CN106138069A - 作为治疗来自非角化复层上皮组织的不适的局部药剂的1-二仲丁基膦酰基戊烷 - Google Patents

Abstract

本发明提供了作为治疗来自非角化复层上皮组织的不适的局部药剂的1-二仲丁基膦酰基戊烷。在本文中提出的构思是：通过局部施加分子所捕获的排热感觉可用于减轻非角化性组织的不适。通过合成化合物和设计测试，确定了名称为DAPA-2-5的分子具有用于实现该目的的选择性期望性能。DAPA-2-5是二烷基-膦酰基-烷烃，且“DAPA-2-5”是1-二仲丁基膦酰基戊烷。DAPA-2-5在非角化性身体表面上引起动态冷却感觉，其不会伴随有刺痛、刺激、或使人不愉快的味道。因此，能够将其用于选择性地治疗来自非角化性复层上皮的感觉不适。

Description

作为治疗来自非角化复层上皮组织的不适的局部药剂的 1-二仲丁基膦酰基戊烷

技术领域

本发明总体涉及治疗化合物领域。更具体地，本发明涉及特定的二烷基-膦酰基-烷烃，即在本文中称为“DAPA-2-5”的1-二仲丁基膦酰基戊烷，也即1-[(二仲丁基)-膦酰基]-戊烷。令人惊讶地并且出乎意料地，DAPA-2-5能够选择性地治疗(例如，抑制)来自非角化性复层上皮(non-keratinizngstratified epithelium)(NKSE)的感觉不适，即，不存在刺痛、刺激、或使人不愉快的味道的问题，例如，如利用结构上类似的化合物所发现的(问题)。如在本文中描述的，DAPA-2-5能够在非角化性体表面(包括，例如口咽表面、食管表面、以及肛门与生殖器(anogenital)表面)上引起动态冷却感觉，其不会伴随有刺痛或其他使人不愉快的感觉。因此，例如，DAPA-2-5可用于治疗包括以下的障碍(例如，疾病)：来自非角化性复层上皮(NKSE)组织的感觉不适、上呼吸消化道不适(包括呼吸上皮的非角化性假复层上皮组织)、口咽不适、食管不适、喉咙刺激、咳嗽、胃灼热、胸痛、肝门与生殖器不适、或非角化性复层上皮(NKSE)组织炎症。本发明还涉及包含DAPA-2-5的药物组合物，以及DAPA-2-5和DAPA-2-5组合物在例如治疗中和作为用于鉴别诊断的药剂的用途。

背景技术

在本文中引用了大量出版物以更全面地描述和公开本发明以及本发明所属领域的现状。这些出版物中的每一个都通过引用以其全部并入本公开，以达到就像每个单独的出版物具体地、单独地表明通过引用并入的相同程度。

贯穿本说明书，包括所附权利要求，除非上下文另外要求，否则将单词“包括”及变形如“包含”和“含有”理解为暗示包含所述整体或步骤或者整体或步骤的组，但不排除任何其他整体或步骤或者整体或步骤的组。

必须指出的是，除非上下文另外清楚地规定，否则如在说明书和所附的权利要求书中使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。因此，例如，提及“一种药物载体”包括两种或更多种这类载体的混合物等。

在本文中，通常以从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值表示范围。当表示这种范围时，另一个实施方式包括从一个特定值和/或至其他特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，将理解的是，该特定值形成另一个实施方式。

本公开包括在理解本发明中可能有用的信息。不承认的是，在本文中提供的任何信息是现有技术或与目前所请求保护的发明相关，或任何明确或暗示引用的出版物是现有技术。

热舒适、感觉不适、以及伤害感受

“热舒适”是在人类工程学、服装业、工程学、以及建筑学中发展良好的概念。该术语是指其中穿着正常量的衣服的人感觉既不太冷又不太热的状况。热舒适对于一个人的幸福感和生产力是重要的。当空气温度、湿度、以及空气运动在称为“舒适区”的指定范围[对于UK和USA是24℃至27℃]内时，实现热舒适。由Bedford和ASHRAE[美国加热冷冻及空调工程师协会]开发了热舒适的标准化描述符。冷却等级的表来自Auliciems和Szokolay：Thermal Comfort,2007，如在以下表中示出的。已经在感觉量表上添加了数字-4，以描述寒冷或刺痛、冰冷或“北极的冷”。

针对具有角蛋白层和受交感神经神经支配并且响应冷而收缩的血管的皮肤状况，开发了热舒适的概念。当环境温度是23℃时，脚和手的皮肤温度例如将分别下降至25℃和30℃，但直肠温度和口腔温度从环境的23℃至34℃保持恒定在36℃至37℃。对于非角化性组织，如口腔粘膜、咽粘膜、或者食管或直肠粘膜，内部血流提供了热，并且组织温度保持恒定。因此，利用物理方法如冰或冷液体，难以在这些组织中维持排热感觉。

可以将伤害感受定义为伤害性刺激的神经编码和处理。在此特别感兴趣的是周围地起作用并且能够局部施加的抗感受伤害性药物。通过“抗感受伤害性(anti-nociceptive)”，意指药物抑制伤害性刺激的心理和生理感知和对于伤害性刺激的反应。通过“周围地(末梢地，peripherally)”，意指药物作用的主要位点位于中枢神经系统的外部，即，脑和脊髓的外部。

目前，存在周围地起作用以削弱伤害性(有害的)信号至中枢神经系统的传递的两大类抗感受伤害性药物。一类是在周围神经纤维的钠通道上起作用以抑制伤害性信号朝向中枢神经系统的神经传递的局部麻醉剂如普鲁卡因和利多卡因。另一类是抑制某些前列腺素的合成的药剂如阿司匹林和布洛芬。当在损伤或炎症期间由组织释放时，这些前列腺素降低了响应于伤害性刺激的感觉神经纤维的放电(firing)阈值。又一类抗感受伤害性药物是麻醉镇痛剂，其不是通过周围作用(末梢作用)抑制疼痛，而是直接作用在脑和脊髓中的神经元件(neuronal element)上。

由查尔斯谢灵顿爵士定义为“强制保护性反射的心理辅助(psychicaladjunct of an imperative protective reflex)”的疼痛由称为多形态C纤维的无髓鞘小直径感觉纤维的排出增多激活。将疼痛分类为伤害性的或神经性的。伤害性疼痛由细胞损伤引起，而神经性疼痛由传输疼痛信号的神经纤维的损害引起。存在产生疼痛的多种情况，最常见的是，例如创伤、炎症、以及免疫紊乱。可能伴随疼痛的感觉是刺激、瘙痒(痒)、灼热感(感觉迟钝)、以及不舒服和不满的感觉。如在本文中使用的，将伤害感受的心理辅助一起分类为“感觉不适”。

存在四种基本类型的动物组织：结缔组织、肌肉组织、神经组织、以及上皮组织。上皮细胞排列在整个身体器官的管道、空腔和表面。当层是一个细胞厚时，将其称为单层上皮。如果存在两层或更多层细胞时，将其称为复层上皮。复层上皮主要由鳞状(扁平)细胞和一些立方细胞(cuboidalcell)组成。在历史上，将复层上皮划分为两大类：角化复层上皮和非角化复层上皮。角化上皮如皮肤的表皮具有由坚韧和不透水的角蛋白组成的死细胞的外层[角质层]。角蛋白还覆盖了舌头的丝状乳头。相比之下，非角化性复层上皮不包含显著的角蛋白层，并且主要存在于以下之上：鼻腔内层(lining)、口腔部分如内唇、咽表面、食管表面、呼吸树内层、以及肛门与生殖器(anogenital)表面。针对角蛋白覆盖组织如指甲、头发和脚，已经传统地保留了术语“角质化上皮(角化上皮，cornified epithelia)”。

与非角化性组织相比，角化性组织较好地耐损伤。非角化性上皮表面必须通过腺状(浆液状和粘液性)分泌物保持湿润，以避免干燥。角蛋白层是药物接近嵌入在角蛋白下面的组织中的神经元感受野(receptive field)的巨大障碍。由于该障碍不存在或减小，因此非角化性上皮表面对感觉剂更加敏感。

近年来，已经意识到，角蛋白是蛋白质家族，并且角蛋白丝形成所有上皮细胞的细胞骨架的组成部分。因此，术语“非角化复层上皮(non-keratinized stratified epithelia)”不再准确并且可能最终过时。此时，优选的术语“非角化性复层上皮(non-keratinizing stratified epithelia)”暗示这些细胞不会形成外部角蛋白层。Bragulla和Homberger[Structure andfunctions of keratin proteins in simple,stratified,keratinized and cornifiedepithelia.Journal of Anatomy,214:516-59,2009]已经提出将复层上皮分为“角质化上皮”和“角化上皮”，但尚未清楚是否接受了这种新术语。

在本申请中，术语“角化性复层上皮”和“非角化性复层上皮”将用于在两类组织之间进行区分。在本申请的名称中使用了术语“非角化复层上皮”，以保持与传统命名法一致。

目前，不存在对于来自非角化性复层上皮(NKSE)的感觉不适具有强功效的局部抗感受伤害性(疼痛抑制剂)化合物。这对于来自口腔、咽表面、以及食管表面的感觉不适尤其如此。

有时，将局部麻醉剂化合物如利多卡因用于来自肛门与生殖器表面(例如，针对外阴阴道疼痛)和来自咽(例如，针对咽炎)的疼痛和不适，但这些药物能够引起超敏反应，并且具有使组织对触摸和压力麻木的不期望的性能。由于这类药物抑制上皮细胞生长，因此延长使用是危险的。

非甾体抗炎化合物(NSAID)(例如，酮咯酸)不会对由肛门与生殖器或口腔NKSE引起的疼痛起作用。通过减少炎症，抗炎甾体能够减轻伤害感受，但抗感受伤害性作用不是立即开始的。

在用于直肠及肛门不适的药膏中，薄荷醇具有一些有限的止痛作用。在锭剂和糖果中，薄荷醇对于疼痛或喉咙刺激以及对于咳嗽具有一些益处。在角化皮肤上，能够施加高浓度的薄荷醇(例如，按重量计大于2％)，而不会直接刺激皮肤。例如，能够将包含按重量计5％薄荷醇的局部贴剂(例如，IcyHot Medicated Patch；Chattem,Inc.)施加至躯干的皮肤上，以减轻肌肉疼痛。然而，在非角化性上皮上，薄荷醇的刺激作用限制了其在口腔中的应用，例如，每单位包含多于8mg薄荷醇的锭剂具有冷人厌恶的味道，高浓度下的薄荷醇刺激鼻膜，并且吸入薄荷醇将增加鼻分泌物。

Watson等人[“Compounds with the Menthol Cooling Effect”,J.Soc. Cosmet.Chem.29:185-200,1978]已经描述了对于角化上皮如皮肤和舌头具有生理学上的冷却效果的多种薄荷醇相关化合物。[Rowsell等人“Phosphine oxides having a physiological cooling effect”,US Patent Number4,070,496,1978]描述了具有“生理学上的冷却作用”的三烷基氧化膦。由于大多数测试在舌头上进行并且舌头是角化的，因此其中描述的研究涉及影响角化表面上的感觉过程的化合物。但没有清楚地识别或系统地研究这些分子对于非角化性组织的抗感受伤害性作用。

对于能够选择性地抑制由非角化性复层上皮(NKSE)引起的感觉不适，而不存在令人厌恶的味道、刺激、或毒性问题的新类别的药理学药剂，存在需要。

如果考虑由NKSE引起的感觉，与角化皮肤相比，存在明显的性质上的差别。注意，例如，在暴露于乙醇气体之后来自眼睛的刺痛和疼痛；鼻膜与水的反应；喉咙中红辣椒的窒息感；以及口中反胃酸的酸味和辛辣味。这些感觉明显不同于在皮肤上所能够感受到的。在此，报告来自NKSE的有害信号的神经末梢主要起源于脑神经如三叉神经(5^th)、舌咽神经(9^th)、和迷走神经(10^th)，以及来自NKSE的一些脊髓感觉传入神经，但不是来自皮肤或舌头。如在本文中讨论的，设计用于减轻来自NKSE的感觉不适的药剂的效果明显不同于设计用于角化皮肤的药剂的效果。

Wei先前已经描述了相对于冷却角化人中皮肤，选择性地冷却眼睛表面的两种化合物(均是对薄荷烷甲酰胺氨基酸酯(p-menthane carboxamideamino acid ester)衍生物)[Wei,Sensory/cooling agents for skin discomfort.Journal Skin Barrier Research.14:5-12,2012,和US 084226463,2013年4月23日]。这些观察提供了在NKSE上能够实现选择性抗伤害感受的第一证据。这些化合物产生在ASHRAE标准上对应于-1[温和凉爽]、-2[凉爽]、以及-3[冷]的排热感觉。

“舒适”是优化的感觉输入的结果，并且还能够将针对角化皮肤的热舒适概念应用至非角化性组织。在炎症中，损伤组织中的主要症状是热[灼热]、红[红色]、以及疼痛[痛]的感觉，并且可以预期的是排热感觉将减轻感觉不适。因此，在不存在组织温度降低的情况下，可以使用刺激排热感觉的化学品，以产生“舒适”或减轻不适。

在此描述了关于具有在NKSE上获得舒适或减轻不适所必须的特有期望感觉的分子设计的进一步改进。特别地，如果候选化合物在NKSE表面上引起“动态凉爽”而不存在刺激，即，ASHRAE感觉在-2和-3之间，那么其是治疗来自该组织的感觉不适的良好候选物。具有期望性质并且选择用于该应用的特殊化合物是DAPA-2-5。

已知的氧化膦

1-二烷基膦酰基烷烃，即，1-[(二烷基)-膦酰基]-烷烃，[碳的总数≤15]是仅需要几个[1至3]合成步骤的类溶剂分子。也将它们称为三烷基氧化膦，但现在优选的术语是二烷基-膦酰基-烷烃[在此缩写为DAPA]。

Rowsell等人，1978，描述了对于皮肤以及对于身体(尤其是鼻子、口、喉咙和胃肠道)粘膜具有生理学上的冷却效果的一系列氧化膦。参见，例如其中第3栏和第4栏中的表。该表中的第18项是1-二仲丁基膦酰基戊烷，即，1-[(二仲丁基)-膦酰基]-戊烷，在本文中称为DAPA-2-5。

Wei[Ophthalmic compositions and method for treating eye discomfortand pain，US专利公开号2005/0059639A1,2005]描述了某些氧化膦的用途以及通过给予在眼用溶液中包含那些化合物的滴眼液来治疗眼睛不适。参见，例如其中第4页上的表1。该表中的第13项是1-二仲丁基膦酰基戊烷，在本文中称为DAPA-2-5。

发明内容

本发明涉及特定的二烷基-膦酰基-烷烃，即在本文中称为“DAPA-2-5”的1-二仲丁基膦酰基戊烷，即，1-[(二仲丁基)-膦酰基]-戊烷。令人惊讶地并且出乎意料地，DAPA-2-5能够选择性地治疗(例如，抑制)来自非角化性复层上皮(NKSE)的感觉不适，即，不存在刺痛、刺激、或令人不愉快的味道的问题，例如，如利用结构上类似的化合物所发现的(问题)。

如在本文中描述的，DAPA-2-5能够在非角化性体表面(包括，例如口咽表面、食管表面、以及肛门与生殖器表面)上引起动态冷却感觉，其不会伴随有刺痛或其他使人不愉快的感觉。因此，例如，DAPA-2-5可用于治疗包括以下的障碍(例如，疾病)：来自非角化性复层上皮(NKSE)组织的感觉不适、上呼吸消化道不适、口咽不适、食管不适、喉咙刺激、咳嗽、胃灼热、胸痛、肝门与生殖器不适、或非角化性复层上皮(NKSE)组织炎症。此外，可以将其用作用于非心源性疼痛相对心源性疼痛的鉴别诊断剂。本发明还涉及尤其用作具有矿物赋形剂的制剂的包含DAPA-2-5的药物组合物，以及DAPA-2-5和DAPA-2-5组合物例如在治疗中的用途。

本发明的一个方面涉及特定的二烷基-膦酰基-烷烃，即用在治疗(例如，选择性治疗)如在本文中描述的某些障碍(例如，疾病)的方法中的在本文中称为“DAPA-2-5”的1-二仲丁基膦酰基戊烷。

本发明的另一个方面涉及DAPA-2-5在制备用于如在本文中描述的治疗(例如，选择性治疗疾病)的药物中的用途。

本发明的另一个方面涉及治疗(例如，选择性治疗)如在本文中描述的某些障碍(例如，疾病)的方法，包括：将治疗有效量的DAPA-2-5优选以药物组合物的形式给予需要治疗的患者。

本发明的另一个方面涉及优选以混合有无机矿物赋形剂的药物组合物且以口腔溶解片剂(口溶片，orally dissolving tablet)的合适压制状态提供、用于局部递送至上消化道并且包含如在本文中描述的(a)DAPA化合物的制剂组合物。

本发明的另一个方面涉及包含以下的试剂盒：(a)如在本文中描述的DAPA-2-5，作为用于非心源性疼痛相对心源性疼痛的鉴别诊断的工具；以及(b)使用说明，例如，关于如何给药和使用化合物的书面说明。

本发明的另一个方面涉及包含以下的试剂盒：(a)如在本文中描述的DAPA-2-5，优选地，以药物组合物并且在合适的容器中和/或用合适的包装提供；以及(b)使用说明，例如，关于如何给予化合物的书面说明。

如本领域技术人员将理解的，本发明的一个方面的特征和优选实施方式也将涉及本发明的其他方面。

附图说明

图1是由利用TRPM8(瞬时型感受器电位蛋白M8，transient receptorpotential M8)质粒转染的细胞引起的测试化合物的荧光(相对荧光单位：％最大值)作为针对DAPA-2-4(圆形)、DAPA-2-5(正方形)、DAPA-2-6(倒三角形)、DAPA-2-7(菱形)、以及DAPA-2-8(星形)中的每一种测试化合物的浓度(μM)的对数的函数的曲线图。

图2示出了用于抑制麻醉的大鼠爪中的热引起的水肿的DAPA化合物的相对活性。相对于对侧爪，DAPA-2-5暴露显著将热引起的水肿抑制了12.9％(P<0.01)。利用测试的其他DAPA化合物没有看到该效果，并且其表明DAPA-2-5具有抗炎性能。

图3A-3D示出了在将0.1N的HCl灌注在口咽中之后，从麻醉大鼠的下颌舌骨肌记录的肌动电流图(肌电图)(EMG)活动的振幅(mV)的图。吞咽动作由酸刺激物引起。这些反应由在前灌注的DAPA-2-5抑制。图3A：在酸之后47次吞咽。图3B：0.4mg/mL的DAPA-2-5将酸反应减少为3min内3次吞咽。图3C：在DAPA-2-5之后，抑制持续了8min，在酸刺激及之后，具有9次吞咽。图3D：在DAPA-2-5之后的22min，反应逐渐恢复，具有27次吞咽。

图4示出了各种DAPA化合物用于抑制酸诱导的吞咽[IC₅₀]和用于TRPM8受体激活[EC₅₀]的相对功效的比较。相对功效与IC₅₀值和EC₅₀值的倒数成比例(正比)。

图5A-5B示出了在第一迹线图5A(“野生型”)中说明由以1mg/mL倾注的DAPA-2-5引起的离体(分离的)小鼠迷走神经的辣椒素诱导的去极化的抑制、以及在第二迹线图5B(“TRPM8KO”)中说明由以1mg/mL倾注的DAPA-2-5引起的离体TRPM8KO小鼠迷走神经的抑制的显著缺乏的极化迹线。

图6示出了暴露于柠檬酸雾的豚鼠的咳嗽频率。暴露于1M的柠檬酸溶液的豚鼠(N＝20)具有每10min观察期间19.9±3.9次咳嗽的咳嗽频率。一周后，递送至口咽区域中的盐水不会影响咳嗽频率(18.0±4.0次咳嗽)，但以75μL/动物递送的盐水中的2mg/mL的DAPA-2-5抑制了咳嗽(6.7±1.6次咳嗽，P<0.01曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test))。

具体实施方式

实施方式1：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗来自非角化性复层上皮组织的感觉不适的药物中的用途。

实施方式2：根据实施方式1所述的用途，其中，所述非角化性复层上皮组织位于上呼吸消化道表面上。

实施方式3：根据实施方式1所述的用途，其中，所述非角化性复层上皮组织位于口腔表面上、呼吸上皮表面上、鼻腔膜表面上、鼻内膜表面上、口咽表面上，或咽表面上。

实施方式4：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由吞咽困难引起。

实施方式5：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由胃内容物反流引起。

实施方式6：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由喉咽反流引起。

实施方式7：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由胃食管反流引起。

实施方式8：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由打嗝引起。

实施方式9：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由咽炎引起。

实施方式10：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由扁桃体炎引起。

实施方式11：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由粘膜炎引起。

实施方式12：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由过敏症引起。

实施方式13：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由咳嗽引起。

实施方式14：根据实施方式1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由咽表面对刺激物的超敏反应引起。

实施方式15：根据实施方式1所述的用途，其中，所述非角化性复层上皮组织位于食管表面上。

实施方式16：根据实施方式1所述的用途，其中，位于食管表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由胃内容物反流引起。

实施方式17：根据实施方式1所述的用途，其中，位于食管表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由胃食管反流引起。

实施方式18：根据实施方式1所述的用途，其中，所述非角化性复层上皮组织位于肛门与生殖器表面上。

实施方式19：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗上呼吸消化道不适的药物中的用途。

实施方式20：根据实施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不适由气道或咽中的粘液、痰、或炎性渗出物引起。

实施方式21：根据实施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不适由与感染有关的气道或咽中的粘液、痰、或炎性渗出物引起。

实施方式22：根据实施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不适由与哮喘有关的气道或咽中的粘液、痰、或炎性渗出物引起。

实施方式23：根据实施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不适由与阻塞性肺疾病有关的气道或咽中的粘液、痰、或炎性渗出物引起。

实施方式24：根据实施方式19所述的用途，其中，所述上呼吸消化道不适与鼻炎、鼻窦炎、鼻充血、鼻堵塞、勉力呼吸、呼吸困难、打鼾、或睡眠呼吸暂停有关。

实施方式25：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗咽不适的药物中的用途。

实施方式26：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由胃内容物反流引起。

实施方式27：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由喉咽反流引起。

实施方式28：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由胃食管反流引起。

实施方式29：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由打嗝引起。

实施方式30：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由咽炎引起。

实施方式31：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由扁桃体炎引起。

实施方式32：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由粘膜炎引起。

实施方式33：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由过敏症引起。

实施方式34：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由咳嗽引起。

实施方式35：根据实施方式25所述的用途，其中，所述咽不适由咽表面对刺激物的超敏反应引起。

实施方式36：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗食管不适的药物中的用途。

实施方式37：根据实施方式36所述的用途，其中，所述食管不适与胃内容物反流有关。

实施方式38：根据实施方式36所述的用途，其中，所述食管不适与胃食管反流有关。

实施方式39：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗喉咙刺激的药物中的用途。

实施方式40：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗咳嗽的药物中的用途。

实施方式41：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗气道中的粘液分泌过多的药物中的用途。

实施方式42：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗胃灼热的药物中的用途。

实施方式43：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗吞咽困难的药物中的用途。

实施方式44：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗胸痛的药物中的用途。

实施方式45：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗肛门与生殖器不适的药物中的用途。

实施方式46：1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗非角化性复层上皮组织炎症的药物中的用途。

实施方式47：一种口腔崩解片剂，其选择性地用于治疗来自非角化性复层上皮组织的感觉不适，所述口腔崩解片剂包含：

从约0.5mg至8mg的活性剂，所述活性剂选自由以下组成的组：1-二仲丁基膦酰基戊烷、1-二仲丁基膦酰基己烷、1-二仲丁基膦酰基庚烷、以及它们的组合；以及

按重量计从约2％至20％的矿物赋形剂。

实施方式48：根据实施方式47所述的口腔崩解片剂，其中，所述活性剂基本上由1-二仲丁基膦酰基戊烷组成。

实施方式49：根据实施方式47所述的口腔崩解片剂，其中，所述口腔崩解片剂重量为约40mg至150mg。

实施方式50：根据实施方式47所述的口腔崩解片剂，其中，所述感觉不适包括咳嗽或喉咙刺激。

实施方式51：根据实施方式47所述的口腔崩解片剂，其中，所述矿物赋形剂适合于将化合物递送至上消化道膜上。

实施方式52：根据实施方式47所述的口腔崩解片剂，其中，所述矿物赋形剂是由经验式Al₂O₃·MgO·2SiO₂·xH₂O表示的硅酸铝镁。

实施方式53：根据实施方式47所述的口腔崩解片剂，其中，所述矿物赋形剂是CaHPO₄、喷雾干燥颗粒、无水二碱式磷酸钙、无水磷酸氢钙。

将薄荷醇用在皮肤上(例如，冰冷贴剂、Ben-Gay油膏)、口中(例如，以糖果和锭剂)、以及鼻子中(例如，Vick的vapo吸入器)以减轻感觉不适，但其对于不具有坚韧的角蛋白覆盖(即，除皮肤和舌头之外的组织)的表面的作用受刺激作用和有限的作用时间限制。约三十年前，Watson等人合成了超过1200种化合物，试图发现具有比薄荷醇好的性能的冷却剂[New compounds with the menthol cooling effect.J.Soc.Cosmet.Chem.29:185-200,1978]。该研究已来，N-烷基-环烷基-咪唑羧酰胺和N-烷基-烷基-咪唑羧酰胺，WS-3、WS-5和WS-23已上市，并且现今将其用作用于糖果、食物(例如，口香糖)、以及化妆品的添加剂。这些科学家还描述了具有冷却性能的氧化膦[Rowsell等人，1978]。然而，没有开发或商业化氧化膦。

通过将浸渍有已知量的化合物的滤纸(1x1cm)放置在测试患者的舌头的背面上，Watson等人[美国专利号4,178,459]对志愿者测试了冷却剂(包括氧化膦)的性能。在30s之后，需要受试者报告存在或不存在冷却效果。以“阈值，μg”记录这些数据，并且其是指在施加至人类志愿者小组的舌头平面上时产生冷却感觉的测试物质的阈值量。6个受试者的(-)-薄荷醇的平均阈值是0.25μg，但在个体灵敏度中存在100倍的变化。舌头表面角化，并且其对温度感知相对不敏感。此外，从舌头的背面检测的凉爽信号可能与味觉、嗅觉、以及其他变量混淆。

如在本文中描述的，在找到最佳候选物以安抚非角化性组织如口、喉咙、食管、以及肛门与生殖器表面，但不存在刺激特性或不期望特性的目标下，发明人已经再次检查了已知的氧化膦化合物。目标是找到能够用作用于药物的单个药剂，而不是用于食物或化妆品的另一药剂的新化学实体。因此，筛选法、生物测定、以及动物模型旨在达到药物终点和应用，以及旨在用于非角化性的靶表面。

令人惊讶地并且出乎意料地，发现了在本文中称为DAPA-2-5的一种化合物具有理想的性能组合。研究中的描述如下：

●DAPA-2-5在NKSE上引起动态冷却感觉而不存在冷不适(研究3)，利用10个其他类似物没有看到该效果。

●DAPA-2-5的动态冷却感觉得到充分的延长[10min至15min]，并且留下残余的抗感受伤害性作用从而具有治疗益处。

●DAPA-2-5抑制红辣椒酱对于志愿受试者的喉咙的刺激作用(研究4)。

●根据DAPA-2-5的TRPM8受体激活效能，尚不能够预测其不同寻常的性能(研究5)，而是必须通过实验才能发现。在EC₅₀[TRPM8效能的测量]和针对大量测试类似物中的NKSE上的抗伤害感受的功效之间，不存在直接关系。

●DAPA-2-5选择性地抑制麻醉动物模型中的热引起的水肿(研究6)，并且其自身不会刺激炎症(研究6)，利用结构上相关的类似物没有看到该效果。

●DAPA-2-5有效地并且选择性地抑制麻醉动物模型中的酸诱导的吞咽(研究8)，该效果明显地将其与其他结构上相关的类似物区别开。

●DAPA-2-5抑制了离体小鼠迷走神经中的辣椒素诱导的去极化(研究9)，以及豚鼠中的柠檬酸酸诱导的咳嗽模型的咳嗽频率(研究10)。

多个测试系统中的这些结果表明，DAPA-2-5表现出不同寻常的选择性药物作用。因此，例如，DAPA-2-5选择性地可用于治疗以下的障碍(例如，疾病)：来自非角化性复层上皮(NKSE)组织的感觉不适、上呼吸消化道不适、口咽不适、食管不适、喉咙刺激、咳嗽、胃灼热、胸痛、肝门与生殖器不适、或非角化性复层上皮(NKSE)组织炎症。

DAPA化合物

本发明涉及特定化合物，其作为称为氧化膦的化合物(其具有以下通式)的组的实例，并且更具体地，称为二烷基-膦酰基-烷烃(在本文中称为“DAPA化合物”)的组的实例(其中，R₁、R₂以及R₃各自是烷基基团)。

(O＝)P R₁R₂R₃

更具体地，本发明涉及特定的二烷基-膦酰基-烷烃，即在本文中称为“DAPA-2-5”的1-二仲丁基膦酰基戊烷。

本发明的化合物也可称为磷酸的衍生物，而不是次膦酸的衍生物，在这种情况下，称为二烷基-磷酰基-烷烃而不是二烷基-膦酰基-烷烃。

DAPA-2-5在室温下是液体，具有～0.85g/cm³的密度以及112-120℃的沸点。

注意，DAPA-2-5的每个仲丁基基团具有手性中心，并且每个手性中心可以独立地是(R)构型或(S)构型。因此，DAPA-2-5具有四种可能的立体异构体：两种旋光立体异构体(即，R,R和S,S)和两种不旋光的内消旋形式(即，R,S和S,R)。除非另外指出，否则提及DAPA-2-5旨在提及四种立体异构体中的任何一种，以及四种立体异构体的任何两种或更多种的任何混合物。

在广泛的研究之后，发明人已经将DAPA-2-5确定为用于治疗由包括例如上呼吸消化道，例如口咽(包括，例如咽)、和上食管表面、以及肛门与生殖器表面的粘膜的非角化性复层上皮(NKSE)引起的感觉不适和炎症的特殊药剂。

如在本文中描述的，对于引起口咽中的局部“动态凉爽”而不存在不适，DAPA-2-5是选择性的并且是理想的。对于口咽/食管不适，该“动态凉爽”是期望的感觉质量[产生凉爽/冷的清新感觉]。此外，其在红辣椒测试中具有良好的活性。其对于热引起的水肿具有抗炎活性，阻碍酸刺激的吞咽作用，并且对抗辣椒素对于离体迷走神经的活性。这些属性使得DAPA-2-5成为减轻由非角化性复层上皮(NKSE)(尤其是口咽膜和食管膜)引起的感觉不适和炎症的理想的活性成分。

DAPA-2-5具有选择性感觉效果和该感觉的局部分布。在动物模型中，其选择性地有效抑制0.1N的盐酸对于咽膜、NKSE表面的刺激作用。当将其递送至人类志愿者的口腔上时，其具有最小的刺激性并且发挥了期望的抗感受伤害性作用。当倾注至体外迷走神经上时，其阻碍了响应于众所周知的感觉刺激物辣椒素的去极化。将其在迷走神经中的接受元件进一步表征为TRPM8(离子通道受体)。

此外，不同于相关类似物，甚至当将剂量增加至8mg/片剂时，DAPA-2-5也不会产生刺痛、不利味道、或者“冰冷”或冷不适。对于喉咙和上食管，DAPA-2-5的活性保持局部化，并且不存在系统冷却(全身冷却)。由于立即开始和动态凉爽感觉，因此具有喉咙不适的个体偏爱DAPA-2-5。将利用其他DAPA化合物(DAPA-1-6、DAPA-1-7、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7)看到的“冰冷”认为太冷，尽管这些化合物对于喉咙是长效的。其他DAPA化合物(DAPA-1-6、DAPA-1-7、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7)的活性扩散到胸骨后面，扩散至胸腔中，这很可能是由于食管内层中感觉元件的激活。

与宽范围的结构类似化合物相比，发现DAPA-2-5在动物模型中具有用于抗伤害感受的期望感觉质量而不存在过多刺激性，其高度有效，具有足够的作用持续时间以成为治疗学上有用的，以及具有抗炎活性。

化学合成

通过以下通用方法制备DAPA化合物：在氮气下，将100mL(23.7g，～200mmol)的仲丁基镁氯化物或溴化物(二异丙基镁氯化物或溴化物)(获得自Acros，以四氢呋喃(THF)中的25％溶液)放置在500mL烧瓶(带有搅拌棒)中。逐滴添加THF中的亚磷酸二乙酯溶液(来自Aldrich,D99234；8.25g，50mL中的60.6mmol)。在约30min之后，将反应混合物温热至沸腾。将反应混合物搅拌另外的30min，随后逐滴添加THF中的适当的正烷基碘化物溶液(来自TCI；20mL中的60mmol)。然后，在室温下将反应混合物搅拌过夜。将反应化合物用水稀释，转移至分液漏斗，用乙酸(～10mL)酸化，并且用醚(ether)萃取两次。将醚层用水洗涤并且蒸发(RotaVap Buchi，浴温40℃)。在高真空下蒸馏浅棕色油。由通过质谱法测定的质量验证的最终产物是无色或微浅黄色的透明液体。

通过该方法制备了以下化合物：

组合物

本发明还涉及包含DAPA-2-5以及药学上可接受的载体、稀释剂、或赋形剂的组合物(例如，药物组合物)。

本发明还涉及组合物(例如，药物组合物)的制备方法，包括使DAPA-2-5以及药学上可接受的载体、稀释剂、或赋形剂混合。

在一个实施方式中，组合物以0.005-2.0％wt/v的浓度包含DAPA-2-5。在一个实施方式中，组合物是液体组合物，并且以0.5-20mg/mL的浓度包含DAPA-2-5。在一个实施方式中，组合物是液体组合物，并且以1-5mg/mL的浓度包含DAPA-2-5。在一个实施方式中，组合物是凝胶组合物，并且以1-20mg/mL的浓度包含DAPA-2-5。

可以在适当的包装和/或适当的容器中提供组合物。例如，组合物可以是包括DAPA-2-5的口服剂型的形式，例如锭剂、果冻杯、可食用膜条(edible film strip)、或口腔崩解片(ODT)。

类似地，可以以携带DAPA-2-5或包含DAPA-2-5的组合物的棉签、擦拭布(wipe)、衬垫、或小毛巾(towellette)(例如，适当地封装在包装中)提供组合物。类似地，例如，可以以贴剂(例如，适用于施加至皮肤的控释贴剂)提供组合物。

类似地，可以以从加压容器递送的雾化喷雾剂提供组合物。类似地，可以以连接至包括DAPA-2-5或含有DAPA-2-5的组合物的贮存器，例如能够递送单位体积(例如，0.05mL至0.15mL)至例如皮肤或粘膜表面的手动启动喷雾器(例如，具有适当小的孔)提供组合物。

在治疗方法中的用途

本发明的一个方面涉及用在治疗(例如，选择性治疗)如在本文中描述的某些障碍(例如，疾病)的方法中的DAPA-2-5。

在药物制备中的用途

本发明的另一个方面涉及DAPA-2-5在制备用于治疗(例如，选择性治疗)，例如治疗(例如，选择性治疗)如在本文中描述的某些障碍(例如，疾病)的药物中的用途。在一个实施方式中，药物包含DAPA-2-5。在一个实施方式中，药物包含配制为具有矿物赋形剂的ODT的DAPA-2-5。

治疗方法

本发明的另一个方面涉及治疗(例如，选择性治疗)如在本文中描述的某些障碍(例如，疾病)的方法，包括：将治疗有效量的DAPA-2-5优选以药物组合物的形式给予需要治疗的患者。

治疗的障碍

在(例如，在治疗方法中应用的、在药物制备中应用的、治疗方法的)一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)以下各项：来自非角化性复层上皮(NKSE)组织的感觉不适、上呼吸消化道不适、口咽不适、食管不适、喉咙刺激、咳嗽、胃灼热、胸痛、肝门与生殖器不适、或非角化性复层上皮(NKSE)组织炎症。

治疗的障碍-来自NKSE组织的感觉不适

在(例如，在治疗方法中应用的、在药物制备中应用的、治疗方法的)一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)来自非角化性复层上皮(NKSE)组织的感觉不适。

如在本文中使用的，术语“感觉不适”涉及刺激、疼痛、痒、或来自非角化性复层上皮(NKSE)组织的感觉迟钝的其他形式。该术语暗示位于NKSE和身体组织中的感觉神经末梢上的伤害感受器的激活，以及由伤害感受器的激活产生的感觉对抗。伤害感受器由例如高温或低温、机械压力、化学品(例如，辣椒素、酸性物等)、损伤、以及炎症介质刺激。可以将降低感觉不适的DAPA化合物(如DAPA-2-5)称为抗感受伤害性药剂。

如在本文中使用的，术语“感觉迟钝”涉及异常感觉，并且除了刺激、痒、以及疼痛之外，包括诸如灼烧、干燥、湿润、发麻的感觉，以及感觉异物存在。

在一个实施方式中，NKSE组织位于以下(表面)之上：

-上呼吸消化道表面；

-口腔表面；

-呼吸组织表面；

-鼻膜表面；

-口咽表面(包括，例如咽表面)；

-食管表面；或

-肛门与生殖器表面。

在实施方式中，NKSE组织位于上呼吸消化道表面上，位于口腔表面上，位于口腔的内层上，或嘴唇的内部，位于呼吸组织表面上，位于呼吸道上皮表面上，位于鼻膜表面上，位于鼻膜的管腔内层(lumenal lining)上。

在实施方式之一中，NKSE组织位于口咽表面上，或咽表面上。在实施方式之一中，来自NKSE组织的感觉不适由以下引起：吞咽困难、胃内容物反流(例如，咽喉反流(喉咽反流，laryngopharyngeal reflux))、打嗝、咽炎、扁桃体炎、粘膜炎、过敏症、咳嗽、或咽表面对于刺激物的超敏反应。

在实施方式之一中，NKSE组织位于食管表面上，并且位于食管表面上的感觉不适由胃内容物反流(例如，胃食管反流)引起。

治疗的障碍-局部不适

在(例如，在治疗方法中应用的、在药物制备中应用的、治疗方法的)一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)上呼吸消化道不适。

在一个实施方式中，上呼吸消化道不适由气道或咽中的过多粘液和炎性渗出物(例如，与鼻炎、鼻窦炎、哮喘、阻塞性肺疾病等有关)引起。

在一个实施方式中，上呼吸消化道不适与勉力呼吸(labouredbreathing)、呼吸困难、打鼾、或睡眠呼吸暂停有关。

在一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)口咽不适。

在一个实施方式中，口咽不适与胃内容物反流有关。

在一个实施方式中，口咽不适与咽喉反流有关。

在一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)食管不适。

在一个实施方式中，食管不适与胃内容物反流有关。

在一个实施方式中，食管不适与胃食管反流有关。

在一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)喉咙刺激。

在一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)咳嗽。

在一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)胃灼热。

在一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)胸痛。

在一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)肛门与生殖器不适。

治疗的障碍-NKSE组织炎症

在(例如，在治疗方法中应用的、在药物制备中应用的、治疗方法的)一个实施方式中，治疗是治疗(例如，选择性治疗)非角化性复层上皮(NKSE)组织的炎症。

治疗

如在本文中使用的，在治疗障碍的上下文中，术语“治疗”通常涉及人类或动物(例如，在兽医应用中)的治疗，其中，达到了一些期望的治疗效果，例如，抑制障碍的发展，并且包括减缓发展的速度、暂停发展的速度、减轻障碍的症状、改善障碍、以及治愈障碍。治疗作为预防措施(即，预防)也包括在内。例如，运用到尚未患有障碍，但有发展障碍风险的患者，包含在术语“治疗”内。

药理术语中的术语“选择性”涉及在结构上相关的同源物的组中表现出将其与其他类似物区别开的定性或定量性能的分子。

如在本文中使用的，在治疗具有“动态凉爽”的排热感觉的障碍的上下文中，术语“选择性治疗”涉及治疗(例如，抑制)来自非角化性复层上皮(NKSE)的感觉不适，而不存在刺痛、刺激、或其他不利影响[例如，口腔中的使人不愉快的味道]的问题。

如在本文中所用的，术语“治疗有效量”涉及化合物、或包含化合物的物质、组合物或剂型的量，当根据期望的治疗方案给药时，这对产生一些期望的治疗效果有效，与合理的效益/风险比相当。

联合疗法

术语“治疗”包括治疗和疗法的联合，其中，例如，依次地或同时地联合了两种或更多种的治疗或疗法。例如，本文中描述的化合物也可以例如与其他药剂联合用于联合疗法。

本发明的一个方面涉及与一种或多种(例如，1、2、3、4种等)另外的治疗剂联合的DAPA-2-5。具体的组合将由医生决定，该医生将使用他的公知常识和熟练从业者已知的剂量方案来选择剂量。

另外的治疗剂的实例包括：抗炎甾体剂(anti-inflammatory steroidalagents)、抗炎止痛剂、抗组胺剂、拟交感神经兴奋胺血管收缩剂(sympathomimetic amine vasoconstrictor)、局部麻醉剂、抗生素、抗痤疮剂、外用维A酸(局部维A酸，topical retinoid)、用于咳嗽的药物、用于粘液分泌的药物、用于吞咽困难的药物(包括香料)、用于生殖器疣的药物、用于皱纹的药物、用于老化皮肤的药物、抗痔剂、用于外阴瘙痒的药物、护肤液、以及用于治疗角质层分离(keratolysis)的药剂。

甾体抗炎剂的实例包括：氢化可的松、氯倍他索、丙酸氯倍他索、乌倍他索、泼尼松龙、地塞米松、曲安奈德、氟轻松、醋酸氟轻松、醋酸氢化可的松、醋酸泼尼松龙、甲泼尼龙、醋酸地塞米松、倍他米松、倍他米松戊酸酯、氟米松、氟替卡松、氟米龙、以及丙酸倍氯米松。

抗炎止痛剂的实例包括：水杨酸甲酯、水杨酸羟乙酯、阿司匹林、吲哚美辛、双氯芬酸、布洛芬、酮洛芬、萘普生、普拉洛芬、非诺洛芬、舒林酸、芬氯酸、环氯茚酸、氟比洛芬、芬替酸、丁苯羟酸、吡罗昔康、以及喷他佐辛。

抗组胺剂的实例包括：盐酸苯海拉明、水杨酸苯海拉明、苯海拉明、马来酸氯苯那敏、以及盐酸异丙嗪。

拟交感神经兴奋胺血管收缩剂的实例包括：盐酸去氧肾上腺素、羟甲唑啉、萘甲唑啉，以及用于鼻血管收缩药活性(鼻解充血药活性，nasaldecongestant activity)的其他咪唑啉受体激动剂。

局部麻醉剂的实例包括：盐酸奴白卡因、地布卡因、盐酸利多卡因、利多卡因、苯佐卡因、盐酸丙吗卡因、丁卡因、盐酸丁卡因、盐酸羟基普鲁卡因、马比佛卡因(甲哌卡因，mepivacaine)、以及盐酸哌罗卡因。

用于咳嗽的药物和用于粘液分泌的药物的实例包括：右美沙芬、氢溴酸右美沙芬、可待因、二氯非尼拉敏(dichloropheniramine)、愈创甘油醚、以及苯酚。

护肤液的实例包括：保湿剂、润肤剂、以及防腐剂这三类。诸如尿素、甘油、以及α-羟基酸的保湿剂帮助从空气中吸收水分并且将其保持在皮肤中。诸如羊毛脂、矿物油、以及凡士林油的润肤剂帮助填充皮肤细胞之间的空间，使皮肤润滑和平滑。防腐剂帮助防止润湿露中的细菌生长。润湿露可包含的其他成分可以包括：维生素、矿物、植物提取物和香料。

抗生素的实例包括：新霉素、红霉素、以及抗病毒剂二十二醇

局部抗痤疮剂的实例包括：过氧苯甲酰、间苯二酚、单乙酸雷琐辛(resorcinol monoacetate)、苯酚、以及水杨酸。

外用维A酸的实例包括：阿达帕林和异维A酸(Retin-A、Differen、以及Tazorac)。角质层分离剂(keratolytics)的实例包括：α-羟基酸、乙醇酸、以及水杨酸。

试剂盒

本发明的一个方面涉及包含以下的试剂盒：(a)DAPA-2-5，或包含DAPA-2-5的组合物，例如，优选地，在适当的容器中和/或用适当的包装提供；以及(b)使用说明，例如，关于如何给予化合物或组合物的书面说明。

书面说明也可以包括活性成分适合治疗的适应症的列表。

书面说明(例如，小册子或包装标签)可以包括剂量和给药说明、制剂组合物(组成)的细节、临床药理学、抗药性、药代动力学、吸收、生物利用度、以及禁忌征候。

诊断方法

还可以将DAPA-2-5用于胸痛的鉴别诊断。更具体地，还可以将DAPA-2-5用于区别心源性疼痛与非心源性疼痛。现有技术未知该类型的简单诊断工具。能够将口服给予(例如，以锭剂或口腔崩解片(ODT))的DAPA化合物如DAPA-2-5或DAPA-2-7用于提供胸痛的鉴别诊断，例如用于将非心源性胸痛(NCCP)与心源性疼痛区别开。

给药途径

例如，如在本文中描述的，可以将DAPA-2-5或含有DAPA-2-5的药物组合物适当地局部给药给受试者。

如在本文中使用的，术语“局部施加”是指递送至与空气接触的身体的表面上，所述表面包括皮肤，肛门与生殖器表面，眼眶、嘴唇、鼻子、以及肛门的移向上皮表面，以及呼吸消化道(aerodigestive tract)(鼻膜、咽和食管表面)，呼吸道(respiratory tract)，以及胃肠道的管腔。

在(例如，在治疗方法中应用的、在药物制造中应用的、治疗方法的)一个实施方式中，治疗是通过局部给药治疗。

在一个实施方式中，治疗是通过局部给药给如在本文中描述的非角化性复层上皮(NKSE)组织来治疗。

例如，在一个实施方式中，NKSE组织位于以下表面之上：

-上呼吸消化道表面；

-口腔表面；

-呼吸组织表面；

-鼻膜表面；

-口咽表面(包括，例如咽表面)；

-食管表面；或

-肛门与生殖器表面。

例如，在一个实施方式中，NKSE组织位于以下表面之上：

-口咽表面(包括，例如咽表面)；

-食管表面；或

-肛门与生殖器表面。

受试者/患者

受试者/患者可以是哺乳动物，例如，有袋动物(例如，袋鼠、袋熊)、啮齿动物(例如，豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如，小鼠)、兔类动物(例如，兔子)、鸟类(例如，鸟)、犬齿类(例如，狗)、猫科动物(例如，猫)、马科动物(例如，马)、猪(例如，小猪)、羊(例如，绵羊)、牛族动物(例如，母牛)、灵长类动物、猿类(例如，猴子或猿)、猴子(例如，绒猴、狒狒)、猿(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)、或人类。

在一个优选的实施方式中，受试者/患者是人类。

制剂

尽管DAPA-2-5可以单独给药，但优选其作为药物制剂(如组合物、制剂(制备品)、药物)给出，所述药物制剂包含DAPA-2-5连同一种或多种本领域技术人员熟知的其他药学上可接受的成分，包括但不限于，药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、辅助剂(佐剂)、填料(填充剂)、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如，润湿剂)、掩蔽剂、着色剂、调味剂、以及增甜剂。制剂可以进一步包含其他活性剂。

因此，本发明进一步提供了如以上描述的药物组合物，以及制备如以上描述的药物组合物的方法。如果配制成离散单元(例如，擦拭布、衬垫、小毛巾等)，每个单元包含预定量(剂量)的化合物。

如在本文中使用的，术语“药学上可接受的”，涉及化合物、成分、物质、组合物、剂型等，在可靠的医学判断的范围之内，它们适用于与所讨论的受试者(例如，人)的组织接触，而没有过多的毒性、刺激、过敏性反应，或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相应。在与制剂的其他成分相容的意义上，每种载体、稀释剂、赋形剂等也必须是“可接受的”。

合适的载体、稀释剂、赋形剂等可以在标准药物教科书中找到，例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences,18th edition,Mack PublishingCompany,Easton,Pa.,1990；以及Handbook of Pharmaceutical Excipients,5th edition,2005。

制剂可以通过任何药学领域中熟知的方法来制备。这类方法包括将化合物与构成一种或多种辅助成分的载体结合(association)的步骤。一般而言，制剂通过均匀并且紧密地将化合物与载体(例如，液体载体、细碎的固体载体等)结合以及如有必要随后使产物成型来制备。

制剂可以适当地为以下形式：液体、溶液(例如，含水的、无水的)、悬浮液(例如，含水的、无水的)、乳剂(例如，水包油型、油包水型)、酏剂、糖浆、干药糖剂、漱口水、滴剂、片剂(包括，例如，包衣片剂)、颗粒剂、粉剂、锭剂、软锭剂(pastille)、胶囊(包括，例如，硬和软明胶胶囊)、扁囊剂、丸剂、安瓿、大丸药(boluses)、栓剂、阴道栓剂(pessaries)、酊剂、凝胶、糊剂、软膏、乳膏剂、洗剂、油、泡沫剂、喷雾剂、雾剂(mists)、或气雾剂。

剂量

本领域技术人员将理解的是，适当剂量的DAPA-2-5以及包含DAPA-2-5的组合物可以在患者之间变化。确定最佳剂量通常将涉及平衡治疗益处对任何风险或有毒副作用的水平。选择的剂量水平将取决于多种因素，包括但不限于DAPA-2-5的活性，给药途径，给药时间，治疗的持续时间，联合使用的其他药物、化合物、和/或物质，障碍的严重性，以及患者的物种(种族)、性别、年龄、体重、状况(病症)、一般健康状况、以及先前的病史。DAPA-2-5的量和给药途径最终将由医师、兽医或临床医师判断决定，但是一般而言，将选择剂量以在作用部位达到实现所期望的作用而不会造成实质性损害或有害副作用的局部浓度。

贯穿整个治疗过程，可以以一个剂量，优选在“按照需要”或必要的基础上完成给药。确定最有效的方式和给药剂量的方法对于本领域技术人员而言是熟知的，并且将随着用于治疗的制剂、治疗的目的、治疗的一种或多种靶细胞、以及治疗的受试者而变化。利用由患者、治疗医师、兽医、或临床医生选择的剂量水平和模式，可以进行单次或多次给药。

上呼吸消化道

口腔包括用于咀嚼、品尝、润滑、以及推动食物团进入咽中的专门结构如牙齿、齿龈、舌头、以及唾液腺。这是体内最复杂的肌肉反射活动之一，并且需要至少6个脑神经和25个肌肉群的协调。由于口能够耐受热液体(当放置在皮肤上时会疼痛)，因此在口腔中热感觉不是高等级保护性反射。另一方面，冷却液体对于调节口渴是重要的，并且冷却的检测具有生存价值。Eccles等人[Cold pleasure.Why we like ice drinks,ice-lolliesand ice cream.Appetite,71,357-60,2013]近来就冷却液体、冰淇淋、正增强(积极增强，positive reinforcement)、以及口渴抑制的关系进行了概念综述。感觉神经密切监视口腔和咽连接处的温度。当外部环境温度高时，饮用冷却液体立刻令人愉悦，并且缓解了口渴、干燥、以及不适。

咽是从鼻和口腔通向喉和食管的锥形通道。咽是喉咙的一部分，是描述颈和喉周围的身体区域的不精确术语。将咽分为三个区域：鼻、口、以及喉。也称为咽之鼻部的鼻咽位于鼻腔的鼻后孔后面以及软腭的水平之上。口咽从软腭(腭咽)延伸至舌骨的水平。咽喉从舌骨延伸至环状软骨的下边缘。咽表面利用非角化性复层上皮(NKSE)作内层。

可以将口咽进一步分为上部区域和下部区域，正中央是例如在Daniel等人[“Pharyngeal dimensions in men and women”,Clinics(SaoPaulo)62,5-10,2007]的磁共振成像研究中示出的所谓的下软腭口咽(LRO)。咽是梯形倒置漏斗形管，并且LRO是具有面积约1cm²的最小横截面的区域，所述最小横截面等于20％的US 25美分硬币(quarter coin)或25％的欧元硬币。舌根处的咽表面和约3cm²至5cm²的面积的LRO周围的咽壁是用于针对本文中描述方法的药物递送的期望靶的一个部分，第二部分是上食管表面。

口咽内腔是食物、液体、以及空气的管道，并且是消化系统和呼吸系统的部分，并且还将其称为呼吸消化道部分(由国际卫生术语标准开发组织定义的解剖学术语)。每天通过口咽的输送量是令人惊骇的。平均每天，成人呼吸12,000L的空气，饮用2L的流体，分泌1L的唾液，并且吃2kg的食物。这些活动是恒定的，在醒着的时间，每分钟约15次呼吸和1次吞咽动作。生物体要生存，必须协调这种输送流，使得食物和液体向下进入食管而不是进入气道，而空气直接进入气道。例如，当和软饮料一起进食大披萨饼时，该系统的效率是明显的并且不证自明。没经过多少忙乱(with a minimum of fuss)，就完成了从口至胃的物质输送。

脑是咽的交通协调者，并且受动器是横纹肌和平滑肌。至少6个脑神经和25块肌肉参与了吞咽。对于固体，将食物咀嚼，混合并且用分泌的唾液润滑，然后，将食团随后快速向下推向食管。当食团以约35cm/s向下输送至咽时，吞咽的口咽阶段发生在一眨眼的毫秒间。支配口和延髓舌(rostral tongue)中的该过程的感觉信号来自三叉(5^th)神经和舌下(8^th)神经分支的传入神经。来自口咽和舌头的后表面的传入信号主要来自舌咽神经(9^th)。来自喉咽的信号通过迷走神经(10^th)。吞咽和咳嗽(当物质走错路径时)是由用以引导输送负载至它们的正确目的地的脑神经和肌肉的协调反射。

上呼吸消化道(口腔和鼻腔、咽、上气道、以及食管)的上皮(鼻、口、喉、上食管、以及支气管上皮)的神经元感受野主要由5^th、9^th以及10^th脑神经推动。这些表面主要由粘膜，即，非角化性复层上皮(NKSE)作内层。这些细胞具有高更新速率(近似几天)并且对于损伤敏感。例如，当在咽中存在固体或液体的混乱输送时，酸和胃蛋白酶，或来自肺的渗出物或痰、呼吸消化道中的堆积物将激活脑神经并且引起刺激、痒、疼痛、以及炎症。咽障碍的特征性表现是球感(globus)(喉咙中肿块的感觉)，吞咽中的困难(吞咽困难)、嘶哑、疼痛、痒、咳嗽、和红，以及咽粘膜肿胀。

咽具有排列为虎钳并且用以获取口咽内容物以及将食团推进食管中的强缩肌。解剖(结构)就像棒球运动中的第一垒手手套。在该系统中存在两个重要的瓣膜：吞咽过程中关闭的会厌，以及松弛以使内容物进入食管然后关闭以阻止反流的上食管括约肌(UES，或环咽肌(cricopharyngeusmuscle))。咽收缩冲洗并且倒空内腔碎片，并且通过产生负压而有助于从鼻腔和鼻咽吸取内容物。良好调节的(well-toned)咽肌对于保持气道通畅，允许平稳气流也是重要的，并且功能障碍将引起打鼾和睡眠呼吸暂停。

局部抗感受伤害性药剂在其中可具有效用的上呼吸消化道障碍的实例是：

咽炎：最常由病毒和细菌试剂引起的咽内层炎症。密切相关的状况是扁桃体炎[Bathala,S.and Eccles,R.A review on the mechanism of sore throatin tonsillitis.Journal of Laryngology and Otology,127:227-32,2013]。化学污染物如香烟烟雾，也能够直接刺激和损害粘膜。咽炎和扁桃体炎的主要症状是刺激、痒、以及疼痛或“喉咙痛”。延长的咽刺激也可导致表现为持续咳嗽(当其存在超过8周时，称为慢性咳嗽)的慢性超敏综合征。本文中描述的药剂将减轻咽炎不适，并且潜在地减少炎症。

吞咽困难(吞咽功能障碍)：老年人、中风患者、具有帕金森病的个体、以及具有头颈癌的个体的常见苦恼。口咽性吞咽困难是应用于其中食物的食团不正确地从咽传递至食管的状况的术语。当颗粒进入气道时，结果是造成吸入性肺炎，其成为照顾这类受害者的重大经济负担。已经表明，用喷雾器给予的感觉刺激物如黑胡椒、辣椒素类物质(红辣椒的活性成分)，以及用鼻管给予的薄荷醇溶液缩短了老年人的吞咽反射潜伏期，并且因此可以用于降低吸入性肺炎的风险[Ebihara et al.,Sensory stimulationto improve swallowing reflex and prevent aspiration pneumonia in elderlydysphagic people”,J.Pharmacol.Sci.,115,99-104,2011]。当进入气道的物质来自食管而不是口腔时，将相关状况称为吸入性肺炎(aspirationpneumonitis)。

后鼻滴涕(鼻后滴漏，post-nasal drip)：其中存在从鼻腔和鼻咽的粘膜进入咽的分泌物增加的状况。这些分泌物可以包含炎性渗出物，并且可以由感染或鼻膜的过敏症(例如，过敏性鼻炎和鼻窦炎)引起。分泌物的增加引起喉咙不适、疼痛、痒、咳嗽、以及受损气流的感觉。通过减轻咽刺激的感觉，递送至口咽粘膜的抗炎性或抗感受伤害性药剂将对这种状况具有治疗价值。

咽喉反流疾病(喉咽反流疾病，LPR)和食管反流疾病：其中酸和胃蛋白酶从胃流回至咽的状况。通常，适当的吞咽以及收缩的上食管括约肌(UES)阻止了回流，但当该系统受损时，酸和胃蛋白酶进入咽表面并且甚至能够进入咽鼓管(Eustachian tube)和鼻窦。结果是嘶哑、疼痛、喉水肿、以及持续清嗓的综合病征。喉的检查表明了围绕喉的红和肿胀粘膜。减少表面炎症的感觉药剂很可能对于治疗LPR是有用的。

酸反流疾病：类似于LPR的状况[Oustamanolakis et al.,Dyspepsia:Organic vs functional.J.Clin.Gastroenterol.,46,175-190,2012]。该状况由上腹部的诸如以下的症状组成：饱胀、不适、早饱、胃气胀、胃灼热、打嗝、恶心、呕吐、或疼痛。将上消化道障碍进一步细分为“器质性”和“功能性消化不良”。器质性消化不良(OD)例如由以下引起：胃溃疡；胃食管反流疾病(GERD)；巴雷特食管、胃或食管癌；胰腺或胆道疾病；对食物或药物的不耐性；以及感染或系统疾病。由于病理学的客观证据不容易鉴别，而症状类似于OD，因此包括NERD的功能性消化不良(FD)更复杂。这些状况的处理包括：抑酸药物、根除幽门螺旋杆菌(H.pylori)的抗生素、促胃肠动力药、基底松弛药(fundus-relaxing drugs)、抗抑郁剂、以及心理干预。

上消化道中的上腹部不适：包括称为“胃灼热”和作为酸反流障碍的主要症状的非心源性胸痛的症状的状况。胃灼热的疼痛和不适主要是食管起源。非心源性胸痛是食管起源的疼痛，而不是由心功能障碍引起。将这些状况的一些症状描述为胃灼热(在进食之后发生并且持续几分钟至几小时的恰好在胸骨后面的胸部的燃烧感觉)。胸骨下的燃烧感觉往往会辐射至颈，一波接一波到来，并且感觉其更像燃烧而不是疼痛。也可以将胃灼热描述为胸痛，并且通过呈现促进胃食管回流的姿势(如俯身或躺在某人背上)而相应地扩大。在中线而不是胸部的侧面上感觉到胃灼热。其他感觉包括由于在口和喉咙中的发酵、酸性或咸味流体所产生的咽喉上或咽喉后面的燃烧，难以吞咽并且感觉食物“粘”在胸部或喉咙的中间。胃灼热和酸反流疾病可以引起慢性咳嗽、喉咙痛、或慢性嘶哑。

酸性和消化酶如胃蛋白酶过多反流至食管和咽中产生在GERD、咽喉反流疾病(LPR)、非侵蚀性反流疾病(NERD)、非心源性胸痛(NCCP)、以及功能性消化不良中看到的不适。

与盐水灌注交替地使用0.1N HCl灌注食管的激发试验(伯恩斯坦试验)可用于引起易感个体的胃灼热，以及证明症状的食管起源，例如，以确定是否胸痛由酸反流引起。对于该试验，将细管通过一个鼻孔，向下至喉咙后面，并且放置在食管的中间。将0.1N的盐酸溶液和生理盐溶液通过导管以例如8mL/min的速率交替灌注10分钟并且灌注在食管中。患者没有觉察到所灌注的溶液。如果用酸灌注引起患者通常的疼痛，而盐溶液的灌注没有产生疼痛，那么结论是：患者的疼痛与酸反流有关。使用该客观评价方法，在7％的正常受试者、17％的巴雷特食管患者、32％的GERD患者、以及58％的NERD患者中记录了对于HCl灌注的不适抱怨。在实施例中，动物模型用于证明DAPA-2-5作为针对0.1N盐酸的刺激性影响的抗感受伤害性药剂。

胸痛和胸痛的鉴别诊断

有时伴随有心悸、发汗、呼吸急促、以及窒息感的胸痛是引起患者看医师或寻求进入急诊科的常见症状。对于检查患者，医师最优先的是确定是否存在任何危及生命的心血管状况。如果必要，由于检查诊断如血清酶测定、心电图、以及关于心功能的放射性示踪剂研究，因此胸痛入院可能是昂贵的。已经注意到，具有胸痛的患者入院的平均费用是US$7340[Coley et al.,Economic burden of not recognizing panic disorder in theemergency department.J.Emergency Medicine 36:3-7.2009]。每年，大约640万美国人因胸痛和相关症状的抱怨就诊急诊科，但仅小百分比(个体)表现出潜在的心血管病因，其他则具有非心源性胸痛(NCCP)。胸痛是急诊科就诊的第二最常见原因，第一原因是胃痛和腹痛[参见，例如，Pitts等人的表8，National Hospital Ambulatory Medical Care Survey:2006emergency department summary”,National Health Statistics Reports,Vol.7,pp.1-38,2006]。

存在NCCP的多种原因，包括胸肌拉伤、肺部疾病、消化不良、惊恐性障碍，并且最常见的是食管功能障碍如GERD[Amsterdam et al.,Testing of low-risk patients presenting to the emergency department with chestpain:a scientific statement from the American Heart Association.Circulation,122:1756-1776,2010]。标准质子泵抑制剂药物如艾美拉唑(esomeprazole)在抑制不明原因的胸痛方面具有非常有限的功效，并且药物作用的开始需要至少几天时间[Flook et al.,Acid-suppressive therapy with esomeprazole forrelief of unexplained chest pain in primary care:a randomized,double-blind,placebo-controlled trial,Amer.J.Gastroenterol.,108:56-64,2013]。

将NCCP与心源性疼痛区别开的简单试验可以有助于胸痛的鉴别诊断，允许患者的治疗分类，并且改善减少护理费用的资源配置。在本文中描述的案例研究中，老年受试者打了一轮激烈的高尔夫球，然后饮食过多，并且开始经历胸部的胸骨后区和左胸肌区的疼痛。他服用了Alka-Seltzer和抗酸剂，并且试图躺下，但疼痛没有消失。在做出求救急救服务的决定之前，他吞咽了每片包含1.5mg DAPA-2-5的三片片剂，并且令人惊讶地，他的胸痛不适在5min内得到了减轻。然而，该显著结果与DAPA-2-5的药理学(即，在上消化道的脑神经末梢上施加抗感受伤害性作用)一致

在此，提出递送至上消化道表面上的活性成分如DAPA-2-5对于减轻胸痛可以是有用的，并且有助于胸痛的鉴别诊断。抵消酸对于咽和食管的影响的药剂如DAPA-1-7、DAPA-1-8、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7也可以用于该目的，这是因为它们对于NKSE的神经末梢是抗感受伤害性的，并且将对抗NCCP。因此，可以将这类药剂用于胸痛的短期处理和鉴别诊断。

有效用于上腹部不适和胸痛的药剂，对于诸如恶心和呕吐(例如由晕动病(motion sickness)和采用癌症化疗剂进行治疗所致)的病状也将有用。这是因为，内脏传入信息的中枢整合在脑干核如前庭核以及孤束核汇合。因此，冷却食管内层表面的药剂可发送信号至脑干，其将缓解晕动病以及其他恶心呕吐病症的症状。

气道疾病

气道疾病如哮喘、慢性阻塞性肺疾病、以及支气管炎与气道粘膜炎症和渗出物的产生增加有关。渗出物如粘液通常通过吐痰或吞咽除去。在晚上和睡眠期间，咽肌松弛而抑制了清除，使得渗出物可能堆积在口咽中，并且引起窒息和作呕。抵消口咽和气道不适的感觉药剂对于这类气道疾病将是有用的。

在本文描述的研究中，表明了倾注至离体迷走神经上的DAPA-2-5直接抑制了辣椒素诱导的去极化。因此，表明了递送至9^th和10^th传入神经的药剂具有抵消口咽和上食管不适的效能。令人惊讶地，DAPA-2-5还在热损伤模型中证明了抗炎活性，并且因此可能在治疗NKSE的炎症中具有价值。

已经存在利用感觉药剂治疗上呼吸消化道的有限次尝试。已经提出使用感觉药剂如黑胡椒、薰衣草、辣椒素、衣壳(capsid)、以及薄荷醇治疗老年人的吞咽困难问题[Ebihara等，2011]。将这些药剂以雾化液体悬浮液施加，或以通过鼻管递送至咽的液体施加。用于增强清除反射(clearancereflexes)的确切感觉事件没有被限定。有效的薄荷醇和薄荷油糖果如也是口腔和鼻腔中的感觉刺激物。有时还将各自称重约2.7g至3.4g，并且在糖-染料基质中包含5mg、7mg或达到最大10mg的薄荷醇的薄荷醇锭剂用作口服刺激物，但由于涩味而具有有限的功效。针对用于治疗喉咙不适和气道刺激，已经描述了某些N-烷基-羰基-氨基酸酯[Wei,US 20110082204 A1,2011和US 084226463，2013年4月23日]。具有期望性能的化合物是(R)-2-[((1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己烷-羰基)-氨基]-丙酸乙酯和[((1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己烷羰基)]-氨基-乙酸异丙酯]。

在本发明的上下文中，目标是：

(a)定义将抵消不适(刺激、痒、以及疼痛)的具有上呼吸消化道膜中的确切抗感受伤害性感觉的活性化合物。这种感觉本身将不会产生不适，而是产生类似于当吞咽冰淇淋时的称为“动态凉爽”的感觉。对于每种测试的化合物，要避免的感觉是称为“冷不适”的状况。

(b)开发用于将活性化合物局部递送至5^th、9^th、以及10^th脑神经的一种或多种的神经末梢的靶上的局部制剂。

(c)定义具有开始快(小于10s)和长持续时间(有效持续至少几小时)的药物作用，其利用能够基于“根据需要”基础(必要时或p.r.n.)的剂量计划表，并且因此允许患者再次控制感觉不适。理想地，在每次给予小于5mg的单位剂量下，活性化合物是有效的。

(d)定义具有对于上皮组织的抗炎作用的另外益处的活性化合物。

利用包含DAPA-2-5，例如1mg至5mg的DAPA-2-5的制剂，满足了这些目的。

气道粘液和炎性渗出物的清除

气道分泌物包括粘液、粘液质、以及痰。粘液是由气道内层产生的异质性、粘性、粘弹性凝胶。其主要是水并且包含称为粘蛋白的高分子量粘液糖蛋白。粘液质来自针对炎症的希腊语，并且包含粘液连同炎症细胞、细菌、以及碎片。痰是咳出的粘液质并且包含唾液和其他液体。在气道疾病如支气管炎、支气管扩张、一些形式的哮喘、囊性纤维化、以及感染中，粘液的分泌过多以及粘液质的产生是主要的病理生理事件，并且增强分泌物的清除是治疗目标。

在针对具有气道疾病的患者的DAPA-2-5临床试验中，药物功效的关键测量是：

功能性咳嗽指数＝咳出的分泌物[mg]/固定观察时间间隔的咳嗽次数

时间间隔可以是早晨醒来之后的3h，或24h(如果资源可用)。由于支气管分泌物堆积过夜，因此早上取样时间是重要的。可以容易地收集、称重痰液，并且针对固体、蛋白质、炎症细胞、或粘蛋白对其进一步分析。这类方法对于本领域是众所周知的。为了进一步评估DAPA-2-5治疗的功效，在临床试验阶段期间可以给予生命质量问卷。

DAPA-2-5给药方案可以是：早上第一件事情是服用各自1.5mg的两个片剂，白天在“按照需要”的基础上服用两片，在晚餐之后服用两片，并且在入睡之前服用两片。教导受试者感觉粘液/粘液质堆积物的循环时间，例如每15min、30min等，并且呈现姿势，例如手在大腿上并且俯身以有效地咳嗽，即咳出(吐痰)。用自动记录装置监控咳嗽频率，并且收集痰液。还可以记录针对肺功能的适当测试例如FEV1以确定是否改善了通气。

用以促进通过咳嗽有效清除的药物设计理念是新颖的。作用机理基于药物抑制无痰干咳(non-productive cough)[抑制9^th和10^th神经中的伤害感受]的抗感受伤害性作用，而不存在对于机械性刺激感受器敏感性的药物作用。在该药物作用下，患者能够“更好地感觉”喉附近的气道分泌物的堆积，以在喉咙中具有较小的刺激，以控制咳嗽刺激物，并且更有效地咳出。在临床试验中，功能性咳嗽指数数值增加，并且QOL指数改善。患者可以具有来自较好的气道清除和较少的无痰干咳的改善的治疗益处。

靶向局部递送至特定位置上

为了研制用于局部递送至咽表面和食管表面的药物，需要仔细理解靶组织和组织环境的动力学。如果冷却成分仅是针对牙膏和口香糖，那么用唾液溶解成分，并且将其递送至5^th神经[三叉神经，其使舌头和口腔粘膜受神经支配]舌分支的神经末梢是足够的。相比之下，咽、喉、以及食管的神经元感受野连接至9^th[舌咽神经]、10^th[迷走神经]的传入神经以及脊髓传入神经，并且其具有不同的解剖学。

口咽是舌根处的拱形结构，中间具有悬雍垂(uvulva)[或葡萄]挂。称为咽喉的前柱(anterior pillars of fauces)的拱形底部对于冷感觉尤其敏感。如果将冷金属探针放置在人类受试者的该位点，则会引起冷却感觉和快速吞咽动作[Kaatzke-McDonald,E.et al.The Effects of Cold,Touch,andChemical Stimulation of the Anterior Faucial Pillar on Human Swallowing.Dysphagia 11:198-206,1996]。咽表面和喉表面受9^th和10^th脑神经的神经末梢密集地神经支配[Mu and Sanders.Sensory nerve supply of the humanoro‐and laryngopharynx:a preliminary study.The Anatomical Record,258,406-20,2000]。在舌头的舌神经中发现了TRPM8免疫反应性纤维[Abe,J.etal.TRPM8protein localization in trigeminal ganglion and taste papillae.BrainResearch.Molecular Brain Research,136:91-8,2005]，但其在口咽的边缘处，以及在喉中而不是会厌中尤其丰富[Sato,T.et al.The distribution oftransient receptor potential melastatin-8in the rat soft palate,epiglottis,andpharynx.Cellular and Molecular Neurobiology,33:161-5,2013]。期望的药物靶是9^th和10^th神经的感受野。

喉咙是描述围绕喉的身体区域的术语。内在地，相关结构是分为三个区域：鼻、口、以及喉的咽。也称为咽之鼻部的鼻咽位于鼻子后面以及软腭的水平之上。口咽从软腭(腭咽)延伸至舌骨的水平。咽喉处于喉后面的空间中，并且从舌骨延伸至环状软骨的下边缘。口咽和喉咽是连续漏斗形倒置梯形管[Daniel等，2007]，并且总表面积是约10cm²至15cm²。

用于药物递送的有利的靶是软腭上、咽喉柱上、以及横向口咽壁上的口咽的喙表面。第二靶位是上食管的内腔。为了达到上食管内层，制剂必须通过上食管括约肌，而不在咽喉中长时间停留。

从舌头、口咽、以及咽喉的后表面至脑干的传入信号主要来自9^th(舌咽神经)和10^th(迷走神经)脑神经，几个纤维来自7^th(面部)脑神经。来自感受野的传入神经协调清空咽的清除反射，并且保护气道免于进入液体和固体。对于上食管，神经支配来自迷走神经和脊髓传入神经。用于药物递送的靶主要是9^th和10^th脑神经，并且在较小程度上是上食管的7^th神经和脊髓传入神经的感受野。

当食团从口移动至食管时，吞咽的口咽阶段发生在毫秒内的眨眼间。如通过激光多普勒超声或X射线视频荧光照相术测定的输送时间(transittime)是约35cm/s[Sonomura et al.,Numerical simulation of the swallowingof liquid bolus.J.Texture Studies 42:203-211,2011]。因此，难以递送(涂覆上)，并且将感觉药剂保留在口-咽喉的表面上。活性成分不能够以固体颗粒递送，这是因为其将产生刺激并且引起咳嗽，因此以液体、喷雾、或唾液中的溶解物递送是理想方法。

在本申请的单独部分中进一步描述了局部药物递送的方法。

作用开始、持续时间和递送时间表

如在本文中预期的，递送的用于治疗的药剂应当具有作用快速开始，例如小于10s并且不超过2min的感觉效果。效果应当有效持续至少一小时并且优选更长，否则患者将必须反复施加药物以获得减轻。优选地，应当存在活性成分的“惊喜效果(wow effect)”，以刺激感觉事件。患者应当能够鉴别该“惊喜效果”，并且在“按照需要”(p.r.n.)基础上使用ODT、液体、或喷雾。在本发明的上下文中，将“惊喜效果”称为“动态凉爽”。在作用的快速开始下，应当能够减轻患者的咽喉不适和上食管不适，并且该减轻将进一步减少与喉咙不适有关的心理因素(例如，焦虑)。这些目标由DAPA-2-5实现。

活性成分的选择：分子靶

存在普遍的观点：称为TRPM8受体的离子通道受体是响应感觉/冷却剂如薄荷醇和icilin(1-[2-羟基]-4-[3-硝基苯基]-1,2,3,6-四氢嘧啶-2-酮)的主要生理元件[McKemy et al.,Identification of a cold receptor reveals ageneral role for Trp channels in thermosensation,Nature,416,52-58,2002]。

TRPM8是具有1104个氨基酸残基的蛋白质，并且具有六个跨膜区。通过降低环境温度激活该受体导致非特异性阳离子进入细胞。然后，感觉神经元的去极化可以主要通过Aδ(以及一些C)纤维将信号传输至脑。尽管针对感觉生理学中TRPM8的角色的该概念对于温度的物理变化可以是有效的，但化学剂如薄荷醇和icilin的感觉效果的解释更加复杂。薄荷醇不仅刺激体外TRPM8，而且刺激TRPV3(与温暖有关的受体)[Macpherson et al.,More than cool:promiscuous relationships of menthol andother sensory compounds.Mol Cell Neurosci 2006；32:335-343,2006]。薄荷醇还抑制TRPA1。icilin不仅刺激TRPM8，而且刺激TRPA1，并且icilin抑制TRPV3[Sherkheli et al.,Supercooling agent icilin blocks awarmth-sensing ion channel TrpV3.Scientific World Journal 2012；982725,2012]和甘氨酸传递(glycinergic transmission)[Cho et al.TrpA1-like channelsenhance glycinergic transmission in medullary dorsal horn neurons.JNeurochem 122:691-701.2012]。因此，薄荷醇和icilin是“混杂”药物，并且它们的特异性感觉效果可能与任何一个特定的受体蛋白质无关。

对TRPM8受体的化学效能(由EC₅₀μM测定)和引起口咽中的感觉事件的效能之间的相互关系是复杂的。发明人研究了21种化合物(包括在本文中描述的11种DAPA化合物、薄荷醇、icilin、7(种)对薄荷烷甲酰胺氨基酸酯(p-menthane carboxamide amino acid ester)、以及1(种)对薄荷烷羧基酯(p-menthane carboxylester))，覆盖了TRPM8效能的100倍范围，其中的每一种均表现出TRPM8受体的全部功效，并且评价了它们的感觉效果。令人惊讶地，利用一些化合物观察到了多种副作用。例如，在21种测试化合物中，在TRPM8效能中排第16位的薄荷醇在ODT的2mg剂量下产生了胸部不适。相比之下，在21种测试化合物中，在TRPM8效能中排第4位的icilin没有产生胸部的冷却，或喉咙上的期望感觉。在21种测试化合物中，在TRPM8效能中排第1、第5、以及第13位的三种对薄荷烷甲酰胺氨基酸酯在喉咙中产生了舒适的冷却。然而，它们中的仅一种对于口咽具有期望的“清新/动态冷却”。在DAPA化合物中，TRPM8受体效能与感觉事件的关系难以分类。令人惊讶地，具有针对活性成分的所有期望性质的DAPA-2-5在21种测试的化合物中在TRPM8效能中排第12位。

如在研究4中示出的，用于激活TRPM8的候选物的EC₅₀[半数有效量]对于鉴别用于治疗上消化道中的感觉不适的候选物具有很小的预测价值。这并非令人惊讶，并且EC₅₀值的过度解释是幼稚的。多个EC₅₀值的95％的置信界限重叠，并且仅在效能中具有至少5倍差别的类似物在感觉效果方面彼此清晰可辨。EC₅₀值不会给出有关排热感觉的质量、作用持续时间、或使人不愉快的味道的可能性的信息。因此，选择性试剂的识别需要更加能够直接解决这些问题的其他生物测定。

近来，已经表明，存在分别介导无害凉爽、抗感受伤害性活性、以及冷疼痛的作用的表达TRPM8神经元的不同组[Knowlton et al.,Asensory-labeled line for cold:TRPM8-expressing sensory neurons define thecellular basis for cold,cold pain,and cooling-mediated analgesia.J Neurosci33,2837-2848.2013]。于是，给定的TRPM8激动剂的感觉效果将是对于每个子集神经元的刺激作用的平衡。DAPA-2-5可以是折中的激动剂(eclectic agonist)，选择性地产生无害凉爽和抗感受伤害，而不会引起刺激/疼痛或不利味道。

治疗不适的喉咙中的精确的期望感觉

当TRPM8受体效能筛选不能够用作用于活性成分的选择的主要方法变得清晰时，有必要开发生物测定的替代方法。喉咙中的期望感觉的精确定义有必要设置用于进一步测试的阶段。

当将测试化合物施加至非角化性体表面(例如，口咽表面)时，可以表征所得的感觉。由各个化合物产生的感觉质量支持某些不同的特性。将引起的感觉的质量、它们的描述符、以及它们的提出作用机制总结在以下表中。对于任何化合物，在活性上可以存在一些重叠，但通常一种化合物仅占据一种或两种感觉类别。

研究的一些DAPA化合物在口腔中引起酷寒的感觉。感觉类似于快速饮用利用冰片混合和平衡的冷水。如果例如利用柠檬水将饮料酸化，将进一步加剧酷寒。可以将口咽表面上的迟钝感觉和酷寒描述为痛苦、不舒服、以及令人厌恶。术语“冰冷”用于描述这些不利的酷寒感觉。

例如，利用DAPA-1-6、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7，指出的第二种类型的冷不适是胸部冷的感觉。冷的感觉位于胸骨后面和上胸中。最可能地，化合物快速分布，并且在食管内层中激活冷感觉。一些受试者认为这些感觉是使人不愉快的，但在胃灼热和胸痛的治疗中可以具有效用。

在DAPA-2-7的较高口服剂量(例如，5mg或更多)下，还注意到在其他体表面上存在冷的感觉。面部皮肤和眼球表面感觉到凉爽和冷。肩胛骨和踝的表面皮肤也感觉到凉爽和冷，尤其是如果在室内存在穿堂风(增加的气流)。手感觉到冷，好像血管收缩。这些感觉可以由DAPA-2-7至血流中的全身性吸收引起。可替换地，可能的是，一个部位处的强烈的凉爽可以使得大脑“概括”感觉，并且将凉爽归于身体的其他部分。如果不是测试受试者所预期的，这些全身性冷感觉可能是令人担忧的，并且将其认为是使人不愉快的。

将这三种类型的感觉-“冰冷”、胸部的冷、以及全身性冷称为“冷不适”。冷不适限制了针对设计用于对口咽/上食管局部作用的药剂的活性成分的选择。理想药剂必须具有局限的作用部位，并且感觉强度不应当引起“冰冷”、胸部的冷、或全身性寒战。

口腔、喉咙、以及上食管可以感觉凉爽、寒战、以及冷。这是人类经历的事实。当将冰淇淋放置在口中时，在舌头上以及在口壁上存在令人愉快的冷却以及甜的感觉。当吞咽冰淇淋时，在口的后部存在非常短暂的(至多一秒或两秒)强烈的清新感觉。可以通过反复吞咽或啜冰淇淋，或“奶昔”或“冰沙”的同样啜取，重复上喉咙中的这种感觉。这是用于治疗口咽/食管不适的期望的感觉。在本文中将这种感觉描述为“动态凉爽(dynamic cool)”，并且与凉爽、冷、或冰冷不同。该“动态凉爽”产生了“惊喜(vow)”效果，这是因为其是强烈的并且是令人愉快的。

可以将喉咙中的“动态凉爽”感觉与快速啜冰冷的水或柠檬水的凉爽、冷、以及冰冷感觉对比。例如：摄取一杯用冰片(搅拌之后)平衡的温度为约4℃的水。以约1啜/秒的速率开始啜水。第一个5次啜取是令人愉快的，但通过5至10次啜取之后，喉咙感觉迟钝的冷，并且在约10至15次啜取之后，喉咙中的冰冷变得使人不愉快，并且能够在胸中感觉到冰冷的感觉，中途向下至胃。这些令人不愉快的感觉构成“冷不适”。

为什么啜冰淇淋的感觉不同于冰冷水的感觉？在两种情况下，喉咙中的内容物的温度大约相同，但利用冰淇淋在喉咙中很少可能获得令人不愉快的冷！一种解释是制作冰淇淋的油和脂肪的热导率与水不同。例如，橄榄油的热导率值是0.17W/m·K，而水的热导率值是0.58W/m·K。与冰淇淋相比，具有较高热导率(以及较高热质量)的冰水吸取更多热量。然后，从喉咙表面的排热速率是感觉感知的决定因素，并且当其太过迅速或连续时，存在冷不适。另一方面，平滑的排热速率产生清新的感觉。实验上，具有高奶油含量的冰淇淋如香草对于引起“动态凉爽”起最佳作用。然后，目标是识别产生最佳“动态凉爽”而不是“冷不适”的化学感觉药剂(即，不会排热的化合物)。

令人惊讶地并且出乎意料地，DAPA-2-5在口咽中引起“动态凉爽”持续5min至15min，而不存在“冷不适”。

DAPA-2-5通过位于口咽喉中的传入神经的感受野上的作用引起“动态凉爽”。感觉神经包括面部(7^th)-使邻近腭扁桃体的表面受神经支配，舌咽神经(9^th)-使较后的1/3舌头和口咽壁受神经支配，以及迷走神经(10^th)-使口咽和咽喉的横向/较后的壁部分受神经支配。进一步沿着呼吸消化道向下，上食管由迷走神经和脊髓传入神经刺激神经。

技术上的困难阻止了来自7^th、9^th以及10^th神经的感受野的感觉输入的直接测量，但已经针对来自大鼠的口鼻(snout)皮肤的感受野的5^th神经进行了映射。通过推论，可以假定对于所有这些脑神经，信息的处理是相同的。

从对大鼠的面部和舌的无害热刺激做出反应的大鼠表面髓状背角，已经记录并且研究了5^th神经的神经元的中枢反应。-Δ5℃的阶跃变化刺激具有静态放电率的细胞和主要具有动态特性的细胞[Davies,SN et al.Sensoryprocessing in a thermal afferent pathway.J.Neurophysiol.53:429-434,1985]。在猫和人类中的类似研究表明：通过神经元以及通过精神物理学测量可很容易地检测温度以如Δ0.5℃/s这样低的阶跃降低(动态变化)[Davies,SNet al.Facial sensitivity to rates of temperature change:neurophysiological andpsychophysical evidence from cats and humans.J.Physiol.344:161-175,1983]。

从神经元放电尖峰模式(spike patterns)(脉冲/s)的研究来看，可清楚的是，对温度变化的动态而非静态放电反应是产生凉爽/冷感觉的最有力的刺激[参见，例如Davies等，1983]。也就是说，大脑“看到”-Δ℃/t而不是绝对的℃。因此，模拟有关神经放电的最佳-Δ℃/t的药剂将产生“动态冷却”。

局部递送至靶的方法

在本申请中，治疗的概念是将抗感受伤害性药剂局部施加至5^th、9^th、以及10^th脑神经的感受野的部分上，例如，局部施加至口腔、口咽、上食管、以及上气道的表面上。设计施加的感觉药剂以抵消酸、刺激物、以及炎症的影响，并且减轻刺激、痒、和/或疼痛。

固体/液体经由口咽的快速输送时间(～35cm/s)是局部药物递送至神经元感受野的障碍，但这种障碍能够通过将活性成分配制为放置在舌头的中后部背面上的口腔崩解片(ODT)，或通过集中递送(focused delivery)液体溶液中的药剂，例如以粗滴(大液滴，macrodroplet)、凝胶、或以气雾剂(递送)而规避。

将快速口腔崩解片(ODT)定义为：“当放置在舌头上时，在30s内快速崩解的包含药用物质的固体剂型。此外，设计产品以在与唾液接触时快速崩解或溶解，因而排除了咀嚼片剂、吞咽完整的片剂、或用水服用片剂的需要”[美国卫生和人类服务部，食品和药物管理局，药品评价与研究中心(CDER)，行业指南：口腔崩解片，2007]。

通常将口腔崩解片(ODT)用于将药物递送至血流中。在本发明的上下文中，将ODT用作用于局部化的局部递送活性成分至上呼吸消化道的非角化性复层上皮(NKSE)表面上的方法。

如用于本发明中所预期的，在称重为50mg至150mg的片剂(例如，按重量计0.6％至10％的片剂)中包含约1mg至5mg的DAPA-2-5的片剂足以用于达到期望的感觉效果。如果喉咙中的刺激来自鼻滴(nose drip)或酸反流，在口咽中的快速分解是最有效的，但如果来自气道的刺激物向上进入咽喉中，其效率较低。口服片剂的溶解内容物在涂覆气道入口处的神经末梢中具有较大的困难，这是因为吞咽刺激气道孔的关闭。对于气道粘膜，喷雾递送可以是更有效的。

本发明的DAPA化合物在室温下是无色或略微黄的液体，并且具有小于水的密度，通常是约0.7g/mL至0.8g/mL。DAPA分子与C₅至C₁₆烷烃存在表面相似之处，但氧化膦基团具有强的氢键活性，并且有效的化合物在水中以至少10mg/mL至20mg/mL的浓度可溶解。相比之下，C₅至C₁₆烷烃不会与水混合。之前，没有人曾尝试使用片剂制造机(制片机)利用DAPA化合物生产ODT，这证明了存在相当大的挑战。

ODT的研制开始于将在压制下结合以形成片剂的颗粒集合(collection of particles)的“制粒过程”。通过选择正确的参数，用于粉末共混物的配方将自由流动至压片机的漏斗中，可压实成一定硬度，具有最小的易碎性，并且快速崩解。近年来，直接压制是用于制备ODT的有利方法，其中，将成分的组预共混，与活性成分混合，放置在压片机上，并且快速制备。预共混物中的有利的成分或赋形剂是填充剂(bulking agent)如多元醇[例如，甘露醇或乳糖]以及润滑剂如硬脂酸镁。直接压制减少了制造中的步骤并且降低了成本。将活性成分和赋形剂的共混粉末称为可压制的直接共混物制剂。

令人惊讶地，DAPA化合物与多种标准预共混物制剂的混合导致了油性非自由流动的粉末。例外是PharmaBurst 500，但该共混物不是可压制的。当将DAPA化合物吸附至称为硅酸铝镁的矿物赋形剂上时，克服了这些制剂问题。在本发明的一种优选的实施方式中，硅酸铝镁可以是由FujiChemical Industry Co.,Ltd生产的Neusilin^TM、或Al₂O₃·MgO·2SiO₂·xH ₂ O[参见www.fujichemusa.com]。

用于口服给予的ODT的替代物是凝胶，其被定义为在其自然状态下是非流动性的聚合物混合的胶状材料。水凝胶，即，其中水是主要组分的凝胶是特别优选的，这是因为其将在口的后部快速溶解。使用凝胶或糖浆作为调味品对于本领域众所周知，并且类似的成分和制剂可以用于递送DAPA-2-5。

对于液体递送，替代方法是使用进料有活性化合物并且适于将活性化合物递送至例如以下的装置和分配器：

●人的口咽；

●人的上食管表面；和/或

●人的上气道。

优选地，装置或分配器是具有或不具有适配器的手动启动或定量分配器，以大量选择性地将活性化合物递送至人类表面上，例如使得按重量计至少70％的活性化合物绕开口腔而递送至期望的表面上。取决于孔径尺寸和分配机制的速度，递送的液滴可以是气雾剂或粗滴。

优选地，适配器(adaptor)是用于递送装置的间隔附件。优选地，间隔附件具有从0.5英寸(～1.27cm)至4.0英寸(～10.2cm)的长度。优选地，装置或分配器适于递送作为气雾剂或粗滴的组分的活性化合物。优选地，装置或分配器的启动适于以恒定剂量单位递送活性化合物。优选地，每次启动期间的总剂量是1mg至5mg的活性化合物。优选地，单位剂量获得自0.05mL至0.2mL的活性化合物的液体制剂。可选地，装置或分配器附有关于其使用的说明(例如，书面说明)。

由于水溶性和化学稳定性，DAPA化合物尤其顺从作为集中水喷雾，或以固定的液体等分部分，或以糖浆递送。液体递送的这些方法对于不能够容易地使用固体剂型的个体(例如，幼儿、老年人)，以及具有流涎或吞咽困难的有缺陷的个体，可以是有用的。液体制剂的缺点是活性成分快速扩散至口腔的表面上，或液体快速输送至食管中。这将限制活性成分与预定靶的接触时间。

优选的制剂是包含1mg至5mg的DAPA-2-5的口腔崩解片[ODT]。当放置在口的后部处的舌头顶部时，针对喉咙不适和胃灼热，这种制剂通常在小于10s内发挥感觉效果，并且有效持续几小时。优选的液体制剂是溶解在25％(wt/v)的柠檬汁、1.5％(wt/v)的木糖醇、以及水中的1mg/mL至5mg/mL的DAPA-2-5。可以将该溶液放置在塑料储液瓶中，并且利用分配器瓶(dispenser bottle)的挤压“喷出”至口的后部上。可替换地，可以将溶液放置在具有手动启动喷雾泵(带有将有助于递送至口的后部处的表面上的3英寸(～7.5cm)的间隔附件)的储液瓶中。

针对患者的“按照需要”基础，而不是以固定时间间隔的药物，设计药剂的递送时间表。通过这种治疗策略，个体恢复了上呼吸消化道不适的自愿控制，并且能够例如在晚上睡眠较好，获得内心平静，并且具有较少的焦虑。

对于肛门与生殖器表面，可以使用乳膏剂、洗剂、凝胶、溶液、或喷雾递送系统。

研究1

毒性

对DAPA-2-5和DAPA-2-7进行了初步毒理学研究。在艾姆斯氏试验(菌株TA98和TA100，存在和不存在肝脏激活)中这些化合物没有一种突变(试验由Apredica,Watertown,MA,USA进行)。

将溶解在3％乙醇/97％1,2-丙二醇或单独的载体中的DAPA-2-7每天以30mg/kg体重皮下给予雄性大鼠(每组N＝8)，持续7天，并且在第8天时，用戊巴比妥钠使动物安乐死，并且除去主要器官(身体、心脏、肝脏、肺、肾、睾丸、脑)并称重。用苏木精和伊红将心脏组织(心室和心脏瓣膜)和肝脏样品染色，并且检查了组织学。在两个组之间不存在身体或器官重量的显著差别，并且心脏和肝脏组织学是正常的。

具有相同设计，但利用通过填喂法以20mg/kg口服给予DAPA-2-5持续7天(每组中N＝10)的研究产生了类似的结果。在大规模试验中，通过饮用水将DAPA-2-5给予雄性大鼠，持续40天。将DAPA-2-5与炼乳[8.5％]以0.5mg/mL混合，并且监控液体消耗。治疗组[N＝12只大鼠]中的平均摄入量是41mg/kg体重/天，持续40天。单独的载体组是N＝11。在两个实验中，在用DAPA-2-5治疗的组和用载体治疗的组之间，不存在器官重量或组织学的统计学差异。

结论是，在最小的不利影响风险下，DAPA-2-5能够由人类志愿者以小于10mg的每日剂量口服进样。

研究2

制备用于口腔表面和咽表面上的感觉试验的ODT

DAPA分子是具有连接至三个疏水烷基链的亲水中心的液体，并且因此建立了用于结合至片剂赋形剂的不同寻常的分子环境。没有人曾尝试利用本发明的DAPA化合物研制ODT，并且该目标变得相当具有技术挑战性。在本发明中，特别感兴趣的赋形剂是硅酸铝镁。

制备了三种ODT，并且将其标记为ODT-A、ODT-B以及ODT-C。在此，以一些细节描述了制剂和制备的详细情况，这是因为发现了制粒配方是“艺术形式(art form)”，并且在实验中需要相当大的努力。

通过将DAPA化合物溶解在无水乙醇中，添加等重量的80％甘露醇-20％麦芽糖醇混合物，然后添加等体积的蒸馏水，制备ODT-A。然后，用玻璃棒搅拌混合物，并且利用一次性塑料吸液管将其分配至蜡或羊皮纸片上。然后，在热源下干燥形成的粘性液体滴，持续至少4h。ODT-A中的API的标称(nominal)剂量范围从1mg/片至3mg/片。干燥的片剂各自平均称重为150mg，并且当在舌头的背面上时，快速完全溶解在唾液中并且包覆了口咽表面。这些片剂适合于初始试验性研究，但尺寸不均匀，易碎(尤其是在高环境湿度条件下)，并且难以顺从进一步的分析评价。

在Ravi Mahalingam,Ph.D和Rajendra S.Tandale,Ph.D的监督下，由Formurex,Inc.,2470N.Wilcox Road,Stockton,CA 95215.Tel:(209)9312040的专家顾问制备了ODT-B。在通过引用合并于此的报告[FR-2013-1038，2013年5月1日，Formulation of DAPA-2-5into UpperEsopharyngeal/Lower Pharynx Dosage Forms]中总结了该研究。实验目的是开发以1.5mg、2.0mg、5.0mg、以及8.0mg剂量递送DAPA-2-5的原型片剂制剂，表征片剂性能，以及开发用于量化DAPA-2-5释放的HPLC法。

实验方法.使用了这些材料，来源/Lot#：DAPA-2-5，PhoenixPharmaceuticals,Inc.Lot#429773；共处理的乳糖、聚维酮、以及交聚维酮(Ludipress)，J.T.Baker Lot#1AH0516；微晶纤维素，NF(Avicel PH102)，FMC Biopolymer Lot#P212824001；共处理的微晶纤维素和瓜尔胶(AvicelCE-15)，FMC Biopolymer Lot#RH1082185；聚维酮，USP(PlasdoneK-29/32)，ISP Technologies Lot#05100280713；黄原胶，USP/NF(Xanthural75)，CP Kelco,Lot#2B4685K；甘露醇，USP(Mannogem)，SPI Pharma,Lot#12000076G；共处理的ODT赋形剂(F Melt)，Fuji Chemical Ind.Co.,Lot#201002；麦芽糊精，NF(altrin M510)，Grain Processing Corporation,Lot#M0832960；胶体二氧化硅(Cab-O-Sil M5P)，Cabot，Lot#1222272；硅酸铝镁，USP(Neusilin US2)，Fuji Chemical Ind.Co.Lot#009025；共处理的ODT赋形剂(Pharmaburst 500)，SPI Pharma Lot#10M019；共处理的乳糖(Ludipress)，BASF Lot#17137275L0；羟丙甲纤维素，USP，50mPa.S，Spectrum Chemicals Lot#2BIO277；硬脂酸镁，NF(HyQual)mMallinckrodt Lot#20100125。

由制造商提供的预共混赋形剂通常是填充剂或稀释剂，以及糖如甘露醇、乳糖、或麦芽糖醇。其他赋形剂是微晶纤维素、淀粉、胶体二氧化硅、羟基乙酸淀粉钠，并且润滑剂是硬脂酸镁或硬脂酸钙。

以三个阶段进行研究：经由1)稀释方法、2)吸附、或3)结合至粘膜粘附聚合物，通过利用预共混赋形剂稀释，将DAPA活性药理学成分[API]转化成固体形式。

稀释方法：在～12个实验中，将DAPA-2-5液体负载至赋形剂(批量大小：12-24g)上。使用不锈钢抹刀几何地混合API和选择的赋形剂，并且混合物通过筛#20。将筛过的共混物使用硬脂酸镁(之前通过筛目#40过筛)润滑，并且针对外观和流动性能(通过漏斗)进行评价。根据流动性质，使用Acura旋转压制机上的(对于120mg片剂)，或 (对于高于120mg片剂)标准凹圆工具，将选择的共混物压制成片剂。针对厚度、硬度、易碎性、以及在室温下在10mL的纯化水中的崩解试验，对片剂进行评价。拍摄了粉末共混物和片剂的外观。

赋形剂：Ludipress、Avicel PH 102、Avicel CE-15、甘露醇、F-Melt、以及麦芽糊精，产生了外观具有油性并且具有较差的流动的共混物。例外是Pharmaburst 500共混物。然而，Pharmaburst 500共混物示出了较差的可压性，并且改变Pharmaburst 500的量不会增强可压性。利用两种硅酸盐赋形剂：Neusilin US2和Syloid 244FP，进行了进一步的试验。令人惊讶地，Neusilin US2是用于与DAPA-2-5共混的有效赋形剂。与Pharmaburst的随后混合产生了能够压制成具有可接受的硬度、易碎性、以及崩解时间物理性能的片剂的共混物。尝试了各种粘膜粘附聚合物，并且结果表明并入羟丙甲纤维素可以具有有益效果。

通过几个参数，评价形成的片剂。溶解速率是片剂溶解在固定体积的水[例如，10mL]中的时间，并且，在ODT的情况下，崩解时间应当小于30s。片剂硬度测量了“在储存、运输、以及在使用之前处理的条件下”的片剂的结构完整性。施加力至片剂直至其破裂，并且力的单位可以是牛顿或千克力(kp)。牛顿单位由等式1牛顿＝1kg·m/s²给出，其中，kg是千克，m是米，并且s是秒。易碎性或易碎，描述了固体物质在很小的努力下破裂成较小块的能力。易碎性的典型指数是在机械应力之后切下的片剂的％。

用于针对100mg ODT的临床试验的可以是最佳的用于ODT-B的最终预共混物是以下的混合：DAPA-2-5：1.5mg；Neusilin US2：20.0mg；共混物：Pharmaburst 50076.5mg；羟丙甲纤维素[50cps]1.0mg；以及硬脂酸镁：1.0mg，以产生能够放置在片剂制造机的漏斗中的非油性自由流动的粉末，以产生厚度(mm)：3.4，硬度(kp)：3.0-5.0，易碎性(％w/w)：0.04，崩解时间(S)：<20，以及具有良好可压性的片剂。

为了分析水溶液中的DAPA-2-5，开发了高压液相色谱[HPLC]法。色谱条件是：柱：Waters XTerra RP18，150x 4.6mm，3.5μm；柱温：40℃；流动相：900mL水和100mL乙腈中的0.1％的四丁基铵和三氟乙酸；流动：1.0mL/min；稀释剂：水；波长：226nm；注入体积：100μL；运行时间：10min；标准制备：水中的0.75mg/mL的DAPA-2-5。样品制备：相当于水中的0.75mg/mL的DAPA-2-5。将包含DAPA-2-5的原型片剂崩解，并且测量了DAPA-2-5的含量。结果表明，86±2％的DAPA-2-5从水相回收，并且因而生物活性可利用。很可能的是，未洗脱的DAPA-2-5仍然紧紧地结合至Neusilin US2上的位点。

ODT-C.进行了更多的实验以找到在40mg至60mg的范围内，具有<10s的崩解的较小片剂。这些参数可以达到较好的药理作用。ODT-B大小是100mg，并且在<20s内崩解。通过反复试验(by trial and error)，发现用于共混DAPA ODT的可再现的配方是：

a.DAPA化合物溶解在按体积计等份的乙醇中，然后，添加1.5重量份至2.0重量份的Neusilin US2，混合组合，并且通过将混合物放置在热源，例如100瓦的电灯泡下蒸发乙醇。例如，向1.5g的DAPA-2-5中添加1.5g的无水乙醇，随后添加2.0g的Neusilin US2。在Speedmixer中以500rpm摇动或混合混合物，持续1min。将样品放置在热源下并且约2h之后，在预期乙醇已经蒸发的情况下，重新称重样品大小，并且现在样品称重是3.5g。这种粉末是自由流动的。

b.制备麦芽糖醇粉末样品(来自Roquette的P200)。

c.制备EasyTab样品(JRS Pharma,Rosenburg,Germany)。

d.制备a.[2.80g]、b.[15.73g]、以及c.[31.46g]的共混物以制造1000ODT片剂，每个称重为50mg并且包含1.2mg的DAPA-2-5。

e.首先通过手摇动共混物，然后，在500rpm下的SpeedMixer中放置2min。将共混物倾注至新单冲压片机Pill Making Machine MakerTDP-1-5[获得自Amazon.com]的漏斗中，并且收集挤出的片剂。

还发现第二无机赋形剂：CaHPO₄、喷雾干燥颗粒、无水二碱式磷酸钙(Dibasic Calcium Phosphate Anhydrous)、无水磷酸氢钙、由Fuji ChemicalCo.,Ltd.制造的商品名称是在与预混合的共混物共混之前用于DAPA化合物的有效吸附成分。然而，吸附能力是Neusilin US2的一半，并且崩解速率是两倍长。

总之，研制了DAPA化合物的原型ODT制剂。设计ODT用于将API递送至咽表面和食管表面上。制粒过程旨在选择用于将是自由流动的、压实成一定硬度，并且具有最小易碎性以及快速崩解时间的粉末共混物的正确参数。发现了成功制剂中的关键因素是使用以Neusilin US2商业上可获得的铝硅酸盐氧化物(aluminum metasilicate oxide)。该赋形剂允许液体DAPA化合物配制在满足使用标准的片剂中。代表性制剂由DAPA-2-5(l.5％)、Neusilin US2(20.0％)、Pharmaburst 500(76.5％)、羟丙甲纤维素(1.0％)、以及硬脂酸镁(l.0％)组成。Pharmaburst 500的替代预共混物赋形剂是EasySolv。这些共混物具有针对压制成ODT的优异性能，并且满足针对可压性和ODT参数的标准。

研究3

ODT对于口腔表面和咽表面的感觉质量

针对对于志愿者的感觉性能，评价了研究2的DAPA ODT。ODT-A结果[参见表]来自熟悉“冷却剂”的感觉性能的几个有经验个体的每种化合物的6至8次试验。ODT-A的结果将与ODT-B和ODT-C一起讨论。

在施加ODT-A之后，存在与各种强度和持续时间的排热有关的感觉。特别值得注意的是利用一些化合物感觉到“冰或痛苦”冷的感觉，但效果是可变的。为了更精确地辨别(isolate)这种感觉并且减少可变性，将ODT-A放置在舌头上，并且在10min之后，指导受试者饮用一口之前利用冰片平衡的水。如果受试者在喉咙中感到“正常凉爽”，值是“0”，如果水在喉咙上感到“过度地冷”，将其评为“+”，并且如果在喉咙上存在“疼痛冷/不适”，等级是“++”。将术语“冷不适”应用于产生了“++”的化合物，并且利用冷水测试，现在能够容易地定义和鉴别这种现象。

由Formurex Corp.制备的ODT-B外观使人愉快，具有均匀的重量、硬度、颜色、以及几何学。在筛选制剂之后，选择组合物F25[1.5mg，100mg]和F27[8mg，240mg]用于详细的测试。在舌头表面上，100mg的片剂大小非常适合，尽管体外崩解时间<20s以及片剂硬度为3kp至6kp，但在唾液中完全溶解相对缓慢(～1min)。通过啜取小量的水以润湿舌头加速了溶解，但在实践中，增强片剂性能的该方法可能不方便。F27，较大片剂[8mg的DAPA-2-5]对于食管表面作用良好，并且在此，能够利用水服用片剂。F27冷却上食管，并且在胸部，向下至胸骨的水平能够感到令人愉快的冷却。对于治疗胃灼热以及对于非心源性胸痛的鉴别诊断，F27制剂和剂量将是优异的原型。接下来的制剂目标是减少片剂大小以及加速溶解和递送。

在每种化合物至少3次试验以及1.2mg/ODT至1.5mg/ODT下，针对感觉性能，对4个志愿者测试了在研究2中描述的ODT-C。将ODT放置在舌头的中线后背侧面上，并且以标准化形式记录感觉效果，持续30min，并且以标准化形式记录效果，持续30min。将ODT编码(code)，并且在双盲基础上给予。将中等[0]、稍微凉爽[-1]、凉爽[-2]、冷[-3]、以及冰冷[-4]的修改的ASHRAE等级用于排列口和喉咙中的峰排热感觉。也注意到了其他感知效果，例如味道和持续时间。在表6中示出了结果。

对于具有DAPA化合物的所有ODT-C，排热感觉在放置ODT的1min内明显。与ODT-B片剂相比，开始快得多，并且可以反映改善的制剂。在排热感觉的测定中不存在模糊(情形)，因此在15次试验之后，中断仅具有赋形剂而不存在DAPA化合物的安慰剂ODT的使用，这是因为这些安慰剂均被测试受试者识别，并且被立即评为零。

排热感觉在峰强度，或在药理学术语、最大效能[或响应]中具有性质上的差别，DAPA-2-5产生了清新的凉爽和冷，并且当剂量增加至8mg时，对于感觉存在燃烧的穿透质量，但其不是有害的，即，不存在疼痛或明显的不适。相比之下，1-6、1-7、2-6、以及2-7产生了对于喉咙后部而言是痛苦的冷和冰冷。疼痛的程度及其持续时间足以将这些化合物评为对于治疗是不期望的。

DAPA-2-5具有由老化学家描述为“氯仿类”的轻微的有机甜味。相比之下，1-6、1-7、2-6、和2-7，以及其他类似物，例如1-8和1-9产生了持续至少20min的描述为“金属性”、“收敛剂”、“未成熟的柿子样”、以及“涩”的使人不愉快的味道。味道在舌头上具有与8mg至10mg的高剂量下的1-薄荷醇的一些相似之处，但“金属性”和其他感觉质量是不同的，并且是有害的：即，受试者说其使人非常不愉快并且是不期望的。利用1-8、1-9、以及2-8，这些使人不愉快的味道尤其显著。利用木糖醇，人造无热量甜味剂掩盖味道的尝试没有成功。味道质量中的这些差别是令人惊讶的、不可预料的、以及出乎意料的，并且使得DAPA-2-5成为用于开发的最佳候选物。

类似物1-4和2-4产生了<5min的冷却效果，并且因此不具有治疗价值。DAPA-2-5具有平均为～12.8min的冷却效果，但冷却持续时间随着环境条件变化。喉咙中的冷却感觉在晚上、接近睡眠时间更显著，推测这是因为存在较少的用于分心的环境提示。因此，排热感觉将持续20min或更长，而不是仅12min。与2-6、1-6和1-7相比，2-7具有较长的冷却作用。尽管可能感觉不到明显的冷却感觉，但感觉不适的减轻能够持续3+小时。

从结构-活性观点，尽管制剂中存在差别，但来自ODT-A和ODT-C的结果令人惊讶地产生了密切类似的结果和结论。R₁和R₂必须是仲烷基基团，即，连接至(或α位)磷原子的碳必须是支化的。因此，二异丁基部分(DAPA-3-1中)对于口咽实际上是无活性的。其中DAPA-2-5的正戊基由3-甲基-丁基(DAPA-3-2)取代的R₃的末端碳的支化也导致活性的显著丧失。但需注意的是，DAPA-2-5、DAPA-1-7、DAPA-3-1、以及DAPA-3-2具有相同的分子量，但它们的活性彼此明显不同。在二异丙基和二仲丁基系列中发现了活性化合物。将R₃中的碳数目从C4增加至C7增加了冷却的持续时间，一种可以有助于亲油性和组织保留的效果。

在此，出乎意料的和令人惊讶的观察是DAPA-2-5具有“动态凉爽”。[当R₃是正戊基时]。但当R₃由一种或两种亚甲基基团扩展至正己基(DAPA-2-6)或正庚基(DAPA-2-7)时，化学品引起冷不适和不利的味道。减少正戊基的一个碳原子成为正丁基(DAPA-2-4)保留了冷却清新，但该类似物作用时间太短以至于不可用于例如口咽障碍中。

总之，ODT试验令人惊讶地表明，DAPA-2-5是用于咽中的感觉不适的最佳API，具有治疗有效的作用持续时间。用于API的第二选择是2-7，但由于痛苦的冷和令人不愉快的味道使得其是较不理想的。存在使得DAPA-2-5是选择性的和例外的药物作用的性质上的差别。测试化合物的性能(尤其是不利的味道)是出乎意料的，并且仅通过进一步的实验和制剂才能发现。

不具有冷不适和不利味道并且具有局部化的动态凉爽的DAPA-2-5中的正戊基基团的独特特性是令人惊讶的，并且尚不能够从现有技术预测。得出的结论是，DAPA-2-5是作为用于上呼吸消化道的抗感受伤害性药剂的最佳API候选物。如果掩盖了使人不愉快的味道，DAPA-2-7是替代物，并且其具有增加的作用持续时间和强烈的感觉体验的优点。

研究4

咽表面上的感觉质量：疼痛

炎症的“疼痛”组分包括刺激、痒、以及不适，并且将这些端点的抑制称为“抗感受伤害性”。为了确定化合物是否具有抗感受伤害性活性，发明人已经设计了改良的辣椒素激发方法以引起口咽不适：红辣椒酱刺激试验。

放置在舌头的后背面的红辣椒酱引起了口咽的痒/刺激感觉。与红辣椒酱有关的感觉位于口的后部，并且被清楚地识别，并且与刺激和清喉的欲望相关。

施加至舌头的后背面的红辣椒酱引起了能够利用包含活性成分的ODT容易抑制的感觉，但(这种感觉)不受仅包含赋形剂的ODT的影响。

在红辣椒酱刺激试验中，使用如在研究3中的ODT递送测试化合物，并且在30min之后，将0.2mL至0.25mL的酱施加至舌头的后背面上(利用注射器或塑料棒)。将在本文中使用的红辣椒酱称为Yank红辣椒酱(YS Gourmet Productions,Inc.,PO Box 26189,San Francisco,CA94126)，并且是与点心(dim sum)(中国茶午餐)使用的众所周知的调味品。如果不存在酱的刺激/痒感觉的抑制，值是“0”，如果存在一些抑制，值是“+”，并且如果存在完全的抑制，那么值是“++”。对于产生“++”得分的化合物，红辣椒酱的刺激信号完全不存在，但仍然能够容易地品尝到来自调味品的酱油的咸味。

在以下表中总结了结果。“++”结果表明了红辣椒酱的刺激作用的抑制。数值结果来自每种化合物的6至8次试验。

在红辣椒酱刺激试验中注意到的一个不同寻常的特征是口咽上的“动态凉爽”感觉(在咽刺激研究中测定的)持续了约10min至15min，然而，抗感受伤害性活性(在红辣椒酱刺激试验中测定的)持续了几个小时。这种“记忆痕迹(memory trace)”作用是最不同寻常的并且是令人惊讶的，但如果清楚地认识到清除反射对于存活是必要的，并且一旦引起或增强，很可能恢复其他脑反射以处理喉咙中的监控障碍，则可以得到解释。脑中的该恢复过程可以具有长持续时间。活性DAPA化合物的抗感受伤害性活性非常吸引人，并且之前尚未观察到。

研究5

关于TRPM8、TRPV1、以及TRPA1的激动剂活性

使用Fluo-8钙试剂盒和荧光成像读板器仪器，在克隆的hTRPM8通道(由人类TRPM8基因编码，在CHO细胞中表达)上评价测试化合物的体外效应。试验由ChanTest Corporation进行(14656NeoParkway,Cleveland,OH 44128,USA)。

通过在HEPES缓冲生理盐水(HBPS)溶液中稀释储备溶液，制备测试化合物和阳性对照溶液。将测试化合物和对照制剂负载在聚丙烯或玻璃衬里的384孔板中，并且放置在FLIPR仪器(Molecular DevicesCorporation,Union City,CA,USA)中。在每次测定中n＝4次重复下，以4至8个浓度评价测试化合物。阳性对照参考化合物是L-薄荷醇，其是已知的TRPM8激动剂。测试细胞是用人类TRPM8cDNA稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

对于试验，将细胞以约30,000个细胞/孔，平铺(plate)在平坦的透明底微孔滴定板的384孔黑壁中(类型：BD Biocoat多聚D-赖氨酸多孔细胞培养板)。将细胞在37℃下温育过夜以达到适合用于荧光分析中的接近融合的单层。测试操作是除去生长培养基以及在37℃下用30min添加40μL的包含荧光-8的HBPS。将10μL的HBPS中的测试化合物、载体、或对照溶液添加至每个孔并且读取4min。

浓度-反应数据经由提供有FLIPR系统(MDS-AT)的FLIPR控制软件分析，并且拟合以下形式的希尔方程：

其中，“Base”是测试化合物的低浓度下的反应；“Max”是高浓度下的最大反应；“xhalf”是EC₅₀，其是测试化合物产生最大活性的一半时的浓度；以及“rate”是希尔系数。假设简单的一对一的结合模式，作出了非线性最小二乘法拟合。使用GraphPad Prism 6软件，获得了95％的置信区间。

在以下表中总结了结果(TRPM8受体试验中的激动剂活性)。

11种测试的DAPA化合物均表现出对于TRPM8受体的充分的效力，即，在最高的测试浓度下，存在～100％的钙内流刺激，并且数据拟合S形剂量-反应曲线。更加有效的感觉化合物(1-6至1-8和2-5至2-8)的EC₅₀落在具有重叠95％的置信区间的窄范围内。在能够预测在上消化道中具有期望冷却性能的化合物的EC₅₀中，不存在区别特征。3-1和3-2的结构修饰导致生物活性的显著丧失。

在图1中示出了针对DAPA-2系列的结果。

图1是TRPM8转染的细胞中引起的测试化合物的荧光(相对荧光单位：％最大值)作为针对DAPA-2-4(圆形)、DAPA-2-5(正方形)、DAPA-2-6(倒三角形)、DAPA-2-7(菱形)、以及DAPA-2-8(星形)中的每一个测试化合物的浓度(μM)的对数的函数的曲线图。

与DAPA-2-5、DAPA-2-6、DAPA-2-7、以及DAPA-2-8相比，DAPA-2-4明显效力较小。DAPA-2-5至DAPA-2-8的效能与重叠的95％置信区间类似。然而，DAPA-2-5是优选的，这是因为当体内给予时，在这些化合物中存在不同的、选择性药理学区别。

为了研究测试化合物的特异性，在TRPV1通道(在HEK293细胞中表达的人类TRPV1基因)和TRPA1通道(在CHO细胞中表达的人类TRPA1基因)上进行了进一步的研究。测试细胞是用人类TRPV1或TRPA1cDNA转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或人胚肾(HEK)293细胞。阳性对照参考化合物是辣椒素(已知的TRPV1激动剂)或芥子油(已知的TRPA1激动剂)。

DAPA-2-5、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7在100μM的最大测试浓度下在TRPA1通道上没有表现出任何激动剂活性。

令人惊讶地，DAPA-2-5、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7表现出弱TRPV1激动剂活性，分别具有7.0mM、0.13mM、以及0.22mM的预计EC₅₀。注意，在刺激TRPV1中，DAPA-2-5的效力是DAPA-2-6的1/54。在第二实验中证实了DAPA-2-5、DAPA-2-6、以及DAPA-2-7的相对效能，并且其提供了用于利用这些化合物观察到的不同药理学特性的基础。

在膜片钳实验中，在转染的细胞中以5μM还评价了DAPA-2-5，并且其表达了针对ASIC3(酸敏感)、hNav1.7(钠通道)、以及hERG(钾通道)的通道受体。尽管阳性对照(即，阿米洛利、利多卡因、以及E4031)在这些细胞中分别是活性的，但在这些细胞中针对DAPA-2-5没有观察到激动剂或拮抗剂活性。

总之，TRPM8EC₅₀[半数有效量]似乎具有很小的预测价值。多个EC₅₀的95％的置信界限重叠，并且仅在效能中具有至少5倍差别的类似物彼此清晰可辨。从ODT研究，清楚的是“动态凉爽”、冰冷、不利味道、以及作用持续时间是重要的参数。但EC₅₀不会给出有关排热感觉的质量、使人不愉快的味道的可能性、或药物作用的持续时间的信息。因此，TRPM8的易接近性和功效不是由EC₅₀定义。过度解释EC₅₀是幼稚的。需要其他生物测定以解决选择性问题。

研究6

动物模型中热引起的水肿的抑制

将炎症定义为血管化活组织对局部损伤的反应[Cotran,RS.1989.Inflammation and repair.In Robbins:Pathologic Basis of Disease,ed.S.L.Robbins,R.S.Cotran,V.Kumar,2:39-86.Philadelphia:Saunders.4^th ed.]。炎症的特性征兆是红、肿胀、热、以及疼痛(以及功能丧失)。

在热引起的血管渗漏的模型中研究了DAPA化合物的抗炎性能[Weiet al.Method of inhibiting inflammatory response.US 4,801,612；Wei et al.,Anti-inflammatory peptide agonists.Annual Review Pharmacol Toxicol.33:9-108,1993]。当将戊巴比妥麻醉的大鼠(200g至300g体重)的爪浸渍在58℃的水中持续1min时，在30min内，约1.8mL的正常爪体积增加了～88％，肿胀是由于爪的水含量的增加。测试是看在加热之前将爪暴露于选择的DAPA化合物持续30min是否降低了热引起的爪体积的增加。

将测试化合物以20mg/mL溶解于20％水-80％R-1,2-丙二醇中。使用连接至在其尖端利用聚乙烯60管片覆盖的钝21号针的注射器，以0.3mL/爪，将溶液施加至戊巴比妥麻醉的大鼠(200g至300g体重)的爪皮肤。在将溶液分布在爪上之后，将爪紧紧地封装在从一次性手套切割的塑料手指(套)中。对侧爪[对照]仅接收载体。在施加30min之后，将两只爪都浸渍在58℃的水中持续1min。在浸渍30min之后，利用剪刀在踝关节切割两只爪，并且称重。

在初步研究中，发现了在热暴露(58℃的水持续1min)之后，对照动物(N＝12)的爪重量从1.77±0.02g(平均±S.E.M.)增加至3.33±0.07g，爪重量增加88±2％。如由图2中的数据示出的，相对于对侧爪，DAPA-2-5将该反应显著抑制了12.9％(P<0.01)。由于损伤刺激物具有超大强度，因此针对组织保护，该抑制程度是显著的。对于未经训练的观察者，DAPA-2-5效果是显而易见的。这些结果是令人惊讶的，这是因为没有预期到DAPA-2-5的这种抗炎性能，并且之前在科学文献中尚未对此进行报道，此外，对于其他DAPA化合物，没有看到DAPA-2-5的抑制效果。

在其他文献(elsewhere)已经讨论了热引起的水肿的机制[Reed et al.,Transcapillary exchange:role and importance of the interstitial fluid pressureand the extracellular matrix.Cardiovascular Res.87:211-217,2010]。热损伤组织的变性蛋白质展开并且暴露亲水基团。随后，降低的细胞外基质的组织间隙液压从血液隔室吸收水进入皮肤。这导致了快速的组织水肿。DAPA-2-5而不是其他测试的DAPA化合物抑制了该过程[参见图2]。

*P<0.01相对于对侧爪

研究7

动物模型中的炎症效应

利用一些DAPA化合物观察到的冰冷刺痛感觉表明，它们可能是直接刺激物。通过将20μL的纯化合物施加至戊巴比妥麻醉的大鼠的刮去的腹部皮肤上，测试了该假说。将测试物质封闭(enclose)在乳膏剂环的～1cm直径的环中。利用微量吸液管施加测试物质，并且在1小时之后，利用化装棉擦拭区域，并且将存在的红(刺激)评定为0至+++的等级。

在以下表中总结了数据。

数据表明，未稀释形式的DAPA-2-6和DAPA-2-7中的每一种是皮肤刺激物。相比之下，纯DAPA-2-5对于皮肤具有最小或无促炎作用。

由于DAPA-2-5的一些预期用途是关于发炎的粘膜和变移上皮，因此DAPA-2-5的炎性作用的缺乏是重要的，并且DAPA-2-5的任何抗感受伤害性作用可以加重刺激或疼痛。此时不清楚这些结构上类似的化合物的选择性和非选择性的确切原因，但其可以包括其他受体如由高浓度下的DAPA-2-6和DAPA-2-7激活的TRP通道(如，TRPV1)下的相互作用。

这些结果还与称为咽喉反流(LPR)的咽障碍中DAPA-2-5的可能性应用具有特定关联性。在LPR中，胃酸和胃蛋白酶回流至咽喉表面上，并且引起组织损伤。利用喉镜，患者咽周围的炎症容易可视化，并且炎症引起疼痛、嘶哑、以及清嗓。目前，治疗的主要方法是例如使用质子泵抑制剂减少来自胃的酸分泌物，然而，不存在治疗喉咙中的不适或咽粘膜炎症的方法。配制用于以口腔崩解片(ODT)、凝胶、液体溶液、或气雾剂递送的药剂如DAPA-2-5，提供了用于LPR的炎性粘膜治疗的新策略。

研究8

上呼吸消化道内层中的主要内源刺激物是盐酸。咽粘膜的酸刺激将引起反射性吞咽。接受区域(接收区域)位于咽壁中，并且受舌咽神经(9^th)和内部喉上神经(10^th)神经支配。在大鼠动物模型中，有机酸如乙酸和柠檬酸的溶液在引起吞咽中是有效的[Kajii et al.,Sour taste stimulationfacilitates reflex swallowing from the pharynx and larynx in the rat Physiology&Behavior 77:321-325,2002]。在本发明中，用于测量对于酸的感觉响应的方法适于筛选可以抑制对于盐酸的敏感性的药剂。因此，抑制酸激发的药剂在减轻胃灼热不适中具有效用。

在俄罗斯圣彼得堡巴甫洛夫生理学研究所进行了实验。称重为200g至400g的成年雄性Wistar大鼠获得自Roppolovo动物饲养所。利用戊巴比妥钠/氨基甲酸乙酯(urethane)将所有大鼠麻醉，并且固定在仰卧位。利用加热垫，将体温维持在37.0℃。在颈的腹侧面进行正中切口，并且将气管插管。将导向管(聚乙烯，直径：2.2mm)固定在硬腭的中线处，然后，将内部灌注管(聚乙烯，直径：0.9mm)平齐软腭的末端放置。该操作允许在最小机械扰动下利用液体刺激咽喉区域。将食管导管放置在胸水平处，以在灌注之后排出溶液。使用灌注泵，以1.5μL/s的流速将灌注溶液施加至咽喉区域持续20s，产生了约30μL的总单位体积。以2min至3min的时间间隔施加刺激，时间间隔允许利用抽吸漂洗和清理。灌注的溶液是蒸馏水、生理盐水、0.1N的盐酸、或溶解在生理盐水中的测试化合物。将成对单极电极插入在单侧下颌舌骨肌中，以记录肌动电流图(EMG)活动和处理用于随后分析的信号。将吞咽动作确定为EMG活性，并且还可以将其可视化为喉动作。将固定时间间隔中的吞咽的次数用作端点。

测试过程类似于早期描述的那些(参见，例如Kajii等人，2002)。同样，食管的排出物处于胸水平，以避免咽的机械扰动。溶液的灌注速率是1.5μL/s，持续15s至18s。

用于测试化合物的载体盐水不会诱导吞咽动作。对于0.1N的HCl灌注(约18秒期间30μL)的响应是高度重复的。在1min内平均存在36±4次吞咽动作(N＝7只大鼠)。在具有休息期或以10min的时间间隔盐水灌注的2小时期间内，在同一大鼠中能够引起这种响应。

将Dixon的上下法(up-down method)[Efficient analysis of experimentalobservations.Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.:20,441-462,1980]用于吞咽响应的滴定抑制，并且获得具有50％的吞咽频率降低的EC₅₀，作为计数反应(定量反应)终点。将DAPA-2-5的EC₅₀(N＝8)评价为0.09mg/mL。

在图3A-3D中示出了实验的实例。

图3A-3D示出了在将0.1N的HCl灌注在口咽中之后，从麻醉大鼠的下颌舌骨肌记录的肌动电流图(EMG)活动的振幅(mV)的图。图3A：在酸之后47次吞咽。图3B：用约18s的DAPA-2-5的灌注(0.4mg/mL，以1.5μL/s)抑制了5min之后产生的酸激发(3次吞咽/min)。图3C：在DAPA-2-5之后10min产生的第二次酸激发引起了仅9次吞咽/min。图3D：在盐水漂洗(1.5μL/s，持续20s)之后，在DAPA-2-5之后15min的第三次酸激发产生了27次吞咽/min的部分恢复响应。

在以下表中总结了针对所有测试化合物的数据(其中，每种化合物N＝4至8次实验)。为了比较，在最后一栏中示出了TRPM8受体试验的EC₅₀。尽管DAPA-2-6、DAPA-2-7、以及DAPA-1-7在TRPM8受体试验中更有效，但对于抑制酸诱导的吞咽，DAPA-2-5是最有效的化合物。在图4中示出了针对测试的DAPA化合物的EC₅₀和IC₅₀的相对效能的比较。可以清楚地看出，效能的两种生物测定量度(measure)不相关。

用于抑制酸诱导的吞咽的TRPM8EC₅₀试验和IC₅₀之间缺乏效能的相关性，这一点相当惊人。例如，在受体试验中，DAPA-2-6具有两倍于DAPA-2-5的效能，但仅是其抑制吞咽活性的5％。DAPA-2-7不如DAPA-2-5有效，但其对于吞咽抑制的持续时间具有更长的持续时间。对于胸痛的鉴别诊断，与DAPA-2-5相比，由于DAPA-2-7较长的作用效果，其可以更有效。

这些实验结果再次强调相对于类似的类似物，DAPA-2-5对于上消化道的不同寻常的选择性活性。对于DAPA-2-5在抑制咽和上食管的酸反流相关不适中的潜在应用，这种酸刺激动物模型中的结果尤其相关。然而，应当注意的是，DAPA-2-7相对DAPA-2-5的较长作用持续时间表明，其可以是DAPA-2-5用于酸反流疾病中的替代候选物。

研究9

对离体迷走神经的研究：直接抗感受伤害性活性

为了检查DAPA-2-5对于抑制感觉不适的能力，在英国伦敦帝国学院(Imperial College,London,U.K.)开发的动物模型中对其进行了测试[Birrell et al.TRPA1agonists evoke coughing in guinea pig and humanvolunteers.Amer.J.Respiratory and Critical Care Medicine 180,1042-7,2009；Patel et al.,Inhibition of guinea-pig and human sensory nerve activity and thecough reflex in guinea-pigs by cannabinoid(CB2)receptor activation.British J.Pharmacol.140,261-82003]。在该体外试验中，将迷走神经片段放置在平台上，并且在局部施加辣椒素之后记录电活动性。当将其施加至皮肤时，辣椒素是引起疼痛的已知刺激物，并且其将去极化离体迷走神经。测定了物质抑制这种辣椒素诱导的去极化的能力。

简言之，用精细镊将近尾部结状神经节的迷走神经片段从小鼠中除去，并且将片段放置在充氧的克雷布斯液中并且用95％O₂/5％CO₂起泡。将去鞘神经干固定在‘油脂-间隙(grease-gap)’记录室中，并且经常以约2mL/min的流速用克雷布斯液倾注，并且神经的电活动性用电极监控。通过水浴将灌注液的温度保持在37℃恒定。用辣椒素(1μM)灌注神经，诱导神经去极化。在两次对辣椒素的可重现去极化响应之后，将DAPA-2-5以灌注液的形式用10min以1mg/mL(4μM)施加，接着施加辣椒素。然后，将神经用克雷布斯液洗涤直至响应已经返回基线并且再次用辣椒素激发(挑战)。在图5A-5B中示出了在正常和Trp M8基因敲除(knockoutmouse)的小鼠中获得的结果和迹线。

图5A-5B示出了在第一迹线图5A(“野生型”)中说明由以1mg/mL倾注的DAPA-2-5引起的离体小鼠迷走神经的辣椒素诱导的去极化的抑制以及在第二迹线图5B(“TRPM8KO”)中说明由以1mg/mL倾注的DAPA-2-5引起的离体TRPM8KO小鼠迷走神经的抑制的显著缺乏的极化迹线。

在图5A-5B中示出的迹线中，前两个峰示出了小鼠迷走神经对辣椒素(“Caps”)的去极化响应。在施加DAPA-2-5(1mg/mL)之后，响应在正常小鼠迷走神经图5A(“野生型”)中受到抑制，但在TRPM8基因敲除图5B(“TRPM8KO”)小鼠迷走神经中没有受到抑制。

由DAPA-2-5引起的离体正常小鼠迷走神经的辣椒素诱导的去极化的抑制百分数是约60％；由DAPA-2-5引起的离体TRPM8基因敲除小鼠迷走神经的辣椒素诱导的去极化的抑制百分数是约0％。

该实验清楚地表明了DAPA-2-5对于感觉神经的直接药理学作用，这是令人惊讶的并且是出乎意料的结果。此外，TRPM8KO小鼠响应减弱表明受体目标是TRPM8。这些结果提供了强有力的证据，证明DAPA-2-5可以用作对由感觉神经如迷走神经神经支配的非角化性膜的抗感受伤害性药剂。

辣椒素是TRPV1激动剂，并且寻找有效的TRPV1拮抗剂在过去十年或更多年前一直是众多药物公司的超强追求。本文表明了DAPA-2-5在低浓度下是TRPV1有效的“生理学”拮抗剂。DAPA-2-5本身不会引起去极化，表明其在该“疼痛”受体下不具有激动活性。这些结果有力地表明DAPA-2-5作为抗感受伤害性药剂的有用性。

研究10

豚鼠咳嗽模型

在中国广州的广州医科大学的广州呼吸疾病研究所的呼吸疾病国家重点实验室进行了该研究。研究者是Dong PeiJian、Liu ChunLi、ZhangQingling、Wei TakFung、以及Zong NanShan。

在标准化豚鼠咳嗽模型中评价了DAPA-2-5。称重为250g至300g的年龄约一个月的雄性特定无病原体豚鼠获得自中国广州省的医学实验动物中心，并且在12h光循环和20次换气/h的情况下，将其饲养在维持在22±2℃和55±15％湿度的室内。由机构动物护理和使用委员会批准了实验过程。

将豚鼠放置在配备有以2.5L/min的速率排除空气的偏流调节器的透明塑料2L体积描记室(Buxco,Wilmington,North Carolina,USA)中。使用具有0.6mL/min输出的超声波雾化器，将2mL溶解在盐水中的1M柠檬酸(Sigma)递送至室，其递送具有估计0.9mm平均粒径的气雾剂(Lab Nebulizer System,Aerogen,Galway,Ireland)。将动物暴露10min。

豚鼠的咳嗽以快速、腹部运动发生，伴随特有的发声。以室中气流的瞬时变化和通过压力传感器和计算机记录的信号，检测频率。此外，还电子地记录了音频放大计数。对咳嗽进行计数，持续10min暴露期。实验由研究者视觉监控。

针对所有动物(N＝20)，记录了咳嗽的基线频率，并且在7天之后，利用乙醚(二乙醚，diethyl ether)将动物麻醉。将小动物喉镜用于将微型喷雾注射器的尖端放置在口腔中。针对小剂量递送的专门仪器来自PennCentury Inc.Wyndmoor,PA 19038 USA。在每组N＝10下，以75μL/动物给予盐水或以2mg/mL溶解在盐水中的DAPA-2-5。在注射10min之后，将豚鼠暴露于柠檬酸雾，并且记录咳嗽次数。

图6示出了结果图。暴露于1M的柠檬酸溶液的豚鼠(N＝20)具有每10min观察期间19.9±3.9次咳嗽的咳嗽频率。一周后，递送至口咽区域中的盐水不影响咳嗽频率(18.0±4.0次咳嗽)，但以75μL/动物递送的盐水中的2mg/mL的DAPA-2-5抑制了咳嗽(6.7±1.6次咳嗽，P<0.01曼-惠特尼U检验)。在麻醉的大鼠和豚鼠中的这些临床前研究确定了DAPA-2-5和相关分子具有针对上消化道中的酸刺激的抗感受伤害性作用。

利用相同的设计，但使用辣椒素0.1mM雾作为刺激物重复了该研究。DAPA-2-5还抑制了该豚鼠模型中的辣椒素诱导的咳嗽。这是其中局部冷却剂已经示出了抑制标准化动物试验模型中的咳嗽的第一实例。

案例(病例，case)研究1

62岁男性是制药公司的高级主管。他具有繁忙的工作时间表，但对导致持续性嘶哑和咳嗽的病毒性感冒敏感。这些症状对于他的社交方面是令人忧烦的，这是因为他喜欢参加歌剧(表演)，并且这些症状还干扰他在持续几个小时并且需要他积极参与的持续商务会议中的角色(状态发挥)。他自愿尝试包含1mg至1.5mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT-A)。使用甘露醇(75至80％wt/wt)和麦芽糖醇或木糖醇(20至25％wt/wt)作为赋形剂，制备这些ODT。片剂通常各自称重为50mg至120mg，并且包含1mg至5mg的DAPA-2-5。对于该个体，DAPA-2-5的1mg至1.5mg的剂量在当他需要时的五次场合下可完全有效地减轻他的嘶哑。他评论说，ODT的适宜尺寸允许他谨慎服用片剂。他评论说，DAPA-2-5ODT具有快速(作用)开始和“平滑的”感觉。他说如果不适当地制备，ODT有时具有“刺激的(edgy)”感觉，并且在“动态凉爽”开始之前使喉咙发痒且引起咳嗽，但在其他方面不存在副作用。他还尝试了喷出至他的喉咙后面的2mg/mL DAPA-2-5溶液，并且他说这些感觉很好。他声称这是他因为喉咙不舒服曾服用的最好的药物。

55岁的学术研究员曾赴亚洲会议，并且接触地铁和大型购物中心的人群。他出现了喉咙痛，随后是～+1℃的低热，然后是强烈的咳嗽，具有来自胸部(下胸骨水平处)的“呼呼声(gurgling)”不适。由于一旦躺下，他就感觉到他的喉咙中的流体激烈鼓动并且咳嗽的发作无法控制，因此他无法入睡。他的喉咙感到刺痛，并且他的喉咙痛和嘶哑变得严重。他同意尝试DAPA-2-5[1.5mg]片剂方案：正餐后两片，晚上睡觉之前两片，以及早晨两片。令人惊讶地，他现在突然能够控制他的咳嗽并且清楚地说话。他定时他的粘液质产生，并且注意到随着他好转，以15min周期，然后是30min周期，然后是3h周期出现粘液质。他将使用该时间表和周期以倾身，以35至40的脊椎角度，他的双手放置在他的背侧大腿上，并且咳进厕所或盥洗池。他说他能够有效地处理发白的黄色粘液质咳痰，并且具有排痰性咳嗽相对无痰干咳的约1:2的比率。他的喉咙痛在两天之内消失了，并且在两周内，他没有任何气道不适。这是在DAPA-2-5之后增强咳嗽效率的突出案例。片剂给予的剂量模式从“按照需要”基础变化至半-“固定时间间隔”方案。

案例研究2

70岁退休建筑师患有病毒性感冒持续了3周，并且由于严重鼻塞而不能睡好。他不能通过他的鼻子呼吸，并且躺在床上加剧了他的挫折感。他自愿尝试包含DAPA-2-5的片剂。在服用片剂1min之内，他说他在他的喉咙后面感到“惊喜(wow)”效果，并且能够吞咽一些在他的鼻子中堆积的物质。他说存在帮助他清理他的鼻子并且允许他更好地呼吸的吸入作用。他服用片剂持续了三个连续的晚上，并且说他比先前的三周睡眠更好。他评论说，每片包含1mg的DAPA-2-5的两片片剂或包含1.5mg的DAPA-2-5的一片片剂是用于他的鼻充血的有效补救。该结果是令人惊讶的，这是因为其表明鼻膜(包括鼻咽)不适能够通过DAPA-2-5在喉咙中的感觉效果减轻。DAPA-2-5可以在咽粘膜上具有血管收缩作用，并且降低鼻咽中的气流阻力。

案例研究3

68岁的男性在加利福尼亚州的卡梅尔海度假。在正餐期间，他喝了两杯酒。由于他对盛开的花过敏，因此他的鼻道感觉到有点充血。在晚上，他服用了包含2mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT)，并且躺在床上，他说他的鼻子和喉咙中的气流感觉到了缓解和“超舒适”。具有海的气息的凉爽空气是完美的。不存在流动的阻力，并且他的呼吸是“毫不费力的”。在该经历中，他感到欣快和欣喜。

案例研究4

66岁女性和69岁男性两个受试者患有哮喘。他们均具有他们说可以忍受的白天期间的干咳和湿咳的发作。然而，在晚上，在喉咙中的窒息和堆积物质的感觉下，他们经常在半夜醒来。他们谈论喘息是由于胸中的气流遇到了堆积的粘液质。在两个个体中，包含1mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT-A)在控制窒息和作呕方面是有效的并且允许他们再次入睡。一个受试者在邮件中写道：“只想让你知道昨晚半夜我在发痒和无法忍受的咳嗽以及可怕喉咙不透气下醒来-一次又一次地咳嗽和清嗓。由于我太累，我只是想我能否忍耐过去，我能够平静下来并且继续睡觉(太懒惰以至于没有起床，打开灯以寻找片剂)；但运气不佳-在连续窒息和咳嗽之后，我迫使我自己起来并且将一片片剂放置在喉咙深处，随着片剂深入喉咙，咳嗽渐缓，并且我感到轻松。然后，不透气的喉咙放松，并且我能够摆脱粘液质，然后在10min内继续睡觉一直到今天早晨！”。在该受试者中，连续观察到了粘液质的散开，并且表明DAPA-2-5可以促进咳痰反射。两个受试者都注意到了痛苦、断续的咳类型(hacking type)咳嗽由DAPA-2-5片剂减弱，但没有损伤咳出粘液的能力。

第二个受试者患有咳嗽变异性哮喘，当他从旧金山海湾地区移至香港时其严重恶化。三个月没有停止咳嗽，并且减少了他的社交活动。当引入包含1.5mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT-A)时，他将一次服用两片或三片片剂以控制他的不适。他指出DAPA-2-5ODT将在他的喉咙中“削弱他的咳嗽刺激物”。在一周试验之后，他的咳嗽完全在控制之下，并且他评论说“他的生命已经得到了解救”。

然而，在该受试者中，起源于气管和支气管的深层咳嗽(deep-seatedcoughs)仍然是刺激和痛苦的。为了改变递送，将4mg/mL的DAPA-2-5首先溶解在25％wt/wt的柠檬汁和1.5％wt/wt的木糖醇的溶液中，并且指导受试者将1mL的溶液(储存在2mL的微量离心管)投入至他的口后面。令人惊讶地，该递送系统比ODT更有效。受试者感到好像溶液快速通过上食管括约肌，并且进入食管以发挥稳定的冷却作用。然后，感觉到该冷却作用从胸和气道的中心发生。因此，激活了宽的神经元感受野。

通过以2mg/mL的溶液(在蒸馏水中)将DAPA-2-5放置在连接至约克喷管(Yorker Spout)(E.D.Luce packaging)的波士顿圆1/2盎司(BostonRound1/2oz)(14mL)容器中，进行液体递送系统的进一步改变。指导受试者将喷管的尖端放置在口的后面，并且轻轻挤出液滴。大致地，该方法递送0.2mL至0.3mL。这也是控制气道不适的有效方法。

案例研究5

67岁老人喜欢吃冰淇淋，但患有偶尔的“冰淇淋头痛”，由响应于过度冷的脑血管反射血管收缩引起的状况。个体是化学家和科学家，并且在听到术语“动态凉爽”和“冰冷”时，自愿尝试各自包含2mg的DAPA-2-5或DAPA-2-7的口腔崩解片(ODT-A)，以察看这些物质是否将促成“冰淇淋头痛”。没有ODT促成头痛响应。受试者谈论了DAPA-2-5ODT如何使他想起包含氯仿的老式(obsolete)糖浆的味道。作为化学家，他熟悉氯仿的味道。他说DAPA-2-5ODT具有相同的使人愉快的甜味、“有机”品质、以及快速开始的作用。该个体还喜欢过食，并且具有由过量的披萨、冰淇淋、泡腾咖啡、以及仰卧式促成的胃内容物回流至喉咙的偶尔发作。通过快速吞咽两片DAPA-2-5ODT，他立即控制了他的来自酸反流的喉咙不适以及呕吐的强烈欲望。在另一场合，该个体在过快吞咽食物之后出现打嗝。通过服用两片DAPA-2-5ODT，在几分钟内停止了这些打嗝。

案例研究6

78岁的中国女性拥有她自己的旅游公司，并且经常带领旅游团去香港、上海、纽约、以及洛杉矶。她精力充沛并且健康，但抱怨由于连续长时间讲话而“嘶哑”和“失音”。她询问以尝试包含1mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT-A)。她说存在来自喉咙不适的立即减轻，并且她能够再次有效地说话和沟通。针对二十次试验，已经重复地观察到了这种有益效果。

案例研究7

均超过60岁的六位女性遭受超过8周时间的不定时喉咙不适。喉咙不适的起因是过敏、过度吸烟、以及心理性(问题)。在根据“按照需要的基础”服用ODT的指示下，将包含0mg(安慰剂)或1.0mg的DAPA-2-5的口腔崩解片(ODT-A)给予这些个体，但在任何一天都不超过三片片剂。激励这些个体尝试片剂以获得感觉减轻。受试者在学习如何自我给予ODT中，不具有困难。立即将安慰剂ODT确定为无效用，并且在一次实验之后拒绝服用。DAPA-2-5ODT在减轻喉咙不适中具有100％的效能。在所有受试者中达到了期望的药物作用。个体不仅感觉较好，而且她们停止了使用储存在她们的药柜中的所有其他药物如薄荷油、抗酸剂、 以及关于DAPA-2-5ODT抵消所有测试受试者的咽刺激的能力，不存在不明确之处。

案例研究8

73岁的超重男性去高尔夫球练习场，并且击中100个球的桶(bucket)，然后继续行走并且打满18洞。他习惯用右手。后来，他与他的朋友吃了5道菜，并且喝了3杯酒。后来在晚上，他抱怨在他的左胸肌和锁骨上区存在酸痛和疼痛。然后，他抱怨胸闷、胸骨后面疼痛、以及呼吸短促。他感觉到在他的口中有酸味，并且服用了一些Alka-Seltzer、抗酸剂，然后是善胃得片剂(Zantac tablet)。这些药物没有减轻他的胸痛或不舒服的感觉，并且他感到了焦虑、脸发红、以及出汗。他担心“死亡可能接近了”，并且想到他是否应该呼叫他的医院急救服务。他居住在郊区，因此对于他而言不方便开车去他的医院所处的城市。

他决定尝试先前已经给他的一些实验DAPA-2-5片剂，并且一口吞咽(利用水)各包含约1.5mg DAPA-2-5的三片片剂。他说感觉到凉爽的水涌进他的喉咙并且慢慢渗透在他的胸中。凉爽强烈，但渐进并且渗透。他的胸骨后面的疼痛快速减小，并且他感到更舒适和激动(不安)减少。他入睡并且直到第二天早晨才醒来。然后，他去看了他的私人医生，医生测量他的血清肌钙蛋白水平并且然后使他通过使用练习踏旋器的心脏压力试验。他的酶水平和心电图均在正常范围内。他的医生建议他注意饮食和体重，除此之外不必担心他的心脏，他的心脏看起来是健康的。

68岁的男人与一群朋友出去一起吃四川菜，其中，特色菜是用四川辣椒和辣椒油充分烹饪的猪肉菜和烤鱼菜。晚上，他喝了茅台酒[按体积计53％的酒精含量]。接近午夜，他开始经历胸痛，并且突发热汗。他的脸变红，并且他喘不过气来。他的同事想知道是否应该将他送到医院。但随后一位吸烟的客人记起在他的口袋中有一些DAPA-2-5片剂。他将四片片剂让这位痛苦的个体用一口水吞咽下去，并且令桌旁的每一个人惊奇的是，在约10min内胸痛不适的症状消失。个体恢复并且能够自己开车回家。

在两种情况下，好像消化不良[非心源性疼痛]的症状可以与由心肌的不充分充氧引起的胸痛[例如，咽痛或心源性疼痛引起的冠状动脉障碍]混淆。减轻非心源性疼痛而不是心源性疼痛的DAPA-2-5分子的可用性将是胸痛起因的鉴别诊断的有价值辅助物(佐剂，adjunct)。

案例研究9

71岁的退休警官是肌肉身材，但在5英尺5英寸(165cm)和185磅(84kg)下的理想体重之上。他在他的大学队踢足球，具有短脖子，以及强大的斜方肌。至少五年来，他抱怨睡眠不好以及白天疲劳。服用镇静剂如没有帮助他睡得更好，并且他担心他的驾驶技能的削弱。他的妻子抱怨他打鼾，并且要求使用单独的卧室。多道睡眠描记术测试表明了阻塞性睡眠呼吸暂停的边缘型诊断，但他不能够忍受使用连续气道正压通气面罩和机器，这是因为他说其给他幽闭恐怖症和窒息的感觉。在睡觉之前，他自愿服用包含2mg的DAPA-2-5的片剂。他的妻子立即注意到他停止了打鼾。他说由于片剂在喉咙中给他清新的感觉和放松呼吸凉爽空气的感觉，因此他睡眠更好。现在，他根据“按照需要基础”使用片剂。他表明这些片剂在睡眠呼吸暂停中也具有价值。

全面总结

在类似同源物的组中寻找正确的治疗分子，非常像是大海捞针。选择过程取决于连续不断的实验。

已经提出的构思是：能够将由分子的局部施加捕获的排热感觉用于减轻非角化性组织的不适。通过合成化合物和设计测试，将名称为DAPA-2-5的分子确定为具有用于实现该目的的选择性的期望性能。针对呼吸消化道的非角化性复层上皮，DAPA-2-5是选择性的，产生了强大的、冷却感觉，而不存在刺激和刺痛。在角化皮肤中没有看到该效果。在受体靶上，其对于TRPM8而非TRPVI和TRPA1是选择性的。当在实验室动物上进行生物测定时，DAPA-2-5选择性地抑制了热水肿，并且没有在皮肤上产生刺激。DAPA-2-5在抑制大鼠中盐酸诱导的吞咽中是选择性最有效的类似物。当配制在ODT中并且在志愿者中进行测试时，DAPA-2-5是用于减轻上消化道感觉不适的选择性最佳分子。

Claims (10)

1.1-二仲丁基膦酰基戊烷在制备用于治疗来自非角化性复层上皮组织的感觉不适的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述非角化性复层上皮组织位于上呼吸消化道表面上。

3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述非角化性复层上皮组织位于口腔表面上、呼吸上皮表面上、鼻腔膜表面上、鼻内膜表面上、口咽表面上或咽表面上。

4.根据权利要求1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由吞咽困难引起。

5.根据权利要求1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由胃内容物反流引起。

6.根据权利要求1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由喉咽反流引起。

7.根据权利要求1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由胃食管反流引起。

8.根据权利要求1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由打嗝引起。

9.根据权利要求1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由咽炎引起。

10.根据权利要求1所述的用途，其中，位于咽表面上的来自非角化性复层上皮组织的所述感觉不适由扁桃体炎引起。