JP4314304B2 - Pyyアゴニストおよびその使用 - Google Patents
Pyyアゴニストおよびその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4314304B2 JP4314304B2 JP2007553737A JP2007553737A JP4314304B2 JP 4314304 B2 JP4314304 B2 JP 4314304B2 JP 2007553737 A JP2007553737 A JP 2007553737A JP 2007553737 A JP2007553737 A JP 2007553737A JP 4314304 B2 JP4314304 B2 JP 4314304B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hpyy
- polypeptide
- conjugate
- pyy
- mpeg
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、PYYアゴニスト、より詳細には、PYY3−36変異体、そしてPYY3−36およびPYY3−36変異体のPEG化誘導体、こうしたアゴニストを含有する組成物、こうしたPYYアゴニストをコードする単離核酸、ならびに肥満およびその併存疾患の治療におけるこうしたアゴニストまたは組成物の使用、あるいは哺乳動物において、食欲、食物摂取またはカロリー摂取を減少させるためのこうしたアゴニストまたは組成物の使用に関する。
肥満は、患者数が増加しつつあり、そして関連する健康上のリスクがあることから、大きな公衆衛生上の懸念である。さらに、肥満は、運動性が制限され、そして肉体の耐久力が減少することを通じて、それとともに社会的に、アカデミックで、そして職業で差別があることを通じて、人の生活の質を侵しうる。
本発明は、PYY3−36の変異体であるPYYアゴニストに関する。
本発明の1つの側面において、PYYアゴニストは、残基10(グルタミン酸)または残基11(アスパラギン酸)が、システイン、リジン、セリン、スレオニン、チロシン、およびポリエチレングリコール(PEG)などの親水性ポリマーとコンジュゲート化可能な官能性、例えばケト、チオール、ヒドロキシル、カルボキシル、または未結合(free)アミノ官能性を有する非天然アミノ酸からなる群より選択されるアミノ酸「X」で置換されている、哺乳動物PPY3−36の変異体であり、こうした変異体は、それぞれ、(E10X)PYY3−36または(D11X)PYY3−36と名付けられる。
本発明の好ましい態様において、PYYアゴニストは、ヒトPYY3−36(hPYY3−36)、イヌPYY3−36、ネコPYY3−36またはウマPYY3−36であり、より好ましくはhPYY3−36である。
本発明のPYYアゴニストは、好ましくは、親水性ポリマー、好ましくはPEGとコンジュゲート化される。アゴニストは、好ましくはモノPEG化され、すなわちPEGに対するアゴニストの比は約1:1であり、PEGは、(E10X)PYY3−36および(D11X)PYY3−36中の「X」のケト、チオール、ヒドロキシル、カルボキシル、または未結合アミノ官能性などのコンジュゲート化可能官能性で付着している。PEGは、直鎖、分枝鎖、またはペンダントであってもよく;より好ましくは、直鎖または分枝鎖であり;最も好ましくは、直鎖である。
好ましくは、PEGは、リンカー部分−L−が含まれる、上に示すmPEGマレイミドである。リンカーレスPEGマレイミドもまた、本発明で、特に、(E10C)hPYY3−36または(D11C)PYY3−36とともに使用するのに適している。こうしたリンカーレスPEGマレイミドは、GoodsonおよびKatre, Bio/Technology 8:343−346, 1990に記載されるように調製可能である。
−O(CH2)pNHC(O)(CH2)r−
の基であり、ここでpは、1〜6の整数、好ましくは1〜3、より好ましくは2または3、最も好ましくは3であり、そしてrは、1〜6の整数、好ましくは1〜3、より好ましくは2または3、最も好ましくは2である。
別の好ましい態様において、特に分枝鎖PEGに関して、リンカーは、式
−NHC(O)(CH2)s−
の基であり、ここでsは、1〜6の整数、好ましくは1〜3、より好ましくは2または3、最も好ましくは2である。
PEGは、直鎖あるいは非直鎖、例えば分枝鎖またはペンダントであってもよい。好ましくは、PEGは直鎖または分枝鎖、好ましくは直鎖または分枝鎖mPEGマレイミドである。グリセロール分枝鎖mPEGマレイミドが、好ましい分枝鎖PEGである。好ましくは、PEGは直鎖mPEGマレイミドである。PEGは、約1kD〜約50kDの範囲内の平均分子量を持たなければならない。好ましくは、平均分子量は、約5kD〜約45kDの範囲内;より好ましくは、約10〜12kDから約40〜45kD、または約20kDから約40〜45kDの範囲内である。特に関心が持たれるのは、式1に示すような、約20または約30kDの平均分子量を有する直鎖mPEGである。式2のグリセロール分枝mPEGもまた関心が持たれ、そしてこれは、好ましくは約20kDまたは約43kDの平均分子量を有する。
1つの態様において、コンジュゲートは、式3
Lは、式
−O(CH2)pNHC(O)(CH2)r−
の基であり、ここでpは、1〜6の整数;好ましくは1〜3;より好ましくは2または3;最も好ましくは3であり;(以下の式4に示すとおり);そしてrは、1〜6の整数;好ましくは1〜3;より好ましくは2または3、最も好ましくは2であるか;
あるいはLは、式
−NHC(O)(CH2)s−
の基であり、ここでsは、1〜6の整数;好ましくは1〜3;より好ましくは2または3;最も好ましくは2である;そして
−SRは、ポリペプチド(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36であり、ここでSはシステイン・チオール基のイオウ原子である
の化合物である。
の直鎖mPEG−PYY3−36変異体コンジュゲート;あるいはその薬学的に許容しうる塩である。好ましくは、(CH2CH2O)n部分は、約20kDまたは30kDの平均分子量を有する。−SRがポリペプチド(E10C)hPYY3−36であるコンジュゲートに特に関心が持たれる。
のコンジュゲート;あるいはその薬学的に許容しうる塩である。好ましくは、各(CH2CH2O)m部分は、約9〜11kDまたは約20〜22kDの範囲内の平均分子量を有する。好ましくは、(CH2CH2O)m部分を合わせた平均分子量は、約20kDまたは約43kDである。−SRがポリペプチド(E10C)hPYY3−36であるコンジュゲートに特に関心が持たれる。
本発明の別の態様において、本発明のPYYアゴニストおよび薬学的に許容しうるキャリアーを含む、薬剤組成物を提供する。さらなる態様において、組成物はまた、組成物の主な適応症または主な適応症の併存疾患の治療において有用な剤でありうる、少なくとも1つのさらなる薬学的剤も含む。さらなる薬学的剤は、好ましくは抗肥満剤である。組成物は、好ましくは、療法的有効量の本発明のPYYアゴニスト、または療法的有効量の本発明のPYYアゴニストおよびさらなる薬学的剤の組み合わせを含む。
定義および略語
句「薬学的に許容しうる」は、物質または組成物が、配合物を構成する他の成分、および/または該配合物で治療されている哺乳動物と、化学的および/または毒物学的に適合していなければならないことを意味する。
用語「末梢投与」は、中枢神経系外部の投与を意味する。末梢投与には、脳への直接投与は含まれない。末梢投与には、限定されるわけではないが、静脈内、筋内、皮下、吸入、経口、舌下、溶腸、直腸、経皮、または鼻内投与が含まれる。
YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY−NH2 [配列番号1]
を有する36アミノ酸のC末端アミド化ポリペプチドを意味する。
IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY−NH2 [配列番号2]
を有するC末端34量体hPYYを意味する。
IKPEAPGCDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY−NH2 [配列番号3]
を有する、C末端34量体hPYYを意味する。
IKPEAPGECASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY−NH2 [配列番号4]
を有する、C末端34量体hPYYを意味する。
発明の詳細な説明
本発明は、PYY3−36の変異体およびそのPEG化コンジュゲートであるPYYアゴニストであって、限定されるわけではないが、クリアランス速度の減少、血漿存在期間の増加、in vivo活性の延長、強度の増加、安定性の増加、可溶性の改善、および抗原性の減少から選択される、少なくとも1つの改善された化学的または生理学的特性を有しうる、前記PYYアゴニストに関する。
当該技術分野で知られる標準的ペプチド合成技術を用いて、例えばtBocまたはFmoc化学を用い、自動的ペプチド合成装置(例えばモデル433A;Applied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティ)を用いて行われる固相ペプチド合成によって、本発明のPYY3−36変異体、例えば(E10C)hPYY3−36および(D11C)hPYY3−36を調製してもよい。利用可能な多くのペプチド合成技術の要約は、Solid Phase Peptide Synthesis 第2版(Stewart, J.M.およびYoung, J.D., Pierce Chemical Company, イリノイ州ロックフォード, 1984)に見出されうる。また、書籍、Solid−phase Organic Synthesis(Burgess, K., John Wiley & Sons, ニューヨーク州ニューヨーク, 2000)および文献、Engelsら, Angew. Chem. Intl. Ed. 28:716−34, 1989もまた参照されたい。上記参考文献はすべて、本明細書に援用される。
組換え発現
核酸分子
(E10C)hPYY3−36ポリペプチドをコードする核酸分子は、以下の核酸配列の1つを含んでもよい(E10C置換のためのコドン突然変異を下線で示す):
atcaaacccgaggctcccggctgtgacgcctcgccggaggagctgaaccgctactacgcctccctgcgccactacctcaacctggtcacccggcagcggtat(配列番号5);または
atcaaacccgaggctcccggctgcgacgcctcgccggaggagctgaaccgctactacgcctccctgcgccactacctcaacctggtcacccggcagcggtat(配列番号6)。
atcaaacccgaggctcccggcgaatgtgcctcgccggaggagctgaaccgctactacgcctccctgcgccactacctcaacctggtcacccggcagcggtat(配列番号7);または
atcaaacccgaggctcccggcgaatgcgcctcgccggaggagctgaaccgctactacgcctccctgcgccactacctcaacctggtcacccggcagcggtat(配列番号8)。
標準的連結技術を用いて、(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36のアミノ酸配列をコードする核酸分子を、適切な発現ベクター内に挿入する。典型的には、使用する特定の宿主細胞において機能するように、ベクターを選択する(すなわち、遺伝子の増幅および/または遺伝子の発現が起こりうるように、ベクターが宿主細胞機構と適合する)。(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36のアミノ酸配列をコードする核酸分子を、原核、酵母、昆虫(バキュロウイルス系)および/または真核宿主細胞において、増幅/発現してもよい。発現ベクターの概説に関しては、Meth. Enz., vol. 185(D. V. Goeddel監修, Academic Press, 1990)を参照されたい。
当業者に周知の標準的培地を用いて、(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36発現ベクターを含む宿主細胞株を培養してもよい。培地は通常、細胞の増殖および生存に必要なすべての栄養素を含有するであろう。大腸菌細胞を培養するのに適した培地には、例えばルリア・ブロス(LB)および/またはテリフィック・ブロス(TB)が含まれる。真核細胞を培養するのに適した培地には、Roswell Park Memorial Institute培地1640(RPMI 1640)、最小必須培地(MEM)および/またはダルベッコの修飾イーグル培地(DMEM)が含まれ、これらにはすべて、培養中の特定の細胞株の必要に応じて、血清および/または増殖因子を補ってもよい。昆虫培養に適した培地は、必要に応じて、イーストレート、ラクトアルブミン加水分解物、および/またはウシ胎児血清を補ったグレース培地である。
アミド化
ペプチジル−グリシン・アルファ−アミド化モノオキシゲナーゼ(PAM)と呼ばれる酵素によって、合成的または組換え的のいずれかで産生されたペプチドのアミド化を達成する。細菌発現系を用いて(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36ペプチドを組換え的に産生する場合、組換えPAM酵素を用いたin vitro反応によって、ペプチドをC末端アミド化することができる。PAM酵素供給源、その産生および精製法、ならびに(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36ペプチドをアミド化するために使用可能な方法は、例えば、米国特許第4,708,934号、第5,789,234号、および第6,319,685号に記載される。
選択的(E10C)hPYY 3−36 および(D11C)hPYY 3−36 抗体
システイン置換部位でのPEG化を伴うまたは伴わない(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36ポリペプチドに特異的に結合するが、天然hPYY3−36に選択的に結合しない抗体および抗体断片が、本発明の範囲内にある。抗体は、単一特異的ポリクローナルを含むポリクローナル;モノクローナル;組換え;キメラ;CDR移植などのヒト化;ヒト;一本鎖;および/または二重特異性;ならびにその断片;変異体;または誘導体であってもよい。抗体断片には、(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36ポリペプチド上のエピトープに結合する抗体部分が含まれる。こうした断片の例には、全長抗体の酵素的切断によって生成されるFabおよびF(ab’)断片が含まれる。他の結合断片には、抗体可変領域をコードする核酸配列を含有する組換えプラスミドの発現など、組換えDNA技術によって生成されるものが含まれる。
実施例1
直鎖30Kおよび20K mPEGおよび20Kマレイミド(E10C)hPYY 3−36
本実施例は、残基10に付着したmPEG(30Kまたは20K)を伴う実質的に均質なモノPEG化(E10C)hPYY3−36の調製を提供する。
(a)(E10C)hPYY 3−36 の調製
自動化ペプチド合成装置(モデル433A;Applied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティ)を用い、2−(1H−ベンゾトリゾール−1−イル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)活性化(Fastmoc、0.15mmolサイクル)でのFmoc戦略を用いた固相法によって、(E10C)PYY3−36を合成した。用いた側鎖保護基は、Asn、Gln、CysおよびHisにはTrt;Ser、Thr、およびTyrにはtBu;LysにはBoc;AspおよびGluにはOtBu;そしてArgにはPbfであった。9mlのトリフルオロ酢酸(TFA)、0.5gのフェノール、0.5mlのH2O、0.5mlのチオアニソールおよび0.25mlの1,2エタンジチオールの混合物を用いて、室温で4時間、ペプチド−樹脂の切断を完了した。氷冷エチルエーテル中でペプチドを沈殿させ、そしてエチルエーテルで洗浄し、DMSO中で溶解して、そして流速80ml/分で、30分間の100%溶媒A:0%溶媒Bから70%溶媒A:30%溶媒Bの直線勾配を用いて、Waters Deltapak C18、15um、100A、50x300mmIDカラム(カタログ番号WAT011801、Waters、マサチューセッツ州ミルフォード)上、逆相HPLCによって精製した。溶媒Aは、0.1% TFA(トリフルオロ酢酸)水溶液である。溶媒Bは、アセトニトリル中の0.1% TFA溶液である。ESI−MSによって精製ペプチドの分子量を確認し(M平均=4024)、そして逆相HPLCによって純度を評価した(図1)。
(b)直鎖30K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の調製
およそ30,000MWの直鎖mPEGマレイミド試薬(Sunbright ME−300MA、NOF社、日本・東京)を、(E10C)hPYY3−36に、残基10のシステインのスルフヒドリル基上で選択的にカップリングした。20mM HEPES(Sigma Chemical、ミズーリ州セントルイス)pH7.0、あるいは20mM酢酸ナトリウム(Sigma Chemical、ミズーリ州セントルイス)pH4.5中に溶解した直鎖30K mPEGマレイミドに、(E10C)hPYY3−36ペプチドを直接添加して、1mg/mlペプチド濃度および約1:1の相対的mPEG:(E10C)hPYY3−36モル比を生じることによって、該マレイミドを該ペプチドと直ちに反応させた。暗所中、室温で0.5〜24時間、反応を行った。陽イオン交換クロマトグラフィー上で直ちに精製するため、20mM酢酸ナトリウムpH4.5中に希釈することによって、HEPES pH7.0中の反応を停止した。20mM酢酸ナトリウム、pH4.5中の反応は陽イオン交換クロマトグラフィー上に直接装填した。SEC−HPLCによって反応産物を評価した(図2)。
(c)直鎖30K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の精製
単回イオン交換クロマトグラフィー工程を用いて、反応混合物から>95%に、PEG化(E10C)hPYY3−36種を精製した。陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、非修飾(E10C)hPYY3−36およびより大きい分子量種からモノPEG化(E10C)hPYY3−36を精製した。上述のような、典型的な直鎖30K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36反応混合物(10mgタンパク質)を、20mM酢酸ナトリウム、pH4.5(緩衝液A)中で平衡化したSP−Sepharose Hitrapカラム(5ml)(Amersham Pharmacia Biotech、GE Healthcare、ニュージャージー州ピスカタウェイ)上で分画した。反応混合物を緩衝液Aで7倍希釈し、そして流速2.5ml/分でカラム上に装填した。5〜10カラム体積の緩衝液Aでカラムを洗浄した。続いて、20カラム体積の0〜100mMの直線NaCl勾配で、カラムから、多様な(E10C)hPYY3−36種を溶出させた。280nmの吸光度(A280)によって、溶離液を監視し、そして適切なサイズの分画を収集した。(登録商標)SDS−PAGEによって評価した際のPEG化の度合いに応じて分画をプールした(図3)。次いで、Centriprep 3濃縮装置(Amicon Technology社、マサチューセッツ州ノースボロー)中、あるいはVivaspin 10K濃縮装置(Vivascience Sartorius Group、ドイツ・ハノーバー)を用いて、精製プールを0.5〜5mg/mlに濃縮した。RP HPLCピーク面積をPYY3−36標準曲線(未提示)に比較することによって、精製プールのタンパク質濃度を決定するか、あるいは実験的に得た消光係数を用いて、280nmの吸光度によって、精製プールの濃度を決定した。図6に示すように、SEC−HPLCを用いて、PEG化(E10C)hPYY3−36の精製プールのプロフィールを描いた。
(d)直鎖20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の調製
およそ20,000MWの直鎖mPEGマレイミド試薬(Sunbright ME−200MA、NOF社)を、(E10C)hPYY3−36に、残基10のシステインのスルフヒドリル基上で選択的にカップリングした。20mM酢酸ナトリウム(Sigma Chemical、ミズーリ州セントルイス)pH4.5中に溶解した直鎖20K mPEGマレイミドに、(E10C)hPYY3−36ペプチドを直接添加して、1mg/mlペプチド濃度および約1.3:1の相対的mPEG:(E10C)hPYY3−36モル比を生じることによって、該マレイミドを該ペプチドと直ちに反応させた。暗所中、室温で60分間、その後、4℃で16時間、反応を行った。20mM酢酸ナトリウム、pH4.5中の反応を陽イオン交換クロマトグラフィー上に直接装填した。SEC−HPLCによって反応産物を評価した。
(e)直鎖20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の精製
単回イオン交換クロマトグラフィー工程を用いて、反応混合物から>95%に、PEG化(E10C)hPYY3−36種を精製した。陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、未結合PEG、非修飾(E10C)hPYY3−36およびより大きい分子量種からモノPEG化(E10C)hPYY3−36を分離した。上述のような、典型的な直鎖20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36反応混合物(20mgタンパク質)を、20mM酢酸ナトリウム、pH4.5(緩衝液A)中で平衡化したSP−Sepharose Hitrapカラム(5ml)(Amersham Pharmacia Biotech、GE Healthcare)上で分画した。反応混合物を流速1.0ml/分でカラム上に装填した。流速2.5ml/分、4カラム体積の緩衝液Aでカラムを洗浄した。続いて、流速2.5ml/分、25カラム体積の0〜200mMの直線NaCl勾配で、カラムから、多様な(E10C)hPYY3−36種を溶出させた。280nmの吸光度(A280)によって、溶離液を監視し、そして適切なサイズの分画を収集した。SEC−HPLCによって評価した際のPEG化の度合いに応じて分画をプールした。次いで、Vivaspin 10K濃縮装置(Vivascience Sartorius Group)を用いて、精製プールを0.5〜5mg/mlに濃縮した。実験的に得た消光係数を用いて、280nmの吸光度によって、精製プールのタンパク質濃度を決定した。精製モノ20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36の総プロセス収率は、38%であった。SEC−HPLCを用いて、モノ20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36の精製プールが96%純粋であると決定された。
直鎖30K mPEGマレイミド(D11C)hPYY 3−36
本実施例は、残基11に付着したmPEGを伴う実質的に均質なモノPEG化(D11C)hPYY3−36の調製を示す。
(a)(D11C)hPYY 3−36 の調製
自動化ペプチド合成装置(モデル433A;Applied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティ)を用い、2−(1H−ベンゾトリゾール−1−イル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)活性化(Fastmoc、0.15mmolサイクル)でのFmoc戦略を用いた固相法によって、(D11C)PYY3−36を合成した。用いた側鎖保護基は、Asn、Gln、CysおよびHisにはTrt;Ser、Thr、およびTyrにはtBu;LysにはBoc;AspおよびGluにはOtBu;そしてArgにはPbfであった。9mlのトリフルオロ酢酸(TFA)、0.5gのフェノール、0.5mlのH2O、0.5mlのチオアニソールおよび0.25mlの1,2エタンジチオールの混合物を用いて、室温で4時間、ペプチド−樹脂の切断を完了した。氷冷エチルエーテル中でペプチドを沈殿させ、そしてエチルエーテルで洗浄し、DMSO中で溶解して、そして流速80ml/分で、30分間の100%溶媒A:0%溶媒Bから70%溶媒A:30%溶媒Bの直線勾配を用いて、Waters Deltapak C18、15um、100A、50x300mmIDカラム(カタログ番号WAT011801、Waters、マサチューセッツ州ミルフォード)上、逆相HPLCによって精製した。溶媒Aは、0.1% TFA(トリフルオロ酢酸)水溶液である。溶媒Bは、アセトニトリル中の0.1% TFA溶液である。ESI−MSによって精製ペプチドの分子量を確認し(M平均=4038)、そして逆相HPLCによって純度を評価した(図4)。
(b)直鎖30K mPEGマレイミド(D11C)hPYY 3−36 の調製
およそ30,000MWの直鎖mPEGマレイミド試薬(Sunbright ME−300MA、NOF社、日本・東京)を、(D11C)hPYY3−36に、残基11のシステインのスルフヒドリル基上で選択的にカップリングした。20mM HEPES(Sigma Chemical、ミズーリ州セントルイス)pH7.0中に溶解した直鎖30K mPEGマレイミドに、(D11C)hPYY3−36ペプチドを直接添加して、1mg/mlペプチド濃度および約1:1の相対的mPEG:(D11C)hPYY3−36モル比を生じることによって、該マレイミドを該ペプチドと直ちに反応させた。暗所中、室温で0.5〜24時間、反応を行った。陽イオン交換クロマトグラフィー上で直ちに精製するため、20mM酢酸ナトリウムpH4.5中に希釈することによって、反応を停止した。SEC−HPLCによって反応産物を評価した(図5)。
(c)直鎖30K mPEGマレイミド(D11C)hPYY 3−36 の精製
単回イオン交換クロマトグラフィー工程を用いて、反応混合物から>95%に、PEG化(D11C)hPYY3−36種を精製した。陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、非修飾(D11C)hPYY3−36およびより大きい分子量種からモノPEG化(D11C)hPYY3−36を精製した。上述のような、典型的な直鎖30K mPEGマレイミド(D11C)hPYY3−36反応混合物(10mgタンパク質)を、20mM酢酸ナトリウム、pH4.5(緩衝液A)中で平衡化したSP−Sepharose Hitrapカラム(5ml)(Amersham Pharmacia Biotech、GE Healthcare、ニュージャージー州ピスカタウェイ)上で分画した。pH7.0の反応混合物を緩衝液Aで7倍希釈し、そして流速2.5ml/分でカラム上に装填した。5〜10カラム体積の緩衝液Aでカラムを洗浄した。続いて、20カラム体積の0〜100mMの直線NaCl勾配で、カラムから、多様な(D11C)hPYY3−36種を溶出させた。280nmの吸光度(A280)によって、溶離液を監視し、そして適切なサイズの分画を収集した。SEC HPLCによって評価した際のPEG化の度合いに応じて分画をプールした。次いで、Vivaspin 10K濃縮装置(Vivascience Sartorius Group)中で、精製プールを0.5〜5mg/mlに濃縮した。RP HPLCピーク面積をPYY3−36標準曲線(未提示)に比較することによって、精製プールのタンパク質濃度を決定した。図7に示すように、SEC−HPLCを用いて、PEG化(D11C)hPYY3−36の精製プールのプロフィールを描いた。
分枝鎖43K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36
本実施例は、残基10に付着したmPEGを伴う実質的に均質なモノPEG化(E10C)hPYY3−36の調製を示す。
(a)分枝鎖43K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の調製
およそ43,000MWの分枝鎖mPEGマレイミド試薬(Sunbright GL2−400MA、NOF社、日本・東京)を、実施例1(a)に記載するように調製した(E10C)hPYY3−36に、残基10のシステインのスルフヒドリル基上で選択的にカップリングした。
(b)モノPEG化分枝鎖43K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の精製
単回陽イオン交換クロマトグラフィー工程を用いて、非修飾(E10C)hPYY3−36およびより大きい分子量種からモノPEG化分枝鎖43K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36種を分離した。上述のような、典型的な分枝鎖43K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36反応混合物(10mgタンパク質)を、20mM酢酸ナトリウム、pH4.5(緩衝液A)中で平衡化したSP−Sepharose Hitrapカラム(5ml)(Amersham Pharmacia Biotech、GE Healthcare)上で分画した。pH7.0の反応混合物を緩衝液Aで10倍希釈し、そして流速2.5ml/分でカラム上に装填した。5〜10カラム体積の緩衝液Aでカラムを洗浄した。続いて、20カラム体積の0〜100mMの直線NaCl勾配で、カラムから、多様な(E10C)hPYY3−36種を溶出させた。280nmの吸光度(A280)によって、溶離液を監視し、そして適切なサイズの分画を収集した。SEC−HPLCによって評価した際のPEG化の度合いに応じて分画をプールした。次いで、Centriprep 3濃縮装置(Amicon Technology社)中、あるいはVivaspin 10K濃縮装置(Vivascience Sartorius Group)を用いて、精製プールを0.5〜5mg/mlに濃縮した。アミノ酸分析によって、精製プールのタンパク質濃度を定量化した。図9に示すように、SEC−HPLCを用いて、モノPEG化分枝鎖43K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36の精製プールのプロフィールを描いた。
本実施例は、残基10で付着した直鎖12kD mPEGまたは分枝鎖20kD mPEGを伴う、実質的に均質なモノPEG化(E10C)hPYY3−36の調製、ならびに残基11で付着した直鎖20kD mPEG、直鎖12kD mPEG、または分枝鎖20kD mPEGを伴う、実質的に均質なモノPEG化(D11C)hPYY3−36の意図される調製を意図する。
(a)直鎖12K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の調製
およそ12,000MW)の直鎖mPEGマレイミド試薬(Sunbright ME−120MA、NOF社を、(E10C)hPYY3−36に、残基10のシステインのスルフヒドリル基上で選択的にカップリングする。20mM酢酸ナトリウム(Sigma Chemical)pH4.5中に溶解した、直鎖12K mPEGマレイミドに、(E10C)hPYY3−36ペプチドを直接添加して、1mg/mlペプチド濃度および約1:1の相対的mPEG:(E10C)hPYY3−36モル比を生じることによって、該マレイミドを該ペプチドと直ちに反応させる。暗所中、室温で0.5〜24時間、反応を行う。20mM酢酸ナトリウム、pH4.5中の反応を陽イオン交換クロマトグラフィー上に直接装填する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEによって反応産物を評価する。
(b)直鎖12K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の精製
単回イオン交換クロマトグラフィー工程を用いて、反応混合物から>95%に、PEG化(E10C)hPYY3−36種を精製する。陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、未結合PEG、非修飾(E10C)hPYY3−36およびより大きい分子量種からモノPEG化(E10C)hPYY3−36を分離する。上述のような、典型的な直鎖12K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36反応混合物(10mgタンパク質)を、20mM酢酸ナトリウム、pH4.5(緩衝液A)中で平衡化したSP−Sepharose Hitrapカラム(5ml)(Amersham Pharmacia Biotech、GE Healthcare)上で分画する。反応混合物を流速1.0ml/分でカラム上に装填する。流速2.5ml/分、4カラム体積の緩衝液Aでカラムを洗浄する。続いて、流速2.5ml/分、25カラム体積の0〜200mMの直線NaCl勾配で、カラムから、多様な(E10C)hPYY3−36種を溶出させる。280nmの吸光度(A280)によって、溶離液を監視し、そして適切なサイズの分画を収集する。SEC−HPLCによって評価した際のPEG化の度合いに応じて分画をプールする。次いで、Vivaspin 10K濃縮装置(Vivascience Sartorius Group)を用いて、精製プールを0.5〜5mg/mlに濃縮する。実験的に得た消光係数を用いて、280nmの吸光度によって、精製プールのタンパク質濃度を決定する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEを用いて、12K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36の精製プールのプロフィールを描く。
(c)分枝鎖20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の調製
およそ20,000MWの分枝鎖mPEGマレイミド試薬(Sunbright GL2−200MA、NOF社)を、(E10C)hPYY3−36に、残基10のシステインのスルフヒドリル基上で選択的にカップリングする。20mM酢酸ナトリウム(Sigma Chemical、ミズーリ州セントルイス)pH4.5中に溶解した分枝鎖20K mPEGマレイミドに、(E10C)hPYY3−36ペプチドを直接添加して、1mg/mlペプチド濃度および約1:1の相対的mPEG:(E10C)hPYY3−36モル比を生じることによって、該マレイミドを該ペプチドと直ちに反応させる。暗所中、室温で0.5〜24時間、反応を行う。20mM酢酸ナトリウム、pH4.5中の反応を陽イオン交換クロマトグラフィー上に直接装填する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEによって反応産物を評価する。
(d)分枝鎖20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY 3−36 の精製
単回イオン交換クロマトグラフィー工程を用いて、反応混合物から>95%に、PEG化(E10C)hPYY3−36種を精製する。陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、未結合PEG、非修飾(E10C)hPYY3−36およびより大きい分子量種からモノPEG化(E10C)hPYY3−36を分離する。上述のような、典型的な分枝鎖20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36反応混合物(10mgタンパク質)を、20mM酢酸ナトリウム、pH4.5(緩衝液A)中で平衡化したSP−Sepharose Hitrapカラム(5ml)(Amersham Pharmacia Biotech、GE Healthcare)上で分画する。反応混合物を流速1.0ml/分でカラム上に装填する。流速2.5ml/分、4カラム体積の緩衝液Aでカラムを洗浄する。続いて、流速2.5ml/分、25カラム体積の0〜200mMの直線NaCl勾配で、カラムから、多様な(E10C)hPYY3−36種を溶出させる。280nmの吸光度(A280)によって、溶離液を監視し、そして適切なサイズの分画を収集する。SEC−HPLCによって評価した際のPEG化の度合いに応じて分画をプールする。次いで、Vivaspin 10K濃縮装置(Vivascience Sartorius Group)を用いて、精製プールを0.5〜5mg/mlに濃縮する。実験的に得た消光係数を用いて、280nmの吸光度によって、精製プールのタンパク質濃度を決定する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEを用いて、分枝鎖20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36の精製プールのプロフィールを描く。
(e)直鎖20K mPEGマレイミド(D11C)hPYY 3−36 の調製
およそ20,000MWの直鎖mPEGマレイミド試薬(Sunbright ME−200MA、NOF社)を、(D11C)hPYY3−36に、残基11のシステインのスルフヒドリル基上で選択的にカップリングする。20mM酢酸ナトリウム(Sigma Chemical)pH4.5中に溶解した、直鎖20K mPEGマレイミドに、(D11C)hPYY3−36ペプチドを直接添加して、1mg/mlペプチド濃度および約1:1の相対的mPEG:(D11C)hPYY3−36モル比を生じることによって、該マレイミドを該ペプチドと直ちに反応させる。暗所中、室温で0.5〜24時間、反応を行う。20mM酢酸ナトリウム、pH4.5中の反応を陽イオン交換クロマトグラフィー上に直接装填する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEによって反応産物を評価する。
(f)直鎖20K mPEGマレイミド(D11C)hPYY 3−36 の精製
単回イオン交換クロマトグラフィー工程を用いて、反応混合物から>95%に、PEG化(D11C)hPYY3−36種を精製する。陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、未結合PEG、非修飾(D11C)hPYY3−36およびより大きい分子量種からモノPEG化(D11C)hPYY3−36を分離する。上述のような、典型的な直鎖20K mPEGマレイミド(D11C)hPYY3−36反応混合物(10mgタンパク質)を、20mM酢酸ナトリウム、pH4.5(緩衝液A)中で平衡化したSP−Sepharose Hitrapカラム(5ml)(Amersham Pharmacia Biotech、GE Healthcare)上で分画する。反応混合物を流速1.0ml/分でカラム上に装填する。流速2.5ml/分、4カラム体積の緩衝液Aでカラムを洗浄する。続いて、流速2.5ml/分、25カラム体積の0〜200mMの直線NaCl勾配で、カラムから、多様な(D11C)hPYY3−36種を溶出させる。280nmの吸光度(A280)によって、溶離液を監視し、そして適切なサイズの分画を収集する。SEC−HPLCによって評価した際のPEG化の度合いに応じて分画をプールする。次いで、Vivaspin 10K濃縮装置(Vivascience Sartorius Group)を用いて、精製プールを0.5〜5mg/mlに濃縮する。実験的に得た消光係数を用いて、280nmの吸光度によって、精製プールのタンパク質濃度を決定する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEを用いて、20K mPEGマレイミド(D11C)hPYY3−36の精製プールのプロフィールを描く。
(g)直鎖12K mPEGマレイミド(D11C)hPYY 3−36 の調製
およそ12,000MW)の直鎖mPEGマレイミド試薬(Sunbright ME−120MA、NOF社を、(D11C)hPYY3−36に、残基10のシステインのスルフヒドリル基上で選択的にカップリングする。20mM酢酸ナトリウム(Sigma Chemical、ミズーリ州セントルイス)pH4.5中に溶解した直鎖12K mPEGマレイミドに、(D11C)hPYY3−36ペプチドを直接添加して、1mg/mlペプチド濃度および約1:1の相対的mPEG:(D11C)hPYY3−36モル比を生じることによって、該マレイミドを該ペプチドと直ちに反応させる。暗所中、室温で0.5〜24時間、反応を行う。20mM酢酸ナトリウム、pH4.5中の反応を陽イオン交換クロマトグラフィー上に直接装填する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEによって反応産物を評価する。
(h)直鎖12K mPEGマレイミド(D11C)hPYY 3−36 の精製
単回イオン交換クロマトグラフィー工程を用いて、反応混合物から>95%に、PEG化(D11C)hPYY3−36種を精製する。陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、未結合PEG、非修飾(D11C)hPYY3−36およびより大きい分子量種からモノPEG化(D11C)hPYY3−36を分離する。上述のような、典型的な直鎖12K mPEGマレイミド(D11C)hPYY3−36反応混合物(10mgタンパク質)を、20mM酢酸ナトリウム、pH4.5(緩衝液A)中で平衡化したSP−Sepharose Hitrapカラム(5ml)(Amersham Pharmacia Biotech、GE Healthcare)上で分画する。反応混合物を流速1.0ml/分でカラム上に装填する。流速2.5ml/分、4カラム体積の緩衝液Aでカラムを洗浄する。続いて、流速2.5ml/分、25カラム体積の0〜200mMの直線NaCl勾配で、カラムから、多様な(D11C)hPYY3−36種を溶出させる。280nmの吸光度(A280)によって、溶離液を監視し、そして適切なサイズの分画を収集する。SEC−HPLCによって評価した際のPEG化の度合いに応じて分画をプールする。次いで、Vivaspin 10K濃縮装置(Vivascience Sartorius Group)を用いて、精製プールを0.5〜5mg/mlに濃縮する。実験的に得た消光係数を用いて、280nmの吸光度によって、精製プールのタンパク質濃度を決定する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEを用いて、12K mPEGマレイミド(D11C)hPYY3−36の精製プールのプロフィールを描く。
(i)分枝鎖20K mPEGマレイミド(D11C)hPYY 3−36 の調製
およそ20,000MWの分枝鎖mPEGマレイミド試薬(Sunbright GL2−200MA、NOF社)を、(D11C)hPYY3−36に、残基10のシステインのスルフヒドリル基上で選択的にカップリングする。20mM酢酸ナトリウム(Sigma Chemical、ミズーリ州セントルイス)pH4.5中に溶解した分枝鎖20K mPEGマレイミドに、(D11C)hPYY3−36ペプチドを直接添加して、1mg/mlペプチド濃度および約1:1の相対的mPEG:(D11C)hPYY3−36モル比を生じることによって、該マレイミドを該ペプチドと直ちに反応させる。暗所中、室温で0.5〜24時間、反応を行う。20mM酢酸ナトリウム、pH4.5中の反応を陽イオン交換クロマトグラフィー上に直接装填する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEによって反応産物を評価する。
(j)分枝鎖20K mPEGマレイミド(D11C)hPYY 3−36 の精製
単回イオン交換クロマトグラフィー工程を用いて、反応混合物から>95%に、PEG化(D11C)hPYY3−36種を精製する。陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、未結合PEG、非修飾(D11C)hPYY3−36およびより大きい分子量種からモノPEG化(D11C)hPYY3−36を分離する。上述のような、典型的な分枝鎖20K mPEGマレイミド(D11C)hPYY3−36反応混合物(10mgタンパク質)を、20mM酢酸ナトリウム、pH4.5(緩衝液A)中で平衡化したSP−Sepharose Hitrapカラム(5ml)(Amersham Pharmacia Biotech、GE Healthcare)上で分画する。反応混合物を流速1.0ml/分でカラム上に装填する。流速2.5ml/分、4カラム体積の緩衝液Aでカラムを洗浄する。続いて、流速2.5ml/分、25カラム体積の0〜200mMの直線NaCl勾配で、カラムから、多様な(D11C)hPYY3−36種を溶出させる。280nmの吸光度(A280)によって、溶離液を監視し、そして適切なサイズの分画を収集する。SEC−HPLCによって評価した際のPEG化の度合いに応じて分画をプールする。次いで、Vivaspin 10K濃縮装置(Vivascience Sartorius Group)を用いて、精製プールを0.5〜5mg/mlに濃縮する。実験的に得た消光係数を用いて、280nmの吸光度によって、精製プールのタンパク質濃度を決定する。SEC−HPLCまたはSDS−PAGEを用いて、分枝鎖20K mPEGマレイミド(D11C)hPYY3−36の精製プールのプロフィールを描く。
生化学的性質決定
エレクトロスプレー質量分析(ESI−MS)、SDS−PAGE、およびSEC HPLCおよびRP HPLCを含む多様な生化学的方法によって、(E10C)hPYY3−36、(D11C)hPYY3−36、ならびに(E10C)hPYY3−36および(D11C)hPYY3−36のPEG化型を、それぞれ、性質決定した。
非変性SEC−HPLCを用いて、(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36いずれかと、直鎖30Kまたは分枝鎖43K mPEGの反応混合物、その陽イオン交換精製プール、および最終精製産物を評価した(実施例1(b)および(c)、2(b)および(c))。Shodex KW804またはTSK G4000PWXL(Tosohaas)を用い、20mMリン酸、pH7.4、150mM NaCl中、流速1.0ml/分で、分析的非変性SEC−HPLCを行った(場合によって、Superdex 200 7.8mmX30cm、Amersham Bioscience、ニュージャージー州ピスカタウェイ)。PEG化は、タンパク質の流体力学的体積を非常に増加させ、より早い保持時間へのシフトを生じた。30K mPEGマレイミドに(E10C)hPYY3−36を加えた反応混合物では、残渣非修飾(E10C)hPYY3−36に対応する小さいピークが観察されるとともに、PEG化ペプチド種に対応する新規ピークが観察された(図2)。30K mPEG(D11C)hPYY3−36および分枝鎖43K mPEG(E10C)hPYY3−36反応混合物中に、新規種が観察され、非修飾(D11C)hPYY3−36または(E10C)hPYY3−36は、非常にわずかしか残っていなかった(図5および8)。SP−Sepharoseクロマトグラフィーによって、これらのPEG化および非PEG化種を分画し、そして続いて、生じた精製モノmPEG(E10C)hPYY3−36およびmPEG(D11C)hPYY3−36種が、非変性SEC上の単一ピークとして、>95%純度で溶出したことが示された(図6、7および9)。SP−Sepharoseクロマトグラフィー工程は、未結合mPEG、(E10C)hPYY3−36または(D11C)hPYY3−36およびより大きい分子量の種を、モノPEG化直鎖30Kおよび分枝鎖43K mPEG(E10C)hPYY3−36またはmPEG(D11C)hPYY3−36から効果的に取り除いた。
SDS−PAGE(実施例1(c))もまた用いて、反応物、陽イオン交換精製分画(図3)、および最終精製産物を評価した。還元条件下および非還元条件下で、1mm厚の10−NuPAGEゲル(Invitrogen、カリフォルニア州カールスバッド)上、SDS−PAGEを行い、そしてNovex Colloidal CoomassieTM G−250染色キット(Invitrogen、カリフォルニア州カールスバッド)を用いて染色した。
慣用的アッセイにおいて、そして以下に記載するin vitroおよびin vivoアッセイにおいて、アゴニストの活性によって、哺乳動物(特にヒト)の体重増加の減少および肥満治療における、薬学的活性剤としての本発明のPYYアゴニストの有用性を立証してもよい。こうしたアッセイはまた、本発明のPYYアゴニストの活性を、既知の化合物の活性と比較しうる手段も提供する。
絶食が誘導する再摂食アッセイ:C57BL/6J雄マウス(The Jackson Laboratory、メイン州バーハーバー)を、ケージあたり2匹ずつ飼育した。12:12明期:暗期の周期(5:00AM点灯、5:00PM消灯)で飼育し、ペレットRMH3000 Purinaげっ歯類飼料(Research Diets, Inc.ニュージャージー州ニューブルンスウィック)を与え、そして自由に水を飲ませた。マウスは、7〜8週齢で到着し、そして研究前に最低10日間順応させた。研究当日、マウスは9〜12週齢であった。研究開始前日、新鮮な寝床で、そして食物がないが、水には自由にアクセスできるケージにマウスを入れた。マウスを一晩(20〜24時間)絶食させた。研究当日、マウスにIP注射を投与し(用量体積=5ml/kg)、ケージに戻し、そしてあらかじめ重量を測定した食物を、ケージに直ちに入れた。用いた投薬ビヒクルは、20mM酢酸Na、pH4.5、50mM NaClであり、そしてPEG化を伴わない活性PYY実体に関して、用量を計算した。ビヒクル対照、3つの用量(0.1mg/kg、0.3mg/kg、および1.0mg/kg)の天然PYY、30K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36、および43K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36を試験した。投薬2時間後、4時間後、6時間後、および24時間後に、食物の重量を再度測定した。こぼれたものに関して寝床をチェックし、この重量を測定し、そして計算に含めた。出発食物重量から各時点の食物重量を減じることによって、累積食物摂取を計算した。(FI処置−FIビヒクル)/FIビヒクル*100によって、阻害パーセント(%)を計算した。
リガンド結合に関するSPA:
リガンド結合に関するSPAは、Y2受容体からの放射標識PYYの競合的置換を測定し、そしてAmersham Biosciences(カタログ番号RPNQ 0085)から得られるレクチン、小麦胚芽凝集素(WGA)でコーティングされた、シンチラント含有微小球体(SPAビーズ)を利用する。50mM Hepes緩衝液(pH7.4)、145mM NaCl、2.5mM CaCl2、1mM MgCl2、10mMグルコース、0.1% BSA、5% DMSOおよびRocheプロテアーゼ阻害剤で構成される細胞採取緩衝液を用いて、表面上にY2受容体を発現するKAN−TSヒト神経芽細胞腫細胞(Fuhlendorfら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:182−186, 1990)を調製した。50mM Hepes緩衝液、pH7.4、1mM MgCl2、2.5mM CaCl2、0.1%(w/v)BSA、0.025%(w/v)バシトラシンおよび0.025%アジ化ナトリウムで構成されるアッセイ緩衝液中、50,000細胞/ウェル、125I−PYY(40,000cpm/ウェル)およびSPAビーズ(0.5mg/ウェル)を用い、96ウェル形式中、3つ組で、SPAアッセイを行った。多様な濃度(0.032〜500nM)の試験リガンドをアッセイ混合物に添加し、次いでこれを振盪しながら、室温で16〜24時間インキュベーションした。プレートを1時間放置し、そして次いでMicroBeta(登録商標)Trilux検出装置(Perkin Elmer、マサチューセッツ州ボストン)を用いて計測した。実施例1のhPYY3−36および30K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36に関する結果を図15に示す。
NPY Y2R受容体でのGTPγ[ 35 S]結合アッセイ
機能アッセイは、NEN Flashplates(96ウェル形式)で行うGTPγ[35S]結合アッセイである。Bassら, Mol. Pharm. 50:709−715, 1990に記載されるように、KAN−TS細胞から膜を調製した。50mM Tris Hcl、pH7.4、3mM MgCl2、pH7.4、10mM MgCl2、20mM EGTA、100mM NaCl、5μM GDP、0.1%ウシ血清アルブミン、および以下のプロテアーゼ阻害剤:100μg/mlのバシトラシン、100μg/mlのベンズアミジン、5μg/mlのアプロチニン、5μg/mlのロイペプチンで構成されるアッセイ緩衝液中、100pM GTPγ[35S]およびウェルあたり10μgの膜を用いて、2つ組で、96ウェルFlashPlateTM形式において、GTPγ[35S]結合アッセイを行った。次いで、アッセイ混合物を、増加する濃度の試験化合物(6点濃度曲線;10−12M〜10−5Mの範囲内のlog希釈)と30℃で60分間インキュベーションした。次いで、FlashPlatesTMを、2000Xgで10分間遠心分離した。次いで、MicrobetaTM検出装置を用いて、GTPγ[35S]結合刺激を定量化した。GraphpadによるPrismを用いて、EC50および固有活性計算を行った。実施例1のhPYY3−36および30K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36に関する結果を図16に示す。実施例1の30K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36および20K mPEGマレイミド(E10C)hPYY3−36のEC50値は匹敵した(例えば、同じアッセイで測定した際、4.3nMおよび4.6nM)。
Claims (28)
- アミノ酸配列IKPEAPGCDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY−NH2[配列番号3]を有するポリペプチド(E10C)hPYY3−36またはその薬学的に許容しうる塩。
- アミノ酸配列IKPEAPGECASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY−NH2[配列番号4]を有するポリペプチド(D11C)hPYY3−36またはその薬学的に許容しうる塩。
- ポリエチレングリコール(PEG)および請求項1に記載されるポリペプチド(E10C)hPYY3−36または請求項2に記載されるポリペプチド(D11C)hPYY3−36を含むコンジュゲート。
- 式3
- mPEGが直鎖である、請求項4のコンジュゲート。
- 式4
- (OCH2CH2)n部分が、約30kDの平均分子量を有する、請求項6のコンジュゲート。
- 式4
- (OCH2CH2)n部分が、約20kDの平均分子量を有する、請求項8のコンジュゲート。
- 式4
- (OCH2CH2)n部分が、約30kDの平均分子量を有する、請求項10のコンジュゲート。
- mPEGが分枝鎖である、請求項4のコンジュゲート。
- mPEGがグリセロール分枝鎖である、請求項12のコンジュゲート。
- 式5
- 各(OCH2CH2)m部分が、約20kD〜22kDの範囲内の平均分子量を有する、請求項14のコンジュゲート。
- 式5
- 各(OCH2CH2)m部分が、約20kD〜22kDの範囲内の平均分子量を有する、請求項16のコンジュゲート。
- 式5
- 式5
- 請求項1もしくは2のポリペプチドまたは請求項3〜19のいずれか1項のコンジュゲート、あるいはその薬学的に許容しうる塩、および薬学的に許容しうるキャリアーを含む、薬剤組成物。
- 抗肥満剤である第二の剤をさらに含む、請求項20の薬剤組成物。
- 肥満または過剰体重である状態を治療するための、請求項20の薬剤組成物。
- 哺乳動物において、体重増加を阻害するか、食物摂取を減少させるかまたはカロリー摂取を減少させるための、請求項20の薬剤組成物。
- 抗肥満剤である第二の剤と組み合わせてなることを特徴とする、請求項22または23の医薬組成物。
- 哺乳動物において、肥満または過剰体重である状態を治療するか、あるいは哺乳動物において、体重増加を阻害するか、食物摂取を減少させるかまたはカロリー摂取を減少させるための薬剤製造における、請求項1もしくは2のポリペプチドまたは請求項3〜19のいずれか1項のコンジュゲート、あるいはその薬学的に許容しうる塩の使用。
- 請求項1または2のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
- 配列番号3または配列番号4に示すようなアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合する、モノクローナル抗体。
- 前記ポリペプチドがシステイン残基でPEG化されている、請求項27のモノクローナル抗体。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US65036605P | 2005-02-04 | 2005-02-04 | |
US73365605P | 2005-11-04 | 2005-11-04 | |
PCT/IB2006/000270 WO2006082517A1 (en) | 2005-02-04 | 2006-01-30 | Pyy agonists and uses thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008528050A JP2008528050A (ja) | 2008-07-31 |
JP4314304B2 true JP4314304B2 (ja) | 2009-08-12 |
Family
ID=36175074
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007553737A Expired - Fee Related JP4314304B2 (ja) | 2005-02-04 | 2006-01-30 | Pyyアゴニストおよびその使用 |
Country Status (33)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20060178501A1 (ja) |
EP (2) | EP2078729A1 (ja) |
JP (1) | JP4314304B2 (ja) |
KR (1) | KR100892545B1 (ja) |
AP (1) | AP2007004069A0 (ja) |
AR (1) | AR052108A1 (ja) |
AT (1) | ATE426614T1 (ja) |
AU (1) | AU2006211039A1 (ja) |
BR (1) | BRPI0606142A2 (ja) |
CA (1) | CA2596977C (ja) |
CY (1) | CY1109054T1 (ja) |
DE (1) | DE602006005902D1 (ja) |
DK (1) | DK1846445T3 (ja) |
DO (1) | DOP2006000025A (ja) |
EA (1) | EA011882B1 (ja) |
ES (1) | ES2322293T3 (ja) |
GT (1) | GT200600038A (ja) |
HR (1) | HRP20090245T1 (ja) |
IL (1) | IL184324A0 (ja) |
MA (1) | MA29243B1 (ja) |
MX (1) | MX2007009389A (ja) |
NL (2) | NL1031067C2 (ja) |
NO (1) | NO20074498L (ja) |
PA (1) | PA8660701A1 (ja) |
PE (1) | PE20061412A1 (ja) |
PL (1) | PL1846445T3 (ja) |
PT (1) | PT1846445E (ja) |
RS (1) | RS50966B (ja) |
SI (1) | SI1846445T1 (ja) |
TN (1) | TNSN07305A1 (ja) |
TW (1) | TWI310038B (ja) |
UY (1) | UY29357A1 (ja) |
WO (1) | WO2006082517A1 (ja) |
Families Citing this family (82)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005508324A (ja) | 2001-09-24 | 2005-03-31 | インペリアル カレッジ イノベーションズ リミテッド | 摂食行動の修正 |
US7214660B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
US7173003B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-06 | Neose Technologies, Inc. | Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF |
US20070026485A1 (en) | 2003-04-09 | 2007-02-01 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
US9005625B2 (en) | 2003-07-25 | 2015-04-14 | Novo Nordisk A/S | Antibody toxin conjugates |
US8633157B2 (en) | 2003-11-24 | 2014-01-21 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin |
US20080305992A1 (en) | 2003-11-24 | 2008-12-11 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
CA2552892C (en) | 2004-01-08 | 2014-08-05 | Neose Technologies, Inc. | O-linked glycosylation of peptides |
EP1744786A2 (en) * | 2004-03-23 | 2007-01-24 | Amgen Inc. | Chemically modified protein compositions and methods |
EP1771066A2 (en) | 2004-07-13 | 2007-04-11 | Neose Technologies, Inc. | Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 glp-1 |
EP2586456B1 (en) | 2004-10-29 | 2016-01-20 | ratiopharm GmbH | Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (FGF) |
AU2006203792B2 (en) | 2005-01-10 | 2011-11-03 | Ratiopharm Gmbh | Glycopegylated Granulocyte Colony Stimulating Factor |
EP2386571B1 (en) | 2005-04-08 | 2016-06-01 | ratiopharm GmbH | Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants |
US20090042790A1 (en) * | 2005-06-13 | 2009-02-12 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Transmucosal delivery of peptide derivatives |
US20070105755A1 (en) | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Neose Technologies, Inc. | One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides |
US20090158449A1 (en) | 2005-08-31 | 2009-06-18 | Kaneka Corporation | Transgenic avian which has foreign gene containing sequence encoding feline-derived protein and method for production thereof |
WO2007056191A2 (en) | 2005-11-03 | 2007-05-18 | Neose Technologies, Inc. | Nucleotide sugar purification using membranes |
WO2007085887A1 (en) * | 2006-01-27 | 2007-08-02 | Pfizer Products Inc. | Pyy agonists and uses thereof |
US20080242607A1 (en) | 2006-07-21 | 2008-10-02 | Neose Technologies, Inc. | Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences |
JP2008069073A (ja) * | 2006-09-12 | 2008-03-27 | Yokohama Tlo Co Ltd | ラクトフェリン複合体及びその製造方法 |
US20100075375A1 (en) | 2006-10-03 | 2010-03-25 | Novo Nordisk A/S | Methods for the purification of polypeptide conjugates |
BRPI0717505B8 (pt) * | 2006-10-04 | 2021-05-25 | Novo Nordisk As | conjugado de peptídeo e formulação farmacêutica |
TWI428346B (zh) | 2006-12-13 | 2014-03-01 | Imp Innovations Ltd | 新穎化合物及其等對進食行為影響 |
EA017770B1 (ru) | 2007-04-03 | 2013-03-29 | Биодженерикс Аг | Способы лечения с использованием гликопэгилированного g-csf |
CN101778859B (zh) | 2007-06-12 | 2014-03-26 | 诺和诺德公司 | 改良的用于生产核苷酸糖的方法 |
CN103497246B (zh) | 2008-02-27 | 2016-08-10 | 诺沃—诺迪斯克有限公司 | 缀合的因子viii分子 |
WO2010016936A1 (en) * | 2008-08-07 | 2010-02-11 | Ipsen Pharma S.A.S. | Pharmaceutical compositions of analogues of glucose-dependent insulinotropic polypeptide |
EA201170647A1 (ru) | 2008-11-04 | 2011-12-30 | Янссен Фармацевтика Нв | Пептиды-агонисты crhr2 и их использование |
WO2010067233A1 (en) | 2008-12-08 | 2010-06-17 | Pfizer Inc. | 1,2,4 triazolo [4, 3 -a] [1,5] benzodiazepin-5 (6h) -ones as agonists of the cholecystokinin-1 receptor (cck-ir) |
WO2010084428A1 (en) | 2009-01-20 | 2010-07-29 | Pfizer Inc. | Substituted pyrazinone amides |
TW201038580A (en) | 2009-02-02 | 2010-11-01 | Pfizer | 4-amino-5-oxo-7,8-dihydropyrimido[5,4-f][1,4]oxazepin-6(5H)-yl)phenyl derivatives |
WO2010089685A1 (en) | 2009-02-03 | 2010-08-12 | Pfizer Inc. | 4-amino-7,8-dihydropyrido[4,3-d]pyrimidin-5(6h)-one derivatives |
TW201040175A (en) | 2009-02-04 | 2010-11-16 | Pfizer | 4-amino-7,8-dihydropyrido[4,3-d]pyrimidin-5(6H)-one derivatives |
EP2406230A1 (en) | 2009-03-11 | 2012-01-18 | Pfizer Inc. | Substituted indazole amides and their use as glucokinase activators |
AU2010222589B2 (en) | 2009-03-11 | 2012-08-16 | Pfizer Inc. | Benzofuranyl derivatives used as glucokinase inhibitors |
EP2408780A2 (en) | 2009-03-20 | 2012-01-25 | Pfizer Inc. | 3-oxa-7-azabicycloý3.3.1¨nonanes |
JP2012528847A (ja) | 2009-06-05 | 2012-11-15 | ファイザー・インク | Gpr119調節因子としてのl−(ピペリジン−4−イル)−ピラゾール誘導体 |
EP2480551A1 (en) | 2009-09-23 | 2012-08-01 | Pfizer Inc. | Gpr 119 modulators |
RS53827B1 (en) | 2009-11-02 | 2015-06-30 | Pfizer Inc. | DIOKSA-BICYCLE DERIVATIVES [3.2.1] OCTOBER-2,3,4-TRIOLA |
BR112012011072A2 (pt) | 2009-11-10 | 2017-06-20 | Pfizer | inibidores de n1-pirazolospirocetona acetil-coa carboxilase |
EP2499140A1 (en) | 2009-11-10 | 2012-09-19 | Pfizer Inc. | N2-pyrazolospiroketone acetyl-coa carboxylase inhibitors |
EP2504342A1 (en) | 2009-11-23 | 2012-10-03 | Pfizer Inc. | Imidazo-pyrazoles as gpr119 inhibitors |
KR101455917B1 (ko) | 2010-03-19 | 2014-11-03 | 화이자 인코포레이티드 | 2,3-디히드로-1h-인덴-1-일-2,7-디아자스피로[3.5]노난 유도체 및 그렐린 수용체의 길항제 또는 역 작용제로서의 그 용도 |
WO2011158149A1 (en) | 2010-06-18 | 2011-12-22 | Pfizer Inc. | 2-(3,5-disubstitutedphenyl)pyrimidin-4(3h)-one derivatives |
PT2621493T (pt) | 2010-09-30 | 2016-11-14 | Pfizer | Inibidores de n1-pirazolospirocetona acetil-coa carboxilase |
CA2815169C (en) | 2010-10-29 | 2015-10-06 | Pfizer Inc. | N1/n2-lactam acetyl-coa carboxylase inhibitors |
EP2655331A1 (en) | 2010-12-23 | 2013-10-30 | Pfizer Inc | Glucagon receptor modulators |
WO2012107850A1 (en) | 2011-02-08 | 2012-08-16 | Pfizer Inc. | Glucagon receptor modulator |
EP2699576B1 (en) | 2011-04-22 | 2015-12-09 | Pfizer Inc | Pyrazolospiroketone derivatives for use as acetyl-coa carboxylase inhibitors |
WO2013011402A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Pfizer Inc. | Gpr 119 modulators |
KR20140023441A (ko) | 2011-07-22 | 2014-02-26 | 화이자 인코포레이티드 | 퀴놀린일 글루카곤 수용체 조절제 |
EP2751116B1 (en) | 2011-08-31 | 2016-10-12 | Pfizer Inc | Hexahydropyrano [3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds |
US9814782B2 (en) | 2012-02-24 | 2017-11-14 | Alteogen Inc. | Modified antibody in which motif comprising cysteine residue is bound, modified antibody-drug conjugate comprising the modified antibody, and production method for same |
AP2014007953A0 (en) | 2012-04-06 | 2014-09-30 | Pfizer | Diacylglycerol acyltransferase 2 inhibitors |
US8889730B2 (en) | 2012-04-10 | 2014-11-18 | Pfizer Inc. | Indole and indazole compounds that activate AMPK |
ES2585262T3 (es) | 2012-05-04 | 2016-10-04 | Pfizer Inc | Compuestos heterocíclicos de hexahidropiran[3,4-d][1,3]tiazin-2-amina sustituidos como inhibidores de PPA, BACE1 y BACE2 |
EP2897964A1 (en) | 2012-09-20 | 2015-07-29 | Pfizer Inc. | Alkyl-substituted hexahydropyrano [3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds |
WO2014091352A1 (en) | 2012-12-11 | 2014-06-19 | Pfizer Inc. | Hexahydropyrano [3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds as inhibitors of bace1 |
EP2935282A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | Pfizer Inc. | CARBOCYCLIC- AND HETEROCYCLIC-SUBSTITUTED HEXAHYDROPYRANO[3,4-d][1,3]THIAZIN-2-AMINE COMPOUNDS |
WO2014125394A1 (en) | 2013-02-13 | 2014-08-21 | Pfizer Inc. | HETEROARYL-SUBSTITUTED HEXAHYDROPYRANO [3,4-d][1,3] THIAZIN-2-AMINE COMPOUNDS |
US9233981B1 (en) | 2013-02-15 | 2016-01-12 | Pfizer Inc. | Substituted phenyl hexahydropyrano[3,4-d][1,3]thiazin-2-amine compounds |
KR20160003848A (ko) | 2013-05-02 | 2016-01-11 | 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 | 치료용 펩티드 |
EP3055300B1 (en) | 2013-10-09 | 2018-03-07 | Pfizer Inc | Antagonists of prostaglandin ep3 receptor |
JP2017507645A (ja) * | 2013-12-20 | 2017-03-23 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | C末端アミド化のためのペプチジルグリシンα−アミド化モノオキシゲナーゼ(PAM)の使用 |
SI3119757T1 (en) | 2014-03-17 | 2018-08-31 | Pfizer Inc. | DIACILGLICEROL-ACILTRANSFERAZE 2 BINDERS FOR THE USE IN THE TREATMENT OF PRECIOUS AND RELATED DISEASES |
CN106459088A (zh) | 2014-04-10 | 2017-02-22 | 辉瑞公司 | 2‑氨基‑6‑甲基‑4,4a,5,6‑四氢吡喃并[3,4‑d][1,3]噻嗪‑8a(8H)‑基‑1,3‑噻唑‑4‑基酰胺 |
WO2016092413A1 (en) | 2014-12-10 | 2016-06-16 | Pfizer Inc. | Indole and indazole compounds that activate ampk |
WO2016103097A1 (en) | 2014-12-22 | 2016-06-30 | Pfizer Inc. | Antagonists of prostaglandin ep3 receptor |
WO2016124687A1 (en) * | 2015-02-04 | 2016-08-11 | Novo Nordisk A/S | Selective pyy compounds and uses thereof |
HUE051898T2 (hu) | 2015-06-17 | 2021-03-29 | Pfizer | Triciklusos vegyületek és alkalmazásuk foszfodiészteráz inhibitorokként |
EP3353182A1 (en) | 2015-09-24 | 2018-08-01 | Pfizer Inc | Tetrahydropyrano[3,4-d][1,3]oxazin derivatives and their use as bace inhibitors |
WO2017051276A1 (en) | 2015-09-24 | 2017-03-30 | Pfizer Inc. | N-[2-(2-amino-6,6-disubstituted-4, 4a, 5, 6-tetrahydropyrano [3,4-d][1,3] thiazin-8a (8h)-yl) -1, 3-thiazol-4-yl] amides |
JP2018534251A (ja) | 2015-09-24 | 2018-11-22 | ファイザー・インク | Bace阻害剤として有用なn−[2−(3−アミノ−2,5−ジメチル−1,1−ジオキシド−5,6−ジヒドロ−2h−1,2,4−チアジアジン−5−イル)−1,3−チアゾール−4−イル]アミド |
MX2018007755A (es) | 2015-12-29 | 2018-11-09 | Pfizer | 3-azabiciclo[3.1.0]hexanos sustituidos como inhibidores de cetohexoquinasa. |
AR109179A1 (es) | 2016-08-19 | 2018-11-07 | Pfizer | Inhibidores de diacilglicerol aciltransferasa 2 |
US20210171598A1 (en) | 2017-12-01 | 2021-06-10 | University Of Copenhagen | Peptide hormone with one or more o-glycans |
WO2019210154A1 (en) * | 2018-04-26 | 2019-10-31 | Colorado State University Research Foundation | Methods and compositions for tracking vegetation |
CN112955147A (zh) | 2018-08-31 | 2021-06-11 | 辉瑞公司 | 用于治疗nash/nafld和相关疾病的组合 |
EP3972596A1 (en) | 2019-05-20 | 2022-03-30 | Pfizer Inc. | Combinations comprising benzodioxol as glp-1r agonists for use in the treatment of nash/nafld and related diseases |
WO2023283392A1 (en) * | 2021-07-08 | 2023-01-12 | Gila Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for activating a neural receptor |
WO2023026180A1 (en) | 2021-08-26 | 2023-03-02 | Pfizer Inc. | Amorphous form of (s)-2-(5-((3-ethoxypyridin-2-yl)oxy)pyridin-3-yl)-n-(tetrahydrofuran-3- yl)pyrimidine-5-carboxamide |
WO2024118524A1 (en) | 2022-11-28 | 2024-06-06 | Cerevel Therapeutics, Llc | Azaindole compounds and their use as phosphodiesterase inhibitors |
Family Cites Families (145)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US176643A (en) * | 1876-04-25 | Improvement in ironing-tables | ||
US141985A (en) * | 1873-08-19 | Improvement in sewing-machine tables | ||
US176630A (en) * | 1876-04-25 | Improvement in wagon-locks | ||
US244041A (en) * | 1881-07-12 | Machine for blocking and shaping hats | ||
US2919901A (en) * | 1957-01-25 | 1960-01-05 | Thor Power Tool Co | Drill system with suction |
US5508815A (en) * | 1981-12-14 | 1996-04-16 | Smart Vcr Limited Partnership | Schedule display system for video recorder programming |
US4908713A (en) * | 1981-12-14 | 1990-03-13 | Levine Michael R | VCR Programmer |
US4586158A (en) * | 1983-02-22 | 1986-04-29 | International Business Machines Corp. | Screen management system |
US4708934A (en) | 1984-09-27 | 1987-11-24 | Unigene Laboratories, Inc. | α-amidation enzyme |
US6319685B1 (en) | 1984-09-27 | 2001-11-20 | Unigene Laboratories, Inc. | Alpha-amidating enzyme compositions and processes for their production and use |
DE229046T1 (de) | 1985-03-30 | 1987-12-17 | Marc Genf/Geneve Ballivet | Verfahren zum erhalten von dns, rns, peptiden, polypeptiden oder proteinen durch dns-rekombinant-verfahren. |
US5763192A (en) | 1986-11-20 | 1998-06-09 | Ixsys, Incorporated | Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique |
US4821097A (en) * | 1987-03-05 | 1989-04-11 | General Instrument Corporation | Apparatus and method for providing digital audio on the sound carrier of a standard television signal |
US5789234A (en) | 1987-08-14 | 1998-08-04 | Unigene Laboratories, Inc. | Expression systems for amidating enzyme |
US4930158A (en) * | 1987-09-02 | 1990-05-29 | Vogel Peter S | Selective video playing system |
US4984152A (en) * | 1987-10-06 | 1991-01-08 | Bell Communications Research, Inc. | System for controlling computer processing utilizing a multifunctional cursor with decoupling of pointer and image functionalities in space and time |
US4827250A (en) * | 1987-10-26 | 1989-05-02 | Tektronix, Inc. | Graphics display system having data transform circuit |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US4991011A (en) * | 1988-12-23 | 1991-02-05 | Scientific-Atlanta, Inc. | Interactive television terminal with programmable background audio or video |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
WO1990014363A1 (en) | 1989-05-19 | 1990-11-29 | Amgen Inc. | Metalloproteinase inhibitor |
US5727060A (en) * | 1989-10-30 | 1998-03-10 | Starsight Telecast, Inc. | Television schedule system |
SG48759A1 (en) | 1990-01-12 | 2002-07-23 | Abgenix Inc | Generation of xenogenic antibodies |
EP0814159B1 (en) | 1990-08-29 | 2005-07-27 | GenPharm International, Inc. | Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies |
US5293357A (en) * | 1990-09-10 | 1994-03-08 | The Superguide Corporation | Method and apparatus for controlling a television program recording device |
US5247347A (en) * | 1991-09-27 | 1993-09-21 | Bell Atlantic Network Services, Inc. | Pstn architecture for video-on-demand services |
JP2654283B2 (ja) * | 1991-09-30 | 1997-09-17 | 株式会社東芝 | アイコン表示方法 |
US5317391A (en) * | 1991-11-29 | 1994-05-31 | Scientific-Atlanta, Inc. | Method and apparatus for providing message information to subscribers in a cable television system |
US5291554A (en) * | 1992-05-28 | 1994-03-01 | Tv Answer, Inc. | Shared-price custom video rentals via interactive TV |
FR2692575B1 (fr) | 1992-06-23 | 1995-06-30 | Sanofi Elf | Nouveaux derives du pyrazole, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
CA2140638C (en) | 1992-07-24 | 2010-05-04 | Raju Kucherlapati | Generation of xenogeneic antibodies |
JPH06139671A (ja) * | 1992-10-27 | 1994-05-20 | Sony Corp | 記録再生システム |
DE69228711T2 (de) * | 1992-10-30 | 1999-10-07 | Juki Kk | SCHNEIDEEINHEIT FüR KUVERTIER- UND VERSCHLIESSMASCHINEN |
US5592551A (en) * | 1992-12-01 | 1997-01-07 | Scientific-Atlanta, Inc. | Method and apparatus for providing interactive electronic programming guide |
US5715515A (en) * | 1992-12-02 | 1998-02-03 | Scientific-Atlanta, Inc. | Method and apparatus for downloading on-screen graphics and captions to a television terminal |
US5410326A (en) * | 1992-12-04 | 1995-04-25 | Goldstein; Steven W. | Programmable remote control device for interacting with a plurality of remotely controlled devices |
JP3958354B2 (ja) * | 1992-12-09 | 2007-08-15 | セドナ・パテント・サービシズ・エルエルシー | ケーブルテレビ配送システムのための改良型セットトップ端末 |
US5600364A (en) * | 1992-12-09 | 1997-02-04 | Discovery Communications, Inc. | Network controller for cable television delivery systems |
US5483277A (en) * | 1992-12-15 | 1996-01-09 | Alcatel Network Systems | Simplified set-top converter for broadband switched network |
US5598524A (en) * | 1993-03-03 | 1997-01-28 | Apple Computer, Inc. | Method and apparatus for improved manipulation of data between an application program and the files system on a computer-controlled display system |
PL310897A1 (en) * | 1993-03-29 | 1996-01-08 | Univ Cincinnati | Analogues of yy peptide and their application |
US5621456A (en) * | 1993-06-22 | 1997-04-15 | Apple Computer, Inc. | Methods and apparatus for audio-visual interface for the display of multiple program categories |
US5594509A (en) * | 1993-06-22 | 1997-01-14 | Apple Computer, Inc. | Method and apparatus for audio-visual interface for the display of multiple levels of information on a display |
US5414455A (en) * | 1993-07-07 | 1995-05-09 | Digital Equipment Corporation | Segmented video on demand system |
US5410344A (en) * | 1993-09-22 | 1995-04-25 | Arrowsmith Technologies, Inc. | Apparatus and method of selecting video programs based on viewers' preferences |
US5398071A (en) * | 1993-11-02 | 1995-03-14 | Texas Instruments Incorporated | Film-to-video format detection for digital television |
US5481542A (en) * | 1993-11-10 | 1996-01-02 | Scientific-Atlanta, Inc. | Interactive information services control system |
US5422674A (en) * | 1993-12-22 | 1995-06-06 | Digital Equipment Corporation | Remote display of an image by transmitting compressed video frames representing background and overlay portions thereof |
US5516653A (en) * | 1993-12-28 | 1996-05-14 | Synaptic Pharmaceutical Corporation | DNA encoding a human neuropeptide Y/peptide YY/pancreatic polypeptide receptor (Y4) and uses thereof |
JPH07244781A (ja) * | 1994-03-07 | 1995-09-19 | C S K Sogo Kenkyusho:Kk | ソフトウェアレンタル方法および装置ならびに流通媒体 |
US5629732A (en) * | 1994-03-29 | 1997-05-13 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Viewer controllable on-demand multimedia service |
US5512958A (en) * | 1994-04-29 | 1996-04-30 | Matsushita Electric Corporation Of America | System for controlling the effects of noise in television receivers |
US5521631A (en) * | 1994-05-25 | 1996-05-28 | Spectravision, Inc. | Interactive digital video services system with store and forward capabilities |
JP3575063B2 (ja) * | 1994-07-04 | 2004-10-06 | ソニー株式会社 | 再生装置、再生方法 |
US5596106A (en) | 1994-07-15 | 1997-01-21 | Eli Lilly And Company | Cannabinoid receptor antagonists |
DE69521374T2 (de) * | 1994-08-24 | 2001-10-11 | Hyundai Electronics America | Videoserver und diesen verwendendes System |
US5682325A (en) * | 1994-09-12 | 1997-10-28 | Bell Atlantic Network Services, Inc. | Level 1 gateway for video tone networks |
US5619249A (en) * | 1994-09-14 | 1997-04-08 | Time Warner Entertainment Company, L.P. | Telecasting service for providing video programs on demand with an interactive interface for facilitating viewer selection of video programs |
DE4435477A1 (de) | 1994-10-04 | 1996-04-11 | Bayer Ag | Cycloalkano-indol- und -azaindol-derivate |
US5614940A (en) * | 1994-10-21 | 1997-03-25 | Intel Corporation | Method and apparatus for providing broadcast information with indexing |
DK0788496T3 (da) | 1994-10-27 | 2001-06-18 | Janssen Pharmaceutica Nv | Inhibitorer for syntese af apolipoprotein-B |
US5521186A (en) | 1994-10-27 | 1996-05-28 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Apolipoprotein-β synthesis inhibitors |
US5724521A (en) * | 1994-11-03 | 1998-03-03 | Intel Corporation | Method and apparatus for providing electronic advertisements to end users in a consumer best-fit pricing manner |
US5623613A (en) * | 1994-11-29 | 1997-04-22 | Microsoft Corporation | System for displaying programming information |
US5912227A (en) * | 1995-01-27 | 1999-06-15 | North Carolina State University | Method of enhancing nutrient uptake |
US5619247A (en) * | 1995-02-24 | 1997-04-08 | Smart Vcr Limited Partnership | Stored program pay-per-play |
US5632681A (en) * | 1995-03-07 | 1997-05-27 | International Business Machines Corporation | Universal electronic video game renting/distributing system |
US5651010A (en) * | 1995-03-16 | 1997-07-22 | Bell Atlantic Network Services, Inc. | Simultaneous overlapping broadcasting of digital programs |
CA2219361C (en) | 1995-04-27 | 2012-02-28 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5721829A (en) * | 1995-05-05 | 1998-02-24 | Microsoft Corporation | System for automatic pause/resume of content delivered on a channel in response to switching to and from that channel and resuming so that a portion of the content is repeated |
US6558708B1 (en) * | 1995-05-17 | 2003-05-06 | Cedars-Sinai Medical Center | Methods for manipulating upper gastrointestinal transit, blood flow, and satiety, and for treating visceral hyperalgesia |
US5740549A (en) * | 1995-06-12 | 1998-04-14 | Pointcast, Inc. | Information and advertising distribution system and method |
US5751282A (en) * | 1995-06-13 | 1998-05-12 | Microsoft Corporation | System and method for calling video on demand using an electronic programming guide |
US5724106A (en) * | 1995-07-17 | 1998-03-03 | Gateway 2000, Inc. | Hand held remote control device with trigger button |
US5745837A (en) * | 1995-08-25 | 1998-04-28 | Terayon Corporation | Apparatus and method for digital data transmission over a CATV system using an ATM transport protocol and SCDMA |
US5737028A (en) * | 1995-11-01 | 1998-04-07 | International Business Machines Corporation | Previous channel listing with cursor controlled user interface for television video displays |
US5919901A (en) * | 1996-04-08 | 1999-07-06 | Bayer Corporation | Neuropeptide Y receptor Y5 and nucleic acid sequences |
US5721897A (en) * | 1996-04-09 | 1998-02-24 | Rubinstein; Seymour I. | Browse by prompted keyword phrases with an improved user interface |
US5721827A (en) * | 1996-10-02 | 1998-02-24 | James Logan | System for electrically distributing personalized information |
EP2699011A3 (en) * | 1996-12-10 | 2014-03-19 | United Video Properties, Inc. | Internet television program guide system |
US6654933B1 (en) * | 1999-09-21 | 2003-11-25 | Kasenna, Inc. | System and method for media stream indexing |
ATE484572T1 (de) | 1997-04-16 | 2010-10-15 | Unigene Lab Inc | Direkte expression von peptiden ins kulturmedium |
IL121230A (en) * | 1997-07-03 | 2004-05-12 | Nds Ltd | Intelligent electronic program guide |
US6342220B1 (en) | 1997-08-25 | 2002-01-29 | Genentech, Inc. | Agonist antibodies |
DE69841723D1 (de) | 1997-09-26 | 2010-07-29 | Abt Holding Co | Expression von endogenen genen durch homologe rekombination eines vektorkonstruktes mit zellulärer dna |
US6046167A (en) * | 1998-03-25 | 2000-04-04 | University Of Cincinnati | Peptide YY analogs |
US6505348B1 (en) * | 1998-07-29 | 2003-01-07 | Starsight Telecast, Inc. | Multiple interactive electronic program guide system and methods |
US6360053B1 (en) * | 1998-08-07 | 2002-03-19 | Replaytv, Inc. | Method and apparatus for fast forwarding and rewinding in a video recording device |
KR100652994B1 (ko) | 1998-09-11 | 2006-11-30 | 아방티 파르마 소시에테 아노님 | 아제티딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 약제 |
US20020026638A1 (en) * | 2000-08-31 | 2002-02-28 | Eldering Charles A. | Internet-based electronic program guide advertisement insertion method and apparatus |
FR2789079B3 (fr) | 1999-02-01 | 2001-03-02 | Sanofi Synthelabo | Derive d'acide pyrazolecarboxylique, sa preparation, les compositions pharmaceutiques en contenant |
DK1189629T3 (da) * | 1999-02-10 | 2011-01-03 | Curis Inc | Peptid YY (PYY) til behandling af glucosestofskiftesygdomme |
US7086077B2 (en) * | 1999-04-01 | 2006-08-01 | Sedna Patent Services, Llc | Service rate change method and apparatus |
US7150031B1 (en) * | 2000-06-09 | 2006-12-12 | Scientific-Atlanta, Inc. | System and method for reminders of upcoming rentable media offerings |
US7010801B1 (en) * | 1999-06-11 | 2006-03-07 | Scientific-Atlanta, Inc. | Video on demand system with parameter-controlled bandwidth deallocation |
US6986156B1 (en) * | 1999-06-11 | 2006-01-10 | Scientific Atlanta, Inc | Systems and methods for adaptive scheduling and dynamic bandwidth resource allocation management in a digital broadband delivery system |
US6832386B1 (en) * | 1999-06-11 | 2004-12-14 | Scientific-Atlanta, Inc. | System and method for allowing a user to quickly navigate within a program guide to an established reference point |
US7228556B2 (en) * | 1999-12-21 | 2007-06-05 | Tivo Inc. | Distributed, interactive television program guide; system and method |
US20030030679A1 (en) * | 2000-01-06 | 2003-02-13 | Anuj Kumar Jain | User-definable images in bookmarks |
WO2001075548A2 (en) * | 2000-03-31 | 2001-10-11 | Liquid Engines, Inc. | System and method for implementing electronic markets |
ES2400716T3 (es) * | 2000-03-31 | 2013-04-11 | United Video Properties, Inc. | Sistema y método de medios interactivos para presentar contenido |
US20020007485A1 (en) * | 2000-04-03 | 2002-01-17 | Rodriguez Arturo A. | Television service enhancements |
GB0008691D0 (en) * | 2000-04-07 | 2000-05-31 | Post Impressions Systems Ltd | Input and output systems for data processing |
US7934232B1 (en) * | 2000-05-04 | 2011-04-26 | Jerding Dean F | Navigation paradigm for access to television services |
US8069259B2 (en) * | 2000-06-09 | 2011-11-29 | Rodriguez Arturo A | Managing removal of media titles from a list |
US7685520B2 (en) * | 2000-06-22 | 2010-03-23 | Intel Corporation | Electronic programming guide with selectable categories |
US7962370B2 (en) * | 2000-06-29 | 2011-06-14 | Rodriguez Arturo A | Methods in a media service system for transaction processing |
JP4356226B2 (ja) * | 2000-09-12 | 2009-11-04 | ソニー株式会社 | サーバ装置、配信システム、配信方法、及び端末装置 |
US8302127B2 (en) * | 2000-09-25 | 2012-10-30 | Thomson Licensing | System and method for personalized TV |
EP1325627B1 (en) * | 2000-10-11 | 2006-04-19 | United Video Properties, Inc. | Systems and methods for building user media lists |
US20020049978A1 (en) * | 2000-10-20 | 2002-04-25 | Rodriguez Arturo A. | System and method for access and placement of media content information items on a screen display with a remote control device |
US6924291B2 (en) | 2001-01-23 | 2005-08-02 | Merck & Co., Inc. | Process for making spiro isobenzofuranone compounds |
ATE284872T1 (de) | 2001-03-22 | 2005-01-15 | Solvay Pharm Bv | 4,5-dihydro-1h-pyrazolderivate mit cb1- antagonistischer wirkung |
EP1456360B1 (en) | 2001-04-19 | 2015-06-03 | The Scripps Research Institute | Methods and composition for the production of orthoganal trna-aminoacyltrna synthetase pairs |
NZ528752A (en) | 2001-06-28 | 2006-06-30 | Pfizer Prod Inc | Triamide-substituted indoles, benzofuranes and benzothiophenes as inhibitors of microsomal triglyceride transfer protein (MTP) and/or apolipoprotein B (APO B) secretion |
US8006262B2 (en) * | 2001-06-29 | 2011-08-23 | Rodriguez Arturo A | Graphic user interfaces for purchasable and recordable media (PRM) downloads |
JP2005508324A (ja) * | 2001-09-24 | 2005-03-31 | インペリアル カレッジ イノベーションズ リミテッド | 摂食行動の修正 |
US7142590B2 (en) * | 2001-10-11 | 2006-11-28 | Utstarcom Inc. | Method and system for oversubscribing a DSL modem |
US20030074257A1 (en) * | 2001-10-12 | 2003-04-17 | Michael Saveliev | Method and apparatus for advertising adjacent to a beverage dispenser to facilitate advertising income device placement in high traffic venues |
US7334251B2 (en) * | 2002-02-11 | 2008-02-19 | Scientific-Atlanta, Inc. | Management of television advertising |
EP1482794A1 (en) | 2002-03-06 | 2004-12-08 | Merck & Co., Inc. | Method of treatment or prevention of obesity |
JP2005528366A (ja) | 2002-03-26 | 2005-09-22 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | カンナビノイド受容体モジュレータとしてのスピロ環式アミド |
RU2304580C2 (ru) | 2002-07-29 | 2007-08-20 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Новые бензодиоксолы |
WO2004012671A2 (en) | 2002-08-02 | 2004-02-12 | Merck & Co., Inc. | Substituted furo [2,3-b] pyridine derivatives |
US7129239B2 (en) | 2002-10-28 | 2006-10-31 | Pfizer Inc. | Purine compounds and uses thereof |
MY134457A (en) | 2002-11-22 | 2007-12-31 | Merck & Co Inc | Substituted amides |
US7186692B2 (en) | 2002-12-17 | 2007-03-06 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Compositions and methods for enhanced mucosal delivery and non-infused administration of Y2 receptor-binding peptides and methods for treating and preventing obesity |
EA008829B1 (ru) | 2002-12-17 | 2007-08-31 | Нэстек Фармасьютикал Кампани Инк. | Композиции и способы для усовершенствованной доставки пептидов, связывающихся с y-рецепторами, которую осуществляют через слизистые оболочки, и способы лечения и предотвращения ожирения |
AU2003289118A1 (en) * | 2002-12-18 | 2004-07-09 | International Business Machines Corporation | Web service providing system, server device for the same, control method for controlling computer system as server device for web service providing system, program for executing the control method, and recording medium |
US7329658B2 (en) | 2003-02-06 | 2008-02-12 | Pfizer Inc | Cannabinoid receptor ligands and uses thereof |
US20070027073A1 (en) | 2003-04-08 | 2007-02-01 | Menachem Rubinstein | Long-acting derivatives of pyy agonists |
US7141669B2 (en) | 2003-04-23 | 2006-11-28 | Pfizer Inc. | Cannabiniod receptor ligands and uses thereof |
US7145012B2 (en) | 2003-04-23 | 2006-12-05 | Pfizer Inc. | Cannabinoid receptor ligands and uses thereof |
US20050009748A1 (en) | 2003-05-14 | 2005-01-13 | Emisphere Technologies, Inc. | Compositions for delivering peptide YY and PYY agonists |
US8008255B2 (en) | 2003-05-30 | 2011-08-30 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for enhanced transmucosal delivery of peptides and proteins |
US7274740B2 (en) * | 2003-06-25 | 2007-09-25 | Sharp Laboratories Of America, Inc. | Wireless video transmission system |
US20050091693A1 (en) * | 2003-10-22 | 2005-04-28 | Rochelle Communications, Inc. | Dual mode set-top box that optimizes the delivery and user selection of audio or video programming over data networks |
US7151097B2 (en) | 2003-11-07 | 2006-12-19 | Pfizer Inc. | Bicyclic pyrazolyl and imidazolyl compounds and uses thereof |
JP2007520543A (ja) | 2004-02-04 | 2007-07-26 | ファイザー・プロダクツ・インク | 置換キノリン化合物 |
US8603969B2 (en) * | 2004-02-11 | 2013-12-10 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | Pancreatic polypeptide family motifs and polypeptides comprising the same |
EP1718671A2 (en) * | 2004-02-23 | 2006-11-08 | Rheoscience A/S | Peptide yy analogues |
US7954129B2 (en) * | 2004-09-24 | 2011-05-31 | Smartvue Corporation | Wireless video surveillance system and method with remote viewing |
US20060088105A1 (en) * | 2004-10-27 | 2006-04-27 | Bo Shen | Method and system for generating multiple transcoded outputs based on a single input |
US7620065B2 (en) * | 2005-07-22 | 2009-11-17 | Trellia Networks, Inc. | Mobile connectivity solution |
US8189472B2 (en) * | 2005-09-07 | 2012-05-29 | Mcdonald James F | Optimizing bandwidth utilization to a subscriber premises |
-
2006
- 2006-01-24 PA PA20068660701A patent/PA8660701A1/es unknown
- 2006-01-27 TW TW095103474A patent/TWI310038B/zh not_active IP Right Cessation
- 2006-01-30 WO PCT/IB2006/000270 patent/WO2006082517A1/en active Application Filing
- 2006-01-30 EP EP09155624A patent/EP2078729A1/en not_active Withdrawn
- 2006-01-30 DK DK06710361T patent/DK1846445T3/da active
- 2006-01-30 CA CA2596977A patent/CA2596977C/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-01-30 SI SI200630252T patent/SI1846445T1/sl unknown
- 2006-01-30 BR BRPI0606142-7A patent/BRPI0606142A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-01-30 EP EP06710361A patent/EP1846445B1/en active Active
- 2006-01-30 EA EA200701439A patent/EA011882B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-01-30 PL PL06710361T patent/PL1846445T3/pl unknown
- 2006-01-30 PT PT06710361T patent/PT1846445E/pt unknown
- 2006-01-30 AT AT06710361T patent/ATE426614T1/de not_active IP Right Cessation
- 2006-01-30 JP JP2007553737A patent/JP4314304B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-01-30 ES ES06710361T patent/ES2322293T3/es active Active
- 2006-01-30 MX MX2007009389A patent/MX2007009389A/es active IP Right Grant
- 2006-01-30 AP AP2007004069A patent/AP2007004069A0/xx unknown
- 2006-01-30 DE DE602006005902T patent/DE602006005902D1/de active Active
- 2006-01-30 RS RSP-2009/0210A patent/RS50966B/sr unknown
- 2006-01-30 KR KR1020077017974A patent/KR100892545B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2006-01-30 AU AU2006211039A patent/AU2006211039A1/en not_active Abandoned
- 2006-02-01 PE PE2006000128A patent/PE20061412A1/es not_active Application Discontinuation
- 2006-02-01 DO DO2006000025A patent/DOP2006000025A/es unknown
- 2006-02-02 AR ARP060100377A patent/AR052108A1/es unknown
- 2006-02-02 GT GT200600038A patent/GT200600038A/es unknown
- 2006-02-02 UY UY29357A patent/UY29357A1/es not_active Application Discontinuation
- 2006-02-03 NL NL1031067A patent/NL1031067C2/nl not_active IP Right Cessation
- 2006-02-03 US US11/347,730 patent/US20060178501A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-03-01 NL NL1033469A patent/NL1033469C2/nl not_active IP Right Cessation
- 2007-07-01 IL IL184324A patent/IL184324A0/en unknown
- 2007-08-03 MA MA30123A patent/MA29243B1/fr unknown
- 2007-08-03 TN TNP2007000305A patent/TNSN07305A1/fr unknown
- 2007-09-04 NO NO20074498A patent/NO20074498L/no not_active Application Discontinuation
-
2009
- 2009-02-26 US US12/393,420 patent/US20090170778A1/en not_active Abandoned
- 2009-02-26 US US12/393,259 patent/US20090171071A1/en not_active Abandoned
- 2009-04-24 HR HR20090245T patent/HRP20090245T1/xx unknown
- 2009-05-12 CY CY20091100507T patent/CY1109054T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4314304B2 (ja) | Pyyアゴニストおよびその使用 | |
JP7386218B2 (ja) | グルカゴン及びglp-1共アゴニスト化合物 | |
JP6412183B2 (ja) | 作用持続時間が増した改変ポリペプチド | |
KR102005456B1 (ko) | 신규 글루카곤 유도체 및 이의 지속형 결합체를 포함하는 조성물 | |
ES2286787T3 (es) | Conjugados de la hormona del crecimiento humana monopegilados en el extremo n, proceso para su preparacion y uso de los mismos. | |
TWI617574B (zh) | 用於治療肥胖之升糖素與glp-1共促效劑 | |
US7112659B2 (en) | OB fusion protein compositions and methods | |
US20090258826A1 (en) | Pituitary adenylate cyclase activating peptide (PACAP) receptor (VPAC2) agonists and their pharmacological methods of use | |
JP2005508639A (ja) | Glp−1受容体アゴニストおよびグルカゴン受容体アンタゴニストの双方として作用するペプチドおよびそれらの薬剤学的使用方法 | |
CN101389648A (zh) | 肽胃泌酸调节素衍生物 | |
JP2007531715A (ja) | グリコール結合fgf−21化合物 | |
SK7799A3 (en) | Fusion polypeptides comprising an ige-binding domain and a hsa component, and their diagnostic and therapeutic uses | |
KR20070009554A (ko) | 뇌하수체 아데닐레이트 사이클라제 활성화 펩티드(pacap) 수용체 (vpac2) 작용제 및 이의약리학적 사용 방법 | |
US20090280106A1 (en) | Pituitary adenylate cyclase acivating peptide (pacap) receptor (vpac2) agonists and their pharmacological methods of use | |
NL1032266C2 (nl) | PYY-agonisten en toepassingen daarvan. | |
CN101115770A (zh) | Pyy激动剂及其用途 | |
KR20050018988A (ko) | 뇌하수체 아데닐레이트 사이클라제 활성화펩타이드(pacap) 수용체(vpac2) 효능제 및 그의약물학적 사용방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20080430 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20080521 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20080528 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20081007 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20081212 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20081212 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081222 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20081225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090223 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090511 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090518 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120522 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |