JPH03185000A - プロテインＡと免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）との結合方法 - Google Patents
プロテインＡと免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）との結合方法Info
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- JPH03185000A JPH03185000A JP32377389A JP32377389A JPH03185000A JP H03185000 A JPH03185000 A JP H03185000A JP 32377389 A JP32377389 A JP 32377389A JP 32377389 A JP32377389 A JP 32377389A JP H03185000 A JPH03185000 A JP H03185000A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、免疫グロブリンＧ（以下ＩｇＧと略称する）
の結合、特に不溶性指示体に固定化されたプロティンＡ
とＩｇＧの結合に関するものである。
の結合、特に不溶性指示体に固定化されたプロティンＡ
とＩｇＧの結合に関するものである。
（従来の技術）
プロティンＡは、ＩｇＧのＦｃ部分と結合するため不溶
性指示体にプロティンＡを固定化し、ＩｇＧの分離、精
製手段として従来より用いられてきた。
性指示体にプロティンＡを固定化し、ＩｇＧの分離、精
製手段として従来より用いられてきた。
プロティンＡとＩｇＧとの結合は、Ｋ ｒ ｏ ｎ ｖ
ａｌｌらにより発見された（Ｊｏｕｒｎａｌ 。
ａｌｌらにより発見された（Ｊｏｕｒｎａｌ 。
ｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１０５．１１１６（１９
７０） ）。
７０） ）。
その後、ＭａｃｋｅｎｚｉｅらによりＩｇＧの分離を改
善する試みが、ＰｒｏｔｅｉｎＡ−８ｅｐｈａｒｏｓｅ
４Ｂカラムを用いて検討されたが、マウスＩｇＧ１とＩ
ｇＧ２との結合量が少なく再現性も無かった。（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１２０；
１４９３ （１９７８））。またＢｙｗａ ｔ ｅ
ｒらは、１６種類の異なる溶離液を用いてＩｇＧの精
製を検討したが、従来の方法と比較して改善することは
できなかった。
善する試みが、ＰｒｏｔｅｉｎＡ−８ｅｐｈａｒｏｓｅ
４Ｂカラムを用いて検討されたが、マウスＩｇＧ１とＩ
ｇＧ２との結合量が少なく再現性も無かった。（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１２０；
１４９３ （１９７８））。またＢｙｗａ ｔ ｅ
ｒらは、１６種類の異なる溶離液を用いてＩｇＧの精
製を検討したが、従来の方法と比較して改善することは
できなかった。
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ
ａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、６４．１ （１９８３）。
ａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、６４．１ （１９８３）。
一方、Ｈｅｃｔｏｒらは、０．５Ｍ以上好ましくは１〜
４Ｍの無機塩を含むｐＨ８，５〜９．５の緩衝液用いる
ことで、不溶性指示体に固定化されたプロティンＡとＩ
ｇＧの結合を改善した（ＵＳ Ｐａｔｅｎｔ ４，
７０４．３６６）ｏ しかしながら、塩濃度が高すぎ
るため蛋白質が沈殿したり、溶液の粘度も高く、特にハ
ロゲンイオンを含む塩では、分離、精製装置のステンレ
ス部に腐蝕が発生しやすい等の欠点があった。
４Ｍの無機塩を含むｐＨ８，５〜９．５の緩衝液用いる
ことで、不溶性指示体に固定化されたプロティンＡとＩ
ｇＧの結合を改善した（ＵＳ Ｐａｔｅｎｔ ４，
７０４．３６６）ｏ しかしながら、塩濃度が高すぎ
るため蛋白質が沈殿したり、溶液の粘度も高く、特にハ
ロゲンイオンを含む塩では、分離、精製装置のステンレ
ス部に腐蝕が発生しやすい等の欠点があった。
（本発明が解決しようとしている問題点）本発明の目的
は、前記従来の方法の欠点を克服して不溶性指示体に固
定化されたプロティンＡとＩｇＧとの結合に野ぞせまれ
る書生質を十分に具備する方法を提供することにある。
は、前記従来の方法の欠点を克服して不溶性指示体に固
定化されたプロティンＡとＩｇＧとの結合に野ぞせまれ
る書生質を十分に具備する方法を提供することにある。
（問題を解決するための手段）
本発明は、従来の技術が有する問題点を解決すべくなさ
れた。
れた。
本発明者らは、不溶性指示体（゛こ固定化されたプロテ
ィンＡとＩｇＧとの結合を特定の液性の溶液中で行うこ
とによりこれらの問題点を克服した。
ィンＡとＩｇＧとの結合を特定の液性の溶液中で行うこ
とによりこれらの問題点を克服した。
すなわち、本発明は、不溶性指示体に固定化されたプロ
ティンＡにＩｇＧを結合させる方法において、クエン酸
塩あるいは、酒石酸塩を０．２Ｍ以上含むｐＨ７以上の
緩衝液を用いることを特徴とするプロティンＡと免疫グ
ロブリンＧ（ＩｇＧ）との結合方法を提供するものであ
る。
ティンＡにＩｇＧを結合させる方法において、クエン酸
塩あるいは、酒石酸塩を０．２Ｍ以上含むｐＨ７以上の
緩衝液を用いることを特徴とするプロティンＡと免疫グ
ロブリンＧ（ＩｇＧ）との結合方法を提供するものであ
る。
本発明で使用されるクエン酸塩及び酒石酸塩としては、
水溶性であればいずれでもよく、塩濃度は０．２Ｍ以上
好ましくは、０．４〜２Ｍである。
水溶性であればいずれでもよく、塩濃度は０．２Ｍ以上
好ましくは、０．４〜２Ｍである。
ｐＨ７以上の緩衝液とするために用いられる塩は、ｐｌ
Ｆ（７〜９．５に緩衝能力のある塩であればいずれを用
いてもよい。
Ｆ（７〜９．５に緩衝能力のある塩であればいずれを用
いてもよい。
不溶性指示体としては、ポリアクリルアミド。
アガロース、セルロース、ポリヒドロキシアルキルメタ
クリレート、シリカ等いずれもを使用することができる
。
クリレート、シリカ等いずれもを使用することができる
。
（実施例）
以下、本発明を実施例により説明するが本発明は、これ
らにのみ限定されるものではない。
らにのみ限定されるものではない。
実施例Ｉ
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ−８ｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ（商品
名、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）、１ｍｌをオーブンカラム
（内径０．８ｃｍ、長さ１０ｃｍ）に充てんし、緩衝液
Ａ（０，１Ｍグリシン＋０，４Ｍクエン酸ナトリウム（
ｐＨ９，０））５ｍｌで平衡化した。マウス腹水（ヒト
・アルブミンに対するモノクローナル抗体１ｇＧを７
ｍｇ含有） （Ｃｅｄａｒｌａｎｅ社）０．５ｍｌを
緩衝液Ａ０．５ｍｌで希釈してカラムに添加しプロティ
ンＡとＩｇＧとを結合させた。
名、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）、１ｍｌをオーブンカラム
（内径０．８ｃｍ、長さ１０ｃｍ）に充てんし、緩衝液
Ａ（０，１Ｍグリシン＋０，４Ｍクエン酸ナトリウム（
ｐＨ９，０））５ｍｌで平衡化した。マウス腹水（ヒト
・アルブミンに対するモノクローナル抗体１ｇＧを７
ｍｇ含有） （Ｃｅｄａｒｌａｎｅ社）０．５ｍｌを
緩衝液Ａ０．５ｍｌで希釈してカラムに添加しプロティ
ンＡとＩｇＧとを結合させた。
緩衝ｊｆｆｌＡ１０ｍｌでカラムを洗浄後、Ｏ，１Ｍグ
リシン−ＨＣｌ （ｐＨ２，８）３ｍｌを流しＩｇＧ
を脱着回収したところ９６％のＩｇＧを回収できた。
リシン−ＨＣｌ （ｐＨ２，８）３ｍｌを流しＩｇＧ
を脱着回収したところ９６％のＩｇＧを回収できた。
実施例２
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ−３ｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ％
１１１１１をオーブンカラム（内径０．８ｃｍ、長さ１
ｃｍ）に充てんし、緩衝液Ｂ（０，１Ｍグリシン＋０．
４Ｍ酒石酸ナトリウム（ｐＨ９，０））５０１１で平衡
化した。実施例１と同じ、マウス腹水０゜５ ｍｌで希
釈し、カラムに添加しプロティンＡとＩｇＧとを結合さ
せた。緩衝液８１０ ｍｌでカラムを洗浄後、０，１Ｍ
グリシン−ＭＣＩ （ｐＨ２，８）、３ｍｌでＩｇＧ
を回収したところ９８％であった。
１１１１１をオーブンカラム（内径０．８ｃｍ、長さ１
ｃｍ）に充てんし、緩衝液Ｂ（０，１Ｍグリシン＋０．
４Ｍ酒石酸ナトリウム（ｐＨ９，０））５０１１で平衡
化した。実施例１と同じ、マウス腹水０゜５ ｍｌで希
釈し、カラムに添加しプロティンＡとＩｇＧとを結合さ
せた。緩衝液８１０ ｍｌでカラムを洗浄後、０，１Ｍ
グリシン−ＭＣＩ （ｐＨ２，８）、３ｍｌでＩｇＧ
を回収したところ９８％であった。
比較例
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ−３ｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ
、％ １ ｍｌをオーブンカラム（内径０．８ｃｍ、長
さ１０ｃｍ）に充てんし、緩衝液Ｃ（０，１Ｍグリシン
（ｐＨ９，０））５ｍｌで平衡化した。実施例１と同じ
、マウス腹水０．５ｍｌを緩衝液Ｃ，０，５ｍｌで希釈
し、カラムに添加した。緩衝液Ｃ，１０ｍ１でカラムを
洗浄後、０．１Ｍグリシ＞−ＨＣＩ（ｐＨ２，ｌ１ｌ）
、３ｍｌでＩｇＧを回収した。（回収率２０％で残り
の８０％はプロティンＡカラムに吸着しなかった。）
、％ １ ｍｌをオーブンカラム（内径０．８ｃｍ、長
さ１０ｃｍ）に充てんし、緩衝液Ｃ（０，１Ｍグリシン
（ｐＨ９，０））５ｍｌで平衡化した。実施例１と同じ
、マウス腹水０．５ｍｌを緩衝液Ｃ，０，５ｍｌで希釈
し、カラムに添加した。緩衝液Ｃ，１０ｍ１でカラムを
洗浄後、０．１Ｍグリシ＞−ＨＣＩ（ｐＨ２，ｌ１ｌ）
、３ｍｌでＩｇＧを回収した。（回収率２０％で残り
の８０％はプロティンＡカラムに吸着しなかった。）
Claims (1)
- 不溶性指示体に固定化されたプロテインＡにＩｇＧを結
合させる方法において、クエン酸塩あるいは、酒石酸塩
を０．２Ｍ以上含むｐＨ７以上の緩衝液を用いることを
特徴とするプロテインＡと免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）
との結合方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32377389A JPH03185000A (ja) | 1989-12-15 | 1989-12-15 | プロテインＡと免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）との結合方法 |
| EP90123350A EP0432629A1 (en) | 1989-12-15 | 1990-12-05 | Method for binding immunoglobulin G to protein A |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32377389A JPH03185000A (ja) | 1989-12-15 | 1989-12-15 | プロテインＡと免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）との結合方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03185000A true JPH03185000A (ja) | 1991-08-12 |
Family
ID=18158461
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32377389A Pending JPH03185000A (ja) | 1989-12-15 | 1989-12-15 | プロテインＡと免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）との結合方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0432629A1 (ja) |
| JP (1) | JPH03185000A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4783872B2 (ja) * | 2009-11-25 | 2011-09-28 | パナソニック株式会社 | 免疫測定方法 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5200471A (en) * | 1990-11-05 | 1993-04-06 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Biomolecules covalently immobilized with a high bound specific biological activity and method of preparing same |
| JPH05149952A (ja) * | 1991-11-26 | 1993-06-15 | Tosoh Corp | プロテインＡと免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）との結合方法 |
| US6447777B1 (en) * | 1996-03-29 | 2002-09-10 | David S. Terman | Polymerized staphylococcal protein a for treatment of diseases |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4704366A (en) * | 1984-06-22 | 1987-11-03 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Process for binding IgG to protein A |
| US4801687A (en) * | 1986-10-27 | 1989-01-31 | Bioprobe International, Inc. | Monoclonal antibody purification process using protein A |
| JPS6419024A (en) * | 1987-07-15 | 1989-01-23 | Tosoh Corp | Separation of immunoglobulin g subclass |
| US4933435A (en) * | 1989-04-05 | 1990-06-12 | Bioprobe International | Antibody purification process |
-
1989
- 1989-12-15 JP JP32377389A patent/JPH03185000A/ja active Pending
-
1990
- 1990-12-05 EP EP90123350A patent/EP0432629A1/en not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4783872B2 (ja) * | 2009-11-25 | 2011-09-28 | パナソニック株式会社 | 免疫測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0432629A1 (en) | 1991-06-19 |
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