JP4064346B2

JP4064346B2 - 新規な糖脂質及びこれを有効成分とする自己免疫疾患治療薬

Info

Publication number: JP4064346B2
Application number: JP2003521248A
Authority: JP
Inventors: 隆山村; 幸子三宅
Original assignee: Asubio Pharma Co Ltd
Current assignee: Asubio Pharma Co Ltd
Priority date: 2001-08-16
Filing date: 2002-08-14
Publication date: 2008-03-19
Anticipated expiration: 2022-08-14
Also published as: DE60215530D1; BR0211968A; KR20040039287A; NO326398B1; HUP0500127A3; ES2274080T3; EP1437358B1; KR100880063B1; WO2003016326A1; CN1568328A; DK1437358T3; EP1437358A4; CN100439383C; HU229345B1; HUP0500127A2; CA2459482A1; CA2459482C; NO20040653L; JPWO2003016326A1; EP1437358A1

Description

この発明は、新規な糖脂質、及びこれを有効成分とする自己免疫疾患のための治療薬に関する。

生体には自己免疫病の発症を予防し抑制する機能があり、これを「免疫調節能」という。「免疫調節能」をつかさどるリンパ球として近年注目されているものに、ＮＫＴ細胞がある（非特許文献1）。発明者らはこれまで、ＮＫＴ細胞を標的とした治療薬（ＮＫＴ細胞を適切に刺激して、その免疫調節能を効果的に発現させる薬物）の開発に取り組んできた。
自己免疫疾患の従来の治療法は、グルココルチコイドや免疫抑制剤といった"非特異的な免疫抑制療法"が主体である。"非特異的な免疫抑制療法"とは、免疫細胞の持つ多くの生物学的機能を、特に選定せずに、無差別に抑制するような治療法である。これらの治療法は、したがって、病気を誘導・増悪させるような生物反応を抑制すると同時に、生体に必要な反応をも抑制する（副作用）。そこで、より特異的な免疫抑制剤（病気を誘導・増悪させるような生物反応のみを抑制する薬剤）の開発が切望されてきた。近年、この目標にそって、自己抗原のペプチド療法が試みられたが、ペプチドは個々人によっても異なる、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子によって提示されるために、個人ごとに効力の差が著しく、またアレルギー反応も問題になってくる。

ＮＫＴ細胞を刺激する能力のある物質として従来他の研究者によって同定されているものに、アルファ・ガラクトシルセラミドがある（非特許文献２〜４、特許文献1〜４等）。発明者らはこれら文献に記載されたアルファ・ガラクトシルセラミドを自己免疫疾患である多発性硬化症の動物モデル、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）や慢性関節リウマチの動物モデルであるコラーゲン関節炎に投与した。しかし、このアルファ・ガラクトシルセラミドは自己免疫病を抑制するサイトカインであるＩＬ−４とともに、自己免疫病を悪化させるサイトカインであるＩＦＮ−γを誘導するため、このアルファ・ガラクトシルセラミドには自己免疫病を抑制または治療する効果がないことを明らかにした（非特許文献５）。すなわち、従来のアルファ・ガラクトシルセラミドはＮＫＴ細胞の持つ相反する機能（病気を抑制する機能と悪化させる機能）を同時に発揮させるために自己免疫病治療薬としては適当でない。

特開平5-9193 特開平5-59081 特許第3088461号米国特許第5,936,076号最新医学第55巻第4号858-863 Science vol.278 1626-1629 (1997） Proc. Natl. Acad. Sci. USA vol.95 pp5690-5693 (1998) J. Med. Chem. 1995, 38, 2176-2187 米国免疫学会誌ザ・ジャーナル・オブ・イミュノロジー2001年1月1日号166巻662-668頁

本発明は、自己免疫疾患の治療に有用な糖脂質を提供することを目的とする。従来このような目的の基に研究されてきたアルファ・ガラクトシルセラミドは、確かにＮＫＴ細胞を刺激する能力のあることが認められているが、その効果には特異性がなく、自己免疫病の悪化をもたらすため、このような治療薬としては極めて不満足なものであった。しかるに、本発明の糖脂質は、自己免疫病を抑制するサイトカインを特異的に誘導し、その他の自己免疫病の悪化をもたらすような因子を誘導することがないため、自己免疫疾患の治療に極めて有効である。

本発明者らは、従来のアルファ・ガラクトシルセラミドの誘導体である複数の糖脂質を合成し、その生物活性を調べたところ、これらの糖脂質のスフィンゴシン塩基の炭素鎖の長さを短くする修飾を加えた物質に、ＮＫＴ細胞の持つ、自己免疫病抑制に有利な機能（ＩＬ−４産生）のみを誘導する能力のあることを見出した。これを多発性硬化症の動物モデルＥＡＥに投与したところ、ＥＡＥに対する予防および治療効果のあることがわかった。

即ち、本発明は、下式（化１）

で表される糖脂質である。

この式中、Ｒ^１はアルドピラノース残基である。このアルドピラノース残基として、α-D-グルコシル、α-D-ガラクトシル、α-D-マンノシル、β-D-グルコシル、β-D-ガラクトシル、β-D-マンノシル、2-デオキシ-2-アミノ-α-D-ガラクトシル、2-デオキシ-2-アミノ-β-D-ガラクトシル、2-デオキシ-2-アセチルアミノ-α-D-ガラクトシル、2-デオキシ-2-アセチルアミノ-β-D-ガラクトシル、β-D-アロピラノシル、β-D-アルトロピラノシル、β-D-イドシル等が挙げられるが、本発明の糖脂質としてはα体を用いたほうが効果的である。これらのうち、Ｒ^１としては下式（化２）

で表されるα―D−ガラクトピラノシルが好ましい。

Ｒ^２は水素原子又は水酸基を表すが、好ましくは水素原子である。
Ｒ^３は−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_２−又は−ＣＨ＝ＣＨ−を表すが、好ましくは−ＣＨ_２−又は−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_２−であり、最も好ましくは−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_２−である。
Ｒ^４は水素原子又はＣＨ_３を表すが、好ましくは水素原子である。
ｘは０〜３５、好ましくは０〜２６であり、より好ましくは１１〜２６、更に好ましくは１１〜２３、最も好ましくは１８〜２３である。

ｙ及びｚは、ｙ＋ｚ＝０〜３を満たす整数を表す。ここで−（ＣＨ_２）_ｙ（ＣＨ（ＣＨ_３））_ｚ−との記載は必ずしも（ＣＨ_２）と（ＣＨ（ＣＨ_３））とがこの記載の順に並ぶことを意味するものではなく、単にその量的関係を示すに過ぎない。例えば、ｙ＝２及びｚ＝１の場合には、−（ＣＨ_２）_ｙ（ＣＨ（ＣＨ_３））_ｚ−は、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２−、又は−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）−のいずれかを表す。また、ｙ及びｚは、好ましくはｚが０であってｙが０〜３であり、より好ましくはｚが０であってｙが１〜３である。

また本発明は、これらの糖脂質を有効成分として含有する自己免疫疾患のための治療薬であり、また、これらの糖脂質を有効成分として含有するＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患、またはＴｈ１細胞が病態を悪化させる疾患の治療薬であり、更に、これらの糖脂質を有効成分として含有する選択的ＩＬ−４産生誘導剤である。

本発明の糖脂質はＮＫＴ細胞の免疫調節能を効果的に発現させることによって自己免疫病を治療するはじめての治療薬である。また、本発明の糖脂質は自己免疫病抑制効果の証明されたはじめての糖脂質でもある。更に、本発明の糖脂質はＮＫＴ細胞の持つ自己免疫病の治療効果のみを選択的に誘導するという点で、きわめて斬新な治療薬である。
本発明の糖脂質は、ＩＬ−４が抑制的に働くような自己免疫疾患であれば、ただちにその治療薬として応用できる。また、ＩＬ−４は抗体産生を高める作用を持つので、ワクチン療法の補助剤として応用可能である。更に、肝炎ウイルスワクチンなどで、なかなか抗体価の上がらない患者に併用すると効果があると考えられる。更に、ＮＫＴ細胞の機能低下を来すような疾患に応用できる。

自己免疫疾患には全身性自己免疫疾患と臓器特異的自己免疫疾患とがある。このうち臓器特異的自己免疫疾患は、特定の臓器や組織（脳、肝臓、眼、関節）に慢性的な炎症を来たし、その原因が、当該臓器に特異的な自己抗原に対する免疫応答（自己免疫応答）に起因すると考えられる疾患をいう。多発性硬化症（脳、脊髄）、リウマチ様関節炎（関節）が代表的な疾患である。障害される臓器は異なっても、それらの疾患には共通点が多く、治療法も基本的に共通している。また、その多くで、ＩＦＮ−γを産生するＴ細胞が重要な役割を果たしている。

ＮＫＴ細胞はＮＫ細胞とＴ細胞の両方の性格を持つリンパ球で、Ｔ細胞抗原受容体を介してＣＤ１ｄ分子に結合した糖脂質を認識する。
ＮＫＴ細胞は、ａ）抗腫瘍活性（腫瘍細胞殺傷効果）、ｂ）ＩＦＮ−γ産生、ｃ）ＩＬ−４産生などの生理機能を発揮し、産生されたＩＦＮ−γによりｄ）ＮＫ細胞の活性増強やｅ）マクロファージ活性化が誘導される。すなわちａ）ｂ）ｃ）はＮＫＴ細胞の直接作用、ｄ）ｅ）はｂ）を介して誘導される間接作用である。

ところで、従来のアルファ・ガラクトシルセラミド（即ち、本発明の糖脂質よりもスフィンゴシン塩基の炭素鎖が長いものをいう。例えば、後述の実施例で比較として用いた糖脂質や、Science vol.278 1626-1629 (1997）、Proc. Natl. Acad. Sci. USA vol.95 pp5690-5693 (1998)、特開平5-9193、特開平5-59081、米国特許第5,936,076号等に記載のものを参照されたい。）はＮＫＴ細胞を活性化して、ａ）〜ｅ）のすべての作用を誘導する、非常に強い免疫賦活剤である。誘導される性質の中で、ｃ）ＩＬ−４産生は自己免疫病に抑制的に働くが、ｂ）ＩＦＮ−γ産生は自己免疫病を悪化させる機能であり、両者が相殺しあう結果、自己免疫病に対する治療効果は得られない。また、従来のアルファ・ガラクトシルセラミドで刺激されたＮＫＴ細胞の相当数は、細胞死（アポトーシス）により即座に死滅する。一方、本発明の糖脂質は、従来のアルファ・ガラクトシルセラミドよりも免疫賦活効果は弱く、ＮＫＴ細胞の機能のうちｃ）ＩＬ−４産生を選択的に誘導する。ＩＦＮ−γ誘導が回避された結果、臓器特異的自己免疫病疾患に対する抑制、治療効果が得られることとなる。また、ＮＫＴ細胞の細胞死も誘導されない点が優れている。

ＮＫＴ細胞の抗原受容体、糖脂質、ＣＤ１ｄ分子の相互関係については、近年研究が進んでいる（イミュノロジカル・レビュー誌1999年172巻285-296頁参照）。現在では、糖脂質のスフィンゴシン塩基及び脂肪酸由来の二つの疎水性炭素鎖部分がＣＤ１ｄ分子の深い二つの溝（ポケット）に入り込んで結合し、親水性の糖部分がＮＫＴ細胞の抗原受容体に結合すると考えられている。本発明の糖脂質では、従来のアルファ・ガラクトシルセラミドに比較してスフィンゴシン塩基の炭素鎖が短く、ＣＤ１ｄ分子への結合が弱くなる。その結果、糖部分の安定性が減弱し、抗原受容体に伝達されるシグナルの性質が修飾される。その結果、ＩＬ−４の選択的産生につながるものと考えられる。いかなる用量においても、本発明の糖脂質の効果はアルファ・ガラクトシルセラミドのそれと一致せず、両者は質的に異なるリガンドと考えられる（後述の実施例及び論文(Nature, vol.413, No.6855 pp.531-534 (2001))を参照されたい。）。

本発明の糖脂質は、上式（化１）で表されるが、例えば、（１）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-トリアコンタノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（２）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ノナコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（３）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-オクタコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（４）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘプタコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（５）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘキサコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（６）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ペンタコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（７）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（８）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-トリコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（９）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ドコサコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（１０）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘネイコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（１１）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-エイコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（１２）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ノナデカノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール、（１３）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-トリアコンタノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（１４）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ノナコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（１５）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-オクタコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（１６）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘプタコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（１７）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘキサコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（１８）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ペンタコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（１９）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（２０）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-トリコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（２１）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ドコサコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（２２）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘネイコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（２３）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-エイコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（２４）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ノナデカノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール、（２５）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-トリアコンタノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（２６）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ノナコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（２７）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-オクタコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（２８）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘプタコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（２９）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘキサコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（３０）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ペンタコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（３１）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（３２）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-トリコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（３３）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ドコサコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（３４）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘネイコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（３５）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-エイコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（３６）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ノナデカノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール、（３７）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-トリアコンタノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（３８）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ノナコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（３９）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-オクタコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（４０）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘプタコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（４１）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘキサコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（４２）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ペンタコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（４３）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（４４）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-トリコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（４５）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ドコサコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（４６）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘネイコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（４７）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-エイコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオール、（４８）(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ノナデカノイルアミノ)-1,3,4-ヘキサントリオールが挙げられるが、この中で（３）〜（９）、（１５）〜（２１）、（２７）〜（３３）及び（３９）〜（４５）が好ましい。

本発明の糖脂質は、種々の方法で製造することが可能であるが、例えば以下に記載する方法に従って製造することが出来る。その製造工程を図１及び図２に示す。即ち、既報（M. Morita et al. J. Med. Chem. 1995, 38, 2176等）の方法に従い、化合物（IIa）、（IIb）、（IIc）を得、（IIa）及び（IIb）については二重結合部分を還元して化合物（IIIa）、（IIIb）に変換する。化合物（IIIa）、（IIIb）、（IIc）の二級水酸基部分をメシル化、或いはトシル化後、アジド基へと置換させることにより化合物（IV）を得、アジド基のアミノ基への選択的還元と続くアミド化反応により化合物（V）を得る。化合物（V）の二級水酸基の保護基であるベンジル基をベンゾイル基やアセチル基等のアシル基へ変換すると共に一級水酸基部分を脱保護して化合物（VI）を得る。化合物（VI）をグリコシル化して化合物（VII）を得、残りの保護基を脱保護することにより、目的とする化合物（I）を得ることが出来る。

本発明の糖脂質は、自己免疫疾患のための治療薬、Ｔｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患又はＴｈ１細胞が病態を悪化させる疾患の治療薬、更に、選択的ＩＬ−４産生誘導剤として用いることができる。ここで、自己免疫疾患とは、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、クローン病、尋常性白斑、ベーチェット病、膠原病、I型糖尿病、ぶどう膜炎、シェーグレン症候群、自己免疫性心筋炎、自己免疫性肝疾患、自己免疫性胃炎、天疱瘡、ギラン・バレー症候群、HTLV-1関連脊髄症等の疾患を意味する。また、Th1/Th2免疫バランスがTh1に偏向した疾患とは、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、I型糖尿病、ぶどう膜炎、シェーグレン症候群等の自己免疫疾患に加え、劇症肝炎、移植片拒絶、細胞内感染病原体による感染症等の主として細胞性免疫による疾患を意味する。

本発明の糖脂質（化１）は、低毒性であり、例えば化合物25を5週齢のマウスに投与した実験では、一回あたり300 μg/kgの週2回、4ヶ月間にわたる腹腔内投与を受けた10例全例が生存していた。本発明の糖脂質（I）は、それ自体単独で投与しても良いが、所望により他の通常の薬理学的に許容される公知慣用の担体と共に、自己免疫疾患、或いはTh1/Th2免疫バランスがTh1に偏向した疾患、或いはTh1細胞が病態を悪化させる疾患に起因する症状の改善、治療を目的とする製剤に調整することが出来る。例えば、有効成分を単独、又は慣用の賦形剤と共にカプセル剤、錠剤、注射剤等の適宜な剤形として、経口的又は非経口的に投与することが出来る。例えば、カプセル剤は、粉末状の原体を乳糖、澱粉又はその誘導体、セルロース誘導体等の賦形剤と混合してゼラチンカプセルに詰めて調整する。また、上記賦形剤の他にカルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸、アラビアゴム等の結合剤と水を加えて混練し、必要により顆粒とした後、更にタルク、ステアリン酸等の潤滑剤を添加して通常の圧縮打錠機を用いて調整する。注射による非経口投与に際しては、有効成分を溶解補助剤と共に滅菌蒸留水又は滅菌生理食塩水に溶解し、アンプルに封入して注射製剤とする。必要により安定化剤、緩衝物質を含有させても良い。

本発明の医薬、自己免疫疾患、或いはTh1/Th2免疫バランスがTh1に偏向した疾患の改善、治療薬及びIL-4誘導剤の投与量は、種々の要因、例えば治療すべき患者の症状、年齢、投与経路、剤形、投与回数等に依存するが、通常、0.001mg〜5000mg／日／人、好ましくは0.01mg〜500mg／日／人、さらに好ましくは0.5mg 〜100mg／日／人が適当である。

以下、実施例により本発明を例証するが、これらは本発明を制限することを意図したものではない。
参考例１：(2R,3S,4R)-1,3,4-トリ-O-ベンジル-5-オクテン-1,2,3,4-テトラオール（化合物１）の合成
3,4,6-トリ-O-ベンジル-D-ガラクトース（0.99ｇ）のエタノール/水（4/1）混合溶液（12.5ml）に、氷冷下NaIO₄（760ｍｇ）を加え、室温下6時間攪拌した。塩化メチレンにて希釈後、水を加えて分液し、水層をさらに2回塩化メチレンにて抽出した。有機層をMgSO₄にて乾燥後、減圧下溶媒を溜去した。得られた油状物のTHF溶液(6ml)を別途調製したプロピリデン（トリフェニル）フォスフォラン(5mmol)のTHF−ヘキサン溶液（11.2ｍｌ）へ、−10℃にて滴下後、室温にて22時間攪拌した。MeOH/H₂O混合溶液（4/1；50ml）を加えた後、ヘキサンにて4回抽出し、得られた有機層をNa₂SO₄にて乾燥後減圧下溶媒を溜去した。得られた油状物をシリカゲルカラムにて精製し、表題化合物270ｍｇを得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.92(t, J=8Hz, 3H), 1.85-2.05(m, 2H), 2.97(d, J=5Hz, 1H), 3.51(d, J=6Hz, 2H), 3.55-3.60(m,1H), 4.05-4.10(m, 1H), 4.35(d, J=12Hz, 1H), 4.40-4.50(m, 1H), 4.50-4.55(m, 3H), 4.60(d, J=12Hz, 1H), 4.69(d, J=12Hz, 1H), 5.44(t, J=10Hz, 1H), 5.70-5.80(m,1H), 7.2-7.4(m, 15H).

参考例２：(2R,3S,4R)-1,3,4-トリ-O-ベンジル-5-ヘプテン-1,2,3,4-テトラオール（化合物２）の合成
3,4,6-トリ-O-ベンジル-D-ガラクトースとエチリデン（トリフェニル）フォスフォランから化合物１の合成と同様にして表題化合物を得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 1.57(dd, J=7Hz and 2Hz, 3H), 2.95(d, J=5Hz, 1H), 3.52(d, J=6Hz, 2H), 3.55-3.60(m,1H), 4.05-4.10(m, 1H), 4.35(d, J=12Hz, 1H), 4.40-4.55(m, 3H), 4.60(d, J=12Hz, 1H), 4.69(d, J=12Hz, 1H), 5.51(t, J=10Hz, 1H), 5.80-5.90(m,1H), 7.2-7.4(m, 15H).

参考例３：(2R,3S,4R)-1,3,4-トリ-O-ベンジル-5-ノネン-1,2,3,4-テトラオール（化合物３）の合成
3,4,6-トリ-O-ベンジル-D-ガラクトースとブチリデン（トリフェニル）フォスフォランから化合物１の合成と同様にして表題化合物を得た。
¹H-NMR: 0.90(t, J=7Hz, 3H), 1.35-1.42(m, 2H), 1.87-2.04(m, 2H), 3.05(d, J=5Hz, 1H), 3.55(d, J=6Hz, 2H), 3.60-3.62(m, 1H), 4.10-4.12(m, 1H), 4.38(d, J=12Hz, 1H), 4.45-4.56(m, 4H), 4.64(d, J=12Hz, 1H), 4.72(d, J=12Hz, 1H), 5.51(t, J=10Hz), 7.26-7.36(m, 15H).

参考例４：(2R,3S,4R)-1,3,4-トリ-O-ベンジル-1,2,3,4-オクタンテトラオール（化合物４）の合成
化合物１(270mg)のTHF(3ｍｌ)溶液に10％Pd-C(30mg)を加え、水素雰囲気下1時間室温にて攪拌した。触媒をろ過し、溶媒を溜去することにより表題化合物(262mg)を得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.88(t, J=3Hz, 3H), 1.25-1.75(m, 6H), 3.15(d, J=5Hz, 1H), 3.5-3.7(m, 4H), 4.05-4.10(m, 1H), 4.50-4.75(m, 6H), 7.25-7.40(m, 15H).

参考例５：(2S,3S,4R)-2-アジド-1,3,4-トリ-O-ベンジル-1,3,4-オクタントリオール（化合物５）の合成
化合物４（262ｍｇ）のピリジン溶液にトリエチルアミン（240μｌ）、メタンスルホニルクロリド(108μｌ)を室温にて順次加えた後、1時間室温にて攪拌した。エーテルにて抽出し、有機層を飽和重硫酸カリウム、水、重曹水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。減圧下、溶媒を溜去し、282mgの残渣を得た。残渣をDMF(2ml)に溶解し、NaN₃(0.3g)を加え、100℃にて24時間攪拌後、酢酸エチルで希釈した。得られた有機層を水洗、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、溶媒を溜去して得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィーにて精製し(ヘキサン/酢酸エチル=100/0から90/10のグラジエント溶出)、表題化合物200mgを得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.89(t, J=7Hz, 3H), 1.25-1.80(m, 6H), 3.60-3.85(m, 5H), 4.45-4.75(m, 6H), 7.25-7.40(m, 15H).

参考例６：(2S,3S,4R)-2-アジド-1,3,4-トリ-O-ベンジル-1,3,4-ヘプタントリオール（化合物６）の合成
化合物２を用いて、化合物４の合成と同様の操作を行い、続いて化合物５の合成と同様の操作により表題化合物を得た。
¹H-NMR: 0.90(t, J=7Hz, 3H), 1.30-1.75(m, 4H), 3.60-3.85(m, 5H), 4.50-4.75(m, 6H), 7.25-7.40(m, 15H).

参考例７：(2S,3S,4R)-2-アジド-1,3,4-トリ-O-ベンジル-1,3,4-ノナントリオール（化合物７）の合成
化合物３を用いて、化合物４の合成と同様の操作を行い、続いて化合物５の合成と同様の操作により表題化合物を得た。
¹H-NMR: 0.88(t, J=7Hz, 3H), 1.20-1.72(m, 8H), 3.59-3.72(m, 5H), 4.50-4.80(m, 6H), 7.27-7.36(m, 15H).

参考例８：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-トリ-O-ベンジル-1,3,4-オクタントリオール（化合物８）の合成
化合物５(200mg)のTHF(7ml)溶液に10％Pd-C(20mg)を加え、水素雰囲気下室温にて14時間攪拌した。メンブレンフィルターにて触媒をろ別した後、減圧下溶媒を溜去した。得られた残渣を塩化メチレン（5ｍｌ）に溶解し、テトラコサン酸、1-メチル-2-クロロピリジニウムヨージド(252mg)、トリブチルアミン(136μｌ)を順次加え、2.5時間加熱攪拌した。反応液に酢酸エチルを加えた後、5％チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和硫酸水素カリウム水溶液にて洗浄、硫酸ナトリウムにて乾燥後、フラッシュクロマトグラフィーにて精製し(アセトン/ヘキサン=4/96から1/4のグラジエント溶出)、表題化合物213mgを得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.80-0.90(ｍ, 6H), 1.20-1.75(m, 48H), 2.0-2.1(m, 2H), 3.45-3.55(m, 2H), 3.75-3.85(m, 2H), 4.20-4.30(m, 1H), 4.44(s, 2H), 4.45-4.60(m, 3H), 4.82(d, J=11Hz, 1H), 5.78(d, J=9Hz, 1H), 7.25-7.40(m, 15H).

参考例９：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-トリ-O-ベンジル-1,3,4-ヘプタントリオール（化合物９）の合成
化合物６を用いて化合物８の合成と同様の操作を行い、表題化合物を得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.85-0.95(ｍ, 6H), 1.20-1.75(m, 46H), 2.0-2.1(m, 2H), 3.50-3.55(m, 2H), 3.80-3.85(m, 2H), 4.20-4.30(m, 1H), 4.46 (s,2H), 4.50-4.65(m, 3H), 4.83(d, J=11Hz, 1H), 5.77(d, J=9Hz, 1H), 7.25-7.40(m, 15H).

参考例１０：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-トリ-O-ベンジル-1,3,4-ノナントリオール（化合物１０）の合成
化合物７を用いて化合物８の合成と同様の操作を行い、表題化合物を得た。
¹H-NMR: 0.85-0.90(m, 6H), 1.26-1.70(m, 50H), 2.00-2.05(m, 2H), 3.49-3.54(m, 2H), 3.79-3.83(m, 2H), 4.22-4.28(m, 2H), 4.45(s, 1H), 4.49-4.54(m, 2H), 4.59(d, J=12Hz, 1H), 4.82(d, J=12Hz, 1H), 5.76(d, J=9Hz, 1H), 7.26-7.34(m, 15H).

参考例１１：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-1-O-トリフェニルメチル-1,3,4-オクタントリオール（化合物１１）の合成
化合物８（210mg）、Pd−C(10%, 60mg)、PdCl₂(30mg)の酢酸エチル(10ml)混合物を水素雰囲気下、室温にて30分攪拌した。THF-EtOH(1/1；25ml)を加え、触媒を濾過後、溶媒を溜去した。得られた残渣のピリジン（1.7ml）混合物にトリフェニルメチルクロリド(587mg)、ジメチルアミノピリジン(20mg)を加え、40℃で9時間加熱攪拌した。減圧下ピリジンを溜去した後、フラッシュクロマトグラフィーにて精製し(塩化メチレン/アセトン=100/0から50/1のグラジエント溶出)、ジオール誘導体を含むフラクションを得た。溶媒を溜去後、得られた残渣に、ピリジン(2ml)ジメチルアミノピリジン(25mg)、ベンゾイルクロリド(200μl)を加え、40℃にて66時間攪拌した。溶媒を減圧下溜去し、得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィーにて精製し(ヘキサン/酢酸エチル=98/2から80/20のグラジエント溶出)、表題化合物128mgを得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.80-0.95(m, 6H), 1.20-1.45(m, 44H), 1.5-2.0(m, 4H), 2.1-2.3(m, 2H), 3.25-3.35(m, 2H), 4.55-4.65(m, 1H), 5.30-5.35(m, 1H), 5.79(dd, J=2Hz and 9Hz, 1H), 5.99(d, J=9Hz, 1H), 7.05-7.35(m, 15H), 7.35-7.60(m,6H), 7.88(d, J=7Hz, 2H), 7.95-8.0(m, 2H).

参考例１２：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-1-O-トリフェニルメチル-1,3,4-ヘプタントリオール（化合物１２）の合成
化合物９を用いて、化合物１１の合成と同様の操作を行い表題化合物を得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.85-0.95(m, 6H), 1.20-1.50(m, 42H), 1.55-1.75(m, 2H), 1.80-1.95(m, 2H), 2.1-2.3(m, 2H), 3.30-3.40(m, 2H), 4.55-4.65(m, 1H), 5.35-5.40(m, 1H), 5.82(dd, J=2Hz and 9Hz, 1H), 6.13(d, J=9Hz, 1H), 7.05-7.65(m, 21H), 7.89(d, J=8Hz, 2H), 7.96(d, J=8Hz, 2H).

参考例１３：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-1-O-トリフェニルメチル-1,3,4-ノナントリオール（化合物１３）の合成
化合物１０を用いて、化合物１１の合成と同様の操作を行い表題化合物を得た。
¹H-NMR: 0.82-0.90(m, 6H), 1.26-1.41(m, 46H), 1.60-1.65(m, 2H), 1.74-1.89(m, 2H), 2.14-2.24(m, 2H), 3.27-3.35(m, 2H), 4.56-4.60(m, 1H), 5.34-5.40(m, 1H), 5.79(dd, J=3Hz and 9Hz, 1H), 5.99(d, J=9Hz, 1H), 7.11-7.69(m, 21H), 7.89(d, J=7Hz, 2H), 7.96(d, J=7Hz, 2H).

参考例１４：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-1,3,4-オクタントリオール（化合物１４）の合成
化合物１１(128mg)の塩化メチレン/メタノール(2/1)(1.8ml)溶液に、p-トルエンスルホン酸1水和物（14mg）を加え、30℃にて2時間攪拌した。減圧下溶媒を溜去し、得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィーにて精製し(ヘキサン/酢酸エチル=85/15から50/50のグラジエント溶出)、表題化合物54mgを得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.85-0.95(m, 6H), 1.20-1.50(m, 44H), 1.60-1.75(m, 2H), 1.95-2.10(m, 2H), 2.29(t, J=8Hz, 2H), 2.70-2.75(m, 1H), 3.6-3.7(m, 2H), 4.35-4.45(m, 1H), 5.35-5.45(m, 2H), 6.33(d, J=9Hz, 1H), 7.38(t, J=8Hz, 2H), 7.50-7.60(m, 3H), 7.64(t, J=7Hz, 1H), 7.95-8.00(m, 2H), 8.05-8.10(m, 2H).

参考例１５：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-1,3,4-ヘプタントリオール（化合物１５）の合成
化合物１２を用いて化合物１４の合成と同様の操作を行い、表題化合物を得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.88（t, J=7Hz, 3H）, 0.97 (t, J=7Hz, 3H), 1.20-1.75(m, 44H), 2.0-2.1(m, 2H), 2.30(t, J=8Hz, 2H), 3.6-3.7(m,2H), 4.35-4.45(m, 1H), 5.35-5.45(m, 2H), 6.38(d, J=9Hz, 1H), 7.38(t, J=8Hz, 2H), 7.45-7.70(m, 3H), 7.95 (d, J=7Hz, 2H), 8.05-8.10(m, 2H).

参考例１６：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-1,3,4-ノナントリオール（化合物１６）の合成
化合物１３を用いて化合物１４の合成と同様の操作を行い、表題化合物を得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.85-0.90(m, 6H), 1.26-1.48(m, 46H), 1.65-1.72(m, 2H), 1.89-2.10(m, 2H), 2.29(t, J=8Hz, 2H), 2.74-2.77(m, 1H), 3.58-3.68(m, 2H), 4.36-4.41(m, 1H), 5.36-5.43(m, 2H), 6.34(d, J=9Hz, 1H), 7.38(t, J=7Hz, 2H), 7.48-7.55(m, 3H), 7.64 (t, J=7 Hz, 1H), 7.95(d, J=7Hz, 2H), 8.06(d, J=7Hz, 2H).

参考例１７：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-1-O-(2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-α-D-ガラクトシル)-1,3,4-オクタントリオール（化合物１７）の合成
化合物１４(54mg)、塩化第1スズ(38mg)、過塩素酸銀(46mg)、モレキュラーシーブ（４A, 270mg）のTHF(2ml)混合物を室温にて1時間攪拌した。これに、テトラ-O-ベンジルガラクトシルフルオリド(70mg)を加えて、2.5時間攪拌した。反応液に酢酸エチル、飽和食塩水を加えて分液操作を行い、得られた有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。溶媒を減圧下溜去し、得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィーにて精製し(ヘキサン/酢酸エチル=95/5から75/25のグラジエント溶出)、表題化合物45mgを得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.75-0.90(m, 6H), 1.15-1.45(m, 44H), 1.55-1.70(m, 2H), 1.80-1.85(m, 2H), 2.16(t, J=7Hz, 2H), 3.30-3.35(m, 1H), 3.50-3.55(m, 1H), 3.6-3.65(m, 1H), 3.8-4.1(m, 5H), 4.40-4.90(m, 10H), 5.35-5.45(m, 1H), 5.70(dd, J=10Hz and 3Hz, 1H), 7.01(d, J=9Hz, 1H), 7.15-7.60(m, 26H), 7.90-7.95(m, 2H), 8.00-8.05(m, 2H).

参考例１８：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-1-O-(2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-α-D-ガラクトシル)-1,3,4-ヘプタントリオール（化合物１８）の合成
化合物１５を用い化合物１７の合成と同様の操作を行い表題化合物を得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.85-0.90(m, 6H), 1.15-1.50(m, 42H), 1.55-1.70(m, 2H), 1.80-1.90 (m, 2H), 2.15(t, J=7Hz, 2H), 3.30-3.35(m, 1H), 3.50-3.55(m, 1H), 3.6-3.65(m, 1H), 3.8-3.9(m, 2H), 3.95-4.05(m, 2H), 4.05-4.15(m, 1H), 4.40-4.90(m, 10H), 5.40-5.45(m, 1H), 5.69(dd, J=10Hz and 3Hz, 1H), 6.93(d, J=9Hz, 1H), 7.15-7.65(m, 26H), 7.92(d, J=7Hz, 2H), 8.03 (d, J=7Hz, 2H).

参考例１９：(2S,3S,4R)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-3,4-ジ-O-ベンゾイル-1-O-(2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-α-D-ガラクトシル)-1,3,4-ノナントリオール（化合物１９）の合成
化合物１６を用い化合物１７の合成と同様の操作を行い表題化合物を得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.87-0.90(m, 6H), 1.25-1.37(m, 46H), 1.61-1.64(m, 2H), 1.78-1.91 (m, 2H), 2.16(t, J=7Hz, 2H), 3.30-3.35(m, 1H), 3.45-3.54(m, 1H), 3.60-3.64(m, 1H), 3.82-3.87(m, 2H), 3.94-4.10(m, 3H), 4.35-4.93(m, 10H), 5.39-5.43(m, 1H), 5.70(dd, J=9Hz and 3Hz, 1H), 7.01(d, J=9Hz, 1H), 7.16-7.38(m, 22H), 7.45(t, J=7Hz, 2H), 7.52(t, J=7Hz, 1H), 7.60(t, J=7Hz, 1H), 7.93(d, J=7Hz, 2H), 8.03 (d, J=7Hz, 2H).

参考例２０：(2S,3S,4R)-3,4-ジ-O-べンゾイル-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール（化合物２０）の合成
化合物１７(45mg)、Pd-C(10%, 12mg)、PdCl₂(12mg)の酢酸エチル(3ml)混合物を水素雰囲気下、室温にて1.5時間攪拌した。触媒をろ別した後、溶媒を減圧下溜去し、得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィーにて精製し(アセトン/ヘキサン=2/3)、表題化合物24mgを得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.80-0.90(m, 6H), 1.20-1.50(m, 44H), 1.60-1.75(m, 2H), 1.90-2.00(m, 2H), 2.25-2.35(m, 3H), 2.68(s, 1H), 2.88(s, 1H), 3.43(br t, 1H), 3.65-4.05(m, 8H), 4.60(br t, 1H), 4.79(d, J=4Hz, 1H), 5.20-5.25(m, 1H), 5.77(dd, J=10Hz and 3Hz, 1H), 7.35-7.65(m, 7H), 7.90-7.95(m, 2H), 8.00-8.05(m, 2H).

参考例２１：(2S,3S,4R)-3,4-ジ-O-べンゾイル-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール（化合物２１）の合成
化合物１８を用い、化合物２０の合成と同様の操作を行い表題化合物を得た。
¹H-NMR(CDCl₃): 0.88(t, J=7Hz, 3H), 0.93(t, J=7Hz, 3H), 1.20-1.40(m, 41H), 1.4-1.55(m, 1H), 1.60-1.75(m, 2H), 1.85-2.00(m, 2H), 2.11(d. J=10Hz, 1H), 2.32(t, J=8Hz, 2H), 2.52(s, 1H), 2.64(s, 1H), 3.44(br t, 1H), 3.65-4.05(m, 8H), 4.60(br t, 1H), 4.80(d, J=4Hz, 1H), 5.25-5.30(m, 1H), 5.77(dd, J=10Hz and 3Hz, 1H), 7.35-7.65(m, 7H), 7.90-7.95(m, 2H), 8.00-8.05(m, 2H).

参考例２２：(2S,3S,4R)-3,4-ジ-O-べンゾイル-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物２２）の合成
化合物１９を用い、化合物２０の合成と同様の操作を行い表題化合物を得た。
¹H-NMR: 0.83-0.90(m, 6H), 1.25-1.32(m, 46H), 1.68-1.73(m, 2H), 2.27-2.47(m, 3H), 2.67(s, 1H), 2.87(s, 1H), 3.43(t, J=7Hz, 1H), 3.66-4.01(m, 8H), 4.59(t, J=10Hz, 1H), 4.79((d, J=4Hz, 1H), 5.21-5.25(m, 1H), 5.77(dd, J=3Hz and 10Hz, 1H), 7.37-7.65(m, 7H), 7.91(d, J=7Hz, 1H), 8.01(d, J=7Hz, 1H).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタントリオール（化合物２３）の合成
化合物２０（24mg）のMeOH-THF(1/1, 1.8ml)混合溶液に室温にて、1M−ナトリウムメトキシド・メタノール溶液（250μl）を加え30分攪拌した。これにAG 50Wx8（H+型）(430mg)を加えて10分攪拌の後、樹脂をろ別した。溶媒を溜去し、得られた残渣を少量のMeOHで洗った後、窒素ガス気流にて乾燥して表題化合物15mgを得た。
¹H-NMR（Pyridine-d₅）: 0.80-0.90(m, 6H), 1.15-1.45(m, 42H), 1.55-1.70(m, 1H), 1.75-1.90(m, 4H), 2.20-2.30(m, 1H), 2.42(t, J-7Hz, 2H), 3.20(br t, 1H), 4.30(br s, 1H) 4.35-4.50(m, 4H), 4.50-4.60(m, 2H), 4.60-4.70(m, 2H), 5.20-5.30(m, 1H), 5.57(d, J=4Hz 1H), 6.00-6.10(m, 1H), 6.3 (br s, 1H), 6.4 (br d, 1H), 6.55(br s, 1H), 6.65(br s, 1H), 6.95(br s, 1H), 8.43(d, J=8Hz, 1H). MS (ESI) m/z：690.5 (M+H⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-ヘプタントリオール（化合物２４）の合成
化合物２１を用いて化合物２３の合成と同様の操作を行い表題化合物を得た。
¹H-NMR（Pyridine-d₅）: 0.87(t, J=7Hz, 3H), 0.95 (t, J=7Hz, 3H), 1.15-1.40(m, 40H), 1.57-1.75(m, 1H), 1.75-1.90(m, 4H), 2.15-2.25(m, 1H), 2.42(t, J=7Hz, 2H), 4.3(br s, 2H), 4.35-4.45(m, 4H), 4.45-4.57(m, 2H), 4.57-4.70(m, 2H), 5.20-5.30(m, 1H), 5.56(d, J=4Hz, 1H), 6.00-6.05(m, 1H), 6.25(br s, 1H), 6.4(br d, 1H), 6.5(br s, 1H), 6.6(br s, 1H), 6.9(br s, 1H), 8.38(d. J=8Hz, 1H). MS (ESI) m/z：676.4 (M+H⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物２５）の合成
化合物２２を用いて化合物２３の合成と同様の操作を行い化合物２５（下記構造式（化３）で表される。）を得た。

TLC：Rf = 0.54 (CHCl₃:MeOH=3:1). ¹H-NMR（Pyridine-d₅）: 0.80(t, J=7Hz, 3H), 0.86(t, J=7Hz, 3H), 1.22-1.31(m, 44H), 1.58-1.69(m, 1H), 1.79-1.84(m, 4H), 2.20-2.30(m, 1H), 2.43(t, J=7Hz, 2H), 4.29(br s, 2H), 4.36-4.45(m, 4H), 4.50-4.55(m, 2H), 4.62-4.69(m, 2H), 5.26(d, J=5Hz, 1H), 5.57(d, J=4Hz, 1H), 6.04(br s, 1H), 6.29(br s, 1H), 6.39(d, J=5Hz, 1H), 6.51(br s, 1H), 6.60(br s, 1H), 6.93(br s, 1H), 8.43(d, J=9Hz, 1H). MS (ESI) m/z：704.5 (M+H⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ノナコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物26）の合成
化合物７とノナコサン酸から、化合物８、１４、１７、２０、２３の合成と同様の操作を連続して行い、表題化合物を得た。
TLC：Rf = 0.25 (CH₂Cl₂:MeOH=10:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD=3:1）: 7.34 (br s, 1H), 4.91 (d, 1H, J=3.5Hz), 4.17 (m, 1H), 3.95-3.88 (m, 2H), 3.80-3.68 (m, 6H), 3.67-3.55 (m, 2H), 2.21 (t, 2H, J=7.7Hz), 1.67-1.26 (m, 60H), 0.91-0.87 (m, 6H). MS (FAB) m/z: 774 (M⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-オクタコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物27）の合成
化合物７とオクタコサン酸から、化合物８、１４、１７、２０、２３の合成と同様の操作を連続して行い、表題化合物を得た。
TLC：Rf = 0.24 (CH₂Cl₂:MeOH=10:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD=3:1）: 4.92 (d, 1H, J=3.7Hz), 4.20-4.19 (m, 1H), 3.96-3.88 (m, 2H), 3.81-3.67 (m, 6H), 3.56-3.50 (m, 2H), 2.20 (t, 2H, J=7.7Hz), 1.67-1.26 (m, 58H), 0.91-0.86 (m, 6H). MS (FAB) m/z: 760 (M⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘプタコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物28）の合成
化合物７とヘプタコサン酸から、化合物８、１４、１７、２０、２３の合成と同様の操作を連続して行い、表題化合物を得た。
TLC：Rf = 0.25 (CH₂Cl₂:MeOH=10:1). ¹H-NMR（Pyridine-d₅）: 8.43 (d, 1H, J=8.5Hz), 5.56 (d, 1H, J=3.7Hz), 5.25 (m, 1H), 4.7-4.6 (m, 2H), 4.54 (d, 1H, J=3.0Hz), 4.50 (t, 1H, J=6.0Hz), 4.45-4.3 (m, 4H), 4.3-4.2 (m, 2H), 2.42 (t, 2H, J=7.4Hz), 2.3-2.15 (m, 1H), 1.9-1.75 (m, 4H), 1.7-1.55 (m, 1H), 1.4-1.15 (m, 56H), 0.85 (t, 3H, J=6.7Hz), 0.78 (t, 3H, J=7.1Hz). MS (FAB) m/z: 747 (M+H⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘキサコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物29）の合成
化合物７とセロチン酸から、化合物８、１４、１７、２０、２３の合成と同様の操作を連続して行い、表題化合物を得た。
TLC：Rf = 0.20 (CH₂Cl₂:MeOH=6:1). ¹H-NMR（Pyridine-d₅）: 8.44 (d, 1H, J=8.4Hz), 5.56 (d, 1H, J=3.7Hz), 5.50-5.19 (m, 1H), 4.69-4.61 (m, 2H), 4.54 (d, 1H, J=3.1Hz), 4.52-4.47 (m, 1H), 4.45-4.34 (m, 4H), 4.31-4.23 (m, 2H), 2.43 (t, 2H, J=7.4Hz), 2.28-2.17 (m, 1H), 1.92-1.73 (m, 4H), 1.70-1.53 (m, 1H), 1.38-1.15 (m, 54H), 0.85 (t, 3H, J=6.7Hz), 0.73 (t, 3H, J=7.0Hz). MS (FAB) m/z: 732 (M⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ペンタコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物30）の合成
化合物７とペンタコサン酸から、化合物８、１４、１７、２０、２３の合成と同様の操作を連続して行い、表題化合物を得た。
TLC：Rf = 0.53 (CH₂Cl₂:MeOH=6:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD=3:1）: 4.92 (d, 1H, J=3.3Hz), 4.20-4.15 (m, 1H), 3.96-3.93 (m, 1H), 3.92-3.85 (m, 1H), 3.82-3.65 (m, 6H), 3.60-3.52 (m, 2H), 2.21 (t, 2H, J=7.6Hz), 1.62-1.26 (m, 52H), 0.90-0.85 (m, 6H). MS (FAB) m/z: 719 (M+H⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-トリコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物31）の合成
化合物７とトリコサン酸から、化合物８、１４、１７、２０、２３の合成と同様の操作を連続して行い、表題化合物を得た。
TLC：Rf = 0.51 (CHCl₃:MeOH=4:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD=3:1）: 4.91 (d, 1H, J=3.1Hz), 4.23-4.15 (m, 1H), 3.95-3.85 (m, 2H), 3.81-3.63 (m, 6H), 3.59-3.51 (m, 2H), 2.21 (t, 2H, J=7.5Hz), 1.61-1.25 (m, 48H), 0.90-0.85 (m, 6H). MS (FAB) m/z: 690 (M⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ドコサコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物32）の合成
化合物７とドコサン酸から、化合物８、１４、１７、２０、２３の合成と同様の操作を連続して行い、表題化合物を得た。
TLC：Rf = 0.47 (CH₂Cl₂:MeOH=5:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD=3:1）: 4.90 (d, 1H, J=3.0Hz), 4.27-4.20 (m, 1H), 3.96-3.92 (m,1H), 3.91 (dd, 1H, J=10.5Hz and 4.0Hz), 3.82-3.65 (m,6H), 3.58-3.51 (m, 2H), 2.22 (t, 2H, J=7.6Hz), 1.70-1.21 (m, 46H), 0.90-0.85 (m, 6H). MS (FAB) m/z: 676 (M⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘネイコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物33）の合成
化合物７とヘネイコサン酸から、化合物８、１４、１７、２０、２３の合成と同様の操作を連続して行い、表題化合物を得た。
TLC：Rf = 0.33 (CH₂Cl₂:MeOH=6:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD=3:1）: 8.05 (d, 1H, J=7.9Hz), 4.92 (d, 1H, J=3.3Hz), 4.22 (m, 1H), 3.96 (m,1H), 3.90 (dd, 1H, J=10.5Hz and 4.1Hz), 3.81-3.69 (m,6H), 3.55 (m, 2H), 2.22 (t, 2H, J=7.6Hz), 1.68-1.62 (m, 4H), 1.31-1.27 (m, 40H), 0.90-0.87 (m, 6H). MS (FAB) m/z: 662 (M+H⁺).

(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル) -2-(N-エイコサノイルアミノ)-1,3,4-ノナントリオール（化合物34）の合成
化合物７とアラキジン酸から、化合物８、１４、１７、２０、２３の合成と同様の操作を連続して行い、表題化合物を得た。
TLC：Rf = 0.33 (CH₂Cl₂:MeOH=6:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD=3:1）: 4.86 (d, 1H, J=3.4Hz), 4.16 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.85 (dd, 1H, J=10.5Hz and 4.6Hz), 3.74-3.61 (m, 6H), 3.50 (m, 2H), 2.17 (t, 2H, J=7.9Hz), 1.62-1.56 (m, 4H), 1.25-1.21 (m, 38H), 0.85-0.81 (m, 6H). MS (FAB) m/z: 648 (M+H⁺).

また、生物活性評価の比較のための対照物質として、アルファ・ガラクトシルセラミド（α-ＧＣ）、ＮＨ及び３，４Ｄを実施例に記載した化合物の合成法に準じて合成した。ここで、α−GCとは(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘキサコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタデカントリオールであり、NHとは(2S,3S,4R)-1-O-(2-アミノ-2-デオキシ-α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘキサコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタデカントリオールであり、3,4Dとは(2S)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1-オクタデカノールである。これらの化合物の構造式（化４）とスペクトルデータを以下に示す。

比較例１：(2S,3S,4R)-1-O-(2-デオキシ-2-アミノ-α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘキサコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタデカントリオール（化合物３５：ＮＨ）
TLC：Rf = 0.67 (t-BuOH:CH₃OH:H₂O=4:1:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD:D₂O=3:1:0.1）: 5.10 (d, 1H, J=3.5Hz), 3.47-3.94 (m, 11H), 2.24 (t, 2H, J=7.3Hz), 1.26-1.54 (m, 72H), 0.88 (m, 6H). MS (ESI) m/z: 857.7 (M+H⁺).

比較例２：(2S,3S,4R)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-ヘキサコサノイルアミノ)-1,3,4-オクタデカントリオール（化合物３６：α−ＧＣ）
TLC：Rf = 0.75 (CHCl₃:MeOH=3:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD=3:1）: 4.90 (d, 1H, J=3.6Hz), 3.56-3.90 (m, 11H), 2.21 (t, 2H, J=7.4Hz), 1.27-1.61 (m, 72H), 0.89 (m, 6H). MS (ESI) m/z: 880.7 (M+Na⁺).

比較例３：(2S)-1-O-(α-D-ガラクトシル)-2-(N-テトラコサノイルアミノ)-1-オクタデカノール(化合物３７：３，４Ｄ)
TLC：Rf = 0.48 (CHCl₃:MeOH=7:1). ¹H-NMR（CDCl₃:CD₃OD=3:1）: 4.90 (d, 1H, J=3.3Hz), 3.42-3.95 (m, 9H), 2.19 (t, 2H, J=7.6Hz), 1.27-1.62 (m, 72H), 0.89 (m, 6H). MS (MALDI) m/z: 820.74 (M+Na⁺).

生物活性評価
上記の合成化合物の生物活性を以下の方法で評価した。
まず、合成糖脂質（化合物２５及びα-ＧＣ（化合物３６））を用いて、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の抑制の検討を行った。
６−８週齢の雌C57BL6J(B6)マウスにミエリン・オリゴデンドロサイト糖蛋白（ＭＯＧ）の３５−５５残基に相当するペプチド(配列番号１)１００μｇを結核死菌(H37Ra)を併用下にエマルジョンとして尾根部に免疫した。同日に百日咳毒素２００ｎｇを尾静脈より、４８時間後に百日咳毒素２００ｎｇを経腹腔的に投与してＥＡＥを誘導し、臨床症状を観察するとともに、病理学的検討を行った。合成糖脂質は、経口投与(400ng/kg)を行った。コントロールにはＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）のみ投与した。
その結果を表１に示す。評価には下記の臨床スコア及び病理スコアを用いた。
臨床スコア０：正常、１：尾のトーヌス低下、２：尾の下垂・歩行不安定、３：中等度後肢脱力、４：後肢完全脱力、５：四肢麻痺、６：死亡
病理スコア０：正常、１：軟膜・軟膜下細胞浸潤、２：中等度血管周囲細胞浸潤、３：高度血管周囲細胞浸潤、４：脳実質細胞浸潤

化合物２５投与群でＥＡＥの抑制効果がみられたが、α−ＧＣ投与群では抑制効果はみられなかった。病理学的検索でも化合物２５投与群では抑制がみられた。化合物２５によるＥＡＥ抑制効果はＮＫＴノックアウトマウス（TCR J alpha 281 ノックアウトマウス）では観察できなかったことから、ＮＫＴ細胞を介する効果であることがわかる。
次に、上記自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の抑制試験に記載の方法でＥＡＥを誘導し、化合物２５（１００μｇ／ｋｇ）経腹腔投与によるＥＡＥ抑制効果を検討した。その結果を図３に示す。経腹腔投与でも経口投与と同様にＥＡＥ抑制効果がみられた。
次に、合成糖脂質（化合物２５及びα−ＧＣ）及びＤＭＳＯを用いて、実験的自己免疫性能脊髄炎（ＥＡＥ）の抑制の機序の検討を行った。

上記方法でＥＡＥを誘導し、化合物２５投与によるＥＡＥ抑制効果がＩＬ−４を介するかどうかを調べる為に抗ＩＬ−４抗体(1mg/ml)の同時投与を腹腔的に行った。その結果を表２に示す。

化合物２５投与によるＥＡＥ抑制効果は抗ＩＬ−４抗体の投与により消失することから、ＩＬ−４がＥＡＥ抑制に重要であることがわかった。

次にコラーゲン関節炎(ＣＩＡ)の抑制実験を行った。その結果を図４に示す。
Ａ）６−８週齢の雄Ｃ５７ＢＬ６マウスにトリType IIコラーゲン１００μｇを結核死菌（Ｈ３７Ｒａ）を併用下にエマルジョンとして尾根部に免疫した。２１日めに同様のエマルジョンを尾根部に追加免疫し、臨床症状を観察した。合成糖脂質は、追加免疫時から週２回経腹腔投与（５００μｇ／ｋｇ）を行った。コントロールはＤＭＳＯのみ投与した。
臨床スコア０：症状なし、１：四肢の指など小関節が１本のみ腫脹発赤、２：小関節２本以上、あるいは手首や足首などの比較的大きな関節が腫脹発赤、３：１本の手や足全体が腫脹発赤、４：１本の手や足の全体的腫脹が最大限に達していると判断したとき、とし、両手、両足の合計を点数とする。
Ｂ６マウスにおけるコラーゲン関節炎において化合物２５投与で、疾患抑制効果がみられた。

Ｂ）６−８週齢の雄ＳＪＬマウスにウシリType IIコラーゲン２００μｇを結核死菌（Ｈ３７Ｒａ）を併用下にエマルジョンとして尾根部に免疫した。２１日めに同様のエマルジョンを尾根部に追加免疫し、臨床症状を観察した。合成糖脂質は、追加免疫時から週２回経腹腔投与（５００μｇ／ｋｇ）を行った。コントロールはＤＭＳＯのみ投与した。ＳＪＬマウスにおけるコラーゲン関節炎において化合物２５投与で、疾患抑制効果がみられた。

Ｃ）６−８週齢の雄ＳＪＬマウスにウシリType IIコラーゲン２００μｇを結核死菌（Ｈ３７Ｒａ）を併用下にエマルジョンとして尾根部に免疫した。２１日めに同様のエマルジョンを尾根部に追加免疫し、臨床症状を観察した。合成糖脂質は、追加免疫時ないし症状出現した２８日から週２回経腹腔投与（５００μｇ／ｋｇ）を行った。コントロールはＤＭＳＯのみ投与した。
症状出現後のコラーゲン関節炎において化合物２５の投与で、疾患抑制効果がみられた。

次に、ＮＯＤマウスにおける糖尿病発症の抑制実験を行った。その結果を図５に示す。ＮＯＤマウスに、４週令より化合物２５を２回経腹腔投与（１００μｇ／ｋｇ）を行ったところ、糖尿病発症が著明に抑制された。

次に、血中サイトカイン測定を行った。その結果を図６に示す。ＮＫＴ細胞は刺激されると短期間で大量のサイトカインを血中に放出することが知られているので、合成糖脂質をマウスに投与した際の血中のＩＮＦ−γとＩＬ−４を時間経過を追ってＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
従来の報告通り、α−ＧＣ投与ではＩＮＦ−γとが優位に産生されるが、化合物２５投与ではＩＬ−４が優位に産生されることがわかった。

続いて、脾細胞の増殖反応測定を行った。その結果を図７に示す。マウス脾細胞を分離し、合成糖脂質に対する増殖反応をチミジンの細胞への取り込みを指標として測定した。脾細胞は化合物２５に対して有意な増殖反応を示した。

次に、脾細胞のサイトカイン測定を行った。その結果を図８に示す。マウス脾細胞を分離し、合成糖脂質によるＩＮＦ−γとＩＬ−４の産生をＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。マウス投与時と同様に、α−ＧＣ投与ではＩＮＦ−γとが優位に産生されるが、化合物２５投与ではＩＬ−４が優位に産生されることがわかった。

次に、脾細胞の増殖反応測定とサイトカイン測定を行った。その結果を図９に示す。マウス脾細胞を分離し、合成糖脂質に対する増殖反応をチミジンの細胞への取り込みを指標として測定した。脾細胞は化合物２３、２４、２５に対して有意な増殖反応を示した。マウス脾細胞を分離し、合成糖脂質によるＩＮＦ−γとＩＬ−４の産生をＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。α−ＧＣ投与ではＩＮＦ−γとが優位に産生されるが、化合物２３、２４、２５投与ではＩＬ−４が優位に産生されることがわかった。

次に、血中抗ＭＯＧ抗体測定を行った。その結果を図１０に示す。合成糖脂質投与群のにおける抗ＭＯＧ抗体価ならびにそのアイソタイプの測定をＥＬＩＳＡを用いて行った。化合物２５投与群では抗ＭＯＧ抗体価の上昇がみられ、アイソタイプではＩｇＧ１が有意な上昇を認め、ＭＯＧに対する反応がＴｈ２に偏倚していることがわかった。

本発明の糖脂質（化１）の製造工程の一例を示す図である。図中、Ｒ^１はアルドピラノース残基を表し、Ｒ^２は水素原子、又は水酸基を表し、Ｒ^３は−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_２−、又は−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、Ｒ^４は水素原子、又はメチル基を表し、ｘは０〜３５の何れかの整数を表し、ｙ＋ｚは０〜３の何れかの整数を表し、Ｒ^５は水素原子、メチル基、又は−（ＣＨ_２）ｙ'（ＣＨ（ＣＨ_３））ｚ'−ＣＨ（Ｒ^４）_２［ｙ'＋ｚ'は０〜２の何れかの整数を示す］を表し、Ｒ^６は水素原子、又はメチル基を表し、Ｒ^７は水酸基やアミノ基等の官能基が適切に保護されたアルドピラノースを表す。本発明の糖脂質（化１）の製造工程の一例を示図である。実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の抑制の検討結果を示すグラフである。コラーゲン関節炎（ＣＩＡ）の抑制の検討結果を示すグラフである。ＮＯＤマウスにおける糖尿病発症の抑制試験の結果を示す図である。血中サイトカインの測定結果を示すグラフである。脾細胞の増殖反応の測定結果を示すグラフである。脾細胞のサイトカインの測定結果を示すグラフである。棒グラフの右側はＩＬ−４を、左側はＩＮＦ−γを表す。脾細胞の増殖反応測定とサイトカイン測定の結果を示す図である。血中抗ＭＯＧ抗体測定の測定結果を示すグラフである。右の棒グラフの右側はＩｇＧ１を、左側はＩｇＧ２ａを表す図である。

Claims

下式（Ｉ）

（式中、Ｒ^１はアルドピラノース残基を表し、Ｒ^２は水素原子又は水酸基を表し、Ｒ^３は−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_２−、又は−ＣＨ＝ＣＨ−を表し、Ｒ^４は水素原子又はＣＨ_３を表し、ｘは０〜３５であり、ｙ及びｚは、ｙ＋ｚ＝０〜３を満たす整数を表す。）で表される糖脂質。
前記Ｒ^１がα―Ｄ−ガラクトピラノシルを表す請求項１に記載の糖脂質。
前記Ｒ^３が−ＣＨ_２−、又は−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_２−を表し、ｘが１０〜３２である請求項２に記載の糖脂質。
前記Ｒ^３が−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_２−を表す請求項３に記載の糖脂質。
前記Ｒ^２及びＲ^４が水素原子を表し、ｘが１１〜２３であり、ｚが０である請求項１〜４のいずれか一項に記載の糖脂質。
請求項１〜５のいずれか一項に記載の糖脂質を有効成分として含有する自己免疫疾患のための治療薬。
請求項１〜５のいずれか一項に記載の糖脂質を有効成分として含有するＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランスがＴｈ１に偏向した疾患、またはＴｈ１細胞が病態を悪化させる疾患の治療薬。
請求項１〜５のいずれか一項に記載の糖脂質を有効成分として含有する選択的ＩＬ−４産生誘導剤。