JP4693777B2 - カルシウム欠乏症予防及び／又は治療剤 - Google Patents

Description

本発明は、ダイフラクトース アンハイドライド（Ｄｉｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ：ＤＦＡ、以下、ＤＦＡということもある）を有効成分として含有する血中や乳中のカルシウム欠乏症の予防及び／又は治療剤に関するものである。
更に、詳細には、本発明は、ダイフラクトース アンハイドライドＩ（以下、ＤＦＡ Ｉということもある）、ダイフラクトース アンハイドライドＩＩ（以下、ＤＦＡ ＩＩということもある）、ダイフラクトース アンハイドライドＩＩＩ（以下、ＤＦＡ ＩＩＩということもある）、ダイフラクトース アンハイドライドＩＶ（以下、ＤＦＡ ＩＶということもある）、ダイフラクトース アンハイドライドＶ（以下、ＤＦＡ Ｖということもある）から選ばれた１もしくは２以上からなるものを有効成分として含有する血中や乳中のカルシウム欠乏症の予防及び／又は治療剤に関するものである。

食生活が改善されたとはいえ、特に、日本人のカルシウム摂取量は栄養必要量を下回っており、その点の改良が求められている。しかしながら、日本人の平均的な食生活習慣では、充分なカルシウム量を摂取するのは相当困難であるのが現状である。
カルシウムは、膜の保全と調節、収縮や分泌や興奮プロセスのコントロール、胃の支持その他の生理作用を有しており、人体に必須のミネラルのひとつであって、きわめて重要であることは周知の通りである。そして、特に産後（分娩後）の産婦にとっては、血中カルシウム濃度が低下しており、授乳中の産婦は更に乳中カルシウム濃度や産乳量が低下する傾向が認められ、母乳中のカルシウム濃度の低下のほか、母体自体にも低カルシウム血症等が生じて母体の健康にも支障が生じてくる。これらに対処するため、カルシウム剤やビタミンＤ剤の投与等が行われているが、充分に満足し得るには至っていない。
乳牛等哺乳類についても、カルシウムに関する事情は上記したヒトの場合と同様である。哺乳動物である乳牛の乳へのカルシウムの供給源は、血中のカルシウムであり、飼料中のカルシウムや骨など体組織から移行している。哺乳動物の代表である乳牛の血中のカルシウム濃度は通常９〜１１ｍｇ／ｄｌで、過剰にカルシウムを給与されると、腸管からの吸収が減少し、糞尿中への排泄量が増加する。この結果、牛乳のカルシウムは乳牛の品種や乳成分の影響を受けるものの、ほぼ一定に保たれている。
また、乳牛は分娩前後の周産期において血中カルシウム濃度が低下し、低カルシウム血症の病態を呈する。低カルシウム血症は血中カルシウム濃度が７ｍｇ／ｄｌ以下で、５ｍｇ／ｄｌ以下になると、起立不能となり重篤な場合は死亡する。これは乳熱とも呼ばれ、米国で乳牛の約６％が罹患し、乳房炎（大腸菌性）や、第四胃変位、胎盤停滞およびケトーシスなどの代謝性疾患を併発しやすい。また、臨床症状が出るまでには至らない、潜在性低カルシウム血症は経産牛の６６％程度に起こり、分娩直後の牛を食欲不振にさせて、乳熱と同様にケトーシス、胎盤停滞、第四胃変位、および乳房炎などの疾病を起こしやすくさせる。更に、低カルシウム血症が長期化すると、牛乳自体のカルシウム濃度が低下する場合がある。
乳牛は、泌乳開始により分娩を境としてカルシウムの出納がドラスチックに変化する。すなわち、泌乳開始によって初乳中に大量のカルシウムが分泌され、その一方、血中のカルシウム濃度が低下して、その程度が著しい場合には起立不能に陥る。
乳牛の低カルシウム血症を改善させる方法として、ビタミンＤを給与したり、乳熱牛に対してはカルシウム剤の静脈内投与が一般に行われるが、血中カルシウム濃度の回復・維持が困難な症例の存在が知られている。また、遺伝的改良により乳生産能力が高まった現在、分娩後の泌乳量も多く、これらがさらに低カルシウム血症の牛を増加させ、起立不能など重篤な状態をつくりだし、大きく影響する原因にもなっており、これら乳牛におけるカルシウム欠乏症の克服が待望されている。
また、低カルシウム症を予防する飼育管理法として、乾乳期（１泌乳期の搾乳をやめてから、次の分娩日までの、搾乳を行なわない期間）に飼料中のカルシウム及びリンを制限することが推奨されているが、例えばカルシウム含量が１日当り５０ｇ以下となるように非常に低い飼料は事実上調達不可能であるから、この飼養方法を実際の酪農業に適用して低カルシウム症を予防することはできないのが当業界の現状である。
更にまた、利尿作用は、ヒトの健康維持や疾病の緩和に重要であることは周知のことである。そして、この点は動物についても同様であって、例えば、乳牛等哺乳類（反芻動物）においても、健康維持、疾病の緩和に利尿効果は非常に重要なものである。特に分娩前後の乳牛では乳房浮腫が発生し、重症の場合、乳頭が外傷を受けやすく乳房炎を併発しやすい。また、乳房堤靭帯が脆弱化し、乳房の下垂により搾乳しにくくなる。乳房浮腫の治療に対しては、血液循環改善のために運動やマッサージ等管理方法の改善、利尿剤による治療、外科手術などが知られているが十分な効果をあげるには至っていない。
一方、フラクトース２分子が結合してなるオリゴ糖であるダイフラクトース アンハイドライド（ＤＦＡ）にはダイフラクトース アンハイドライドＩ（ＤＦＡ Ｉ）、ダイフラクトース アンハイドライドＩＩ（ＤＦＡ ＩＩ）、ダイフラクトース アンハイドライドＩＩＩ（ＤＦＡ ＩＩＩ）、ダイフラクトース アンハイドライドＩＶ（ＤＦＡ ＩＶ）、ダイフラクトース アンハイドライドＶ（ＤＦＡ Ｖ）が知られており、これらの構造式は次のとおりである。

そして、ＤＦＡ ＩＩＩ及びＤＦＡ ＩＶについては、ＤＦＡ ＩＩＩを有効成分とするカルシウム吸収亢進組成物及びＤＦＡ ＩＶを有効成分とするカルシウム吸収亢進組成物がそれぞれ既に開示されている（例えば、特許文献１及び特許文献２）。しかしながら、哺乳動物のカルシウム欠乏症や浮腫の予防や治療に効果を有することは記載されていない。なかでも、四つの胃を持つ反芻動物、特に、乳牛に対するＤＦＡによる生理作用は全く明らかにされていない。ましてや、ＤＦＡがこれらの胃の中で分解されないこと、更には、血中カルシウムや乳中カルシウム等のカルシウム欠乏症、浮腫の予防及び／又は治療に有効であること、及び、利尿に有効であることなど全く触れるところがない。
更にまた、ＤＦＡを分娩前に投与することにより分娩後の低カルシウム血症を予防及び／又は治療することは全く知られておらず、ヒトにとっても他の哺乳類にとっても全く新規な知見である。
特許文献１
特許第３５１４９５５号公報
特許文献２
特開２０００−２０４０４２号公報
発明が解決しようとする課題
出産後（分娩後）の母体においては、ただでさえ血中カルシウム濃度が低下して健康に影響が出やすいのであるが、授乳すれば更にその影響は大きくなり、しかもその影響は母体のみにとどまらず乳児にも及び、特に少子化の傾向が強い現代社会において重要な問題として大きくクローズアップされている。
このようなカルシウム濃度低下による健康への悪影響は哺乳類に共通であって、例えば乳牛にあっても、分娩直後には既に血中カルシウム濃度は低下しており、その下り方が大きいほど元気、食欲が低下し、且つ回復が遅れる傾向にあり、それが更に進行すると起立不能となる。そして搾乳すれば更に該傾向は高まり、牛乳の生産量も低下し、乳牛としての寿命も短縮する。
また、健康維持、疾病緩和において利尿作用は重要であるし、浮腫退行（又は予防）作用も重要であって、これらの作用を有するすぐれたシステムの開発も同時に求められている。そして、これらの点については、ヒトのみでなく哺乳動物類その他の動物についても同様である。
本発明は、このような技術の現状に鑑み、産前産後、特に産後（分娩後）の母体における血中カルシウム濃度の低下を抑制する目的、及びヒトその他動物における利尿、浮腫の抑制を効果的に実施する目的でなされたものである。
課題を解決するための手段
本発明は上記目的を達成するためになされたちのであるが、目的が特殊なものである点に鑑み、実際のヒトによる臨床試験の代りに行われる動物実験自体を見直す必要があるとの観点にたった。そこで本発明者らは、動物実験で用いられる動物に着目した。通常、実験動物としては、マウスやラット等の哺乳類が使用されるが、ヒトに比べ小型であるし、本発明の目的が出産後の母体の血中カルシウム濃度の低下抑制であり、母乳との関連も深いことから、本発明者らは、実験動物として乳牛を用いることとした。
乳牛はマウスやラットと比べるとはるかに大型の哺乳類であるし、牛乳に関するメカニズムもヒトの母乳と共通している部分が多く、したがって、乳牛で得られたデータはマウスやラットで得られたデータよりもはるかにヒトに近く、信頼度も高いものということができる。しかしながら、マウスやラットとは異なり、乳牛はその飼養管理がむつかしいうえ、試験期間も非常に長く、コストがかかるという重大な問題があるが、本発明はこれらの点をクリアーし、乳牛を用いた動物実験に成功したものであって、この点が本発明の大きな特徴のひとつである。もちろん、ヒトではなく乳牛の場合には得られたデータはそのまま利用可能であるし、他の哺乳類の場合には乳牛のデータを適宜利用すればよい。
そこで本発明者らは、乳牛を用いて血中カルシウム濃度の低下を抑制する物質を各種スクリーニングした結果、ＤＦＡに着目した。そして本発明者らは、各方面から、鋭意研究の結果、ＤＦＡが、通常の哺乳動物とは異なり、４つの胃を有する独特な消化器系を持つ牛において、複雑にして独特な胃の構成にもかかわらず、分解されないことをはじめて見出した。そしてこの新規有用知見に基づいて更に研究を進めた結果、ＤＦＡは、カルシウム吸収を亢進し、血中カルシウム量が上昇し、その結果、牛乳のカルシウム濃度を高めるとともに、低カルシウム血症を改善するという非常に有用な作用を有することをはじめて見出し、そしてこれらの作用が確実に行われ、再現性があることも確認した。
一般に、乳牛は、特に分娩後において血中カルシウム濃度が減少し、その結果、各種の疾病にかかり易くなり、生産性が低下する危険性が高いうえ、分娩の回数がふえると、それだけカルシウム量も減少するので、ますます生産性が低下することとなり、牛、特に乳牛に特有な問題点の解決が希求されていたのであるが、本発明はこれら牛に独特の問題点を解決するのにもはじめて成功したものである。したがって、本発明によるＤＦＡの牛、特に分娩前後の周産期の乳牛に対する投与はきわめて有効である。
しかも更に特筆すべきことは、本発明においては、ＤＦＡの最も有効な投与時期についても検討がなされた点である。具体的には、血中カルシウム濃度を維持ないし上昇させることが必要な場合、その時期にＤＦＡを投与するのが通常であるから、この技術常識にしたがって、本発明の目的のひとつである分娩後の血中カルシウム濃度の低下抑制のために分娩後の乳牛にＤＦＡ ＩＩＩを給与したところ、血中カルシウム濃度の低下抑制に有効であることを見出した。しかしながら、本発明者らは、これに満足することなく、更に有効なシステムを開発することとし、鋭意研究検討の結果、発想を逆転することによって目的とする更にすぐれた新規システムの開発に成功した。
すなわち本発明者らは、上記したように、各方面から鋭意検討の結果、ＤＦＡ ＩＩＩ給与方法ないし給与時期が重要であるとの観点にたち、研究を行ったが、更に有効なシステムの構築には至らなかった。本発明者らは、ここで発想の転換を痛感し、分娩後のカルシウム濃度の低下抑制に係るシステムを技術常識にしたがって分娩後に実施するのではなく、発想を転換して、というより発想を逆転して、分娩後のカルシウム濃度の低下抑制のためのシステムを効果が全く予測ないし期待されない分娩前にあえて実施してみた。
その結果、全く予期せざることに、ＤＦＡ ＩＩＩを『分娩前』の乾乳期に給与することにより「分娩後」に給与する場合よりも血中カルシウム濃度がより増加するという技術常識、技術水準を大きく超越した新規知見を得た。そして更に研究を続けた結果、次のような新事実をはじめて見出した。
（１）乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与すると、分娩直後の血中カルシウム濃度は給与しない牛よりも増加する。
（２）乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与すると、分娩直後の血中カルシウム濃度は加齢による低下の影響を受けない。
（３）乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与しない場合、分娩直後の血中カルシウム濃度は産次が進むにしたがい低下し、１産次の低下量は０．６ｍｇ／ｄｌ程度と予想された。
（４）乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与すると、血中カルシウム濃度は正常値に戻るのが早く、加齢により遅くなる傾向のある無給与牛とは異なった。
（５）ＤＦＡ ＩＩＩ給与の血中カルシウム濃度増加効果は分娩直後より乾乳期の方がその効果が大きい。
本発明は、上記した有用新知見に基づき更に研究の結果完成されたものであって、出産前（分娩前）にＤＦＡ ＩＩＩ及び／又はＤＦＡ ＩＶを投与することによって、出産後（分娩後）の血中カルシウム濃度の低下を抑制することを基本的な技術思想のひとつとするものである。また、本発明は、ＤＦＡ ＩＩＩ及び／又はＤＦＡ ＩＶを投与するだけでなく、各時期における乳中カルシウム濃度の低下を抑制することによって、出産前を含む各時期における血中カルシウム濃度の低下を抑制することを広く包含するカルシウム欠乏症の予防及び／又は治療に有効であることをはじめて見出した。そのうえ、全く予期せざることに、更に、ＤＦＡ ＩＩＩ、ＤＦＡ ＩＶは、すぐれた利尿作用を有し、乳房浮腫等の浮腫の予防及び／又は治療にも有効であるという有用な新知見も得た。
しかも更に、これらの有用な作用効果は、カルシウム及び／又はビタミンＤによって高められることも新規に見出した。
本発明は、これらの有用新知見に基づいてなされたものであって、ＤＦＡ ＩＩＩ、ＩＶによる抗カルシウム欠乏症作用、利尿作用、抗浮腫作用をはじめて見出し、そのうえ更に、実験動物としてマウスやラットではなく、更にヒトに近い牛、それも乳牛でこれらの作用を確認した点で特徴的である。
もちろん、本発明において牛を対象とする場合はそのデータがそのまま使用できるし、他の動物を対象とする場合も牛の場合と同様にしてこれらの新規生理作用を確認することができる。

図１
ルーメン培養によるＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶ含量の変化を示す。但し、該変化としては、培養液による差はみられなかったため、両培養液の平均値を使用した。
図２
同一牛による乾乳時のＤＦＡ ＩＩＩ給与が分娩直後の血中カルシウム濃度に及ぼす影響を示す。なお、前産次（前回出産した牛）は全牛とも分娩前ＤＦＡ ＩＩＩは無給与であり、今産次（今回出産した牛）のＤＦＡ ＩＩＩ給与牛は分娩２０日前からＤＦＡ ＩＩＩを給与し（１日あたり５０ｇ）、また、図２の右端の数値は個体Ｎｏ．と今回の産次数（何回目の出産かを示す）をハイホンで結んで示す。
図３
乾乳時のＤＦＡ ＩＩＩ給与が分娩直後の血中カルシウム濃度に及ぼす影響（産次別）を示す。
図４
分娩後の血中カルシウム濃度の変化を示す。なお、分娩後採血時間は分娩直後の採血時間を基点とした経過時間である。凡例の中の「あり・今産次」は乾乳時にＤＦＡ ＩＩＩを給与し、今回出産した牛の平均値（８頭）である。「あり・前産次」は「あり・今産次」牛の前産次のデータであるが、前産次においては乾乳時ＤＦＡ ＩＩＩは無給与の牛のデータである。「なし・今産次」は乾乳時にＤＦＡ ＩＩＩを給与しておらず、今回出産した牛の平均値（７頭）である。「なし・前産次」は「なし・今産次」牛の前産次のデータであって、乾乳期ＤＦＡ ＩＩＩは無給与の牛のデータである。「なし・全牛平均」は乾乳期ＤＦＡ ＩＩＩ無給与牛の全データ平均値（３８頭）を示す。
以下、本発明について詳述する。
本発明は、次のとおりのものである。
１． ダイフラクトース アンハイドライド（ＤＦＡ）を有効成分としてなることを特徴とするヒト又は動物用のカルシウム欠乏症、浮腫、尿量の低減の少なくともひとつを予防及び／又は治療する剤。
２． ダイフラクトース アンハイドライド（ＤＦＡ）が、ダイフラクトース アンハイドライドＩ（ＤＦＡ Ｉ）、ダイフラクトース アンハイドライドＩＩ（ＤＦＡ ＩＩ）、ダイフラクトース アンハイドライドＩＩＩ（ＤＦＡ ＩＩＩ）、ダイフラクトース アンハイドライドＩＶ（ＤＦＡ ＩＶ）、ダイフラクトース アンハイドライドＶ（ＤＦＡ Ｖ）から選ばれた１もしくは２以上からなるものであることを特徴とする１項に記載のヒト又は動物用のカルシウム欠乏症、浮腫、尿量の低減の少なくともひとつを予防及び／又は治療する剤。
３． ダイフラクトース アンハイドライドＩＩＩ（ＤＦＡ ＩＩＩ）及び／又はダイフラクトース アンハイドライドＩＶ（ＤＦＡ ＩＶ）を有効成分としてなることを特徴とするヒト又は動物用のカルシウム欠乏症、浮腫、尿量の低減の少なくともひとつを予防及び／又は治療する剤。
４． 更にカルシウム及び／又はビタミンＤを併用してなることを特徴とする１〜３項のいずれか１項に記載の剤。
５． 動物が、反芻動物、その他の哺乳動物、ペット類、鳥類から選ばれる少なくともひとつであることを特徴とする１〜４項のいずれか１項に記載の剤。
６． カルシウム欠乏症が血中及び／又は乳中カルシウム濃度の低減であることを特徴とする１〜５項のいずれか１項に記載の剤。
７． 動物が分娩前又は分娩後の乳牛であることを特徴とする１〜６項のいずれか１項に記載の剤。
８． ＤＦＡ ＩＩＩ及び／又はＤＦＡ ＩＶを有効成分として含有することを特徴とする分娩前のヒト又は動物投与用低カルシウム血症の予防及び／又は治療剤。
９． １〜８項のいずれか１項に記載の剤を経口及び／又は非経口投与することを特徴とするカルシウム欠乏症、浮腫、尿量の低減の少なくともひとつを予防及び／又は治療する方法。
１０． 分娩前及び／又は分娩後に投与することを特徴とする９項に記載の方法。
１１． 分娩前に経口投与することにより分娩後に血中カルシウム濃度の低減を抑制することを特徴とする９又は１０項に記載の方法。
１２． ＤＦＡ ＩＩＩ及び／又はＤＦＡ ＩＶを分娩前にヒト又は動物に投与することを特徴とする分娩後の血中カルシウム濃度の低減を抑制する方法。
１３． 更にカルシウム及び／又はビタミンＤを併用することを特徴とする１２項に記載の方法。
１４． 分娩予定日の２週間前、好ましくは３週間前から投与を開始することを特徴とする請求項１２又は１３に記載の方法。
１５． ＤＦＡ ＩＩＩ及び／又はＤＦＡ ＩＶを乾乳期の乳牛に投与することを特徴とする分娩後の血中カルシウム濃度の低減を抑制する方法。
１６． 乳牛１頭につき、１日当りＤＦＡ ＩＩＩ又はＤＦＡ ＩＶを１〜２００ｇ、好ましくは５〜１００ｇ、更に好ましくは８〜８０ｇ、特に好ましくは１０〜７０ｇ経口投与することを特徴とする１５項に記載の方法。
１７． ＤＦＡ ＩＩＩ及び／又はＤＦＡ ＩＶを含有し、抗カルシウム欠乏症、抗浮腫、利尿の少なくともひとつの作用を有するものであることを特徴とし、カルシウム欠乏症のために、又は浮腫の改善のために、又は利尿のために、用いられるものである旨の表示を付した飲食品又は飼料。
１８． ＤＦＡ ＩＩＩ及び／又はＤＦＡ ＩＶを含有し、分娩後の血中カルシウム濃度の低減を抑制する作用を有することを特徴とし、分娩後の血中カルシウム濃度低減抑制のために分娩前に使用されるものである旨の表示を付した飲食品又は飼料。
１９． 飲食品又は飼料がヒト又は動物用のものであることを特徴とする１８項に記載の飲食品又は飼料。
２０． 動物が牛、山羊、羊、水牛、ラクダ、馬、豚、ペット類から選ばれる少なくともひとつであることを特徴とする１９項に記載の飼料。
２１． 牛が乳牛であることを特徴とする２０項に記載の飼料。
本発明においては、有効成分としてＤＦＡ（ＤＦＡ Ｉ、ＤＦＡ ＩＩ、ＤＦＡ ＩＩＩ、ＤＦＡ ＩＶ及び／又はＤＦＡ Ｖ）を、特にＤＦＡ ＩＩＩ及び／又はＩＶを使用するが、所望に応じて更にカルシウム及び／又はビタミンＤも併用するものである。本発明において有効成分として使用するＤＦＡ ＩＩＩ（ｄｉｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ ＩＩＩ）は、フラクトース２分子が１，２’及び２，３’で結合している２糖類（ｄｉ−Ｄ−ｆｒｕｃｔｆｕｒａｎｏｓｅ−１，２：２，３’ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ）である。ＤＦＡ ＩＩＩは最近工業生産が行なわれるようになった。また、有効成分として利用するＤＦＡ ＩＶ（ｄｉｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ−ＩＶ）は、フルクトース２分子が２，６’：６，２’で結合している２糖類（ｄｉ−Ｄ−ｆｒｕｃｔｆｕｒａｎｏｓｅ−２，６：６，２’ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ）である。
有効成分としてはＤＦＡ Ｉ、ＤＦＡ ＩＩ、ＤＦＡ ＩＩＩ、ＤＦＡ ＩＶ及び／又はＤＦＡ Ｖの精製品、粗精製品、製造工程において生成する中間生成物、同廃液、これらの処理物（濃縮物、ペースト化物、乾燥物、希釈物、懸濁物、乳化物の少なくともひとつ）から選ばれる少なくともひとつが包含される。また、市販品も適宜使用可能である。
本発明にしたがって、上記した有効成分を用いて動物用飲食品、つまり飼料ないし飼料組成物（飲料を含む）及び／又は動物医薬（栄養強化剤、経口投与剤等）を調製するが、その際、ＤＦＡ Ｉ、ＤＦＡ ＩＩ、ＤＦＡ ＩＩＩ、ＤＦＡ ＩＶ及び／又はＤＦＡ Ｖの給与量は、飼料あるいは飲料として給与する場合、１日当たり、動物の体重１ｋｇにつき１０ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１００〜３００ｍｇとするのがよい。また、栄養強化剤、経口投与剤では１回当たり、動物の体重１ｋｇにつき１０ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１００〜３００ｍｇとし、１日１〜３回給与するのがよい。これらの給与量はここで示した範囲のみに限定されるものではなく、この範囲から逸脱する場合もあり得る。
また、本発明において有効成分として使用するＤＦＡ Ｉ、ＤＦＡ ＩＩ、ＤＦＡ ＩＩＩ、ＤＦＡ ＩＶ及び／又はＤＦＡ Ｖは、飼料や医薬組成物中のカルシウムに対して、飼料あるいは飲料として給与する場合、重量比で０．１〜２倍以上、好ましくは０．５〜１．５倍とするのがよく、また、栄養強化剤、経口投与剤では、重量比で０．２〜３倍以上、好ましくは１〜２倍がよい。しかしながら、長期に亘る給与や、疾病に対する改善効果を期待する場合は、上記範囲を逸脱しても一向にさしつかえない。
ヒトに投与する場合、有効成分の投与量は、後記するとおり、分娩前投与の場合と同様とすればよく、また、血中カルシウム濃度低下抑制以外の場合も、同様にこれにならって適宜用法、用量を規定すればよい。
本発明において、動物とは、ヒトを除く動物であって、ヒトが飼育する動物一般を意味し、反芻動物のほか、特定の目的や愛玩のために飼育、繁殖せしめる哺乳類（哺乳動物）や鳥類をいい、例えばブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ハムスター、モルモット、カンガルー、サル、ニワトリ、アヒル、ウズラ、ダチョウ、七面鳥、その他ペット類、動物園等で飼育されている動物や鳥類が例示される。反芻動物とは、牛のほか、山羊、羊、ラクダ、水牛等の家畜はもとより野生の反芻動物も広く包含するものである。反芻動物は、反芻胃を有する等の通常の哺乳動物とは相違するユニークな消化器系を有するものであって、通常の哺乳動物における技術常識がそのまま適用し得ない場合が多い独特の動物である。
本発明は、ヒトのほか反芻動物を含む家畜動物のカルシウム欠乏症の予防及び／又は治療に有効である。カルシウム欠乏症としては、例えば、カルシウムの吸収阻害、血中カルシウム濃度の低下、乳中カルシウム含量の低下等が挙げられる。また、本発明の有効成分は、すぐれた利尿作用を有するので、乳房浮腫等の予防及び／又は治療にも有効である。
このように本発明は、泌乳する動物の乳中カルシウム強化や低カルシウム血症改善にも有効であり、血中カルシウム濃度の低下も治療ないし予防できるため、低カルシウム血症に起因する疾病の治療や予防も達成され、また、分娩による血中カルシウム濃度の低下も治療ないし予防することもできるし、利尿作用によって乳房浮腫の治療ないし予防も可能であり、本発明は、ヒトのほか特に乳牛といった泌乳する反芻動物に対して非常に有効である。
更に、本発明の有効成分によるカルシウム濃度低下抑制に関しては、本発明者らは、更なる研究の結果、全く予期せざることに、ＤＦＡ ＩＩＩが、分娩後の血中カルシウムの低下抑制が本発明の目的であるにも拘らず、分娩後投与ではなく分娩前に投与することによって目的が達成されるという全く予期せざる効果をはじめて見出し、分娩前投与による分娩後の血中カルシウム濃度低下抑制という新しい発明を完成させたものである。
この発明について、有効成分としてＤＦＡ ＩＩＩを代表例にとり、以下に詳述することとする。
ＤＦＡ ＩＩＩは、分娩前（出産前）に投与すればよいが、分娩予定日（出産予定日）の１週間前から投与するのがよく、更に好ましくは２〜５週間前から投与するのがよく、通常、３週間前（約２０日前）から投与を開始する。なお、投与開始時期は分娩予定日を基準としているので、前後にずれることはやむを得ないし、所望するのであれば、上記に限定されることなく、分娩前であれば適宜時期としてもよく、投与量を増加する等の方法によれば分娩予定日１週間前よりも分娩予定日に近い時期とすることも可能である。
ＤＦＡ ＩＩＩの投与量は、経口投与の場合、妊産婦１人当り、１日に、０．０５ｇ〜１０ｇ、好ましくは０．１〜５ｇ、更に好ましくは０．２〜０．７ｇ、通常は例えば０．５ｇとする。投与は全量を１回としてもよいし、２〜３回程度に分けて実施しても良い。また、投与は毎日連続投与を原則とするが、隔日等間隔をあけて投与することも可能である。
なお、ＤＦＡ ＩＩＩ投与量は、特に上記範囲に限定されるものではなく、長期間に亘って保健上ないし健康維持の目的で摂取する場合には、上記範囲よりも少量であってもよいし、また本有効成分は、安全性について問題がないので、上記範囲よりも多量に使用しても一向にさしつかえない。現にマウスを用いた１０日間の急性毒性試験の結果、１０００ｍｇ／ｋｇの経口投与でも死亡例は認められなかった。
ＤＦＡ ＩＩＩの投与の態様は、乳牛の場合も上記と同様であって、乾乳期に投与することが有効であり、その具体的投与時期は上記と同様である。なお投与量は、ヒトの場合よりも高く、乳牛１頭あたり、１日に、１〜２００ｇ、好ましくは５〜１００ｇ、更に好ましくは８〜８０ｇ、特に好ましくは１０〜７０ｇであり、実施例においては５０ｇ投与した。
ＤＦＡ ＩＩＩは、直接投与してもよいし、現場において飲料水や食品、飼料に添加して用事調製して投与してもよいし、製剤してサプリメントとして投与するほか、あらかじめＤＦＡ ＩＩＩを添加した飲食品や飼料を製造しておき、これを給与することも可能である。また、医薬に製剤してもよい。
すなわち、本発明において、飲食品として使用する場合には、本有効成分（その処理物）をそのまま、使用したり、他の食品ないし食品成分と併用したりして適宜常法にしたがって使用できる。本有効成分を用いる本発明に係る組成物は、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよいが、甘味料、酸味料、ビタミン剤その他ドリンク剤製造に常用される各種成分を用いて、健康ドリンクに製剤化することも可能である。飼料や飼料添加物の場合も同様である。
また、本発明において、医薬品として使用する場合、本有効成分は、種々の形態で投与される。その投与形態としては錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与をあげることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。その使用量は症状、年令、体重、投与方法および剤形によって異なるが、通常は、成人に対して、１日当たり、静脈投与の場合は、体重１ｋｇ当たり、０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇを投与することができ、筋肉投与の場合は同じく０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇを投与することができ、また、経口投与の場合には同じく０．０５〜１０ｇ、好ましくは０．１〜５ｇの範囲で投与するのがよい。
本発明において、ＤＦＡ ＩＩＩは分娩前に投与するが、所望するのであれば更に分娩後に投与することも可能であり、例えば分娩直後、及び分娩６時間後、更に必要あれば分娩１２時間後に、それぞれ、上記した１日の投与量〜２倍程度の投与量を投与してもよい。
なお、ＤＦＡ ＩＩＩを投与する際、ビタミンＤ及び所望するのであればカルシウムを（好ましくは分娩後に）併用してもよい。これらの投与量は格別限定されないが、通常、ビタミンＤは、ビタミンＤ_３として、１日あたり０．５〜７μｇ、好ましくは１〜４μｇ、更に好ましくは１．５〜３．５μｇを投与する。カルシウムは、１日当り５０〜５００ｍｇ、好ましくは２００〜４５０ｍｇ、更に好ましくは３００〜４００ｍｇを投与する。これらは市販品も使用可能であって、ビタミンＤ_３ ２．５μｇ、カルシウム３５０ｍｇとなるように錠数を調整して投与することも可能である。
乳牛の場合は、一応の目安としてビタミンＤは、ビタミンＤ_３として、１日又は１回あたり５，０００〜２０，０００ＩＵ、好ましくは８，０００〜１５，０００ＩＵを投与し、カルシウムは炭酸カルシウムを使用した場合、１回当り５０〜２００ｇ、好ましくは８０〜１２０ｇ投与すればよい。
ビタミンＤ剤としてはビタミンＤ_２、ビタミンＤ_３、又、これらの前駆物質を含み、ＤＦＡのカルシウム吸収亢進効果を補完あるいは、増強を目的として供することができる。
カルシウム剤としては飼料および食品として使用が認められているすべてを指すものである。具体的には、例えば、グルコン酸カルシウム、プロピオン酸カルシウム、炭酸カルシウム、第一リン酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、第三リン酸カルシウム、塩化カルシウム、カキ殻、骨粉等が非限定的に例示される。なお、ビタミンＤ及び／又はカルシウムは、抗カルシウム欠乏症の場合のみならず、利尿や抗浮腫の場合にも、ＤＦＡと併用することが可能である。
発明の効果
本発明は、ＤＦＡを有効成分として含有することを特徴とするヒト又は動物用医薬あるいはヒト又は動物用飲食品又は飼料組成物の使用によって、ヒトや動物の血中カルシウム含量が増加し、分娩時の低カルシウム血症を改善するのみならず、乳の生産性が向上し、周産期病を減少させる効果を奏するものである。また、本発明の有効成分は、利尿作用を有することから、ヒトや動物の健康維持、乳房浮腫等の疾病の緩和に役立つものである。
更にまた、本発明は、分娩後の血中カルシウム濃度の低下の抑制をＤＦＡの投与、しかも分娩後ではなく分娩前に投与するというきわめてユニークなアイデアで達成することにはじめて成功した点、しかも、分娩後よりも分娩前に投与した方が更に有効であることを確認した点できわめて特徴的である。したがって本発明によれば、血中カルシウム濃度の低下を抑制し、あるいは血中カルシウム濃度を維持し更にそれを増加させることも可能である。
血中カルシウム濃度の低下が抑制されることにより、特に分娩後にカルシウム濃度が低下しやすい妊産婦において、健康を維持し、母乳量の低下を抑制し、母乳の組成の低下を抑制することができる。
また、乳牛について見ると、上記と同じ著効が奏されるほか、乳牛に特有な効果も奏される。すなわち、血中カルシウム濃度の低下は起立不能や採食意欲を低下させ、分娩時の多くの疾病に影響するといわれているが、乾乳期のＤＦＡ ＩＩＩ給与は加齢による影響がなく、血中カルシウム濃度の低下を未然に防ぎ、また、正常時への回復も早いことから酪農界に多大の貢献をするものである。しかも、本発明によれば乳牛としての寿命を延長することができ、経済的にもきわめて有効である。また、酪農界では、低カルシウム血症の予防のための飼養管理法として、乾乳期に飼料中のカルシウムおよびリンを制限することが推奨されている。しかしながら飼料中のカルシウムおよびリンの含量を推奨域まで低下させることはきわめて困難ないし実質的に不可能であるが、本発明によれば、このような飼養管理をする必要もない。
そのうえ、本発明においては、実験動物としてマウスやラットではなく、大型でしかも産乳という点でヒト妊産婦ときわめて近縁な乳牛を用いた点で特徴的であり、そのデータはヒトにとっても信頼度が高いものである。もちろん、乳牛自体の低カルシウム血症の予防及び／又は治療にはそのままこれらのデータが利用できることはいうまでもないし、他の哺乳類についての作用効果も充分にこれらのデータから判断できる。
以下、本発明を実施例により更に詳しく説明するが、本発明は実施例のみに限定されるものではない。

反芻動物において、ＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶがカルシウム吸収を亢進するためには、反芻胃での微生物による分解を免れて、腸管に到達しなければならない。そこで、ＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶの反芻胃における分解性を検討した。
乾乳牛の栄養管理を想定して濃厚飼料を４ｋｇ給与し、乾草を自由採食としているルーメンカニューレを装着したホルスタイン去勢牛と、乳量３０ｋｇで給与飼料中の濃厚飼料割合が５５％の乳牛から、それぞれ第一胃内溶液を採取し、４重ガーゼで濾過し、イノキュラムとした。
緩衝液は、０．２５Ｍリン酸緩衝液（ＫＨ_２ＰＯ_４ ６．８０４５ｇ＋Ｎａ_２ＨＰＯ_４・１２Ｈ_２Ｏ ２６．８６０５ｇ／５００ｍｌ、ｐＨ７．０）を使用し、この緩衝液１００ｍｌ当たりＤＦＡＩＩＩ、あるいはＤＦＡＩＶを１ｇ添加した。
２００ｍｌ容三角フラスコにイノキュラム３０ｍｌ、緩衝液２０ｍｌを加え、炭酸ガスで内部の空気を置換した後、ブンゼンバルブを装着したゴム栓で栓をし、３９℃のインキュベータで培養した。培養０、１、２、４、６、８、１２および２４時間毎にフラスコを採取し、培養液を分析に供した。
フラスコに入った培養液を攪拌し、２０ｍｌ採取後、スルホサリチル酸（２０％溶液）を０．１ｍｌ加え、除タンパクした。８，０００回転で１０分間遠心後、０．４５μｍの濾紙で濾過し、液体クロマトグラフィーによりＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶを分析した。
培養液へのＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶ添加量は４００ｍｇ／ｄｌに設定した。その結果、ＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶは何れのイノキュラムを用いた場合においても分解されず、各培養時間においてもほぼ全量が回収された（図１）。ルーメン微生物により分解されなければ、乳牛においてもＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶは腸管まで到達し、カルシウムの吸収を亢進することが認定された。

ＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶの給与が泌乳牛のカルシウム代謝、産乳性および尿排泄量に及ぼす効果を検討した。
ホルスタイン乳牛（２〜４産、分娩後９０〜１２０日、平均体重６４２ｋｇ、平均乳量３６ｋｇ）９頭を３群に分け、１期１５日（予備期１０日、本期５日）とする３×３のラテン方格により、試験を実施した。
給与飼料は、１日量として、グラスサイレージ、コーンサイレージ、ビートパルプを乾物重量で各々３、４および２ｋｇの一定量として、配合飼料（粗蛋白質含量１８％、ＴＤＮ含量７４％）は乳量の１／３量とした。また、ミネラル剤およびビタミン剤は無給与とし、個体ごとの採食量不足は乾草を給与して補った。なお、これらの給与飼料は全牛とも同一内容であり、飲水は自由摂取とした。
対照区は、上記の給与のみとし、ＤＦＡ ＩＩＩ区は、給与飼料＋ＤＦＡ ＩＩＩ １００ｇ給与、ＤＦＡ ＩＶ区は、給与飼料＋ＤＦＡ ＩＶ １００ｇ給与とした。
乳牛は、代謝試験施設に収容し、５時と１７時の２回搾乳を行い、本期５日間は乳量、乳成分の分析を行った。糞尿については本期５日間それぞれを全量回収、計量し、一定割合を混合して分析に供した。
表１に試験の結果を示した。その結果から明らかなように、乾物摂取量とカルシウム摂取量は各区とも大きな差はなかった。乳量はＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶ区が対照区よりも約１ｋｇ増加した。乳脂率および乳蛋白質率も区間で差は見られなかったが、乳中カルシウム率は対照区に対してＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶ区とも有意に増加した（Ｐ＜０．０５）。カルシウム排泄量は、ＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶ区において、糞中への排泄量が有意に減少し（Ｐ＜０．０５）、乳中への排泄量が有意に増加した（Ｐ＜０．０５）。また、これらの結果、ＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶ給与によって、カルシウムの可消化量は増えたものの、蓄積量に対しては効果を示さなかった。飲水量は各区間に差はなかったが、尿量はＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶ区とも有意に増加した（Ｐ＜０．０５）。なお、表中、ＴＤＮは可消化養分総量を示す。
以上から、ＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶは、乳牛のカルシウム吸収においてすぐれた効果を奏し、併せて、牛乳のカルシウム濃度を高める効果を有することが認められた。また、尿量の増加も確認された。

乳牛の分娩時血中カルシウム濃度に対する、ＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶの影響を検討した。
供試牛は２産以上のホルスタイン分娩牛を１区５頭、３区計１５頭を用いた。分娩直後に尾根部から採血を行い、対照区は温湯３００ｍｌを経口投与し、ＤＦＡ ＩＩＩ区とＤＦＡ ＩＶ区はそれぞれＤＦＡ ＩＩＩ １００ｇと、ＤＦＡ ＩＶ １００ｇを温湯２５０ｍｌに溶かして、経口投与した。また、分娩直後の採血を基点として、６時間および６０時間後に尾根部からの採血を実施し、併せて、触診による乳房浮腫の程度も確認した。
分娩後の給与飼料は、グラスサイレージ、コーンサイレージ、配合飼料を含むＴＭＲ（以下混合飼料という。粗飼料割合４７．８％）を１日当たり２０ｋｇと配合飼料４ｋｇおよび乾草を自由摂取とした。給与飼料の内容、要求量および充足率を下記表２に示す。なお、要求量の計算条件は次のとおりである：分娩後日数３日、２産、体重６１２ｋｇ、乳量２０ｋｇ、乳脂率４．０％、乳蛋白質率３．２％。また、ＮＥＩは泌乳正味エネルギーを示し、ｅｆＮＤＦは有効中性洗剤不溶繊維を示す。

血液は３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、その血清部分を−３０℃で分析まで保存した。カルシウムの分析はＯＣＰＣ法で行った。また、浮腫の程度は、触診によって行い、重度は４、中度は３、軽度は２、正常は１とした。得られた結果を、それぞれ、表３および表４に示した。

上記結果から明らかなように、分娩直後の血中カルシウム含量は各区７．１〜７．３ｍｇ／ｄｌであった。６時間目の血中カルシウム含量において、対照区では増加はみられなかったが、ＤＦＡ ＩＩＩ区およびＤＦＡ ＩＶ区とも分娩直後より約１ｍｇ／ｄｌ増加し、それぞれ８．３ｍｇ／ｄｌ、８．０ｍｇ／ｄｌとなった。しかし、６０時間目ではＤＦＡ ＩＩＩ区で８．０ｍｇ／ｄｌとなり、ＤＦＡ ＩＶ区でも６時間目から増加する傾向は見られなかった。なお、いずれの区においても乳熱症状を呈する牛は見られなかった。また、乳房浮腫の程度において、対照区は６時間目に上昇したのに対し、ＤＦＡ ＩＩＩ区およびＤＦＡ ＩＶ区とも改善され、６０時間目にはほぼ正常になった。
以上の結果より、ＤＦＡ ＩＩＩおよびＤＦＡ ＩＶは、分娩直後の血中カルシウム濃度を高め、乳房浮腫を軽減することが確認された。

乳牛の分娩時血中カルシウム濃度に対して、ＤＦＡ ＩＩＩおよびカルシウムとビタミンＤの効果を検討した。
供試牛は２産以上のホルスタイン分娩牛を１区５頭、３区計１５頭を用いた。分娩直後に尾根部から採血を行い、ＤＦＡ ＩＩＩ区はＤＦＡ ＩＩＩ １００ｇを温湯２５０ｍｌに溶かして、経口投与した。ＤＦＡ ＩＩＩ＋Ｃａ区はＤＦＡ ＩＩＩおよび炭酸カルシウムをそれぞれ１００ｇとして温湯２００ｍｌに溶かし、ＤＦＡ ＩＩＩ＋Ｃａ＋ＶＤ区はＤＦＡ ＩＩＩおよび炭酸カルシウムをそれぞれ１００ｇに加えて、ビタミンＤ１００００ＩＵを温湯２００ｍｌに溶かし、経口投与した。また、分娩直後の採血を基点として、６、２４および７０時間後に尾根部からの採血を実施した。
飼料給与、血中カルシウム含量の分析は、実施例３と同様に行った。得られた結果を下記表５に示した。

上記結果から明らかなように、分娩直後の血中カルシウム濃度は６．４〜７．４ｍｇ／ｄｌであり、ＤＦＡ ＩＩＩ＋Ｃａ区が最も低い値であった。６時間目の血中カルシウム濃度は分娩直後よりも、ＤＦＡ ＩＩＩ区１．２ｍｇ／ｄｌ、ＤＦＡ ＩＩＩ＋Ｃａ区２．０ｍｇ／ｄｌ、ＤＦＡ ＩＩＩ＋Ｃａ＋ＶＤ区は１．７ｍｇ／ｄｌ増加した。２４時間では、６時間よりもＤＦＡ ＩＩＩ区、ＤＦＡ ＩＩＩ＋Ｃａ区で低下したものの、ＤＦＡ ＩＩＩ＋Ｃａ＋ＶＤ区はさらに増加し、正常値と考えられる９．３ｍｇ／ｄｌに達し、７０時間でもその濃度が維持されていた。ＤＦＡ ＩＩＩ区とＤＦＡ ＩＩＩ＋Ｃａ区の７０時間目においての血中カルシウム濃度は、それぞれ８．５と９．１ｍｇ／ｄｌであり、ＤＦＡ ＩＩＩ＋Ｃａ区の回復程度の向上が認められた。
以上の結果より、ＤＦＡ ＩＩＩは単独で投与するよりも、カルシウム剤と併用し、さらには、ビタミンＤと併用することにより、その効果を高めることが認められた。

乾乳期のＤＦＡ ＩＩＩ給与が分娩後の乳牛の血中カルシウム濃度に及ぼす影響を実際の乳牛を用いてｉｎ ｖｉｖｏにて試験した。
（１）目的
これまで分娩後の牛にＤＦＡ ＩＩＩを投与し、血中カルシウム濃度向上にＤＦＡ ＩＩＩは効果があると考えられた。一方、分娩直後にはすでに血中のカルシウム濃度は下がっており、下がり方が大きいほど、元気・食欲は弱く回復も遅い傾向にある。そこで、ＤＦＡ ＩＩＩを乾乳期に給与し分娩直後の血中カルシウム濃度に及ぼす影響を調査した。
（２）試験区分
ＤＦＡ ＩＩＩ給与；分娩予定３週間前から分娩までの乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩ（５０ｇ／日）給与。
ＤＦＡ ＩＩＩ無給与；分娩前はＤＦＡ ＩＩＩ無給与。
尚、ＤＦＡ ＩＩＩ給与区分及びＤＦＡ ＩＩＩ無給与区分とも分娩後０、６時間後に１回当たりＤＦＡ ＩＩＩを９０ｇ給与した。また、乾乳期には、両区ともに、ビタミンＤ１２，０００ＩＵを４ｋｇの飼料に添加した飼料を１日に４ｋｇ給与した。
（３）試験方法
１）供試牛
２産以上の乳牛を使用した。
ＤＦＡ ＩＩＩ給与牛は平成１６年４月３０日以降分娩した１０頭を供試し、無給与牛は平成１４年７月１４日以降平成１６年４月１８日までに分娩し、乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与していない３８頭を対象とした。尚、平成１４年７月１４日からの試験であるため、この間試験牛として２回分娩した牛が１５頭（ＤＦＡ ＩＩＩ給与牛８頭、ＤＦＡ ＩＩＩ無給与牛７頭）含まれている。
２）給与飼料
乾乳牛は分娩予定２ヵ月前を目処に搾乳を中止し、その後配合飼料（粗蛋白質含量 １８％、ＴＤＮ ７２％、Ｃａ ０．９％、Ｐ ０．５％）を分娩予定３週間前まで１日当たり２ｋｇ給与した。分娩予定３週間前から分娩までは配合飼料（粗蛋白質含量 ２０％、ＴＤＮ ７５％、Ｃａ ０．２％、Ｐ ０．５％）を１日当たり４ｋｇ給与した。尚、乾乳期全期間その他の飼料として乾草（粗蛋白質含量 ６〜８％、ＴＤＮ ４５〜５５％、Ｃａ ０．２〜０．３％、Ｐ ０．２％）を自由採食させた。ＤＦＡ ＩＩＩ給与牛は分娩予定３週間前の配合飼料４ｋｇにＤＦＡ ＩＩＩを５０ｇ添加し給与した。分娩後の給与飼料はグラスサイレージ、コーンサイレージ、配合飼料を含むＴＭＲ（粗飼料割合４７．８％）を１日当たり２０ｋｇと配合飼料（粗蛋白質含量１８％、ＴＤＮ ７２％、Ｃａ ０．９％、Ｐ ０．５％）４ｋｇおよび乾草を自由摂取とした。
３）分娩後の採血およびＤＦＡ ＩＩＩ投与方法
全牛とも、分娩直後に尾根部から採血し、さらに分娩直後の採血を基点（０時間）として、６時間、２４時間および７２時間後を目処に同尾根部からの採血を実施した。採血の０および６時間には１回当たりＤＦＡ ＩＩＩ９０ｇ、炭酸カルシウム１００ｇ、ビタミンＤ１０，０００ＩＵを温湯に溶解し経口投与した。
４）血中カルシウム分析方法
血液は３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、その血清部分を−３０℃で分析まで保存した。カルシウム含量の測定はＯＣＰＣ法により行った。
（結果）
１）試験牛として２回分娩した牛の分娩直後の血中カルシウム濃度（図２参照）。
ＤＦＡ ＩＩＩ給与および無給与とも前産次においては乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩは給与していない。乾乳期のＤＦＡ ＩＩＩ給与は今産次のＤＦＡ ＩＩＩ給与牛にのみ実施した。
前産次はＤＦＡ ＩＩＩ給与および無給与牛とも分娩直後の血中カルシウム濃度は平均で７．２および７．１ｍｇ／ｄｌであり、両牛間に差はみられなかった。今産次においてはＤＦＡ ＩＩＩ給与牛の分娩直後の血中カルシウム濃度は８．１ｍｇ／ｄｌとなり、前産次と比較すると１．０ｍｇ／ｄｌ増加した。一方、ＤＦＡ ＩＩＩ無給与牛は６．５ｍｇ／ｄｌであり、前産次より０．６ｍｇ／ｄｌ低い値となった。
一般に、分娩直後の血中カルシウム濃度は加齢に伴って低下するといわれており、ＤＦＡ ＩＩＩ無給与牛はそれを裏付ける結果となった。しかし、ＤＦＡ ＩＩＩ給与牛では増加がみられたことから、腸管からのカルシウム吸収亢進あるいは、血中への骨からのカルシウム移行が亢進した可能性が高いと考えられた。特に、今産次においてＤＦＡ ＩＩＩ給与牛は７ｍｇ／ｄｌを下回る牛はみられず、加齢牛で増加割合が高い傾向にあった。ＤＦＡ ＩＩＩ無給与牛では７ｍｇ／ｄｌの値を１頭を除き下回った。今産次の分娩直後の血中カルシウムはＤＦＡ ＩＩＩ給与牛と無給与牛の間に有意差（ｐ＜０．０１）が認められた。
２）産次（出産回数）と分娩直後の血中カルシウム濃度（図３参照）
図３は産次ごとに分娩直後の血中カルシウム濃度を示したものであり、供試した全牛のデータ（ＤＦＡ ＩＩＩ給与牛１０頭、ＤＦＡ ＩＩＩ無給与牛３８頭）である。乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与しなかった牛は産次が進むにしたがって血中カルシウム濃度は低下し、分娩直後の血中カルシウム濃度＝−０．６×産次＋８．８の関係が認められた（ｐ＜０．０１）。一方、ＤＦＡ ＩＩＩ給与牛は産次の増加により分娩直後の血中カルシウム濃度が低下することはなかった。尚、ＤＦＡ ＩＩＩ給与牛の回帰式は例数が少ないため、有意差は認められていない。
３）分娩後の血中カルシウム濃度の変化（図４参照）
図４は分娩後の経過時間による血中カルシウム濃度を示したものである。凡例の「あり・今産次」は今産次の乾乳時にＤＦＡ ＩＩＩを給与した牛８頭の平均値である。「あり・前産次」は「あり・今産次」牛の前産次のデータであるが、前産次においては乾乳時にＤＦＡ ＩＩＩは給与していない。「なし・今産次」は、今産次の乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与していない牛７頭の平均値である。「なし・前産次」は「なし・今産次」牛の前産次のデータで、乾乳時にＤＦＡ ＩＩＩは給与していない。「なし・全牛平均］は乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与しなかった牛３８頭全ての平均値である。
「あり・前産次」および「なし・前産次」は２４時間の血中カルシウム濃度を除きほぼ同様に推移した。一方、「あり・今産次」は前産次よりも高く推移し、「なし・今産次」が前産次よりも低く推移したこととは大きく異なっていた（０、６および２４時はいずれもＰ＜０．０１の有意差あり）。血中カルシウム濃度の正常値は９〜１１ｍｇ／ｄｌである。乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与するとほぼ６時間後には正常値に達すると考えられる。しかし、乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与しなかった場合には、血中カルシウム濃度が正常値に戻るために約３日を要し、その回復の程度は産次が進むにしたがい、遅くなることが予想された。
（５）まとめ
上記試験の結果、以下のことが確認された。
１）乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与すると、分娩直後の血中カルシウム濃度は給与しない牛よりも増加する。その結果、起立不能とならず、牛の健康回復が早く、乳量も増加する。
２）乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与すると、分娩直後の血中カルシウム濃度は加齢による低下の影響を受けないことが確認された。その結果、廃用・淘汰される割合が減り、乳牛としての寿命が延びることとなった。
３）乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与しない場合、分娩直後の血中カルシウム濃度は産次が進むにしたがい低下し、１産次の低下量は０．６ｍｇ／ｄｌ程度と予想された。
４）乾乳期にＤＦＡ ＩＩＩを給与すると、血中カルシウム濃度は正常値に戻るのが早く、加齢により遅くなる傾向のある無給与牛とは異なった。
５）ＤＦＡ ＩＩＩ給与の血中カルシウム濃度増加効果は分娩直後より乾乳期の方がその効果が大きい。
血中カルシウム濃度の低下は起立不能や採食意欲を低下させ、分娩時の多くの疾病に影響するといわれている。乾乳期のＤＦＡ ＩＩＩ給与は加齢による影響がなく、血中カルシウム濃度の低下を未然に防ぎ、また、正常時への回復も早いことから酪農界に多大の貢献をすることが実証された。

Claims (14)

1. カルシウムを併用し、且つ、分娩前に経口投与されるように用いられることを特徴とする、ダイフラクトース アンハイドライドＩＩＩ（ＤＦＡ ＩＩＩ）を有効成分としてなる分娩後の乳牛の低カルシウム血症予防及び／又は治療剤。
2. 併用されるカルシウムが、カルシウムを含有する飼料に由来するものを含むことを特徴とする請求項１に記載の剤。
3. 更にビタミンＤを併用してなることを特徴とする請求項１又は２に記載の剤。
4. 乳牛１頭につき、１日当りＤＦＡ ＩＩＩを１〜２００ｇ経口投与されるように用いられることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
5. 分娩前が乾乳期であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の剤。
6. 請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤を、カルシウムを併用し、且つ、分娩前に経口投与することを特徴とする、分娩後の乳牛の低カルシウム血症を予防及び／又は治療する方法。
7. 併用されるカルシウムが、カルシウムを含有する飼料に由来するものを含むことを特徴とする請求項６に記載の方法。
8. カルシウムを併用し、且つ、分娩前及び分娩後に経口投与されるように用いられることを特徴とする、ダイフラクトース アンハイドライドＩＩＩ（ＤＦＡ ＩＩＩ）を有効成分としてなる分娩後の乳牛の低カルシウム血症予防及び／又は治療剤。
9. 併用されるカルシウムが、カルシウムを含有する飼料に由来するものを含むことを特徴とする請求項８に記載の剤。
10. 更にビタミンＤを併用してなることを特徴とする請求項８又は９に記載の剤。
11. 乳牛１頭につき、１日当りＤＦＡ ＩＩＩを１〜２００ｇ経口投与されるように用いられることを特徴とする、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の剤。
12. 分娩前が乾乳期であることを特徴とする、請求項８〜１１のいずれか１項に記載の剤。
13. 請求項８〜１２のいずれか１項に記載の剤を、カルシウムを併用し、且つ、分娩前及び分娩後に経口投与することを特徴とする、分娩後の乳牛の低カルシウム血症を予防及び／又は治療する方法。
14. 併用されるカルシウムが、カルシウムを含有する飼料に由来するものを含むことを特徴とする請求項１３に記載の方法。

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