イソブチルボロン酸とのエステル交換は、所望のボロン酸１１を提供することができる。Ｒ^１、Ｒ^１’及びＲ^１’’は、互いに独立して、例えば、水素、アルコキシ、ハロゲン又は−ＣＦ_３であり得る。Ｒ^２は、例えば、Ｃ_１−７アルキル又はフェニルであり得る。

実施例
本明細書においては、特定の例示的実施態様を記述及び記載しているが、本発明の化合物は、適切な出発物質を使用し、本明細書に一般的に記載される方法に従って、かつ／又は当業者に利用可能な方法によって調製され得る。空気感受性の試薬が関与する反応は全て、不活性雰囲気下で実施した。試薬は、特に断りのない限り、販売業者から入手したものをそのまま使用した。

中間体１
１−（２−アミノ−エチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル塩酸塩
２−（Ｂｏｃ−アミノ）エチルブロミド（５．０ｇ、２２．３mmol）をＤＭＦ５０mlに溶解し、アジ化ナトリウム（１．６ｇ、２４．５mmol）を加えた。反応混合物を８０℃で１２時間撹拌した。反応混合物をジエチルエーテル（２００ml）で希釈し、水（３×）及びブライン（２×）で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、（２−アジド−エチル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル３．９ｇ（９４％）を無色の粘性油状物として与えた。GC/MS: (M+H)⁺ = 187.191。

（２−アジド−エチル）−カルバミン酸tert−ブチルエステル（３．９ｇ、２０．８mmol）及びプロピオル酸メチル（３．５ｇ、３．７１ml、４１．７mmol）をtert−ブタノール５０mlに溶解した。１．０M 硫酸銅（ＩＩ）五水和物水溶液（４．１７ml、４．１７mmol）、続いて、１．０M アスコルビン酸ナトリウム水溶液（１６．７ml、１６．７mmol）を加えた。反応混合物を室温で６０時間撹拌した。反応混合物を水１５０mlでクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×８０ml）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃ／ジクロロメタン（勾配：０〜４０％ＥｔＯＡｃ）を用いた、シリカゲル７０ｇのクロマトグラフィーにかけた。生成物を含有する全ての画分を合わせ、濃縮して、１−（２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル３．２ｇ（５７％）をオフホワイトの固体として与えた。LC/HR-MS: (M+H)⁺ = 271.1401。

１−（２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル（１．７５ｇ、６．４７mmol）をジオキサン中の４N ＨＣｌ（１６．２ml、６４．７mmol）に溶解し、室温で３時間撹拌した。溶媒を蒸発させて、１−（２−アミノ−エチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル塩酸塩１．３２ｇ（９９％）を白色の固体として与えた。

実施例１
（Ｒ）−３−メチル−１−（１−（２−（２，３，４−トリメトキシベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）ブチルボロン酸

フラスコに、２，３，４−トリメトキシ安息香酸（１．２９ｇ、６．０８mmol）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド５７ml及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．９ml、１６．９mmol）を投入した。反応混合物を０℃まで冷却した。ＨＡＴＵ（２．８３ｇ、７．４５mmol）を加え、反応混合物を０℃で１時間撹拌した。１−（２−アミノ−エチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル塩酸塩（１．４ｇ、６．７８mmol）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を１．０M ＨＣｌでクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＫＨＣＯ_３水溶液、水及びブラインで洗浄し、次に、濃縮し、高真空下で乾燥させた。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートして、１−［２−（２，３，４−トリメトキシ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステルを明褐色の半固体として与え、これをさらに精製することなく使用した。

フラスコに、１−［２−（２，３，４−トリメトキシ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル（２．２２ｇ、６．１mmol）及びメタノール６０mlを投入した。次に、１．０M ＮａＯＨ（２４ml、２４mmol）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を部分的に濃縮し、次に、水にとり、１．０M ＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃ２００mlで２回抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をジクロロメタン７０ml、ＥｔＯＡｃ４０ml及びメタノール１０mlにとり、次に、約３０mlの容量まで濃縮した。ジエチルエーテルを加え、懸濁液を濾過し、ジエチルエーテルですすぎ、高真空下で乾燥させて、１−［２−（２，３，４−トリメトキシ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸１．８ｇ（８４％）を白色の固体として与えた。LC/HR-MS: (M+H)⁺ = 351.1293。

１−［２−（２，３，４−トリメトキシ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸（１６０mg、０．４６mmol）、ＴＢＴＵ（１６１mg、０．５０mmol）及び（Ｒ）−ＢｏｒｏＬｅｕ（＋）−ピナンジオール−ＨＣｌ（１３８mg、０．４６mmol）を０℃でジクロロメタン６mlに懸濁した。ジクロロメタン１mlに溶解したＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１７ml、１．００mmol）を０℃で１５分間かけて滴下した。反応混合物を０℃及び室温で３時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン５０mlで希釈し、１M ＨＣｌ５０ml、２M ＫＨＣＯ_３５０ml及び水５０mlで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃ／ジクロロメタン（勾配：０〜５０％ＥｔＯＡｃ）を用いた、シリカゲル２０ｇのクロマトグラフィーにかけた。生成物を含有する全ての画分を合わせ、濃縮して、１−［２−（２，３，４−トリメトキシ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸［（Ｒ）−３−メチル−１−（（１Ｓ，２Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラ−トリシクロ［６．１．１．０^２，６］デカ−４−イル）−ブチル］−アミド１１１mg（４１％）を白色の泡状物として与えた。LC/HR-MS: (M+H)⁺= 460.2359。

１−［２−（２，３，４−トリメトキシ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸［（Ｒ）−３−メチル−１−（（１Ｓ，２Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラ−トリシクロ［６．１．１．０^２，６］デカ−４−イル）−ブチル］−アミド（１０９mg、０．１８mmol）、イソブチルボロン酸（５２mg、０．５１mmol）及び２N ＨＣｌ（０．１５ml、０．３０mmol）をメタノール１．５ml及びヘプタン１．５mlに溶解した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。メタノール層を分離し、ヘプタン３mlで２回洗浄した。メタノール層をＥｔＯＡｃ７mlで処理し、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ７mlにとり、濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートした。得られた白色の固体をジクロロメタン及び水で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートして、（Ｒ）−３−メチル−１−（１−（２−（２，３，４−トリメトキシベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）ブチルボロン酸２１mg（２５％）を白色の固体として与えた。LC/HR-MS: (M-H)^-=462.2161。

実施例２
（Ｒ）−２−フェニル−１−（１−（２−（２，３，４−トリメトキシベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）エチルボロン酸

１０mlの丸底フラスコ中、１−（２−（２，３，４−トリメトキシベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボン酸（１５０mg、０．４３mmol）及び（Ｒ）−ＢｏｒｏＰｈｅ−（＋）−ピナンジオール−ＨＣｌ（１５８mg、０．４７mmol）をＤＭＦ３mlに溶解し、０℃まで冷却した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１９ml、１．０９mmol）を０℃で滴下し、続いて、ＨＡＴＵ（１７９mg、０．４７mmol）を加えた。添加が完了した後、氷浴を取り外し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応物を水でクエンチし、１：１ジエチルエーテル／ＥｔＯＡｃ（４０ml）で２回抽出した。有機層を水で２回、ブラインで１回洗浄し、次に、合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃ／ジクロロメタン（勾配：０〜５０％ＥｔＯＡｃ）を用いた、シリカゲル２５ｇのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含有する全ての画分を合わせ、濃縮して、１−［２−（２，３，４−トリメトキシ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸［（Ｒ）−２−フェニル−１−（（１Ｓ，２Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラ−トリシクロ［６．１．１．０^２，６］デカ−４−イル）−エチル］−アミド１５３mg（５７％）をオフホワイトの泡状物として与えた。LC/MS: (M-H)^-= 630。

１０mlの丸底フラスコ中、１−［２−（２，３，４−トリメトキシ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸［（Ｒ）−２−フェニル−１−（（１Ｓ，２Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラ−トリシクロ［６．１．１．０^２，６］デカ−４−イル）−エチル］−アミド（１５１mg、０．２４mmol）及びイソブチルボロン酸（７０mg、０．６９mmol）をメタノール１．２ml及びヘキサン２．４mlに溶解した。１．０M 塩酸（０．６０ml、０．６０mmol）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応物をメタノール１０mlで希釈し、ヘキサンで抽出した。ヘキサン層をメタノール１０mlで逆抽出した。メタノール層をヘキサンで２回洗浄し、次に、合わせ、濃縮した。残渣をジクロロメタン２０mlに溶解し、水２mlと飽和ＮａＨＣＯ_３溶液２mlの混合物で洗浄した。水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、ＭｅＯＨ／ジクロロメタン（勾配：０〜１０％ＭｅＯＨ、次に、１０％ＭｅＯＨ／クロロホルム）を用いた、シリカゲル４ｇのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含有する全ての画分を合わせ、濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートして、（Ｒ）−２−フェニル−１−（１−（２−（２，３，４−トリメトキシベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）エチルボロン酸２４mg（２０％）を白色の粉状物として与えた。LC/MS: (M+Na)⁺= 520; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) □: 8.23 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.88 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.72 (br. s., 1H), 7.18 - 7.33 (m, 5H), 6.77 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.71 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.98 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.36 (br. s., 1H), 3.06 (dd, J = 14.1, 4.8 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 14.1, 9.3 Hz, 1H)。

実施例３
（Ｒ）−１−（１−（２−（２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）−２−フェニルエチルボロン酸

２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）安息香酸（２．３１ｇ、１１．１mmol）をＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド１６０mlに溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．７５ml、２７．８mmol）を加え、反応物を０℃まで冷却し、ＨＡＴＵ（４．６４ｇ、１２．２mmol）を加えた。０℃で１時間撹拌後、１−（２−アミノ−エチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル塩酸塩（２．２９ｇ、１１．１mmol）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次に、１M ＨＣｌでクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＫＨＣＯ_３水溶液、水及びブラインで洗浄し、次に、濃縮した。粗残渣をジエチルエーテルでトリチュレートして、１−［２−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル２．７９ｇ（７０％）をオフホワイトの固体として与えた。LC/HR-MS: (M+H)⁺ = 361.0921。

１−［２−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル（２．７９ｇ、７．７４mmol）をＭｅＯＨ６０mlに懸濁した。粘性のスラリーに、１．０M ＮａＯＨ（３１ml、３１．０mmol）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、その間に反応物は均質になった。ＭｅＯＨを蒸発させ、次に、残渣を水にとり、ＨＣｌ水溶液で酸性化し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、少量の固体を与えた。水層を合わせ、ＮａＯＨ水溶液で塩基性化し、濃縮した。残渣を０℃まで冷却し、濃ＨＣｌで酸性化した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、高真空下で乾燥させた。２つのバッチを合わせ、１−［２−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸２．０ｇ（７５％）を白色の固体として与えた。LC/HR-MS: (M+H)⁺ = 347.0760。

１０mlの丸底フラスコ中、１−（２−（２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボン酸（１２５mg、０．３６mmol）及び（Ｒ）−ＢｏｒｏＰｈｅ−（＋）−ピナンジオール−ＨＣｌ（１３３mg、０．４０mmol）をＤＭＦ２．５mlに溶解し、０℃まで冷却した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１６ml、０．９２mmol）を０℃で滴下し、続いて、ＨＡＴＵ（１５１mg、０．４０mmol）を加えた。添加が完了した後、氷浴を取り外し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応物を水でクエンチし、１：１ジエチルエーテル／ＥｔＯＡｃ（４０ml）で２回抽出した。有機層を水で２回、ブラインで１回洗浄し、次に、合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃ／ジクロロメタン（勾配：０〜４０％ＥｔＯＡｃ）を用いた、シリカゲル２５ｇのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含有する全ての画分を合わせ、濃縮して、１−［２−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸［（Ｒ）−２−フェニル−１−（（１Ｓ，２Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラ−トリシクロ［６．１．１．０^２，６］デカ−４−イル）−エチル］−アミド１２４mg（４９％）を無色の油状物として与えた。LC/MS: (M-H)^-= 626。

１０mlの丸底フラスコ中、１−［２−（２−フルオロ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸［（Ｒ）−２−フェニル−１−（（１Ｓ，２Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラ−トリシクロ［６．１．１．０^２，６］デカ−４−イル）−エチル］−アミド（１１７mg、０．１７mmol）及びイソブチルボロン酸（５０mg、０．４９mmol）をメタノール０．８ml及びヘキサン１．６mlに溶解した。１．０M 塩酸（０．４２ml、０．４２mmol）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応物をメタノール１０mlで希釈し、ヘキサンで抽出した。ヘキサン層をメタノール１０mlで逆抽出した。メタノール層をヘキサンで２回洗浄し、次に、合わせ、濃縮した。残渣をジクロロメタン２０mlに溶解し、水２mlと飽和ＮａＨＣＯ_３溶液２mlの混合物で洗浄した。水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、ＭｅＯＨ／クロロホルム（勾配：０〜１０％ＭｅＯＨ、次に、１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）を用いた、シリカゲル４ｇのクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含有する全ての画分を合わせ、濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートして、（Ｒ）−１−（１−（２−（２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）−２−フェニルエチルボロン酸１９mg（２１％）をオフホワイトの粉状物として与えた。LC/MS: (M+Na)⁺= 516; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) □: 8.21 (br. s., 1H), 8.02 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.77 (br. s., 1H), 7.41 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.06 - 7.30 (m, 7H), 4.55 - 4.63 (m, 2H), 3.92 (d, J = 4.5 Hz, 2H), 3.22 (br. s., 1H), 2.90 - 2.98 (m, 1H), 2.71 - 2.82 (m, 1H)。

実施例４
（Ｒ）−１−（１−（２−（２−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）−２−フェニルエチルボロン酸

５０mlの丸底フラスコ中、１−（２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル（５００mg、１．８５mmol）をジクロロメタン７mlに懸濁した。トリフルオロ酢酸（４．０ml、５２mmol）をゆっくり加え、全ての固体を溶解させた。反応混合物を室温で２．５時間撹拌し、次に、濃縮し、高真空下で乾燥させた。残渣をＤＭＦ５mlに溶解し、２−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）安息香酸（３９０mg、１．７７mmol）を加えた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．５ml、８．６mmol）を滴下し、続いて、ＨＡＴＵ（７４１mg、１．９５mmol）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次に、水でクエンチし、石油エーテルで希釈した。得られた懸濁液を濾過し、水及び少量の石油エーテルですすぎ、次に、高真空下で乾燥させて、１−［２−（２−メトキシ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル５５７mg（８４％）をオフホワイトの固体として与えた。LC/MS: (M+H)⁺= 373; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) □: 8.30 (dd, J = 8.1, 0.8 Hz, 1H), 8.19 (br. s., 1H), 8.14 (s, 1H), 7.37 (dd, J = 8.1, 0.8 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.69 - 4.76 (m, 2H), 4.02 - 4.09 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.98 (s, 3H)。

５０mlの丸底フラスコ中、１−［２−（２−メトキシ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸メチルエステル（５５５mg、１．４９mmol）をメタノール３ml及びＴＨＦ３０mlに懸濁した。水酸化リチウム（１６１mg、６．７１mmol）、続いて、水３mlを加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次に、有機溶媒を蒸発させた。水性残渣を０℃まで冷却し、ｐＨ約２まで１．０M ＨＣｌで酸性化し、沈殿物を生じさせた。懸濁液を濾過し、水で洗浄し、次に、高真空下で乾燥させて、１−［２−（２−メトキシ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸４５２mg（８４％）をオフホワイトの固体として与えた。LC/MS: (M+H)⁺= 359。

１０mlの丸底フラスコ中、１−［２−（２−メトキシ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸（１５０mg、０．４２mmol）及び（Ｒ）−ＢｏｒｏＰｈｅ−（＋）−ピナンジオール−ＨＣｌ（１５５mg、０．４６mmol）をＤＭＦ２．５mlに溶解し、０℃まで冷却した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１９ml、１．０９mmol）を０℃で滴下し、続いて、ＨＡＴＵ（１７５mg、０．４６mmol）を加えた。添加が完了した後、氷浴を取り外し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応物を水でクエンチし、１：１ジエチルエーテル／ＥｔＯＡｃ（４０ml）で２回抽出した。有機層を水で２回、ブラインで１回洗浄し、次に、合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃ／ジクロロメタン（勾配：０〜５０％ＥｔＯＡｃ）を用いた、シリカゲル２５ｇのクロマトグラフィーにかけた。生成物を含有する全ての画分を合わせ、濃縮して、１−［２−（２−メトキシ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸［（Ｒ）−２−フェニル−１−（（１Ｓ，２Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラ−トリシクロ［６．１．１．０^２，６］デカ−４−イル）−エチル］−アミド１９５mg（６６％）を無色の油状物として与えた。LC/MS: (M-H)^-= 638。

１０mlの丸底フラスコ中、１−［２−（２−メトキシ−４−トリフルオロメチル−ベンゾイルアミノ）−エチル］−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸［（Ｒ）−２−フェニル−１−（（１Ｓ，２Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−２，９，９−トリメチル−３，５−ジオキサ−４−ボラ−トリシクロ［６．１．１．０^２，６］デカ−４−イル）−エチル］−アミド（１８９mg、０．２７mmol）及びイソブチルボロン酸（７８mg、０．７７mmol）をメタノール１．３ml及びヘキサン２．６mlに溶解した。１．０M 塩酸（０．６７ml、０．６７mmol）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応物をメタノール１０mlで希釈し、ヘキサンで抽出した。ヘキサン層をメタノール１０mlで逆抽出した。メタノール層をヘキサンで２回洗浄し、次に、合わせ、濃縮した。残渣をジクロロメタン２０mlに溶解し、水２mlと飽和ＮａＨＣＯ_３溶液２mlの混合物で洗浄した。水層をジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をジエチルエーテル／ＥｔＯＡｃでトリチュレートして、（Ｒ）−１−（１−（２−（２−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）−２−フェニルエチルボロン酸５１mg（３８％）を白色の粉状物として与えた。LC/MS: (M+Na)⁺= 528; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) □: 8.26 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.97 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 7.71 (br. s., 1H), 7.34 (dd, J = 8.1, 0.9 Hz, 1H), 7.24 - 7.28 (m, 4H), 7.16 - 7.23 (m, 1H), 7.14 (s, 1H), 4.70 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.94 - 4.05 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.30 - 3.40 (m, 1H), 3.07 (dd, J = 14.3, 5.1 Hz, 1H), 2.86 (dd, J = 14.3, 10.0 Hz, 1H)。

実施例５
アッセイプロトコール及び結果
細胞ベースのプロテアソーム活性／選択性アッセイ
細胞ベースのプロテアソームサブユニット活性／選択性アッセイは、培養細胞中のプロテアソーム複合体と関連する、β５ｃ又はβ５ｉ（キモトリプシン様活性）、β２ｃ／２ｉ（トリプシン様）、及びβ１ｃ又はβ１ｉ（カスパーゼ様）プロテアーゼ活性の活性を独立に測定する一連の５種の蛍光アッセイであった。具体的には、それぞれのサブユニット活性に以下の基質を使用した：β１ｉ：（ＰＡＬ）_２Ｒｈ１１０、β１ｃ：（ＬＬＥ）_２Ｒｈ１１０、β２ｃ／２ｉ：（ＫＱＬ）_２Ｒｈ１１０、β５ｃ：（ＷＬＡ）_２Ｒｈ１１０、β５ｉ：（ＡＮＷ）_２Ｒｈ１１０。手順は以下に従った：

細胞の調製：Ramos細胞（ＤＰＢＳ中２×１０^６／ml）２５μlを、ハーフエリアプレート（PerkinElmer Cat 6005569）中に、最終５×１０^４細胞／ウェルでプレーティングした。１００×４倍段階希釈した試験化合物又はＤＭＳＯ０．５μlを各ウェルに加えた。試験した化合物の最大濃度は、２０μMであり、従って、化合物の段階希釈を２００mMから開始した。３７℃で３０分間インキュベートした。次に、室温で１５分間平衡化した。ＤＰＢＳ中の０．０２５％ジギトニン、各基質２０μM及び０．５Mスクロースからなる２×反応混合物２５μlを加えた。７００rpmで１分間振盪した。室温で１２０分間インキュベートした。次に、Envisionマルチラベルプレートリーダー（PerkinElmer）によって５００nm励起／５１９nm発光でプレートを読み取った。

改変ＰＢＭＣプロテアソーム活性アッセイ
この細胞ベースのプロテアソーム活性アッセイは、先のRamos細胞ベースのアッセイと基質が類似していたが、反応バッファーとしての１０％ＦＢＳ含有完全ＲＰＭＩとの関連でヒトＰＢＭＣを使用した。このアッセイは、初代ヒト細胞中の試験化合物の細胞透過のレベルを評価するように設計された。手順は次に従った：健康なドナーから新たに単離したＰＢＭＣを、Ｖ底９６プレート中に、１０％ＦＢＳ含有完全ＲＰＭＩ１００μl中の１×１０^５細胞／ウェルでプレーティングした。１００×４倍段階希釈化合物１μl／ウェルを加え、１時間インキュベートした。試験した最大化合物濃度は、２０μMであった（１００×作業溶液を２mMから開始する）。細胞を２０００rpmで５分間スピンダウンした。上清を全て除去した。次に、細胞をＤＰＢＳ２５μlに再懸濁し、細胞を新鮮なハーフエリアプレート（PerkinElmer Cat 6005569）に移した。最終反応容量は、細胞懸濁液２５μl、１００×阻害薬又はＤＭＳＯ０．５μl、基質混合物（０．０２５％ジギトニン、２０μM基質（基質：（ＰＡＬ）_２Ｒｈ１１０、（ＬＬＥ）_２Ｒｈ１１０、（ＫＱＬ）_２Ｒｈ１１０、（ＷＬＡ）_２Ｒｈ１１０、又は（ＡＮＷ）_２Ｒｈ１１０）／１０％ＦＢＳ及び０．５Mスクロース混合物を含有する）２５μlを含む５０μlであった。１分間（７００rpmで）振盪した。２時間インキュベートし、次に、Envisionプレートリーダーで５００nm励起／５１９nm発光を使用してプレートを読み取った。

ＰＢＭＣＩＰ−１０アッセイ
次のようにして、全血からＰＢＭＣを単離した：血液を無菌環境でヘパリン処理した管中に回収した。血液を等容量のＰＢＳ／２％ＦＣＳで希釈し、この混合物３０mlを、８００ｇで３０秒間遠心しかつ室温まで温めておいた、Histopaque-1077 １５mlを含有するACCUSPIN管に加えた。次に、管を、室温にて８００ｇで２０分間、ノーブレーキで遠心した。ポリエチレンフリットの真上の単核細胞のバンドを、パスツールピペットによって取り出した。これらの単核細胞を滅菌ＰＢＳで３回洗浄し、カウントし、１０％加熱不活性化したウシ胎仔血清、１０mM ＨＥＰＥＳ、１mM ピルビン酸ナトリウム、ペニシリン（５０U/ml）、ストレプトマイシン（５０μg/ml）及びグルタミン（２mM）を補填したＲＰＭＩ１６４０中、約１．５×１０^６／mlに再懸濁した。９６ウェル組織培養プレート（BD Falcon 353072）に約２×１０^５細胞／ウェルをプレーティングし、１％ＤＭＳＯの最終濃度で、化合物の滴定物と共に６０分間／３７℃でプレインキュベートした。次に、細胞を、Ａ型ＣｐＧ（Invivogen, Cat # tlrl-2216; ODN 2216）により２．５μMの最終濃度で刺激した。細胞を一晩インキュベートし、上清を除去した。ウェル中に残留しているＰＢＭＣ細胞の生存率を、ATPliteルミネッセンスアッセイ（Perkin-Elmer）で製造業者の説明書に従って測定した。ルミネッセンスをPerkin-Elmer Envisionでルミネッセンスフィルターを使用して測定した。ＩＰ１０レベルを、CXCL10/IP10 AlphaLISAキット（Perkin-Elmer）で、全ての容量を半分にする以外は製造業者の説明書に従って測定した。蛍光を、EnvisionマルチラベルプレートリーダーでAlphaScreen標準設定を使用して測定した。

結果：
本発明の代表化合物についての上記アッセイの結果を以下の表１に提供したが、表中のＩＣ５０及びＥＣ５０活性値は、μMである：

本発明において特定の実施態様の変更を行ってもよく、これが依然として添付の特許請求の範囲の範囲内にあることから、本発明は上述した本発明の特定の実施態様に限定されないことを理解されたい。

Claims

式（Ｉ）：

［式中、
Ｒ^１、Ｒ^１’及びＲ^１’’は、互いに独立して、水素、アルコキシ、ハロゲン又は−ＣＦ_３であり；そして
Ｒ^２は、Ｃ_１−７アルキル又はフェニルである］
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
Ｒ^１、Ｒ^１’及びＲ^１’’が、互いに独立して、水素、メトキシ、フッ素又は−ＣＦ_３である、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^１、Ｒ^１’又はＲ^１’’の１つが、水素であり、そして、他の２つが、互いに独立して、アルコキシ、ハロゲン又は−ＣＦ_３である、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^１、Ｒ^１’又はＲ^１’’の１つが、水素であり、そして、他の２つが、互いに独立して、メトキシ、フッ素又は−ＣＦ_３である、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^２が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^２が、フェニルである、請求項１に記載の化合物。
以下：
（Ｒ）−３−メチル−１−（１−（２−（２，３，４−トリメトキシベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）ブチルボロン酸；
（Ｒ）−２−フェニル−１−（１−（２−（２，３，４−トリメトキシベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）エチルボロン酸；
（Ｒ）−１−（１−（２−（２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）−２−フェニルエチルボロン酸；若しくは
（Ｒ）−１−（１−（２−（２−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド）−２−フェニルエチルボロン酸
である、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
治療有効量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物と薬学的に許容し得る担体とを含む、医薬組成物。
関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための、請求項８に記載の医薬組成物。
関節リウマチ、ループス及び過敏性腸疾患から選択される炎症性疾患又は障害の治療又は予防のための医薬の調製のための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の使用。