JP5599822B2 - アルブミンバインダーa−b−c−d−e−を有するfgf21誘導体及びそれらの使用 - Google Patents
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Description
-B- は存在しないか、結合を表すか、あるいは-B1-, -B2-またはそれらの組み合わせから選択され、ここで-B1- は式 IV, V, VIまたはVIIの要素であり:
-C-は存在しないか、結合を表すか、または式 XまたはXIの要素であり:
-D-は存在しないか、結合を表すか、あるいは式 XIIまたはXIIIの要素であり:
#-NH-(CH2)t-* (式 XIII)
-E-は存在しないか、結合を表すか、あるいは式 XXII, XXIII, XXIIIa, XXIV, XXIVa, XXV, XXVIまたはXXVIIの要素であり:
あるいはそれらの医薬に許容できる塩である。
本明細書に使用される用語「FGF21化合物」は天然のヒトFGF21及びその類似体を指す。
類似体及び誘導体は、問題になっている技術的事項の理解を容易にするのに最も適しているものとみなされるものであれば何であれ、ポリペプチド命名法、有機化学命名法、及び化学式、またはそれらの混ぜ合わせを交換可能に用いて、本明細書において命名される。例えば、実施例4の誘導体は、S-122-[1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-エチル)-2,5-ジオキソ-ピロリジン-3-イル] [Cys122]-Met-FGF21 ([Cys122] Met-FGF21が、位置122におけるCysのチオール基で、1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-エチル)-2,5-ジオキソ-ピロリジン-3-イルにより修飾されることを意味する)と命名されてよい。しかし、この化合物は、また、以下の化合物:
FGF21の変異体(または類似体)は、問題になっている技術的事項の理解を容易にするのに最も適しているものとみなされるものであれば何であれ、ポリペプチド命名法、有機化学命名法、化学式、アミノ酸置換、またはそれらの混ぜ合わせを交換可能に用いて、本明細書において命名される。
以下は、本発明の誘導体の、特には本発明の第一の態様の誘導体の、特定の実施形態であり、ここで、式 A-B-C-D-E-のアルブミンバインダーはFGF21化合物のチオール基、すなわち、例えば、システイン残基に共有結合している:
-B-は-B1-, -B2-またはこれらの組み合わせであり、ここで、-B1-は式 IV, V, VIまたはVIIの要素であり:
-C-は式 XまたはXIの要素であり:
あるいはこれらの医薬に許容できる塩である。
-B-は-B1-, -B2-またはこれらの組み合わせであり、ここで、-B1-は式 IV, V, VIまたはVIIの要素であり:
-C-は式 XまたはXIの要素であり:
あるいは、それらの医薬に許容できる塩である。
1. 式A-B-C-D-E-のアルブミンバインダーが共有結合しているFGF21化合物の誘導体であって、ここで、
A-は式 I, IIまたはIIIの要素であり:
-B-は存在しないか、結合を表すか、あるいは-B1-, -B2-またはそれらの組み合わせから選択され、ここで、-B1- は式 IV, V, VIまたはVIIの要素であり:
-C-は存在しないか、結合を表すか、あるいは式 XまたはXIの要素であり:
-D-は存在しないか、結合を表すか、あるいは式 XIIまたはXIIIの要素であり:
#-NH-(CH2)t-* (式 XIII),
-E-は存在しないか、結合を表すか、あるいは式 XXII, XXIII, XXIIIa, XXIV, XXIVa, XXV, XXVIまたはXXVIIの要素であり:
誘導体、あるいはそれらの医薬に許容できる塩。
A-は式 I, IIまたはIIIの要素であり:
-B-は存在しないか、結合を表すか、あるいは-B1-, -B2-またはこれらの組み合わせから選択され、ここで、-B1-は式 IV, V, VIまたはVIIの要素であり:
-C-は存在しないか、結合を表すか、または式 XまたはXIの要素であり:
-D-は存在しないか、結合を表すか、あるいは式 XIIまたはXIIIの要素であり:
#-NH-(CH2)t-* (式 XIII),
-E-は存在しないか、結合を表すか、あるいは式 XXII, XXIII, XXIIIa, XXIV, XXIVa, XXV, XXVIまたはXXVIIの要素であり:
誘導体、あるいはそれらの医薬に許容できる塩。
A- は式 I, IIまたはIIIであり:
-B-は-B1-, -B2-またはそれらの組み合わせであり、ここで、-B1-は式 IV, V, VIまたはVIIの要素であり:
-C-は式 XまたはXIの要素であり:
-D-は場合により存在し、存在する場合には式 XIIまたはXIIIの要素であり:
#-NH-(CH2)t-* (式 XIII),
-E-は場合により存在し、存在する場合には結合、あるいは式 XXII, XXIII, XXIIIa, XXIV, XXIVa, XXV, XXVIまたはXXVIIの要素であり:
誘導体、あるいはそれらの医薬に許容できる塩。
A- は式 I, IIまたはIIIの要素であり:
-B-は-B1-, -B2-またはそれらの組み合わせであり、ここで、-B1-は式 IV, V, VIまたはVIIの要素であり:
-C-は式 XまたはXIの要素であり:
-D-は場合により存在し、存在する場合には式 XIIまたはXIIIの要素であり:
#-NH-(CH2)t-* (式 XIII),
-E-は場合により存在し、存在する場合には結合、あるいは式 XXII, XXIII, XXIIIa, XXIV, XXIVa, XXV, XXVIまたはXXVIIの要素であり:
誘導体、あるいはそれらの医薬に許容できる塩。
A- は式 I, IIまたはIIIであり:
-B-は-B1-, -B2-またはそれらの組み合わせであり、ここで、-B1-は式 IV, V, VIまたはVIIの要素であり:
-D-は式 XIIまたはXIIIの要素であり:
#-NH-(CH2)t-* (式 XIII)
-E-は式 XXII, XXIII, XXIIIa, XXIV, XXIVa, XXV, XXVIまたはXXVIIの要素であり:
-E-は式 XXII, XXIII, XXIV, XXV, XXVIまたはXXVIIの要素であり:
誘導体、あるいはそれらの医薬に許容できる塩。
ここで、A- は式 Iの要素であり:
ここで、nは14, 16または18、好ましくは14または16である、誘導体。
ここで、A- は式 Iの要素であり、好ましくはnが13である、誘導体。
ここで、-B-は-B1-、好ましくは式IVまたはV:
ここで、-B-は-B2-、好ましくは式IIX:
ここで、-B-は-B2-、より正確には式IX:
ここで-B-が結合である、誘導体。
ここで、-C-が式X:
ここで、-C-が式X:
ここで、pは1であり、かつqは1または2であり、好ましくはpは1であり、かつqは2である、誘導体。
ここで、-C-は式XI:
ここで、-C-は式XI:
ここで、mは1であり、かつkは4, 5または11であり、好ましくはmは1であり、かつkは5である、誘導体。
ここで、-D-は式XII:
ここで、-D-は式XIII:
ここで、-D-は存在していない、誘導体。
ここで、-E-は式 XXII, XXIII, XXIV, XXV, XXVIまたはXXVII:
ここで、-E-は式 XXII, XXIII, XXIIIa, XXVまたはXXVI:
ここで、Eは式XXIVの要素である、誘導体。
ここで、A-は式 IまたはIIであり、
-B-は結合であるか、あるいは式 IIXまたはIXの要素であり、
-C-は式Xの要素であり、
-D-は式 XIIまたはXIIIの要素であり、かつ
-E-は式 XXIIまたはXXIVの要素であり、かつ
好ましくは、nは13, 14または16であり、bは2であり、dは1であり、eは2であり、pは1であり、qは2であり、rは2であり、sは2であり、かつtは2である、
誘導体。
ここで、A-は式I, IIまたはIII:
ここで、A-は式I, IIまたはIII:
ここで、A-は式I, IIまたはIII:
ここで、A-は式I, IIまたはIII:
ここで、A-B-C-D-E-が以下の式(1)-(14):
ここで、A-B-C-D-E-が以下の式(1)-(12):
S-122-[1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-エチル)-2,5-ジオキソ-ピロリジン-3-イル] [Cys122]-Met-FGF21 (化合物F);
S-71-[1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-エチル)-2,5-ジオキソ-ピロリジン-3-イル] [Cys71]Met-FGF21 (化合物H); 及び
S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [Cys71]Met-FGF21 (化合物O)
から選択される化合物;あるいはこれらの化合物のいずれか1つの医薬に許容できる塩。
ここで、A-は式 I, IIまたはIII:
-B-は-B1-, -B2-またはこれらの組み合わせであり、ここで、-B1-は式 IV, V, VIまたはVII:
-C-は式 XまたはXIの要素であり:
誘導体、あるいはその医薬に許容できる塩。
ここで、A-は式I, IIまたはIII:
-B-は-B1-, -B2-またはこれらの組み合わせであり、ここで、-B1-は式 IV, V, VIまたはVII:
-C-は式 XまたはXIの要素であり:
誘導体、あるいはそれらの医薬に許容できる塩。
ここで、A-は式Iの要素:
ここで、-B-は-B1-、好ましくは式IVまたはV:
ここで、-B-は-B2-、好ましくは、式IX:
ここで、-B-は-B2-、好ましくは、式XXVIII:
ここで、pは1でありqは1または2であり、好ましくはpは1でありqは2である、誘導体。
ここで、-C-は式XI:
ここで、-C-は式XI:
ここで、A-は式I, IIまたはIII:
ここで、A-は式I, IIまたはIII:
ここで、A-は式I, IIまたはIII:
ここで、A-は式I, IIまたはIII:
ここで、A-B-C-は以下の式(13)-(15):
N-アルファ1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタ-デカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [Arg56, Arg59, Arg69, Arg122]-Met-FGF21 (化合物V)
である、可能な限度で先行する実施形態のいずれか1つによる誘導体; またはその医薬に許容できる塩。
(a)配列番号1と比較して、少なくとも1つの以下の修飾:-1M, -1G, -1C, -1S, S6C, S6K, A26E, Q27E, Q28R, A31E, K56R, K59R, K69R, S71C, D102T, L118C, K122C, K122R, A134C, I152K, L166F, S167G, M168L, V169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, 及び/またはS181K,R (好ましくは少なくとも1つの以下:-1M, -1G, -1C, -1S, S6C, S6K, A26E, Q27E, Q28R, A31E, K56R, K59R, K69R, S71C, D102T, L118C, K122C, K122R, A134C, I152K 及び/またはM168L);及び/または、
(b)配列番号1と比較して、最大で25アミノ酸残基, 好ましくは最大で20アミノ酸残基, より好ましくは最大で15アミノ酸残基, より一層好ましくは最大で10アミノ酸残基, または非常に好ましくは最大で6アミノ酸残基のN末端伸長であって、ここで、N末端伸長アミノ酸残基の、少なくとも50%, 好ましくは少なくとも60%, より好ましくは少なくとも70%, より一層好ましくは少なくとも80%, または非常に好ましくは少なくとも90%はGまたはSである、N末端伸張
を含む、誘導体。
(a)配列番号1と比較して、以下の修飾:
(i) K122C, (K59R, K69R, K122R), (K56R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R), S71C, (K56R, K59R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R, K122R, I152K), D102T, A26E, (Q28R, A31E), Q27E, M168L, (Y179F, A180E, S181R), (V169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K), 及び/または(L166F, S167G, M168L, V169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) (好ましくはK122C, (K59R, K69R, K122R), (K56R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R), S71C, (K56R, K59R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R, K122R, I152K), D102T, A26E, (Q28R, A31E), Q27E, 及び/またはM168L),
(ii) -1G, 及び(-1G, M168L),または
(iii) S6C, (L118C-A134C, K56R, K59R, K69R, K122R),及び(S6K, K56R, K59R, K69R, K122R)
であって、ここで、(i)及び(iii)のFGF21化合物はさらに場合によりN末端Mを含んでよい、修飾;
及び/または
(b)配列番号1と比較して、以下:(iv) MG-, MC-, MS-, MSGSGSGSGSG-, MGGGGG-, MSHSGSGSGSGSGSGSGSGSG-, MSGGGGG-, MSGSGGS-, MSGGSSG-, 及びMSGSGSG-から選択されるN末端伸長であって、
ここで、(iv)のFGF21化合物それぞれにおけるN末端Mは場合により欠失していてもよい、N末端伸長
を含む、誘導体。
を含む、FGF21類似体。
(b) 配列番号1と比較して、最大で25アミノ酸残基, 好ましくは最大で20アミノ酸残基, より好ましくは最大で15アミノ酸残基, より一層好ましくは最大で10アミノ酸残基, または非常に好ましくは最大で6アミノ酸残基のN末端伸長であって、少なくとも50%, 好ましくは少なくとも60%, より好ましくは少なくとも70%, より一層好ましくは少なくとも80%, または非常に好ましくは少なくとも90%のN末端伸長アミノ酸残基はGまたはSである、N末端伸長
を含む、FGF21類似体。
を含む、FGF21類似体。
を含む、FGF21類似体。
を含む、FGF21類似体。
(a)配列番号1と比較して、以下の修飾:
(i) (K59R, K69R, K122R), (K56R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R), S71C, (K56R, K59R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R, K122R, I152K), D102T, A26E, (Q28R, A31E), Q27E, M168L, (Y179F, A180E, S181R), (V169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K), (L166F, S167G, M168L, V169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) (好ましくは(K59R, K69R, K122R), (K56R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R), S71C, (K56R, K59R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R, K122R, I152K), D102T, A26E, (Q28R, A31E), Q27E,またはM168L),
(ii) -1G 及び (-1G, M168L),または
(iii) S6C, (L118C-A134C, K56R, K59R, K69R, K122R) 及び (S6K, K56R, K59R, K69R, K122R)
であって、ここで、(i)及び(iii)のFGF21類似体はさらに場合によりN末端Mを含んでよい、修飾、及び/または
(b)配列番号1と比較して、以下:(iv) MG-, MC-, MS-, MSGSGSGSGSG-, MGGGGG-, MSHSGSGSGSGSGSGSGSGSG-, MSGGGGG-, MSGSGGS-, MSGGSSG- 及び MSGSGSG-から選択されるN末端伸長であって、ここで、(iv)のFGF21類似体のそれぞれにおけるN末端Mは場合により欠失していてよいN末端伸長
を含む、FGF21類似体。
(a)配列番号1と比較して、以下の修飾: (K59R, K69R, K122R), (K56R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R), S71C, (K56R, K59R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R, K122R, I152K), D102T, A26E, (Q28R, A31E), Q27E, M168L, (Y179F, A180E, S181R), (V169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K),または(L166F, S167G, M168L, V169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) (好ましくは(K59R, K69R, K122R), (K56R, K69R, K122R), (K56R, K59R, K69R), S71C, (K56R, K59R, K69R, K122R),または(K56R, K59R, K69R, K122R, I152K), D102T, A26E, (Q28R, A31E), Q27E,またはM168L)であって、ここで、FGF21類似体はさらに場合によりN末端Mを含んでよい、修飾;及び/または、(b)配列番号1と比較して、以下:(iv) MG-, MC-, MS-, MSGSGSGSGSG-, MGGGGG-, MSHSGSGSGSGSGSGSGSGSG-, MSGGGGG-, MSGSGGS-, MSGGSSG- 及び MSGSGSG-から選択されるN末端伸長であって、ここで、(iv)のFGF21類似体のそれぞれにおけるN末端Mは場合により欠失していてよい、N末端伸長
を含む、FGF21類似体。
以下の略語がアルファベット順に以下に使用される: DCMはジクロロメタンであり、DICはジイソプロピルカルボジイミドであり、DIPEAはジイソプロピルエチルアミンであり、DPBSはDulbecco社のリン酸緩衝生理食塩水であり、DVBはジビニルベンゼンであり、EDACは(3-ジメチルアミノ-プロピル)エチルカルボジイミド塩酸塩であり、Fmocは9H-フルオレン-9-イルメトキシカルボニルであり、HEPESは4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸であり、HOAtは1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾールであり, HOBtは1-ヒドロキシベンゾトリアゾールであり, HPβCDはヒドロキシプロピルβシクロデキストリンであり、HPLCは高速液体クロマトグラフィーであり、IBMXは3-イソブチル-1-メチルキサンチンであり、Inpはイソニペコチン酸であり、IPTGはイソプロピルβ-D-1-チオガラクト-ピラノシドであり、LCMSは液体クロマトグラフィー質量分析法(Liquid Chromatography Mass Spectroscopyであり、MALDI-TOF MSはMatrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectroscopy(マトリクス支援レーザー脱離イオン化質量分析法)であり、MeOHはメタノールであり、NanoES-MSはナノエレクトロスプレータンデム質量分析法であり、NMPは1-メチル-ピロリジン-2-オンであり、OEGは8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸であり、OtBuはtert.ブチルエステルであり、PBSはリン酸緩衝生理食塩水であり、RTは室温であり、TFAはトリフルオロ酢酸であり、THFはテトラヒドロフランであり、TIPSはトリイソプロピルシランであり、トリスはトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンまたは2-アミノ-2-ヒドロキシメチルプロパン-1,3-ジオールであり、Trxはトラネキサム酸であり、TSTUはO-(N-スックイミジル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩であり、及びUPLCはUltra Performance Liquid Chromatography(超高速液体クロマトグラフィー)である。
LCMS 方法1 (LCMS1)
Agilent Technologies LC/MSD TOF (G1969A)質量分析計を用いて、Agilent 1200シリーズHPLCシステムより溶離した後のサンプルの質量を同定した。タンパク質のスペクトルのデコンボリューションを、Agilent社製タンパク質コンフォメーションソフトウェアを用いて計算した。
溶離液:
A: 0.1% トリフルオロ酢酸入りの水
B: 0.1% トリフルオロ酢酸入りのアセトニトリル
勾配: 15分かけて25% - 95 %のアセトニトリル
Perkin Elmer Sciex API 3000質量分析計を用いて、Perkin Elmerシリーズ200 HPLCシステムより溶離した後のサンプルの質量を同定した。
溶離液:
A: 0.05% トリフルオロ酢酸入りの水
B:0.05% トリフルオロ酢酸入りのアセトニトリル
勾配: 1.5 ml/分で7.5分かけて5% - 90 %アセトニトリル
Waters Micromass ZQ質量分析計を用いて、Waters Alliance HT HPLCシステムより溶離した後のサンプルの質量を同定した。
溶離液:
A: 0.1% トリフルオロ酢酸入りの水
B: 0.1% トリフルオロ酢酸入りのアセトニトリル
勾配: 1.0 ml/分で7.5分かけて10% - 90% B
ヒトFGF21に関するDNA及びアミノ酸配列は、例えば、Nishimura et al. in Biochim. Biophys. Acta 1492(1):203-206 (2000)により開示されている。配列は、また、公的なデータベースより入手可能であり、それぞれ、アクセッション番号はEMBL:AB021975 及び UNIPROT:Q9NSA1である。
Met-FGF21の以下の12の類似体を当該技術分野において公知のように設計し、かつ実施例1または類似の方法を用いる出芽酵母において概論されるように大腸菌中に発現させた:
2a) K122C Met-FGF21 (化合物B),
2b) (K59R, K69R, K122R) Met-FGF21 (化合物C),
2c) (K56R, K69R, K122R) Met-FGF21 (化合物D),
2d) (K56R, K59R, K69R) Met-FGF21 (化合物G),
2e) S71C Met-FGF21 (化合物E),
2f) (K56R, K59R, K69R, K122R) Met-FGF21 (化合物S),
2g) (K56R, K59R, K69R, K122R, I152K) Met-FGF21 (化合物R),
2h) D102T Met-FGF21 (化合物M),
2i) A26E Met-FGF21 (化合物N),
2j) (Q28R, A31E) Met-FGF21 (化合物P),
2k) Q27E Met-FGF21 (化合物Q) 及び
2l) M168L Met-FGF21 (化合物K)。
2m) (179F, 180E, 181R) Met-FGF21 (化合物X),
2n) (169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) Met-FGF21 (化合物Y) 及び
2o) (166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) Met-FGF21 (化合物Z)
が含まれる。
2p) Gly-FGF21-M168L (化合物J) 及び
2q) Gly-FGF21 (化合物I)。
2r) S6C-Met-FGF21,
2s) (L118C-A134C, K56R, K59R, K69R, K122R)-Met-FGF21,
2t) (S6K, K56R, K59R, K69R, K122R)-Met-FGF21,
2u) Met-Gly-FGF21,
2v) Met-Gly-FGF21-M168L,
2x) Met-Cys-FGF21,
2y) Met-Ser-FGF21,
2z) (r) MSGSGSGSGSG-FGF21,
2aa) (s) MGGGGG-FGF21,
2ab) (t) MSHSGSGSGSGSGSGSGSGSG-FGF21,
2ac) (u) MSGGGGG-FGF21,
2ad) (v) MSGSGGS-FGF21,
2ae) (x) MSGGSSG-FGF21 及び
2af) (y) MSGSGSG-FGF21。
実施例1-2に記載されるようにして製造されたFGF21ポリペプチド及びその類似体を以下のように、または類似の技法を用いて、さらに精製した:
マレイミドを含むアルブミンバインダーを以下に記載されるように合成してもよく、フリーのシステインを含むFGF21及びその類似体を以下にも記載されるように、かかるアルブミンバインダーを用いて誘導体化させてよい。
5.8 g (7.5 mmol) 2-塩化クロロトリチルレジン (100-200 メッシュ, 1% DVB, 1.3 mmol/gでロードされた)をDCM (80 mL)中で1時間膨張させ、次いで水分を抜いた(drained)。Fmoc-エチレンジアミン塩化水素をNMP (30 mL)及びDCM (30 mL)及びDIPEA (5 eq, 6.42 mL)に懸濁させた。この懸濁液をレジンに添加し3時間浸透した。レジンから水分を抜き、17:2:1の DCM:MeOH:DIPEA、DCM, NMP 及び DCM (3 x 80 mL)で洗浄した。乾燥機でKOH/NaOHを用いて乾燥させた。
3 mmolのFmoc-エチレンジアミン2-クロロトリチルレジンをCEM Libertyマイクロ波ペプチド合成機及びFmocベースのペプチド固相法を用いて修飾した。レジンをNMP (60 mL)中で膨張させ、水分を抜いた。
レジンを5%ピペリジン入りNMP (60 mL)を用いてFmoc脱保護し、30秒間加熱し、水分を抜き、NMP (60 mL)を用いて洗浄後、続いて、さらなる5%ピペリジン入りNMP (60 mL)で処置し、3分間70-75℃で加熱し、続いて、NMP (4 x 60 mL)を用いて洗浄した。0.3 MのFmoc-8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸溶液+ 0.3 M HOAt入りNMP (45 mL)をレジンに添加し、続いて、0.75 MのDIC溶液入りNMP (18 mL)を添加した。反応は10分間70-75℃まで加熱させ、続いて、NMP (4x60 mL)を用いて洗浄した。
レジンを5%ピペリジン入りNMP (60 mL)を用いてFmoc脱保護し、30秒間加熱し、水分を抜き、NMP (60 mL)を用いて洗浄後、続いて、さらなる5%ピペリジン入りNMP (60 mL)で処置し、3分間70-75℃で加熱し、続いて、NMP (4 x 60 mL)を用いて洗浄した。0.3 MのFmoc-Glu-OtBu溶液+ 0.3 M HOAt入りNMP (45 mL)をレジンに添加し、続いて、0.75 MのDIC溶液入りNMP (18 mL)を添加した。反応は10分間70-75℃まで加熱させ、続いて、NMP (4x60 mL)を用いて洗浄した。
レジンを5%ピペリジン入りNMP (60 mL)を用いてFmoc脱保護し、30秒間加熱し、水分を抜き、NMP (60 mL)を用いて洗浄後、続いて、さらなる5%ピペリジン入りNMP (60 mL)で処置し、3分間70-75℃で加熱し、続いて、NMP (4 x 60 mL)を用いて洗浄した。0.3 Mのオクタデカン二酸モノ-tert-ブチルエステル溶液+ 0.3 M HOAt入りNMP (45 mL)をレジンに添加し、続いて、0.75 MのDIC溶液入りNMP (18 mL)を添加した。反応は10分間70-75℃まで加熱させ、続いて、NMP (4x60 mL)を用いて洗浄した。
レジンをTFA/TIPS/水 95:2.5:2.5で1時間処理した。レジンをろ過し(filtered off)、ろ液を真空下で濃縮した。アセトニトリルを添加しサンプルを再濃縮した。粗生成物をHPLC (10-50% アセトニトリル, 0.1 % TFA, 60 ml/分, C18, 50mmx200mm, 15Å)により精製した。
LCMS2 m/z: 777 (M+1).
N-マレオイル-ベータ-アラニン(0.65 mmol, 110 mg)をNMPに溶解した。EDAC (0.65 mmol, 125 mg) 及び HOBt (0.65 mmol, 88 mg)を添加し、混合物を室温で1時間攪拌した。17-[(S)-3-(2-{2-[(2-{2-[(2-アミノ-エチルカルバモイル)-メトキシ]-エトキシ}-エチルカルバモイル)-メトキシ]-エトキシ}-エチルカルバモイル)-1-カルボキシ-プロピルカルバモイル]-ヘプタデカン酸(0.65 mmol, 504 mg)溶液入りNMP (5 ml)を添加し、混合物を室温で16時間攪拌した。粗生成物をHPLC(25-65% アセトニトリル, 0.1 % TFA, 60 mL/分, C18, 50mmx200mm, 15Å)で精製して、200mgの標記の化合物を得た。
LCMS2 m/z: 927.8 (M+1)
実施例2及び3(K122C及びN末端Mを有する配列番号1)に記載されるように調製した、K122C Met-FGF21類似体における位置122でのCys残基を、上述のように調製した以下の試薬を用いてチオール基で修飾した:
LCMS1: 理論的質量 = 20442.2, 発見された質量(found) 20442.3
S71C Met-FGF21誘導体 S-71-[1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-エチル)-2,5-ジオキソ-ピロリジン-3-イル] [Cys71] Met-FGF21 (化合物H)の製造
2-(19-tert-ブトキシカルボニルノナデカノイルアミノ)ペンタン二酸 1-tert-ブチル エステル 5-(2,5-ジオキソピロリジン-1-イル) エステル(2.50 g) 及び [2-(2-{2-[2-(2-アミノ-エトキシ)-エトキシ]-アセチルアミノ}-エトキシ)-エトキシ]-酢酸(1.47 g)の溶液入りエタノール(40 ml)にDIPEA(1.26 ml)を添加した。混合物を一晩室温で攪拌後、真空内で濃縮させた。0.1 N HCl水溶液(150 ml)及び酢酸エチル(200 ml)を残留物に添加した。層を分離し、水層を酢酸エチル(100 ml)で抽出した。組み合わせた有機層を水及びブラインを用いて洗浄し、乾燥させ(硫酸マグネシウム)、真空で濃縮させて、経時的に(on standing)結晶化する油を得た。
収率 96% (3.1 g). LCMS3: 理論的質量: 874.2. 発見された質量: 874.49
19-{(S)-1-tert-ブトキシカルボニル-3-[2-(2-{[2-(2-カルボキシメトキシ-エトキシ)-エチル-カルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-プロピルカルバモイル}-ノナデカン酸 tert-ブチル エステル(3.1 g)の溶液入りアセトニトリル(50 ml)にTSTU (1.39 g) 及び DIPEA (0.91 ml)を添加した。混合物を一晩室温で攪拌後、真空内で濃縮させた。0.1 N HCl水溶液(100 ml)及び酢酸エチル(200 ml)を残留物に添加した。層を分離し、水層を酢酸エチル(50 ml)で抽出した。組み合わせた有機層を水及びブラインを用いて洗浄し、乾燥させ(硫酸マグネシウム)、真空で濃縮させて油を得た。収率 99% (3.4 g) LCMS3: 理論的質量: 971.2 発見された質量: 971.8
収率 80% (2.4 g). LCMS3: 理論的質量: 859.03 発見された質量: 859.44
マルイミドプロピオン酸(500 mg)を乾燥THF(15 ml)中に溶解させた。TSTU (790 mg)及びDIPEA (0.62 ml)を添加した。混合物を室温で一晩、窒素下で攪拌した。黄色の粘性の(thick)懸濁液を濃縮させた。残留物をDCM中に溶解させ、0.1 N HCl (2x) 及びブライン(1x)を用いて抽出した。有機層を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮させて白色固体を得た。
LCMS3: 理論的質量: 266.21 発見された質量: 267.26 (M+1)
N-ブトキシカルボニルエチレンジアミン(70 mg)の溶液入りアセトニトリル(4 ml)にDIPEA (0.07 ml)を添加し、かつ3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロピロール-1-イル)プロピオン酸2,5-ジオキソピロリジン-1-イル エステル(100 mg)を添加した。1時間攪拌後、混合物を真空内で濃縮した。残留物をDCM内に溶解し、5%クエン酸で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。この残留物にTFA (8 ml)を添加した。室温で1時間攪拌後、混合物を真空内で濃縮し、トルエンで2回共沈殿させた。この残留物をTHF (5 ml)中に溶解させた。19-((S)-1-カルボキシ-3-{2-[2-({2-[2-(2,5-ジオキソ-ピロリジン-1-イルオキシ-カルボニルメトキシ)-エトキシ]-エチルカルバモイル}-メトキシ)-エトキシ]-エチルカルバモイル}-プロピルカルバモイル)-ノナデカン酸(75 mg)及びDIPEA (0.09 ml)を添加した。混合物を室温で一晩攪拌した。Aバッファー: 0.1% TFA入りの水及びBバッファー:0.1% TFA入りのアセトニトリルを用いてHPLCにより精製した。45分かけて、勾配 10-80%B。流量: 20 ml/分, C18 カラム 30mmx250mm, 110Å. 収率 116 mg (34%)
LCMS3: 理論的質量: 955.17 発見された質量: 955.7
LCMS1: 理論的質量: 20511.3 発見された質量: 20511.3
S71C Met-FGF21誘導体S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [Cys71] Met-FGF21 (化合物O)の製造
9-{(S)-1-カルボキシ-3-[2-(2-{[2-(2-{[2-(2-ヨード-アセチルアミノ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-プロピルカルバモイル}-ノナデカン酸の製造
19-{(S)-1-tert-ブトキシカルボニル-3-[2-(2-{[2-(2-カルボキシメトキシ-エトキシ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-プロピルカルバモイル}-ノナデカン酸tert-ブチルエステル(500 mg)の溶液入りアセトニトリル(15 ml)にTSTU (224 mg)及びDIPEA (0.13 ml)を添加した。室温で2時間攪拌後、この混合物をエチレンジアミン(0.50 ml)入りアセトニトリル(5 ml)の溶液中に注いだ。2時間攪拌後、混合物を真空内で濃縮した。残留物を1 N NaOH (100 ml) 及び酢酸エチル(400 ml)中で攪拌した。層を分離した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空内で濃縮させて、白色固体を得た。この固体をエタノール中で攪拌し、ついでろ過した。ろ液を濃縮してシロップを得た。収率 250 mg (48%)
LCMS3: 理論的質量: 916.26 発見された質量: 916.7
ヨード酢酸(60 mg)入りDCM (8 ml)の溶液に、TSTU (90 mg) 及びDIPEA(0.05 ml)を添加した。室温で60分間攪拌後、19-[(S)-3-(2-{2-[(2-{2-[(2-アミノ-エチルカルバモイル)-メトキシ]-エトキシ}-エチルカルバモイル)-メトキシ]-エトキシ}-エチルカルバモイル)-1-tert-ブトキシカルボニル-プロピルカルバモイル]-ノナデカン酸tert-ブチルエステル(0.25 g)入りDCM (8 ml)及びDIPEA(0.05 ml)の溶液を添加した。120分間攪拌後、混合物をDCM(100 ml)で希釈し、1 N HCl(50 ml)を添加した。層を分離した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、真空内で濃縮した。残留物をエタノールで共沈殿させて、固体の化合物を得た。収率 225 mg (76%)
LCMS3: 理論的質量: 1084.2 発見された質量: 1084.8
19-{(S)-1-tert-ブトキシカルボニル-3-[2-(2-{[2-(2-{[2-(2-ヨード-アセチルアミノ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-プロピルカルバモイル}-ノナデカン酸tert-ブチルエステル(225 mg)をTFA (10 ml)で90分間処理した。混合物を真空内で沈殿させて、トルエンで2回共沈殿させた。残留物をAバッファー: 0.1% TFA入り水及びBバッファー: 0.1% TFA入りアセトニトリルを用いてHPLCで精製した。45分かけて勾配 10-80%B。流量: 20 ml/分, C18 カラム 30mmx250mm, 110Å 収率 45 mg (22%)
LCMS3: 理論的質量: 971.98 発見された質量: 972.6
NH4HCO3により凍結乾燥させた[Cys71] Met-FGF21 (7.53 mg, 385 nmol)を3x350 ul 0.02M トリス, pH 7.8に溶解させ、PD10カラムを介してバッファーを0.02M トリス, pH 7.8に交換した。約3.5 mlを回収した。上述のように製造された、19-{(S)-1-カルボキシ-3-[2-(2-{[2-(2-{[2-(2-ヨード-アセチルアミノ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-プロピルカルバモイル}-ノナデカン酸(1.5 mg)を0.02M トリス, pH 7.8 バッファー/アセトニトリル1:1 (0.75 ml)中に溶解させた。[Cys71] Met-FGF21の溶液にヨードアセトアミド溶液(0.561 ml, 3eq)を添加した。アセトニトリルの濃度は7%であった。混合物を室温で70時間放置した。混合物を4000gで10分間、Amicon Ultra-4遠心装置MWCO 10000にて限外ろ過した。約4 mlのAバッファーを用いた限外ろ過をさらに4回繰り返して、試薬を除去した。試料をAバッファー: 20 mM トリス, pH 7.8; Bバッファー: 20 mM トリス, 50 mM NaCl, pH 7.8を用いてmonoQ 5/50 GL カラムでアニオン交換により精製した。流量0.5 ml及び60CVに対して勾配0-100%B。生成物を含む単離したフラクションをプールし、Amicon Ultra-4遠心装置MWCO 10000で6000 rpmで2 x 10分間、限外ろ過により濃縮した。
LCMS1: 理論的質量: 20400.2 発見された質量: 20400.13
(K56R, K59R, K69R, K122R) Met-FGF21誘導体 N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [Arg56, Arg59, Arg69, Arg122] Met-FGF21 (化合物V)の製造
実施例2及び3に概論されるようにして製造された、K56R, K59R, K69R, K122R Met-FGF21類似体(K56R, K59R, K69R, 及び K122R及びN末端Mを有する配列番号1)におけるN末端Met残基を以下の試薬を用いてアルファアミノ基で修飾した:
LCMS1: 理論的質量: 20368.1 発見された質量: 20367.2
本発明のFGF21化合物の生物学的活性または有効性を決定するために以下のアッセイを使用した。
複数の本発明のFGF21化合物の酸化安定性を過酸化水素を用いて促進実験(accelerated experiment)で決定した。
db/dbマウスはII型糖尿病に対するマウスモデルである。マウスはレプチン受容体を欠失し、高血糖症、インスリン抵抗性、過食症及び肥満により特徴付けされる。
db/dbマウス
本発明のFGF21化合物(それぞれ、実施例4, 5及び6に記載されるように調製される、化合物F, H及びO)の薬物動態プロファイルを雄db/dbマウスで評価した。Met-FGF21 (化合物A)を3つの異なる投薬レベル、すなわち、0.125, 0.5及び1 mg/kgで皮下注射で、比較用に含めた。
血漿T1/2 は比較用化合物に関しては1.3-1.7時間であると測定され(試験化合物のように、0.5 mg/kgで投薬された場合、1.4時間)、化合物Fに関しては8.2時間、化合物Hに関しては15.9時間、そして化合物Oに関しては14.6時間であった。
Met-FGF21(化合物A)及び本発明のFGF21化合物(実施例4に記載されるように製造される化合物F)の薬物動態プロファイルを、正常な雄のグッティンゲンミニブタ, n=3-4, (12-15月齢, 25 kg)で試験した。化合物Aの血漿濃度を1週間モニターした一方で、化合物Fの血漿濃度を2週間モニターした。両化合物を0.1 mg/kgの1回の静脈内投薬(約5 nmol/kg)として投薬した。
S71C Met-FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [Cys71] Met-FGF21 (化合物O)の製造
実施例2及び3に概論されるようにして調製されたS71C Met-FGF21類似体(S71C及びN末端Mを有する配列番号1)の位置71でのCys残基を、以下の試薬を用いてチオール基で修飾した:
NH4HCO3により凍結乾燥させた[Cys71] Met-FGF21 (21.8 mg, 1.1 umol)を20 mMトリス, 0.5 NaCl, pH 8.0 (4.36 ml)に溶解させた。前述のように調製した、19-{(S)-1-カルボキシ-3-[2-(2-{[2-(2-{[2-(2-ヨード-アセチル-アミノ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-プロピルカルバモイル}-ノナデカン酸(5.4 mg, 5eq)を、0.02M トリス, 0.5M NaCl pH 8.0 バッファー/アセトニトリル1:1 (1.09 ml)に溶解させ、[Cys71] Met-FGF21の溶液に添加した。2時間15分後、混合物をHiPrep 26/10入りAバッファー(1.5 CV)で脱塩した。プールしたフラクションをAバッファー: 20 mM トリス, pH 7.8; Bバッファー: 20 mM トリス, 50 mM NaCl, pH 7.8を用いてmonoQ 5/50 GLカラムでアニオン交換により精製した。流量0.5 ml及び60CVに対して0-100%Bの勾配。生成物を含む単離したフラクションをプールし、PD10 (GE 179851-01)カラムを用いてバッファーを50 mM NH4HCO3に交換した。溶離物を回収し、Millex GV滅菌0.22 umフィルターを介してろ過し、凍結乾燥させた。収量 6.7 mg.
LCMS1: 理論的質量: 20400.2 発見された質量: 20402.3
S71C Met-FGF21誘導体 S-71-[1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-エチル)-2,5-ジオキソ-ピロリジン-3-イル] [Cys71] Met-FGF21の製造
実施例2及び3に概論されるようにして調製される、S71C Met-FGF21類似体(S71C及びN末端Mを有する配列番号1)の位置71でのCys残基を上述のように製造した試薬を用いて位置71でチオール基で修飾した:
収量 2.88 mg.
LCMS1: 理論的質量: 20483.3. 発見された質量: 20483.
S71C Met-FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [Cys71] Met-FGF21の製造
17-{(S)-1-カルボキシ-3-[2-(2-{[2-(2-{[2-(2-ヨード-アセチルアミノ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-メトキシ}-エトキシ)-エチルカルバモイル]-プロピルカルバモイル}-ヘプタデカン酸の製造
エタノール(10 ml) 及びエチレンジアミン(1 ml)の溶液に17-((S)-1-カルボキシ-3-{2-[2-({2-[2-(2,5-ジオキソ-ピロリジン-1-イルオキシカルボニルメトキシ)-エトキシ]-エチルカルバモイル}-メトキシ)-エトキシ]-エチルカルバモイル}-プロピルカルバモイル)-ヘプタデカン酸(500 mg)を添加した。室温で一晩攪拌後、混合物を40℃で真空内で濃縮させた。残留物を分取HPLC(10-65% アセトニトリル, 0.1 % TFA, 20 ml/分, C18, 30mmx250mm, 110Å)により精製した。収率 332 mg (70%)
LCMS3: 理論的質量: 776.0. 発見された質量: 776.6 (M+1)
ヨード酢酸(92 mg)入りアセトニトリル(1 ml)溶液にTSTU (142 mg) 及び DIPEA (0.085 ml)を添加した。室温で60分間攪拌後、17-[(S)-3-(2-{2-[(2-{2-[(2-アミノ-エチルカルバモイル)-メトキシ]-エトキシ}-エチルカルバモイル)-メトキシ]-エトキシ}-エチルカルバモイル)-1-カルボキシ-プロピルカルバモイル]-ヘプタデカン酸(0.320 g)入り0.1M Na2CO3 (12 ml)の溶液を添加した。120分間攪拌後、混合物のpHを1N HClを用いて1に調整した。沈殿物をろ過し、水で洗浄して、真空内で乾燥させた。収率 350 mg (90%)
LCMS3: 理論的質量: 943.9 発見された質量: 944.6 (M+1)
サイズ排除精製せずにpH 7.5で、実施例12の一般的手順Bを用いて化合物を製造した。収率 15.9 mg (38%)
LCMS1: 理論的質量: 20372.19 発見された質量: 20372.34
実施例15: FGF類似体のさらなるCys誘導体の製造
(-1G, 71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Gly-FGF21の製造
化合物を実施例12の一般的手順Bを用いて製造した。反応を1:1の20 mM トリス, 0.5 NaCl, pH 7.5及びDPBSバッファーの混合物で実施した。サイズ排除精製は行わなかった。収率 19.5 mg mg (58%)
LCMS1: 理論的質量: 20511 発見された質量: 20511
(-1G, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Gly-FGF21の製造
一般的手順C:
実施例56に概論されるように調製される、(-1G, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21類似体(配列番号1)の位置71でのCys残基を上述のように調製される試薬を用いて、位置71でチオール基で修飾した:
LCMS1: 理論的質量: 20525. 発見された質量: 20525
(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ala-FGF21の製造
実施例56に概論されるように調製された(-1A, 71C,121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21類似体(配列番号1)の位置71でのCys残基を前述のように調製される試薬を用いて位置71でチオール基で修飾した:
LCMS1: 理論的質量: 20539.4. 発見された質量: 20539.5
(-1S, 71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ser-FGF21 の製造
実施例56に記載されるようにして調製された、(-1S, 71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21類似体(配列番号1)の位置71でのCys残基を前述のように調製される試薬を用いて位置71でチオール基で修飾した:
LCMS1: 理論的質量: 20541, 発見された質量: 20541
(-5G, -4S, -3G, -2S, -1G, 56R, 59R. 69R, 102E, 121Q, 122R, 168L) FGF21誘導体 N-アルファ-3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニル(-5G, -4S, -3G, -2S, -1G, 56R, 59R, 69R, 102E, 121Q, 122R, 168L) FGF21の製造
17-{カルボキシメチル-[2-(2,5-ジオキソ-ピロリジン-1-イルオキシカルボニル)-エチル]-カルバモイル}-ヘプタデカン酸の製造
LCMS3: 理論的質量: 540.7, 発見された質量: 541.3 (M+1)
LCMS3: 理論的質量: 20301.9, 発見された質量: 1451,2 (M+14).
(-1G, 71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Gly-FGF21の製造
(-1G, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Gly-FGF21の製造
(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ala-FGF21の製造
(-1S, 71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ser-FGF21の製造
(-1G, 71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Gly-FGF21の製造
(-1G, 71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Gly-FGF21の製造
(-1A, 71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ala-FGF21の製造
(-1A, 71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ala-FGF21の製造
実施例56に概論されるようにして製造された、(-1A, 71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K)FGF21類似体(配列番号1)の位置71でのCys残基を、上述のように製造した試薬を用いて位置71でチオール基で修飾した:
LCMS1: 理論的質量: 20553.39, 発見された質量: 20552.88
(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K, 182G) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K, 182G] Gly-FGF21の製造
(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E] Ala-FGF21の製造
実施例56に概論されるようにして製造された、(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E) FGF21類似体(配列番号1)における位置71でのCys残基を、上述のように製造した試薬を用いて位置71でチオール基で修飾した:
LCMS1: 理論的質量: 20498.40 発見された質量: 20498.07
(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, des181) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, des181K] Ala-FGF21の製造
実施例56に概論されるようにして製造された、(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, des181) FGF21類似体(配列番号1)の位置71でのCys残基を、上述のように製造された試薬を用いて位置71でチオール基で修飾した:
LCMS1: 理論的質量: 20411.32, 発見された質量: 20410.90
(-1A, 71C, 121Q, 143V, 145E, 146E, 148aD, 149L, 150R, 152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, 154F, 155S, 156S, 158L, 159E, 160T, 161D, 163M, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [71C, N121Q, 143V, 145E, 146E, 148aD, 149L, 150R, 152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, 154F, 155S, 156S, 158L, 159E, 160T, 161D, 163M, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E] Ala-FGF21の製造
(-1A, 28R, 56R, 59R, 69R, S71C, 102T, 121Q, 122R, 166F, 167G, 168L, 170T) FGF21誘導体 S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタ-デカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [28R, 56R, 59R, 69R, S71C, 102T, 121Q, 122R, 166F, 167G, 168L, 170T] Ala-FGF21の製造
(-1G, 71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Gly-FGF21 の製造
17-(カルボキシメチル-{2-[2-(2-ヨード-アセチルアミノ)-エチルカルバモイル]-エチル}-カルバモイル)-ヘプタデカン酸の製造
エチレンジアミン(0.3 ml)入りTHF (4 ml)の溶液に、実施例19に記載されるように製造した、17-{カルボキシメチル-[2-(2,5-ジオキソ-ピロリジン-1-イルオキシカルボニル)-エチル]-カルバモイル}-ヘプタデカン酸(190 mg)の溶液を添加した。混合物を一晩室温で攪拌し、0.1 % TFA入り水及び0.1 % TFA入りアセトニトリルを溶離液として用いて、分取HPLCにより直接精製した。生成物を含むフラクションをプールし、凍結乾燥させた。収率 60 mg (35%)
LCMS3: 理論的質量: 485.67, 発見された質量: 486.38 (M+1)
ヨードアセトアミド(35 mg)入りアセトニトリル(0.50 ml)の溶液にTSTU (56 mg) 及び DIPEA (0.032 ml)を添加した。混合物を1時間攪拌した後に、17-{[2-(2-アミノ-エチルカルバモイル)-エチル]-カルボキシメチル-カルバモイル}-ヘプタデカン酸(60 mg)入り0.1M Na2CO3 (5 ml)の溶液を添加した。混合物を2時間攪拌し、1N HCLを用いてpH 1まで酸性化させた。混合物を沈降させた。上清を移し、沈殿物を水で2回洗浄して、真空内で乾燥させた。収率 75 mg (93%)
LCMS3: 理論的質量: 653.60, 発見された質量: 654.27 (M+1)
(-1G, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Gly-FGF21の製造
(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ala-FGF21の製造
LCMS1: 理論的質量: 20249.05 発見された質量: 20249.58
(-1S, 71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ser-FGF21の製造
(-1G, 71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Gly-FGF21の製造
(Q28R, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Ala-FGF21誘導体 N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [Q28R, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T] Ala-FGF21の製造
(-1A, 71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 102E, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ala-FGF21の製造
(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K] Ala-FGF21の製造
-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K, 182G-FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181K, 182G] Ala-FGF21の製造
(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E) FGF21誘導体 S-71-[([(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E], Ala-FGF21の製造
(-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, des181K) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, des 181K] Ala-FGF21の製造
(-1A, 71C, 121Q, 143V, 145E, 146E, 148aD, 149L, 150R, 152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, 154F, 155S, 156S, 158L, 159E, 160T, 161D, 163M, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [71C, 121Q, 143V, 145E, 146E, 148aD, 149L, 150R, 152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, 154F, 155S, 156S, 158L, 159E, 160T, 161D, 163M, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E] Ala-FGF21の製造
(-1A, 28R, 56R, 59R, 69R, S71C, 102T, 121Q, 122R, 166F, 167G, 168L, 170T) FGF21誘導体 S-71-[(2-{3-[(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル)-カルボキシメチル-アミノ]-プロピオニルアミノ}-エチルカルバモイル)-メチル] [28R, 56R, 59R, 69R, S71C, 102T, 121Q, 122R, 166F, 167G, 168L, 170T] Ala-FGF21の製造
(K56R, K59R, K69R, K122R) Gly-FGF21誘導体 N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [K56R, K59R, K69R, K122R] Gly-FGF21の製造
FGF21誘導体を実施例7に記載されるのと同様の態様で製造かつ精製した。
LCMS1: 理論的質量: 20293.9 発見された質量: 20294.2
(28R, K56R, 59R, 69R, 102T, 121Q, 122R, 168L, 179F, 180E, 181R) Gly-FGF21誘導体 N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタ-デカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [28R, K56R, 59R, 69R, 102T, 121Q, 122R, 168L, 179F, 180E, 181R] Gly-FGF21の製造
FGF21誘導体を実施例7に記載されるのと同様の態様で製造かつ精製した。
LCMS1: 理論的質量: 20415.1 発見された質量: 20415.3
(K56R, 59R, 69R, 122R, 168L) Gly-FGF21誘導体 N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [K56R, 59R, 69R, 122R, 168] Gly-FGF21の製造
FGF21誘導体を実施例7に記載されるのと同様の態様で製造かつ精製した。
LCMS1: 理論的質量: 20275.9 発見された質量: 20276.1
(K56R, 59R, 69R, 122R, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181R) Gly-FGF21誘導体 N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [K56R, 59R, 69R, 122R, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181R] Gly-FGF21の製造
FGF21誘導体を実施例7に記載されるのと同様の態様で製造かつ精製した。
LCMS1: 理論的質量: 20535.2 発見された質量: 20535.6
(K56R, 59R, 69R, 122R, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181R) Ser-FGF21誘導体 N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [K56R, 59R, 69R, 122R, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, 181R] Gly-FGF21の製造
FGF21誘導体を実施例7に記載されるのと同様の態様で製造かつ精製した。
LCMS1: 理論的質量: 20565.2 発見された質量: 20565.5
(-14E, -13E, -12A, -11E, -10A, -9G, -8G, -7A, -6G, -5G, -4S, -3G, -2G, -1S, K56R, 59R, 69R, 122R) FGF21誘導体 N-アルファ-1-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリル] [-14E, -13E, -12A, -11E, -10A, -9G, -8G, -7A, -6G, -5G, -4S, -3G, -2G,-1S, K56R, 59R, 69R, 122R] FGF21の製造
FGF21誘導体を実施例7に記載されるのと同様の態様で製造かつ精製した。
LCMS1: 理論的質量: 21063.6 発見された質量: 21063.8
(-5G, -4S, -3G, -2S-, 1G, K56R, 59R, 69R, 102E, 121Q, 122R, 168L) FGF21誘導体 N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [-5G, -4S, -3G, -2S, -1G, K56R, 59R, 69R, 102E, 121Q, 122R, 168L] FGF21の製造
FGF21誘導体を実施例7に記載されるのと同様の態様で製造かつ精製した。
LCMS1: 理論的質量: 20592.2 発見された質量: 20592.9
(K56R, K59R, K69R, K122R) Gly-FGF21誘導体 N-アルファ-1-(2-{2-[2-(16-1H-テトラゾール-5-イル-ヘキサデカノイルアミノ)-エトキシ]-エトキシ}-アセチル) [K56R, K59R, K69R, K122R] Gly-FGF21の製造
LCMS1: 理論的質量: 20029.66 発見された質量: 20029.82.
(K56R, K59R, K69R, K122R) Gly-FGF21誘導体 N-アルファ1-[4-(16-1H-テトラゾール-5-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)-ブチリル] [K56R, K59R, K69R, K122R] Gly-FGF21の製造
4-(16-1H-テトラゾール-5-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)-酪酸のスクシンイミジルエステルを、139 mgの4-(16-1H-テトラゾール-5-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)-酪酸及び115 mgのN-ヒドロキシスクシンイミドを1 ml DMF(数秒間熱湯で温められた)に溶解させることによって生成させた。145mgの(3-ジメチルアミノプロピル)エチルカルボジイミド塩酸塩を添加し、混合物を20分間室温で攪拌させた。3.5時間後、混合物を8 mlの水に注ぎ入れ、遠心分離機にかけた。上清を除去し、懸濁及び遠心分離を2回繰り返した。
LCMS1: 理論的質量: 20033.67 発見された質量: 20033.72.
(-5G, -4S, -3G, -2S, -1G, K56R, 59R, 69R, 102E, 121Q, 122R, 168L) FGF21誘導体 N-アルファ-1-[4-(16-1H-テトラゾール-5-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)-ブチリル] [-5G, -4S, -3G, -2S, -1G, K56R, 59R, 69R, 102E, 121Q, 122R,168L] FGF21の製造
FGF21誘導体を実施例54に記載されるのと同様の態様で製造かつ精製した。
LCMS1: 理論的質量: 20331.94 発見された質量: 20332.39
以下の化合物を実施例2及び3に記載されるように製造かつ精製した:
56a) (K56R, K59R, K69R, K122R) Gly-FGF21;
56b) (K56R, K59R, K69R, K122R, M168L) Gly-FGF21;
56c) (Q28R, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, M168L, Y179F, A180E, S181R) Gly-FGF21;
56d) (K56R, K59R, K69R, D102E, N121Q, K122R, M168L) GSGSG-FGF21;
56e) (S71C, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) Gly-FGF21;
56f) (K56R, K59R, K69R, K122R, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181R) Ser-FGF21;
56g) (K56R, K59R, K69R, K122R, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181R) Gly-FGF21;
56h) (K56R, K59R, K69R, K122R) EEAEAGGAGGSGGS-FGF21;
56i) (S71C, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) Ser-FGF21;
56j) (S71C, N121Q, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) Gly-FGF21;
56k) (S71C, D102E, N121Q, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) Gly-FGF21;
56l) (S71C, N121Q, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) Ala-FGF21;
56m) (S71C, D102E, N121Q, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) Ala-FGF21;
56n) (Q28R, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Ala-FGF21;
56o) (S71C, N121Q, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E) Ala-FGF21;
56p) (S71C, N121Q, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181G) Ala-FGF21;
56q) (S71C, N121Q, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des S181) Ala-FGF21;
56r) (D102N) Met-FGF21;
56s) (Q15F) Met-FGF21;
56t) (D24K) Met-FGF21;
56u (V16K) Met-FGF21;
56v) (S71C, M168I) Gly-FGF21;
56x) (S71C, M168L) Gly-FGF21;
56y) (K56R, K59R, K69R, K122R) FGF21;
56z) (N121Q) Met-FGF21;
56aa) (des N121) Met-FGF21;
56ab) (S71C) Gly-FGF21;
56ac) (P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) Met-FGF21;
56ad) (145aP, 145bM, L146V, P149E, G151E, I152D, A154R, P155G, Q156H, P157L, P158E, D159S, V160D, G161M, S162F, D164S, S167E, M168T, V169D, G170S, P171M, S172D, Q173P, G174F, R175G, S176L, P177V, S178T, Y179G, A180L, S181E, 182A, 183V, 184R, 185S, 186P, 187S, 188F, 189E, 190K) Met-FGF21;
56ae) (Q27E, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, Y179F, A180E, S181R) Gly-FGF21;
56af) (Q15F, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, Y179F, A180E, S181R) Gly-FGF21;
56ag) (S71C, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) Gly-FGF21;
56ah) (L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181K) Ser-FGF21;
56ai) (M168A) Met-FGF21;
56aj) (M168S) Met-FGF21;
56ak) (K56R, K59R, K69R, K122R, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181R) FGF21;
56al) (M168S) Ser-FGF21;
56am) (Q28R, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, D159E, M168L, G174A, Y179F) Gly-FGF21;
56an) (K56R, K59R, K69R, K122R) EESAASGAAAGSAAA-FGF21;
56ao) (Q28R, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Gly-FGF21;
56ap) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, S181R) FGF21;
56aq) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, desS181) FGF21;
56ar) (N121D) Met-FGF21; 及び
56as) (A26E, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, Y179F, A180E, S181R) Gly-FGF21.
以下のFGF21誘導体を実施例2及び3に記載されるのと同様に製造してもよい:
57a) (Q28R, K56R, K59R, K69R, S71C, D102T, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Ala-FGF21;
57b) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R) Gly-FGF21;
57c) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R) Ala-FGF21;
57d) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R) Ser-FGF21;
57e) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R) FGF21;
57f) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Gly-FGF21;
57g) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Ala-FGF21;
57h) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Ser-FGF21;
57i) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) FGF21;
57j) P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ala-FGF21;
57k) (S71C, 121Q, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ala-FGF21;
57l) (S71C, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ala-FGF21;
57m) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ala-FGF21;
57n) (K56R, K59R, K69R, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ala-FGF21;
57o) (S71C, 121Q, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ser-FGF21;
57p) (S71C, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ser-FGF21;
57q) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ser-FGF21;
57r) (K56R, K59R, K69R, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ser-FGF21;
57s) (S71C, 121Q, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) FGF21;
57t) (S71C, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) FGF21;
57u) (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) FGF21;
57v) (K56R, K59R, K69R, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) FGF21;
Erkリン酸化アッセイを、ヒトベータ-クロトーで安定的に形質転換されたHEK293細胞において実施した。HEK293T/b-クロトー安定細胞を96ウェルプレート上に3000細胞/ウェルで播種した。2日後、新鮮な培地を添加し、2時間以上の後にFGF21タンパク質を添加した。プレートを12分間インキュベーションした。そして、製造業者の指示に従って、AlphaScreen SureFire Phospho-ERK1/2アッセイキット(Perkin Elmer, Waltham, MA)を用いて、全体的なERKリン酸化を評価し、AlphaScreen HTS Turboオプションとともに、EnVision Multilabel Microplate Reader Model 2103 (Perkin Elmer)をシグナル検出用に用いた。データは平均+/- S.E.M.として表される。EC50値を、GraphPad Prism バージョン5.02を用いて、4つのパラメーターのロジスティックな非線形の回帰分析により決定した。参考文献:Yie, J. et al.: FGF21 N- 及び C-termini play different roles in receptor interaction and activation, FEBS Letters 583 (2009) 19-24, 及び Micanovic R. et al.: Different roles of N- and C- termini in the functional activity of FGF21.
1310689116140_1.');
2009 May; 219(2):227-34。
Claims (8)
- 式 A-B-C-D-E-のアルブミンバインダーが、システイン残基のチオール基を介して、N末端アミノ酸残基のアミノ基を介して、または、リジン残基のイプシロンアミノ基を介して、共有結合しているFGF21化合物の誘導体であって、
配列番号1に対して少なくとも80%の同一性を有し、
ここで、A-は式IまたはII:
-B-は-B2-であり、
-B2-は式 IIX, IXまたはXXVIIIの要素であり:
#-NH-SO2-(CH2)u-CO-* (式 XXVIII)
ここで、uは2, 3または4であり、*は-C-、-D-、-E-、またはFGF21化合物との結合点であり、#はA-との結合点であり;
-C-は存在しないか、結合を表すか、または式 XもしくはXIの要素であり:
-D-は存在しないか、結合を表すか、または式 XIIもしくはXIIIの要素であり:
#-NH-(CH2)r-NH-CO-(CH2)s-* (式 XII)または
#-NH-(CH2)t-* (式 XIII)
ここで、rは2, 3, 4または5であり、sは1, 2, 3または4であり、tは1, 2, 3, 4, 5または6であり、*は-E-またはFGF21化合物との結合点であり、かつ#は-C-との結合点であり;
-E-は存在しないか、結合を表すか、あるいは式 XXIIの要素であり:
誘導体、あるいはそれらの医薬的に許容できる塩。 - -B-及び-C-は存在し、かつ結合を表さない、請求項1に記載の誘導体。
- S-122-[1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-エチル)-2,5-ジオキソ-ピロリジン-3-イル] [Cys122]-Met-FGF21 (化合物F); S-71-[1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-エチル)-2,5-ジオキソ-ピロリジン-3-イル] [Cys71]Met-FGF21 (化合物H); S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) [Cys71]Met-FGF21 (化合物O); N-アルファ1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタ-デカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [Arg56, Arg59, Arg69, Arg122]-Met-FGF21 (化合物V); S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチル-カルバモイル}-メチル) [71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 169aT, 171L, 172E, 173A, 174V, 179F, 180E, des181K] Ala-FGF21; S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタ-デカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチル-カルバモイル}-メチル) [28R, 56R, 59R, 69R, S71C, 102T, 121Q, 122R, 166F, 167G, 168L, 170T] Ala-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [Q28R, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T] Ala-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] [K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des S181] Ala-FGF21; N-アルファ-1-[4-(16-1H-テトラゾール-5-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)-ブチリル] [K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des S181] Ala-FGF21; N-アルファ-1-[4-(16-1H-テトラゾール-5-イル-ヘキサデカノイル-スルファモイル)-ブチリル] [Q28R, K56R, K59R, K69R, D102T, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T] Ala-FGF21; S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタ-デカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチル-カルバモイル}-メチル) (Q28R, K56R, K59R, K69R, S71C, D102T, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Ala-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R) Gly-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R) Ala-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R) Ser-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R) FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Gly-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Ala-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) Ser-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, L166F, S167G, M168L, G170T) FGF21; S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタ-デカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチル-カルバモイル}-メチル) (S71C, 121Q, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ala-FGF21; S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタ-デカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチル-カルバモイル}-メチル) (S71C, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ala-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ala-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ala-FGF21; S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチル-カルバモイル}-メチル) (S71C, 121Q, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ser-FGF21; S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) (S71C, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ser-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S
172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ser-FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル-アミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) Ser-FGF21; S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタ-デカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチル-カルバモイル}-メチル) (S71C, 121Q, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) FGF21; S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイル-アミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エチルカルバモイル}-メチル) (S71C, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A
154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) FGF21; N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, N121Q, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) FGF21; 及び N-アルファ-1-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル] (K56R, K59R, K69R, K122R, P143V, A145E, L146E, 148aD, P149L, P150R, I152H, 153aE, 153bS, 153cD, 153dM, A154F, P155S, Q156S, P158L, D159E, V160T, G161D, S163M, L166F, S167G, M168L, 169aT, P171L, S172E, Q173A, G174V, Y179F, A180E, des181) FGF21から選択される誘導体のいずれか1つである請求項1から3のいずれか一項に記載の誘導体;あるいはこれらの化合物のいずれか1つの医薬的に許容できる塩。 - 請求項1から5のいずれか一項に記載の誘導体、及び医薬的に許容できる担体を含む、組成物。
- 医薬として使用するための、請求項6に記載の組成物。
- 糖尿病、脂質異常症、肥満、循環器疾患、メタボリック・シンドローム、及び/または非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)の治療または予防における医薬として使用するための、請求項6に記載の組成物。
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SI2814842T1 (sl) | 2012-02-15 | 2018-10-30 | Novo Nordisk A/S | Protitelesa, ki vežejo peptidoglikal prepoznan protein 1 |
US9550830B2 (en) | 2012-02-15 | 2017-01-24 | Novo Nordisk A/S | Antibodies that bind and block triggering receptor expressed on myeloid cells-1 (TREM-1) |
WO2013131091A1 (en) | 2012-03-02 | 2013-09-06 | New York University | Chimeric fgf21 proteins with enhanced binding affinity for beta-klotho for the treatment of type ii diabetes, obesity and related metabolic disorders |
US9474785B2 (en) | 2012-06-07 | 2016-10-25 | New York University | Chimeric fibroblast growth factor 19 proteins and methods of use |
US9464126B2 (en) | 2012-06-07 | 2016-10-11 | New York University | Chimeric fibroblast growth factor 21 proteins and methods of use |
US9657075B2 (en) | 2012-06-07 | 2017-05-23 | New York University | Chimeric fibroblast growth factor 23 proteins and methods of use |
TWI513705B (zh) | 2012-06-11 | 2015-12-21 | Lilly Co Eli | 纖維母細胞生長因子21蛋白質 |
MX2014015258A (es) | 2012-06-11 | 2015-03-05 | Lilly Co Eli | Variantes del factor 21 de crecimiento de fibroblasto. |
WO2014130659A1 (en) | 2013-02-22 | 2014-08-28 | New York University | Chimeric fibroblast growth factor 23 proteins and methods of use |
EP3057605A1 (en) | 2013-10-18 | 2016-08-24 | Novartis AG | Methods of treating diabetes and related disorders |
MX2016005101A (es) | 2013-10-21 | 2017-01-09 | Salk Inst For Biological Studi | Factor de crecimiento de fibroblastos (fgf) 1 mutado y procedimientos de uso. |
US20170065678A1 (en) | 2014-03-11 | 2017-03-09 | Novartis Ag | Methods of treating metabolic disorders associated with lipodystrophies and defects in insulin production or signaling |
MY178347A (en) | 2014-07-17 | 2020-10-08 | Novo Nordisk As | Site directed mutagenesis of trem-1 antibodies for decreasing viscosity |
EA036697B1 (ru) | 2014-10-24 | 2020-12-09 | Бристол-Майерс Сквибб Компани | Модифицированные полипептиды fgf-21 и их применение |
RS59154B1 (sr) * | 2014-12-23 | 2019-10-31 | Novo Nordisk As | Fgf21 derivati i njihova upotreba |
KR20170049320A (ko) * | 2015-10-28 | 2017-05-10 | 주식회사유한양행 | 이중 작용 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
AU2016344134A1 (en) | 2015-10-30 | 2018-05-31 | Salk Institute For Biological Studies | Treatment of steroid-induced hyperglycemia with fibroblast growth factor (FGF) 1 analogs |
KR20170080526A (ko) * | 2015-12-31 | 2017-07-10 | 한미약품 주식회사 | Fgf21 아날로그, fgf21 결합체, 및 이의 용도 |
EP3442997A2 (en) | 2016-04-15 | 2019-02-20 | Indiana University Research & Technology Corporation | Fgf21 c-terminal peptide optimization |
EP3502143A4 (en) | 2016-08-19 | 2020-07-15 | Ampsource Biopharma Shanghai Inc. | BINDING PEPTIDE FOR THE CONSTRUCTION OF A FUSION PROTEIN |
CN107759694B (zh) | 2016-08-19 | 2023-01-13 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 双特异性抗体及其制备方法与用途 |
CN106279437B (zh) | 2016-08-19 | 2017-10-31 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途 |
EA201992516A1 (ru) | 2017-04-21 | 2020-04-09 | Юхан Корпорейшн | Способ получения бифункциональных белков и их производных |
TWI710377B (zh) * | 2017-05-23 | 2020-11-21 | 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 | Mic-1化合物及其用途 |
US11155618B2 (en) | 2018-04-02 | 2021-10-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Anti-TREM-1 antibodies and uses thereof |
JP2021529763A (ja) | 2018-07-03 | 2021-11-04 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーBristol−Myers Squibb Company | Fgf−21製剤 |
US11542309B2 (en) | 2019-07-31 | 2023-01-03 | Salk Institute For Biological Studies | Fibroblast growth factor 1 (FGF1) mutant proteins that selectively activate FGFR1B to reduce blood glucose |
CN115322794A (zh) | 2020-01-11 | 2022-11-11 | 北京质肽生物医药科技有限公司 | Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物 |
CN113980147B (zh) * | 2021-11-26 | 2023-07-28 | 中国药科大学 | 一种聚多肽与fgf21融合蛋白突变体及其应用 |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5424286A (en) | 1993-05-24 | 1995-06-13 | Eng; John | Exendin-3 and exendin-4 polypeptides, and pharmaceutical compositions comprising same |
UA72181C2 (uk) | 1996-08-30 | 2005-02-15 | Ново Нордіск А/С | Похідна глюкагоноподібного пептиду-1 (варіанти), фармацевтична композиція та спосіб одержання лікувального засобу (варіанти), спосіб лікування діабету (варіанти) і ожиріння |
WO2001032678A1 (en) | 1999-11-05 | 2001-05-10 | Smithkline Beecham Corporation | sbgFGF-19a |
AU2002322394A1 (en) | 2001-07-30 | 2003-02-17 | Eli Lilly And Company | Method for treating diabetes and obesity |
EP1329227A1 (en) | 2002-01-22 | 2003-07-23 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Diagnostic conjugate useful for intercellular imaging and for differentiating between tumor- and non-tumor cells |
EP2264065B1 (en) | 2003-08-05 | 2017-03-08 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin derivatives |
RU2401276C2 (ru) * | 2003-09-19 | 2010-10-10 | Ново Нордиск А/С | Производные глюкагон-подобного пептида-1 (glp-1) |
CN100444898C (zh) * | 2003-09-19 | 2008-12-24 | 诺沃挪第克公司 | 治疗肽的清蛋白结合型衍生物 |
TW200522976A (en) * | 2003-09-19 | 2005-07-16 | Novo Nordisk As | Novel plasma protein affinity tags |
EP2932981B1 (en) * | 2003-09-19 | 2021-06-16 | Novo Nordisk A/S | Albumin-binding derivatives of GLP-1 |
KR20060135648A (ko) * | 2003-12-10 | 2006-12-29 | 일라이 릴리 앤드 캄파니 | 섬유모세포 성장인자 21의 뮤테인 |
BRPI0417684A (pt) * | 2003-12-18 | 2007-03-20 | Novo Nordisk As | composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto |
US20070265200A1 (en) | 2004-03-17 | 2007-11-15 | Eli Lilly And Company | Glycol Linked Fgf-21 Compounds |
DK1751184T3 (da) | 2004-05-13 | 2009-11-23 | Lilly Co Eli | FGF-21 fusionsproteiner |
GB0412181D0 (en) | 2004-06-01 | 2004-06-30 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
WO2006005667A2 (en) * | 2004-07-08 | 2006-01-19 | Novo Nordisk A/S | Polypeptide protracting tags comprising a tetrazole moiety |
KR100854198B1 (ko) | 2004-09-02 | 2008-08-26 | 일라이 릴리 앤드 캄파니 | 섬유아세포 성장 인자 21의 뮤테인 |
US7622445B2 (en) | 2004-09-02 | 2009-11-24 | Eli Lilly And Company | Muteins of fibroblast growth factor 21 |
ES2572779T3 (es) * | 2004-10-29 | 2016-06-02 | Ratiopharm Gmbh | Remodelación y glucopegilación del Factor de Crecimiento de Fibroblastos (FGF) |
JP2008522617A (ja) | 2004-12-14 | 2008-07-03 | イーライ リリー アンド カンパニー | 線維芽細胞成長因子21の突然変異タンパク質 |
US20080261875A1 (en) | 2005-01-21 | 2008-10-23 | Eli Lilly And Company | Method For Treating Cardiovascular Disease |
TWI362392B (en) | 2005-03-18 | 2012-04-21 | Novo Nordisk As | Acylated glp-1 compounds |
US20100022446A1 (en) * | 2007-01-18 | 2010-01-28 | Novo Nordisk A/S | Use of Peptides in Combination with Surgical Intervention for the Treatment of Obesity |
ATE554785T1 (de) * | 2007-03-30 | 2012-05-15 | Ambrx Inc | Modifizierte fgf-21 polypeptide und ihre verwendung |
EP2185178B1 (en) | 2007-08-03 | 2017-08-23 | Eli Lilly And Company | Use of an fgf-21 compound and a glp-1 compound for the treatment of obesity |
EP2190460B1 (en) | 2007-09-05 | 2014-12-17 | Novo Nordisk A/S | Peptides derivatized with a-b-c-d- and their therapeutical use |
CN100587073C (zh) * | 2008-03-24 | 2010-02-03 | 吉林农大生物反应器工程有限公司 | 人成纤维细胞生长因子-21的重组表达 |
EA032727B1 (ru) | 2008-10-10 | 2019-07-31 | Амген Инк. | Мутантный резистентный к протеолизу полипептид fgf21 и его применение |
WO2010065439A1 (en) | 2008-12-05 | 2010-06-10 | Eli Lilly And Company | Variants of fibroblast growth factor 21 |
ES2692495T3 (es) | 2009-01-23 | 2018-12-03 | Novo Nordisk A/S | Derivados del FGF21 con aglutinante de albúmina A-B-C-D-E- y sus usos |
JP2012529463A (ja) | 2009-06-11 | 2012-11-22 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | 2型糖尿病を治療するための、glp−1とfgf21との組合せ |
US20120035099A1 (en) | 2009-06-11 | 2012-02-09 | Novo Nordisk A/S | Fgf21 analogues and derivatives |
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