JP3119857B2 - 種子コーティング - Google Patents

種子コーティング

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JP3119857B2
JP3119857B2 JP02000348A JP34890A JP3119857B2 JP 3119857 B2 JP3119857 B2 JP 3119857B2 JP 02000348 A JP02000348 A JP 02000348A JP 34890 A JP34890 A JP 34890A JP 3119857 B2 JP3119857 B2 JP 3119857B2
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    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は種子コーティングに関し、更に詳しくは有益
微生物を使用した農業上有用な種子の接種（inoculatio
n）方法に関する。微生物という用語は、細菌、真菌及
びより高等のもしくはより下等の生物を意味するように
本明細書では広義に用いられる。
ある微生物は、植物の成長性を改善し、植物のＮ及び
Ｐ状態を改善し、又は植物に影響を与えるある害虫及び
病気をコントロールするためにいくつかの方法で機能す
ることができる。これらの生物としては、リゾビウム
（Rhizobium）〔ブラジリゾビウム（Bradyrhizobium）
を含む〕、シュードモナス（Rseudomonas）、セラチア
（Serratia）、バチルス（Bacillus）、パスツーリア
（Pasteuria）、アゾトバクター（Azotobacter）、エン
テロバクター（Enterobacter）、アゾスピリラム（Azos
pirillum）及びシアノバクテリア（Cyanobacteria）
（藍藻）属の細菌、グリオクラジウム（Gliocladiu
m）、トリコダーマ（Trichoderma）、コニオセリウム
（Coniotherium）、バーチシリウム（Verticillium）、
パエシロミセス（Paecilomyces）、メタリジウム（Meta
rhizium）及び菌根属の真菌並びに特定植物の根付近の
土壌中に存在する虫媒性（entomophilic）線虫がある。
用いられる微生物は、接種原（inoculant）組成物の使
用による種まきで土壌中に通常混入される。接種原は、
通常乾燥、湿潤又はスラリーのいずれかの接種技術によ
って種子と完全接触下におかれる。スラリー接種の場
合、接種原は水と混合され、通常粘着剤、例えばアラビ
アゴム又はメチルセルロースが粘着性を改善するために
用いられる。
英国特許第2,080,669号明細書では、リゾビウム接種
原中における水溶性ポリビニルピロリドン（PVP）の使
用について示している。水溶性ポリビニルピロリドン
は、微生物の生存を促進すると述べられている。我々の
先行欧州特許出願第87,306 343.2号明細書では、キャ
リア媒体、微生物の有益種及びビニルピロリドンとビニ
ルアセテート、スチレンもしくは置換スチレンとのコポ
リマーを含有した植物用接種原組成物について開示して
いる。
接種の農場内実施では種まきに余計な工程を加えてし
まい、したがって農作者に嫌われることが多い。しか
も、種子を微生物でコーティングする現在の方法には欠
点があり、即ちそれによれば生存微生物の低担持率及び
不十分な保存寿命を生じてしまう、商業的実施の場合に
は、環境温度下で少なくとも６ケ月の保存寿命を有する
コーティングされた種子が望ましい。
農場で用いられる乾燥、湿潤及びスラリー接種法とは
異なり、前接種（preinoculation）は種子コーター（co
ater）で行われ、それによって種子は微生物含有処方剤
（通常、粘土ベース）でコーティングされる。商業的種
子コーティングプロセスでは、微生物生存に悪影響を与
えうる温度での乾燥段階を通常要する。しかも、種子は
種まきに先立ってしっかりとコーティングされているこ
とから、微生物は継続的乾燥条件下でふつう数か月間生
存し続ける必要がある。上記問題のために、種子の商業
的前接種はほとんど成功していなかった。
例えば英国特許第2,080,669号明細書では、下記工程
からなるリソビウムでの種子プレコーティング方法につ
いて記載している。種子は、カゼインナトリウム、微細
石灰石及びピート（peat）でコーティングされ、過剰水
分を除くため乾燥され、しかる後ポリビニルピロリドン
水溶液中ピート媒体内のリゾビウム培養物スラリーと混
合される。最後に、カオリン／石灰混合物がいかなる過
剰水分も吸収させてしまうためにコーティングされた種
子と混合される。この方法は100％のリゾビウム生存率
を与えると主張されているが、示された結果の詳細な検
討によればこれが事実ではないことを示している。一例
として21日間の貯蔵後に100％生存率が記録されたが、
但し結果の再現性は乏しい。他のすべての例では、28日
間の貯蔵後に0.5〜19％のリゾビウム生存率が記録され
た。
リゾビウムでの種子の前接種に関するもう１つの問題
は、植物の成長に対して有益な効果を有するように種子
当たり十分な細菌数を得ることである。大豆の場合105
細菌／種子が必要であり、ルーサーン（lucerne）場合1
03細菌／種子が必要であると認識されている。種子の前
接種に関する前記方法では、これらの目標に達しえなか
った。我々の先行欧州特許出願第87,306 343.2号明細
書で記載されているようにビニルピロリドン及びビニル
アセテートのコポリマーのような粘着性ポリマーを含有
した接種原組成物による種子のスラリー化は、それが10
5細菌／大豆種子及び103細菌／ルーサーン種子の目標を
達成している点で従来技術よりも改善がある。しかしな
がら、それは保存寿命に関する改善で余地をまだ残して
いるのである。
驚くべきことに我々は、スラリー化操作時に水性懸濁
液として別に加えられる粘着性ポリマーの懸濁液の存在
下において例えば我々の先行欧州特許出願第87,306 34
3.2号明細書で記載されたような接種原組成物で種子を
スラリー化し、しかる後環境温度で風乾したところ、種
子当たり十分なリゾビウム数を有するコーティングされ
た種子製品が得られ、しかもその場合に十分なリゾビウ
ムが５ケ月以上の期間にわたり生存し続けることを発見
した。
本発明によるコーティングされた種子の製造方法で
は、キャリア媒体、種子から成長する植物に対して有益
な効果を有する少なくとも１種の微生物及び粘着性ポリ
マーを含有した接種原組成物で種子をスラリー化し、そ
の際にスラリー化が粘着性ポリマーの水性懸濁液の存在
下で行われ、得られた製品を30℃以下の温度で風乾す
る。
本発明は、キャリア、種子又はそれから生じる植物に
関して有益である微生物及び微生物と適合しうる粘着性
ポリマーを含有したコーティング組成物で包囲された少
なくとも１つの種子を含む改善されたコーティング種子
製品を提供する。
粘着性ポリマーは、ビニルピロリドン及びビニルアセ
テートのコポリマー、ポリ（メチルビニルエーテル）無
水マレイン酸コポリマー、メチルビニルエーテル及び無
水マレイン酸のコポリマーの遊離酸、ビニルピロリドン
／スチレンコポリマー、部分的加水分解ポリビニルアル
コール、ビニルアセテート／ブチルアクリレートコポリ
マー、ビニルアセテートホモポリマー、ビニルアセテー
ト／ベオバ（VeoVa）10/ブチルアクリレートターポリマ
ー、アクリル酸コポリマー、スチレン／アクリル酸エス
テルコポリマー、ビニルアセテート／エチレンコポリマ
ー並びにポリビニルアセテートから選択されることが好
ましい。特に好ましいポリマーは、各重量比で50:50〜7
0:30のビニルピロリドン及びビニルアセテートのコポリ
マーである。好ましくは、懸濁液は10〜20重量％のコポ
リマーを含有している。好都合には、懸濁液中の粘着性
ポリマーが接種原組成物中の場合と同一であってもよ
い。
キャリアはピートであることが好ましい。一方、ヒル
石、粘土、沈泥、黒鉛、タルク、濾過泥、コイア粉、バ
ガス、堆肥化コーン穂軸又は石炭粉も使用可能である。
微生物は、リゾビウム（ブラジリゾビウムを含む）、
シュードモナス、セラチア、バチルス、パスツーリア、
アゾトバクター、エンテロバクター、アゾスピリラム、
シアノバクテリア、グリオクラジウム、トリコダーマ、
コニオセリウム、バーチシリウム、パエシロミセス、メ
タリジウム、菌根属の真菌及び虫媒性線虫から選択され
ることが好ましい。
一部の環境下では、外観を改善するためコーティング
された種子に粉末粘土を散布することが有用であろう。
他の製品から区別するためコーティングされた種子中に
色素を配合することも望ましいであろう。我々は、粉末
粘土及び色素双方がリゾビウムに対する有害作用なしに
コーティング種子組成物中に含有されうることを証明し
た。適切な粘土の一例は、サリーパウダー（Surrey Pow
der）としても知られるモンモリロナイトカルシウムで
ある。色素は、ローダミンB500（Rhodamine B500）、メ
チルバイオレット（Methyl Violet）、ブルー2313（Blu
e 2313）、エオシンＹ（Eosine Y）、サンセットイエロ
ー（Sunset Yellow）、マゼンタ（Magenta）、ブルー23
123、ピグメントグリーン７（Pigment Green7）、ター
トラジン（Tartrazine）、マラカイトグリーン（Malach
ite Green）、オーラミン０（Auramine 0）、オイルイ
エロー21756（Oil Yellow 21756）、グリーン19102（Gr
een 19102）及びメチレンブルー2B（Methylene Blue 2
B）のような色素並びに100シルバーパール（100 Silver
Pearl）、120ラスターパール（120 Lustre Pearl）、2
35グリーンパール（235 Green Pearl）、300ゴールドパ
ール（300 Gold Pearl）、500ブロンズパール（500 Bro
nze Pearl）及び504レッドパール（504 Red Pearl）の
ような二酸化チタンコーティングマイカ（ラスター）か
ら選択されることが好ましい。
多数の種子が化学的殺真菌剤でコーティングされてい
る。これらは本発明でも用いることができるが、その場
合にはこれら殺真菌剤に耐性のリゾビウム株を用いるこ
とが必要であり。このため種子を殺真菌剤及びリゾビウ
ムで同時にコーティングすることができる。殺真菌剤
は、メタラキシル、カルバチイン及びチラムから選択さ
れることが好ましい。
本発明のコーティングされた種子製品は、種子をコー
ティング組成物の諸成分と混合し、得られたコーティン
グ種子の表面を乾燥することにより製造される。乾燥は
室温（即ち、30℃以下）で行われるべきである。接種原
対種子の割合は種子のタイプに応じて0.5〜2.5重量％の
範囲から選択される。
本明細書で記載された方法により製造されたコーティ
ング種子は、下記の利点を有している： （ａ）コーティングされた種子は易流動性である。
（ｂ）コーティングは発芽に悪影響を与えない。
（ｃ）ほとんどのコーティングは袋づめ及び種まきで失
われない。
（ｄ）コーティングされた種子は、少なくとも３ケ月の
期間にわたり種子当たり高い生育リゾビウム細胞数を維
持している。
本発明は下記例で説明されるが、その中で例１〜４は
比較例であり、例５以降は本発明の方法について示して
いる。
例１ ピートベース接種原の調製 選択されたカヤツリグサ（sedge）ピート〔フィソン
ズ（Fisons）〕を水酸化カルシウム及び炭酸カルシウム
でpH6.5に調整した。これを60℃でオーブン乾燥し、ハ
ンマーミルで粉砕して0.4mmふるいに通した。粉末ピー
トの一部150gを300ゲージポリテンバッグに封入し、γ
線（50KGy）で滅菌した。パックにブラジリソビウム・
ジャポニカム（Bradyrhizobium japonicum）、リゾビウ
ム・メリロチ（Rhizobium meliloti）又はR.レグミノサ
ラム（R.leguminosarum）の次亜種トリフォリイ（trifo
lii）の純粋培養物115mlを注入し、注入孔を再密封し、
内容物を26℃で７日間のインキュベート前に完全混合し
た。このような接種原は、平均５×109/gの生存細胞を
含有している。
ピート−粘土混合物ベースの接種原（サリーパウダ
ー、モンモリロナイトカルシウム）は、同一方法で調製
することができる。粉末ピート−粘土混合物（25又は50
％w/w粘土）の一部150gを300ゲージポリテンバッグに封
入し、γ線（50KGy）で滅菌した。パックにB.ジャポニ
カム、R.メリロチ又はR.レグミノサラム次亜種トリフォ
リイの純粋培養物115mlを注入し、注入孔を再密封し、
内容物を26℃で７日間のインキュベート前に完全混合し
た。このような接種原は、平均3.6×109/gの生存細胞を
含有している。
例２ 放射線照射ピートパックを例１で記載されたように調
製し、B.ジャポニカム、R.メリロチ又はR.レグミノサラ
ム次亜種トリフォリイの純粋培養物57.5ml＋PVP−VA−
Ｓ−630のオートクレーブ処理10％水性懸濁液57.5ml又
はPVP（分子量44,000）のオートクレーブ処理10％水溶
液57.5mlを注入した。PVP−VA−Ｓ−630は60:40ビニル
ピロリドン／ビニルアセテートコポリマー（分子量700,
000）であり、マンチェスターのGAF（英国）社から得ら
れる。それは水中で安定なエマルジョンを形成しうるス
プレードライ粉末である。
コントロール接種原も同様に調製されるが、但し水5
7.5mlをポリマーの水性懸濁液又は溶液に代用した。す
べてのパックを完全に混合し、26℃で７日間インキュベ
ートし、室温で貯蔵した。コントロール、PVP−及びPVP
−VA−Ｓ−630含有接種原は、使用時６×109、1.7×108
及び4.25×109/gのリゾビウムを各々含有していた。
大豆種子を下記のようにB.ジャポニカムで接種した： コントロール接種原を用いて、３方法で大豆種子に接
種した： 1.乾燥−接種原1gを種子300gと混合した。
2.水スラリー−接種原1gを水2mlでスラリー化し、しか
る後種子300gと混合した。
3.アラビアゴムスラリー−接種原1gをアラビアゴムの40
％水溶液〔供給者−シグマ（Sigma）〕2mlでスラリー化
し、しかる後種子300gと混合した。
すべての処理において、接種された種子をふるい分け
による非粘着接種原の除去前に室温で30分間保った。
PVP−又はPVP−VA−Ｓ−630含有接種原を用いて、３
方法で大豆種子に接種した： 1.乾燥−接種原1gを種子300gと混合した。
2.湿潤−種子300gを接種原1gとの混合前に水0.3mlでわ
ずかに湿潤化させた。
3.スラリー−接種原1gを水2mlでスラリー化し、しかる
後種子300gと混合した。
接種された種子をふるい分けによる非接着接種原の除
去前に室温で30分間保った。
次いで、すべての種子ロットを空気にさらし、25℃で
８日間保ち、その間に種子当たりのリゾビウム数を測定
した。結果は第１表で示されている。
第１表から、PVP−VA−Ｓ−630接種原のみが望ましい
種子当たりのリゾビウム数（即ち、105/種子以上）を達
成しうることが観察できる。アラビアゴム及びPVPの双
方は、リゾビウム生存数が保護物質非存在下で観察され
る場合と比較して伸びている点で、種子表面上のリゾビ
ウムをある程度保護することが観察される。種子表面上
のリゾビウム生存数はPVP−VA−Ｓ−630接種原が用いら
れる場合更に促進されており、このため保護物質として
PVP及びアラビアゴムよりもPVP−VA−Ｓ−630の優秀性
を証明している。最良の結果は種子がPVP−VA−Ｓ−630
接種原とスラリー混合された場合に得られるが、但しこ
の場合であってもリゾビウム生存数は市販コーティング
種子製品として不十分であり、更に改善が要される。
例３ 例２で記載された試験のバラツキに鑑みて、この例で
適用される試験はバッグ内で貯蔵されるコーティング種
子の保護性能を比較するために行われた。
種子コーティング上のリゾビウム生存数に関するPVP
−VA−Ｓ−630コポリマーの効果を、アラビアゴムの40
％水溶液によるスラリー接種及び従来（コントロール）
の接種原による乾燥接種と比較した。
γ線照射大豆種子100gロットを無菌ボトル中で振盪す
ることにより従来の接種原（例２で記載されたように調
製された；リゾビウム9.6×109/g）1gで乾燥接種した。
その他を接種前に無菌アラビアゴム溶液1mlと混合し
た。PVP−VA−Ｓ−630含有接種原（例２で記載されたよ
うに調製された；リゾビウム2.2×1010/g）での接種に
用いられる種子ロットは無菌水0.1mlで前湿潤化させ
た。種子ロットを放射線照射ポリテンバッグに移し、密
封し、実験室温度で６ケ月間保った。間隔をあけて50の
種子ロットを各処理物から取出し、種子当たりの生存リ
ゾビウム細胞数を測定した（第２表参照）。
第２表で示された結果は、本例においてアラビアゴム
での種子のスラリー接種及びPVP−VA−Ｓ−630接種原で
の湿潤接種が双方とも望ましいリゾビウム数／種子（即
ち、105/種子以上）に達していることを示している。従
来の接種原での乾燥接種は不満足であった。しかしなが
らすべての場合において、リゾビウム数／種子はコーテ
ィングされた種子がバッグ内で貯蔵されたとしても貯蔵
３〜６ケ月以内に105以下に落ちた。
例４ PVP−VA−Ｓ−630は種子表面上のリゾビウムの生存を
明らかに促進し、このためピート接種原中のPVP−VA−
Ｓ−630濃度増加により十分な保存寿命を得るため十分
な程度までリゾビウムの生存を改善しうるか否かを調べ
る上で興味があった。
PVP−VA−Ｓ−630 ０、５、10及び15gを含有したピ
ートベース接種原のパックを例２で記載されたように調
製した。15gを超えるPVP−VA−Ｓ−630を含有した150g
ピートパックを調製することは、これがピート粒子の凝
集を招きひいては種子コーティングを無効にすることか
ら不可能である。
接種原を用いて、２方法で大豆種子に接種した： 1.湿潤−種子300gを接種原1gとの混合前に水0.4mlでわ
ずかに湿潤化させた。
2.スラリー−接種原1gを水2mlでスラリー化し、しかる
後種子300gと混合した。
接種された種子をふるい分けによる非粘着接種原の除
去前に室温で30分間保った。次いで、種子を空気にさら
し、種子当たりのリゾビウム数測定前に室温で１時間保
った。結果は第３表で示されている。
結果は、ピート接種原のPVP−VA−Ｓ−630含有量を最
大可能レベルまで増加させることにより望ましいリゾビ
ウム数／種子（即ち、105/種子以上）が達成可能である
が、但し更に改善が望まれることを示している。
例５ 大豆種子の前接種 PVP−VA−Ｓ−630含有ピートベース接種原（例２で記
載されたように調製される）2gを室温でPVP−VA−Ｓ−6
30の水性懸濁液3ml（10、20又は30％w/w）と混合した。
懸濁液を大豆種子300gとスラリー化し、スラリーを風乾
した。種子ロットを放射線照射ポリテンバッグに移し、
密封し、室温で５ケ月間保った。間隔をあけて50の種子
ロットを各処理物から取出し、種子当たりの生存リゾビ
ウム細胞数を測定した（第４表参照）。
ピートベース接種原の量を変更させた効果が調べられ
た。接種原２、３、４又は5gをPVP−VA−Ｓ−630懸濁液
３、４、４又は5mlと各々混合した。接種原３又は4gが
用いられた場合には、水1mlも混合物に加えた。接種原5
gが用いられた場合には、水2mlを混合物に加えた。懸濁
液を種子とスラリー化し、乾燥し、バッグに入れ、生存
リゾビウム細胞数を上記のように測定した（第４表参
照）。
PVP−VA−Ｓ−630含有ピート−粘土接種原（例２で記
載されたように調製される）をピートベース接種原の代
わりに用い、前接種大豆種子を上記のように調製した。
種子当たりの生存リゾビウム細胞数を測定した（第５表
参照）。
PVP−VA−Ｓ−630と３種の異なるB.ジャポニカム株RC
R3407（CB1809）、532c及びG49のうち１種を含有したピ
ートベース接種原を用いて上記のように大豆種子に前接
種し、種子当たりの生存リゾビウム細胞数を測定した
（第４表参照）。
第４及び５表の結果は、105リゾビウム／種子の目標
が達成でき、しかもそうして製造されたコーティング種
子が５ケ月以上の保存寿命を有することを証明してい
る。
これらの結果から、10又は20％w/w PVP−VA−Ｓ−630
懸濁液が最適であって、大豆種子300g当たり接種原２〜
4g（即ち、接種原率0.7〜1.3％）で貯蔵５ケ月後に十分
な生存リゾビウム細胞数／種子になると結論づけられ
る。本方法はB.ジャポニカム株の範囲まで適用可能であ
る。
例６ ルーサーン種子の前接種 ルーサーン種子100gを例５で記載されたようにPVP−V
A−Ｓ−630及びR.メリロチRCR2001含有ピートベース接
種原で前接種した。処理された種子をバッグに入れ、例
５で記載されたように貯蔵した。間隔をあけて、種子当
たりの生存リゾビウム細胞数を測定した（第６表参
照）。
第６表の結果は、103リゾビウム／ルーサーン種子の
目標が達成でき、しかもそうして製造されたコーティン
グ種子が６ケ月以上の保存寿命を有することを証明して
いる。
これらの結果から、10又は20％w/w PVP−VA−Ｓ−630
懸濁液が最適であって、ルーサーン種子100g当たり接種
原1.5〜2g（即ち、接種原率1.5〜２％）で貯蔵６ケ月後
ににおいて１×103生存リゾビウム細胞数／種子の目標
を達成しうると結論づけられる。
例７ クローバー種子の前接種 白花クローバー種子100gを例５で記載されたようにPV
P−VA−Ｓ−630及びR.レグミノサラム次亜種トリフォリ
イTA1含有ピートベース接種原で前接種した。処理され
た種子をバッグに入れ、例５で記載されたように貯蔵し
た。間隔をあけて、種子当たりの生存リゾビウム細胞数
を測定した（第７表参照）。
第７表の結果は、103リゾビウム／クローバー種子が
達成でき、しかもそうして製造されたコーティング種子
が３ケ月以上の保存寿命を有することを証明している。
例８ PVP−VA−Ｓ−630含有ピートベースB.ジャポニカム接
種原（例２のように調製される）2gを室温で20％w/w PV
P−VA−Ｓ−630の水性懸濁液3mlと混合した。懸濁液を
大豆種子300gとスラリー化し、スラリーにサリーパウダ
ー9kgを散布した。風乾後、種子ロットを放射線照射ポ
リテンバッグに移し、密封し、室温で貯蔵した。間隔を
あけて50の種子ロットを取出し、種子当たりの生存リゾ
ビウム細胞数を測定した（第８表参照）。
例９ PVP−VA−Ｓ−630含有ピートベースB.ジャポニカム接
種原（例２のように調製される）2gを色素ローダミンB5
00又はブルー23123 0.12g含有20％w/w PVP−VA−SP630
懸濁液4.2mlと混合した。懸濁液を大豆種子300gとスラ
リー化し、スラリーを風乾した。種子ロットを放射線照
射ポリテンバッグに移し、密封し、室温で貯蔵した。間
隔をあけて50の種子ロットを取出し、種子当たりの生存
リゾビウム細胞数を測定した（第９表参照）。
例10 PVP−VA−Ｓ−630含有ピートベースB.ジャポニカム接
種原（例２のように調製される）2gを二酸化チタンコー
ティングマイカ（ラスター）100シルバーパール0.6g含
有20％w/w PVP−VA−Ｓ−630の水性懸濁液4.2mlと混合
した。懸濁液を大豆種子300gとスラリーを風乾した。種
子ロットを放射線照射ポリテンバッグに移し、密封し、
室温で貯蔵した。間隔をあけて50の種子ロットを取出
し、種子当たりの生存リゾビウム細胞数を測定した（第
10表参照）。
例11 PVP−VA−Ｓ−630含有ピートベースB.ジャポニカム接
種原（例２のように調製される）2gをローダミンB500又
はブルー23132のいずれか0.12g及び100シルバーパール6
g含有20％w/w PVP−VA−Ｓ−630水性懸濁液4.2mlと混合
した。懸濁液を大豆種子300gとスラリー化し、スラリー
を風乾した。種子ロットを放射線照射ポリテンバッグに
移し、密封し、室温で貯蔵した。間隔をあけて50の種子
ロットを取出し、種子当たりの生存リゾビウム細胞数を
測定した（第11表参照）。
例12 殺真菌剤耐性リゾビウム株の選択 殺真菌剤耐性株をレニー（Rennie）（1986年）の方法
により産生した。R.メリロチRCR2001の純粋培養物をメ
タラキシル０、20、40、60、100又は500ppmが配合され
たTY培地〔ベーリンガー（Beringer）、1974年〕に移し
た。株は、それらがメタラキシル100ppm存在下で増殖し
うる場合耐性であって、それらがメタラキシル500ppmに
耐性である場合免疫性であると考えられる。14日以内で
増殖性を示す自然突然変異体をメタラキシル非含有TY培
地で再培養し、しかる後メタラキシルを次第に濃度増加
させて含有したTY培地で再培養した。メタラキシルに対
して観察される耐性の遺伝的安定性を確保するため、こ
の操作を１年間にわたり３回繰返した。
同様の操作を行い、カルバチイン及びチラムの双方に
対して耐性のB.ジャポニカムRCR3407変異体を得た。
例13 PVP−VA−Ｓ−630とメタラキシル耐性R.メリロチ株又
はカルバチイン及びチラム耐性B.ジャポニカム株とを含
有したピートベース接種原を例２で記載されたように調
製した。
R.メリロチ接種原2gをアプロンFL（Apron FLTM）〔メ
タラキシル28.35％含有；供給者ガスタフソン（Gustafs
on）〕0.126g含有20％w/w PVP−VA−Ｓ−630水性懸濁液
3mlと混合した。懸濁液をルーサーン種子100gとスラリ
ー化し、スラリーを風乾した。
B.ジャポニカム接種原2gをアンカー（AnchorTM）〔カ
ルバチイン66.7g/及びチラム66.7g/含有；供給者ユ
ニロイヤル（Uniroyal）〕1.8ml含有20％w/w PVP−VA−
Ｓ−630水性懸濁液42mlと混合した。懸濁液を大豆種子3
00gとスラリー化し、スラリーを風乾した。
種子ロットを放射線照射ポリテンバッグに移し、密封
し、室温で貯蔵した。間隔をあけて50の種子ロットを取
出し、種子当たりの生存リゾビウム細胞数を測定した
（第12図参照）。
例14 例５で記載されたように大豆種子を前接種するため同
様の操作が、PVP−VA−Ｓ−630に代えて下記ポリマーの
いずれかで用いることができる：ポリ（メチルビニルエ
ーテル）無水マレイン酸コポリマー、メチルビニルエー
テル及び無水マレイン酸のコポリマーの遊離酸、ビニル
ピロリドン／スチレンコポリマー、部分的加水分解ポリ
ビニルアルコール、ビニルアセテート／ブチルアクリレ
ートコポリマー、ビニルアセテートホモポリマー、ビニ
ルアセテート／ベオバ10/ブチルアクリレートターポリ
マー、アクリル酸コポリマー、スチレン／アクリル酸エ
ステルコポリマー、ビニルアテート／エチレンコポリマ
ー並びにポリビニルアセテート。
例15 ルーサーン種子を例７で記載された方法によりR.メリ
ロチ及び色素ブルー23123でコーティングした。コーテ
ィング後５ケ月目に、種子を野外試験でまき、得られた
植物の成長性を未処理種子から得られる植物の場合と比
較した。種まき後10週目に長さ40cmの列からの植物を切
断し、植物上部の重量を測定した（第13表）。R.メリロ
チによるルーサーン種子の前接種で、植物成長性が向上
した。
例16 大豆種子を例９で記載された方法によりB.ジャポニカ
ム及び色素ローダミンB500でコーティングした。コーテ
ィング後３ケ月目に、種子を野外でまいた。試験を行い
採取して、根瘤数、重量及び種子収率を測定した（第14
表）。B.ジャポニカムによる大豆種子の前接種で、未接
種種子と比較し種子収率、根瘤数及び重量が増加した。
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───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭63−24883（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−2683（ＪＰ，Ａ) 特開 昭53−41424（ＪＰ，Ａ)

Claims (11)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】（１）種子、（２）キャリア媒体、種子か
    ら成長する植物に対して有益な効果を有する少なくとも
    １種の微生物及び第一の粘着性ポリマーを含有した接種
    原組成物、及び（３）ビニルピロリドン／ビニルアセテ
    ートコポリマー、ポリ（メチルビニルエーテル）無水マ
    レイン酸コポリマー、メチルビニルエーテル及び無水マ
    レイン酸のコポリマーの遊離酸、ビニルピロリドン／ス
    チレンコポリマー、部分的加水分解ポリビニルアルコー
    ル、ビニルアセテート／ブチルアクリレートコポリマ
    ー、ビニルアセテートホモポリマー、アクリル酸コポリ
    マー、スチレン／アクリル酸エステルコポリマー、ビニ
    ルアセテート／エチレンコポリマー及びポリビニルアセ
    テートからなる群より選択される第二の粘着性ポリマー
    の水性懸濁液とを一緒にスラリー化し、その際成分
    （２）と成分（３）を混合したもので成分（１）をスラ
    リー化し、或いは、成分（３）の存在下において成分
    （２）で成分（１）をスラリー化し、得られた製品を30
    ℃以下の温度で風乾することを特徴とするコーティング
    された種子の製造方法。
  2. 【請求項２】懸濁液中の粘着性ポリマーが、ビニルピロ
    リドン／ビニルアセテートコポリマーである、請求項１
    に記載の方法。
  3. 【請求項３】粘着性ポリマーが、各重量比で50:50〜70:
    30のビニルピロリドン／ビニルアセテートコポリマーで
    ある、請求項２に記載の方法。
  4. 【請求項４】懸濁液が10〜20重量％のコポリマーを含有
    する、請求項２又は３に記載の方法。
  5. 【請求項５】接種原対種子の割合が種子のタイプに応じ
    て0.5〜2.5重量％の範囲から選択される、請求項１〜４
    のいずれか一項に記載の方法。
  6. 【請求項６】懸濁液中の粘着性ポリマーが接種原組成物
    中のものと同一である、請求項１〜５のいずれか一項に
    記載の方法。
  7. 【請求項７】種子がマメ科植物種子で、微生物がリゾビ
    ウム細菌である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の
    方法。
  8. 【請求項８】キャリア媒体がビートである、請求項１〜
    ７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 【請求項９】コーティングされた種子の風乾後に、当該
    種子に粉末粘土が散布される、請求項１〜８のいずれか
    一項に記載の方法。
  10. 【請求項１０】少なくとも１種の色素がコーティング中
    に配合されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載
    の方法。
  11. 【請求項１１】殺真菌剤がコーティング中に配合されて
    いる、請求項１〜10のいずれか一項に記載の方法。
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