JP5155866B2 - アリール/アルキル無水琥珀酸ヒアルロナン誘導体 - Google Patents
アリール/アルキル無水琥珀酸ヒアルロナン誘導体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5155866B2 JP5155866B2 JP2008531534A JP2008531534A JP5155866B2 JP 5155866 B2 JP5155866 B2 JP 5155866B2 JP 2008531534 A JP2008531534 A JP 2008531534A JP 2008531534 A JP2008531534 A JP 2008531534A JP 5155866 B2 JP5155866 B2 JP 5155866B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- acid derivative
- aryl
- osa
- derivative according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/11—Encapsulated compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
- A61K8/73—Polysaccharides
- A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/41—Particular ingredients further characterized by their size
- A61K2800/412—Microsized, i.e. having sizes between 0.1 and 100 microns
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/41—Particular ingredients further characterized by their size
- A61K2800/413—Nanosized, i.e. having sizes below 100 nm
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Description
本発明は、アリール/アルキル無水琥珀酸HA誘導体(ASA-HA)を生成するために、アリール−又はアルキル無水琥珀酸(ASA)によるヒアルロン酸(HA)の変性、ASA-HA誘導体,及び特に化粧品及び生物医薬産業におけるそれらの適用及び使用に関する。
身体中の最も豊富なヘテロ多糖は、グリコサミノグリカンである。グリコサミノグリカンは、反復する二糖単位からなる枝なしの炭水化物ポリマーである(ケラタン硫酸のみが炭水化物のコアー領域において枝分かれされている)。二糖単位は一般的に、第1のサッカリド単位として、2種の変性された糖、すなわちN−アセチルガラクトサミン(GalNAc)又はN−アセチルグルコサミン(GlcNAc)の1つを含んで成る。第2の単位は通常、ウロン酸、例えばグルクロン酸(GlcUA)又はイズロネートである。
HAはまた、衛生及び手術製品のために使用される種々のポリマー材料、例えばポリウレタン、ポリエステル、等のための、それらの材料を生物適合性にする効果を有する添加剤としても使用され得る。
変性されていないHAに比較して、一定の変更された特性を有する、ヒアルロン酸に基づく化合物又は誘導体についての必要性が、特に化粧品及び生物医学産業において存在する。興味ある性質は、例えば典型的には、化粧品に使用される、気泡を安定化する改良された能力、及び非親水性材料とブレンドする能力である。
従って、第1の観点においては、本発明は、n個の反復範囲を含んで成り、そしてpH8-9で、下記一般構造式(I):
を有するヒアルロン酸誘導体に関する。
(b)前記ヒアルロン酸誘導体を回収する;
段階を含んで成るヒアルロン酸誘導体の生成方法に関する。
本発明の第4の観点は、有効量の第1の観点において定義されるようなヒアルロン酸誘導体、及び医薬的に許容できるキャリヤー、賦形剤又は希釈剤を含んで成る医薬組成物に関する。
第6の観点は、有効量の第1の観点において定義されるようなヒアルロン酸誘導体、又は第2,3又は4の観点のいずれかにおいて定義されるような組成物を活性成分として含んで成る化粧製品に関する。
重要な観点は、第1の観点において定義されるようなヒアルロン酸誘導体、又は第3,4又は5の観点のいずれかにおいて定義されるような組成物を含んで成る医薬カプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、微晶球又は超微晶球に関する。
ヒアルロン酸:
“ヒアルロン酸”は、β−1,4及びβ−1,3グリコシド結合を変えることによって一緒に結合される、N−アセチルグルコサミン(GlcNAc)及びグルクロン酸(GlcUA)の反復二糖単位から構成される、硫酸化されていないグリコサミノグリカンとして、本明細書においては定義される。ヒアルロン酸はまた、ヒアルロナン、ヒアルロネート又はHAとして知られている。用語、ヒアルロナン及びヒアルロン酸は、本明細書においては、交換可能的に使用される。
を有するヒアルロン酸誘導体に関する。
好ましくは、R5, R6, R7, R8が、好ましくはプロピル、2−オクテニル、2−ノネニル、2−ドデセニル、2−ヘキサデセニル、2−オクタデセニル及びフェニルから選択された2又は複数の異なったアルキル−及び/又はアリール−基を含んで成る。
ヒアルロン酸のレベルは、改良されたカルバゾール方法(Bitter and Muir, 1962, Anal Biochem. 4: 330-334)に従って決定され得る。さらに、ヒアルロン酸の平均分子量は、当業界における標準の方法、例えばUeno など, 1988, Chem. Pharm. Bull. 36, 4971-4975; Wyatt, 1993, Anal. Chim. Acta 272: 1-40; 及び Wyatt Technologies, 1999, "Light Scattering University DAWN Course Manual" and "DAWN EOS Manual" Wyatt Technology Corporation, Santa Barbara, Californiaにより記載されるそれらの方法を用いて決定され得る。
DSは、下記例6に従って、1H NMR分光法(10mg/ml、D2O, 80℃、128走査、400MHz)により決定され、ここでOSA基からのピークが2D−NMR(gCOSY)の使用により割り当てられた。次に、DSが、OSAのビニルプロトン(5.4及び5.6ppm)の強度と、アセチルプロトン(2.0ppm)の強度とを比較することにより、計算された。
本発明の好ましい態様においては、1又は複数のアルキル−/アリール−無水琥珀酸(ASA)は、下記一般構造式(III ):
さらにもう1つの好ましい態様においては、1又は複数のASAは、図3に示される構造式のいずれかを含んで成る。
本発明の方法においては、次の方法により生成される、組換え的に生成されるHAが使用され得、ここで前記HA−生成宿主細胞が、当業界において知られている方法を用いて、ヒアルロン酸の生成のために適切な栄養培地において培養される。例えば、細胞は、適切な培地において、及びヒアルロン酸合成に関与する酵素の発現及びヒアルロン酸の単離を可能にする条件下で行われる実験室用又は産業用発酵器において、振盪フラスコ培養、小規模又は大規模発酵(連続、バッチ、供給バッチ、又は団体状態発酵を包含する)により培養され得る。
好ましい態様は、好ましくはグラム陽性細菌又は宿主細胞により、より好ましくはバチルス属の細菌により、組換え的に生成されるヒアルロン酸又はその塩に関する。
好ましい態様は、ヒアルロン酸の無機塩、好ましくはヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸アンモニウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、又はヒアルロン酸コバルトを含んで成る、第1の観点のヒアルロン酸誘導体に関する。
第1の観点の好ましいHA誘導体は、イソプロパノールに懸濁された粒子のレーザー回折測定により決定される場合、D50が10〜1,000ミクロン、好ましくは100〜1,000ミクロン、より好ましくは150〜900ミクロン、そしてさらに好ましくは200〜800ミクロンの間である50パーセントの粒度を有する。
下記例に示されるように、本発明は、微粒子又は超微粒子、又はマイクロカプセル又はナノカプセルを形成できるASA-HA誘導体を提供する。そのような粒子又はカプセル、又はそれらを含んで成る組成物は、多数の商業的及び科学的適用、例えば化粧品又は一般的薬物供給に使用できる。
好ましい態様においては、本発明のHA誘導体を含んで成る組成物はまた、他の成分、好ましくは1又は複数の活性成分、好ましくは1又は複数の薬理学的活性物質、及びまた、好ましくは水溶性賦形剤、例えばラクトースを含んで成ることができる。
高分子量(高−MW)ヒアルロン酸(HA):
−(バッチMAG30014)
−(バッチMAF145SD)
低分子量(低−MW)HA:
−100kDa(バッチ14919−021)
−30kDa(バッチ14919−032)
−23kDa
−14kDa
−シスルトランス−2−オクテン−1−イル無水琥珀酸(OSA)、Aldrich Chemical Company (d.: 1.000, MW 220.27, 97% 純度)。
−フェニル無水琥珀酸(PhSA)(乾燥粉末、MW176.17)。
−ノネニル無水琥珀酸(NSA)Aldrich Chemical Company (d.: 1.032, MW 224.30, 95+% 純度, 1JS38, 246-00198-1)。
−テトラプロピル無水琥珀酸(TpSA)。
−ヘキサデセニル無水琥珀酸(HDSA)。
−オクタデセニル無水琥珀酸(ODSA)。
−ODSA及びHDSAの混合物(50:50)。
4MのHCl、及び4MのNaOH。
Na2CO3。
Milli-Q(商標)超純水 (Millipore)。
12〜14KDaの分子量カットオフを有する再生セルロースの透析管、Spectr/Por(TM) (Spectrum Medical Industries)。
Ultrafiltration 膜 (MWCO 10 kDa 及び 3kDa)。
HA(バッチMAF145SD, 1.42g)を、Milli−Q水(200ml)に、室温で一晩、溶解し、その後、4MのNaOHによりpHを9.0に調節した。OSA(1ml、4.54mモル)を、強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で16時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。20mlの飽和NaHCO3を添加し、反応を緩衝した。反応の後、pHを、1MのHClにより6.8に調節した。生成物を、96%エタノール(4体積)を添加し、80%v/vの最終濃度にすることによるエタノール沈殿により回収した。沈殿物を遠心分離(3000rpm、15分及び4℃)により回収した。ペレットを96%エタノールにより洗浄し、その後、MQ水に再溶液し、そして凍結乾燥した。
3種のMilli−Q水の溶液の個々50mlに、HA(バッチMAF145SD、1.13g)を添加し、そして室温で一晩、溶解した。pHを、4MのNaOHにより11に調節した。異なった量のOSA(1.10ml(5,23mモル)、0.505ml(2.62mモル)、0.110(0.52mモル))を、3種の溶液の個々に強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で21時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。すべてのサンプルは、反応の後、約4〜5のpHを有した。生成物を、96%エタノール(4体積)を添加し、80%v/vの最終濃度にすることによるエタノール沈殿により回収した。沈殿物を遠心分離(3000rpm、15分及び4℃)により回収した。ペレットを96%エタノールにより洗浄し、その後、MQ水に再溶液し、そして凍結乾燥した。
HA(バッチMAF145SD, 0.75g)を、Milli−Q水(150ml)に、室温で一晩、溶解し、その後、pHを9.0に調節した。OSA(1.42ml、6.25mモル)を、強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で16時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。pHを、pH安定装置の使用により約9〜11に維持した(1MのNaOHを添加する)。生成物を、MQ水(4℃、7L、MWCO 12-14,000Da)に対して3時間、3度透析し、凍結し、そして凍結乾燥した。
HA(バッチMAF30014, 0.75g)を、Milli−Q水(150ml)に、室温で一晩、溶解し、その後、pHを8.5に調節した。OSA(1.42ml、6.25mモル)を、強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で16時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。pHを、pH安定装置の使用により約9〜11に維持した(1MのNaOHを添加する)。pHを、1MのHClの使用により6.5に調節した。生成物を、MQ水(4℃、7L、MWCO 12-14,000Da)に対して3時間、3度透析し、凍結し、そして凍結乾燥した。
低−MW HA(30又は100KDa、2.5g)を、室温で一晩、Milli-Q水(50ml)に溶解し、その後、pHを8.5に調節した。等モル量のOSA(3.35ml、HA:OSAの比1:1)又は1/10のモル濃度のHA(0.35ml、HA:OSAの比10:1)を、強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で16時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。pHを、pH安定装置の使用により約8.5〜9.0に維持した(1M又は0.5MのNaOHを添加する)。生成物を、MQ水(4℃、7L、MWCO 12-14,000Da)に対して3時間、3度透析し、凍結し、そして凍結乾燥した。
分子量:
例5からの100KDaのOSA−HAを、SEC-MALLS-VISC (移動相: 15OmM NaCI, 5OmM NaH2PO4, pH 7.0, 0.5 ml/分, 注入される体積: 0.5 ml)を用いて分析した。使用されるカラム:PL aquagel OH-40/OH-50/OH60. System: Waters Alliance HPLC system Waters 2410 Rl detector and Wyatt MALLS detector。データは、Wyatt Technology Corp.からのASTRA Vソフトウェアを用いて処理された。
DSを、1H NMR分光法(10 mg/ml, D2O, 8O℃, 128 の走査, 400MHz)により決定した。OSA基からのピークを、2D−NMR(gCOSY)の使用により割り当てた。
高−MW HAに対するすべての実験の間、観察は同じであった:OSAは、撹拌のために、徐々に、より小さな液滴に分割する琥珀色の油状液滴を形成する。反応の最後で、液滴は、ミセル又は微小規模の凝集体/小滴の形成として解釈され得る、乳白色且つ不透明であった。過剰のOSAが除去される、沈殿又は透析による精製の後でさえ、この現象はまだ、異なった程度、観察された。
4種の異なった実験を行い、そして1H−NMR分光法からのDS及び収率と一緒に、表1に要約する。DSは、OSAのビニルプロトン(5.4及び5.6ppm)の強度と、アセチルプロトン(2.0ppm)の強度とを比較することにより計算される。
結論的には、それらの実験においては、高−及び低−MWヒアルロン酸が2−オクテン−1−イル無水琥珀酸(OSA)により都合良く変性された。
低−MW-HA(14kDa、2.5g)を、Milli-Q水(50ml)に室温で溶解し、その後、pHを8.5に調節した。等モル量のOSA(3.35ml、HA:OSAの比1:1)又は1/10のモル濃度のHA(0.34ml、HA:OSAの比10:1)を、強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で16時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。pHを、pH安定装置の使用により約8.5〜9.0に維持した(0.5MのNaOHの添加)。生成物を、MQ水(4℃、7L、MWCO 12〜14,000Da)に対して3時間、3度、透析し、凍結し、そして凍結乾燥した。精製及び凍結乾燥の後の収率はそれぞれ2.1g及び2.1gであった。DSを、例6に記載のようにして決定し、それぞれ11.5%及び2.6%であった。
低−MW-HA(14kDa、2.5g)を、Milli-Q水(50ml)に室温で溶解し、その後、pHを8.5に調節した。等モル量のPhSA(2.8g、HA:PhSAの比1:1)又は1/10のモル濃度のHA(0.28g、HA:PhSAの比10:1)を、強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で16時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。pHを、pH安定装置の使用により約8.5〜9.0に維持した(0.5MのNaOHの添加)。生成物を、MQ水(4℃、7L、MWCO 12〜14,000Da)に対して3時間、3度、透析し、凍結し、そして凍結乾燥した。精製及び凍結乾燥の後の収率はそれぞれ2.5g及び2.4gであった。DSを、例6に記載のようにして決定し、それぞれ15.1%及び2.6%であった。
低−MW-HA(14kDa、2.5g)を、Milli-Q水(50ml)に室温で溶解し、その後、pHを8.5に調節した。等モル量のNSA(3.55ml、HA:NSAの比1:1)又は1/10のモル濃度のHA(0.35ml、HA:NSAの比10:1)を、強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で16時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。pHを、pH安定装置の使用により約8.5〜9.0に維持した(0.5MのNaOHの添加)。生成物を、MQ水(4℃、7L、MWCO 12〜14,000Da)に対して3時間、3度、透析し、凍結し、そして凍結乾燥した。精製及び凍結乾燥の後の収率はそれぞれ2.4g及び2.2gであった。DSを、例6に記載のようにして決定し、それぞれ11.4%及び2.1%であった。
低−MW-HA(14kDa、2.5g)を、Milli-Q水(50ml)に室温で溶解し、その後、pHを8.5に調節した。等モル量のDSA(4.20ml、HA:DSAの比1:1)又は1/10のモル濃度のHA(0.42ml、HA:DSAの比10:1)を、強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で16時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。pHを、pH安定装置の使用により約8.5〜9.0に維持した(0.5MのNaOHの添加)。生成物を、MQ水(4℃、7L、MWCO 12〜14,000Da)に対して3時間、3度、透析し、凍結し、そして凍結乾燥した。精製及び凍結乾燥の後の収率はそれぞれ2.2g及び2.2gであった。DSを、例6に記載のようにして決定し、それぞれ2.2%及び1.7%であった。
低−MW-HA(14kDa、2.5g)を、Milli-Q水(50ml)に室温で溶解し、その後、pHを8.5に調節した。等モル量のTpSA(3.25ml、HA:TpSAの比1:1)又は1/10のモル濃度のHA(0.33ml、HA:TpSAの比10:1)を、強い撹拌下で添加した。その溶液を、周囲温度で16時間、強い撹拌(約600rpm)下で反応せしめた。pHを、pH安定装置の使用により約8.5〜9.0に維持した(0.5MのNaOHの添加)。生成物を、MQ水(4℃、7L、MWCO 12〜14,000Da)に対して3時間、3度、透析し、凍結し、そして凍結乾燥した。
11種の別々の実験を、2種の異なったHA:ASAモル比(1:1及び10:1)で、5種の異なったASA(ASA名称、構造及び略語については図3を参照のこと)によりLMW HA(14kDa)を変性することにより実施した。得られる生成物を透析により精製し、過剰の試薬及び副生成物を除去した。置換度(DS)を、1H NMR分光法により、モノマーに基づいて決定した。収率を、凍結乾燥されたサンプルの重量分析により決定した。分子量を、SEC-MALLS-VISCにより決定した。GPCカラム上の材料の蓄積を回避するために、温度を、自動注入器により4℃〜15℃に調節した。この分析からのすべての結果は、表2に要約される。
二重対数規模での分子量(MW)に対する回転(Rg)の半径をプロットすることにより、ポリマーの配座についての情報を得ることができる。Rg及びMWの関係が、Haug’s三角形に要約されている(図4)。
14kDaのOSA-HA(DS=9.7%、バッチ14658-142)及び変性されていないLMW HA(30kDa)の溶液を、表3に与えられる濃度に従って、MQ−水において調製した。サンプルを、表面張力計(Wilhelmyプレート)を用いての表面張力測定により分析した。溶媒(水)の表面張力は、同じ方法により72mN/m であることが決定された。表面張力測定の結果は図6に与えられ、そして表3に要約される。見られるように、表面張力は、OSA-HAの濃度の上昇と共に低下する。純粋な溶媒(MQ−水)及びLMW-HA(30kDa)と比較すれば、表面張力は、HA誘導体に関して、一層低い。
HA(4g、MAG30021)を、400mlのMQ水に一晩、溶解した。溶液を室温(25℃)で維持し、又は60℃に加熱し、その後、炭酸ナトリウム(2g)を剪断(ULTRA-TURRAX 24000/分、5分)下で添加した。次に、ASAを、表4に表される反応スキームに従って添加し、そして強い剪断(ULTRA-TURRAX 24000/分、5分)下で混合した。得られるエマルジョンを、所定の温度で6時間、反応せしめ(表4)、次に室温に一晩、移動した。pHを中性に調節し、その後、生成物を導電率が15μSi/cm以下になるまで、限外濾過(MWCO 10000)により精製した。生成物を凍結し、そして凍結乾燥した。NMR分光法は、すべての生成物が変性されたことを確証した。すべてのサンプルは、1%w/v濃度で0.1MのNaClにおいて濁った溶液を付与した。
例14において調製された、ASA−HA番号1, 3, 4, 5, 6, 7及び変性されていないHA(MAG30014)を、次のレシピに従って、3種の化粧用オイル(鉱油、ジエチルへキシルカーボネート及びエチルヘキシルパルミテート)と共に配合した:
1.6mlのオイルを、0.1MのNaCl及び0.29%のASA-HAの水溶液14mlに添加した。
2.その溶液を、強い剪断下で25秒間、混合した(24000/分でULTRA-TURRAX)。
3.前記エマルジョンを、暗室において室温で8週間、放置し、24時間及び8週間後、安定性について視覚的に評価した。
低MW ASA HAを、高MW HAについて例15に記載のようにして調製し、唯一の差異は、HA(23kDa)の出発濃度が2%w/vであったことである。表5におけるすべてのサンプルを、60℃で調製し、そして限外濾過(MWCO 3000kDa)により精製し、そして凍結乾燥した。DSを、例6に記載のようにして、1H NMR分光法により決定した。
水溶液中、PhSA-HA(14kDa)(10mg/ml)は、ヒドロキシル基(Cu2+/H2O2により生成される)の存在下で、変性されていないHAよりも、より早く分解することが示され、続いて、画線カメラ観察及び光散乱(DLS/SLS)研究の両者により示された。これは、PhSA-HAが化粧品配合物への可能性ある使用のために遊離基掃去剤としての可能性を有することを示す。
OSA-HA誘導体の決定的凝集濃度(CAC)を、等温滴定熱量計VP-ITC(Microcal LLC, USA)を用いて熱量法により決定した。OSA-HAの濃縮溶液(0.294ml、蒸留水中、15mg/ml)を用いて、熱量計サンプルセルにおける蒸留水(1.4615ml)を滴定した。OSA-HAの溶液(2μl、15mg/ml)を300秒ごとに注入し、そしてサンプルセルにおけるエンタルピー変動(ΔH)を、図8に示されるようにして、時間にわたって記録した。
この研究は、OSA-HAの結合性質の存在を確認した。さらに、それは、ミセル及び/又は微粒子/超微粒子へのそれらの誘導体の可能性ある配合を示し、それらを、疎水性化合物、例えば疎水性化粧生物活性剤及び薬剤の封入及び供給への使用のために適切にする。
44%の置換度を有するOSA-HAのCACを、水浴(Julabo F10, Merck, United States)により温度調節された分光蛍光計(FluoroMax, Spex, United States)を用いて、蛍光顕微鏡により決定した。ナイルレッドを、蛍光プローブとして使用した。蛍光を、異なったリン酸緩衝液(表7)において調製された広範囲のOSA-HA溶液(表6)に基づいて測定した。
CACを決定するために、λmaxを、ポリマー濃度(C)の関数としてプロットした。CACは曲線λmax対Cの変曲点で推定された(図10)。
前記例に記載される実験設定と同じ設定を用いて、OSA-HA(DS=44%)のCACの値に対する塩濃度の影響を研究した。その結果は、下記表8が及び図11に示される。
OSA-HA(DS=44%)ポリマーミセルZeta電位を、ドップラーレーザー干渉計にカップリングされた細管電気泳動(Zetasizer 3000HS, Malvern, United Kingdom)により決定した。測定値は25℃で記録された。CSA-HAを10〜3MのNaCl(1mg/mlの濃度で)に、測定の前、溶解した。OSA-HA(DS=44%、10〜3MのNaCl中、1mg/ml)のZeta電位を、約−25mVに評価した(図12)。
OSA−HA(DS=44%)ポリマーミセルの顕微鏡観察を、透過性電子顕微鏡(EM 410, Philips, The Netherlands)により行った。サンプルをイオン化された炭素被覆された銅グリッド上に置き、そして酢酸ウラニル水溶液(2%)により染色した。顕微鏡スナップショットは、OSA-HAポリマーミセルが球形状であり、そして典型的には50〜200nmのミクロン以下の寸法を有することを明確に示した(データーは示されていない)。これは図13に示される。
Claims (21)
- n個の反復範囲を含んで成り、そしてpH8-9で、下記一般構造式(I):
を有するヒアルロン酸誘導体。 - 2又はそれより多くのR1, R2, R3, R4が、pH8-9で一般構造式(II)を有する1又は複数のエステル結合されたアルキル−/アリール−琥珀酸を含んで成る請求項1記載のヒアルロン酸誘導体。
- 3又はそれより多くのR1, R2, R3, R4が、pH8-9で一般構造式(II)を有する1又は複数のエステル結合されたアルキル−/アリール−琥珀酸を含んで成る請求項1又は2記載のヒアルロン酸誘導体。
- 少なくとも1つのR5, R6, R7, R8がアルキル基を含んで成る請求項1〜3のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体。
- 前記アルキル基が、C1-C20アルキル基を含んで成る請求項4記載のヒアルロン酸誘導体。
- 少なくとも1つのR5, R6, R7, R8がアリール基を含んで成る請求項4記載のヒアルロン酸誘導体。
- 前記アリール基がフェニルである請求項6記載のヒアルロン酸誘導体。
- R5, R6, R7, R8が、2又はそれより多くの異なったアルキル−及び/又はアリール−基を含んで成る請求項4〜6のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体。
- 800〜10,000,000Daの範囲で、平均分子量を有する請求項1〜8のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体。
- 10,000〜50,000Daの平均分子量を有する請求項9記載のヒアルロン酸誘導体。
- 50,000〜500,000Daの平均分子量を有する請求項9記載のヒアルロン酸誘導体。
- 置換度(DS)が、 1 H NMR分光法により決定される場合、0.1〜100%の範囲である請求項1〜11のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体。
- ヒアルロン酸が組換え的に生成される請求項1〜12のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体。
- 請求項1〜13のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体、及び活性成分を含んで成る組成物。
- 水溶性賦形剤を更に含んで成る請求項14記載の組成物。
- 有効量の請求項1〜13のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体、及び医薬的に許容できるキャリヤー、賦形剤又は希釈剤を含んで成る医薬組成物。
- ビークルとしての有効量の請求項1〜13のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体、及び薬理学的活性剤を含んで成る医薬組成物。
- 請求項1〜13のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体を含んで成る化粧品。
- 有効量の請求項1〜13のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体の有効量を活性成分として含んで成る化粧品。
- 請求項1〜13のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体を含んで成る、衛生、医学又は手術製品。
- 請求項1〜13のいずれか1項記載のヒアルロン酸誘導体を含んで成る医薬カプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、微晶球又は超微晶球。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPA200501332 | 2005-09-26 | ||
DKPA200501332 | 2005-09-26 | ||
PCT/DK2006/000523 WO2007033677A1 (en) | 2005-09-26 | 2006-09-26 | Aryl/alkyl succinic anhydride hyaluronan derivatives |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009510186A JP2009510186A (ja) | 2009-03-12 |
JP2009510186A5 JP2009510186A5 (ja) | 2009-11-12 |
JP5155866B2 true JP5155866B2 (ja) | 2013-03-06 |
Family
ID=37497045
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008531534A Expired - Fee Related JP5155866B2 (ja) | 2005-09-26 | 2006-09-26 | アリール/アルキル無水琥珀酸ヒアルロナン誘導体 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US7993678B2 (ja) |
EP (1) | EP1931713B1 (ja) |
JP (1) | JP5155866B2 (ja) |
CN (1) | CN101273065B (ja) |
AU (1) | AU2006294207B2 (ja) |
BR (1) | BRPI0616298A2 (ja) |
CA (1) | CA2621899C (ja) |
DK (1) | DK1931713T3 (ja) |
WO (1) | WO2007033677A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7228591B2 (ja) | 2018-07-05 | 2023-02-24 | 住友化学株式会社 | ウラシル化合物及びその用途 |
Families Citing this family (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MX2010010904A (es) | 2008-04-04 | 2010-11-04 | Univ Utah Res Found | Eteres de glicosaminoglicosano semisinteticos alquilados, y metodos para elaborarlos y usarlos. |
CZ2009836A3 (cs) | 2009-12-11 | 2011-06-22 | Contipro C A.S. | Derivát kyseliny hyaluronové oxidovaný v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd, zpusob jeho prípravy a zpusob jeho modifikace |
CZ2009835A3 (cs) | 2009-12-11 | 2011-06-22 | Contipro C A.S. | Zpusob prípravy derivátu kyseliny hyaluronové oxidovaného v poloze 6 glukosaminové cásti polysacharidu selektivne na aldehyd a zpusob jeho modifikace |
AU2012230822A1 (en) | 2011-03-23 | 2013-11-07 | University Of Utah Research Foundation | Methods for treating or preventing urological inflammation |
WO2012163884A1 (en) | 2011-05-30 | 2012-12-06 | Novozymes Biopharma Dk A/S | Spray drying of high molecular weight hyaluronic acid |
TWI561535B (en) | 2011-10-06 | 2016-12-11 | Bvw Holding Ag | Copolymers of hydrophobic and hydrophilic segments that reduce protein adsorption |
CZ303879B6 (cs) | 2012-02-28 | 2013-06-05 | Contipro Biotech S.R.O. | Deriváty na bázi kyseliny hyaluronové schopné tvorit hydrogely, zpusob jejich prípravy, hydrogely na bázi techto derivátu, zpusob jejich prípravy a pouzití |
CZ304512B6 (cs) | 2012-08-08 | 2014-06-11 | Contipro Biotech S.R.O. | Derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, způsob jeho modifikace a použití |
CZ304654B6 (cs) | 2012-11-27 | 2014-08-20 | Contipro Biotech S.R.O. | Nanomicelární kompozice na bázi C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy C6-C18-acylovaného hyaluronanu, způsob přípravy nanomicelární kompozice a stabilizované nanomicelární kompozice a použití |
CA2932532C (en) | 2012-12-04 | 2021-06-22 | Phosphorex, Inc. | Microparticles and nanoparticles having negative surface charges |
US9879124B2 (en) * | 2013-08-29 | 2018-01-30 | Dainichiseika Color & Chemicals Mfg. Co., Ltd. | Method for manufacturing water-insoluble molded article and water-insoluble molded article |
EP3052529B1 (en) | 2013-09-30 | 2017-10-04 | Galderma S.A. | Single-step functionalization and cross-linking of hyaluronic acid |
US20150119505A1 (en) * | 2013-10-29 | 2015-04-30 | Edward Scott Williams | Paper Coating Composition |
CZ2014150A3 (cs) | 2014-03-11 | 2015-05-20 | Contipro Biotech S.R.O. | Konjugáty oligomeru kyseliny hyaluronové nebo její soli, způsob jejich přípravy a použití |
CZ2014451A3 (cs) | 2014-06-30 | 2016-01-13 | Contipro Pharma A.S. | Protinádorová kompozice na bázi kyseliny hyaluronové a anorganických nanočástic, způsob její přípravy a použití |
EP3263146A4 (en) * | 2015-02-27 | 2018-06-20 | Dainichiseika Color & Chemicals Mfg. Co., Ltd. | Method for manufacturing medical material, medical material, and anti-adhesion material |
CZ309295B6 (cs) | 2015-03-09 | 2022-08-10 | Contipro A.S. | Samonosný, biodegradabilní film na bázi hydrofobizované kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití |
CZ306479B6 (cs) | 2015-06-15 | 2017-02-08 | Contipro A.S. | Způsob síťování polysacharidů s využitím fotolabilních chránicích skupin |
CZ306662B6 (cs) | 2015-06-26 | 2017-04-26 | Contipro A.S. | Deriváty sulfatovaných polysacharidů, způsob jejich přípravy, způsob jejich modifikace a použití |
CZ308106B6 (cs) | 2016-06-27 | 2020-01-08 | Contipro A.S. | Nenasycené deriváty polysacharidů, způsob jejich přípravy a jejich použití |
GB201611695D0 (en) * | 2016-07-05 | 2016-08-17 | Statoil Petroleum As | Subsea wellhead installation and/or removal |
US11337994B2 (en) | 2016-09-15 | 2022-05-24 | University Of Utah Research Foundation | In situ gelling compositions for the treatment or prevention of inflammation and tissue damage |
CN108410926B (zh) * | 2017-12-03 | 2021-12-14 | 新疆阜丰生物科技有限公司 | 一种制备提取高分子量透明质酸的方法 |
FR3083448B1 (fr) * | 2018-07-06 | 2020-07-10 | Coatex | Formulation cosmetique lavante |
CN113750226B (zh) * | 2021-08-12 | 2022-10-21 | 通用生物(安徽)股份有限公司 | 一种阳离子脂质核酸疫苗组合物及其制备方法 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5356883A (en) * | 1989-08-01 | 1994-10-18 | Research Foundation Of State University Of N.Y. | Water-insoluble derivatives of hyaluronic acid and their methods of preparation and use |
US5416071A (en) * | 1991-03-12 | 1995-05-16 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Water-soluble composition for sustained-release containing epo and hyaluronic acid |
US5580553A (en) * | 1992-08-21 | 1996-12-03 | Nippon Starch Chemical Co., Ltd. | Cosmetic composition containing alkenylsuccinic acid ester of saccharide |
BR9601302A (pt) | 1995-04-10 | 1998-01-13 | Amerchol Corp | Processo para fabricação de um derivado poliglucosamina covalentement ligado derivado poliglucosamina compostos e composição |
IT1281877B1 (it) | 1995-05-10 | 1998-03-03 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Sali di metalli pesanti di succinil derivati dell'acido ialuronico e loro impiego come potenziali agenti terapeutici |
US6017901A (en) * | 1995-05-10 | 2000-01-25 | Fidia Advanced Bioplymers S.R.L. | Heavy metal salts of succinic acid hemiesters with hyaluronic acid or hyaluronic acid esters, a process for their preparation and relative pharmaceutical compositions |
PL186859B1 (pl) * | 1995-08-29 | 2004-03-31 | Fidia Advanced Biopolymers | Biomateriał do zapobiegania zrostom tkanek po zabiegu chirurgicznym i zastosowanie biomateriału |
IT1286510B1 (it) * | 1996-11-29 | 1998-07-15 | Cooperativa Centro Ricerche Po | Esteri butirrici ad attivita' antiproliferativa e composizioni farmaceutiche che li contengono |
US5977348A (en) * | 1997-07-25 | 1999-11-02 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Polysaccharide modification in densified fluid |
GB9902412D0 (en) * | 1999-02-03 | 1999-03-24 | Fermentech Med Ltd | Process |
CA2410577A1 (en) * | 2000-05-23 | 2001-12-13 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for treating respiratory disorders associated with pulmonary elastic fiber injury |
CN1136012C (zh) * | 2000-08-07 | 2004-01-28 | 黄玲惠 | 伤口敷料及其制备方法 |
GB0408308D0 (en) * | 2004-04-14 | 2004-05-19 | Vectura Ltd | Pharmaceutical compositions |
-
2006
- 2006-08-26 US US11/572,954 patent/US7993678B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-09-26 BR BRPI0616298-3A patent/BRPI0616298A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-09-26 DK DK06791421.8T patent/DK1931713T3/da active
- 2006-09-26 CN CN2006800354457A patent/CN101273065B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-09-26 CA CA2621899A patent/CA2621899C/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-09-26 AU AU2006294207A patent/AU2006294207B2/en not_active Ceased
- 2006-09-26 WO PCT/DK2006/000523 patent/WO2007033677A1/en active Application Filing
- 2006-09-26 JP JP2008531534A patent/JP5155866B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-09-26 EP EP06791421A patent/EP1931713B1/en not_active Not-in-force
-
2011
- 2011-06-20 US US13/164,012 patent/US20110319357A1/en not_active Abandoned
-
2012
- 2012-07-20 US US13/554,190 patent/US20120283213A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-09-03 US US14/017,085 patent/US20140106411A1/en not_active Abandoned
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7228591B2 (ja) | 2018-07-05 | 2023-02-24 | 住友化学株式会社 | ウラシル化合物及びその用途 |
US11820755B2 (en) | 2018-07-05 | 2023-11-21 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Uracil compound and use thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20120283213A1 (en) | 2012-11-08 |
CN101273065A (zh) | 2008-09-24 |
CA2621899A1 (en) | 2007-03-29 |
WO2007033677A1 (en) | 2007-03-29 |
JP2009510186A (ja) | 2009-03-12 |
EP1931713B1 (en) | 2012-12-05 |
CN101273065B (zh) | 2011-12-28 |
BRPI0616298A2 (pt) | 2011-06-14 |
AU2006294207A1 (en) | 2007-03-29 |
US7993678B2 (en) | 2011-08-09 |
DK1931713T3 (da) | 2013-03-11 |
US20090252810A1 (en) | 2009-10-08 |
AU2006294207B2 (en) | 2012-11-29 |
EP1931713A1 (en) | 2008-06-18 |
US20110319357A1 (en) | 2011-12-29 |
US20140106411A1 (en) | 2014-04-17 |
CA2621899C (en) | 2014-05-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5155866B2 (ja) | アリール/アルキル無水琥珀酸ヒアルロナン誘導体 | |
JP5399716B2 (ja) | アリール/アルキルビニルスルホンヒアルロン酸誘導体 | |
JP2008527056A (ja) | αヒドロキシ酸のポリマーにより結合されたヒアルロン酸 | |
JP2008526693A (ja) | 保湿及び抗−しわ性質を有するヒアルロン酸画分 | |
JP5313497B2 (ja) | 乾燥および凝集されたヒアルロン酸生成物 | |
US7956180B2 (en) | Dried and agglomerated hyaluronic acid product | |
US20050272695A1 (en) | Fast dissolving dried hyaluronic acid product | |
KR20070017374A (ko) | 신속하게 용해하는 건조 히알루론산 생성물 | |
WO2005116130A1 (en) | A fast dissolving dried hyaluronic acid product |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20090714 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090925 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090925 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120724 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121022 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20121113 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20121207 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20151214 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |