JP4783872B2 - 免疫測定方法 - Google Patents
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Description
(1)上記担体上に上記結合剤を介して固定化された上記抗体に対し、被測定物質を提供する工程と、
(2)抗原抗体反応により、上記抗体と上記被測定物質との複合体を形成する工程と、
(3)上記抗体と上記被測定物質とが複合体を形成した際に、上記抗体が上記結合剤との結合を解消することで、上記担体上から解離する工程、
(4)解離した上記抗体の上記標識体の量を計測する工程
を含む。
多くの生体試料のpHは中性である。従って、pHを低下させる工程なしに、生体試料は溶液として用いられ得る。従って、本発明では、pHの低下による生体試料への悪影響が回避され得る。
図1は、実施の形態1における免疫測定方法の基本構成図を示す。抗体102は、被測定物質に特異的に結合する抗体である。標識体103は、抗体102に結合する標識体である。図1(a)に示されるように、抗体102は、結合剤104を介して担体11上に固定化されている。図1(b)に示されるように、抗体102が結合剤104に結合し、抗体−結合剤複合体105を形成する。この抗体−結合剤複合体105は、抗体102と、その抗体102の結合剤結合部位111に結合した結合剤104とを有する。
イムノクロマト試験片および試験用反応液からなるイムノクロマト測定キットに上述の免疫測定法を利用した例を、以下に説明する。図3は、実施の形態1の免疫測定の方法を、当該イムノクロマト測定キットに応用した例を示す。このイムノクロマト測定キットは、特定の物質の表面あるいは内部(固定相または担体と呼ばれる)を、検体を含む物質(移動相)が通過する際に、当該検体中の抗原(被測定物質)と標識抗体とが相互作用する過程を利用して、その被測定物質の存在を確認することを実現する。
ペンサーを用いて、第2の抗体116を溶解した100μlのPBS緩衝液(濃度:1mg/ml)を塗布する。
以下、本発明の免疫測定方法の具体例を示す。本実施例では、表面プラズモン共鳴装置(以下、SPR装置)を用いた測定を行った。具体的には、Biacore社製のBiacore3000システム(以下、Biacoreと記す)を測定装置として使用した。この測定装置は、表面プラズモン共鳴現象を測定原理として、生体分子間の相互作用を標識なしで検出することが可能な分析装置である。Biacoreを使用して測定対象である分子の間の相互作用を測定するためには、測定対象分子の一方を測定用チップに固定化し、固定した分子に作用する分子を含む試料液を当該測定用チップ表面に送液する。このとき、この測定装置は、測定用チップの表面で起こる分子間の結合・解離に帰因する微量の質量変化を表面プラズモン共鳴シグナルとして検出し、当該シグナルを経時的にモニタして、そのモニタした結果をセンサーグラムとして記録する。
hSAと2F13F11G11との特異性を測定するため、hSAの代わりに2F13F11G11と反応しないウシ血清アルブミン(以下、BSAと記す)を用いて同様の実験(pH:7.4)を実施した。
2F13F11G11に代えて、11−4B抗体、42−DA3抗体、および13−3B抗体が用いられ、実施例1と同様に実験(pH:7.4)が実施された。
11−4B抗体は、受託番号FERM BP−7937号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体であった。
42−DA3抗体は、受託番号FERM ABP−10637号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体であった。
13−3B抗体は、受託番号FERM BP−7938号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体であった。
図9は、11−4B抗体が用いられた測定の結果得られたセンサーグラムを示す。
図10は、42−DA3抗体が用いられた測定の結果得られたセンサーグラムを示す。
図11は、13−3B抗体が用いられた測定の結果得られたセンサーグラムを示す。
図9〜図11から理解されるように、hSAまたはBSAを流入しても、レスポンスの低下は観測されなかった。従って、2F13F11G11およびhSAの組合せのみが、pH6上8.9以下での、好ましくはpH7.4以上8.9以下での、免疫グロブリンG抗体の前記プロテインAからの解離を可能にする。
次に、本発明の免疫測定方法に適した条件について、SPR装置での測定例を示す。
101 被測定物質
102 抗体
103 標識体
104 結合剤
105 抗体−結合剤複合体
111 イムノクロマト試験片
112 PTFE基板
113 ニトロセルロースメンブレン
114 ガラス繊維濾紙
115 吸水性パッド
116 第2の抗体
Claims (24)
- 基板の表面にプロテインAを介して結合している免疫グロブリンG抗体を、前記表面から解離させる方法であって、
前記方法は、以下の工程(A)および(B)を具備する:
プロテインAを介して免疫グロブリンG抗体が結合している表面を有する基板を用意する工程(A)、および
ヒト血清アルブミンを含有する溶液を前記表面に提供し、前記免疫グロブリンG抗体を前記プロテインAから解離させる工程(B)
を含み、
ここで、前記免疫グロブリンG抗体は、受託番号FERM BP−10459号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体(2F13F11G11)であり、
前記溶液は6以上8.9以下のpHを有する。 - 前記工程(B)において、抗原抗体反応によって、前記免疫グロブリンG抗体と前記ヒト血清アルブミンとの複合体が形成される、請求項1に記載の方法。
- 前記複合体が形成された際に、前記免疫グロブリンG抗体が前記表面から解離する、請求項2に記載の方法。
- 前記工程(B)の後、前記溶液が前記表面から解離した前記免疫グロブリンG抗体を含有している、請求項1に記載の方法。
- 前記工程(B)の後、前記溶液が前記複合体を含有している、請求項2に記載の方法。
- 前記pHは、7.4以上8.9以下である、請求項1に記載の方法。
- 前記溶液は、緩衝液である、請求項1に記載の方法。
- 前記pHは、7.4以上8.9以下である、請求項7に記載の方法。
- 溶液に含まれるヒト血清アルブミンを定量する方法であって、以下の工程(A)〜工程(C)を具備する:
プロテインAを介して免疫グロブリンG抗体が結合している表面を有する基板を用意する工程(A)、
ここで、前記免疫グロブリンG抗体は、標識体によって修飾されており、
前記免疫グロブリンG抗体は、受託番号FERM BP−10459号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体(2F13F11G11)であり、
ヒト血清アルブミンを含有する溶液を前記表面に提供し、前記免疫グロブリンG抗体を前記プロテインAから解離させて前記溶液に混合する工程(B)、ここで
前記溶液は6以上8.9以下のpHを有し、および
前記溶液に混合された前記免疫グロブリンG抗体を修飾する前記標識体を定量し、前記溶液に含有される前記ヒト血清アルブミンを定量する工程(C)。 - 前記工程(B)において、抗原抗体反応によって、前記免疫グロブリンG抗体と前記ヒト血清アルブミンとの複合体が形成される、請求項9に記載の方法。
- 前記複合体が形成された際に、前記免疫グロブリンG抗体が前記表面から解離する、請求項10に記載の方法。
- 前記工程(B)の後、前記溶液が前記表面から解離した前記免疫グロブリンG抗体を含有している、請求項9に記載の方法。
- 前記工程(B)の後、前記溶液が前記複合体を含有している、請求項10に記載の方法。
- 前記pHは、7.4以上8.9以下である、請求項9に記載の方法。
- 前記溶液は、緩衝液である、請求項9に記載の方法。
- 前記pHは、7.4以上8.9以下である、請求項15に記載の方法。
- 溶液がヒト血清アルブミンを含有するかどうかを決定する方法であって、以下の工程(A)〜工程(D)を具備する:
プロテインAを介して免疫グロブリンG抗体が結合している表面を有する基板を用意する工程(A)、
ここで、前記免疫グロブリンG抗体は、標識体によって修飾されており、
前記免疫グロブリンG抗体は、受託番号FERM BP−10459号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体(2F13F11G11)であり、
ヒト血清アルブミンを含有する可能性がある溶液を前記表面に提供し、前記免疫グロブリンG抗体を前記プロテインAから解離させて前記溶液に混合する工程(B)、ここで、
前記溶液は6以上8.9以下のpHを有し、
前記溶液に混合された前記免疫グロブリンG抗体を修飾する前記標識体を検出する工程(C)、および
前記工程(C)において前記標識体が検出されれば、前記溶液が前記ヒト血清アルブミンを含有していることを決定する工程(D)。 - 前記工程(B)において、抗原抗体反応によって、前記免疫グロブリンG抗体と前記ヒト血清アルブミンとの複合体が形成される、請求項17に記載の方法。
- 前記複合体が形成された際に、前記免疫グロブリンG抗体が前記表面から解離する、請求項18に記載の方法。
- 前記工程(B)の後、前記溶液が前記表面から解離した前記免疫グロブリンG抗体を含有している、請求項17に記載の方法。
- 前記工程(B)の後、前記溶液が前記複合体を含有している、請求項18に記載の方法。
- 前記pHは、7.4以上8.9以下である、請求項17に記載の方法。
- 前記溶液は、緩衝液である、請求項17に記載の方法。
- 前記pHは、7.4以上8.9以下である、請求項23に記載の方法。
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