JP4991517B2 - 細胞/組織培養デバイス、システム、および方法 - Google Patents
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Description
(i)アグロバクテリウムによって媒介される遺伝子導入:Klee ら.,(1987)Annu.Rev.Plant Physiol.38:467−486;Klee and Rogers in Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants,第6巻,Molecular Biology of Plant Nuclear Genes,編,Schell,J.,and Vasil,L.K.,Academic Publishers,San Diego,Calif.(1989)p.2−25;Gatenby,in Plant Biotechnology,編,Kung,S.and Arntzen,C.J.,Butterworth Publishers,Boston,Mass.(1989)p.93−112。
図1a〜cには、本発明のデバイスの第1の実施形態の主な構成部材が、正面図および断面側面図として、それぞれ図1Aおよび1Bに示され、図1Cには本発明の例示的なシステムが示される。
図2aおよび2bには、それぞれ、本発明のデバイスの第2の実施形態の主な構成部材が、それぞれ、正面図および断面側面図として示される。
図3には、本発明のデバイスの第3の実施形態の主な構成部材が断面側面図として示される。
図4には、本発明のデバイスの第1の実施形態の継目線が正面図として示される。
図5aおよび5bには、本発明のデバイスの第4の実施形態の主な構成部材が、それぞれ、側面図および断面の上方視点図として示される。図5cおよび5dには、図5(a)の線B−BおよびC−Cに沿った、第4の実施形態の横方向の断面図が示される。
図6aおよび6bには、本発明のデバイスの第5の実施形態の主な構成部材が、それぞれ、側面図および断面の上方視点図として示される。図6cおよび6dには、図6(a)の線B−BおよびC−Cに沿った、第5の実施形態の横方向の断面図が示される。
図7には、図5の実施態様が透視図として示される。
図8には、図6の実施態様が透視図として示される。
図9には、図5〜8の実施形態を使用するための支持構造体が示される。
図10には、図1〜8のいずれか1つのデバイスを複数個含む、本発明のバッテリーの好ましい実施形態の主な構成部材が示される。
図11aおよび11bでは、本発明とともに使用される発現カセットとベクターが示される。
図12には、三角フラスコに対して向かい合わせた本発明のデバイスの中での、形質転換された(グルコセレブロシダーゼ(GCD))ニンジン細胞懸濁物の増殖が示される。
図13には、三角フラスコに対して向かい合わせた本発明のデバイスによって生産されたGCDの相対的な量が示される。
図14には、平行である増殖曲線に関して、7%および15%の充填細胞容量の開始点が示される。
図15には、これらの2つの増殖条件についての定量的ウェスタンブロットによるGCDタンパク質の量が示される。
図16には、定常点を見つけるための、さらに長い期間(14日間)にわたる増殖が示される。
図17には、最大量のGCD(他のタンパク質と比較して)は形質転換された細胞によって8日目までに生産され、その後、生産されたGCDの量は減少し始めたことが示される。
図18には、4日目に培地を交換し、および/または新しい培地を添加することにより、8日目を越えても細胞の高い増殖レベルが維持されることが示される。
図19には、図18に記載される条件下で生産されたGCDの量が示される。
図20には、図18に記載される条件下で生産されたGCDの量が示される。
図21には、細胞増殖に対する種々の糖レジュメの効果が示される。
図22aおよび22bには、GCDの生産に対する種々の糖レジュメの効果が示される。
図23aおよび23bには、本発明の10Lのデバイスの中での細胞増殖に対するエアレーション速度の効果が示される。
図24には、本発明のデバイスに対するさらなる酸素の添加の効果が示される。
図25には、PCRによる増幅後の、ヒト第X因子をコードする配列(矢印)の電気泳動による分離が示される。
図26には、CaMV35SΩとOCSターミネーター配列の間に第X因子の配列が連結されている、連結されたCE−FX−KDEL構築物が示される。制限酵素の認識部位の位置が示される。
図27は、中に連結カセットCE−FX−KDELが導入されているpBluescript SKベクターのマップである。
図28は、プラスミドpzp−FX−ERおよびpGREEN nos−kana−FX−ERで形質転換したクローンの制限分析であり、これにより、植物細胞中でのヒト第X因子のクローニングおよび発現に使用したカセット、およびプラスミドが示される。レーン1は、構築物pzp−FX−ERで形質転換され、その後、制限酵素で消化されたクローン3である。レーン2は、EcoR1とHindIIIで消化された後のクローン3である。レーン3は、構築物pzp−FX−ERで形質転換され、その後、制限酵素で消化されたクローン4である。レーン4は、EcoR1とHindIIIで消化された後のクローン4である。レーン5は、CaMV35S+ΩFX−ER発現カセットである。レーン6は、pGREEN nos−kana−FX−ERで形質転換され、その後、制限酵素で消化されたクローン3である。レーン7は、Asp718とXbaIで消化されたクローン3である。レーン8は、pGREEN nos−kana−FX−ERで形質転換され、その後、制限酵素で消化されたクローン8である。レーン9は、Asp718とXbaIで消化されたクローン8である。全ての形質転換されたクローンのCaMV35S+ΩFX−ER発現カセットのバンドに注目されたい。MW=分子量標準物。
図29には、CaMV35S+Ω、OCSターミネーターと、NPTII配列の間に第X因子配列が連結されている、pGREEN nos−kana−FX−ER構築物のTDNAが示される。制限酵素の認識部位の位置が示される。
図30には、多数の形質転換されたニンジン細胞株の細胞内容物のウェスタンブロット分析が示される。第X因子の発現は、精製されたポリクローナルウサギ抗ヒト第X因子IgG(Affinity Biologicals,Hamilton,Ontario,Canada)によってウェスタンブロット上で検出された。pGREEN−nos−kana−FX−ERで形質転換された株の中での第X因子の強い発現に留意されたい(レーン1および2)。MW=分子量標準物。
図31には、植物細胞中で発現させられた組み換え体ヒト第X因子の的確な切断が示される。エンドペプチダーゼであるフリン(これは、ヒト第X因子の軽鎖/重鎖のプロセシングのためのプロペプチドと一本鎖の除去に応答する)によって、活性なXaの大きさになるように植物細胞中で発現させられた組み換え体ヒト第X因子が的確に消化される(レーン4および5を参照のこと)。MW=分子量標準物。
図32は、植物細胞中で発現させられた組み換え体ヒト第X因子の触媒活性を示すグラフである。形質転換されたニンジン細胞に由来する細胞抽出物(●、▲、および■)と、形質転換されていない対照(+、*、および●)は、色素形成性物質であるペファクロム(Pefachrome)と反応させられ、生成物が分光光度計によってOD450nmでモニターされた。
図33には、PCRによる増幅後の、ヒトIfnβコード配列(矢印)の電気泳動による分離が示される。レーン1はifnKDEL配列(ERを標的とする)である。レーン2はifnSTOP配列である(アポプラストを標的とする)。MW=分子量標準物。
図34には、CE−K発現カセットを使用して大腸菌(E.coli)DH5αにクローニングされた、増幅されたヒトIfnβコード配列の電気泳動による分離が示される。ポジティブクローンが、CaMV35S正方向プライマーとターミネーター逆方向プライマーを使用する挿入断片のPCR分析によって選択された(図29を参照のこと)。レーン1〜7はポジティブクローンであり、CE−ifn−STOP挿入断片を示している。レーン「fx」はポジティブ対照のCE−fx−hisであり、これにはifn挿入断片は含まれていない。レーン「−DNA」はネガティブ対照のPCR反応であり、これにはDNAは含まれていない。
図35には、CE−K発現カセットを使用して大腸菌(E.coli)DH5αにクローニングされた、増幅されたヒトIfnβコード配列の電気泳動による分離が示される。ポジティブクローンが、CaMV35S+Ω正方向プライマーとOCSターミネーター逆方向プライマーを使用する挿入断片のPCR分析によって選択された(図37を参照のこと)。レーン1〜4および6はポジティブクローンであり、CE−ifn−KDEL挿入断片を示している。レーン5はヒトIfnβを発現しないクローンである。MW=分子量標準物。
図36には、ifnポジティブクローンの制限分析産物の電気泳動による分離が示される。左側のパネルには、CE−ifn−STOP挿入断片およびCE−ifn−KDEL挿入断片(矢印)を有しているポジティブクローンの、制限酵素EcoRI+SalIを使用した制限分析産物の電気泳動による分離が示される(レーン1〜5)。レーン1は、EcoRI+SalIで消化したCE−ifn−KDELポジティブクローン1である(図35を参照のこと)。レーン2は、EcoRI+SalIで消化したCE−ifn−KDELポジティブクローン2である(図35を参照のこと)。レーン3は、EcoRI+SalIで消化したCE−ifn−STOPポジティブクローン1である(図34を参照のこと)。レーン4は、EcoRI+SalIで消化したCE−ifn−STOPポジティブクローン2である(図34を参照のこと)。レーン5は、EcoRI+SalIで消化したCE−Fx(「ifn」挿入断片を含まない)である。MW=分子量標準物。右側のパネルには、CE−ifn−STOP挿入断片およびCE−ifn−KDEL挿入断片(矢印)を有しているポジティブクローンの、制限酵素KpnI+XbaIを使用した制限分析産物の電気泳動による分離が示される(レーン6〜9)。レーン6は、KpnI+XbaIで消化したCE−ifn−KDELポジティブクローン1である(図35を参照のこと)。レーン7は、制限酵素消化をしていないCE−ifn−KDELポジティブクローン2である(図35を参照のこと)。レーン8は、制限酵素消化をしていないCE−ifn−STOPポジティブクローン1である(図34を参照のこと)。レーン9は、KpnI+XbaIで消化したCE−ifn−STOPポジティブクローン1である(図34を参照のこと)。MW=分子量標準物。
図37には、CaMV35S+ΩとOCSターミネーター配列の間にヒトIfnβのコード配列が連結されている、連結させられたCE−ifn−KDEL構築物が示される。制限酵素の認識部位の位置が示される。
図38は、pzp−ifn−KDELプラスミドとpzp−ifn−STOPプラスミドの調製に使用されたpzp 111バイナリーベクターのマップであり、制限酵素認識部位が示される。
図39は、pzp−ifn−KDELプラスミドとpzp−ifn−STOPプラスミドを有しているアグロバクテリウムLB4404で形質転換されたニンジン細胞のクローンの中で発現させられた組み換え体ヒトIfnβの免疫検出を示すウェスタンブロットである。カルスが、抗生物質での選択によって寒天中の形質転換された細胞から増殖させられ、その後、数ヶ月間かけてそれぞれのプレートに移された。形質転換されたカルスの細胞内容物(レーン1〜10)が抽出され、PAGE上で分離させられ、ブロットされ、組み換え体ヒトinfβが、親和性によって精製されたウサギ抗インターフェロンβ抗体で検出された。MW=分子量標準物。St=ポジティブ対照:CHO細胞中で発現させられた3ngの組み換え体ヒトインターフェロンβ。
図40には、PCRによる増幅後の、伝染性ファブリーキウス嚢病ウイルスのウイルスタンパク質2(VPII)をコードする配列(矢印)の電気泳動による分離が示される。レーン1、2、および3はVPII配列である。レーン4および5はネガティブ対照のPCR反応であり、それぞれ、DNAが含まれないもの、およびポリメラーゼが含まれないものである。MW1はλHEの分子量標準物であり、MW2は1bpのラダーの分子量標準物である。
図41には、CE−K発現カセットを使用して大腸菌(E.coli)DH5αにクローニングされた、増幅されたVPIIコード配列の電気泳動による分離が示される。ポジティブクローンが、CaMV35S+Ω正方向プライマーとOCSターミネーター逆方向プライマーを使用する挿入断片のPCR分析によって選択された(図37を参照のこと)。レーン1〜6は試験したクローンである。レーン2、3、および5は、VPII挿入断片を有しているポジティブクローンを示す。レーン7は、VPIIIのPCR産物であるポジティブ対照である。レーン8は、空のCEカセットのDNAを有しているPCR産物である。レーン9および10はネガティブ対照のPCR反応であり、それぞれ、DNAが含まれないもの、およびポリメラーゼが含まれないものである。M=分子量標準物。
図42は、CE−VPIIの調製に使用されたCEバイナリーベクターのマップであり、制限酵素認識部位が示される。
図43aおよび43bは、PAGE分析(43A)とウェスタンブロット(43B)であり、これらによって、pGA492−CE−VPIIプラスミドを有しているアグロバクテリウムLB4404で形質転換されたニンジン細胞のクローンの中で発現させられた組み換え体VPIIの電気泳動による分離と免疫検出が示される。カルスが、抗生物質での選択によって寒天中で形質転換された細胞から増殖させられ、その後、数ヶ月間かけてそれぞれのプレートに移された。形質転換されたカルスの細胞内容物(レーン2、3、5、6、7、10、11、13、14、および15)が抽出され、PAGE上で分離され、ブロットされ、組み換え体であるVPIIが、ニワトリ抗IBDV抗体で検出された(図43)。+=ポジティブ対照(VPIIタンパク質)。レーン1およびレーン9はVPII細胞懸濁物(形質転換事象の混合物)である。レーン4および12は、「空の」ベクターだけで形質転換されたネガティブ対照細胞であり、そしてレーン8および16は、形質転換されていないニンジン細胞の内容物である。
本発明の原理および操作は、図面と添付される記載を参照してさらに理解され得る。図1〜9は、本発明のデバイスの種々の例示的な実施形態の模式図を示す。
本発明はまた、細胞および/または組織を純培養し、回収するための使い捨てのデバイスのバッテリーにも関する。ここでは、複数のこれらのデバイスのそれぞれは、本明細書中で上記に定義され、その第1から第5の実施形態を参照して記載された、デバイス(10)と構造的に、また操作上も類似している。
本発明はまた、複数回使用される使い捨てのデバイス中で植物細胞を培養し、回収するための方法にも関する。このデバイスは、所望により、そして好ましくは、上記の実施例1および2のデバイスおよび/またはシステムにしたがって設定される。この方法では、植物細胞は、好ましくは、本発明のデバイスの容器に入れられる。この容器は、好ましくはプラスチック製であり、これは所望により、透明であっても、および/または半透明であってもよく、所望により硬質であっても、または弾力性があってもよく、また、所望により、硬質と柔軟性の間の硬度の程度を有してもよい(例えば、半硬質)。次いで、任意の他のさらなる材料、例えば、滅菌の気体もしくは混合気体、および/または滅菌の液体もしくは液体混合物、あるいは任意の他の適切な添加物が提供される。好ましくは、デバイスは、再利用することができる回収装置を特徴とするように構成される。その結果、材料(植物細胞、および/または上記のさらなる材料の1つ)を回収することができ、少なくとも1回のさらなる細胞培養/回収サイクルをなおも行うことができる。所望により、そしてより好ましくは、植物細胞は懸濁液の中で培養される。
本実験は、ツルニチニチソウ(rose periwinkle)としても知られているビンカ・ロゼア(Vinca rosea)由来の細胞を用いて行った。
実施例5a:ニンジンの細胞懸濁液の中でのヒトグルコセレブロシダーゼのクローニングおよび大量発現
本実施例により、本発明の方法にしたがって本発明のデバイスの中で培養され、形質転換された植物細胞を用いて行われた実験の記述が提供される。
プラスミドベクター:プラスミドCE−T
プラスミドCE−Tを、Galili博士から入手したプラスミドCEから構築した(米国特許第5367110号、1994年11月22日)。
hGCDをコードするcDNA(配列番号7および8)を、正方向プライマー:5’CAGAATTCGCCCGCCCCTGCA3’(配列番号3)と逆方向プライマー:5’CTCAGATCTTGGCGATGCCACA3’(配列番号4)を使用して増幅した。精製したPCR DNA産物をエンドヌクレアーゼEcoRIとBglIIで消化し(プライマーの中の下線を付けた認識配列を参照のこと)、同じ酵素で消化した発現カセットE−Tを有している中間体ベクターに連結させた。発現カセットを切断し、中間体ベクターから溶離させて、制限酵素SmaIとXbaIを使用してバイナリーベクターpGREENIIに連結させて、最終的な発現ベクターとした。カナマイシン耐性を、pGREENベクターと共に入手したnosプロモーターによって駆動されるNPTII遺伝子によって与えた(図11B)。得られた発現カセット(配列番号13)を図11Aに示す。
ニンジンカルス(すなわち、未分化のニンジン細胞)と細胞懸濁培養物の確立を、Torres K.C.(Tissue culture techniques for horticular crops,p.p.111,169)に以前に記載されているように行った。
ニンジン細胞の形質転換を、以前に記載された方法(Wurtele,E.S.and Bulka,K.Plant Sci.61:253−262(1989))の適応によってアグロバクテリウム(Agrobacterium)形質転換を使用して行った。液体培地中の増殖中の細胞を、カルスの代わりにこのプロセスの全体を通じて使用した。接種材料および増殖時間は、液体培養物中での細胞の形質転換に適応させた。簡単に説明すると、アグロバクテリウム(Agrobacterium)をエレクトロポレーションによってpGREEN IIベクターで形質転換し(den Dulk−Ra,A.and Hooykaas,P.J.(1995)Methods Mol.Biol.55:63−72)、その後、30mg/mlのパロモマイシン抗生物質を使用して選択した。ニンジン細胞をアグロバクテリウム(Agrobacteria)で形質転換し、液体培地中の60mg/mlのパロモマイシン抗生物質を使用して選択した。
形質転換の14日後、培養物に由来する細胞を、細胞のそれぞれのクラスターからカルスを形成させるために、3%の充填細胞容量の稀釈率で固形培地上にプレートした。以下に詳細に記載されるように、それぞれのカルスが1〜2cmの直径に達した時点で、細胞をSDS試料緩衝液中でホモジナイズし、得られたタンパク質抽出物をSDS−PAGEで分離させ(Laemmli U.,(1970)Nature 227:680−685)、ニトロセルロース膜(Hybond Cニトロセルロース、0.45マイクロン、カタログ番号:RPN203C、Amersham Life Science社製)に移した。GCDを検出するためのウェスタンブロットを、ポリクローナル抗hGCD抗体(以下に記載される)を使用して行った。有意なレベルのGCDを発現するカルスを増殖させ、スケールアップ、タンパク質の精製および分析のために液体培地に移して増殖させた。
rh−GCD遺伝子(配列番号13および14)を含む遺伝子修飾されたニンジン細胞の約1cmのカルスを、4.4gr/lのMSD培地(Duchefa)、9.9mg/lのチアミンHCl(Duchefa)、0.5mgの葉酸(Sigma)、0.5mg/lのビオチン(Duchefa)、0.8g/lのカゼイン加水分解物(Duchefa)、糖30g/l、およびホルモン2−4D(Sigma)を含む9cmの直径のMurashige and Skoog(MS)寒天培地プレート上にプレートした。カルスを25℃で14日間増殖させた。
材料および実験手順
プラスミドベクター:
CE−Kプラスミド:CE−Kプラスミドの骨格は、植物細胞の小胞体での高いレベルでの発現および保持に不可欠なエレメントを全て含むさらなるカセットをポリクローニング部位の中に有しているBluescript SK+プラスミド(Stratagene,La Jolla CA)(配列番号15)である。このカセット(配列番号16およびマップ、図26を参照のこと)には、CaMV35Sプロモーター、Ωエンハンサー、塩基性エンドキチナーゼ遺伝子(シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana))に由来するER標的化シグナルをコードするDNA断片、組み換え遺伝子の融合のためのEcoRIとSalI制限部位、KDEL ER保持シグナル、ならびに、アグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)のオクトピン合成酵素(OCS)遺伝子の転写終結シグナルおよびポリアデニル化シグナルの配列が含まれている。
培養されたニンジン細胞中での活性な組み換え体ヒト第X因子の発現
ニンジン細胞の中での発現および分析:形質転換されたニンジン細胞を、GCDについて本明細書中で上記に記載したように、0.2mg/lの2,4ジクロロメトキシ酢酸を加えたMurashige & Skoog培地(Physiol.Plant,15:473,1962)の中の培養物中で増殖させた。細胞を7日間増殖させ、その後、細胞を回収した。過剰な液体を100メッシュのフィルター上で分離した。細胞内容物を、タンパク質内容物の評価のために、本明細書中で上記に詳細に記載したように抽出した。FX cDNAで形質転換したニンジン細胞を、Affinity Biologicals(Hamilton Ontario,Canada)によるウサギ抗ヒト第X因子精製IgGを使用してウェスタンブロットによってFXの発現について分析した。多数の種々の細胞株を分析した(図30)。図30(レーン1および2)は、ニンジン細胞の中でのヒト第X因子の強い発現を示している。種々の大きさのものが観察された原因は、組み換え体ヒト第X因子プロタンパク質の部分的なプロセシングである。
組み換え体ヒトFX遺伝子(配列番号16および21)を含む遺伝子修飾されたニンジン細胞の約1cmのカルスを、4.4gr/lのMSD培地(Duchefa)、9.9mg/lのチアミンHCl(Duchefa)、0.5mgの葉酸(Sigma)、0.5mg/lのビオチン(Duchefa)、0.8g/lのカゼイン加水分解物(Duchefa)、糖30g/l、およびホルモン2−4D(Sigma,St Louis,MO)を含む9cmの直径のMurashige and Skoog(MS)寒天培地プレート上にプレートした。カルスを25℃で14日間増殖させた。
材料および実験手順
CE−Kプラスミド:CE−Kプラスミドの骨格は、植物細胞の小胞体での高いレベルでの発現および保持に不可欠なエレメントを全て含むさらなるカセットをポリクローニング部位の中に有しているBluescript SK+プラスミド(Stratagene,La Jolla CA)(配列番号15)である。このカセット(配列番号27およびマップ、図37を参照のこと)には、CaMV35Sプロモーター、Ωエンハンサー、塩基性エンドキチナーゼ遺伝子(シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana))に由来するER標的化シグナルをコードするDNA断片、組み換え遺伝子の融合のためのEcoRIとSalI制限部位、KDEL ER保持シグナル、ならびに、アグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)のオクトピン合成酵素(OCS)遺伝子の転写終結シグナルおよびポリアデニル化シグナルの配列が含まれている。
1.正方向プライマー:Ifnβ開始EcoRI:5’CAGAATTCATGAGCTATAATC3’(配列番号24)、
2.逆方向プライマーII:Ifnβ末端SalI kdel:5’GGATGTCGACTTACGCAGGTAG3’(配列番号25)、
3.逆方向プライマーII:Ifnβ末端SalI STOP:5’GTGTCGACTTAGTTACGCAGGTAG3’(配列番号26)。
培養されたニンジン細胞中での活性な組み換え体ヒトインターフェロンβの発現
ニンジン細胞の中での発現および分析:最初の分析:形質転換されたニンジン細胞を、GCDについて本明細書中で上記に記載したように、0.2mg/lの2,4ジクロロメトキシ酢酸を加えたMurashige & Skoog培地(Physiol.Plant,15:473,1962)の中の培養物中で増殖させた。細胞を7日間増殖させ、その後、細胞を回収した。過剰な液体を100メッシュのフィルター上で分離した。2週間後、形質転換細胞の試料を、モノクローナルマウス抗ヒトインターフェロンβ抗体と、親和性によって精製されたウサギ抗インターフェロンβ抗体(Calbiochem,La Jolla,CA)を使用するドットブロットアッセイを使用して、インターフェロンの発現の事前の分析のために回収した。両方の抗体によって、インターフェロンβで形質転換された細胞の中で強い特異的なシグナルが生じた。形質転換されていない細胞においてはシグナルは生じなかった。
組み換え体ヒト遺伝子インターフェロンβ(配列番号27および28)を含む遺伝子修飾されたニンジン細胞の約1cmのカルスを、4.4gr/lのMSD培地(Duchefa)、9.9mg/lのチアミンHCl(Duchefa)、0.5mgの葉酸(Sigma)、0.5mg/lのビオチン(Duchefa)、0.8g/lのカゼイン加水分解物(Duchefa)、糖30g/l、およびホルモン2−4D(Sigma St Louis,MO)を含む9cmの直径のMurashige and Skoog(MS)寒天培地プレート上にプレートした。カルスを25℃で14日間増殖させた。
材料および実験手順
CEプラスミド:CEプラスミドの骨格は、植物細胞の小胞体での高いレベルでの発現および保持に不可欠なエレメントを全て含むさらなるカセットをポリクローニング部位の中に有しているBluescript SK+プラスミド(Stratagene,La Jolla CA)(配列番号15)である。このカセット(配列番号32およびマップ、図XXXを参照のこと)には、CaMV35Sプロモーター、Ωエンハンサー、塩基性エンドキチナーゼ遺伝子(シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana))に由来するER標的化シグナルをコードするDNA断片、組み換え遺伝子の融合のためのEcoRIとSalI制限部位、KDEL ER保持シグナル、ならびに、アグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)のオクトピン合成酵素(OCS)遺伝子の転写終結シグナルおよびポリアデニル化シグナルの配列が含まれている。
35Sプロモーター由来の正方向プライマー:5’CTCAGAAGACCAGAGGGC3’(配列番号5)
ターミネーター由来の後方プライマー:5’CAAAGCGGCCATCGTGC3’(配列番号6)。
培養されたニンジン細胞中での組み換え体VPIIの発現
ニンジン細胞の中での発現および分析:最初の分析:形質転換されたニンジン細胞を、GCDについて本明細書中で上記に記載したように、0.2mg/lの2,4ジクロロメトキシ酢酸を加えたMurashige & Skoog培地(Physiol.Plant,15:473,1962)の中の培養物中で増殖させた。細胞を7日間増殖させ、その後、細胞を回収した。過剰な液体を100メッシュのフィルター上で分離した。2週間後に、形質転換細胞の試料を、ニワトリ抗IBDVおよびウサギ抗IBDV抗体を使用するドットブロットアッセイを使用してVPIIの発現を予備的に分析するために回収した。いずれの抗体も、VBIIで形質転換された細胞の中で強い特異的なシグナルを生じた。形質転換されていない細胞においてはシグナルは生じなかった。
組み換え体VP11を伝染性ファブリーキウス嚢病ウイルスに対するワクチンとしての有効性について、ニワトリにおいてアッセイした。全タンパク質抽出物をvp2R21株由来のカルスから調製し、注射によって(1mg)または経口で(3×100μg)、(各グループにおいて10匹の4週齢のニワトリに)投与した。経口投与は、連続する3日間、1匹のニワトリについて2グラムの濾過した細胞懸濁液を与えることによって行った。組み換え体VPIIでのワクチン接種の防御効果を表2に示す。
組み換え体VPII(配列番号32および33)を含む遺伝子修飾されたニンジン細胞の約1cmのカルスを、4.4gr/lのMSD培地(Duchefa)、9.9mg/lのチアミンHCl(Duchefa)、0.5mgの葉酸(Sigma)、0.5mg/lのビオチン(Duchefa)、0.8g/lのカゼイン加水分解物(Duchefa)、糖30g/l、およびホルモン2−4D(Sigma St Louis,MO)を含む9cmの直径のMurashige and Skoog(MS)寒天培地プレート上にプレートした。カルスを25℃で14日間増殖させた。
配列番号2はタバコキチナーゼAからの液胞標的化シグナルである。
配列番号3〜6は一本鎖DNAオリゴヌクレオチドである。
配列番号9はCaMV 35Sプロモーター核酸配列である。
配列番号10はERシグナルペプチドをコードする核酸配列である。
配列番号11は液胞標的化配列をコードする核酸配列である。
配列番号12はターミネーター用配列である。
配列番号13はシグナルペプチドに融合された組換えGCDをコードする核酸である。
配列番号14はシグナルペプチドに融合された組換えGCDである。
Claims (18)
- 以下のものを含む、植物細胞培養物中で組換え体タンパク質を発現させるためのシステム:
(a)少なくとも1回のサイクルにおいて細胞および/または組織を純培養し、回収するための少なくとも1つの使い捨てのデバイスであって、前記デバイスには、滅菌可能な使い捨ての容器が含まれており、前記容器は、細胞および/または組織を含む培養培地の少なくとも所望の部分の回収を可能にするための流量調整器を含む再利用可能な回収装置が含まれ、前記デバイスは、少なくとも1回のさらなる連続する培養/回収サイクルに連続して使用することができ、この場合、先の回収されたサイクルから残っている、細胞および/または組織を含む前記培地の残りを、次の培養および回収サイクルのための接種材料とすることができ、前記デバイスは、前記デバイスの下端にまたは下端の近くに配置された少なくとも1つの空気吸入口を含み、前記デバイスの底部は円錐台状であり、前記空気吸入口は、1〜10mmの平均直径の気泡を生じるように設計されているデバイス;および
(b)配列番号14に記載のアミノ酸配列を有する組換えヒトグルコセレブロシダーゼからなる組換えヒトタンパク質を発現するニンジン細胞の懸濁培養物。 - 前記回収装置は、前記容器の下端の底部に取り付けられる請求項1に記載のシステム。
- 前記回収装置は、前記容器の下端の底部付近に配置され、その結果、各回収サイクルの最後に、細胞および/または組織を含む前記培地の前記残りが、前記回収装置のレベルよりも下のレベルまでの前記容器の前記下端に自動的に残る請求項1に記載のシステム。
- 前記容器は、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリエチレンとナイロンの共重合体、PVC、及びEVAを含む群より選択される材料から作られている請求項1に記載のシステム。
- 前記容器は、前記材料の1層以上の積層体から作られている請求項4に記載のシステム。
- 前記空気吸入口は、少なくとも1つの空気吸入口管を含み、前記空気吸入口管は、空気供給源に接続することができかつ複数の2次吸入口管と連通されており、前記2次吸入口管は、気泡の形態の滅菌ガスを前記培養培地中に導入するために、入口開口部を介して前記容器の内側の位置に延びている請求項5に記載のシステム。
- 前記デバイスは、全体としての長さ、高さ、および幅を有しており、かつ長さに対する高さの比は1から3であるかまたは1.85であり、幅に対する高さの比は5から30であるかまたは13である請求項1に記載のシステム。
- 前記デバイスは、円柱状の幾何学的形状を有する請求項1に記載のシステム。
- 前記気泡の少なくともいくつかは4mmの平均直径を有する請求項1に記載のシステム。
- 前記内部充填容量は、50リットルから200リットルの間である請求項1に記載のシステム。
- 前記システムは、前記デバイスを支持するための支持構造体をさらに含む請求項1に記載のシステム。
- 前記支持構造体は、向かい合ったフレームを有する堅固な円柱フレームおよび円錐ベースを含む請求項11に記載のシステム。
- 前記システムは、少なくとも2つの前記使い捨てのデバイスのバッテリーを含む請求項1に記載のシステム。
- 前記使い捨てのデバイスは、それぞれのデバイスの取り付け器具を介して支持構造体によって支持されている請求項13に記載のシステム。
- 前記使い捨てのデバイスのそれぞれの添加物入口は、滅菌接続装置を含む自由末端を有する共通の添加物入口管に接続されている請求項13に記載のシステム。
- 前記使い捨てのデバイスのそれぞれの回収装置は、滅菌接続装置を含む自由末端を有する共通の回収管に接続されている請求項13に記載のシステム。
- 前記使い捨てのデバイスのそれぞれの前記空気吸入口は、滅菌接続装置を含む自由末端を有する共通の空気吸入口管に接続されている請求項13に記載のシステム。
- 前記自由末端は、空気供給源に接続されることができる請求項17に記載のシステム。
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Families Citing this family (75)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL155588A0 (en) * | 2003-04-27 | 2003-11-23 | Metabogal Ltd | Methods for expression of enzymatically active recombinant lysosomal enzymes in transgenic plant root cells and vectors used thereby |
US20050032211A1 (en) * | 1996-09-26 | 2005-02-10 | Metabogal Ltd. | Cell/tissue culturing device, system and method |
US20030100945A1 (en) | 2001-11-23 | 2003-05-29 | Mindguard Ltd. | Implantable intraluminal device and method of using same in treating aneurysms |
US7951557B2 (en) * | 2003-04-27 | 2011-05-31 | Protalix Ltd. | Human lysosomal proteins from plant cell culture |
US20100196345A1 (en) * | 2003-04-27 | 2010-08-05 | Protalix | Production of high mannose proteins in plant culture |
US20100317102A1 (en) * | 2006-01-17 | 2010-12-16 | Tsutomu Suzuki | Cell Culture Method and Automatic Culture System Using the Method |
US8304386B2 (en) | 2006-02-03 | 2012-11-06 | Prolor Biotech, Inc. | Long-acting growth hormone and methods of producing same |
US9249407B2 (en) | 2006-02-03 | 2016-02-02 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
US8048849B2 (en) | 2006-02-03 | 2011-11-01 | Modigene, Inc. | Long-acting polypeptides and methods of producing same |
US8048848B2 (en) | 2006-02-03 | 2011-11-01 | Prolor Biotech Ltd. | Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof |
US10221228B2 (en) | 2006-02-03 | 2019-03-05 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
US8476234B2 (en) | 2006-02-03 | 2013-07-02 | Prolor Biotech Inc. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
US10351615B2 (en) | 2006-02-03 | 2019-07-16 | Opko Biologics Ltd. | Methods of treatment with long-acting growth hormone |
US20150038413A1 (en) | 2006-02-03 | 2015-02-05 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
US7553941B2 (en) | 2006-02-03 | 2009-06-30 | Modigene Inc | Long-acting polypeptides and methods of producing same |
US8946155B2 (en) | 2006-02-03 | 2015-02-03 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
US9458444B2 (en) | 2006-02-03 | 2016-10-04 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
US20140113860A1 (en) | 2006-02-03 | 2014-04-24 | Prolor Biotech Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
DE102006018824A1 (de) | 2006-04-22 | 2007-10-25 | Bayer Technology Services Gmbh | Einweg-Bioreaktor |
US20080131960A1 (en) * | 2006-11-15 | 2008-06-05 | Millipore Corporation | Self standing bioreactor construction |
DE102006062634A1 (de) * | 2006-12-23 | 2008-06-26 | Stiftung Alfred-Wegener-Institut für Polar- und Meeresforschung Stiftung des öffentlichen Rechts | Kulturvorrichtung für aquatische Organismen |
WO2008101124A1 (en) * | 2007-02-15 | 2008-08-21 | Broadley-James Corporation | Sterile bioreactor bag with integrated drive unit |
WO2008101127A2 (en) * | 2007-02-15 | 2008-08-21 | Broadley-James Corporation | Bioreactor jacket |
ES2660667T3 (es) * | 2007-05-07 | 2018-03-23 | Protalix Ltd. | Biorreactor desechable a gran escala |
US9080180B2 (en) * | 2007-07-03 | 2015-07-14 | Idemitsu Kosan Co., Ltd. | Transgenic plants expressing STX2EB protein for use as a pig edema disease vaccine |
JP2010057390A (ja) * | 2008-09-02 | 2010-03-18 | Nikken Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | 検査用具 |
WO2010076795A1 (en) * | 2009-01-02 | 2010-07-08 | Avraham Avidan | Non-flat photobioreactor |
DE102009005962A1 (de) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Bayer Technology Services Gmbh | Begasungssystem |
EP2413962A1 (en) | 2009-03-30 | 2012-02-08 | Mount Sinai School of Medicine | Influenza virus vaccines and uses thereof |
US9663778B2 (en) | 2009-07-09 | 2017-05-30 | OPKO Biologies Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
EP3482767B1 (en) | 2009-08-28 | 2021-10-06 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | Dose escalation enzyme replacement therapy for treating acid sphingomyelinase deficiency |
BR112012012004A8 (pt) | 2009-11-19 | 2018-12-11 | Univ Arizona | biorreator e método para cultivar células |
KR101148194B1 (ko) * | 2010-01-20 | 2012-05-23 | 성균관대학교산학협력단 | 투명 필름으로 이루어진 광합성 생물 반응기 |
WO2011094534A2 (en) | 2010-01-28 | 2011-08-04 | Atmi B.V.B.A. | Vessel with adjustable side drain |
CN102933707B (zh) * | 2010-03-02 | 2015-09-30 | 普罗塔里克斯有限公司 | 稳定的α-半乳糖苷酶及其用途 |
CA2792537A1 (en) | 2010-03-30 | 2011-10-06 | Mount Sinai School Of Medicine | Influenza virus vaccines and uses thereof |
US20130224797A1 (en) | 2010-10-15 | 2013-08-29 | Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. | Method for producing glycoprotein having mannose residue as non-reducing end of sugar chain |
MY148876A (en) * | 2011-01-14 | 2013-06-14 | Univ Sains Malaysia | A cell culture tank. |
DK2665814T3 (en) | 2011-01-20 | 2017-09-11 | Protalix Ltd | NUCLEIC ACID CONSTRUCTION FOR EXPRESSION OF ALPHA-GALACTOSIDASE IN PLANTS AND PLANT CELLS |
US20120301923A1 (en) * | 2011-05-27 | 2012-11-29 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Dialysis fermenter-bioreactor with dialysis device |
EP2758075B1 (en) | 2011-09-20 | 2023-05-03 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | Influenza virus vaccines and uses thereof |
JP6073903B2 (ja) * | 2011-10-10 | 2017-02-01 | ダスギプ・インフォメーション・アンド・プロセス・テクノロジー・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングDasgip Information And Process Technology Gmbh | バイオリアクタを有するバイオテクノロジー装置、バイオリアクタのための排気ガス温度制御デバイス、およびバイオテクノロジー装置内を流れる排気ガスを処理する方法 |
JP2015500033A (ja) * | 2011-12-09 | 2015-01-05 | ポール テクノロジー ユーケイ リミテッドPall Technology Uk Limited | 連続灌流用濾過装置 |
US9603907B2 (en) | 2012-02-01 | 2017-03-28 | Protalix Ltd. | Dry powder formulations of dNase I |
CN104487082A (zh) | 2012-04-19 | 2015-04-01 | 奥普科生物制品有限公司 | 长效胃泌酸调节素变体及其生产方法 |
US9051541B2 (en) * | 2012-07-30 | 2015-06-09 | Nutech Ventures | MRI-compatible bioreactors and methods of using |
BR122020018510B1 (pt) | 2012-11-20 | 2023-03-14 | Opko Biologics Ltd | Método para aumentar incrementalmente o tamanho hidrodinâmico de um fator de coagulação ativado viia |
JP2016508133A (ja) | 2012-12-18 | 2016-03-17 | アイカーン スクール オブ メディシン アット マウント サイナイ | インフルエンザウイルスワクチン及びその使用 |
CN105121460A (zh) | 2013-03-06 | 2015-12-02 | 波塔力克斯有限公司 | 表达TNFα多肽抑制的植物细胞在治疗中的用途 |
CA2902298A1 (en) | 2013-03-06 | 2014-09-12 | Protalix Ltd. | Chimeric polypeptides, polynucleotides encoding same, cells expressing same and methods of producing same |
US9908930B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-03-06 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Antibodies against influenza virus hemagglutinin and uses thereof |
WO2014210036A1 (en) * | 2013-06-24 | 2014-12-31 | Wilson Wolf Manufacturing Corporation | Closed system device and methods for gas permeable cell culture process |
US20150158926A1 (en) | 2013-10-21 | 2015-06-11 | Opko Biologics, Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
WO2015116963A1 (en) | 2014-02-01 | 2015-08-06 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Air accordion bioreactor |
WO2015148704A1 (en) | 2014-03-25 | 2015-10-01 | Terumo Bct, Inc. | Passive replacement of media |
JP6719387B2 (ja) * | 2014-04-28 | 2020-07-08 | ビババイオセル エスピーエー | 自動細胞培養及び回収装置 |
JP6294206B2 (ja) * | 2014-10-08 | 2018-03-14 | 富士フイルム株式会社 | 細胞培養バッグおよび細胞培養方法 |
EP3221455B1 (en) | 2014-11-20 | 2020-08-12 | Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Compositions and methods for producing polypeptides with a modified glycosylation pattern in plant cells |
JP2018504412A (ja) | 2015-01-23 | 2018-02-15 | アイカーン スクール オブ メディシン アット マウント サイナイ | インフルエンザウイルスワクチン接種レジメン |
KR20160105716A (ko) | 2015-02-28 | 2016-09-07 | 김두현 | 바이오리액터의 일회용 컨테이너 |
WO2016203482A2 (en) | 2015-06-19 | 2016-12-22 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
WO2017004592A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-05 | Terumo Bct, Inc. | Cell growth with mechanical stimuli |
US10645886B2 (en) * | 2016-01-29 | 2020-05-12 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Methods and apparatus for gnotobiotic plant growth |
WO2017205667A1 (en) | 2016-05-25 | 2017-11-30 | Terumo Bct, Inc. | Cell expansion |
US11104874B2 (en) | 2016-06-07 | 2021-08-31 | Terumo Bct, Inc. | Coating a bioreactor |
US11685883B2 (en) | 2016-06-07 | 2023-06-27 | Terumo Bct, Inc. | Methods and systems for coating a cell growth surface |
EP3471767A4 (en) | 2016-06-15 | 2020-01-15 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | INFLUENZA VIRUS HEMAGGLUTININS AND USES THEREOF |
HUE064463T2 (hu) | 2016-07-11 | 2024-03-28 | Opko Biologics Ltd | Hosszantartó hatású VII. koagulációs faktor és az elõállítására vonatkozó eljárások |
US11629332B2 (en) | 2017-03-31 | 2023-04-18 | Terumo Bct, Inc. | Cell expansion |
EP3606555A4 (en) | 2017-04-07 | 2021-08-04 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | INFLUENZA VIRUS TYPE B ANTI-NEURAMINIDASE ANTIBODIES AND THEIR USES |
WO2019074880A1 (en) * | 2017-10-10 | 2019-04-18 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | DEVICE AND METHOD FOR ENHANCED REMOVAL OF AIR BUBBLES FROM CULTURES OF ROTARY BIOREACTOR CELLS AND CULTURE CHAMBERS |
EP3621739B1 (en) * | 2018-01-05 | 2023-07-05 | Illumina Inc. | Predicting reagent chiller instability and flow cell heater failure in sequencing systems |
CN108424855A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-08-21 | 大连普瑞康生物技术有限公司 | 一种植物细胞、器官液体培养装置 |
CN108441425A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-08-24 | 大连普瑞康生物技术有限公司 | 一种植物细胞、器官培养装置 |
US11299700B1 (en) | 2021-02-19 | 2022-04-12 | Acequia Biotechnology, Llc | Bioreactor containers and methods of growing hairy roots using the same |
Family Cites Families (83)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US467993A (en) * | 1892-02-02 | Alfred jorgensen | ||
US2147271A (en) * | 1937-07-16 | 1939-02-14 | Schwarz Lab Inc | Pure yeast culture apparatus |
US2341259A (en) * | 1941-01-22 | 1944-02-08 | Lummus Co | Inoculating method and apparatus |
US2836434A (en) * | 1952-08-21 | 1958-05-27 | Separator Ab | Arrangement for sterile interconnection and sealing of apparatuses in a plant for instance for cultivation of bacteria |
US3201327A (en) * | 1962-08-21 | 1965-08-17 | Sun Oil Co | Fermentation apparatus and process |
SE347015B (ja) * | 1966-10-06 | 1972-07-24 | Sanraku Ocean Co | |
US3468520A (en) * | 1967-05-12 | 1969-09-23 | American Cyanamid Co | Combination agitation and transfer unit for suspended cells |
US3504185A (en) * | 1968-05-09 | 1970-03-31 | Univ Syracuse Res Corp | Apparatus for measuring and controlling cell population density in a liquid medium |
GB1284077A (en) * | 1968-10-18 | 1972-08-02 | British Petroleum Co | Process and apparatus for the cultivation of micro-organisms |
US3540700A (en) * | 1969-01-24 | 1970-11-17 | New Brunswick Scientific Co | Rotary processing apparatus |
DE2059931C3 (de) * | 1970-12-05 | 1973-10-18 | Knapsack Ag, 5033 Huerth-Knapsack | Verfahren zum Verhindern von Schaumausbrüchen aus geschlossenen Reaktionsräumen |
US3793154A (en) * | 1970-12-21 | 1974-02-19 | Univ St Johns | Apparatus for gaseous environmental control of batch cultures of micro-organisms |
US3950227A (en) * | 1970-12-21 | 1976-04-13 | St. John's University | Batch method of establishing and maintaining a controlled aerobic environment for a microbial culture |
US3850227A (en) * | 1971-04-23 | 1974-11-26 | Olin Corp | Process for improving heat transfer efficiency and improved heat transfer system |
US4179339A (en) * | 1977-03-02 | 1979-12-18 | Olympus Optical Company, Ltd. | Liquid feeder for automatic culture apparatus |
US4228243A (en) * | 1978-07-13 | 1980-10-14 | Toray Industries, Inc. | Cell culture propagation apparatus |
US4328317A (en) * | 1980-03-31 | 1982-05-04 | Solargizer International, Inc. | Continuous chemical conversion or fermentation apparatus |
DE3133314A1 (de) * | 1981-08-22 | 1983-03-10 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | "vorrichtung zum dispergieren einer zweiten phase in einer ersten phase" |
US4519984A (en) * | 1982-01-18 | 1985-05-28 | Phillips Petroleum Company | Apparatus for carrying out sparged reaction |
CH663422A5 (de) * | 1982-05-27 | 1987-12-15 | Chemap Ag | Verfahren und fermenter zur zuechtung von gewebezellen. |
US4708938A (en) * | 1984-04-30 | 1987-11-24 | Hickinbotham Winemakers Pty. Ltd. | Alcoholic fermentation |
US4670993A (en) * | 1984-08-16 | 1987-06-09 | E.C.C. America Inc. | Method for fluidizing fine kaolin particles |
US4668632A (en) * | 1985-02-06 | 1987-05-26 | Vxr, Inc. | Sparger and apparatus for and method of growing cells |
US5372945A (en) * | 1985-06-06 | 1994-12-13 | Alchas; Paul G. | Device and method for collecting and processing fat tissue and procuring microvessel endothelial cells to produce endothelial cell product |
US4713345A (en) * | 1985-07-29 | 1987-12-15 | Grain Processing Corporation | Fermentation methods and apparatus |
EP0224962A1 (en) * | 1985-11-25 | 1987-06-10 | De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur | Apparatus for the continuous cultivation of microorganisms in a culture liquid |
US5166072A (en) * | 1986-06-26 | 1992-11-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Apparatus for the cultivation of immobilized micro-organisms |
JPS63133978A (ja) * | 1986-11-26 | 1988-06-06 | Rikagaku Kenkyusho | 細胞培養装置 |
US4717668A (en) * | 1986-12-12 | 1988-01-05 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Plastic roller bottle for suspension cultures |
US5081036A (en) * | 1987-01-23 | 1992-01-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method and apparatus for cell culture |
US4908315A (en) * | 1987-03-04 | 1990-03-13 | Agristar, Inc. | Integument and method for micropropagation and tissue culturing |
GB2202549A (en) * | 1987-03-20 | 1988-09-28 | Philip John Whitney | Foldable fermenter |
US6846968B1 (en) * | 1988-02-26 | 2005-01-25 | Large Scale Biology Corporation | Production of lysosomal enzymes in plants by transient expression |
US4931401A (en) * | 1988-09-01 | 1990-06-05 | La Societe De Recherche Snc Inc. | Bioreactor |
US5073491A (en) * | 1988-12-23 | 1991-12-17 | Hoffman-La Roche Inc. | Immobilization of cells in alginate beads containing cavities for growth of cells in airlift bioreactors |
US5549892A (en) * | 1988-12-23 | 1996-08-27 | Genzyme Corporation | Enhanced in vivo uptake of glucocerebrosidase |
US5100801A (en) * | 1989-01-26 | 1992-03-31 | Biocontrol Systems, Inc. | Device for sequential microbial enrichment in a single apparatus |
US5188946A (en) * | 1989-01-26 | 1993-02-23 | Biocontrol Systems Incorporated | Process and device for sequential microbial enrichment in a single apparatus |
EP0447256A3 (en) * | 1990-03-16 | 1992-01-08 | Hitachi, Ltd. | Methods and apparatus for incubation and sterilization |
EP0462065B1 (de) * | 1990-06-15 | 2005-03-02 | Syngenta Participations AG | Neue Signalsequenzen |
EP0471947A1 (en) * | 1990-06-29 | 1992-02-26 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Culture bag |
US5240598A (en) * | 1990-09-18 | 1993-08-31 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Microbubble generator for the transfer of oxygen to microbial inocula and microbubble generator immobilized cell reactor |
EP0485970A3 (en) * | 1990-11-13 | 1992-07-01 | Yeda Research And Development Company Limited | Transgenic plants overproducing threonine and lysine |
AT394576B (de) * | 1991-01-16 | 1992-05-11 | Vogelbusch Gmbh | Reaktor zur durchfuehrung biologischer reaktionen mittels biokatalysatoren |
US5612188A (en) * | 1991-11-25 | 1997-03-18 | Cornell Research Foundation, Inc. | Automated, multicompartmental cell culture system |
US5267791A (en) * | 1991-12-13 | 1993-12-07 | Corning Incorporated | Suspended cell culture stirring vessel closure and apparatus |
JPH05219834A (ja) * | 1992-02-14 | 1993-08-31 | Fumiko Kobayashi | ディスポーサブル培養袋及び培養方法 |
IL102189A (en) * | 1992-06-12 | 1995-07-31 | Univ Ben Gurion | Device for growing microorganisms |
US5409833A (en) * | 1993-07-01 | 1995-04-25 | Baxter International Inc. | Microvessel cell isolation apparatus |
US5342781A (en) * | 1993-07-15 | 1994-08-30 | Su Wei Wen W | External-loop perfusion air-lift bioreactor |
EP0793717B1 (en) * | 1994-10-24 | 2005-01-26 | The Texas A & M University System | Oral immunization with transgenic plants |
EP0865499B1 (en) * | 1995-09-14 | 2009-03-18 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Production of lysosomal enzymes in plant-based expression systems |
US6458574B1 (en) * | 1996-09-12 | 2002-10-01 | Transkaryotic Therapies, Inc. | Treatment of a α-galactosidase a deficiency |
US6083725A (en) * | 1996-09-13 | 2000-07-04 | Transkaryotic Therapies, Inc. | Tranfected human cells expressing human α-galactosidase A protein |
US20050032211A1 (en) * | 1996-09-26 | 2005-02-10 | Metabogal Ltd. | Cell/tissue culturing device, system and method |
IL155588A0 (en) * | 2003-04-27 | 2003-11-23 | Metabogal Ltd | Methods for expression of enzymatically active recombinant lysosomal enzymes in transgenic plant root cells and vectors used thereby |
IL119310A (en) * | 1996-09-26 | 1999-07-14 | Metabogal Ltd | Cell/tissue culturing device and method |
US6190913B1 (en) * | 1997-08-12 | 2001-02-20 | Vijay Singh | Method for culturing cells using wave-induced agitation |
US5927988A (en) * | 1997-12-17 | 1999-07-27 | Jenkins; William M. | Method and apparatus for training of sensory and perceptual systems in LLI subjects |
US6096546A (en) * | 1998-01-30 | 2000-08-01 | Board Of Trustees, Rutgers, The State University Of New Jersey | Methods for recovering polypeptides from plants and portions thereof |
WO2000011953A1 (en) * | 1998-09-01 | 2000-03-09 | Penn State Research Foundation | Method and apparatus for aseptic growth or processing of biomass |
IL142041A0 (en) * | 1998-10-07 | 2002-03-10 | Syngenta Participations Ag | Therapeutically active proteins in plants |
US6528063B2 (en) * | 1999-01-04 | 2003-03-04 | Rahan Meristem | Recombinant vaccines against IBDV |
US6432698B1 (en) * | 1999-01-06 | 2002-08-13 | Rutgers, The State University | Disposable bioreactor for culturing microorganisms and cells |
US6553812B2 (en) * | 2000-05-02 | 2003-04-29 | Kavlico Corporation | Combined oil quality and viscosity sensing system |
AU8822601A (en) * | 2000-07-31 | 2002-02-13 | Biolex Inc | Expression of biologically active polypeptides in duckweed |
JP2002238580A (ja) * | 2001-02-20 | 2002-08-27 | Naoyuki Taniguchi | 動物型糖鎖付加機能を持つ植物細胞 |
DE60233395D1 (de) * | 2001-04-18 | 2009-10-01 | Valtion Teknillinen | Die verwendung von abc transporter kodierenden genen zur stimulierung der herstellung von sekundärmetaboliten in biologischen zellen |
US7629309B2 (en) * | 2002-05-29 | 2009-12-08 | Zystor Therapeutics, Inc. | Targeted therapeutic proteins |
DE10135014A1 (de) * | 2001-07-18 | 2003-01-30 | Bayer Ag | 1,4-Butendiol(polyether) enthaltende Kautschukmischungen |
KR20030014976A (ko) * | 2001-08-14 | 2003-02-20 | 양문식 | 식물세포를 이용한 재조합 단백질의 대량생산방법 |
US7208285B2 (en) * | 2001-08-28 | 2007-04-24 | Allergan, Inc. | Fret protease assays for botulinum serotype A/E toxins |
ES2224792B1 (es) * | 2002-06-28 | 2007-02-16 | Era Plantech, S.L. | Produccion de peptidos y proteinas por acumulacion de cuerpos proteicos derivados de reticulos endoplasmico en plantas. |
JP2005532069A (ja) * | 2002-07-03 | 2005-10-27 | ユニバーシティ オブ セントラル フロリダ | 体細胞胚形成を介した色素体遺伝子操作 |
US7316774B2 (en) * | 2002-07-22 | 2008-01-08 | Kinetico Incorporated | Fluid treatment system |
US7951557B2 (en) * | 2003-04-27 | 2011-05-31 | Protalix Ltd. | Human lysosomal proteins from plant cell culture |
EP1682576A1 (en) * | 2003-11-06 | 2006-07-26 | Compugen Ltd. | Variants of human glycoprotein hormone alpha chain: compositions and uses thereof |
DE602005007423D1 (de) * | 2004-06-02 | 2008-07-24 | Millipore Corp | Einwegreaktor |
DK1773976T4 (da) * | 2004-06-04 | 2020-02-10 | Global Life Sciences Solutions Usa Llc | Engangsbioreaktorsystemer og -fremgangsmåder |
DE602005021379D1 (de) * | 2004-10-13 | 2010-07-01 | Protalix Ltd | System und verfahren zur produktion von antikörpern in der pflanzenzellkultur |
US20080132743A1 (en) * | 2006-12-01 | 2008-06-05 | Albemarle Corporation | Production of high purity decabromodiphenylalkanes |
ES2660667T3 (es) * | 2007-05-07 | 2018-03-23 | Protalix Ltd. | Biorreactor desechable a gran escala |
US8956823B2 (en) * | 2007-08-20 | 2015-02-17 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Anti-antibody reagent |
-
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