JP3930929B2

JP3930929B2 - 共焦点顕微鏡

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Publication number: JP3930929B2
Application number: JP31785096A
Authority: JP
Inventors: 陽介岸
Original assignee: Olympus Corp
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 1996-11-28
Filing date: 1996-11-28
Publication date: 2007-06-13
Anticipated expiration: 2016-11-28
Also published as: JPH10161032A; US5969846A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、共焦点（コンフォーカル）顕微鏡に係り、特に標本（試料）の励起方法、蛍光観察方法に最適な共焦点顕微鏡に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来の走査型共焦点顕微鏡の第１の例として、図９に示すように、標本の励起、蛍光観察が可能なものがある。これは、レーザ光源１と、レンズ２３、励起フィルタ３Ａ、マイクロレンズディスク４、ショートパスダイクロイックミラー５、ピンホールディスク６を備えたスキャナユニット２と、対物レンズ８と、測光フィルタ１１、集光レンズ１２、撮像素子１３を備えた観察ユニット１０から構成されている。
【０００３】
ここで、マイクロレンズディスク４上のマイクロレンズ４ａ，４ｂ，４ｃの配置は、図２に示すようにディスクの半径方向にある一定間隔で複数の開口部が形成され各開口部にそれぞれマイクロレンズが配設され、さらに隣の配列に対して少しずつ半径方向に位置がシフトするように配列されており、互いにシフトした複数列を１セットとして１枚の画像を取得できるようになっており、同様にピンホールディスク６上のピンホールも同様に構成されている。図２の例では、各ディスク４，６の６分の１で１枚の画像が取得できるように、マイクロレンズ列ならびにピンホール列の同一パターンが６セット形成されている。従って、ディスク４，６の１回転で６枚の画像が得られる。
【０００４】
レーザ光源１から発せられた光は、レンズ２３により平行光にコリメートされ、該平行光は励起フィルタ３Ａを介してマイクロレンズディスク４のマイクロレンズに透過され、該マイクロレンズを透過した平行光はダイクロイックミラー５を透過して、ピンホールディスク６に設けられたピンホール面で結像する。該ピンホールを透過した光は対物レンズ８を透過して標本９の表面で再び結像する。
【０００５】
そして、該標本９の表面から発せられた蛍光は対物レンズ８を透過し、ピンホール面で結像する。ピンホールを透過した光は、ダイクロイックミラー５で反射し、測光フィルタ１１および集光レンズ１２を透過して、撮像素子１３もしくは接眼レンズで結像し、標本像として確認できる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
図９の励起光を抽出する励起フィルタ３Ａは、光源１とマイクロレンズディスク４の間に、また測光フィルタ１１は撮像素子１３もしくは接眼レンズ（図示せず）の手前に設定されており、１波長励起、１波長蛍光の観察が可能となる。
【０００７】
ところが、図９の例は、励起フィルタ３Ａ、測光フィルタ１１が共に固定であるため、１波長励起、１波長蛍光の観察、測定ができるものの、標本の種類によっては次に述べる多重励起、多重蛍光観察、測定が困難である。
【０００８】
ここで、多重励起とは、励起光を導入する際に標本を複数の波長で励起することをいう。また多重蛍光観察とは、標本から発せられる蛍光を、複数の波長で観察、測定することをいう。
【０００９】
図１０は図９の問題点を改善するため、図９の構成に新たにダイクロイックミラー３１と、観察ユニット３０Ａ，３０Ｂを追加したものである。観察ユニット３０Ａは、集光レンズ１２Ａと、測光フィルタ２８Ａと、ＴＶ（テレビ）カメラ２９Ａから構成されている。観察ユニット３０Ｂは、集光レンズ１２Ｂと、測光フィルタ２８Ｂと、ＴＶ（テレビ）カメラ２９Ｂから構成されている。
【００１０】
このように、ダイクロイックミラー３１の光路に観察ユニット３０Ａ，３０Ｂが配設されているので、両測光フィルタ２８Ａ，２８Ｂとして波長の異なるものを使用すれば、２波長蛍光の観察、測定が可能である。
【００１１】
ところが、ＴＶカメラ２９Ａ，２９Ｂのそれぞれの画像を元にしてレシオ画像を計算するような場合、ＴＶカメラ２９Ａ，２９Ｂの画素を合わせるという調整は非常に困難である。
【００１２】
さらに、両ＴＶカメラ２９Ａ，２９Ｂの性能のばらつきにより、ＴＶカメラ２９Ａ，２９Ｂの交換時に必ずこの調整作業が必要となり、煩わしい。
本発明の目的は、上記の問題点を除去するためなされたものであり、励起光を導入する際に標本を複数の波長で励起でき、また標本から発せられる蛍光を、複数の波長で観察、測定できる共焦点顕微鏡を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するため請求項１に対応する発明は、回転することにより照射光を標本に対して走査する機能を有するディスクを備えたディスク走査型の共焦点顕微鏡において、前記ディスクの回転に同期して照明光および観察光の少なくとも一方の波長または波長領域を切り換えることのできる波長選択手段を具備したことを特徴とする共焦点顕微鏡である。
【００１４】
さらに、前記ピンホールディスクの回転に同期して蛍光波長の切換ができる手段を持つことで標本から発せられる蛍光を、複数の波長で観察、測定できる共焦点顕微鏡を提供することにある。
【００１５】
前記目的を達成するため請求項２に対応する発明は、複数のピンホールを有するピンホールディスクおよび複数の開口部にそれぞれマイクロレンズを有するマイクロレンズディスクを回転させて、該各ピンホールを通過した照射光を標本に対して走査する共焦点顕微鏡において、
前記マイクロレンズディスク及び前記ピンホールディスクの回転に同期して照明光および観察光の少なくとも一方の波長または波長領域を切り換えることのできる波長選択手段と、
前記マイクロレンズディスク及び前記ピンホールディスクの回転と前記波長選択手段による波長又は波長領域の切り換えを機械的または電気的に同期結合する同期結合手段とを具備したことを特徴とする共焦点顕微鏡である。
【００１６】
前記目的を達成するため請求項３に対応する発明は、前記波長選択手段を、前記マイクロレンズディスクの入射側、前記マイクロレンズディスクの出射側、前記観察光路上のいずれかに設けたことを特徴とする請求項２記載の共焦点顕微鏡である。
【００１７】
請求項４に対応する発明は、回転することにより照射光を標本に対して走査する機能を有するディスクを備えたディスク走査型の共焦点顕微鏡において、前記ディスクを透過した観察光を撮像する撮像手段と、前記撮像手段による画像取得のタイミングに同期して照明光及び観察光の少なくとも一方の波長又は波長領域を切り換える波長選択手段とを具備したことを特徴とする共焦点顕微鏡である。
請求項５に対応する発明は、前記撮像手段による画像取得のタイミングと、前記ディスクの回転を同期させるようにしたことを特徴とする請求項４に記載の共焦点顕微鏡である。
請求項６に対応する発明は、前記照明光及び前記観察光の少なくとも一方の波長又は波長領域を切り換えて取得した複数の画像を元にしてレシオ画像を計算することを特徴とする請求項４，５に記載の共焦点顕微鏡である。
請求項７に対応する発明は、回転することにより照射光を標本に対して走査する機能を有するディスクを備えたディスク走査型の共焦点顕微鏡において、前記ディスクの回転に同期して照明光および観察光の少なくとも一方の波長または波長領域を切り換えることのできる波長選択手段と、前記ディスクの回転と前記波長選択手段による波長又は波長領域の切り換えを機械的又は電気的に同期結合する同期結合手段を具備したことを特徴とする共焦点顕微鏡である。
請求項８に対応する発明は、前記ディスクは複数のピンホールを有するピンホールディスクであることを特徴とする請求項１、４、５、６または７のいずれかに記載の共焦点顕微鏡である。
本発明によれば、励起光を導入する際に標本を複数の波長で励起でき、また標本から発せられる蛍光を、複数の波長で観察、測定できる。
【００１８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施形態について図面を参照して説明する。
＜第１実施形態＞
図１は、図９に示す従来の共焦点顕微鏡に、新たにピンホールディスク９の回転に同期して照明光および観察光の少なくとも一方の波長または波長領域を切り換えることのできる波長選択手段を設けたものである。以下波長選択手段について具体的に説明する。
【００１９】
波長選択手段は、励起フィルタディスク３と、クラッチ７からなる。励起フィルタディスク３は中心部に回転軸３１を有し、図３（ａ）に示すように扇形状であって波長の異なる複数の励起フィルタ３３ａ，３３ｂを交互に配設した円形状のものであり、励起フィルタディスク３の周縁部の一部がレンズ２３とマイクロレンズディスク４の間に位置するように設置されている。
【００２０】
クラッチ７は、励起フィルタディスク３の回転軸３１とマイクロレンズディスク４の回転軸１４を機械的または電気的に接離できるものであればよく、例えば電磁力により接離可能な電磁クラッチを用いることができる。
【００２１】
励起フィルタディスク３は図３（ａ）に示す扇形状の励起フィルタ３３ａ，３３ｂに代えて、図３（ｂ）に示すように、円形状であって波長の異なる複数の励起フィルタ３３ａ，３３ｂを交互に配設したものであってもよい。
【００２２】
このような構成のものにおいて、光源１より発せられた光は、レンズ２３によって平行光にコリメートされ、励起フィルタディスク３に設置されている励起フィルタ３３ａ，３３ｂによって波長を選択され、マイクロレンズディスク４上に設定されている複数のマイクロレンズによって、ピンホールディスク６上に設定されているマイクロレンズ４ａ，４ｂ，４ｃと個々に対になっている複数のピンホールに集光する。
【００２３】
ここで、ダイクロイックミラー５はショートパスの特性を持つため、この励起光はダイクロイックミラー５を透過する。複数のピンホールを通過した光は、対物レンズ８によって標本９の同一平面上で再び集光する。照射された光によって標本９が励起され、蛍光を発する。蛍光は再び対物レンズ８を透過してピンホール面で結像する。さらにピンホールを通過した光はダイクロイックミラー５によって反射され、観察ユニット１０に導かれる。観察ユニット１０内に設けられた測光フィルタ１１によって波長を制限し、集光レンズ１２によってＴＶカメラなどの撮像素子１３の受光面に結像する。
【００２４】
次に、励起方法について説明する。マイクロレンズディスク４上のマイクロレンズおよびピンホールディスク６上のピンホールの配列は、例えば図２に示すように、ディスクの半径方向に、ある一定間隔で配列されている。さらに隣の配列に対して少しずつ半径方向に位置がシフトするように配列されており、互いにシフトした複数列を１セットとして１枚の画像を取得できるようになっている。
【００２５】
図２の例では、各ディスク４ａ，４ｂの６分の１で１枚の画像が取得できるように、マイクロレンズ列４ａ，４ｂ，４ｃならびにピンホール列６ａ、６ｂ、６ｃのセットが、同一のパターンで６セット形成されている。従って、マイクロレンズディスク４とピンホールディスク６の１回転で６枚の画像が得られる。
【００２６】
そこで、マイクロレンズディスク４およびピンホールディスク６のパターンに合わせて励起フィルターディスク３を形成し、図３（ａ）のように、ディスク上に扇状のフィルタ３３ａ，３３ｂを搭載する。例えば２波長励起の場合には、波長の異なる励起フィルタ３３ａ，３３ｂを交互に設置する。例えばカルシウムイオン蛍光指示薬であるfura- ２を励起する場合には、励起フィルタディスク３として340nm および380nm の励起フィルタを交互に設定する。
【００２７】
以上述べた第１実施形態は、次のように変形して実施できる。
１）前記２つの励起フィルタの励起光の光量バランスをとる場合には、各々のフィルタの上にＮＤフィルタを設置すればよい。
【００２８】
２）マイクロレンズディスク４およびピンホールディスク６の回転軸１４に、励起フィルタディスク３をクラッチ７で連結する。この励起フィルタディスク３に搭載する励起フィルタは、図３（ｂ）に示すように、円形のフィルタに形成し、さらに着脱可能にし励起波長に応じて交換できるようにしてもよい。ただし、この場合励起光のビーム径より大きな径のフィルタにすることが必要である。
【００２９】
３）マイクロレンズディスク４の回転すなわち励起フィルタディスク３による励起光の切換に同期して、撮像素子１３の画像取得のタイミングをとることで、時系列的に２波長励起の画像を取得することができる。
【００３０】
４）図１の撮像素子１３の代りに、接眼レンズを設けてもよい。
以上述べた第１実施形態によれば、マイクロレンズディスク４、ピンホールディスク６および励起フィルタディスク３を備えた回転式スキャナーユニットを利用することで、高速で共焦点像を取得できるので、２波長測光で、交互に画像を取得したとしても、十分に高速な観察、測定ができる。
【００３１】
ピンホールディスク６の回転に同期して励起光の切換ができる励起フィルタディスク３を持つことで、多重励起すなわち励起光を導入する際に標本を複数の波長で励起することができる。
【００３２】
＜第２実施形態＞
本発明の第２実施形態を図４に示しており、図１と異なる点は、図１の励起フィルタディスク３と、クラッチ７からなる波長選択手段の構成が、以下のように異なる。すなわち、ミラーディスク１５、励起フィルタ１６ａ，１６ｂ、ミラー１７ａ，１７ｂ、回転軸１８、ギャ１９，２０からなる波長選択手段を設けたものである。
【００３３】
ミラーディスク１５は、例えば図５のように円形ディスクに扇形の透過部１５ａと扇形の反射部１５ｂが交互に配設され、円形ディスクの中央部に回転軸１８貫通固定され、回転軸１８の一端部にはギャ２０が固定されたものである。
【００３４】
マイクロレンズディスク４の回転軸１４の一端部にはギャ１９が固定され、ギャ１９とが互いに噛合するように互いに略４５度傾斜した状態に設置され、回転軸１４の回転に伴って回転軸１８が回転するように構成されている。なお、ギャ１９とギャ２０のギヤ比は１：１となっている。
【００３５】
そして、レンズ２３によりコリメートされた平行光は、ミラーディスク１５の反射部１５ｂで直角に偏向され、反射光は励起フィルタ１６ａを透過し、ミラー１７ａで直角に偏向され、再びミラーディスク１５の反射部１５ｂで直角に偏向され、マイクロレンズディスク４上のマイクロレンズに導かれるように構成されている。
【００３６】
また、レンズ２３によりコリメートされた平行光は、ミラーディスク１５の透過部１５ａで直角に偏向され、反射光は励起フィルタ１６ｂを透過し、ミラー１７ｂで直角に偏向され、再びミラーディスク１５の透過部１５ａで直角に偏向され、マイクロレンズディスク４上のマイクロレンズに導かれるように構成されている。
【００３７】
次に、このように構成された第２実施形態の動作について説明する。光源１から発せられた光はレンズ２３によって平行光にコリメートされて、スキャナユニット２に設定されたミラーディスク１５の透過部１５ａを透過し、励起フィルタ１６ｂで波長を選択されてミラー１７ｂで反射され、再び、ミラーディスク１５の透過部１５ａを透過してマイクロレンズディスク４上のマイクロレンズヘ導光される。
【００３８】
一方、ミラーディスク１５がある一定角度回転すると、光源１から発せられた光はミラーディスク１５の反射部１５ｂで反射され、励起フィルタ１６ａで波長を選択されてミラ−１７ａで反射され、再びミラーディスク１５の反射部１５ｂで反射してマイクロレンズディスク４上のマイクロレンズヘ導光される。この後の動作は、第１実施形態と同じであるので、この説明を省略する。
【００３９】
ここで、ミラーディスク１５はギヤ２０によってマイクロレンズディスク４の回転軸１４とリンクしており、ギヤ比は１：１となっているで、マイクロレンズディスク４の回転すなわちミラーユニットによる励起光の切換に同期して、撮像素子１３の画像取得のタイミングをとることで、時系列的に２波長励起の画像を取得することができる。これ以外の作用効果は、第１実施形態と同一である。
【００４０】
なお、図４のようにミラ−１７ａにより反射された光が、回転軸１４に干渉しないように、図５に示すように、光路がミラーディスク１５および回転軸１４からオフセットしている。このオフセット量は、励起光がミラーディスク１５に入射する際に透過したときはミラ−１７ｂによって反射され、再度必ずミラーディスク１５を透過し、反射したときはミラ−１７ａによって反射され、再度必ずミラーディスク１５を反射する位置となっている。
【００４１】
＜第３実施形態＞
本発明の第３実施形態を図６に示しており、図１と異なる点は、図１の励起フィルタディスク３と、クラッチ７からなる波長選択手段の構成が、以下のように異なる。すなわち、ガルバノミラー２１、励起フィルタ１６ａ，１６ｂ、光ファイバー２２からなる波長選択手段を設けたものである。
【００４２】
光源１から発せられた光は、ガルバノミラー２１によって時系列的に分光され、一方は励起フィルタ１６ａ、他方は励起フィルタ１６ｂを透過し、それぞれの波長に選択され、光ファイバー２２に導光される。光ファイバー２２から出射された光はレンズ２３によって平行光にコリメートされて、マイクロレンズディスク４上のマイクロレンズに導光される。この後の動作は、第１実施形態と同じであるので、この説明を省略する。
【００４３】
ここで、電気的にガルバノミラー２１の振動数とマイクロレンズディスク４の回転数をリンクさせ、すなわち図２のような６分割されたマイクロレンズディスク４の例の場合、マイクロレンズディスク４が１周で、ガルバノミラー２１は３周期振動することになる。１波長で励起したい場合には、ガルバノミラー２１をいずれかの方向で静止させておけばよい。従って、ガルバノミラー２１の振動数に同期して撮像素子１３の画像取得のタイミングをとることで、時系列的に２波長励起の画像を取得することができる。なお、高速で画像取得の必要がない場合には、ガルバノミラー２１の切換に同期して、すなわち励起光の切換に同期して画像取得の切換えを行えば、マイクロレンズディスク４を同期させる必要はない。
これ以外の作用効果は、第１実施形態と同一である。
【００４４】
＜第４実施形態＞
図７は、本発明の第４実施形態を示す概略構成図である。
この実施形態は、標本９から発する蛍光を多波長で観察、測定できるように、構成したものである。すなわち、図１と異なる点は、図１の励起フィルタディスク３と、クラッチ７からなる波長選択手段を、測光フィルタドラム２４、クラッチ７からなる波長選択手段に変更したものである。
【００４５】
測光フィルタドラム２４は、図８に示すように、有底円筒状であって、該底面に回転軸２７を貫通固定すると共に底面に複数の開口部２４ａが形成され、かつ周面に波長の異なる測光フィルタ２６ａ，２６ｂを交互に配置したものである。回転軸２７と、マイクロレンズディスク４およびピンホールディスク６の回転軸１４の間に、両者の回転を同期させることができるように構成したものである。なお、図８は分かりやすくするため、底面が省略してある。
【００４６】
このような構成のものにおいて、光源１から発せられた光はレンズ２３によって平行光にコリメートされて、励起フィルタ２５で波長を選択されて、マイクロレンズディスク４上に設定されている複数のマイクロレンズに導光される。以下標本９から発せられた蛍光がダイクロイックミラー５によって反射されるまでは第１実施形態と同様の作用となる。
【００４７】
ダイクロイックミラー５によって反射された蛍光は、測光フィルタドラム２４に設置された測光フィルタ２６ａまたは２６ｂを透過し、波長を制限されて観察ユニット１０に導かれる。観察ユニット１０内に設けられた集光レンズ１２によってＴＶカメラなどの撮像素子１３の受光面に結像する。
【００４８】
次に、多波長測光方法について説明する。第１実施形態で説明したように、図２に示すようなマイクロレンズディスク４上のマイクロレンズおよびピンホールディスク６上のピンホールの配列が、ディスクの６分の１で１枚の画像が取得できるように、同一のパターンで６セット形成されているとしたとき、測光フィルタドラム２４を図８のような構成とし、マイクロレンズディスク４の回転軸１４にリンクさせる。例えばカルシウムイオン蛍光指示薬であるindo-1を用いて測光する場合には、励起フィルタ２５に350nm のフィルタを設置し、測光フィルタドラム２４に405nm と480nm の測光フィルタを交互に設置する。
【００４９】
また、これら２波長の蛍光の光量バランスをとりたい場合には、各々のフィルタの上にＮＤフィルタを設置できるようにしてもよい。
なお、マイクロレンズディスク４とピンホールディスク６の回転軸１４に測光フィルタドラム２４をクラッチ７で連結できるようにしておき、いずれかの１波長で測光したい場合にはクラッチ７を解放して手動で測光フィルタドラム２４を回転できるようにする。
【００５０】
そして、マイクロレンズディスク４の回転すなわち測光フィルタドラム２４による測光の切換に同期して、撮像素子１３の画像取得のタイミングをとることで、時系列的に２波長測光の画像を取得することができる。
【００５１】
これに対して、前述した従来の２波長測光する場合、図１０に示すようにＴＶカメラのような撮像素子１３を２台設定することがあるが、それぞれの画像を元にしてレシオ画像を計算するような場合に、互いのＴＶカメラの画素を合わせるという調整は非常に困難である。
【００５２】
以上述べた第４実施形態によれば、ピンホールディスク６の回転に同期して蛍光波長の切換ができる測光フィルタドラム２４を備えているので、多重蛍光観察すなわち標本から発せられる蛍光を、複数の波長で観察、測定することができ、レシオ画像を計算することも容易になる。
【００５３】
＜変形例＞
前述の実施形態では、励起フィルタディスク３を、マイクロレンズディスク４とレンズ２３の間に配置した例について説明したが、前述した励起フィルタディスク３と同一の励起フィルタディスク３を、マイクロレンズディスク４とダイクロイックミラー５の間に配置し、かつ励起フィルタディスク３とマイクロレンズディスク４とピンホールディスク６を同期回転するように構成してもよい。
【００５４】
また、前述の実施形態では、ピンホールディスク６と、同一のパターンのマイクロレンズディスク４を同一回転軸１４により回転させるように構成されているのは、光の利用効率を高めるためであるが、例えば用途等によっては光の利用効率を高める必要がないときには、マイクロレンズディスク４を省き、ピンホールディスク６と励起フィルタディスク３を同一の回転軸に連結するようにしてもよい。
【００５５】
【発明の効果】
以上述べた本発明によれば、次のような効果が得られる共焦点顕微鏡を提供することができる。
（１）多重励起すなわち励起光を導入する際に標本を複数の波長で励起することができる。
【００５６】
（２）多重蛍光観察すなわち標本から発せられる蛍光を、複数の波長で観察、測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の共焦点顕微鏡の第１実施形態を示す概略構成図。
【図２】図１のマイクロレンズディスクまたはピンホールディスクの構成を説明するための図。
【図３】図１の励起フィルタディスクの構成を説明するための図。
【図４】本発明の共焦点顕微鏡の第２実施形態を示す概略構成図。
【図５】図４のミラーディスクの構成を説明するための図。
【図６】本発明の共焦点顕微鏡の第３実施形態を示す概略構成図。
【図７】本発明の共焦点顕微鏡の第４実施形態を示す概略構成図。
【図８】図７の測光フィルタドラムの構成を説明するための図。
【図９】従来の共焦点顕微鏡の第１の例を説明するための概略構成図。
【図１０】従来の共焦点顕微鏡の第２の例を説明するための概略構成図。
【符号の説明】
１…レーザ光源
２…スキャナユニット
３…励起フィルタディスク
４…マイクロレンズディスク
５…ダイクロイックミラー
６…ピンホールディスク
７…クラッチ
８…対物レンズ
９…標本（試料）
１０…観察ユニット
１１…測光フィルタ
１２…集光レンズ
１３…撮像素子
１４…回転軸
１５…ミラーディスク
１６ａ，１６ｂ…励起フィルタ
１７ａ，１７ｂ…ミラー
１８…回転軸
１９…ギャ
２０…ギャ
２１…ガルバノミラー
２２…光ファイバー
２３…レンズ
２４…測光フィルタドラム
２５…励起フィルタ
２６ａ，２６ｂ…測光フィルタ
２７…回転軸

Claims

回転することにより照射光を標本に対して走査する機能を有するディスクを備えたディスク走査型の共焦点顕微鏡において、
前記ディスクの回転に同期して照明光および観察光の少なくとも一方の波長または波長領域を切り換えることのできる波長選択手段を具備したことを特徴とする共焦点顕微鏡。
複数のピンホールを有するピンホールディスクおよび複数の開口部にそれぞれマイクロレンズを有するマイクロレンズディスクを回転させて、該各ピンホールを通過した照射光を標本に対して走査する共焦点顕微鏡において、
前記マイクロレンズディスク及び前記ピンホールディスクの回転に同期して照明光および観察光の少なくとも一方の波長または波長領域を切り換えることのできる波長選択手段と、
前記マイクロレンズディスク及び前記ピンホールディスクの回転と前記波長選択手段による波長又は波長領域の切り換えを機械的または電気的に同期結合する同期結合手段とを具備したことを特徴とする共焦点顕微鏡。
前記波長選択手段は、前記マイクロレンズディスクの入射側、前記マイクロレンズディスクの出射側、前記観察光路上のいずれかに設けたことを特徴とする請求項２記載の共焦点顕微鏡。
回転することにより照射光を標本に対して走査する機能を有するディスクを備えたディスク走査型の共焦点顕微鏡において、
前記ディスクを透過した観察光を撮像する撮像手段と、
前記撮像手段による画像取得のタイミングに同期して照明光及び観察光の少なくとも一方の波長又は波長領域を切り換える波長選択手段とを具備したことを特徴とする共焦点顕微鏡。
前記撮像手段による画像取得のタイミングと、前記ディスクの回転を同期させるようにしたことを特徴とする請求項４に記載の共焦点顕微鏡。
前記照明光及び前記観察光の少なくとも一方の波長又は波長領域を切り換えて取得した複数の画像を元にしてレシオ画像を計算することを特徴とする請求項４，５に記載の共焦点顕微鏡。
回転することにより照射光を標本に対して走査する機能を有するディスクを備えたディスク走査型の共焦点顕微鏡において、
前記ディスクの回転に同期して照明光および観察光の少なくとも一方の波長または波長領域を切り換えることのできる波長選択手段と、
前記ディスクの回転と前記波長選択手段による波長又は波長領域の切り換えを機械的又は電気的に同期結合する同期結合手段を具備したことを特徴とする共焦点顕微鏡。
前記ディスクは複数のピンホールを有するピンホールディスクであることを特徴とする請求項１、４、５、６または７のいずれかに記載の共焦点顕微鏡。