JP3262147B2 - 共焦点顕微鏡 - Google Patents
共焦点顕微鏡Info
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- JP3262147B2 JP3262147B2 JP33466293A JP33466293A JP3262147B2 JP 3262147 B2 JP3262147 B2 JP 3262147B2 JP 33466293 A JP33466293 A JP 33466293A JP 33466293 A JP33466293 A JP 33466293A JP 3262147 B2 JP3262147 B2 JP 3262147B2
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- light
- epi
- illumination
- scanning
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-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/0004—Microscopes specially adapted for specific applications
- G02B21/002—Scanning microscopes
- G02B21/0024—Confocal scanning microscopes (CSOMs) or confocal "macroscopes"; Accessories which are not restricted to use with CSOMs, e.g. sample holders
- G02B21/0036—Scanning details, e.g. scanning stages
- G02B21/0044—Scanning details, e.g. scanning stages moving apertures, e.g. Nipkow disks, rotating lens arrays
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- Microscoopes, Condenser (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は走査型共焦点顕微鏡に関
し、特に落射照明時に対物レンズを交換することなく容
易に観察位置を特定できる共焦点顕微鏡に関する。
し、特に落射照明時に対物レンズを交換することなく容
易に観察位置を特定できる共焦点顕微鏡に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来の走査型共焦点顕微鏡（以下、単に
共焦点顕微鏡と呼ぶ。）は複数ピンホールを有する円板
を回転させ、この円板にレーザの平行光を入射して前記
各ピンホールを通過した光が試料上を走査するようにし
たものである。また、前記ピンホールと同一パターンの
マイクロレンズを有する円板を前記ピンホールを有する
円板と同期させて回転させることにより光利用効率を改
善することができる。
共焦点顕微鏡と呼ぶ。）は複数ピンホールを有する円板
を回転させ、この円板にレーザの平行光を入射して前記
各ピンホールを通過した光が試料上を走査するようにし
たものである。また、前記ピンホールと同一パターンの
マイクロレンズを有する円板を前記ピンホールを有する
円板と同期させて回転させることにより光利用効率を改
善することができる。
【０００３】図２はこのような従来のマイクロレンズを
付加した共焦点顕微鏡の一例を示す構成ブロック図であ
る。図２において１はレーザ、２は落射照明用光源、３
はミラー、４は複数のマイクロレンズを有する円板（以
下、円板４と呼ぶ。）、５はカメラ、６はレンズ、７は
バリアフィルタ、８はダイクロイックミラー、９は前記
マイクロレンズと同一パターンのピンホールを有する円
板（以下、円板９と呼ぶ。）、１０は対物レンズ、１１
は試料である。
付加した共焦点顕微鏡の一例を示す構成ブロック図であ
る。図２において１はレーザ、２は落射照明用光源、３
はミラー、４は複数のマイクロレンズを有する円板（以
下、円板４と呼ぶ。）、５はカメラ、６はレンズ、７は
バリアフィルタ、８はダイクロイックミラー、９は前記
マイクロレンズと同一パターンのピンホールを有する円
板（以下、円板９と呼ぶ。）、１０は対物レンズ、１１
は試料である。
【０００４】落射照明時に、落射照明用光源２の出力光
はミラー３、ダイクロイックミラー８及び対物レンズ１
０を介して試料１１に照射される。
はミラー３、ダイクロイックミラー８及び対物レンズ１
０を介して試料１１に照射される。
【０００５】試料１１からの反射光は対物レンズ１０を
介してダイクロイックミラー８に入射される。ダイクロ
イックミラー８においてこの入射光は反射されバリアフ
ィルタ７及びレンズ６を介してカメラ５に入射される。
介してダイクロイックミラー８に入射される。ダイクロ
イックミラー８においてこの入射光は反射されバリアフ
ィルタ７及びレンズ６を介してカメラ５に入射される。
【０００６】共主点観察時にはミラー３は取り除かれ、
円板４及び９が挿入される。レーザ１の出力光は円板４
に入射され、入射光の内マイクロレンズを透過した光は
ダイクロイックミラー８を介して円板９に入射される。
円板４及び９が挿入される。レーザ１の出力光は円板４
に入射され、入射光の内マイクロレンズを透過した光は
ダイクロイックミラー８を介して円板９に入射される。
【０００７】また、円板９に入射された光の内ピンホー
ルを通過した光は対物レンズ１０を介して試料１１に照
射される。
ルを通過した光は対物レンズ１０を介して試料１１に照
射される。
【０００８】試料１１からの反射光は対物レンズ１０を
介して円板９に入射され、前記ピンホールと同一のピン
ホールを通過してダイクロイックミラー８に入射され
る。ダイクロイックミラー８においてこの入射光は反射
されバリアフィルタ７及びレンズ６を介してカメラ５に
入射される。
介して円板９に入射され、前記ピンホールと同一のピン
ホールを通過してダイクロイックミラー８に入射され
る。ダイクロイックミラー８においてこの入射光は反射
されバリアフィルタ７及びレンズ６を介してカメラ５に
入射される。
【０００９】ここで、図２に示す従来例の動作を説明す
る。先ず、試料１１上の観察位置を探す時には、円板４
及び９を取り除き、ミラー３を挿入して落射照明用光源
２の出力光を試料１１に照射する。この時対物レンズ１
０を低倍率にして大きな視野で観察位置を探し、大まか
の見当を付けた後、対物レンズ１０を高倍率にして観察
位置を特定する。
る。先ず、試料１１上の観察位置を探す時には、円板４
及び９を取り除き、ミラー３を挿入して落射照明用光源
２の出力光を試料１１に照射する。この時対物レンズ１
０を低倍率にして大きな視野で観察位置を探し、大まか
の見当を付けた後、対物レンズ１０を高倍率にして観察
位置を特定する。
【００１０】次に、ミラー３を取り除き円板４及び９を
挿入し、共焦点系に切り換えて試料１１上の前記観察位
置での観察を行う。
挿入し、共焦点系に切り換えて試料１１上の前記観察位
置での観察を行う。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】しかし、図２に示す従
来例において、共焦点系では分解能は向上するがスライ
ス画像となるため全体像が分かりにくいため、一旦共焦
点系に切り換えて後に観察位置を見失った場合には、再
びミラー３を挿入し円板４及び９を取り除き落射照明に
し、さらに対物レンズ１０を低倍率に切り換えて観察位
置を特定し直さなければならない場合が多い。
来例において、共焦点系では分解能は向上するがスライ
ス画像となるため全体像が分かりにくいため、一旦共焦
点系に切り換えて後に観察位置を見失った場合には、再
びミラー３を挿入し円板４及び９を取り除き落射照明に
し、さらに対物レンズ１０を低倍率に切り換えて観察位
置を特定し直さなければならない場合が多い。
【００１２】また、共焦点系ではスライスによって光量
が低下するためレーザ１には強い励起光のものを用いて
おり、この結果、試料１１の蛍光退色が生じ易くなるた
め共焦点系と落射照明を何回も切り換えるのは好ましく
ない。
が低下するためレーザ１には強い励起光のものを用いて
おり、この結果、試料１１の蛍光退色が生じ易くなるた
め共焦点系と落射照明を何回も切り換えるのは好ましく
ない。
【００１３】さらに、対物レンズ１０は水浸若しくは油
浸の物が多いため、倍率切り換えの際に大きく位置がず
れたり、交換に時間がかかり面倒な作業であると言った
問題点がある。従って本発明の目的は、同一の対物レン
ズを用いて観察位置の特定が容易な共焦点顕微鏡を実現
することにある。
浸の物が多いため、倍率切り換えの際に大きく位置がず
れたり、交換に時間がかかり面倒な作業であると言った
問題点がある。従って本発明の目的は、同一の対物レン
ズを用いて観察位置の特定が容易な共焦点顕微鏡を実現
することにある。
【００１４】
【課題を解決するための手段】このような目的を達成す
るために、本発明では、走査型共焦点顕微鏡において、
複数の開孔を有する円板を用いて照明光を走査させる走
査手段と、試料の観察位置を特定するための落射照明手
段と、前記走査手段と前記落射照明手段との出力光を切
り換え、前記走査手段の出力光を前記試料に照射して生
じた前記試料からの反射光若しくは蛍光を前記走査手段
を介させると共に観察倍率を高倍率にして出力し、若し
くは、前記落射照明手段の出力光を前記試料に直接照射
して生じた前記試料からの反射光若しくは蛍光を直接出
力する切り換え手段と、この切り換え手段の出力光を観
察する観察手段とを備えたことを特徴とするものであ
る。
るために、本発明では、走査型共焦点顕微鏡において、
複数の開孔を有する円板を用いて照明光を走査させる走
査手段と、試料の観察位置を特定するための落射照明手
段と、前記走査手段と前記落射照明手段との出力光を切
り換え、前記走査手段の出力光を前記試料に照射して生
じた前記試料からの反射光若しくは蛍光を前記走査手段
を介させると共に観察倍率を高倍率にして出力し、若し
くは、前記落射照明手段の出力光を前記試料に直接照射
して生じた前記試料からの反射光若しくは蛍光を直接出
力する切り換え手段と、この切り換え手段の出力光を観
察する観察手段とを備えたことを特徴とするものであ
る。
【００１５】
【作用】共焦点系である走査手段と試料の観察位置を特
定する落射照明手段とを設け、切り換え手段を用いて走
査手段と落射照明手段とを切り換えると共に共焦点系の
時にはリレーレンズを透過させることにより、同一の対
物レンズを用いて観察位置の特定ができる。
定する落射照明手段とを設け、切り換え手段を用いて走
査手段と落射照明手段とを切り換えると共に共焦点系の
時にはリレーレンズを透過させることにより、同一の対
物レンズを用いて観察位置の特定ができる。
【００１６】
【実施例】以下本発明を図面を用いて詳細に説明する。
図１は本発明に係る共焦点顕微鏡の一実施例を示す構成
ブロック図である。ここで、１，２，４〜７及び９〜１
１は図２と同一符号を付してある。
図１は本発明に係る共焦点顕微鏡の一実施例を示す構成
ブロック図である。ここで、１，２，４〜７及び９〜１
１は図２と同一符号を付してある。
【００１７】図１において１２は励起フィルタ、１３及
び１６はダイクロイックミラー、１４及び１７はミラ
ー、１５はリレーレンズである。
び１６はダイクロイックミラー、１４及び１７はミラ
ー、１５はリレーレンズである。
【００１８】また、１，４，９及び１６は走査手段５０
を、２及び１２は落射照明手段５１を、１０，１３〜１
５及び１７は切り換え手段５２を、５〜７は観察手段５
３をそれぞれ構成している。
を、２及び１２は落射照明手段５１を、１０，１３〜１
５及び１７は切り換え手段５２を、５〜７は観察手段５
３をそれぞれ構成している。
【００１９】レーザ１の出力光は円板４に入射され、入
射光の内一のマイクロレンズを透過した光はダイクロイ
ックミラー１６を介して円板９に入射される。
射光の内一のマイクロレンズを透過した光はダイクロイ
ックミラー１６を介して円板９に入射される。
【００２０】また、円板９に入射された光の内一のピン
ホールを通過した光はミラー１７、ミラー１４及び対物
レンズ１０を介して試料１１に照射される。
ホールを通過した光はミラー１７、ミラー１４及び対物
レンズ１０を介して試料１１に照射される。
【００２１】試料１１からの反射光は対物レンズ１０、
ミラー１４及びミラー１７を介して円板９に入射され、
前記ピンホールと同一のピンホールを通過してダイクロ
イックミラー１６に入射される。ダイクロイックミラー
１６においてこの入射光は反射されリレーレンズ１５、
バリアフィルタ７及びレンズ６を介してカメラ５に入射
される。
ミラー１４及びミラー１７を介して円板９に入射され、
前記ピンホールと同一のピンホールを通過してダイクロ
イックミラー１６に入射される。ダイクロイックミラー
１６においてこの入射光は反射されリレーレンズ１５、
バリアフィルタ７及びレンズ６を介してカメラ５に入射
される。
【００２２】一方、落射照明用光源２の出力光は励起フ
ィルタ１２、ダイクロイックミラー１３及び対物レンズ
１０を介して試料１１に照射される。
ィルタ１２、ダイクロイックミラー１３及び対物レンズ
１０を介して試料１１に照射される。
【００２３】試料１１からの反射光は対物レンズ１０を
介してダイクロイックミラー１３に入射される。ダイク
ロイックミラー１３においてこの入射光は反射されバリ
アフィルタ７及びレンズ６を介してカメラ５に入射され
る。
介してダイクロイックミラー１３に入射される。ダイク
ロイックミラー１３においてこの入射光は反射されバリ
アフィルタ７及びレンズ６を介してカメラ５に入射され
る。
【００２４】ここで、図１に示す実施例の動作を説明す
る。切り換え手段５２はダイクロイックミラー１３及び
ミラー１４を図面垂直方向に移動させることにより、光
路へのダイクロイックミラー１３及びミラー１４の挿入
及び取り除きを行う。
る。切り換え手段５２はダイクロイックミラー１３及び
ミラー１４を図面垂直方向に移動させることにより、光
路へのダイクロイックミラー１３及びミラー１４の挿入
及び取り除きを行う。
【００２５】先ず、試料１１上の観察位置を探す時に
は、切り換え手段５２によりダイクロイックミラー１３
を光路に挿入し、ミラー１４を光路から取り除く。即
ち、落射照明用光源２の出力光は励起フィルタにより波
長が選択され、円板４及び９を介さずに試料１１に照射
され、試料１１からの蛍光も円板４及び９を介さずにカ
メラ５に戻って来るため対物レンズ１０により観察位置
を特定することができる。
は、切り換え手段５２によりダイクロイックミラー１３
を光路に挿入し、ミラー１４を光路から取り除く。即
ち、落射照明用光源２の出力光は励起フィルタにより波
長が選択され、円板４及び９を介さずに試料１１に照射
され、試料１１からの蛍光も円板４及び９を介さずにカ
メラ５に戻って来るため対物レンズ１０により観察位置
を特定することができる。
【００２６】次に、切り換え手段５２によりダイクロイ
ックミラー１３を光路から取り除き、ミラー１４を光路
に挿入することにより共焦点系に切り換える。この際、
共焦点系の光路には落射照明時よるも高倍率の観察倍率
になるリレーレンズ１５が付加されている。
ックミラー１３を光路から取り除き、ミラー１４を光路
に挿入することにより共焦点系に切り換える。この際、
共焦点系の光路には落射照明時よるも高倍率の観察倍率
になるリレーレンズ１５が付加されている。
【００２７】この結果、共焦点系である走査手段５０と
試料の観察位置を特定する落射照明手段５１とを設け、
切り換え手段５２を用いて走査手段５０と落射照明手段
５１とを切り換えると共に共焦点系の時にはリレーレン
ズ１５を透過させることにより、同一の対物レンズ１０
を用いて観察位置の特定が容易になる。
試料の観察位置を特定する落射照明手段５１とを設け、
切り換え手段５２を用いて走査手段５０と落射照明手段
５１とを切り換えると共に共焦点系の時にはリレーレン
ズ１５を透過させることにより、同一の対物レンズ１０
を用いて観察位置の特定が容易になる。
【００２８】即ち、落射照明の観察倍率を共焦点系の観
察倍率よりも下げることにより、分解能は低いが焦点深
度が深い落射照明と分解能は高いが焦点深度が浅い共焦
点との特徴を生かすことができ、対物レンズの交換によ
る位置ずれがなく、短時間で観察位置の特定が可能な
る。
察倍率よりも下げることにより、分解能は低いが焦点深
度が深い落射照明と分解能は高いが焦点深度が浅い共焦
点との特徴を生かすことができ、対物レンズの交換によ
る位置ずれがなく、短時間で観察位置の特定が可能な
る。
【００２９】なお、図１に示す実施例ではカメラ５を用
いているが、レンズ６を接眼レンズとして直接観察して
も良い。また、図１に示す実施例ではマイクロレンズを
有する円板４を用いているが、円板４は省略しても良
い。また、図１に示す実施例では蛍光により観察位置を
特定しているが、反射照明や透過照明でも良い。また、
図１に示す実施例ではピンホールを用いているが、ピン
ホールのみならず入射光が通過する開孔であれば形状等
に係わりなく用いることが可能である。
いているが、レンズ６を接眼レンズとして直接観察して
も良い。また、図１に示す実施例ではマイクロレンズを
有する円板４を用いているが、円板４は省略しても良
い。また、図１に示す実施例では蛍光により観察位置を
特定しているが、反射照明や透過照明でも良い。また、
図１に示す実施例ではピンホールを用いているが、ピン
ホールのみならず入射光が通過する開孔であれば形状等
に係わりなく用いることが可能である。
【００３０】
【発明の効果】以上説明したことから明らかなように、
本発明によれば次のような効果がある。共焦点系である
走査手段と試料の観察位置を特定する落射照明手段とを
設け、切り換え手段を用いて走査手段と落射照明手段と
を切り換えると共に共焦点系の時には高倍率のリレーレ
ンズを透過させることにより、同一の対物レンズを用い
て観察位置の特定が容易な共焦点顕微鏡が実現できる。
本発明によれば次のような効果がある。共焦点系である
走査手段と試料の観察位置を特定する落射照明手段とを
設け、切り換え手段を用いて走査手段と落射照明手段と
を切り換えると共に共焦点系の時には高倍率のリレーレ
ンズを透過させることにより、同一の対物レンズを用い
て観察位置の特定が容易な共焦点顕微鏡が実現できる。
【図１】本発明に係る共焦点顕微鏡の一実施例を示す構
成ブロック図である。
成ブロック図である。
【図２】従来の共焦点顕微鏡の一例を示す構成ブロック
図である。
図である。
１ レーザ ２ 落射照明用光源 ３，１４，１７ ミラー ４ マイクロレンズを有する円板 ５ カメラ ６ レンズ ７ バリアフィルタ ８，１３，１６ ダイクロイックミラー ９ ピンホールを有する円板 １０ 対物レンズ １１ 試料 １２ 励起フィルタ １５ リレーレンズ ５０ 走査手段 ５１ 落射照明手段 ５２ 切り換え手段 ５３ 観察手段
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G02B 19/00 - 21/00 G02B 21/04 - 21/36
Claims (1)
- 【請求項１】走査型共焦点顕微鏡において、 複数の開孔を有する円板を用いて照明光を走査させる走
査手段と、 試料の観察位置を特定するための落射照明手段と、 前記走査手段と前記落射照明手段との出力光を切り換
え、前記走査手段の出力光を前記試料に照射して生じた
前記試料からの反射光若しくは蛍光を前記走査手段を介
させると共に観察倍率を高倍率にして出力し、若しく
は、前記落射照明手段の出力光を前記試料に直接照射し
て生じた前記試料からの反射光若しくは蛍光を直接出力
する切り換え手段と、 この切り換え手段の出力光を観察する観察手段と を備えたことを特徴とする共焦点顕微鏡。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33466293A JP3262147B2 (ja) | 1993-12-28 | 1993-12-28 | 共焦点顕微鏡 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33466293A JP3262147B2 (ja) | 1993-12-28 | 1993-12-28 | 共焦点顕微鏡 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07199074A JPH07199074A (ja) | 1995-08-04 |
| JP3262147B2 true JP3262147B2 (ja) | 2002-03-04 |
Family
ID=18279865
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33466293A Expired - Lifetime JP3262147B2 (ja) | 1993-12-28 | 1993-12-28 | 共焦点顕微鏡 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3262147B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3930929B2 (ja) * | 1996-11-28 | 2007-06-13 | オリンパス株式会社 | 共焦点顕微鏡 |
| JP4802950B2 (ja) * | 2006-09-08 | 2011-10-26 | 横河電機株式会社 | 創薬スクリーニング装置 |
| JP2008185432A (ja) * | 2007-01-30 | 2008-08-14 | Yokogawa Electric Corp | 創薬スクリーニング装置 |
| US8275226B2 (en) | 2008-12-09 | 2012-09-25 | Spectral Applied Research Ltd. | Multi-mode fiber optically coupling a radiation source module to a multi-focal confocal microscope |
| WO2011069261A1 (en) | 2009-12-08 | 2011-06-16 | Spectral Applied Research Inc. | Imaging distal end of multimode fiber |
-
1993
- 1993-12-28 JP JP33466293A patent/JP3262147B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07199074A (ja) | 1995-08-04 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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