JP3820249B2 - ヒトペルオキソーム増殖因子活性化受容体α（ＰＰＡＲ）のアゴニストである置換フェニルプロピオン酸誘導体 - Google Patents

Description

技術分野
本発明は、特定の新規な（２Ｓ）−３−（４−｛２−［アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパノイック プロピオン酸誘導体、当該化合物の製造方法、インスリン抵抗性およびその他の代謝症候群の兆候と関連するか否かを問わない脂質障害（異常脂質血症：ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａｓ）を含む臨床的状態の処置におけるそれらの利用、それらの治療上の使用方法、およびそれらを含む医薬組成物に関する。

背景技術
２型糖尿病を含む代謝症候群は、ＶＬＤＬ（超低密度リポタンパク質）および高密度ＬＤＬ小粒子濃度の上昇、ＨＤＬ（高密度リポプロテイン）濃度の減少ならびに線維素溶解の減少により一般的に特徴づけられる異常なリポタンパク質レベルとして観察される、インスリン過剰血症を伴うインスリン抵抗性、場合によっては２型糖尿病、動脈性高血圧、中心性（内臓）肥満、異常脂質血症、を含む一群の兆候を意味する。

最近の疫学的研究により、インスリン抵抗性を伴う個人は、心臓血管関連の罹患および死亡に関して、とりわけ心筋梗塞及び脳卒中に罹患する著しく高いリスクを伴うことが実証されている。２型糖尿病においては、アテローム性動脈硬化に関連する状態が、すべての死亡者の８０％を上る場合において生じている。

臨床医学において、代謝症候群を伴う患者においてインスリン感受性を増加させる必要性、およびその結果アテローム性動脈硬化の進行の促進を引き起こすと考えられる異常脂質血症を正常化することの必要性は認識されている。しかし、現在のところ、これは、明確な薬物療法的基準を有する一般に受け入れられた診断であるとはいえない。

以下の式Ｃの化合物のＳ−エナンチオマー：

２−エトキシ−３−［４−（２−｛４−メタンスルホニルオキシフェニル｝エトキシ）フェニル］プロパン酸は、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９９／６２８７２において開示されている。この化合物は、ペルオキソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ、ＰＰＡＲ類の総説としては、Ｔ．Ｍ．Ｗｉｌｌｓｏｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００年、第４３巻，第５２７頁を参照のこと）のモジュレーターであり、ＰＰＡＲα／ＰＰＡＲγアゴニスト活性を併せ持つことが報告されている（Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、２００１年、第９巻，第６９９頁、Ｐ．Ｃｒｏｎｅｔら）。この化合物は、インスリン抵抗性を伴う状態の処置において有効である。
驚くべきことに、非常に有力なＰＰＡＲαのモジュレーターである一連の化合物が今回発見された。

発明の開示
本発明は、式Ｉの化合物のＳ−エナンチオマー：

［式中、Ｒ^１は２，４−ジフルオロフェニルまたはシクロヘキシルである］
ならびにその医薬的に許容な塩、溶媒和物、結晶形およびプロドラッグを提供する。
この明細書で用いられる用語「プロドラッグ」には、哺乳類、特にヒトにおいて、カルボン酸基またはその塩またはそのコンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）に変換されるカルボン酸基の誘導体が含まれる。理論には拘束されないが、プロドラッグに伴う活性のほとんどは、プロドラッグが変換した式Ｉの化合物の活性から生じると考えられる。プロドラッグは、当該技術分野の当業者の能力の範囲内で、通常の方法論により十分に合成することができる。カルボキシの種々のプロドラッグは、当該技術分野において知られている。当該プロドラッグ誘導体の例としては：
ａ）Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集、（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５年）および、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第４２巻、第３０９−３９６頁、Ｋ．Ｗｉｄｄｅｒら編集（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８５年）；
ｂ）Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−ＬａｒｓｅｎおよびＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集、第５章”Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、第１１３−１９１頁（１９９１年）；
ｃ）Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ、第８巻、第１−３８頁（１９９２年）；
ｄ）Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第７７巻、第２８５頁（１９８８年）；および
ｅ）Ｎ．Ｋａｋｅｙａら、Ｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ、第３２巻、第６９２頁（１９８４年）
を参照されたい。

上記のａ〜ｅの文献は、参照することにより本明細書に援用される。
インビボで開裂可能なエステルは、もとの化合物のプロドラッグの１タイプである。カルボキシ基を含む式（Ｉ）の化合物のインビボで加水分解可能な（または開裂可能な）エステルは、例えばヒトまたは動物の体内で加水分解されもとの酸を生み出す医薬的に許容なエステルである。カルボキシについての医薬的に許容な好適なエステルには、例えばメトキシメチルなどのＣ_１−６アルコキシメチルエステル；例えばピバロイルオキシメチルなどのＣ_１−６アルカノイルオキシメチルエステル；フタリジルエステル；例えば１−シクロヘキシルカルボニルオキシエチルなどのＣ_３−８シクロアルコキシカルボニルオキシＣ_１−６アルキルエステル；例えば５−メチル−１，３−ジオキソレン−２−オンイルメチルなどの１，３−ジオキソレン−２−オンイルメチルエステル；および例えば１−メトキシカルボニルオキシエチルなどのＣ_１−６アルコキシカルボニルオキシエチルエステルが含まれ；この発明の化合物のいかなるカルボキシ基においても形成されうる。

式Ｉの化合物は医薬としての活性を有する。特に、式Ｉの化合物は非常に有力なＰＰＡＲαのアゴニストである。さらに、式Ｉの化合物はＰＰＡＲγのアゴニストでもある。本明細書で用いられる用語「アゴニスト」には、部分的アゴニストも含まれる。

本発明の具体的な化合物は：
（２Ｓ）−３−（４−｛２−［（シクロヘキシルメチル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパン酸；および
（２Ｓ）−３−（４−｛２−［（２，４−ジフルオロベンジル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパン酸；
および、その医薬的に許容な塩、溶媒和物および結晶形である。

本明細書において、「医薬的に許容な塩」という表現は、限定はしないが、例えばアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、塩基性アミノ酸との塩、および有機アミンとの塩などの塩基塩を定義することを意図している。

本発明の特定の化合物は、非溶媒和型と同様に、例えば水和型などの溶媒和型で存在しうることも理解されるであろう。本発明は、そのような溶媒和型のすべてを包含すると了解される。本発明の特定の化合物は互変異性体として存在しうる。本発明はそのような互変異性体のすべてを包含するものと了解される。

調製方法
本発明の化合物は、以下に概説するとおりに調製されうる。しかし、本発明はこれらの方法によっては限定されず、化合物は、先行文献において構造的に関連する化合物について記載されたとおりにも調製されうる。反応は、標準的方法にしたがってまたは実施例の項に記載されたとおりに実施されうる。

式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物のＳ−エナンチオマー：

［式中、Ｒ^１は既に定義されたとおりであり、Ｒ^２はＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓの標準的なテキスト「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版（１９９１）に記載されたカルボキシリックヒドロキシ基のための保護基を示す］
を、脱保護剤と反応させることにより調製されうる。当該保護基は、例えばＷａｎｇ樹脂または２−クロロトリチルクロリド樹脂などの樹脂であってもよい。保護基は当該技術分野の当業者に周知の技術に従って除去されうる。当該保護基の１つは、Ｒ^２がＣ_１−６アルコキシ基またはアリールアルコキシ基（例えばベンジル）を表す場合の、ＣＯＲ^２がエステルを表す場合である。当該エステルは、例えば加水分解試薬（例えば、ＴＨＦおよび水の混合液中の水酸化リチウムなど）などの脱保護試薬と、０〜１００℃の範囲の温度で反応し、式Ｉの化合物を与えうる。

式ＩＩの化合物は、式ＩＩＩの化合物のＳ−エナンチオマー：

［式中、Ｒ^２は既に定義したとおりである］
を式ＩＶの化合物：

［式中、Ｒ^１は既に定義したとおりである］
と、例えばジクロロメタンなどの不活性溶媒中で、例えばカルボジイミド（例えば、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドなど）の存在下、場合によっては例えば塩基触媒（例えば、４−ジメチルアミノピリジンなど）などの触媒の存在下、−２５℃〜１５０℃の範囲の温度で反応させることにより調製されうる。

式ＩＩＩおよびＩＶの化合物は、実施例に記載された方法または当該技術分野の当業者に知られた類似の方法により調製されうる。
式ＩＩＩおよびＩＶの化合物は、式Ｉの化合物の調製において有用な中間体であり、かつ新規であると考えられる。式ＩＩおよびＩＩＩの化合物は、本発明のさらなる側面として本出願においてクレームされる。式ＩＩおよびＩＩＩの化合物のＳ−エナンチオマーが好ましい。

本発明の化合物は、慣用の技術を使用してそれらの反応混合物より単離されうる。
代替のおよび場合によってはより好適な方法で本発明の化合物を得るために、これまでに述べた個々の製造工程は異なる順番で行われうること、および／または個々の反応は全体の経路においての異なる段階で行われうること（すなわち、ここで述べた特定の反応に関連するものへの化学変換は、異なる中間体において行われうること）を、当該技術分野の当業者は理解するであろう。
「不活性な溶媒」という表現は、出発物質、試薬、中間体またはプロドラッグと、目的物の収量に不利に影響しない程度において、反応しない溶媒を意味する。

製剤
本発明の化合物は、医薬的に許容な剤形において、遊離の酸または医薬的に許容な有機または無機塩基付加塩のいずれかとしての活性成分を含む製剤の形で、経口、非経口、静脈内、筋肉内、皮下またはその他の注射方法、口腔内、直腸内、膣内、経皮および／または鼻腔内および／または吸入により、通常投与されるであろう。障害および処置される患者および投与経路に依存して、当該組成物は種々の薬量で投与されうる。

ヒトの治療的処置において、本発明の化合物の好適な１日の薬量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。
経口製剤としては、特に、０．５ｍｇ〜５００ｍｇの範囲、例えば１ｍｇ、３ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇおよび２５０ｍｇの薬量の活性化合物を与える、当該技術分野の当業者に知られた方法により製剤化されうる錠剤またはカプセルが好ましい。

したがって、本発明のさらなる側面によれば、医薬的に許容なアジュバント、希釈剤および／または担体と混合された本発明の任意の化合物、またはその医薬的に許容な誘導体を含む医薬製剤が提供される。

薬理学的特質
式（Ｉ）の本化合物は、先天的なまたは誘発的なインスリンに対する感受性の減少（インスリン抵抗性）および関連の代謝性障害（代謝症候群としても知られている）に関連する臨床上の状態の予防および／または治療に有用である。これらの臨床上の状態には、限定はされないが、一般的肥満、腹部肥満、動脈性高血圧、高インスリン血症、高血糖症、２型糖尿病およびインスリン抵抗性に伴って特徴的に現れる異常脂質血症が含まれるであろう。粥腫発生のリポタンパク質のプロフィールとして知られているこの異常脂質血症は、非エステル化脂肪酸の穏やかな上昇、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）トリグリセリド−リッチ粒子の上昇、高レベルのＡｐｏＢ、小さく高密度の低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子、フェノタイプＢの存在下、低レベルのａｐｏＡＩ粒子および高レベルのＡｐｏＢに伴う低レベルの高密度リポタンパク質により特徴づけられる。

本発明の化合物は、他の代謝症候群の兆候を伴うまたは伴わない、複合的もしくは混合的高脂血症または種々の程度の高トリグリセリド血症および食後の異常脂質血症（ｐｏｓｔｐｒａｎｄｉａｌ ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ）の患者の処置に有用であると考えられる。

本化合物による処置は、それらの抗異常脂質血症的および抗炎症的特質により、アテローム性動脈硬化症に関連する心臓血管の疾病率および死亡率を低下させると考えられる。心臓血管疾患状態には、心筋梗塞を生じさせる種々の内臓における動脈硬化性疾患（ｍａｃｒｏａｎｇｉｏｐａｔｈｉｅｓ）、鬱血性心不全、脳血管疾患、および下肢の末梢動脈不全が含まれる。インスリン感受性を増加させる効果により、式Ｉの化合物はまた、代謝症候群および妊娠の糖尿病からの２型糖尿病への進展を妨げるかまたは遅らせるとも考えられる。従って、腎臓疾患を引き起こす微小血管障害、網膜の障害、および下肢の末梢血管疾患などの、糖尿病の慢性高血糖症に関連する長期の合併症の進展は、遅延されると考えられる。さらに、当該化合物は、インスリン抵抗性に関連するか否かによらず、多嚢胞卵巣症候群、肥満、癌、および軽度の認識障害、アルツハイマー病、パーキンソン病および多発性硬化症などの神経変性障害を含む炎症疾患状態のような、心臓血管系以外の種々の状態の処置において有用であり得る。

本発明の化合物は、２型糖尿病を患っている患者におけるグルコースレベルの制御において有用であると考えられる。
本発明は、（既に定義したとおりの）脂質異常血症、インスリン抵抗性症候群および／または代謝症候群を治療または予防するための、当該治療または予防を必要とする哺乳類（特にヒト）に対しての式Ｉの化合物の投与を含む方法を提供する。

本発明は、２型糖尿病を治療または予防するための、当該治療または予防を必要とする哺乳類（特にヒト）に対しての治療有効量の式Ｉの化合物の投与を含む方法を提供する。
さらなる側面において、本発明は、医薬としての式Ｉの化合物の使用を提供する。
さらなる側面において、本発明は、インスリン抵抗性および／または代謝異常の処置のための医薬の製造における式Ｉの化合物の使用を提供する。

組み合わせ治療
本発明の化合物は、アテローム性動脈硬化症の進展または進行に関連する疾患、例えば高血圧、高脂血症、異常脂質血症、糖尿病および肥満などの治療において有用であるその他の治療剤と組み合わせられうる。本発明の化合物は、ＬＤＬ：ＨＤＬの比率を低下させるその他の治療剤、またはＬＤＬ−コレステロールの血中濃度の減少を引き起こす薬剤と組み合わせられうる。糖尿病の患者において、本発明の化合物は、微小血管障害と関連する合併症を治療するための治療剤ともまた組み合わせられうる。

本発明の化合物は、代謝症候群または２型糖尿病およびそれらに関連する合併症の処置のための治療と並行して使用されうる。そのような治療には、例えばメトホルミン、フェンホルミンおよびブホルミンなどのビグアニド剤、インスリン（合成インスリン類縁体、アミリン）および抗高血糖症経口薬（これらは食後血糖調節薬（ｐｒａｎｄｉａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ）およびα−グルコシダーゼ阻害薬に分けられる）が含まれる。α−グルコシダーゼ阻害薬の例としては、アカルボースまたはボグリボースまたはミグリトールが挙げられる。食後血糖調節薬の例としては、レパグリニドまたはナテグリニドが挙げられる。

本発明の別の側面において、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該塩の溶媒和物またはそれらのプロドラッグは、別のＰＰＡＲ調節剤と共に投与されうる。ＰＰＡＲ調節剤には、特に限定はされないが、ＰＰＡＲαおよび／またはγアゴニスト、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該塩の溶媒和物またはそれらのプロドラッグが含まれる。好適なＰＰＡＲαおよび／またはγアゴニスト、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該塩の溶媒和物またはそれらのプロドラッグは、当該技術分野において周知である。これらには、ＷＯ０１／１２１８７、ＷＯ０１／１２６１２、ＷＯ９９／６２８７０、ＷＯ９９／６２８７２、ＷＯ９９／６２８７１、ＷＯ９８／５７９４１、ＷＯ０１／４０１７０、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９９６年，第３９巻、第６６５頁、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐａｔｅｎｔｓ、第１０巻（５）、第６２３−６３４頁（特に第６３４頁に列記された特許出願に記載された化合物）およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０００年、第４３巻、第５２７頁に記載された化合物が含まれ、これらの文献は参照することにより本明細書に援用される。特に、ＰＰＡＲαおよび／またはγアゴニストは、ＮＮ６２２／ラガグリタザール（Ｒａｇａｇｌｉｔａｚａｒ）、ＢＭＳ２９８５８５、ＷＹ−１４６４３、クロフィブレート、フェノフィブレート、ベザフィブレート、ゲムフィブロジルおよびシプロフィブレート；ＧＷ９５７８、シグリタゾン、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、エグリタゾン（ｅｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、プログリタゾン（ｐｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ＢＲＬ−４９６３４、ＫＲＰ−２９７、ＪＴＴ−５０１、ＳＢ２１３０６８、ＧＷ１９２９、ＧＷ７８４５、ＧＷ０２０７、Ｌ−７９６４４９、Ｌ−１６５０４１およびＧＷ２４３３を意味する。特に、ＰＰＡＲαおよび／またはγアゴニストは、（Ｓ）−２−エトキシ−３−［４−（２−｛４−メタンスルホニルオキシフェニル｝エトキシ）−フェニル］プロパン酸、およびその医薬的に許容な塩を意味する。

さらに、本発明の組み合わせは、例えばグリメピリド、グリベンクラミド（グリブリド）、グリクラジド、グリピジド、グリキドン、クロロプロパミド、トルブタミド、アセトヘキサミド、グリコピラミド（ｇｌｙｃｏｐｙｒａｍｉｄｅ）、カルブタミド、グリボヌリド（ｇｌｉｂｏｎｕｒｉｄｅ）、グリソキセピド（ｇｌｉｓｏｘｅｐｉｄ）、グリブチアゾール（ｇｌｙｂｕｔｈｉａｚｏｌｅ）、グリブゾール、グリヘキザミド（ｇｌｙｈｅｘａｍｉｄｅ）、グリミジン、グリピナミド（ｇｌｙｐｉｎａｍｉｄｅ）、フェンブタミド（ｐｈｅｎｂｕｔａｍｉｄｅ）、トルシラミド（ｔｏｌｃｙｌａｍｉｄｅ）およびトラザミド（ｔｏｌａｚａｍｉｄｅ）などのスルホニルウレアと併用して使用されうる。好ましくは、スルホニルウレアは、グリメピリドまたはグリベンクラミド（グリブリド）である。より好ましくは、スルホニルウレアはグリメピリドである。従って、本発明は、このパラグラフに記載された１、２またはそれ以上の既存の治療薬と併用しての、本発明の化合物の投与を含む。２型糖尿病およびその関連する合併症の処置のための他の既存の治療薬の薬量は、当該技術分野において既知であり、例えばＦＤＡなどの規制機関により使用のために承認されているものであろう。また、当該薬量は、ＦＤＡにより発行されたオレンジブック（Ｏｒａｎｇｅ Ｂｏｏｋ）に記載されているであろう。あるいは、より少量の薬量が、組み合わせに由来する利益の結果として使用されうる。

本発明は、コレステロール低下剤と組み合わせた本発明の化合物もまた含む。本出願においてコレステロール低下剤は、特に限定はされないが、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ（３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリルコエンザイムＡレダクターゼ）の阻害剤を意味する。好適には、ＨＭＧ−ＣｏＡ阻害剤は、アトルバスタチン、ベルバスタチン（ｂｅｒｖａｓｔａｔｉｎ）、セリバスタチン、ダルバスタチン（ｄａｌｖａｓｔａｔｉｎ）、フルバスタチン、イタバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ニコスタチン（ｎｉｃｏｓｔａｔｉｎ）、ニバスタチン（ｎｉｖａｓｔａｔｉｎ）、プラバスタチンおよびシンバスタチンから成る群から選択されるスタチン、またはその医薬的に許容な塩（特にナトリウムまたはカルシウム）、またはその溶媒和物、または当該塩の溶媒和物である。特定のスタチンは、アトルバスタチン、またはその薬学的に許容な塩、その溶媒和物、当該塩の溶媒和物またはそのプロドラッグである。より特定のスタチンは、アトルバスタチンカルシウム塩である。しかしながら、特に好ましいスタチンは、化学名（Ｅ）−７−［４−（４−フルオロフェニル）−６−イソプロピル−２−［メチル（メチルスルホニル）−アミノ］−ピリミジン−５−イル］ （３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシへプト−６−エン酸［（Ｅ）−７−［４−（４−フルオロフェニル）−６−イソプロピル−２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（メチルスルホニル）−アミノ］ピリミジン−５−ｙｌ］ （３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシへプト−６−エン酸としても知られている］の化合物、またはその医薬的に許容な塩、またはその溶媒和物または当該塩の溶媒和物である。化合物（Ｅ）−７−［４−（４−フルオロフェニル）−６−イソプロピル−２−［メチル−（メチルスルホニル）−アミノ］−ピリミジン−５−イル］ （３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシへプト−６−エン酸ならびにそのカルシウムおよびナトリウム塩は、ヨーロッパ特許出願公報ＥＰ−Ａ−０５２１４７１、およびＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、（１９９７年）、第５巻（２）、第４３７−４４４頁に開示されている。この後者のスタチンは、一般名ロスバスタチンとして現在知られている。

本出願において、用語「コレステロール低下剤」はまた、活性または非活性によらず、例えばエステル、プロドラッグおよび代謝物などの、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の修飾物も含む。
本発明にはまた、回腸胆汁酸輸送系の阻害剤（ＩＢＡＴ阻害剤）と組み合わせた本発明の化合物も含まれる。

ＩＢＡＴ阻害活性を有する好適な化合物は報告されており、例えば、ＷＯ９３／１６０５５、ＷＯ９４／１８１８３、ＷＯ９４／１８１８４、ＷＯ９６／０５１８８、ＷＯ９６／０８４８４、ＷＯ９６／１６０５１、ＷＯ９７／３３８８２、ＷＯ９８／０７４４９、ＷＯ９８／０３８１８、ＷＯ９８／３８１８２、ＷＯ９９／３２４７８、ＷＯ９９／３５１３５、ＷＯ９８／４０３７５、ＷＯ９９／３５１５３、ＷＯ９９／６４４０９、ＷＯ９９／６４４１０、ＷＯ００／０１６８７、ＷＯ００／４７５６８、ＷＯ００／６１５６８、ＷＯ００／６２８１０、ＷＯ０１／６８９０６、ＤＥ１９８２５８０４、ＷＯ００／３８７２５、ＷＯ００／３８７２６、ＷＯ００／３８７２７、ＷＯ００／３８７２８、ＷＯ００／３８７２９、ＷＯ０１／６８９０６、ＷＯ０１／６６５３３、ＷＯ０２／３２４２８、ＷＯ０２／５００５１、ＥＰ８６４５８２、ＥＰ４８９４２３、ＥＰ５４９９６７、ＥＰ５７３８４８、ＥＰ６２４５９３、ＥＰ６２４５９４、ＥＰ６２４５９５およびＥＰ６２４５９６に記載された化合物を参照されたい。これらの特許出願の内容は参照することにより本発明の援用される。

本発明において使用するために好適なＩＢＡＴ阻害剤の具体的な種類はベンゾチエピン類であり、ＷＯ００／０１６８７、ＷＯ９６／０８４８４およびＷＯ９７／３３８８２の請求項、特に請求項１に記載された化合物は、参照することにより本明細書に援用される。ＩＢＡＴ阻害剤のその他の好適な種類は、１，２−ベンゾチアゼピン類、１，４−ベンゾチアゼピン類および１，５−ベンゾチアゼピン類である。さらにＩＢＡＴ阻害剤の好適な種類は、１，２，５−ベンゾチアジアゼピン類である。

ＩＢＡＴ阻害活性を有する１つの好適な具体的化合物は、（３Ｒ，５Ｒ）−３−ブチル−３−エチル−１，１−ジオキシド−５−フェニル−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−ベンゾチアゼピン−８−イル β−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（ＥＰ８６４５８２）である。他の好適なＩＢＡＴ阻害剤には：
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−１’−フェニル−１’−［Ｎ’−（カルボキシメチル）カルバモイル］メチル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（カルボキシメチル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−１’−フェニル−１’−［Ｎ’−（２−スルホエチル）カルバモイル］メチル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３−ブチル−３−エチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−１’−フェニル−１’−［Ｎ’−（２−スルホエチル）カルバモイル］メチル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（２−スルホエチル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３−ブチル−３−エチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（２−スルホエチル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３−ブチル−３−エチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（２−カルボキシエチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（２−カルボキシエチル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３−ブチル−３−エチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（５−カルボキシペンチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（２−カルボキシエチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛α−［Ｎ’−（２−スルホエチル）カルバモイル］−２−フルオロベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３−ブチル−３−エチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（Ｒ）−（２−ヒドロキシ−１−カルボキシエチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（Ｒ）−（２−ヒドロキシ−１−カルボキシエチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−｛Ｎ−［（Ｒ）−α−（Ｎ’−｛（Ｒ）−１−［Ｎ”−（Ｒ）−（２−ヒドロキシ−１−カルボキシエチル）カルバモイル］−２−ヒドロキシエチル｝カルバモイル）ベンジル］カルバモイルメトキシ｝−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３−ブチル−３−エチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛α−［Ｎ’−（カルボキシメチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３−ブチル−３−エチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛α−［Ｎ’−（（エトキシ）（メチル）ホスホリル−メチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３−ブチル−３−エチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−｛Ｎ−［（Ｒ）−α−（Ｎ’−｛２−［（ヒドロキシ）（メチル）ホスホリル］エチル｝カルバモイル）ベンジル］カルバモイルメトキシ｝−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（２−メチルチオ−１−カルボキシエチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−｛Ｎ−［（Ｒ）−α−（Ｎ’−｛２−［（メチル）（エチル）ホスホリル］エチル｝カルバモイル）−４−ヒドロキシベンジル］カルバモイルメトキシ｝−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−｛Ｎ−［（Ｒ）−α−（Ｎ’−｛２−［（メチル）（ヒドロキシ）ホスホリル］エチル｝カルバモイル）−４−ヒドロキシベンジル］カルバモイルメトキシ｝−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［（Ｒ）−Ｎ’−（２−メチルスルフィニル−１−カルボキシエチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メトキシ−８−［Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ’−（２−スルホエチル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，５−ベンゾチアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｒ）−１−カルボキシ−２−メチルチオ−エチル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，ｌ−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−（Ｒ）−ヒドロキシプロピル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−メチルプロピル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｓ）−１−カルボキシブチル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｓ）−１−カルボキシプロピル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｓ）−１−カルボキシエチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−（Ｒ）−ヒドロキシプロピル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（２−スルホエチル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｓ）−１−カルボキシエチル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｒ）−１−カルボキシ−２−メチルチオエチル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−｛（Ｓ）−１−［Ｎ−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−カルボキシエチル）カルバモイル］プロピル｝カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，ｌ−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−メチルプロピル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（（Ｓ）−１−カルボキシプロピル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−［Ｎ−（（Ｒ／Ｓ）−α−｛Ｎ−［１−（Ｒ）−２−（Ｓ）−１−ヒドロキシ−１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）プロプ−２−イル］カルバモイル｝−４−ヒドロキシベンジル）カルバモイルメトキシ］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（２−（Ｓ）−３−（Ｒ）−４−（Ｒ）−５−（Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）カルバモイル］−４−ヒドロキシベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；および
１，１−ジオキソ−３，３−ジブチル−５−フェニル−７−メチルチオ−８−（Ｎ−｛（Ｒ）−α−［Ｎ−（２−（Ｓ）−３−（Ｒ）−４−（Ｒ）−５−（Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）カルバモイル］ベンジル｝カルバモイルメトキシ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，５−ベンゾチアジアゼピン；
またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該塩の溶媒和物またはそれらのプロドラッグである。

本発明のさらなる側面によれば、場合によっては医薬的に許容な希釈剤または担体と一緒に、有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該塩の溶媒和物またはそれらのプロドラッグと：
例えば、参照することにより本明細書に援用されるＷＯ００／３８７２５、第７頁、第２２行〜第１０頁、第１７行において参照または記載されているものなどの、ＣＥＴＰ（コレステリルエステル転送タンパク質）阻害剤；
例えば、ＳＣＨ５８２３５および参照することにより本明細書に援用される米国特許５，７６７，１１５に記載されているものなどのアゼチジノン類などの、コレステロール吸収アンタゴニスト；
例えば、参照することにより本明細書に援用されるＳｃｉｅｎｃｅ、第２８２巻、第７５１−５４頁、１９９８年に記載されたものなどの、ＭＴＰ（ミクロソーム転送タンパク質）阻害剤；
例えば、ニコチン酸（ナイアシン）、アシピモックスおよびニセリトールなどの徐放性および組み合わせ製剤を含む、ニコチン酸誘導体；
例えばスタノール類などのフィトステロール化合物；
プロブコール；
例えば、オリスタット（ＥＰ１２９，７４８）およびシブトラミン（ＧＢ２，１８４，１２２およびＵＳ４，９２９，６２９）などの、抗肥満化合物；
例えば、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、アドレナリンブロッカー、α−アドレナリンブロッカー、β−アドレナリンブロッカー、混合α／β−アドレナリンブロッカー、アドレナリン興奮薬、カルシウムチャンネルブロッカー、ＡＴ−１ブロッカー、塩分排泄剤、利尿剤または血管拡張剤などの抗高血圧化合物；
例えば、ＷＯ０１／７０７００およびＥＰ６５６３５に記載されているような、ＣＢ１アンタゴニストまたはインバースアゴニスト；
メラニン濃縮ホルモン（ＭＣＨ）アンタゴニスト；
ＰＤＫ阻害剤；または
例えば、ＬＸＲ、ＦＸＲ、ＲＸＲおよびＲＯＲαなどの、核内受容体のモジュレーター；
から選択される１以上の薬剤、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該塩の溶媒和物もしくはそれらのプロドラッグを、場合によっては医薬的に許容な希釈剤または担体と一緒に、当該治療的処置を必要とするヒトなどの温血動物に対して同時に、連続的にまたは別々に投与することを伴う、組み合わせ処置が提供される。

式Ｉの化合物と組み合わせて使用されうる、活性代謝物も含む具体的なＡＣＥ阻害剤またはそれらの医薬的に許容な塩、それらの溶媒和物、当該塩の溶媒和物またはそれらのプロドラッグには、特に限定はされないが、以下の化合物が含まれる：
アラセプリル、アラトリオプリル（ａｌａｔｒｉｏｐｒｉｌ）、アルチオプリル カルシウム（ａｌｔｉｏｐｒｉｌ ｃａｌｃｉｕｍ）、アンコベニン（ａｎｃｏｖｅｎｉｎ）、ベナゼプリル、ベナゼプリル塩酸塩、ベナゼプリラト（ｂｅｎａｚｅｐｒｉｌａｔ）、ベンゾイルカプトプリル（ｂｅｎｚｏｙｌｃａｐｔｏｐｒｉｌ）、カプトプリル、カプトプリル−システイン、カプトプリル−グルタチオン、セラナプリル（ｃｅｒａｎａｐｒｉｌ）、セラノプリル（ｃｅｒａｎｏｐｒｉｌ）、セロナプリル、シラザプリル、シラザプリラト（ｃｉｌａｚａｐｒｉｌａｔ）、デラプリル、デラプリル−二酸（ｄｅｌａｐｒｉｌ−ｄｉａｃｉｄ）、エナラプリル、エナラプリラト、エナプリル、エピカプトプリル（ｅｐｉｃａｐｔｏｐｒｉｌ）、ホロキシミチン（ｆｏｒオキシｍｉｔｈｉｎｅ）、ホスフェノプリル（ｆｏｓｆｅｎｏｐｒｉｌ）、ホセノプリル（ｆｏｓｅｎｏｐｒｉｌ）、ホセノプリル ナトリウム、ホシノプリル（ｆｏｓｉｎｏｐｒｉｌ）、ホシノプリル ナトリウム、ホシノプリラト（ｆｏｓｉｎｏｐｒｉｌａｔ）、ホシノプリリック酸（ｆｏｓｉｎｏｐｒｉｌｉｃ ａｃｉｄ）、グリコプリル（ｇｌｙｃｏｐｒｉｌ）、へモルフィン−４（ｈｅｍｏｒｐｈｉｎ−４）、イドラプリル（ｉｄｒａｐｒｉｌ）、イミダプリル、インドラプリル（ｉｎｄｏｌａｐｒｉｌ）、インドラプリラト（ｉｎｄｏｌａｐｒｉｌａｔ）、リベンザプリル（ｌｉｂｅｎｚａｐｒｉｌ）、リシノプリル、リシウミンＡ（ｌｙｃｉｕｍｉｎ Ａ）、リシウミンＢ（ｌｙｃｉｕｍｉｎ Ｂ）、ミキサンプリル（ｍｉｘａｎｐｒｉｌ）、モエキシプリル、モエキシプリラト（ｍｏｅｘｉｐｒｉｌａｔ）、モベルチプリル、ムラセインＡ（ｍｕｒａｃｅｉｎ Ａ）、ムラセインＢ（ｍｕｒａｃｅｉｎ Ｂ）、ムラセインＣ（ｍｕｒａｃｅｉｎ Ｃ）、ペントプリル（ｐｅｎｔｏｐｒｉｌ）、ペリンドプリル、ペリンドプリラト（ｐｅｒｉｎｄｏｐｒｉｌａｔ）、ピバロプリル（ｐｉｖａｌｏｐｒｉｌ）、ピボプリル（ｐｉｖｏｐｒｉｌ）、キナプリル、キナプリル塩酸塩、キナプリラト、ラミプリル、ラミプリラト（ｒａｍｉｐｒｉｌａｔ）、スピラプリル（ｓｐｉｒａｐｒｉｌ）、スピラプリル塩酸塩、スピラプリラト（ｓｐｉｒａｐｒｉｌａｔ）、スピロプリル（ｓｐｉｒｏｐｒｉｌ）、スピロプリル塩酸塩、テモカプリル、テモカプリル塩酸塩、テプロチド、トランドラプリル、トランドラプリラト（ｔｒａｎｄｏｌａｐｒｉｌａｔ）、ウチバプリル（ｕｔｉｂａｐｒｉｌ）、ザビシプリル（ｚａｂｉｃｉｐｒｉｌ）、ザビシプリラト（ｚａｂｉｃｉｐｒｉｌａｔ）、ゾフェノプリルおよびゾフェノプリラト。本発明において使用するために好ましいＡＣＥ阻害剤は、ラミプリル、ラミプリラト、リシノプリル、エナラプリルおよびエナラプリラトである。本発明において使用するためにより好ましいＡＣＥ阻害剤は、ラミプリルおよびラミプリラトである。

式Ｉの化合物と組み合わせて使用するために好ましいアンジオテンシンＩＩアンタゴニスト、その医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該塩の溶媒和物またはそれらのプロドラッグには、限定はされないが、化合物：カンデサルタン、カンデサルタンシレキセチル、ロサルタン、バルサルタン、イルベサルタン、タソサルタン、テルミサルタンおよびエプロサルタンが含まれる。本発明において使用するために特に好ましいアンジオテンシンＩＩアンタゴニストまたはその医薬的に許容な誘導体は、カンデサルタンおよびカンデサルタンシレキセチルである。

従って、本発明のさらなる特徴によれば、２型糖尿病およびその関連する合併症の治療を当該治療を必要とするヒトなどの温血動物において行うための方法であって、有効量のこの組み合わせのセクションに記載されているその他の化合物の１つ、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグの同時の、連続的のまたは別々の投与において、当該動物に有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグを投与することを含む前記方法が提供される。

従って、本発明のさらなる特徴によれば、治療を必要とするヒトなどの温血動物においての高脂血症状態の治療方法であって、有効量のこの組み合わせのセクションに記載されているその他の化合物の一つ、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグの同時の、連続的のまたは別々の投与において、当該動物に有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグを投与することを含む前記方法が提供される。

本発明のさらなる側面によれば、医薬的に許容な希釈剤または担体と共に、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグ、およびこの組み合わせのセクションに記載されているその他の化合物の一つ、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグを含む医薬組成物が提供される。

本発明のさらなる側面によれば、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグ、およびこの組み合わせのセクションに記載されているその他の化合物の一つ、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグを含むキットが提供される。

本発明のさらなる側面によれば：
ａ）第１の単位剤形における、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグ；
ｂ）第２の単位剤形における、この組み合わせのセクションに記載されているその他の化合物の一つ、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグ；および
ｃ）前記第１および第２の剤形を含有するための包含手段（ｃｏｎｔａｉｎｅｒ ｍｅａｎｓ）、
を含むキットを提供する。

本発明のさらなる側面によれば：
ａ）第１の単位剤形における、医薬的に許容な希釈剤または担体を伴う、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグ；
ｂ）第２の単位剤形における、この組み合わせのセクションに記載されているその他の化合物の一つ、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグ；および
ｃ）前記第１および第２の剤形を含有するための包含手段（ｃｏｎｔａｉｎｅｒ ｍｅａｎｓ）、
を含むキットを提供する。

本発明の別の特徴によれば、ヒトなどの温血動物における代謝症候群または２型糖尿病およびその関連する合併症の治療に使用するための医薬の製造における、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグ、およびこの組み合わせのセクションに記載されているその他の化合物の一つ、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグの使用が提供される。

本発明の別の特徴によれば、ヒトなどの温血動物における高脂血症状態の治療に使用するための医薬の製造における、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグ、およびこの組み合わせのセクションに記載されているその他の化合物の一つ、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグの使用が提供される。

本発明のさらなる側面によれば、治療的処置を必要とするヒトなどの温血動物に対しての、医薬的に許容な希釈剤または担体を伴ってもよい有効量のこの組み合わせのセクションに記載されているその他の化合物の一つ、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグの同時の、連続的のまたは別々の投与とともに、医薬的に許容な希釈剤または担体を伴ってもよい有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、当該溶媒和物の塩またはそれらのプロドラッグの投与を含む組み合わせ治療が提供される。

実施例
^１Ｈ−ＮＭＲおよび^１３Ｃ−ＮＭＲ測定は、Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ ３００またはＶａｒｉａｎ ＵＮＩＴＹ ｐｌｕｓ ４００、５００または６００分光計により、各々３００、４００、５００および６００ＭＨｚの^１Ｈ周波数、および各々７５、１００、１２５および１５０ＭＨｚの^１３Ｃ周波数で行った。測定はδスケールで表した。
特に言及がなければ、化学シフトは内部標準としての溶媒とともにｐｐｍで表示されている。

略号
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＤＭＡＰ ジメチルアミノピリジン
ｔ トリプレット
ｓ シングレット
ｄ ダブレット
ｑ カルテット
ｍ マルチプレット
ｂｓ ブロードシングレット

実施例１
（２Ｓ）−３−（４−｛２−［（シクロヘキシルメチル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパン酸
（ｉ）エチル （２Ｓ）−３−｛４−［２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエトキシ］フェニル｝−２−エトキシプロパノエート
アセトニトリル（２００ｍＬ）中のエチル （２Ｓ）−２−エトキシ−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパノエート（２３．８ｇ、１００ｍｍｏｌ、Ｗ０９９／６２８７２の記載にしたがって調製）に無水炭酸カリウム（３１．９ｇ、２３１ｍｍｏｌ）、続いてベンジル ブロモアセテート（１７．４ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩還流した。反応混合物を室温まで放冷し、不溶の塩を濾別し、溶液を減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチル（３００ｍＬ）に取り、有機層をＮａＨＣＯ_３水溶液（３ｘ１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥し、減圧下濃縮した。溶出液としてメチレンクロリドを用いてのシリカゲルによる精製および純粋なフラクションの回収により、黄色の油状物を２２．４ｇ（５８％）得た。

（ｉｉ）｛４−［（２Ｓ）−２，３−ジエトキシ−３−オキソプロピル］フェノキシ｝酢酸
蒸留直後のＴＨＦ（２９０ｍＬ）中のエチル （２Ｓ）−３−｛４−［２−（ベンジルオキシ）−２−オキソエトキシ］フェニル｝−２−エトキシプロパノエート（２２．３３ｇ、５７．８ｍｍｏｌ）に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、３．１ｇ）を加え、反応混合物を大気圧下室温で一晩水素化した。混合物をセライトの固まりを通して濾過し、濾液を減圧下濃縮し、淡黄色の油状物を１６．６ｇ（９７％）得た。

（ｉｉｉ）Ｎ−（シクロヘキシルメチル）ヘプタンアミド
メチレンクロリド（３０ｍＬ）中のアミノメチルシクロヘキサン（０．３４ｇ、３．０ｍｍｏｌ）にヘプタン酸（０．３９ｇ、３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．３７ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、続いて１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．５７ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩攪拌した。混合物をメチレンクロリド（１００ｍＬ）で希釈し、有機層を５％ＨＣｌ（３ｘ７５ｍＬ）、ＮａＨＣＯ_３水溶液（７５ｍＬ）及び食塩水（７５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥した。減圧下の濃縮により、０．６２ｇ（９２％）の油状物（その後結晶化した）を得た。

（ｉｖ）Ｎ−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−ヘプチルアミン塩酸塩
Ｎ−（シクロヘキシルメチル）ヘプタンアミド（０．５８ｇ、２．６ｍｍｏｌ）をトルエンとの共沸蒸留により１度乾燥し、蒸留直後のＴＨＦ（２３ｍＬ）に取り、アルゴン雰囲気下氷浴で冷却した。ボラン（ジエチルエーテル中のメチルスルヒド錯体の２Ｍ溶液を３．２ｍＬ）を加え、１５分後に氷浴を取り外した。反応混合物を４時間還流し、その後室温まで放冷した。１．２ｍＬの１０％ＨＣｌを注意深く加え、混合物を攪拌しながら一晩放置した。減圧下の濃縮の後、氷冷したＴＨＦ（約１５ｍＬ）を加えることにより、白色沈殿が生じた。水（約３ｍＬ）を加えた後にトルエン（約１０ｍＬ）を加え、混合物を減圧下濃縮した。氷冷したＴＨＦを残渣に加え、生じた沈殿を濾取し、減圧下乾燥し、２．６９ｇの粗生成物を白色の塩として得た。この物質は、続く反応工程においてさらなる精製をせずに使用した。

（ｖ）エチル （２Ｓ）−３−（４−｛２−［（シクロヘキシルメチル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパノエート
｛４−［（２Ｓ）−２，３−ジエトキシ−３−オキソプロピル］フェノキシ｝酢酸（０．１０８ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）のエチレンクロリド溶液（３．６ｍＬ）に、Ｎ−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−ヘプチルアミン塩酸塩（０．０９０ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０９８ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）、続いて１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．０７０ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩攪拌した。混合物をメチレンクロリド（２５ｍＬ）で希釈し、有機層を５％ＨＣｌ（３ｘ２５ｍＬ）、ＮａＨＣＯ_３（２５ｍＬ）および食塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下濃縮した。メタノール（０−１％グラジエント）のメチレンクロリド溶液を溶出液として用いる、シリカゲルのプレパックカラム（Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）ＳＰＥカラム、５ｇＳｉ／２５ｍＬ））による精製により、０．１０３ｇ（５８％）の無色の油状物を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ０．８３−０．９７（ｍ，５Ｈ）、１．１１−１．３３（ｍ，１７Ｈ）、１．４５−１．８０（ｍ，８Ｈ）、２．８８−３．００（ｍ，２Ｈ）、３．１４および３．１９（２ｄ，２Ｈ、回転異性体）、３．２４−３．３９（ｍ，３Ｈ）、３．５８（ｍ，１Ｈ）、３．９５（ｍ，ｌＨ）、４．１５（ｑ，２Ｈ）、４．６４および４．６６（２ｓ，２Ｈ，回転異性体）、６．８４および６．８４（２ｄ，２Ｈ，回転異性体）、７．１４（ｄ，２Ｈ）

（回転異性体により、ピークの数は炭素原子の数よりも多い。）

（ｖｉ）（２Ｓ）−３−（４−｛２−［（シクロヘキシルメチル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシ−プロパン酸
ＴＨＦ（２．０ｍＬ）中のエチル （２Ｓ）−３−（４−｛２−［（シクロヘキシルメチル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシ−プロパノエート（０．０３１ｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）に、水（２．０ｍＬ）および水酸化リチウム（０．００６ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩攪拌した。混合物を２ＭＨＣｌで酸性化し、酢酸エチル（４ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下濃縮し、０．０２７ｇ（９３％）の無色の油状物を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ０．８２−０．９９（ｍ，５Ｈ）、１．１０−１．３５（ｍ，１４Ｈ）、１．４６−１．８２（ｍ，８Ｈ）、２．９４（ｍ，１Ｈ）、３．０５（ｍ，１Ｈ）、３．１５および３．２１（２ｄ，２Ｈ，回転異性体）、３．２５−３．４６（ｍ，３Ｈ）、３．６１（ｍ，１Ｈ）、４．０２（ｍ，ｌＨ）、４．６６および４．６８（２ｓ，２Ｈ，回転異性体）、６．８５（ｄ，２Ｈ）、７．１６（ｄ，２Ｈ）、７．７７（ｂｓ，１Ｈ）

（回転異性体により、ピークの数は炭素原子の数よりも多い。）

実施例２
（２Ｓ）−３−（４−｛２−［（２，４−ジフルオロベンジル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパン酸
（ｉ）Ｎ−（２，４−ジフルオロベンジル）ヘプタンアミド
メチレンクロリド（３０ｍＬ）中の２，４−ジフルオロベンジルアミン（０．４３ｇ、３．０ｍｍｏｌ）に、ヘプタン酸（０．３９ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．３７ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、続いて１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸（０．５８ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩攪拌した。混合物をメチレンクロリド（１００ｍＬ）で希釈し、有機層を５％ＨＣｌ（３ｘ７５ｍＬ）、ＮａＨＣＯ_３水溶液（７５ｍＬ）及び食塩水（７５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥した。減圧下での濃縮により、０．６３ｇ（８２％）の黄色の油状物を得た。

（プロトン化されていない炭素は観測されていない。）。

（ｉｉ）Ｎ−（２，４−ジフルオロベンジル）−Ｎ−ヘプチルアミン塩酸塩
Ｎ−（２，４−ジフルオロベンジル）ヘプタンアミド（０．５５ｇ、２．２ｍｍｏｌ）をトルエンとの共沸蒸留で１度乾燥し、蒸留直後のＴＨＦ（１９ｍＬ）に取り、アルゴン雰囲気下氷浴で冷却した。ボラン（ジエチルエーテル中のジメチルスルヒド錯体の２Ｍ溶液を２．７ｍＬ）を加え、１５分後に氷浴を取り外した。反応混合物を４時間還流し、その後室温まで放冷した。１．０ｍＬの１０％ＨＣｌを注意深く加え、混合物を攪拌しながら一晩放置した。減圧下濃縮し、その後氷冷したＴＨＦ（約１５ｍＬ）を加えることにより沈殿が生じ、生じた沈殿を濾取し、減圧下乾燥し、０．８１ｇの粗生成物をオフホワイト色の塩として得た。この物質は、続く反応工程においてさらなる精製をせずに使用した。

（プロトン化されていない炭素は観測されていない。）。

（ｉｉｉ）エチル （２Ｓ）−３−（４−｛２−［（２，４−ジフルオロベンジル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパノエート
｛４−［（２Ｓ）−２，３−ジエトキシ−３−オキソプロピル］フェノキシ｝酢酸（０．１０４ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のメチレンクロリド（３．５ｍＬ）溶液に、Ｎ−（２，４−ジフルオロベンジル）−Ｎ−ヘプチルアミン塩酸塩（０．０９８ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０９４ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、続いて１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．０６７ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩攪拌した。混合物をメチレンクロリド（５０ｍＬ）で希釈し、有機層を５％ＨＣｌ（３ｘ２５ｍＬ）、ＮａＨＣＯ_３水溶液（２５ｍＬ）および食塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮した。メタノール（０−１％グラジエント）のメチレンクロリド溶液を溶出液として用いる、シリカゲルのプレパックカラム（Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）ＳＰＥカラム、５ｇＳｉ／２５ｍＬ））による精製により、０．０６６ｇ（３６％）の無色の油状物を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ０．８１−０．９０（ｍ，３Ｈ）、１．１５（ｔ，３Ｈ）、１．１７−１．３１（ｍ，１１Ｈ）、１．４３−１．６５（ｍ，２Ｈ）、２．８９−３．００（ｍ，２Ｈ），３．２４−３．３９（ｍ，３Ｈ）、３．５９（ｍ，１Ｈ）、３．９６（ｍ，ｌＨ）、４．１５（ｑ，２Ｈ）、４．６０（ｓ，２Ｈ）、４．６９および４．７０（２ｓ，２Ｈ，回転異性体）、６．７３−６．８８（ｍ，４Ｈ）、７．０８−７．２２および７．２２−７．３１（２ｍ，３Ｈ，回転異性体）

（回転異性体により、ピークの数は炭素原子の数よりも多い。フッ素化された炭素は観測されていない。）

（ｉｖ）（２Ｓ）−３−（４−｛２−［（２，４−ジフルオロベンジル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパン酸
エチル （２Ｓ）−３−（４−｛２−［（２，４−ジフルオロベンジル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパノエート（０．０４７ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．０ｍＬ）溶液に、水（２．０ｍＬ）および水酸化リチウム（０．０１０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩攪拌した。混合物を減圧下で濃縮し、２ＭＨＣｌで酸性化し、酢酸エチル（４ｘ２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下濃縮し、０．０４４ｇ（８９％）の無色の油状物を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ０．８３−０．９３（ｍ，３Ｈ）、１．１７（ｔ，３Ｈ）、１．２０−１．３５（ｍ，８Ｈ）、１．４５−１．６７（ｍ，２Ｈ）、２．９０−３．１４（ｍ，２Ｈ）、３．２６−３．３５（ｍ，２Ｈ）、３．４２（ｍ，１Ｈ）、３．６３（ｍ，ｌＨ）、４．０４（ｍ，１Ｈ）、４．６３（ｓ，２Ｈ）、４．７４（ｓ，２Ｈ）、６．７５−６．９０（ｍ，４Ｈ）、７．１１−７．２２および７．２５−７．３５（２ｍ，３Ｈ，回転異性体）、９．１３（ｂｓ，１Ｈ）

（回転異性体により、ピークの数は炭素原子の数よりも多い。フッ素化された炭素は観測されていない。）

生物活性
製剤
化合物をＤＭＳＯに溶解し、１６ｍＭのストック溶液を得た。アッセイの前に、ストック溶液をさらにＤＭＳＯおよび培地で希釈した。

一般化学品および試薬
ルシフェラーゼアッセイ試薬はＰａｃｋａｒｄ，ＵＳＡから購入した。制限酵素はＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒから、ベントポリメラーゼはＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓから購入した。

セルラインおよび細胞培養条件
Ｕ２−ＯＳ（骨原性肉腫、ヒト）はＡＴＣＣ，ＵＳＡから購入した。細胞を増殖させ、継代数６からバッチにおいて再凍結した。細胞は、２５ｍＭグルコース、２ｍＭグルタチオンまたは４ｍＭＬ−アラニル−Ｌ−グルタチオン、１０％ウシ胎仔血清を含むダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ ｍｅｄｉｕｍ：ＤＭＥＭ）において、５％ＣＯ_２で培養した。カルシウムまたはマグネシウムを添加しないリン酸緩衝生理食塩水を使用した。すべての細胞培養試薬はＧｉｂｃｏ（米国）から、および９６穴細胞培養プレートはＷａｌｌａｃｈから購入した。

ヘテロ発現のためのプラスミド構成
標準的な組み替えＤＮＡ技術はＡｕｓｕｂｅｌ（７）に記載されているとおりに実施した。ルシフェラーゼレポーターベクター、ｐＧＬ５ＵＡＳ（クローンは、ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合シークエンス、

の５つのコピーからなる）を、ｐＧＬ３−プロモーター（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＳａｃＩ／ＸｈｏＩ部位においてクローン化した。ＵＡＳ部位を有するＳａｃＩ／ＸｈｏＩフラグメントをアニーリングしたオーバーラップするオリゴヌクレオチドを用いて構築した。

使用した発現ベクターは、ｐＳＧ５（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に基づく。すべてのベクターは、ＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメイン（データベースアクセション番号Ｐ０４３８６のアミノ酸位置１−１４５をエンコードする）をエンコードするＥｃｏＲＩ／ＮｈｅＩフラグメントに続いて、ポリオーマウイルスのＴ抗原からの核局在シークエンスをエンコードするフラグメントへのインフレーム融合を含む。

核局在シークエンスは、ＮｈｅＩ／ＫｐｎＩ付着端を創出するアニーリングしたオーバーラップするオリゴヌクレオチド：

を使用して構築した。ヒトおよびマウスＰＰＡＲαならびにヒトおよびマウスＰＰＡＲγ由来のリガンド結合ドメインは、ＫｐｎＩ／ＢａｍＨＩフラグメントとしてＰＣＲ増幅し、ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメインおよび核局在シークエンスに対するフレームにおいてクローン化した。使用したすべてのプラスミド構築物のシークエンスを、配列解析により確認した。以下の発現ベクターを一時的トランスフェクションに使用した：

^１ は、リガンド結合ドメインを発現するために使用したデータベースエントリーのヌクレオチドの位置を意味する。

一時的トランスフェクション
継代数６からの細胞の凍結ストックを解凍し、トランスフェクションの前に継代数８まで増殖した。周密的細胞をトリプシン処理し、洗浄し、２７０ｘｇで２時間の遠心分離によりペレット化した。細胞のペレットを、冷たいＰＢＳ中に細胞の濃度が約１８ｘ１０^６細胞／ｍＬとなるように再懸濁した。ＤＮＡを加えた後に、細胞の懸濁液を氷上で約５分間インキュベートし、その後０．５ｍＬのバッチで、ＢｉｏｒａｄのＧｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ^ＴＭにより２３０Ｖ、９６０μＦでエレクトロポレーションを行った。５０μｇＤＮＡの全体を０．５ｍＬ細胞の各バッチに加えた。ここで当該ＤＮＡは、２．５μｇの発現ベクター、２５μｇのレポーターベクターおよび２２．５μｇの特定されていないＤＮＡ（ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、Ｄｔｒａｔａｇｅｎｅ）を含んでいた。

エレクトロポレーションの後に、細胞を、フェノールレッドを含まないＤＭＥＭで３２０，０００細胞／ｍＬの濃度まで希釈し、約２５，０００細胞／ウェルを９６穴プレートに播種した。細胞の再生を可能にするために、播種したプレートを３７℃で３〜４時間インキュベートし、その後試験化合物を添加した。ＰＰＡＲαのアッセイにおいて、ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）の脂肪酸成分によるバックグラウンドの活性を避けるために、細胞培地には樹脂−活性炭で精製したウシ胎仔血清を填補した。樹脂−活性炭で精製したＦＣＳは、以下の通りに製造した；５００ｍＬの熱不活性化ＦＣＳに対して、１０ｇの活性炭および２５ｇのＢｉｏ−Ｒｅｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｇｒａｄｅ Ａｎｉｏｎ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｒｅｓｉｎ ２００−４００メッシュを加え、溶液を一晩室温でマグネチックスターラー上に配置した。次の日に、ＦＣＳを遠心分離し、ストリッピングの手順を４〜６時間繰り返した。２回目の処理の後に、ＦＣＳを遠心分離し、活性炭と樹脂の残余物を除去するために殺菌濾過した。

アッセイの手順
ＤＭＳＯ中のストック溶液をマスタープレートに適切な濃度範囲で希釈した。マスタープレートから、最終薬量の試験化合物溶液を得るために培地で希釈した。
各ウェルに細胞培地の量を７５μＬまで調節した後に、５０μＬの試験化合物を加えた。一時的にトランスフェクションした細胞を、約２４時間化合物にさらし、その後ルシフェラーゼ検出アッセイを行った。ルシフェラーゼアッセイのために、１００μＬのアッセイ試薬を手動で各ウェルに加え、細胞を溶解させるために、プレートを約２０分間放置した。溶解後、１４２０Ｍｕｌｔｉｗｅｌｌ ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｖｉｃｔｏｒ、Ｗａｌｌａｃｈより購入）でルシフェラーゼ活性を測定した。

対照化合物
ＴＺＤであるピオグリタゾンを、ヒトおよびマウスＰＰＡＲγの双方における活性のための対照物質として使用した。５，８，１１，１４−エイコサテトライン酸（Ｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｙｏｎｉｃ ａｃｉｄ）を、ヒトＰＰＡＲαの標準物質として使用した。

計算および分析
ＥＣ_５０値の計算のために、濃度−効果曲線を作成した。使用した値は２回または３回の独立した測定の平均値（バックグラウンドの平均値の控除後）に由来し、対照化合物により得られた最大活性のパーセンテージとして表現した。値を試験化合物の濃度の対数に対してプロットした。データのポイントの間に直線を挿入し、対照化合物により得られる最大活性の５０％を達成するのに必要な濃度を計算することによりＥＣ_５０を算出した。

式Ｉの化合物は、ＰＰＡＲαに対して０．５μｍｏｌ／Ｌ未満のＥＣ_５０値を有し、好まし化合物はＰＰＡＲに対して０．０５μｍｏｌ／Ｌ未満のＥＣ_５０を有する。式Ｉの化合物は、ＰＰＡＲγに対するよりもＰＰＡＲαに対してより強力である点において、選抜された化合物群である。この関係はこれらの化合物の薬理学的活性に関して、および治療上のプロフィールに関して重要である。

さらに、本発明の化合物は改善されたＤＭＰＫ（薬物代謝および薬物動態学）の特性を示し、例えばそれらはインビトロでの改善された代謝安定性を示し、またインビボでの好ましい用量反応曲線も示す。当該化合物はまた、有望な毒物学的プロフィールも示す。

Claims (7)

1. 式Ｉの化合物のＳ−エナンチオマー：
   

   

   ［式中、Ｒ^１は２，４−ジフルオロフェニルまたはシクロヘキシルを表す］
   またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物、もしくはその結晶形。
2. （２Ｓ）−３−（４−｛２−［（シクロヘキシルメチル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパン酸；および
   （２Ｓ）−３−（４−｛２−［（２，４−ジフルオロベンジル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパン酸
   から選択される化合物、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物もしくはその結晶形。
3. （２Ｓ）−３−（４−｛２−［（シクロヘキシルメチル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパン酸、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物もしくはその結晶形。
4. （２Ｓ）−３−（４−｛２−［（２，４−ジフルオロベンジル）（ヘプチル）アミノ］−２−オキソエトキシ｝フェニル）−２−エトキシプロパン酸、またはその医薬的に許容な塩、その溶媒和物もしくはその結晶形。
5. 式ＩＩの化合物：
   

   

   ［式中、Ｒ^１は請求項１において定義されたとおりであり、Ｒ ^２ はカルボキシリックヒドロキシ基の保護基を表す］
   を、脱保護剤と反応させることを含む、式Ｉの化合物の製造方法
6. 式ＩＩの化合物：
   

   

   ［式中、Ｒ^１およびＲ^２は請求項５において定義されたとおりである］。
7. 式ＩＩＩの化合物：
   

   

   ［式中、Ｒ^２は請求項５において定義したとおりである］。