JP4820056B2 - バルサルタンおよびｎｅｐ阻害剤を含む医薬組成物 - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

アンジオテンシンＩＩは、標的細胞表面の特異的受容体と相互作用する。例えば、ＡＴ１−受容体およびＡＴ−２受容体と呼ばれる受容体のサブタイプを同定することが可能であった。最近、大変な努力によりＡＴ１−受容体に結合する物質が同定された。該活性成分はしばしばアンジオテンシンＩＩ拮抗剤と呼ばれる。ＡＴ−１受容体の阻害のため、該拮抗剤は他にも適応はあるが、例えば、降圧剤として、または鬱血性心不全の処置のため用いられ得る。それゆえ、アンジオテンシンＩＩ拮抗剤は、ＡＴ１−受容体サブタイプに結合する活性成分であると理解される。

レニンアンジオテンシンシステムの阻害剤は、例えば、N. Eng. J. Med. 316, 23 (1987) p. 1429-1435に記載されている様に、高血圧および鬱血性心不全で血圧を下げ、かつ有効に作用するよく知られた薬物である。レニンアンジオテンシンシステムの多数のペプチドおよび非ペプチド阻害剤が既知であり、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリルおよびスピラプリルを含むＡＣＥ阻害剤が最も広く研究されている。ＡＣＥ阻害剤の主な作用機序は、血管収縮作用のあるペプチドＡｎｇ ＩＩの形成の阻止を含むが、Hypertension, 16, 4 (1990) p. 36３−370において、ＡＣＥが、血管作用性ペプチドブラジキニンおよびサブスタンスＰを含む様々なペプチド基質を切断すると報告されている。ＡＣＥ阻害剤によるブラジキニンの減少の阻止が示され、そしてある状態でのＡＣＥ阻害剤の活性はＡｎｇ ＩＩ形成の阻止よりむしろブラジキニンレベルの上昇により仲介されることがCirc. Res., 66, 1 (1990) p. 24２−248で報告されている。従って、ＡＣＥ阻害剤の作用が、アンジオテンシンの形成の阻止、そしてそれに続くレニンアンジオテンシンシステムの阻害に専ら起因するとみなすことはできない。

中性エンドペプチダーゼ（EC 3.4.24.11；エンケファリナーゼ；心房性ペプチダーゼ（atriopeptidase）；ＮＥＰ）は、芳香族性アミノ酸のアミノ末端側の様々なペプチド基質を切断する亜鉛含有メタロプロテアーゼである。Biochem. J., 241, (1987) p. 237-247を参照されたい。この酵素の基質は、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ、ＡＮＰとしても既知）、脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、メチオニンエンケファリンおよびロイシンエンケファリン、ブラジキニン、ニューロキニンＡ、およびサブスタンスＰを含むが、これらに制限されない。

ＡＮＰは、血管拡張作用ペプチド、利尿ペプチドおよび降圧作用ペプチドファミリーであり、文献（例えば、Annu. Rev. Pharm. Tox., 29, (1989) p. 2３−54）で最近多く報告されている。１つの形態であるＡＮＦ９９−１２６は、心拡張状態の間に心臓から放出されて循環するペプチドホルモンである。ＡＮＦの機能は、塩と水のホメオスタシスを維持すること、ならびに血圧を制御することである。ＡＮＦは、少なくとも２つのプロセス：Am. J. Physiol., 256 (1989) p. R469-R475で報告されている受容体介在性クリアランスおよびBiochem. J., 243 (1987) p. 18３−187で報告されているＮＥＰによる酵素不活性化により、循環中に急速に不活性化される。ＮＥＰの阻害剤が降圧、利尿、ナトリウム利尿作用を増強し、かつ実験動物において、血漿ＡＮＦがＡＮＦの薬理学的投与に応答することが既に示されている。２つの特異的なＮＥＰ阻害剤によるＡＮＦの増強が、Sybertz et al. in J. Pharmacol. Exp. Ther. 250, 2 (1989) p. 62４−631およびHypertension, 15, 2 (1990) p. 15２−161で報告されており、一般的なＮＥＰによるＡＮＦの増強は米国特許番号第４，７４９，６８８号で開示されている。米国特許番号第４，７４０，４９９において、Olinsは心房性ペプチド作用を増強するためのチオルファンおよびケラトルファン（kelatorphan）の使用法を開示した。さらに、ＮＥＰ阻害剤は血圧を下げ、かつ実験的高血圧のある形態で利尿および環状グアノシン３’，５’−１リン酸（ｃＧＭＰ）排泄の増加といったＡＮＦ様の作用をする。ＮＥＰ阻害剤の降圧作用は、ＡＮＦに対する抗体が血圧の降下を中和するのでＡＮＦ介在性である。

長期かつ未制御の高血圧性血管疾病は、心臓および腎臓のような標的器官において様々な病変を最終的に引き起こす。持続性高血圧は、脳卒中の頻度増加も引き起こし得る。それゆえ、組み合わせ処置の利点をさらに認識するために、血圧降下の評価項目以外に、降圧治療の有効性を評価する、さらなる心血管の評価項目の検査が非常に必要である。

高血圧性血管疾病の性質は多因子である。ある種の状況下では、異なる作用メカニズムの薬物が組み合わされてきた。しかしながら、異なる作用態様の薬物の任意の組合せをただ考えることが、有効な作用の組合せを必然的に導くわけではない。従って、有害な副作用がほとんどない、より有効な組合せ治療が必要である。

１つの態様において、本発明は、必要に応じて薬学的に許容される担体の存在下で、バルサルタンまたはその薬学的に許容される塩、および中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤またはその薬学的に有効な塩を含む医薬的組合せ、およびそれらを含む医薬組成物に関する。

別の実施態様において、本発明は、バルサルタン＋ＮＥＰ阻害剤を含む医薬組成物の投与による心臓および腎臓関連状態の処置方法に関するか、またはバルサルタンまたはその薬学的に許容される塩、および中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤またはその薬学的に有効な塩を含む医薬組成物の使用に関する。

本発明の別の実施態様において、本発明は、バルサルタンまたはその薬学的に許容される塩、および中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤またはその薬学的に有効な塩を含む医薬組成物、および利尿剤、特にヒドロクロロチアジドに関する。

バルサルタンは、式（Ｉ）

のＡＴ１受容体拮抗剤、（Ｓ）−Ｎ−（１−カルボキシ−２−メチル−プロプ−１−イル）−Ｎ−ペンタノイル−Ｎ−［２；（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル−メチル］アミンであり、その開示内容が本明細書で説明するように全体として本明細書に取り込まれる、ＥＰ ０４４３９８３Ａおよび米国特許番号第５，３９９，５７８号で開示される。

該組合せで有用なＮＥＰ阻害剤は、式（ＩＩ）

［式中、
Ｒ_２は、Ｃ１〜７アルキル、トリフルオロメチル、フェニル、置換フェニル、−（ＣＨ_２）_１〜４−フェニル、または−（ＣＨ_２）_１〜４−置換フェニルであり；
Ｒ_３は、水素、Ｃ１〜７アルキル、フェニル、置換フェニル、−（ＣＨ_２）_１〜４−フェニル、または−（ＣＨ_２）_１〜４−置換フェニルであり；
Ｒ_１は、ヒドロキシ、Ｃ１〜７アルコキシ、またはＮＨ_２であり；
ｎは、１〜１５の整数であり、そして
用語置換フェニルは、Ｃ１〜４低級アルキル、Ｃ１〜４低級アルコキシ、Ｃ１〜４低級アルキルチオ、ヒドロキシ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＦから選択される置換基を意味する。］
の化合物、およびその薬学的に許容される塩である。

好ましくは、式ＩＩの選択的中性エンドペプチダーゼ阻害剤は、化合物
［式中：
Ｒ_２は、ベンジルであり；
Ｒ_３は、水素であり；
ｎは、１〜９の整数であり；かつ
Ｒ_１は、ヒドロキシである。］
を含む。

なおより好ましくは、式ＩＩの選択的中性エンドペプチダーゼ阻害剤は、式ＩＩ
［式中、
Ｒ_２は、ベンジルであり；
Ｒ_３は、水素であり；
ｎは、１であり；かつ
Ｒ_１は、ヒドロキシである。］
の化合物であるＳＱ２８，６０３として文献で報告される。

式ＩＩ（式中、Ｒ_２は、トリフルオロメチル以外である）の選択的中性エンドペプチダーゼ阻害剤の調製は、米国特許番号第４，７２２，８１０号でDelaneyらにより開示される。式ＩＩ（式中、Ｒ_２は、トリフルオロメチルである）の選択的中性エンドペプチダーゼ阻害剤の調製は、米国特許番号第５，２２３，５１６号でDelaneyらにより開示される。

本発明の範囲にあるＮＥＰ阻害剤は、米国特許番号第４，６１０，８１６号で開示される化合物（引用により本明細書に取り込まれる）を含み、具体的には、Ｎ−［Ｎ−［１（Ｓ）−カルボキシル−３−フェニルプロプリル］−（Ｓ）−フェニルアラニル］−（Ｓ）−イソセリンおよびＮ−［Ｎ−［（（１Ｓ）−カルボキシ−２−フェニル）エチル］−（Ｓ）−フェニルアラニル］−β−アラニン；米国特許番号第４，９２９，６４１号で開示される化合物、具体的には、Ｎ−［２（Ｓ）−メルカプトメチル−３−（２−メチルフェニル）−プロピオニル］メチオニン；南アフリカ共和国特許出願番号第８４／０６７０号で開示されるＳＱ２８，６０３（Ｎ−［２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−β−アラニン）；ＵＫ６９５７８（ｃｉｓ−４−［［［１−［２−カルボキシ−３−（２−メトキシエトキシ）プロピル］−シクロペンチル］カルボニル］アミノ］−シクロヘキサンカルボン酸）およびその活性な鏡像異性体；チオルファンおよびその鏡像異性体；ｒｅｔｒｏ−チオルファン；ホスホラミドン；およびＳＱ２９０７２（７−［［２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］アミノ］−ヘプタン酸）を含む。使用に適当な物はまた、上記ＮＥＰ阻害剤の任意のプロドラッグ形態（例えば、１またはそれ以上のカルボン酸基がエステル化されている化合物）である。

本発明の範囲にあるＮＥＰ阻害剤は、米国特許番号第５，２１７，９９６号で開示される化合物、具体的には、Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルおよびＮ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸、またはそれぞれの場合でその薬学的に許容される塩；ＥＰ００３４２８５０で開示される化合物、具体的には、（Ｓ）−ｃｉｓ−４−［１−［２−（５−インダニルオキシカルボニル）−３−（２−メトキシエトキシ）プロピル］−１−シクロペンタンカルボキシアミド］−１−シクロヘキサンカルボン酸；ＧＢ０２２１８９８３で開示される化合物、具体的には、３−（１−［６−ｅｎｄｏ−ヒドロキシメチルビシクロ［２，２，１］ヘプタン−２−ｅｘｏ−カルバモイル］シクロペンチル）−２−（２−メトキシエチル）プロパン酸；ＷＯ９２／１４７０６で開示される化合物、具体的には、Ｎ−（１−（３−(Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−（Ｓ）−プロピルアミノ）−２（Ｓ）−ｔ−ブトキシ−カルボニルプロピル）シクロペンタンカルボニル）−Ｏ−ベンジル−（Ｓ）−セリン メチル エステル；ＥＰ００３４３９１１で開示される化合物；ＪＰ０６２３４７５４で開示される化合物；ＥＰ００３６１３６５で開示される化合物、具体的には、４−［［２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］アミノ］安息香酸；ＷＯ９０／０９３７４で開示される化合物、具体的には、３−［１−（ｃｉｓ−４−カルボキシカルボニル−ｃｉｓ−３−ブチルシクロヘキシル−ｒ−１−カルバモイル（carboamoyl）シクロペンチル］−２Ｓ−（２−メトキシエトキシメチル）プロパン酸；ＪＰ０７１５７４５９で開示される化合物、具体的には、Ｎ−（（２Ｓ）−２−（４−ビフェニルメチル）−４−カルボキシ−５−フェノキシバレリル）グリシン；ＷＯ９４／１５９０８で開示される化合物、具体的には、Ｎ−（１−（Ｎ−ヒドロキシカルバモイルメチル）−１−シクロペンタンカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニン；米国特許番号第５，２７３，９９０号で開示される化合物、具体的には、（Ｓ）−（２−ビフェニル−４−イル）−１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチルアミノ）メチルスルホン酸；米国特許番号第５，２９４，６３２号で開示される化合物、具体的には、（Ｓ）−５−(Ｎ−（２−（ホスホノメチルアミノ）−３−（４−ビフェニル）プロピオニル）−２−アミノエチル）テトラゾール；米国特許番号第５，２５０，５２２号で開示される化合物、具体的には、β−アラニン、３−［１，１’−ビフェニル］−４−イル−Ｎ−［ジフェノキシホスフィニルメチル］−Ｌ−アラニル；ＥＰ００６３６６２１で開示される化合物、具体的には、Ｎ−（２−カルボキシ−４−チエニル）−３−メルカプト−２−ベンジルプロパンアミド；ＷＯ９３／０９１０１で開示される化合物、具体的には、２−（２−メルカプトメチル−３−フェニルプロピオンアミド）チアゾール−４−イルカルボン酸；ＥＰ００５９０４４２で開示される化合物、具体的には、（（Ｌ）−（１−（（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−メトキシ）カルボニル）−２−フェニルエチル）−Ｌ−フェニルアラニル）−β−アラニン、Ｎ−［Ｎ−［（Ｌ）−［１−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−メトキシ］カルボニル］−２−フェニルエチル］−Ｌ−フェニルアラニル］−（Ｒ）−アラニン、Ｎ−［Ｎ−［（Ｌ）−１−カルボキシ−２−フェニルエチル］−Ｌ−フェニルアラニル］−（Ｒ）−アラニン、Ｎ−［２−アセチルチオメチル−３−（２−メチル−フェニル）プロピオニル］−メチオニン エチル エステル、Ｎ−［２−メルカプトメチル−３−（２−メチルフェニル）プロピオニル（propioyl）］−メチオニン、Ｎ−［２（Ｓ）−メルカプトメチル−３−（２−メチルフェニル）プロパノイル］−（Ｓ）−イソセリン、Ｎ−（Ｓ）−［３−メルカプト−２−（２−メチルフェニル）プロピオニル］−（Ｓ）−２−メトキシ−（Ｒ）−アラニン、Ｎ−［１−［［１（Ｓ）−ベンジルオキシカルボニル−３−フェニルプロピル］アミノ］シクロペンチルカルボニル］−（Ｓ）−イソセリン、Ｎ−［１−［［１（Ｓ）−カルボニル−３−フェニルプロピル］アミノ］−シクロペンチルカルボニル］−（Ｓ）−イソセリン、１，１’−［ジチオビス−［２（Ｓ）−（２−メチルベンジル）−１−オキソ−３，１−プロパンジイル］］−ビス−（Ｓ）−イソセリン、１，１’−［ジチオビス−［２（Ｓ）−（２−メチルベンジル）−１−オキソ−３，１−プロパンジイル］］−ビス−（Ｓ）−メチオニン、Ｎ−（３−フェニル−２−（メルカプトメチル）−プロピオニル）−（Ｓ）−４−（メチルメルカプト）メチオニン、Ｎ−［２−アセチルチオメチル−３−フェニル−プロピオニル］−３−アミノ安息香酸、
Ｎ−［２−メルカプトメチル−３−フェニル−プロピオニル］−３−アミノ安息香酸、Ｎ−［１−（２−カルボキシ−４−フェニルブチル）−シクロペンタンカルボニル］−（Ｓ）−イソセリン、Ｎ−［１−（アセチルチオメチル）シクロペンタン−カルボニル］−（Ｓ）−メチオニン エチル エステル、３（Ｓ）−［２−（アセチルチオメチル）−３−フェニル−プロピオニル］アミノ（amimo）−ε−カプロラクタム；およびＷＯ９３／１０７７３で開示される化合物、具体的には、Ｎ−（２−アセチルチオメチル−３−（２−メチルフェニル）プロピオニル）−メチオニン エチル エステルも含む。

利尿剤は、例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、メチルクロロチアジド、およびクロロサリドンからなる群から選択されるチアジド誘導体である。最も好ましくは、ヒドロクロロチアジドである。

組み合わされるべき化合物は、薬学的に許容される塩として存在し得る。これらの化合物が、例えば、少なくとも１つの塩基性中心を有すると、それらは酸付加塩を形成し得る。対応する酸付加塩は、所望ならさらに塩基性中心を有するようにも形成され得る。少なくとも１つの酸性基（例えば、ＣＯＯＨ）を有する化合物は、塩基を有する塩も形成し得る。対応する内部にある塩は、化合物が例えば、カルボキシ基とアミノ基を共に含む場合、さらに形成され得る。

Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルについて、好ましい塩は、米国特許番号第５，２１７，９９６号で開示されるナトリウム塩、トリエタノールアミン塩およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩を含む。トリエタノールアミン塩およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩の調製は、以下の様に行われ得る：
トリエタノールアミン塩
Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステル（３４９ｍｇ、０．８４８ｍｍｏｌ）に、１ｍｌの酢酸エチル中５ｍｌのエチル エーテルおよび０．１１３ｍｌ（０．８４８ｍｍｏｌ）のトリエタノールアミンを添加する。固体を集めて乾燥する。融点６９−７１℃。

トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩
Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステル（３．２ｇ（７．７８ｍｍｏｌ））に、３２ｍｌの酢酸エチルおよび９４０ｍｇ（７．７８ｍｍｏｌ）トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを添加する。懸濁液を４５ｍｌの酢酸エチルで希釈し、一晩（〜２０時間）還流する。反応物を、０℃に冷却して濾過し、固体を酢酸エチルで洗浄し、乾燥する。融点１１４〜１１５℃。

トリエタノールアミンおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンで形成されるＮ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルの塩は新規物質であり、そしてＮＥＰ阻害剤として用いられ得る。本発明の別の実施態様は、該新規塩、特にＮＥＰの阻害と関連する状態および疾病を予防および処置するため、ＮＥＰ阻害剤としてのその使用、該塩を含む医薬組成物、および本発明の組合せについて上記または下記開示の様に、特に状態および疾病の処置のため、バルサルタンとの組合せである。

バルサルタンとＮＥＰ阻害剤の組合せがバルサルタン、ＡＣＥ阻害剤、またはＮＥＰ阻害剤のみの投与より高い治療作用を達成し、かつ血管ペプチダーゼ阻害剤のみの投与で見られるより少ない血管性浮腫を促進することは、驚くべく発見であった。より高い効果は、作用の長期持続時間としても示され得る。作用の持続時間は、次の投与前にベースラインまで戻る時間または曲線下面積（ＡＵＣ）のいずれかとしてモニターされ、そして水銀ｍｍでの血圧変化の結果（ｍｍＨｇの変化）および作用の持続時間（分、時間、または日）として示される。

さらなる利点は、本発明により組み合わされるべき個々の薬物のより少ない用量が投薬量を減らすために用いられ得ること（例えば、投薬量がより少ないことがしばしば要求されるだけでなく、より少ない頻度で適用されることも必要とされる。）、または副作用の増加を少なくするために用いられ得ることである。バルサルタンまたはその薬学的に許容される塩、およびＮＥＰ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の組合せ投与は、より高いパーセンテージの処置患者で優位な応答の結果となり、つまり原因疾患の状態にも関係なくより高い応答率結果となる。このことは、処置されるべき患者の希望および要求に一致する。

バルサルタンおよびＮＥＰ阻害剤での組合せ治療は、改善された効果ならびにより高い応答率により、より効果的な降圧治療（悪性高血圧、本態性高血圧、腎血管性高血圧、糖尿病性高血圧、収縮期高血圧、または別の続発性高血圧のいずれであるかに関わらない）となることが示され得る。組合せは、（急性および慢性）鬱血性心不全のような心不全、左心室機能障害および肥大型心筋症、糖尿病性心筋症、上室性不整脈および心室性不整脈、心房細動、心房粗動または有害な血管リモデリングの処置または予防でも有用である。バルサルタンおよびＮＥＰ阻害剤の治療が心筋梗塞およびその続発症の処置および予防で有益であることがさらに示され得る。バルサルタン＋ＮＥＰ阻害剤の組合せは、アテローム性動脈硬化症、狭心症（安定性または不安定性に関わらない）、および腎不全（糖尿病性および非糖尿病性）の処置でも有用である。さらに、バルサルタンおよびＮＥＰ阻害剤を用いる組合せ治療は内皮機能障害を改善し、それにより心不全、狭心症および糖尿病のように正常内皮機能が損なわれている疾病で有効となり得る。さらに、本発明の組合せは、続発性アルドステロン症、原発性肺高血圧および続発性肺高血圧、糖尿病性ネフロパチーの様な腎不全状態、糸球体腎炎、強皮症、糸球体硬化、初期腎臓疾病のタンパク尿、および腎血管性高血圧、糖尿病性網膜症の処置または予防、片頭痛、末梢血管障害、レイノー病、管腔細胞の過形成（luminal hyperplasia）、認知機能障害（例えば、アルツハイマー病）、緑内障、および発作の様な他の血管性疾病の管理のため用いられ得る。

一般名または商標名またはコード番号により同定される活性剤の構造は、標準的インデックスの実体版「メルクインデックス」またはデータベース、例えば、Life Cycle Patents International（例えば、IMS World Publications）から取得され得る。その対応する内容は、引用により本明細書に取り込まれる。当業者は、この引例に基づき活性剤を完璧に同定でき、同様に製造して、試験管内および生体内共に標準的な試験モデルで医薬品の効能および特性を試験できる。

例えば、ＵＳ特許、ＥＰ、ＧＢ、ＪＰまたはＷＯ特許出願で言及されるＮＥＰ阻害剤に関する主題、特に、請求項または実施例で開示される対応するＮＥＰ阻害剤および薬学的に許容される塩、およびそれらを含む医薬組成物が、引用により本明細書に取り込まれる。

適当な分野の技術者は、上記および下記の治療効果で本発明の組合せの有効性を示すための適切な試験モデルを充分に選択できる。

代表的な試験は、例えば、以下の方法を適用して、バルサルタンとＮ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルの組合せで行われ得る：
薬物の有効性は、正常塩量の食事または塩を添加した食事（ラットの固形飼料中４〜８％の塩、または飲料水として１％ＮａＣｌ）のいずれかで維持された、酢酸デオキシコルチコステロン−塩ラット（ＤＤＣＡ塩）および自然発生高血圧発症ラット（ＳＨＲ）を含む様々な動物モデルで調べられる。

ＤＯＣＡ−塩試験モデルは、急性または慢性試験のプロトコールの何れかを利用する。急性試験の方法には、大腿動脈および静脈カテーテルを挿着するラットを用いて６時間にわたる実験時間で、様々な試験物質の効果を評価することを含む。急性試験の方法は、ＤＯＣＡ−塩高血圧の確立期（established phase）で血圧を降下させる効力について試験物質を評価する。対照的に、慢性試験の方法は、ＤＯＣＡ−塩高血圧の展開期（development phase）で血圧の上昇を予防または遅延させる試験物質の効力を評価する。それゆえ、慢性試験の方法では、血圧は無線送信機によりモニターされる。無線送信機は、ＤＯＣＡ−塩処置開始前、従って高血圧の誘導前にラットの腹部大動脈に外科的に埋め込まれる。血圧は、最大６週間（ＤＯＣＡ−塩投与前約１週間および投与後５週間）継続的ににモニターされる。

ラットは、２〜３％のイソフルレンを含む酸素吸入に続いてアミタールナトリウム（アモバルビタール）（１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔）により麻酔される。麻酔レベルは、安定したリズムの呼吸パターンにより確認される。

急性試験の方法：
ラットは、ＤＯＣＡ移植の際に片側性腎摘出を受ける。左側腹および首の後の毛がかられ、滅菌アルコール綿およびポビドン／ヨウ素で消毒される。手術の間、ラットを加温パッドの上に置き、３７℃の体温を維持する。

皮膚とその下の筋肉が２０ｍｍ切開され、左の腎臓が露出される。腎臓は周囲の組織から離され、体外に出され、そして２度の結紮（３〜０シルク）が、大動脈との結合部に隣接する腎動脈および腎静脈の周りでしっかりとなされる。続いて、腎動脈および腎静脈が切断され、腎臓が取り除かれる。筋肉および皮膚の傷口は、４〜０シルク縫合糸およびステンレススチール傷用クリップでそれぞれ閉じられる。同時に、首の後が１５ｍｍ切開され、そして酢酸デオキシコルチコステロン（１００ｍｇ／ｋｇ）を含有する３週間放出ペレット（Innovative Research of America, Sarasota, Florida）が皮下に埋め込まれる。続いて、傷がステンレス−スチールクリップで閉じられ、そして両方の傷がポビドン／ヨウ素で処置される；ラットにプロカインペニシリンＧ（１００，０００Ｕ）の筋肉注射およびブプレノルフィンの皮下注射（０．０５〜０．１ｍｇ／ｋｇ）が手術後に行われる。ラットは直ちに、１％ＮａＣｌ＋０．２％ＫＣｌ飲料水で飼育される；この処置は、少なくとも３週間、該動物が高血圧となり実験に利用可能となるまで続けられる。

実験の４８時間前に動物はイソフルレンで麻酔され、動脈圧の測定、血液採取、および試験化合物の投与のため、大腿動脈および大腿静脈にカテーテルが入れられる。ラットは、実験チャンバーとしても利用するプレキシグラスケージにいられ、４８時間かけて回復させる。

慢性試験の方法：
この方法は、ラットが片側性腎摘出およびＤＯＣＡおよび塩の開始７〜１０日前に無線送信機を埋め込まれることを除いて、上記と同じである。さらに、このラットは大腿動脈および大腿静脈にカテーテルを入れる手術を受けない。無線送信機は、M.K. Bazil, C. Krulan and R.L. Webbに記載の様に埋め込まれる。心血管の遠隔モニタリングは、非麻酔自然発症高血圧ラットのパラメーターとされる。J.Cardiovasc. Pharmacol. 22: 897-905, 1993を参照されたい。

続いて、事前に決めた時間ポイントで血圧、心拍数などを測定するため、コンピューターにプロトコールをセットアップする。ベースラインのデータは、様々な時間ポイントおよび様々な時間間隔で集められる。例えば、ベースラインまたは投与前の値は普通、薬物投与前２４時間で集められたデータおよび３つの連続するデータの平均からなる。

血圧、心拍数および活動は、薬物投与前、投与中、投与後の事前に選択した様々な時間ポイントで測定される。測定全てが、非拘束（unrestrained)かつ平静（undisturbed）での動物で行われる。バッテリーの寿命で決まる試験の最長時間は９ヶ月に達し得る。この継続時間の試験のため、ラットは一日当たり２回未満で経口投与されるか（１〜３ｍｌ／ｋｇ添加剤）、または薬物が飲料水を介して、または餌と混ぜられて投与される。より短い持続時間、つまり最大８週間の試験のため、薬物は皮下に埋め込まれた浸透圧性ミニポンプを介して与えられる。浸透圧性ミニポンプは、薬物送達率および時間に基づき選択される。バルサルタンの投薬量は１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルは、１０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。

さらに、ＳＨＲを利用して、Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルと組み合わせたバルサルタンの有効性が試験される。ＳＨＲの高血圧のバックグランドは、レニンアンジオテンシンシステム（ＲＡＳ）を抑制しようとするための慢性的な塩添加、またはＳＨＲでＲＡＳを活性化するための慢性的な塩の減少により、変更される。これらの操作を行い、様々な試験物質の有効性をより広く評価する。自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）で行われる実験は、Taconic Farms, Germantown, New York (Tac:N(SHR)fBR)により提供される。無線遠隔測定装置（Data Sciences International, Inc., St. Paul, Minnesota）は、１４〜１６週齢の間の全試験動物のより下部の腹大動脈に埋め込まれる。全ＳＨＲは、実験開始前の少なくとも２週間で外科的埋め込み手術から回復可能である。心臓血管のパラメーターは、無線送信機を経由して連続してモニターされ、デジタルシグナルが、電子データ取得システムを用いて集められ、かつ保存される受信機に送信される。血圧（動脈の心臓収縮期圧および心臓拡張期圧の平均）および心拍数が、意識があり、自由に動け、そして平静なＳＨＲでモニターされる。動脈血圧および心拍数は、１０分毎に１０秒間測定されて記録される。各ラットについて記録されるデータは、２４時間の平均値を表し、１日ごとに集められる１４４〜１０分の試料から作り上げられる。血圧および心拍数のベースラインの値は、薬物処置の開始前に行われた３つの連続２４時間の測定値の平均からなる。全ラットは、温度と湿度の制御された部屋で個別に飼育され、１２時間の明暗サイクルで維持される。

心臓血管のパラメーターに加えて、体重の毎週の測定値も全ラットで記録される。処置は、飲料水、毎日の経口栄養補給を介して、または上記の浸透圧性ミニポンプでなされる。飲料水に入れられる場合、飲料水量は１週間当たり５回測定される。続いて、個々のラットのバルサルタンおよびＮ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルの投薬量が、各ラットについての飲料水量、飲料水中の薬物の濃度、および個々の体重に基づき計算される。飲料水中の薬物溶液は全て、３〜４日毎に新しい物にされる。飲料水中の典型的な投薬量のバルサルタンは３〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、一方Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルの投薬量は、用いられる特定の物質に高く依存する。単一療法として投与される多くの場合、１日の用量は５０ｍｇ／ｋｇ／日を超えない。組合せの場合、より少ない投薬量の各物質が用いられ、対応してバルサルタンは１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲で投与され、Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルの投薬量は５０ｍｇ／ｋｇ／日以下である。しかしながら、応答率が組合せ処置で増加される場合の投薬量は、単一療法として用いられるものと等しい。

薬物が経口栄養補給により投与される場合、バルサルタンの投薬量は１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、そしてＮ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸 エチル エステルは１００ｍｇ／ｋｇ／日を超えない。

慢性試験の終了時に、ＳＨＲまたはＤＯＣＡ−塩ラットは麻酔され、迅速に心臓が取り出される。心房の付属器の分離および除去の後、左心室、および左心室＋右心室（合計）の重量が測定されて記録される。続いて、左心室、および心室の合計が体重に対して標準化され記録される。血圧および心臓塊についての全記録値は平均±標準誤差を表す。

血管の機能および構造は、組合せの有効性を評価するために処理された後、評価される。ＳＨＲは、Intengan HD, Thibault G, Li JS, Schiffrin EL, Circulation 1999, 100 (22): 2267-2275で記載される方法により試験される。同様に、ＤＯＣＡ−塩ラットの血管機能の評価方法は、Intengan HD, Park JB, Schiffrin, EL, Hypertension, 1999, 34(4 Part 2): 907-913に記載される。
利用可能な結果は、本発明に記載の組合せの予測外の治療効果を示す。

１つの態様において、本発明の目的は、例えば、高血圧、（急性および慢性）鬱血性心不全の様な心不全、左心室機能障害および肥大型心筋症、糖尿病性心筋症、上室性不整脈および心室性不整脈、心房細動、心房粗動、有害な血管リモデリング、心筋梗塞およびその続発症、アテローム性動脈硬化症、狭心症（安定性または不安定性に関わらない）、腎不全（糖尿病性および非糖尿病性）、心不全、狭心症、糖尿病、続発性アルドステロン症、原発性肺高血圧および続発性肺高血圧、糖尿病性ネフロパチーの様な腎不全状態、糸球体腎炎、強皮症、糸球体硬化、初期腎臓疾病のタンパク尿、および腎血管性高血圧、糖尿病性網膜症からなる群から選択される状態または疾病の処置または予防のための、片頭痛、末梢血管障害、レイノー病、管腔細胞の過形成、認知機能障害（例えば、アルツハイマー病）、緑内障および発作の様な他の血管性疾病の管理のための、医薬的組合せ組成物であって、（ｉ）ＡＴ１−拮抗剤バルサルタンまたはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）ＮＥＰ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む組成物を提供することである。さらなる活性成分は、利尿剤、特にヒドロクロロチアジドであり得る。

該組成物において、成分（ｉ）および（ｉｉ）が得られて、一緒に、交互、または１つの組み合わされた単位用量剤形または２つの別々の単位用量剤形で別々に投与され得る。単位用量剤形は、固定した組合せでもあり得る。

本発明のさらなる態様は、高血圧、（急性および慢性）鬱血性心不全の様な心不全、左心室機能障害および肥大型心筋症、糖尿病性心筋症、上室性不整脈および心室性不整脈、心房細動、心房粗動、有害な血管リモデリング、心筋梗塞およびその続発症、アテローム性動脈硬化症、狭心症（安定性または不安定性に関わらない）、腎不全（糖尿病性および非糖尿病性）、心不全、狭心症、糖尿病、続発性アルドステロン症、原発性肺高血圧および続発性肺高血圧、糖尿病性ネフロパチーの様な腎不全状態、糸球体腎炎、強皮症、糸球体硬化、初期腎臓疾病のタンパク尿、および腎血管性高血圧、糖尿病性網膜症からなる群から選択される状態または疾病の処置または予防法、片頭痛、末梢血管障害、レイノー病、管腔細胞の過形成、認知機能障害（例えば、アルツハイマー病）、緑内障および発作の様な他の血管性疾病の管理方法であり、（ｉ）ＡＴ１−拮抗剤バルサルタンまたはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）ＮＥＰ阻害剤またはその薬学的に許容される塩の治療上有効量の組合せ、および薬学的に許容される担体をかかる処置が必要な哺乳類に投与することを含む方法である。

本発明の組合せのうち治療上有効量の各成分は、同時または任意の順序で連続して投与され得る。
対応する活性成分またはその薬学的に許容される塩は水和物の形でも用いられるか、または結晶化に用いられる別の溶媒を含み得る。

本発明に記載の医薬組成物はそれ自体既知の方法で製剤され、そして治療上有効量の薬理学的に活性な化合物を単独で、または特に経腸投与または非経腸投与に適当な１またはそれ以上の薬学的に許容される担体との組み合わせで含む、ヒトを含む哺乳類（温血動物）への経口または経直腸のような経腸投与、および非経腸投与に最適なものである。典型的な経口の剤形は、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、エリキシル剤および懸濁剤を含む。典型的な注射可能剤形は、溶剤および懸濁剤を含む。

上記の剤形で使用する典型的な薬学的に許容される担体は、ラクトース、スクロース、マンニトールおよびソルビトールのような糖；コーンスターチ、タピオカスターチおよびかたくり粉のようなスターチ；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびメチルセルロースのようなセルロースおよび誘導体；ジカルシウムリン酸塩およびトリカルシウムリン酸塩のようなカルシウムリン酸塩；硫酸ナトリウム；硫酸カルシウム；ポリビニルピロリドン；ポリビニルアルコール；ステアリン酸；ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸カルシウムのようなアルカリ土類金属のステアリン酸塩；ステアリン酸；ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油およびコーン油のような植物油；非イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤および陰イオン界面活性剤；エチレングリコールポリマー；βシクロデキストリン；脂肪アルコール；およびシリアル固体加水分解物（hydrolyzed cereal solid）、ならびに毒性のない相性の良い他の充填剤、結合剤、崩壊剤、緩衝剤、保存剤、抗酸化剤、滑沢剤、香味剤、および医薬品製剤で通常用いられるものにより例示される。

本発明は、キット形態の別々の医薬組成物の組合せにも関する。それは、２つの別々の単位：バルサルタン医薬組成物およびＮＥＰ阻害剤である医薬組成物を含むキットである。キットの形態は、別々の成分が異なる投薬形態（例えば、非経腸バルサルタン製剤および経口ＮＥＰ製剤）で投与されるべき場合、または異なる投薬間隔で投与される場合、特に好都合である。

該医薬品製剤は、薬理学的に活性な化合物を単独で、または通例の医薬補助物質を一緒に含む製剤を、恒温動物へ経口投与および経直腸投与のような経腸投与、または非経腸投与するためである。例えば、医薬製剤は、約０．１％〜９０％、好ましくは約１％〜約８０％の活性な化合物からなる。経腸投与または非経腸投与の医薬製剤は、例えば、コーティングされた錠剤、錠剤、カプセル剤、または座薬およびアンプルのような単位用量剤形である。これらは、例えば、通常の混合、造粒、コーティング、可溶化（solubulizing）または凍結乾燥工程を用いてそれ自体既知の方法で製剤される。従って、経口使用する医薬製剤は、固形賦形剤と活性な化合物を組み合わせること、所望なら得られた混合物を造粒すること、および所望または必要なら、混合物または顆粒を適当な補助物質を加えた後に錠剤またはコーティングされた錠剤に処理することにより得られ得る。

活性な化合物の投薬量は、投与形態、恒温動物、年齢および／または個々の状態のような様々な因子に依存し得る。本発明に記載の医薬組成物の活性成分の好ましい投薬量は、治療上有効量の投薬量、特に通常利用可能な量である。通常経口投与の場合、１日の用量約１ｍｇ〜約３６０ｍｇが、例えば、約７５ｋｇの体重の患者に対して見積もられるべきである。

バルサルタンは、適当な単位用量剤形、例えば、カプセル剤または錠剤の形態で、例えば、約２０〜３２０ｍｇの患者に適用され得るバルサルタンの治療上有効量を含んだ形態で供給され得る。活性成分の使用は、最大１日あたり３回であり、例えば、１日の用量２０ｍｇ〜４０ｍｇのバルサルタンで開始し、１日あたり８０ｍｇから１日あたり１６０ｍｇ、最大１日あたり３２０ｍｇに増加する。好ましくは、バルサルタンは、心不全の患者において１日当たり１回、または２回、それぞれ８０ｍｇの用量または１６０ｍｇの用量で適用される。相当する用量は、例えば、朝、昼または夕方に取られ得る。好ましくは、心不全では１日１回、または１日２回の投与である。

ＮＥＰ阻害剤の場合、好ましい単位用量剤形は、例えば、一日毎に投与される約２０ｍｇ〜約８００ｍｇ、好ましくは、約５０ｍｇ〜約７００ｍｇ、なおより好ましくは、約１００ｍｇ〜６００ｍｇ、そしてなおより好ましくは、約１００ｍｇ〜約３００ｍｇを含む錠剤またはカプセル剤である。

利尿剤の場合、好ましい単位用量剤形は、例えば、約５ｍｇ〜約５０ｍｇ、好ましくは約６．２５ｍｇ〜約２５ｍｇを含む錠剤またはカプセル剤である。一日の用量である６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、または２５ｍｇのヒドロクロロチアジドは、好ましくは１日に１回で投与される。
上記の用量は、治療上有効量の本発明の活性成分を含む。

以下の実施例は、上記の本発明を例示する；しかしながら、いかなる方法でも本発明の範囲を制限することは意図しない。
剤形実施例１：
フィルムコーティングされた錠剤：

^＊）処理中に取り除かれる。

フィルムコーティングされた錠剤を、例えば以下の様に製造する：
バルサルタン、微結晶性セルロース、クロスポビドン、無水コロイダルシリカ／コロイド二酸化ケイ素／Aerosile 200の一部、コロイド二酸化ケイ素、およびステアリン酸マグネシウムの混合物を、拡散ミキサーで前もって混合し、続いて選別ミルを通してふるう。生じた混合物を再び拡散ミキサーで前もって混合し、ローラー圧縮機で圧縮し、続いて選別ミルを通してふるう。生じた混合物に、無水コロイダルシリカ／コロイド二酸化ケイ素／Aerosile 200の残りを添加し、最終的な混合を拡散ミキサーで行う。混合物全部を、ロータリー打錠機で圧縮し、錠剤を、せん孔パンでDiolack pale redを用いてフィルムでコーティングする。

剤形実施例２：
フィルムコーティングされた錠剤：

フィルムコーティングされた錠剤を、例えば、剤形実施例１で記載の様に製造する。

剤形実施例３：
フィルムコーティングされた錠剤：

^＊）Opadry［登録商標］brown OOF16711着色剤の組成は以下で表にする。
^＊）処理中に取り除かれる。

Opadry［登録商標］の組成：

フィルムコーティングされた錠剤を、例えば、剤形実施例１で記載の様に製造する。

剤形実施例４：
カプセル剤：

錠剤を、例えば以下の様に製造する：
造粒／乾燥
バルサルタン微結晶性セルロースを、流動層造粒機中で精製水に溶解したポビドンおよびラウリル硫酸ナトリウムからなる造粒溶液でスプレー造粒する。得た顆粒を流動層乾燥機中で乾燥する。

粉砕／混合
乾燥した顆粒を、クロスポビドンおよびステアリン酸マグネシウムと一緒に粉砕する。続いて該塊を、コニカルスクリュー（srew）型のミキサーで約１０分間混合する。

カプセル化
空の硬ゼラチンカプセルを、制御した温度および湿度条件下で、混合した大量の顆粒で詰める。詰めたカプセルを、付着粉を除き、視覚的に検査し、重量検査し、そして品質保証部で検疫する。

剤形実施例５：
カプセル剤：

剤形を、例えば、剤形実施例４で記載の様に製造する。

剤形実施例６：
硬ゼラチンカプセル剤：

剤形実施例７：
活性成分として、例えば、（Ｓ）−Ｎ−（１−カルボキシ−２−メチルプロプ−１−イル）−Ｎ−ペンタノイル−Ｎ−［２’（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル−メチル］アミンを含む硬ゼラチンカプセル剤を、例えば、以下の様に製剤できる。

成分（１）および（２）を、水中の成分（３）および（４）溶液で造粒する。成分（５）および（６）を、乾燥顆粒に添加し、そして混合物をサイズ１の硬ゼラチンカプセルに詰める。
本明細書で言及した全刊行物および特許は、本明細書で説明した様に全体として引用により取り込まれる。

Claims (3)

1. 高血圧または心不全の処置または予防のために使用する、
   （ｉ）ＡＴ１−拮抗剤バルサルタンまたはその薬学的に許容される塩、および
   （ｉｉ）ＮＥＰ阻害剤であるＮ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−（ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸またはそのエチルエステルもしくはそれらの薬学的に許容される塩、並びに
   薬学的に許容される担体
   を含む医薬組成物。
2. ＮＥＰ阻害剤が、Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−（ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸エチルエステルである、請求項１に記載の医薬組成物。
3. ＮＥＰ阻害剤が、Ｎ−（３−カルボキシ−１−オキソプロピル）−（４Ｓ）−（ｐ−フェニルフェニルメチル）−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸である、請求項１に記載の医薬組成物。